JPH03503803A - 炎症反応性の検出のための評価手段 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 炎症反応性の検出のための評価手段 発明の背景 本発明は、リュウマチ様の関節炎のような炎症に対する個体動物の感受性の検査 のための診断試験法に関する。 発明の概要 本発明の目的は、炎症の徴候に対する感受性について哺乳動物を試験する方法を 提供することである。 最も広い角度では、その方法は、視床下部−下垂体一副腎軸（ｈｙｐｏｔｈａｌ ａｍｉｃ−ｐｉｔｕｉｔａｒｙ−ａｄｒｅｎａｌ（ＨＰＡ）ａｘｉｓ）を刺戟す るのに有効な化合物を哺乳動物に投与し；そして該哺乳動物の下垂体および副腎 腺により分泌されるホルモンのレベルを測定する段階を包含する。 更に特定した角度では、その方法は、哺乳動物に、サイト力イン、細胞成長因子 、副腎皮質刺戟ホルモン放出ホルモン（ＣＲＨ）　、主属体性アミン、主属体性 アミンの作動薬、主属体性アミンの拮抗薬、主属体アミンの同族体、モノアミン オキシダーゼの阻害剤および主属体性アミン取込み阻害剤またはグルココルチコ イド受容体の拮抗薬から成る群から選ばれた化合物を投与し；そして該哺乳動物 の血漿中の、グルココルチコイド類または副腎皮質刺戟ホルモン（ＡＣＴＨ）の レベルを測定する段階を包含する。 投与される物質は、測定される物質と同じであってはいけない。 本発明は、哺乳動物の自己免疫疾患の研究におけるモデルとして有用である。 ヒトの系を研究するのによいモデルとして役立ててよい実験動物は、ラット、マ ウス、モルモット、ウサギおよびニワトリを包含する。 しかし、本発明の最終の目的は、炎症の徴候に対するヒトの感受性を診断するた めの方法を提供することである。測定されるべきホルモンは、化合物が正常な個 体に投与された時に該正常な個体により増加したレベルで分泌されるホルモンで あるが、一方、炎症の徴候を持つか、炎症の徴候に対して感受性のある個体に投 与した後ではそのような高いレベルで分泌されないホルモンでなければならない 。 測定ができる、下垂体および副腎腺により分泌されるホルモンは、コルチコステ ロンのようなグルココルチコイド、コルチゾール、およびＡＣＴＨを包含する。 測定できる他のホルモンは、ＣＲＨ、プロラクチン、アルギニンパップレシン（ ａｒｇｉｎｉｎｅ　ｖａｓｏｐｒｅｓｓｉｎ　（ＡＶＰ））　、成長ホルモン（ ＧＨ）　、甲状腺刺戟ホルモン（ＴＳＨ）　、およびエンドルフィン／エンケフ ァリンである。 試験に使用される化合物は、静脈内投与ｃｉ、Ｖ、）によるのが好ましいが、皮 下（Ｓ、Ｃ，）または経口（ｐ、ｏ、）投与法のような他の方法が使用されても よい。この化合物は、適当な非毒性の薬学的に許容できる担体とともに、視床下 部−下垂体一副腎軸を刺戟するのに充分な量で投与される。この化合物は、視床 下部−下垂体一副腎軸が平静な時、換言すればヒトでは午後８時の時に、投与さ れるべきである。 インターロイキン−１のような免疫／炎症性のメジエータ−が使用される時、こ の免疫炎症性のメジエータ−は、０．１μｇ／体重ｋｇないし１０μｇ／体重ｋ ｇ、好ましくは１μｇ／体重ｋｇないし５μｇ／体重ｋｇの薬量で恐ら（投与さ れるだろう。ＣＲＨが使用される時は、体重１ｋｇ当り１μｇの卵巣ＣＲＨがｉ 、ｖ、で投与される。 主属体性アミンまたはキバジン（ｑｕｉｐａｚｉｎｅ）のようなその類似化合物 が使用される時は、この化合物は体重１ｋｇ当り０．０１ないし１■、好ましく は０．　１ないし０．５■／体重ｋｇのキパジンが恐らく投与されるであろう。 他の主属体性アミンまたはその類似体の投与量は、場合場合の基準に従って決め なければならない。 化合物の投与後、検査をする前に、化合物が患者の血漿中のグルココルチコイド またはＡＣＴＨのレベルを上げるのに任せる充分な時間待つ必要がある。概して 、検査の前に少な（とも１０分分間様する必要がある。グルココルチコイドまた はＡＣＴＨのレベルは、そのレベルが正常な状態に復帰する前に測定しなければ ならない。 グルココルチコイドまたはＡＣＴＨのレベルは、その化合物の投与後４時間以内 に正常に復帰するであろう。待機時間は好ましくは投与後１５ないし２時間、更 に好ましくは投与後３ｏないし６０分間である。 もしもホルモンのレベルが、正常の個体で確立した平均値より有意に低いならば （２倍以上の標準偏差で低いように）、その患者は炎症疾患に対して感受性があ ると陽性診断される。 この方法は、関節炎、ブドウ膜網膜炎 （ｕｖｅｏｒｅｔｉｎｉｔｉｓ）　、肺炎、脳を髄炎、多発性硬化症および肝炎 肉芽腫症を包含するがこれだけに限定されない炎症の徴候の検査に極めて有用で ある。 種々の免疫／炎症性メジエータ−を使用してもよい。 インターロイキン類〔インターロイキン−１（ＩＬ−１）、インターロイキン− ２（ＩＬ−２）、インターロイキン−３（ＩＬ−３）、インターロイキン−４（ ＩＬ−４）、インターロイキン−５（ＩＬ−５）およびインターロイキン−６（ ＩＬ−６））、インターフェロン類（αインターフェロン、βインターフェロン およびγインターフェロン）または腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）の何れかの一種のよ うなサイト力インをこの検査に使用してもよい。表皮成長因子（ＥＧＦ）、トラ ンスフォーミング成長因子αおよび／またはβ（ＴＧＦ−αおよび／またはＴＧ Ｆ−β）のような他のサイトカインも使用できる。セロトニン、ノルエピネフリ ン、エピネフリンまたはドーパミンのような主属体性アミンも使用できる。これ に加えて、キパジンのようなこれらの主属体性アミンの同族体と作動薬も使用さ れ得る。使用され得る追加の化金物は、主属体性アミンの内因性のレベルを高め るトラニルサイブロミン（ｔｒａｎｙｌ−ｃｙｐｒｏｍｉｎｅ）硫酸塩またはイ ソカルボキサシト（ｉｓｏｃａｒｂｏｘａｚｉｄ）　　（３０ｍｇ／患者）のよ うなモノアミンオキシダーゼ阻害剤を包含する。フルオキセチン（ｆｌｕｏｘｅ ｔｉｎｅ）のような主属体性アミンの取込み阻害剤も使用され得る。 ＩＬ−１のような炎症性メジエータ−は、視床下部−下垂体−副腎（ＨＰＡ）軸 を刺戟することにより、血漿のコルチコステロンとＡＣＴＨの増加の原因になる ことが知られている。本発明は；関節炎と他の炎症の徴候に対する感受性は、炎 症性メジエータ−と他の化合物に対するＨＰＡ軸の応答性の欠如に関係している ことを見出したことに基づいている。 本発明は、ＨＰＡ軸を中枢的にまたは多数のレベルで刺戟することによってＨＰ Ａ欠陥を回避できる薬剤を使用する関節炎の処理指針としても非常に有用である 。これは、ステロイドまたはＣＲＨもしくは八ＣＴＨのような他のＨＰＡ軸ホル モンの薬量と投与時期の決定指針を提供する。 図面の簡単な説明 Ｆｉｇ、ＩＡとＩＢは、連鎖球菌の細胞壁（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ　ｃｅ ｌｌ　ｗａｌｌ）　　（ＳＣＷ）を無胸腺に対する正常のＬＥＷおよびＦ３４４ ラットに注射した後の関節炎の重症度を示している。関節炎の重症度は、−回の ｐ、ｓｃｗ注射の後の４２日迄にわたる関節炎のインデックス（最高値：１６） により定量化される。データは、試験群当り５匹のラットの 「平均値±Ｓ、Ｅ、Ｍ、Ｊを意味する。 Ｆｉｇ、２Ａ、２Ｂ、２Ｃおよび２Ｄは、５ＣＷＳ　ＩＬ−１アルファ、または キバジンでもって、純系交配のＦ３４４／ＮとＬＥＷ／Ｎラット中に、または異 系交配したＨＳＤラットにより誘導された血漿コルチコステロンのレベルを示し ている。各々の系のラットは、示したように、一種のメジエータ−（ＳＣＷ（２ ■の細胞壁のラムノース）、１ｇｍの組換えＩＬ−１α、１■のキナβジンまた はＰＢＳ対照〕でｉ、ｐ、注射する注射６０分後に採取した血漿中のコルチコス テロンを定量する。水平線は各々の群の平均値を示す。 Ｆｉｇ、３Ａ、３Ｂ、８Ｃ，３Ｄ、３Ｅおよび３Ｆは、ＬＥＷ／Ｎ　（−０−） ラット対Ｆ３４４／Ｎ（−・−）ラットにおける、 ＳＣＷ　（Ｆ　ｉ　ｇ、３Ａと３Ｂ）；ヒト組換えＩＬ−１α（ＩＬ−１）（Ｆ ｉｇ、３Ｃと３Ｄ）：または キパジン（ＱＵＩＰ）（Ｆｉｇ、３Ｅと３Ｆ）に対する血漿ＡＣＴＨとコルチコ ステロンの応答の時間経過を示している。 血漿ＡＣＴＨとコルチコステロンを、示した各薬剤のｉ、ｐ、注射後４時間迄の いろいろの時点においてラジオイムノアッセイにより定量した。示したデータは 、実験群当り少なくとも５匹の動物の、 平均値±Ｓ、Ｅ、Ｍ、である。 Ｆｆｇ、４Ａ、４Ｂ、４Ｃおよび４Ｄ＋よ、Ｆ３４４／Ｎ（−・−）ラット対し ＥＷ／Ｎ　（−０−）ラットにおける、 ＳＣＷ　（Ｆｉ　ｇ、４Ａと４Ｂ）； ヒト組換え　ＩＬ−１α（ＩＬ−１）（Ｆｉｇ、４Ｃと４Ｄ）：または キナβジン（ＱＵＩＰ）（Ｆｉｇ、４Ｅと４Ｆ）に対する血漿ＡＣＴＨとコルチ コステロンの応答の薬量による応答度を示している。 示したメジエータ−の種々の薬量を、ｉ、ｐ、注射しそして血漿ＡＣＴＨとコル チコステロンを、示した各薬剤の注射後６０分後にラジオイムノアッセイにより 定量した。示したデータは、実験群当り少なくとも５匹の動物の、 平均値±Ｓ、Ｅ、Ｍ、である。 Ｆｉｇ、５Ａと５Ｂは、ヒトＣＲＨのいろいろな濃度に対する血漿ＡＣＴＨとコ ルチコステロンの薬量応答を示している。ＣＲＨをｉ、ｐ、注射し、そして注射 ６０分後に血漿ＡＣＴＨとコルチコステロンをラジオイムノアッセイにより測定 した。データは、実験群当り少なくとも５匹の動物の、 平均値±Ｓ、Ｅ、Ｍ、である。 Ｆｉｇ、６Ａ、６Ｂ、６Ｃおよび６Ｄは、室傍核（ｐａｒａｖｅｎｔｒｉｃｕｌ ａｒ　ｎｕｃｌｅａｓ）のパルボセルラー（ｐａｒｖｏｃｅｌｌｕｌａｒ）　＝ 　ユウロ：／　（ＰＶＮ）におけるＣＲＨ（Ｆｉｇ、６Ａ）とエンケファリン（ Ｆ　ｉ　ｇ、　　６　Ｂ）の転写レベルかＳＣＷの投与により、Ｆ３４４／Ｎラ ット（・）では増加するが、ＬＥＷ／Ｎラット（０）では増加しないことを示し ている。 ＰＶＮにおけるＣＲＨ（Ｆｉｇ、６０）とエンケファリン（Ｆｉｇ、６Ｄ）の転 写レベルは、Ｆ３４４／Ｎラット（・）またはＬＥＷ／Ｎラット（０）における γＩＬ−１α　投与により増加しない。 Ｆ３４４／ＮとＬＥＷ／Ｎラットに、２■の細胞壁ラムノース／１００ｇラット 当り、または１μｇのｒｌＬ−１α／１００ｇラット当りを腹膜内注射する；そ して０．２．４および７時間後に殺した。 前に記述したように（６，７）、本来の場所でのハイブリダイゼイションとＰＶ Ｎ当りのセクション当りのハイブリダイズした試料のコピー数の定量を行った。 Ｆ３４４／ＮラットではＣＲＨのｍＲＮＡレベルは、ＳＣＷ注射後、４時間と７ 時間後の両方とも基準線とＬＥＷ／Ｎレベル〔例えば、系間の７時間における両 側Ｔ検定（ｔｗｏ−ｔａｆｌｅｄ　Ｔ　ｔｅｓｔ）、ｐ＜０．００１）　　と比 較して明瞭に増大している。エンケファリンのｍＲＮＡレベルは、ＳＣＷ投与に 対する応答において両方の系統で基準線の上にあるが、Ｆ３４４／Ｎの応答はＬ ＥＷ／Ｎの応答より大であった（ｐ＜０．０５）。　最少６匹のラットを各々の 試験条件のために使用した。但し、２時間の点では４匹を使用した。横線はＳ、 Ｅ、Ｍ、を表す。 Ｆｉｇ、７Ａと７Ｂは、いろいろな薬剤の腹膜内注射後４時間において測定した 、Ｆ３４４／Ｎ（Ｆｉｇ、７Ａ）とＬＥＷ／Ｎ　（Ｆ　ｉ　ｇ、７Ｂ）ラット中 の全視床下部の免疫反応性のＣＲＨ（ｉ　ＣＲＨ）含有量を示している。Ｆ　３ ４４／Ｎ　（Ｆ　ｉ　ｇ、　　７Ａ）またはＬＥＷ／Ｎ（Ｆｉｇ、７Ｂ）ラット は、未処理であるか、ＰＢＳ、ｒｌＬ−１ａＣラット当り１Ｂｇ）、または５Ｃ Ｗ（ラット当り２■の細胞壁ラムノース）を投与され、そしてｉ　ＣＲＨ視床下 部の含有量はラジオイムノアッセイ（１０）により定量される。核実験条件当り 少な（とも１０匹のラットを使用した。 統計的差異は、シュンカン′ス多領域検定（Ｄｕｎｃａｎ’　ｓｍｕｌｔｉｐｌ ｅ　ｒａｎｇｅ　ｔｅｓｔ）に従った片側アッパ（ｏｎｅ−ｗａｙ　ＡＮＯＶＡ ）により決定した。 未処理とＰＢＳ処理したＦ３４４／Ｎラットの間には有意差は無く、また、どの ような基準によってもＬＥＷ／Ｎラットのどの処理群の間でも有意差は無かった 。 ｒｌＬ−１ａおよびＳＣＷ処理したＦ３４４／Ｎ視床下部の両方は、ＰＢＳまた は未処理のＦ３４４／Ｎ視床下部より、そして処理したもしくは未処理のＬＥＷ ／Ｎ視床下部より有意差により多くのＣＲＨを含有していた（＊＝ＡＮＯＶＡ　 　ｐ＜Ｑ、０００１．　　シュンカン′ス多領域　ｐ＜０．０５）。 シュンカン′ス多領域検定によると、ＬＥＷ／Ｎ視床下部のＣＲＨのベースライ ンレベルは、Ｆ３４４／Ｎ視床下部の基準線レベルから有意に差は無かった。　 Ｆｉｇ、８は、組替えｒＩＬ−１ａでｉｎ　　ｖｉｔｒｏで刺戟したＦ３４４／ Ｎ（・）対しＥＷ／Ｎ（○）からの視床下部のｉ　ＣＲ８分泌を示している。Ｌ ＥＷ／ＮまたはＦ３４４／Ｎラットからの視床下部を、１旦　ｖｉ　ｔｒＯで、 対照培地でまたは１０−”　Ｍないし１０−＠Ｍの濃度のｒｌＬ−１αで、２０ 分間刺戟した。培地中の１ＣＲＨをラジオイムノアッセイ（１１）で定量した。 Ｆ３４４／Ｎラットからの視床下部は、ＬＥＷ／Ｎ視床下部による基準線上１０ ％の増加と比較して；基準線上１５０％増の１ＣＲＨの分泌を示した（　＊　＝ 　ｐ　＜　ｏ　。 ００１）。 統計的意義は、シュンカン′ス多領域検定により決定した。実験条件当り少なく とも７匹のラットを使用した。 発明の詳細な説明 群Ａの連鎖球菌細胞壁断片（ペプチドグルカン群の特殊な多糖）の水性けん濁液 の、ＬＥＷ／Ｎ雌ラット中うの一回の腹膜内注射は、重症の、速い徴候の、急性 の胸腺非依存性の関節炎を誘発し、これに慢性的な増殖性かつ浸食性の胸腺依存 性の関節炎か続く。然し、組織適合性のＦ３４４／Ｎの雌ラットは、他の組織適 合性の系と共に、小さい、一時的な後肢の膨潤を起こすのみである（Ｌ　２）。 細胞壁に対する応答における系統依存性の相違は、牌臓肥大、血液白血球溶解、 および肝炎肉芽腫症の発達の程度においても注目されている。 ＬＥＷ／Ｎラットにおける重症の炎症病理の発達は、細胞壁断片の量、局在化部 位、または持続性の違いに関係しない。ＬＥＷ／ＮおよびＦ３４４／Ｎラットの 両方において、細胞壁は牌臓、肝臓、骨髄および関節周辺の滑液血管に局在化す る。ＬＥＷ／Ｎラットは、Ｆ３４４／Ｎラットよりより持続性のある炎症反応を 、細胞壁の局在部位に起こす（５）。細胞壁に対するいろいろの単核細胞の応答 の解析は、ＬＥＷ／Ｎラットにおける連鎖球菌細胞壁誘発症状に対する顕著な感 受性とＦ３４４／Ｎにおける抵抗性に潜在する機構の基本的な洞察をするに至っ ていないが、系間の僅かな相違が注目されている（６−８、およびワイルダー他 、未公開資料）。 組織学的には、ＬＥＷ／Ｎラットにおける急性相の関節炎における早期の変化は 内皮性の細胞１ａの増加した発現を伴う滑液毛細血管の損傷である。これに直ぐ 次いで、滑液における陽性マクロファージの浸潤がある（１）。全ての時点にお いて、Ｆ３４４／Ｎラットは、ＬＥＷ／Ｎラットと比較して、あったとしてもほ んの少しの炎症を示す。この滑液マクロファージと内皮性細胞１ａの発現の程度 の違い、これは関節炎の発達と平行するのであるが、２系列間の最も衝撃的な免 疫組織学的相違である。 この差異は、無胸腺のＬＥＷ、ｒｎｕ／ｒｎｕおよびＦ３４４．ｒｎｕ／ｒｎｕ ラットにおいてすら観察される。これは、Ｉａ発現とＳＣＷ関節炎の急性の胸腺 非依存性の両方を調節する因子または因子群があるらしいことと；２系列間の関 節炎感受性の相違はＳＣＷの注射の直後に作動するＩａの抑制調節剤の存在に関 連するらしいことを暗示している。 コルチコステロイド類は、１ａ発現の強力な内因性の負の調節剤、そして強力な 内因性の免疫抑制性のかつ抗炎症性の作用剤の両方である（９−１３）。 コルチコステロンは、エンドトキシンおよびインターロイキン−１（ＩＬ−１） のような炎症性メジエータ−によるＨＰＡの刺戟を通しての炎症の初期に放出さ れる（１４−２８）。 ＳＣＷは、マクロファージを活性化しモしてＩＬ−１の放出を刺戟し、そして化 学的にエンドトキシンに関係する（細菌性リボ多糖）（２４）ので；そしてＩＬ −１は、免疫系と中枢神経系（ＣＮＳ）の間の正常のフィードバックループを維 持するのに重要でであるので（１１−２３，２５−２６）；純系交配したＦ３４ ４／ＮとＬＥＷ／Ｎラットおよび異系交配したＨ３Ｄラットにおける、ＳＣＷと ＩＬ−１αに対する初期のＡＣＴＨとコルチコステロンの応答を比較した。 セロトニン（５−ＨＴ）も炎症の間に血小板から放出され、そしてＩａ発現の負 の調節剤であるので（２７，２８）；そして５−ＨＴ経路は視床下部−下垂体刺 戟の別の経路であるので（２９−３１）；Ｆ３４４／Ｎ、ＬＥＷ／ＮおよびＨＳ Ｄラットにおける急性のＡＣＴＨおよびコルチコステロン応答に対するセロトニ ン作動薬、キバジンの影響も比較した。 更に、観察したＳＣＷ感受性のＬＥＷ／ＮラットとＳＣＷ抵抗性のＦ３４４／Ｎ ラットにおけるグルココルチコイドの直接の関与を評価するために、前者のＳＣ Ｗ感受性を抑制するためのグルココルチコイドの置換薬量の能力および後者のＳ ＣＷ抵抗性を逆転するための強力なグルココルチコイド拮抗薬ＲＵ４８６の能力 を検討した。 発明の詳細な説明 動物：　１００ｇの、ウィルス抗体の無い、雌の、純系交配のＦ３４４／ＮとＬ ＥＷ／Ｎラット、そして異系交配のハーランースブラグーダウリー（ＨＳ　Ｄ） ラット〔ハーランースブラグーダウリー（インタアナポリス、ＩＮ）から購入〕 にいろいろの炎症性メジエータ−を腹膜注射するに先立ち、１２時間−明−１２ 時間−暗周期に順応させた。 薬剤と炎症性メジニーター：群Ａの連鎖球菌細胞壁ペプチドグルカン群の特殊な 炭水化物（ＳＣＷ）を以前に記述した（１）ようにして燐酸塩緩衝液（Ｐ　Ｂ　 Ｓ）内に調整した。これを、ラット当り細胞壁ラムノースを０．０２ないし２■ の濃度で注射した。 組換えヒトインターロイキン−１α（ＩＬ−１α）；ＩＬ−１α（３２）はビー 、キリアンおよびビー、ロメジコ両博士ら（ホフマンーラ　ロッシュ、エヌ、ジ エイ、）から寛大に贈られた。これをラット当り０．１ないし５μｇの範囲の薬 量で注射した。特定した活性は、３Ｘ１０８ないし２．　５　Ｘ　１０　”　単 位／ｌｔ　ｇ（Ｄ範ｒＭテＪ５った。ＩＬ−１活性の１単位は、以前に記述した ようにＤＩＯセル生物検定法で決めた（３２）。 注射した最終濃度におけるエンドトキシンレベルは、０．００１３ＥＵ／１００ μｍより少なかった。 キバジン（Ｑｕｉｐａｚｉｎｅ）はシグマ化学会社（セントルイス、エムオオ） から購入した。それをラット当り０．１ないし５■の範囲の薬量で投与した。 細胞培養用のデキサメタソン（Ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ）をシグマ化学会社 （セントルイス、エムオオ）から購入し、ラット当り０．０１μｇないし１００ μｇ投与した。 ＲＵ４８６　（８３，フィベルトデー、、デラエット、アール０．およびツーツ シュ、ジー、（１９８１）プロシーディングＶｌｌｌ、インターナショナル　コ ンブレス　才ブ　フ７−マ：１０ジー（Ｐｒｏｃ、ＶＩＩＩ　Ｉｎｔｅｒｎａｔ ｉｏｎａｌＣｏｎｇｒｅｓｓ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、）、　６６８ 頁〕はルーセル一二一クラフ（パリ、フランス）より寛大に贈られた。 それを、ラット当り　０．０３■ないし３■の範囲の薬量で、腹膜内（ｉ、ｐ、 ）注射するために、滅菌した標準の食塩水にけん濁した。 ＬＹ５８８５７：セロトニン（５−ヒドロキシトリプタミン）の拮抗薬、ＬＹ５ ３８５７　（６−メチル−１−［１−メチルエチル］エルゴリンー８−カルボン 酸、２−ヒドロキシ−１−メチルプロピル　エステル［Ｚ］−２−ブテンジオエ ート）（３４）はエム、コーエン博士、リリー　リサーチラボラドリース、イー ライ　リリーアンド　コ、（インタアナポリス、ＩＮ）から寛大に贈られた。 ラット／ヒトのコルチコステロン放出ホルモン（ＣＲＨ）はベニンシュラ　ラボ ラドリース（ベルモント、シーエ・−）から購入した。そしてそれをラット当り ０．０１ないし８μｇの範囲の薬量で使用した。 ホルモン検定：血漿コルチコステロンは、ラジオアッセイ・システム・ラボラト リ−２会社、イミュノケミカル　コーポレーション（カーソン、シーニー）より 購入したラジオイムノアッセイ（３５）キットにより定量した。 副腎皮質ホルモン（ＡＣＴＨ）のレベルは、前に記述した（３６）ようにして定 量した。 ラットに１０およびＩＩＡＭの間にｉ、ｐ、注射し、そして血漿ＡＣＴＨとコル チコステロン定量のために、血液を注射後３０分間ないし４時間後に採取した。 コルチコステロンのインター（ｉｎｔｅｒ）−およびイントラ（ｉｎｔｒａ）− アッセイ管理変化性（ｃｏｎｔｒｏｌｖａｒｉａｂｉｌｉ　ｔｙ）は各々１．２ ％および３．４％であった。 ＡＣＴＨのインター（ｉｎｔｅｒ）−およびイントラ（ｉｎｔｒａ）−アッセイ 管理変化性（ｃｏｎ’ｔｒｏｌｖａｒｉａｂｉｌｉ　ｔｙ）は各々８．０％およ び２．８％であった。 関節炎の重症度：関節炎の重症度は、関節炎指数により定量され、曲に記述した ように（２）単独のブラインドした観察者によ行われた。簡単に説明すると、関 節炎指数は、各々の肢の関節炎の重症度（尺度　０−４．４−最も重症の関節炎 ）の総和である。最高の関節炎指数は１６である。 データ解析：試験群当り最少５匹のラットを検討した。そして試験は少な（とも ３回繰り返した。示したデータは、　平均値士各々の群の平均値の標準誤差（Ｓ 。 Ｅ、Ｍ、’）である。試験群を賦形剤で処理した対照群および互いに比較した。 そして群間の有意差は非対のスチュウデントのｔ検定（ｕｎｐａｉｒｅｄ　５ｔ ｕｄｅｎｔ　ｔ　ｔｅｓｔ）により決定した。 放出された全ＡＣＴＨとコルチコステロンは、台形（ｔｒａｐｅｚｏｉｄ）規則 を使用して、曲線下の面積を積分することにより計算した。 級！ ＬＥＷ／ＮのＳＣＷ誘発関節炎の胸腺依存性および胸腺依存性の相 Ｆｉｇ、ＩＡとＢは、以前の試験（１）の繰り返しを示しており、この試験では ＳＣＷを注射した正常番二対する無胸腺のＬＥＷとＦ３４４のラットで関節炎指 数（ＡＩ）を検定した。各群５匹の動物に、日Ｏに、ＳＣＷを一回腹膜内投与し そして６週間観察した。 正常のＬＥＷ／Ｎラットに誘発した関節炎は、２相であり、速い徴候の急性の炎 症構成部分はＳＣＷの注射２４時間後と早く発症し、そして後の慢性の構成部分 は、注射後３ないし６週間後に発症した。無胸腺のＬＥＷ。 ｒｎｕ／ｒｎｕ　　ラットは後の相の関節炎を発症しないが、早期の炎症の構成 部分を発症しそして低程度の慢性の滑膜炎を継続する。ＬＥＷラットにおけるＳ ＣＷ関節炎の早期の相は、従って、胸腺非依存性であり、そして後の相は胸腺依 存性である。 軽い関節炎を発症する正常のそして無胸腺のＦ３４４ラットの非常に小さいパー セントは、早期の胸腺非依存性の構成部分を発症し、これは速やかに快癒する。 無胸腺のＬＥＷ、ｒｎｕ／ｒｎｕ対Ｆ３４４．ｒｎｕ／　ｒ　ｎ　ｕラットにお けるＳＣＷ関節炎の急性の胸腺非依存性の相における系間の相違の存在は；関節 炎の胸腺非依存性の相は遺伝的に調節されており、そしてその調節因子または因 子群は症状の非常に速い時期に作動することを示している。 異系交配のＨ３Ｄラット対純系交配のＦ３４４／ＮおよびＬＥＷ／Ｎラットにお ける５ＣＷＳ　ＩＬ−１αおよ上で議論したように、コルチコステロンは、炎症 性メジエータ−よるＨＰＡ軸の刺戟を通しての炎症の初期に放出されるＩａ発現 の強力な負の調節剤であるので（１４−２３）；純系交配のＦ３４４／Ｎおよび ＬＥＷ／Ｎラットおよび異系交配のＨ３Ｄラットに対するＳＣＷ、ＩＬ−１αお よびセロトニン（５−ＨＴ）作動薬、キ、＜ジンに対する早期のＡＣＴＨおよび コルチコステロン応答を比較した。 腹膜内のＳＣＷ、ＩＬ−１αおよびセロトニン（５−ＨＴ）作動薬、キバジンの 全ては、ｉ、ｐ、注射後１時間において、Ｆ３４４／Ｎラットに顕著な血漿コル チコステロン応答を誘発した（Ｆｉｇ、２Ａ、２Ｂ、２Ｃおよび２Ｄそして表１ ）。これらの薬剤は、少ない（ＳＣＷ、キパジン）または無の（ＩＬ−１α）血 漿コルチコステロン応答をＬＥＷ／Ｎラット（ｐ＜０．０１）に誘発した。異系 交配のＨ３Ｄラットは、低いＬＥＷ／Ｎと高いＦ３４４／Ｎ応答の中間にある中 程度のコルチコステロン応答を示した。コルチコステロンの応答は広く分布しそ して二つの群に入れられる。一つは低いＬＥＷ／Ｎ応答に跨がるものであり、そ して他方は高いＦ３４４／Ｎ応答に跨がるものである。 データは、Ｆｉｇ、２Ａ、２Ｂ、２Ｃおよび２Ｄに示した血漿コルチコステロン の、 平均値±Ｓ、Ｅ、Ｍ、　　　　である。 血漿コルチコステロンは、Ｈ３Ｄ、Ｆ　３４４／ＮまたはＬＥＷ／Ｎラットに、 ＰＢＳ、ＳＣＷ　（２■細胞壁ラムノース／ラツト）、ＩＬ−１α（１Ｂｇ／ラ ット）またはキパジン（１■／ラツト）をｉ、ｐ、注射した６０分後に、採取し た血漿のラジオイムノアッセイにより定量した。 コルチコステロン測定の１時間の時点および使用したメジエータ−の薬量は、時 間経過と薬量応答試験における最大のコルチコステロンの応答を伴うことが見出 されたそれらであった（Ｆｉｇ、３と４）。 ＬＥＷ／Ｎ対Ｆ３４４／ＮラットにおけるＳＣＷ、ＩＬ−１αおよびキパジンに 対する血漿ＡＣＴＨおよびコルチコステロンの時間経過速度論 Ｆｉｇ、３は：血漿ＡＣＴＨは、Ｆ３４４／ＮとＬＥＷ／Ｎラットの両方におい て注射３０ないし６０分後に最高になったものの；ＳＣＷ、ＩＬ−１αおよびキ パジンに対するＬＥＷ／Ｎ血漿ＡＣＴＨ応答は、全ての時点において、−貫して Ｆ３４４／Ｎ応答より低かったこと；を示している。同様にして、ＬＥＷ／Ｎ血 漿コル血漿コルココステロン応答の時点においてＦ３４４／Ｎ応答より低かった 。 ＳＣＷ、ＩＬ−１α、またはキバジンに応答する全ての時間帯にわたって分泌さ れる全部のＡＣＴＨとコルチコステロンは、ＬＥＷ／Ｎラットにおける方がＦ３ ４４／Ｎにおけるより顕著に少ない（表２）。 ＬＥＷ／Ｎラットと比較して、Ｆ３４４／Ｎラットにおいては；血漿ＡＣＴＨは 、ＩＬ−１αに応答して８倍より多く；ＳＣＷに応答して２倍より多（；そして キパジンに応答して１．６倍より多（；増加する。 Ｆ３４４／Ｎラットは、ＬＥＷ／Ｎラットと比較した時、ＳＣＷとＩＬ−１αに 応答して２倍以上およびキパジンに応答して１．４倍以上、血漿コルチコステロ ンを増加する。 データは、ｉ、　　１）、の５ＣＷ（２■細胞壁ラムノース／ラツト）、ＩＬ− １α（１μｇ／ラット）、またはキバジン（１■／ラツト）に対する応答におけ る、Ｆ３４４／Ｎ対しＥＷ／Ｎラットにより分泌された全量の血漿ＡＣＴＨとコ ルチコステロンの、 平均値　±　Ｓ、Ｅ、Ｍ、　　を表す。 データは、台形規則を使用して、Ｆｉｇ、３の時間経過曲線下の面積を計算する ことにより、誘導された。 ＬＥＷ／Ｎ対Ｆ３４４／ＮラットにおけるＳＣＷ、ＩＬ−１αおよびキパジンに 対する血漿ＡＣＴＨとコルチコステロンの薬量一応答量 Ｆｉｇ、４は、ＳＣＷ、ＩＬ−１αまたはキパジンの薬量をいろいろに換えて処 理したＬＥＷ／Ｎ対Ｆ３４４／Ｎラットの血漿ＡＣＴＨとコルチコステロンの応 答を示している。試験した全ての薬量において、ＬＥＷ／Ｎラットは、Ｆ３４４ ／Ｎラットより低い血漿ＡＣＴＨおよびコルチコステロンレベルを持っていた。 ラット／ヒトＣＲＨに対するＬＥＷ／Ｎ対Ｆ３４４／Ｎラットの血漿ＡＣＴＨお よびコルチクステロン応答ラット／ヒトＣＲＨのｉ、ｐ、のいろいろな薬量に対 するＬＥＷ／ＮのＡＣＴＨとコルチコステロンの応答は、Ｆ３４４／Ｎ応答より 低かった（Ｆｉｇ、５）。 Ｆ３４４／Ｎ対しＥＷ／Ｎラットにおける下垂体、副腎線および胸腺の重量 下垂体の重量は、有意に差はないというものの、ＬＥＷ／Ｎラットと比較してＦ ３４４／Ｎにおける方がより多かった（表３）。Ｆ３４４／Ｎの副腎線の重量は 、年令の合ったＬＥＷ／Ｎラットから得た副腎線より僅かだか有意に多かった（ １）＜０．０１）。ＬＥＷ／Ｎの胸腺の重量は、年令の合ったラットでは、Ｆ３ ４４／Ｎの胸腺の重量より有意に高かった（ｐ＜９．０１）。 ＬＥＷ／Ｎラットのデキサメタソン処理によるＳＣＷ関節炎の抑制 ＬＥＷ／Ｎラットにおいては、ＳＣＷに対するコルチコステロイド答は明らかに 鈍かったので、ＳＣＷ処理したＬＥＷ／Ｎラットにおける関節炎の重症度に与え るコルチコステロイドであるデキサメタソンの影響を評価した（表４）。 群当り５匹の動物に、デキサメタソン（Ｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅ）のいろい ろな薬量と共に、日０に５ＣＷ（２■細胞壁ラムノース／ラツト）をｉ、ｐ、注 射する。デキサメタソン処理は、０．５μｇ×２回／日（ｂ、ｉ、ｄ）または１ μｇＸ１回／日（ＱＤ）の生理的置換範囲ないし薬理的範囲の薬量（１０−１０ ０μｇＱＤ）の範囲にある薬量で７２時間にわたって継続した。薬理学的範囲内 のデキサメタソンの薬量が全体的に、ＳＣＷにより誘発された関節炎を抑制する だけでなく、生理的範囲の薬量（１μｇＱＤまたは０．５μｇｂ、ｉ、ｄ、）も 、ＳＣＷに加えて食塩水処理した対照と比較して関節炎指数（Ａ。 １、）により決定した関節炎の重症度を有意に抑制した（ｐ＜０．０５）。 ＬＥＷ／Ｎラットに５ＣＷ（２■細胞壁ラムノース／ラツト）を−回注射し、次 いでデキサメタソンを示した薬量でまたは対照の食塩水を注射した。デキサメタ ソン注射は日に一回（ＱＤ）または一回（ｂ、ｉ、ｄ、）、全部で７２時間にわ たり行い、そしてブラインドにした観察者が、ＳＣＷ注射の７２時間後に、関節 炎の重症度（Ａ、１．、関節炎指数）を定量した。 ＳＣＷで処理したＦ３４４／Ｎラットへの、コルチコステロン受容体拮抗薬、Ｒ Ｕ４８６、または５　　ＨＴｚ作動薬、ＬＹ５３８５７の影響 表５は、ＳＣＷにコルチコステロン受容体拮抗薬ＲＵ４８６を加えた、またはＳ ＣＷに５　　ＨＴ２拮抗薬ＬＹ！１８５７を加えたＦ３４４／Ｎラットの処理を 、上記何れかの薬剤単独での処理と比較した影響である。群当り５匹の動物を、 日０に、５ＣＷ（ラット当り２■の細胞壁ラムノース）でｉ、ｐ、注射した。Ｓ ＣＷと同時に、ＲＵ４８６のいろいろな薬量を注射した。そしてＳＣＷ注射の後 ７２時間迄ＲＵ４８６を日に一回投与した。 ＬＹ５３８５７処理はＳＣＷと同時に始まり、７２時間にわたり日に一回継続し た。僅かな死亡が、ＳＣＷ単独で処理したＦ３４４／Ｎに観察されたのみである 。そして、ＲＵ４８６またはＬＹ５３８５７単独で処理したＦ３４４／Ｎラット には死亡は観察されなかった。単独では影響のなかった（３■ＱＤ）ＲＵ４８６ の薬量は、ＳＣＷと併用するｉ、ｐ、投与では、１００％の致死率をもたらした 。０．０３■ＱＤと同程度に低いＲＵ４８６の薬量は、ＳＣＷ処理したラットに 投与したときには、対照と比較して、依然として顕著な炎症による病的状態と死 亡を伴った。ＲＵ４８６は、以前に、カラゲーナン誘発の炎症を悪化するが顕著 な死亡はないことが示された（３３）。５ＣＷ−関節炎モデルにおいて死亡が増 加するのは、恐らく、２種の薬剤を併用するｉ、　　Ｉ）、投与に伴って起こる 重症の腹膜炎に関係したのであろう。生存するのに充分に低いＲＵ４８６の薬量 では、生存しているラットは急性の関節炎、ある場合には中程度の重症度である （例えば、０．３■のＲＵ４８６の薬量において平均のＡ、１．＝４．５である ）関節炎を起こす。 ＳＣＷと５−ＨＴ、拮抗薬ＬＹ５３８５７によるＦ３４４／Ｎの同時処理は有意 な死亡率を伴わないが、何れかの薬剤を単独で使用した対照ラットと比較して、 穏やかなまたは中程度の関節炎を起こす（ｐ＜Ｑ、０５）。 全ての薬量の変数が検討されなかったが、データは、ＳＣＷ処理したＦ３４４／ Ｎラットにおけるコルチコステロンまたは５−ＨＴの効果の遮断が重症なまたは 致命的ですらある全身性の炎症性の徴候を起こしていることを、明らかに示して いる。 ＊ＳＣＷにＲＵ４８６を加えて投与された生存ラットは、検死の時に毛の逆立て と腹膜炎を示した。 ＊＊ｐ＜０，０５　　ＳＣＷに食塩水を加えて処理したＦ３４４／Ｎラットの炎 症指数（Ａ、１．）と比較して、Ｆ３４４／Ｎラットを５ＣＷ（２■の細胞壁ラ ムノース／ラット）の−回注射、それに次ぐ、示した薬量での、ＲＵ４８６の日 毎のｉ、ｐ、注射、またはＬＹ５３８５７の日２回のｉ、ｐ、注射で処理する。 対照動物は、ＳＣＷに食塩水を加えて、ＲＵ４８８に食塩水を加えて、またはＬ Ｙ５３８５７に食塩水を加えて処理した。 炎症指数は、ブラインドにした観察者がＳＣＷを注射してから７２時間後におい て定量した。最大のＡ、　　１、は１６である。 議論 連鎖球菌細胞壁を注射したＬＥＷ／Ｎラット、および無胸腺のヌードＬＥＷ、ｒ ｎｕ／ｒｎｕラットにすら発生する早期の事実の一つは、滑液の内皮細胞上の１ α発現の増強である。これは炎症性の過程と共に発達し、発現の強度は関節炎の 重症度に平行する。これと顕著に対照的なのは、ＳＣＷを注射した正常のそして 無胸腺のＦ３４４ラットには、Ｉａ抗原の発現の大したことのない増強が発達す ることである（１）。コルチコステロイド類は、Ｉａ発現の強力な内因性の負の 調節剤および内因性の免疫抑制性および抗炎症性の薬剤である（９−１３）。 ここで報告した実験では、ＳＣＷ　　ＩＬ−１αおよびキパジンに対する急性の コルチコステロン応答は、関節炎抵抗性のＩａ低発現性のＦ３４４／Ｎラットと 比較すると、関節炎感受性の、Ｉａ高発現性のＬＥＷ／Ｎラットにおいてかなり 抑制されることが示されている。 異系交配のＨ３Ｄラットは、これは広い変化性でもってＳＣＷ誘発の関節炎に対 して中間の平均の感受性を示すのであるが、これらのメジエータ−に対するこれ も中間の平均の広い変化のあるコルチコステロン応答を示した。更に、コルチコ ステロンをデキサメタソンの生理的薬量で転換すると、ＬＥＷ／Ｎラットにおけ るＳＣＷ関節炎の重症度を有意に抑制した。 逆に、コルチコステロイド類体の拮抗薬であるＲＵ４８６による、Ｆ３４４／Ｎ ラットにおけるコルチコステロンの拮抗は、死亡率の増加、炎症の病状悪化を随 伴し；かつそうでなければ抵抗性であるこの系統において、穏やかなないし中程 度の急性の関節炎を発達させた。 ＬＥＷ／Ｎラット中のように、遺伝的根拠上に；またはＲＵ４８６で処理したＦ ３４４／Ｎラットにおけるように薬理学的根拠上のどちらかにあるこれらの研究 から；ＳＣＷに対するコルチコステロン応答における欠損は、ＳＣＷ誘発の炎症 の徴候に対する感受性の発達を伴うことが明らかである。 炎症の間のコルチコステロンの上昇は、エンドトキシン（細菌性リボ多糖、ＬＰ Ｓ）およびインターロイキン−１（ＩＬ−１）のような炎症性および免疫性のメ ジエータ−による視床下部−下垂体−副腎（ＨＰ　Ａ）軸の刺戟から生じる（１ ４−２３）。 ５ＣＷ（ペプチドグルカン群の特殊な多糖）は化学的にエンドトキシンに関連し ているので、そして活性化したマクロファージからのＩＬ−１の放出を刺戟する ので（２４）、ＳＣＷはＨＰＡ軸のＩＬ−１刺戟を介してコルチコステロンを増 加できるだろう。 ここに示した研究は、ＳＣＷに対するコルチコステロンの応答の抑制に加えて、 ＬＥＷ／ＮラットはＩＬ−１に対するコルチコステロンの応答の欠如を示してい る。 最近の研究は、ＩＬ−１は、ＣＲＨ放出を誘発することにより最初に視床下部の レベルを上げることを示している（１５−２３）。ＬＥＷ／Ｎラットは、ＳＣＷ とＩＬ−１に対する低いコルチコステロン応答に平行する抑制されたＡＣＴＨ応 答を持ち；これはより高いＡＣＴＨおよびコルチコステロン応答を持つＦ３４４ ／Ｎラットと対照的である。これらの初期の発見は、ＬＥＷ／Ｎラットにおける ＨＰＡ軸欠失は、視床下部および／または下垂体レベルにあることを暗示してい る。 Ｆ３４４／Ｎラットと比較して、ＬＥＷ／Ｎラットのより小さい副腎線とより大 きい胸腺は、欠失ＨＰＡ軸応答とコルチコステロンの慢性的な分泌減退とも一致 する。ＬＥＷ／Ｎラットは、外因性のＣＲＨに対する抑制されたＡＣＴＨおよび コルチコステロン応答も持つ。 これは、外因性のＣＲＨまたは他のＡＣＴＨ分泌促分泌促進力る前下垂体コルチ コトロフの不十分な起動にとって、またはこの細胞の本来の欠失にとって二次的 であるかも知れない。 ここに示したデータから、視床下部または下垂体のどちらであるかの欠失の部位 を精確に決めるのは不可能である。というのは、特にＨＰＡ軸の慢性的な過剰− もしくは不足の刺戟は、どのような原因であるにせよ、ＣＲＨ，ＡＣＴＨおよび コルチコステロンの産出の基準線と刺戟されたレベルにおける二次的変化並びに 副腎線と胸腺の大きさにおける二次的変化を起こしかねないからである（１３． １７）。 ＬＥＷ／Ｎラットにおける障害の精確な解剖学的および分子的部位を決めるには 更に研究が必要である。 ５−ＨＴ作動薬のキバジン、並びにＩＬ−１およびＳＣＷに対するＡＣＴＨおよ びコルチコステロン応答において、ＬＥＷ／Ｎラットが欠失しているという観察 は；これらのラットにおける欠失が、ＨＰＡ軸のＩＬ−ＩＮ戟のレベルだけにお けるものではないことを暗示している。　　ＩＬ−１αに比較してキバジンに対 するより大きいＬＥＷ／Ｈのコルチコステロン応答は、５−ＨＴと５−ＨＴ作動 薬がＨＰＡ軸を刺戟する多数の経路に関係しているかも知れない（３１，４０） 。おそら（キバジンがＩＬ−１−視床下部一下垂体一経路におけるＬＥＷ／Ｎの 欠失を回避せしめているのかも知れない（３１，３８−４０）。この仮説は、セ ロトニンが主要なＣＲＨと強力なＡＣＴＨ分泌促分泌促進力を機能していること を示す現実にあるデータにより支持される（３１．４１．４２）。炎症性メジェ ーターーＨＰＡ軸のループの無傷と関節炎抵抗性における５−ＨＴ経路の重要性 は、ＳＣＷ注射したラットのＬＹ５３８５７による関節炎の随伴によっても暗示 される。 ＩＬ−１と比較して、ＳＣＷに対するＬＥＷ／Ｎのより大きなコルチコステロン とＡＣＴＨの応答も、Ｓｃｗにより放出される多数の炎症性のメジエータ−（こ れはＩＬ−１、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）お よび５−ＨＴを包含する。）による多数のレベルでのＨＰＡ軸の刺戟に関連する 。 ５−ＨＴは血液脳関門を通過しないが、炎症の間に放出される５−ＨＴは仮説的 には直接にＡＣＴＨの下垂体放出を刺戟するかも知れない（３１，４１，４２） 。 しかし、このようなＨＰＡ軸の５−ＨＴ刺戟の有力な経路の生理学的妥当性は明 瞭でない。というのは、これは中心部位に到達する５−ＨＴの適当な系の濃度に 依存するだろうからである。 総括すると、ここで報告した実験は、ＬＢＷ／Ｎラットは、ＳＣＷとＩＬ−１、 および５−ＨＴ作動薬であるキバジン、そして外因性ＣＲＨを包含する若干数の 炎症性またとストレス性のメジエータ−に対するＡＣＴＨおよびコルチコステロ ン応答において遺伝的に欠失している系統を代表していることを示している。こ れと対照的に、Ｆ３４４／Ｎラットは同じ炎症性またはストレス性のメジエータ −に対して無傷の強力なＡＣＴＨおよびコルチコステロン応答を持つ組織適合性 の、ＳＣＷ関節炎に比較的抵抗性の系統を代表する。Ｈ３Ｄラットの応答は、炎 症性のメジニーター−ＨＰＡ軸ＡＣＴＨとコルチコステロン応答およびＳＣＷ関 節炎感受性の両方の広い範囲を持つ異系交配の群のそれらを代表する。 従って、ＬＥＷ／ＮおよびＦ３４４／Ｎラットは、ＣＮ５−炎症／免疫系フィー ドバック・ループにおける遺伝子的に決められた欠失をもつ独特な動物のモデル を表す。それが視床下部または下垂体起源のどちらであろうとも、この欠失はＳ ＣＷへの応答における関節炎に対する増加した感受性を伴い、そしてＬＥＷ／Ｎ ラットで観察された他の実験的に誘発された炎症の徴候に対する感受性の増加に も寄与するかも知れない（４３−５０）。 ＳＣＷを注射し、次に薬理学的にＨＰＡ軸を遮断したＦ３４４／Ｎラットにおけ る顕著に増強されたした炎症の徴候、およびＳＣＷを注射し、次にデキサメタソ ンを置換投与したＬＥＷ／Ｎラットにおける関節炎重症度の抑制と組になったこ のデータは；ＬＥＷ／Ｎラットにおける関節炎感受性、そしてＦ３４４／Ｎにお けるけ抵抗性は調節される、それも、炎症性のそして可能ならば他のストレス性 のメジエータ−に対するコルチコステロイド類とＨＰＡ軸応答を少なくとも部分 的に介して調節されるという強力な証拠を提供している。 このデータは、ヒトにおけるリュウマチ様関節炎に対する感受性も包含してもよ い。リュウマチ様関節炎は、若干数の異なるハロタイプに係わるクラスＩＩの主 要な組織適合性複合体（ＭＨＣ）エピトープを随伴する。 リュウマチ様関節炎感受性に対するクラスＩＩＭＨｃ（Ｉａ）の寄与を調査して いる研究は、ＭＨＣの型と配列はリュウマチ様関節炎に対する感受性に部分的に しか原因ならないことを暗示している。 まだ定義されていない別の要因、おそら＜Ｉａ発現調節を司るものあろうが、そ れによってリュウマチ様関節炎に対する感受性に寄与している。ここに提示した 資料は、Ｉａ発現と関節炎に対する感受性の両方を調節する追加の因子は；コル チコステロイド類であって、炎症性および可能ならば他のストレス性メジエータ −に対するＨＰＡ軸の応答性であるという概念に合致する。 リュウマチ性の患者は、コルチコステロイド類の低薬量の疾患抑制効果に微妙に 反応する；リュウマチ様の関節炎は頻繁に月経のようなコルチゾール過剰状態（ ｈｙｐｅｒｃｏｒｔｉｓｏｌｅｍｉｃ）の期間に軽減し、そして分娩後の期間の ような低コルチゾールの状態の期間に病状は悪化する。我々のデータと組み合わ せたこれらの観察は；リュウマチ様関節炎の患者における炎症性および可能なら ば他のストレス性メジエータ−に対する視床下部−下垂体一副腎軸応答性の評価 法を暗示し、疾患の過程に新しい見方を提供するものであろう。 追加の証拠は；ルイス（Ｌｅｗｉｓ）　　（Ｌ　Ｅ　Ｗ／　Ｎ　）ラットにおけ る連鎖球菌細胞壁（ＳＣＷ）−誘発関節炎に対する感受性、即ちヒトのリュウマ チ様の関節炎のモデルは部分的には、視床下部−下垂体一副腎軸の炎症性または ストレス性メジニーター−誘発の欠失活性化によるということを示している。 この欠失の機構を研究するために、ＬＥＷ／Ｎラットにおける視床下部−副腎皮 質放出ホルモン（ＣＲＨ）ニューロンの機能的完全性を検討し、組織適合性、関 節炎抵抗性のＦ３４４／Ｎラットと比較した。ＳＣＷまたは組換えインターロイ キン−１α（ｒｌＬ−１α）に対する応答では、ＬＥＷ／Ｎラットは、深達に欠 失室傍核のＣＲＨのｍＲＮＡレベル、視床下部のＣＲＨ含有量および有機培地に 移植した視床下部からＣＲＨ放出量を示した。これらのデータは、炎症性および 他のストレス性メジエータ−に対するＬＥＷ／ＨのＡＣＴＨおよびコルチコステ ロンの欠失応答、およびＬＥＷ／Ｎの実験的関節炎に対する感受性は、部分的に は、ＣＲＨの合成と分泌における視床下部の欠失によるということの強力な証拠 を提供している。追加の発見：即ち視床下部のエンケファリン遺伝子−この遺伝 子はストレスに応答してＣＲＨ遺伝子と整合して調節されるのであるが−この遺 伝子のＬＥＷ／Ｎにおける欠失発現は、−次的欠失はＣＲＨ遺伝子にあるのでな （、むしろその不適当な調節に関係していることを暗示している。 群への連鎖球菌細胞壁ペプチドグルカン多糖（ＳＣＷ）の腹膜内注射に応答して 、純系交配のルイス（Ｌｅｗｉｓ）（ＬＥＷ／Ｎ）雌ラットは重症の、ヒトのリ ュウマチ様関節炎に似ている繁殖的かつ浸食性の関節炎を発症した。 一方、組織適合性のフィッシャー（Ｆ３４４／Ｎ）ラットは、おなしＳＣＷ刺戟 に対して関節炎を発症しなかった（１−８）。炎症性メジエータ−による糖質コ ルチコイド分泌の活性化は、免疫反応が適当に調節され且つ制限される機構の一 つであるという最近仮定された事実を考慮して、ＬＥＷ／ＮおよびＦ３４４／Ｎ ラットにおけるＳＣＷおよび他の炎症性刺戟に対する下垂体−副腎の応答を以前 に研究した（２３．５２．５３）。 ＬＥＷ／Ｎラットは炎症性および他のストレス性メジエータ−に対し欠失ＨＰＡ 軸応答を持ち、そして同じ刺戟に対するＦ３４４／Ｎラットの応答は完全である か正常以上であることを見出した。 特に、ＬＥＷ／Ｎラントは、Ｆ３４４／Ｎラットと対照的に、腹膜内注射したＳ ＣＷに対し、組換えインターロイキン−１α（ｒｌＬ−１α）に対し、セロトニ ン作動薬であるキバジンに対しそして合成−ラット／ヒト−副腎皮質刺戟ホルモ ン放出ホルモン（ＣＲＨ）に対し顕著ニ傷ついた血漿ＡＣＴＨとコルチコステロ ン応答を持っている。 これに加えて、ＬＥＷ／Ｎラットは、Ｆ３４４／Ｎラットと比較して、より小さ い副腎腺とより大きい胸腺を持ち、これはＡＣＴＨとコルチコステロン、各々に よる刺戟の慢性的欠失と一致する。更に、関節炎と重症の炎症を、ＳＣＷ関節炎 −抵抗性のＦ３４４／Ｎラットに別の方法で、即ち糖質コルチコイド受容体拮抗 薬のＲＵ４８６を使用して、そのＨＰＡ軸のその末端の効果器における遮断によ り誘発できる。 一緒にすると、これらのデータは、ＬＥＷ／Ｎラットの下垂体および副腎腺の、 炎症性または他のストレス性メジエータ−に対する低応答性は、ＳＣＷ関節炎と 他の実験的炎症の徴候に対するそれらの感受性に寄与する主要な要因であること を示している（４３−５０）。 刺戟に対する下垂体ＡＣＴＨの低応答性は、視床下部の刺戟の欠損に一次的また は二次的であり得る（３６）。 ＬＥＷ／Ｎラットの傷ついたＡＣＴＨおよびコルチコステロン応答が視床下部由 来であるかどうかを決定するために、ＬＥＷ／ＮおよびＦ３４４／Ｎラット中の 、泌に影響を与える連鎖球菌細胞壁（ＳＣＷ）またはｒｌＬ−１αの能力を比較 した。 これらの研究の結果は、ＬＥＷ／ＮのＨＰＡ軸への影響は視床下部を包含するこ とを示している。Ｆ３４４／Ｎラットと対照的に、ＰＶＮ内におけるニュウロン の合成と分泌は顕著に傷ついていた。 ＣＲＨのｍＲＮＡの視床下部の発現に与える炎症性のメジエータ−の影響は、Ｓ ＣＷまたはｒＩＬ−１αのいずれかを使用して腹膜内に注射したＦ３４４／Ｎお よびＬＥＷ／ＮラットからのＰＶＮ部分内のＣＲＨ試料で本来の位置でハイブリ ダイゼーションする方法により定量した。８０ないし１００ｇのウィルス抗体の 無い、Ｆ３４４／ＮおよびＬＥＷ／Ｎの雌ラット〔バーラン　スプラーグ　ダウ リー、インジアナポリス、アイエヌ〕に、ＳＣＷ（１００ｇのラット当り２■の 細胞壁ラムノース）、または組換えインターロイキン−１α（ｒｌＬ−１α、１ ａｇ／１００ｇラット）を腹膜内注射した。 組換えインターロイキン−１αはビー、キリアンおよびピー、ロメジコ両博士ら （ホフマンーラ　ロツシュ、エヌ、ジェイ、）からの一種の贈り物であった。 血液を至急採取し、コルチコステロンとＡＣＴＨのレベルを決めるために使用し た（３５．３６）。 脳を切取り、４ｍｍの冠状薄片を、１２ｍの凍結部分を切出すまで一８０℃に冷 却、保存し、ゼラチンを２回塗布したスライド上に融解しておく。次いで、それ らをＣＲＨまたはとエンケファリンの試料でその本来の位置でハイブリダイゼー ションし、以前に記述したように分析した（５４．５５．５６）。ハイブリダイ ゼーションは、６００ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣＩ　　（ｐＨ７，５）、５０％ホルム アミド、４ｍＭ　　ＥＤＴＡ、０．１％ビロリン酸ナナトリウム塩０．２％ＳＤ Ｓ、０．２ｍｇ／ｍｌヘパリンスルヘート、および１０％デキストランスルヘー ト中、２０−２４時間にわたり３７℃で行った。ＳＣＷの注射後、４ないし７時 間の間に、ＣＲＨのｍＲＮＡのレベルはＦ３４４／ＮのＰＶＮ中で著しく増大し たが、ＬＥＷ／Ｎ０ＰＶＮ中では増加しなかった（Ｆ　ｉ　ｇ。 ６Ａ）。ＬＥＷ／ＮラットにおけるＳＣＷに対するＣＲＨ生合成的応答のこの欠 失はＣＲＨ遺伝子におけるまたはそれを活性化する段階における欠失にには二次 的であるかも知れない。 ２種の異なるスト１／スを与えた後の、ＰＶＮ中のＣＲＨとエンケファリン遺伝 子の協同的調節は以前に記述されている（５７．５８）。 ＳＣＷによるエンケファリン遺伝子の誘導もＬＥＷ／Ｎラットで欠失してたかど うかを決定するために、ＳＣＷで処理したその動物からの隣接部分を、それ本来 の位置でのハイブリダイゼーションによりエンケファリンの発現を検討した。そ の応答は、ＬＥＷ／ＮのＰＶＮ中におけるよりＦ３４４／Ｎにおける方が非常に 多かった（Ｆ　ｉ　ｇ、　　６　Ｂ）。それらの結果は、Ｆ３４４／Ｎと他のラ ットにおけるＰＶＮ中のＣＲＨとエンケファリン遺伝子を活性化する一般的な経 路（５７，５８）がＬＥＷ／Ｎラットにおいては欠失していることを暗示してい る。 細菌性のエンドトキシンであるリポ多糖ｃｓｃｗの成分）とＩＬ−１はＨＰＡ軸 を刺戟する（１４−２２．５９）。 ＳＣＷはＩＬ−１の放出を誘発するので（２４）、１Ｌ−１は恐ら＜ＳＣＷによ るＨＰＡ軸刺戟の一つの可能なメジエータ−である。 実に、ｒｌＬ−１αは、ＬＥＷ／Ｎラットと比較して、Ｆ３４４／Ｎラットにお いては血漿コルチコステロンとＡ、　ＣＴ　Ｈにおける存意（ｐｒｏ、０１）な 増加を誘発した（Ｆ３４４／Ｎ　　ＡＣＴＨ＝４８０ｐｇ／ｍｌ、ＬＥＷ／Ｎ　 　ＡＣＴＨ＝７０ｐｇ／ｍｌ：Ｆ３４４／Ｎコルチコステロン＝４８８ｎｇ／ｍ ｌ、ＬＥＷ／Ｎ　　コルチコステロン＝７８ｎｇ／ｍｌ、注射後１時間）（前述 の議論を参照）。 しかし、同様な一回のｒｌＬ−１αの腹膜内注射（ラット当り１ａｇ）は、どち らの系統においても基準線上のＰＶＮ中のＣＲＨのｍＲＮＡまたはエンケファリ ンのｍＲＮＡを有意に増加せしめなかった（Ｆｉｇ、６Ｃと６Ｄ）。 Ｆ３４４／Ｎラットにおいて、ｒｌＬ−１ａが、血漿ＡＣＴＨとコルチコステロ ンを増加できことと、ＰＶＮ中のＣＲＨのｍＲＮ八レへルを増加できないことの 間の不一致は、４１Ｌ−１αは使用した濃度では、ＣＲＨの分泌を促進するが転 写を促進しないことを暗示している。 一方、ｒｌＬ−１αにより誘発される転写のレベルにおける如何なる増加も、そ れ本来の位置でのハイブリダイゼー・ジョンの検出の感度のレベルを下回ってい るかも知れない。 ｒｌＬ−１αに対するＣＲＨのｍＲＮＡの応答の欠失と対照的な、ＳＣＷにより 誘発されるＣＲＨのｍＲＮＡのレベルの増加は、二つの機構：ｒｌＬ−１αに比 較してＳＣＷ刺戟のより持続する性質、または多数の経路を介してＣＲＨニュー ロンを刺戟できるかも知れないＳＣＷによる放出される多数の成分：に関連して いるかも知れない。　全体の視床下部のＣＲＨの含有量は、ＣＲＨの合成と分泌 の間の均衡を反映している。 ５ＣＷ（ラット当り２ｍｇの細胞壁ラムノース）、組替え一１α（ラット当り１ ａｇ）またはリン酸塩緩衝塩液（ＰＢＳ、無菌、エンドトキシンの無い、ＧＩＢ ＣＯ、グランドアイランド、ニューヨーク）をＬＥＷ／ＮまたはＦ３４４／Ｎラ ットに腹膜内注射した４時間後、首を切断し、視床下部を素早（取り、ドライア イス上急速−乾燥し、抽出した。全体の免疫活性のＣＲＨ（ｉＣＲＨ）を、以前 に記述したようにラジオイムノアッセイにより定量した（６０）。　ＳＣＷ、ｒ 　ＩＬ−１ａ、またはリン酸塩緩衝塩液（Ｐ　Ｂ　Ｓ）を腹膜内注射した４時間 後に測定した、視床下部の免疫反応性のＣＲＨ（ｉＣＲＨ）含有量をＦｉｇ、７ に示した。 Ｆ３４４／Ｎラットでは、腹膜内のＳＣＷまたはｒｌＬ−１αのとちらにも対す る応答において、ｉ　ＣＲＨの視床下部の含有量は対照の２倍以上に増加した。 ＰＢＳ注射したまたは無処理の動物における１ＣＲＨの含有量は有意に異なって いなかった。これと対照的に、ＩＣＲＨ含有量は、無処理のＬＥＷ／Ｎラットと 比較して、ＰＢ３１ＳＣＷまたはｒｌＬ−１αで注射したＬＥＷ／Ｎラメトにお いては変化しなかった。 ＳＣＷまたはｒｌＬ−１ａのｉｎ　　ｖｉｖｏ投与に対する応答におけるＬＥＷ ／Ｎラットの視床下部の１ＣＲＨ含有量の変化の欠如は、これらのメジエータ− に対するＣＲＨのｍＲＮＡのＬＥＷ／Ｎラットの欠失応答に合致する。 Ｆ３４４／Ｎラットの視床下部の１ｃＲＨにおける５ＣＷ−誘導増加は、ＳＣＷ に対する応答においてＣＲＨのｍＲＮＡを増加するそれらの能力と合致する。 ｒＩＬ−１αの、Ｆ３４４／Ｎラットにおいては視床下部のｉ　ＣＲＨ含有量を 増加するが、これらのラットにおけるＰＶＮ中のＣＲＨのｍＲＮＡレベルを増加 しない能力は：ＩＬ−１αは、ＣＲＨの転写レベルにおける検出できる増加を起 こすことなしに、ＣＲＮのｍＲＮＡの転写および／または転写後の過程の速度ま たは効率を増加するかも知れないことを暗示している。 ＬＥＷ／Ｎラットにおいては、ＣＲＨのＩＬ−１０分泌の刺戟も欠失しているか どうかを決めるために、ＬＥＷ／Ｎ対Ｆ３４４／Ｎの視床下部の対外移植組織か らのｉｎ　　ｖｉｔｒｏの１ＣＲＨ放出を誘導するｒｌＬ−１αの能力を比較し た。無処理の年令が合致したＦ３４４／ＮまたはＬＥＷ／Ｎラットから取得した 視床下部体外組織を、ｒｌＬ−１αのいろいろな濃度の存在下培養しそして培地 の上澄み液中へのｉ　ＣＲＨの放出をラジオイムノアッセイにより定量した。視 床下部の体外移植組織は、以前に記述したように、未処理のラットから素早く取 り去った（６１．６２）。体外移植組織を、０．１％ウシ血清アルブミン（ＢＳ Ａ、グレード■、シグマケミカルス、セントルイス、エムオオ）を含む培地１９ ９（Ｍ１９９、ギブコ、グランドアイランド、ニューヨーク）中、５％　Ｃｏｘ 、３７℃で一夜培養した。 次いで、４８穴の細胞培養板中の視床下部を、順次下記の添加物の一種を含有す る６個の大板のシリーズで、２０分毎に連続的に移し替える： 対照　Ｍ１９９（３個の大板、合計６０分）；Ｍｌ　９９＋ｒ　ＩＬ　−１（Ｚ 　（１０−”　Ｍないし１０−＠Ｍ；２個の大板、合計４０分）： または６０ｍＭ塩化カリウム（１個の大板、２０分）免疫反応性のＣＲＨ（ｉ　 ＣＲＨ）を、以前に記述した敏感なラジオイムノアッセイにより、培地中で直接 定量した（６３）。 ６０ｍＭのＫＣＩに対して基礎値（ｂａｓａｌ　ｖａｌｕｅ）より２９０％多い ｉ　ＣＲＨの応答により表される生存している視床下部からの結果のみを解析に 用いた。 Ｆｉｇ、８は、ｒｌＬ−１（Ｚ（１０−”Ｍないし１０−＠Ｍ）は；Ｆ３４４／ Ｈの視床下部からは、基準線を超えて、Ｉ　ＣＲＨの分泌における１５０％増を 誘導したことを示し：そしてＬＥＷ／Ｎの視床下部からは基準線を超えては１Ｃ ＲＨの分泌における増加をなにも誘導しなかったことを示す。 上で論じたように、炎症性または他のストレス性メジエータ−に対するＬＥＷ／ ＮラットのＡＣＴＨとコルチコステロンの欠失は、ＳＣＷ誘導関節炎に対するそ の感受性における一つの重要な要因である。我々の現在の発見は、ＬＥＷ／Ｎの ＡＣＴＨとコルチコステロンの欠失応答とそれに随伴する関節炎に対する感受性 は、炎症性および他のストレスメジエータ−に対する応答における、ＣＲＨｌお よび恐ら（他のストレスホルモンの視床下部の合成と分泌の欠如に関係している ことを暗示している。 ＳＣＷに対する応答におけるＬＥＷ／ＨのエンケファリンのｍＲＮＡ合成の一緒 の欠失は、ＬＥＷ／ＮラットのＣＲＨ生合成欠失がＣＲＨ遺伝子に特異的ではな （、その調整における欠失から起こるものだろうという事実を提供する。 本発見は、哺乳動物の自己免疫：その中では中枢神経系の欠失が、不適当な免疫 ／炎症性の反調節により特徴付けられる病気を起こすのであるが：のための独特 なモデルを暗示している。このような機構は、リュウマチ様の関節炎のヒトの疾 病にも関連している。 参考文献 １、ワイルダー、アール、エル１．アレン、ジェイ。 ビー、および　ハンセン、シー、（１９８７）Ｊ、Ｃｌ１ｎ、Ｉｎｖｅｓｔ、７ ９．１１６０−１１７１゜ ２、ワイルダー、アール、エル１．カランドラ。 ジー、ビー１．ガービン、ニー、ジェイ、、ライト、チー。デー　および　ハン セン　シー、チー、（１９８２）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ　Ｒｈｅｕｍ、　　２５　 、　１０６４−１０７２　。 ３、アレン、ジェイ、ビー、および　ワイルダー。 アール、エル、　　（１９８５）　Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ　Ｒｈｅｕｍ、　　２８ ゜１３１８−１３１９頁。 ４、アンデルレ、ニス、ケー、、アレン、ジェイ。 ビー６．ワイルダー、アール、エル１．アイゼンパーグ、アール、ニー０．クロ マ−チー、ダブリュ、ジェイ。 および　シュワプ、ジエイ、エイチ、（１９８５）Ｉｎｆｅｃｔ、Ｉｍｎ＋ｕｎ 、　　４９．　８３６−８３７゜５、アレン、ジェイ、ビー１．カランドラ、ジ ー。 ビー、およびワイルダー、アール、エル、（１９８３）ｌｎｆｅｃｔ、［ｍｍｕ ｎ、　　４２．　７９６−８０１゜６、ワイルダー、アール、エル１．アレン、 ジェイ。 ビー０．ワール、エル、エム８．カランドラ、ジー、ビー、およびワール、ニス 、エム、　　（１９８３）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ　Ｒｈｅｕｍ、　　２６巻、１４ ４２−１０７２゜７、リッジ、ニス、シー８．ザブリスキエ、ジェイ。 ビー１．オサワ、エイチ、、ダイアマントスタイン、チー１．オロンスキー、ニ ー、および　ケルバール、ニス、ニス、　　（１９８６）、Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍｅｄ 、１６４゜３２７−３３２゜ 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３０、チュング、ニー９．ホール、チー、アール、およびハーベイ、ニス、　　 （１９８７）Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏ　１゜１１３．１５９−１６５゜ ３１、カロゲロ、ニー、イー９．ベルナルジニ、アール９．マルギオリス、ニー 、エフ、、ガルシ、ダブリュ、チー８．ムンソン、ビー、ジェイ０、タマーキン 、エル１．トマイ、チー、ビー１．ブラデイ、エル１．ゴールド、ビー、ダブリ ュ、、およびクルーソス、ジー、ピ−、（１９８８）タンパク質（Ｐｅｐｔ　１ ｄｅｓ）、印刷中。 ３２、キリアン、ビー、エル１．クフカ、ケー、エル１．スターン　ニー、ニス ０．ウォーレ、デー９．ベンジャミン、ダブリュ、アール１．デチアラ、チー、 エム１．ガブラー、ニー１．ファラル、ジェイ、ジェイ、。 ミゼル、ニス、ビー、およびロメジコ、ビー、チー。 （１９８６）Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、１３６．４５０９−４５１４゜ ３３、ラウェ、エル９．カワイ、ニス１．プラントンデー、デー０．ブライトウ ェル、デー１．バーネス。 ケー、、クナゼノク、アール、ニー２．ロリアウクス。 デー、エル、およびクローソス、ジー、ビー、　　（１９８８）Ｊ、５ｔｅｒｏ ｉｄ　　Ｂｉｏｃｈｅｍ、（印刷中）。 ３４、コーエン、エム、エル、ｌ　フラー、アール、ダブリュ、、およびクルッ 、ケー、デー、（１９８３）Ｊ、ｏｆ　　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、Ｅｘｐ、Ｔｈｅ ｒ、２２７．３２７−３３２゜ ３５、グロス、エイチ、ニー０．ルーダ−、ジェイ９ジェイ、、ブラウン、チー 。ニス９．およびリブセット。 エム、ビー、　　（１９７２）Ｓｔｅｒｏｉｄｓ　　２０，６８１−６９５゜ ３６、クルーソス、ジー、ビー９．シュルテ、、エイチ、エム、オールドフィー ルド、イー、エイチ、、ゴールド、ビー、ダブリュ、、カトラー、ジェイアール 、。 ジー、ビー、およびロリアウクス、デー、エル、（１９８４）Ｎｅｗ　　Ｅｎｇ ｌ、Ｊ、Ｍｅｄ、３１０，６２２−６２６゜ ３７、クルーソス、ジー、ビー、２　カトラー、ジー。 ビー、ジエイアール、およびロリアウクス、デー、エル。 Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、Ｔｈｅｒ、２０，２６３−２８１゜３８、ギップス、デー 、エム、およびヴエイル、ダブリュ、　　（１９８３）Ｂｒａｉｎ　　Ｒｅｓ、 ２８０，１７６−１７９゜ ３９、ハシモト、ケー、、オオノ、エフ、、ムラカミ。 ジェイ、ジェイ、、アオキ、ウワイ、およびタカハラ。 ジエイ、（１９８２）Ｊ、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、９３゜１５１−１６０゜ ４０、スビネジ、イー、およびネグローヴイラー、ニー、　　（１９８３）Ｅｎ ｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ　　１１２．１２１７−１２２３゜ ４１、ラーセン、ジー、エル、およびヘンセン、ビー。 エム、　　（１９８３）Ａｎｎ、Ｒｅｖ、Ｉｍｍｕｎｏｌ。 １．３３５−３３９゜ ４２、ページ　アイ、エイチ、　　（１９６８）セロトニン（Ｙｅａｒ　Ｂｏｏ ｋ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ　Ｉｎｃ、、シカゴ）に記載。 ４３、コハシ、オオ、、コハシ、ウワイ、、タカハシ、チー９．オザワ、ニー、 およびシゲマツ、エフ、、（１９８６）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ　　Ｒｈｅｕｍ、２ ９．５４７−５５３゜ ４４、グリフイス、エム、エム、およびデウィット。 シー、ダブリュ、　　（１９８４）Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ。 １３２．２８３０−２８３６゜ ４５、ヒル、ジエイ、エル、およびユ　デー、チー。 （１９８７）Ｉｎｆｅｃ、Ｉｍｍｕｎ、５５．７２１−７２６゜ ４６、ベラウド、イー１．レジエフ、チー、ｌヴアンダーパーク、ニー、ニー１ ．オフナー、エイチ、、フリズ、アール１．チュー、シー、エイチ、ジェイ、、 ベルナルト、デー、およびコーエン、アイ、アール、（１９８６）Ｊ、Ｉｍｍｕ ｎｏｌ、１３６．５１１−５１５゜４７、カプシ、アール、アール０．ロバージ 、エフ。 ジー６．マツクカリスター、エム１．エルーサレド、ジェイ、、クワバラ、チー １．ゲーリイ、アイ０．ハンナ。 イー１．およびヌッセンプラット、アール、ビー、（１９８６）Ｊ、Ｉｍｍｕｎ ｏｌ、１３６，９２８−９３３゜４８、ディビス、ジェイ、ケー、、ソープ、ア ール。 ビー０．マドックス、ピー、ニー１．ブラウン、エム。 ビー１．カッセルおよびジー、エイチ、（１９８２）Ｉｎｆｅｃｔ、Ｉｍｍｕｎ 、３６，７２０−７２９゜４９、アレン、ジェイ、ビー、およびワイルダー、ア ール、エル、（１９８７）Ｉｎｆｅｃｔ、Ｉｍｍｕｎ。 ５５．６７４−６７９゜ ５０、レーマン、チー、ジェイ、ニー０．アＩ／ン、ジエイ、ビー１．プロット 、ビー、エイチ、およびワイルダー、アール、（１９８４）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ、２７，９３９−９４２゜ ５１、）ツド、ジエイ、ニー８．アッチャーオルビー。 エイチ、、ベル、ジェイ、アイ１．チャオ、エヌ、、フロネック、ゼット１．ヤ コブ、シー、オオ、、マクデルモット、エム１．シンハ、ニー、ニー９．チメル マン。 ケー、、シュタインマン、エル、およびマクデビット７エイチ、オオ、（１９８ ８）Ｓｃｉｅｎｃｅ　　２４０゜１００３−１００９゜ ５２、ベセドフスキー、エイチ、オオ、、デル　レイ、ニー、およびソーキン、 イー０．〔エフ、ファブリス、イー、ガラシ、ジェイ、ハッデンおよびエフ。ニ ー、ミチェソン編、「免疫調節（Ｉｍｍｕｎｏｒｅｇｕｌａｔｊｏｎ）　Ｊブレ ナム出版（Ｐｌｅｎｕｍ　Ｐｒｅｓｓ）、　　（＝　ニーヨーク）、３１５頁（ １９８３年） ５３、ミュンク、ニー９．ガイレ、ピー、エム、およびホルブルック、エフ、ジ ェイ、、Ｅｎｄｏｃｒ。 Ｒｅｖ、５．２５−４４　（１９８４）５４、ヤング■他、ダブリュ、ニス、。 Ｎｅｕｒｏｓｃｉ、Ｌｅｔｔ、７０，１９８−２０３（１９８６）。 ５５、ヤング■他、ダブリュ、ニス、。 Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、（米国）８３．９８２７−９８３１　 （１９８６）。 ５６、ライトマン、ニス、エル１．ヤング■、ダブリュ、ｘス、、Ｊ、Ｐｈｙｓ ｉｏ１．　　（Ｃ７ンドン）３９４．２３〜３９（１９８７）。 ５７、ライトマン、ニス、エル９．ヤング■、ダプリュ、ニス、、Ｎａｔｕｒｅ 　　３２Ｂ、６４３−６４５（１９８７）。 ５８、ライトマン、ニス、エル３．ヤング■、ダブリュ・ニス、・　Ｊ、Ｐｈｙ ｓｉｏｌ、　　（ロンドン）４０３．５１１−５２３゜ ５９、ナカムラ、エイチ、、モトヨシ、ニス０．およびカドカワ、チー、、Ｅｕ ｒ、Ｊ、Ｐｈａｒｍａｃ。 １．１５１．６７−７３　（１９８８）。 Ｅｎｚｙｍｏｌ、１０３．５６５−５７７　（１９８３）。 ６１、カロゲロ他、ニー、イー、、Ｊ、ＣＩ　ｉｎ。 Ｉｎｖｅｓｔ、８２，７６７−７７４　（１９８８）。 ６２、カロゲロ他、ニー、イー、、Ｊ、ＣＩ　ｉｎ。 Ｉｎｖｅｓｔ、８２，８３９−８４６　（１９８８）。 炎症指数 〜ＣＪ′ＩＬ ；口 血漿中のコルチコステロンｌｎｇ／ｍｌ１時間（分） コルチコステロン 時間（分） ＡＣＴＨ 薬量（ｌｏｇ　ｇｌ コルチコステロン 薬量（ｌｏｇ　ｇｌ ＡＣＴＨ（ｐｇ／ｍｌ） コルチコステロン（ｎｇ／ｍ１） ＦＩＧ、　６Ａ ＣＷ ＦＩＧ、　６Ｂ 時間　（ｈ「） ＦＩＧ、　６Ｃ ＦＩＧ、　６０ 時間巾「） 視床下部の１ＣＲＨの含有量 （ｐｇ／ｍｇタンパク質） ％基準線上の１ＣＲＨ放出 補正層の翻訳文提出書（特許法第１８４条の８）平成３年５月３０日 特許庁長官　殿　　　　　　　　　　　　　　　圃１、特許出願の表示 ＰＣＴ／ＵＳ　８９１０５３６７ ２発明の名称 ３、特許出願人 名称　アメリカ合衆国 ４゜代理人 住所　東京都千代田区神田駿河台１の６お茶の水スクエアＢ館 氏名　（６８６１）萼　　経夫　（ほか１名）請求の範囲 １、炎症の徴候に対する哺乳動物の感受性を試験する方法であって； 視床下部−下垂体一副腎軸を刺戟するために有効な化合物の一量を哺乳動物に投 与し；そして該哺乳動物の下垂体または副腎腺により分泌されているホルモンの レベルを定量するために検定を行う段階を包含する方法。 ２、ｒ＠乳動物に、サイトカイン、細胞成長因子、副腎皮質刺戟ホルモン放出ホ ルモン、主属体性（ｂｉｏｇｅｎｉｃ）アミン、主属体性アミンの作動薬、主属 体アミンの同族体、モノアミンオキシダーゼの阻害剤および主属体性アミン取込 み阻害剤から成る群から選ばれた化合物を投与し；そして該哺乳動物の血漿中の 、グルココルチコイド類または副腎皮質刺戟ホルモンのレベルを定量するために 検定を行う段階を包含する請求項１記載の方法。 ３、該炎症の徴候が、関節炎、ブドウ膜網膜炎（ｕｖｅｏｒｅｔｉｎｉｔｉｓ） 　、肺炎、脳を髄炎、多発性硬化症および肝炎肉芽腫症である請求項１記載の組 成物。 ４、該化合物がインターロイキン−１、セロトニン、副腎皮質刺戟ホルモン放出 ホルモンまたはキパジンであり、該ホルモンがコーチゾール、コルチコステロン または副腎皮質刺戟ホルモンである請求項１記載の方法。 ５、下垂体または副腎腺により分泌される該ホルモンのレベルが、該化合物の投 与１０分ないし４時間後に定量される請求項１記載の方法。 ６、関節炎に対する哺乳動物の感受性を試験する方法であって； 視床下部−下垂体一副腎軸を刺戟するのに有効なインターロイキン−１またはキ バジンの一量を哺乳動物に投与し；そして 該インターロイキン−１またはキパジンの投与後の１０分と４時間の間に、該哺 乳動物の血漿中の副腎皮質刺戟ホルモンとコルチコステロンのレベルを定量する ために検定を行う段階を包含する方法。 ７、該哺乳動物が実験動物である請求項６記載の方法。 ８、該哺乳動物がヒトである請求項６記載の方法。 国際調査報告

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. １．炎症の徴候に対する哺乳動物の感受性を試験する方法であって； 視床下部一下垂体一副腎軸を刺戟することにおいて有効な化合物を哺乳動物に投 与し；そして該哺乳動物の下垂体または副腎腺により分泌されているホルモンの レベルを測定する段階を包含する方法。
2. ２．哺乳動物に、サイトカイン、細胞成長因子、副腎皮質刺戟ホルモン放出ホル モン、生原体性（ｂｉｏｇｅｎｉｃ）アミン、生原体性アミンの作動薬、生原体 性アミンの同族体、モノアミンオキシダーゼの阻害剤および生原体性アミン取込 み阻害剤から成る群から選ばれた化合物を投与し；そして 該哺乳動物の血漿中の、グルココルチコイド類または副腎皮質刺戟ホルモンのレ ベルを測定する段階を包含する請求項１記載の方法。
3. ３．該炎症の徴候が、関節炎、ブドウ膜綱膜炎（ｕｖｅｏｒｅｔｉｎｉｔｉｓ） 、肺炎、脳脊髄炎、多発性硬化症および肝炎肉芽種症である請求項１記載の組成 物。
4. ４．該化合物がインターロイキン−１、セロトニン、副腎皮質刺戟ホルモン放出 ホルモンまたはキパジンであり、該ホルモンがコーチゾール、コルチコステロン または副腎皮質刺戟ホルモンである請求項１記載の方法。
5. ５．下垂体または副腎腺により分泌される該ホルモンのレベルが、該化合物の投 与１０分ないし４時間後に測定される請求項１記載の方法。
6. ６．関節炎に対する哺乳動物の感受性を試験する方法であって； 視床下部一下垂体一副腎軸を刺戟するのに有効なインターロイキン−１またはキ パジンの一量を哺乳動物に投与し；そして 該インターロイキン−１またはキパジンの投与後の１０分と４時間の間に、該哺 乳動物の血漿中の副腎皮質刺戟ホルモンとコルチコステロンのレベルを測定する 段階を包含する方法。
7. ７．該哺乳動物が実験動物である請求項６記載の方法。
8. ８．該哺乳動物がヒトである請求項６記載の方法。