JPH03502582A

JPH03502582A - 骨髄性白血病の治療方法

Info

Publication number: JPH03502582A
Application number: JP1506821A
Authority: JP
Inventors: アブラムス，ジョン・エス
Original assignee: シェリング・バイオテック・コーポレーション
Priority date: 1988-05-31
Filing date: 1989-05-26
Publication date: 1991-06-13
Also published as: EP0452315A1; AU3834589A; EP0347057A1; WO1989011864A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】骨髄性白血病の治療方法発明の分野本発明は、概して、顆粒球−マクロファージコロニー刺激性因子（ＧＭ−Ｃ５Ｆ）の過度の産生によって引き起こされるまたは悪化する疾患を治療するための方法に関し、詳細には、骨髄性白血病の治療方法に関する。

発明の背景循環性血球は、新しく発生した細胞で絶えず置き換わっている。置換血球は、二つの主要な系である少なくとも８種類の成熟血球種（１）赤血球（成熟赤血球）、マクロファージ（単球）、好酸性顆粒球、巨核球（血小板）、好酸性顆粒球、好酸性顆粒球（肥満細胞）を含む骨髄系；および（２）　Ｔ　’）ンパ球およびＢリンパ球を含むリンパ糸；を産生ずる造血と呼ばれる過程で生成される〔バージニス（Ｂｂｒｇ＃ａｇ）およびニコラ（ＮｉｃｏＬａ）、Ｇｒｏｗｔｈ　Ｆａｃｔｏｒｓ　ａ％ｄ　Ｓｔｅｍ　Ｃａ１１ｍ　（アカデミツク・プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｇａａ）、ニュー・ヨーク、ｘｃ＋ｇ３））。

血球形成の制御の多くは、コロニー刺激性因子＜ｃｓｐ）と呼ばれる相互作用性糖タンパク質の群によって仲介される。これらの糖タンパク質はその存在を検出するのに用いられる生体内検定法および試験管内検定法のためにそのよ５に名付げられている。半固形培地で造血細胞をクローン培養するための方法は、試験管内検定法の展開に特に重要であった。このような培養では、個々の前駆細胞（すなわち、発生上、特定の系に委ねられるが、なお増殖することが可能な細胞）は増殖して、生体内での比較しうる過程と本質的に同じであると思われる方法で、成熟する子孫のコロニーを形成することができる。造血におけるＣ５Ｆの役割が、最近の多くの総説、例えばメＳｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ　Ｆａｃｔｏｒｓ　　（エルゼピル（Ｅｌｓａｖｉａｒ）、１２２９巻、１６〜２２頁（１９８５）；ニコラら、２１１頁（１９８６）；クラーク（Ｃ１ａｒｋ）およびカー７２３８巻、１３７４〜１３７９頁（１９８７）に紹介されている。

これらの因子の検出、単離および精製は極めて困難であり、それらが典型的に存在している体液の性質およびその極めて低い濃度によって複雑になることが多い。更に多くのＣ５Ｆが、主として分子のクローニングを介して入手可能になるに従い、そのための臨床的な用途を見出だすことに関心が高まってきた。ホルモンとの生理学的な類似性（例えば、可溶性因子であり、増殖媒介因子であり、細胞受容体により作用すること）のために、Ｃ５Ｆの可能な利用は現在のホルモンについての利用、例えば、デクスターＣＤ＃ｘｔｍｒ）、Ｎａｔｕｒｅ、　　３２１巻、１９８頁（１９８６）と同様視されている。その利用は、血球発生を刺激することが望ましいと思われるいくつかの臨床的状態、例えば、腫瘍の化学療法または放射線療法後の回復療法、骨髄発育不全の治療、好中球欠損症の治療、骨髄移植に伴う造崩再生を促進させる治療、および立証された感染に対する宿主の抵抗性を増加させる治療に対して提案された〔例えば（前記に引用した）デクスター、（前記に引用した）メトカーフ、　５ｃｉｓ％ｃｇ、および（前記に引用した）クラークおよびカーメン〕。最近、ヒトのＧＭ−Ｃ５Ｆの組換え体が、重症の白血球減少性エイズ（ＡＩＤｓ）患者の循環性白血球数を投与量に依存して増加させることが分かった〔グループマン（Ｇｒｏｏ−ｐｍａｎ）、Ｃｓ１Ｌ、　５０巻、５〜６頁（１９８７））。

更に、Ｃ５Ｆは骨髄性白血病の発病および進行にある役割を果たしていると思われる。骨髄性白血病は、顆粒球−マクロファージ前駆細胞のクローン性新生物であり、二つの主要な群である、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）および急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）に分けられる。ＣＭＬは、牌臓および血欣甲の造血集団の拡大を伴なう成熟の全段階での顆粒球−単球集団の骨髄中での増大を特徴とする。

化学療法は白血病の細胞集団の過度の大きさを減少させることに成功してはいるが、そのような療法は（未熟形または異常形細胞の比率が益々増加する）末期の重大な変化を防止することまたは罹患患者の寿命を延長させることには成功していない（前記に引用したメトカーフ、１９８４）。

ＡＭＬは、成熟する顆粒球−単球細胞の形跡がほとんどまたは全くないことが多い未熟顆粒球−単球幼若細胞の蓄積を特徴とする。この疾患は、主として骨髄に現われ、通常、勝臓の拡大はごくわずかである。血中の総有核細胞数は増加することがあるしまたはしないこともあるが、比較的に少ない成熟細胞に対して未熟な幼若細胞が高比率で存在する。通常、付随した貧血、血小板減少症、および骨髄および末梢血液での成熟顆粒球および単球の相対的欠損がある。抑制不可能な出血または重症感染の結果として死に致るのが一般的である（前記に引用したメトカーフ、１９８４）。

両形態の白血病共に、コロニー刺激性因子、特にＧＭ−Ｃ５Ｆの産生またはそれに対する応答性の異常によって進行すると思われる。特に、多くのＡＭＬ患者からの白血病細胞は、それらが本質的にＧＭ−Ｃ５Ｆを発現するので、試験管内での自発的な増殖が可能であることおよびそのような自発的な増殖を抗血清を中和するＧＭ−Ｃ５Ｆの添加によって阻害することができるということが分かった〔ヤング（Ｙｏｓｃ％ｇ）ら、Ｂｌｏｏｄ、６８巻、１１７８〜１１８１頁（１９８６）ｌ。

不発明は、ＧＭ−Ｃ５Ｆの細胞増殖を刺激する能力を阻止することによる骨髄性白血病、特にＡＭＬの治療に関する。このような阻止は、ヒトのＧＭ−ＣＳＦに特異的な単クローン性抗体の利用によって行なうことができる。したがって、ＧＭ−Ｃ５Ｆ活性を阻止することが可能な単クローン性抗体の入手が可能になれば骨髄性白血病を治療する新規な方法を得ることができると思われる。

したがって、本発明は、ヒトのＧＭ−Ｃ５Ｆに対するアンタゴニストの効果的な量を投与することによって有効なＧＭ−Ｃ５Ｆ濃度を減少させる方法を提供する。詳細には、本発明は、ヒトのＧＭ−ＣＳＦに対するアンタゴニストの効果的な量を投与することによる骨髄性白血病を１′８ｇするための方法に関する。好ましくは、ＧＭ−Ｃ５Ｆに対するアンタゴニストは、ＧＭ−Ｃ５Ｆの生物学的活性を阻止することが可能な単クローン性抗体、その断片または標準的な方法によってそれから誘導される結合性組成物である。最も好ましくは、ＧＭ−Ｃ５Ｆに対するアンタゴニストは、ハイフ゛リドーマＢＶＤ２−５Ａ２４、ＢＶＤ２−２３Ｂ６．４およびｔｊＶＤ２−２１Ｃ１１，３によって生成された単クローン性抗体またはその遺伝子から誘導される。これらのノ・イブリドーマはメリーランド州、ロックビルのアメリカン・タイプ・カルチャー−コレクション（Ａｍｅｒｉｃａ％Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）　（ＡＴＣＣ）に、それぞれ登録査号ＢＢ９５６７、ＨＢ９５６　ＢおよびＨＢ９５６９としく寄託本発明は、ヒトのＧＭ−Ｃ５Ｆの生物学的活性を阻止することが可能な単クローン性抗体の発見、およびある種の骨髄性白血病がＧＭ−Ｃ５Ｆの自己分泌によって引き起こされるという発見に基づいている。本発明の方法は、ヒトのＧＭ−Ｃ５Ｆに対するアンタゴニストの効果的なまたは疾患を回復させる量を投与することから成る。

好ましくは、本発明のアンタゴニストはヒトのＧＭ−Ｃ５Ｆの生物学的活性を阻止することが可能な抗体から誘導する。

抗体はジスルフィド架橋によって一緒に結合されたポリペプチド鎖の集合体から成る。Ｌ−鎖およびＩ−鎖と呼ばれる２本の主要なポリペプチド鎖が抗体のあらゆる主要な構造種（インタイブ）を構成し１いる。さらに、Ｈ−鎖およびＬ−知は共に、可変部および不変部と呼ばれる小部分に分けられる。Ｂ−知は１種類の可変部および３種類の異なる不変部から成り、Ｌ−鎖はＬ種類の（Ｈ−鎖のものとは異なる）可変部および１種類の（Ｈ−鎖のものとは異なる）不変部から成る。Ｈ−鎖およびＬ−鎖の可変部は抗体の結合％異性の原因となっている。

本明細書中で用いたｒｇ−知可変部」という用語は。

（１）長さがアミノ酸１１０〜１２５伽であり、（２）そのアミノ酸配列が不発明の単クローン性抗体のＨ−頌のアミノ酸配列に対応して、Ｂ−領のＮ−末端アミノ酸から開始するポリペプチドを意味する。同様に、「Ｌ−鎖可変部」という用語は、（１ン長さがアミノ酸９５〜１１５個であり、（２）そのアミノ酸配列が本発明の単クローン性抗体のＬ−鎖のアミノ酸配列に対応じて、Ｌ−鎖のＮ− 末端アミノ酸から開始するポリペプチドを意味する。

本明細書中で用いた「単クローン性抗体」という用語は、ヒトのＧＭ−Ｃ５Ｆに特異的に結合し且つその生物学的活性を阻止することが可能である免疫グロブリンの均一集団を意味する。

本明細書中で用いた「結合性組成物」という用語は、２徨類のポリペプチド鎖即ち、（１）機能的に関連させた場合、ヒトのＧＭ−Ｃ５Ｆに対して結合親和性が高いコンホーメーションをとるものと、（２）ヒトのＧＭ　−Ｃ５Ｆに特異的で且つその生物学的活性を阻止することが可能な単クローン性抗体を生成するノ・イブリドーマから誘導されるものとから成る組成物を意味する。「機能的に関連させた」という用語は、２種類のポリペプチド鎖を、ＦａｂまたはＦｖのような天然の抗体断片の結合などの様々な手段によって、またはカルボキシル末端で遺伝子工学的に工学処理されたシスティン含有ペプチドリンカ−によって、抗原に対する結合能力を持つように互いに相関的な位置におくことができるということを示すという意味である。通常、２種類のポリペプチド鎖はヒトのａＭ−Ｃ５Ｆｔｉｃ％異的な単クローン性抗体のＬ−鎖可変部およびＨ−鎮可変部に対応している。

好ましくは、本発明のアンタゴニストは、ヒトのＧＭ−Ｃ５Ｆの生物学的活性を阻止することが可能な単クローン性抗体から誘導される。このような単クローン性抗体は二重スクリーニング法によって得られる。最初は、間接エンザイムーリンクドイムノアブソーペントアツセイ（ｅ％ｚｙｍｅ−１ｉｎｋｅｄ　ｉｍｍｕｎｏ−ａｂｓｏｒｂｅｎｔ　ａｓｓａｙ）（ＥＬＩＳＡ）またはイムノメトリックエリザスクリーン（ｉｍｍｓｎｏｍａｔｒｉｃ　ＥＬＩＳＡ　ｓａｒｅａｍ）によってヒトのＧＭ−Ｃ５Ｆに特異的な抗体を選択する。この集合体から第２のスクリーンを用いてヒトのＧＭ−Ｃ５Ｆの生物学的活性を阻止するかまたは中和する抗体の能力を判断する。種々の生物学的検定法がＧＭ−Ｃ５Ｆに対して利用可能である。特に、例えばメトカーフによって〃区Ｈｅｍｏｐｏｔａｔｔｃ　Ｃｏ１ｏｎｙ　ＳｔｉｍｓｌａｔｔｎσＦαｃｃｏｒａ　（エルゼピル、アムステルダム、１９８４）に開示されたように半固形培地での骨髄または＊？！’の血液検定法を用いることができるし、ＧＭ−Ｃ５Ｆ依存細胞系ＫＧ−１’ｌｒ：、例えばケフラー（Ｋｏａｆｆｌａｒ）らによって５ｃｉｅｎｃｅ、２００巻、１１５３〜１１５４頁（１９７８）におよびルスイス（Ｌｕａｉｓ）らによってＰｒｏｅ、Ｎａｔｌ、　Ａａａｄ、　Ｓｅｔ、、７７巻、５３４６〜５３５０頁（１９８０）に開示されているような検定法で用いることができ、ＫＧ−１細胞系はＡＴＣＣｆ介して登録誉号ＣＣＬ２４６として入手可能である。

骨髄および調帯の血液慣定法は下記のように行なう。

非血液病の患者から採取された骨髄細胞をフィコール［：４００！、シグマ・ケミカル・カンパニー（ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、）、ミズーリ州、セント・ルイス）上にノーにして、遠心分離しく６００Ｘｆ、２０分間）、そして界面での細胞を除去した。これらの細胞を、１０％ウシ胎児血ｆｉ（ＦＣ５）ｆ；ｌ含むイスコブの修正ダルベツコ培地（Ｊａｃｏｖｍ’ｓ　Ｍｏｄｉｆｉｅｄ　ＩＪ）ｕｌｂｓｒ：ｃｏ’ｓ　Ｍｅｄｉｕｍ）で２回洗浄１２、同じ培地に再懸濁させ、そして付着細胞をプラスチック製ペトリ皿への付着によって除去した（付着細胞はＧＭ−Ｃ５Ｆ産生細胞であることが多く、前記に引用したメトカーフを診照されたい）。非付着細胞を１０５の細胞数／　ｍｔで、２０％ＦＣ５と、５０μモル２−メルカフトエタノールと、０，９％メチルセルロースと、各種濃度のコロニー刺激性活性を有することが知られている上澄みかまたは試験用上澄みとを含むイスコブ培地に加える。その１ｍｔ分を３５絹のペトリ皿にプレートし、空気中にＣｏ、？：６％言む十分に加湿された雰囲気中、３７℃で培養する。増養の開始後３日月に、エリスロポエチン１単位を各プレートに加える。顆粒球−マクロファージコロニーおよび赤血球バーストを１０〜１４日目に倒日月微鏡を用いて評価する。

ヘパリン中に採取された贋金血球を６００Ｘｆで６分間遠心回転させる。血漿と赤血球最上部間の界面に集まった白血球’Ｙ０．１７＃塩化アンモニウムおよび６％ＦＣ５が入っている試験管に移す。氷上で５分後に、懸濁液はＦ　ＣＳ　４　ｒｌＬｔを下にして、６００Ｘｆで６分間遠心分離乞ン酸緩衝浴液で洗浄し、骨髄細胞について前記に記載したフィコールおよびプラスチックによる付着段階に通す。

低密度の非付着細胞を採取し、１０ゝの細胞／培地で前記に記載の半固形培地に置いた。

検定の最後に、個々のコロニーをガラス板に塗布し且つライト・ギムザＣＷｒｉｇｈｔ　−Ｇｍ　１ｔｓｃａα）で染色した後、細胞性組成を測定する。好酸球はルクソル・ファスト・ブルー（Ｌｕｚｏｌ　Ｆａｓｔ　Ｂｌｕｅ）　　で染色することニヨッテ測定する〔例えばジョンソン・ジー（ＪＯｎｌＯ％Ｇ、）およびメトカーフ奉ディー（Ｍａｔｃａｌｆ　Ｄ、）、Ｅｚｐ、　Ｈａｍａｔｏｌ、、８巻、５４９〜５６１頁（１９８０））。

本発明のハイブリドーマは周知の方法によって製造す生ずるための非融合的方法が可能であり、本発明の範囲内である、例えばウィルスに誘発される変化である〔カサ＋）ＣＣαｓａｔ　ｉ　）ら、ＦＢ＝）ンパ球の抗原特異性選択およびＥＢＶでの形質転換によるヒト単クローン性抗体ＣＢｕｍａｎ　　Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌｓ　　ｆｒｏｍ　　Ａｎｔｉｇｅｎ−５ｐｅｃｉｆｉｃＳｅｌｅｃｔＳｏｎ　　ｏｆ　　Ｂ　　Ｌｙｍｐんｃｙｔａｓ　　ａｎｄ　　ＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｂｙＥＢＶ）」、Ｓｃｉｍｎｃｇ、２３４巻、４７６〜４７９頁（１９８６））。通常、不滅性細胞系は哺乳類細胞、特に）類、ウシ、ヒト起源の骨髄騰細胞を形質転換させたものである。ラットまたはマウス骨髄腫細胞系を、便宜上および入手可能性上用いることが最も多い。

標的抗原で感作されだ哺乳類からの適当なリンパ球を得るための方法は周知である。通常、ヒト起源の細胞が望ましい場合、末梢血液リンパ球（ＰＢＬ）’に用いるが、非ヒト哨乳類起源が望ましい場合、牌細胞またはリンパ節細胞を用いる。宿主哺乳類を精製された抗原の繰り返しの投与で感作し、哺乳類に所望の抗体産生細胞を生じることを可能にした後、これらを不滅性細胞系との融合のために採取する。融合のための方法も当該技術分野において周知であり、一般に、細胞を、ポリエチレングリコールのような融合剤と混合することを含む。ハイブリドーマをＥＡＴ選択のよ５な標準法によって選択する。

これらのハイブリドーマの中から、所望の抗体を分泌するものを標準免疫検定法、例えばウェスタン法（１Ｆａ　ｍ　−１ｇｒｘ　ｂｌｏｔｔｉ％ｇ）、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ等によってその冶堆を検定することによって選択する。抗体を、標準タンパク貴精製法を用いて培地から回収する〔例えばテユ１９８５））。前記のいずれかの方法を適用する場合の手引きは多くの文献で祷ることができ、例えばコーラ−（Ｋｏｋｊｓｒ）ら、Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ　Ｔｅｃｈ％ｉｑ％ｅｓ　（コールド−スプリング・ハーバ−・ラボラトリ−ＣＣｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇｌｌａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　）、ニュー・ヨーク、１９８０）；カンプベル（ＣａｍｐｂａｌＬ）、ｈＩｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｙプレス（ＣＲＣＰｒｅｓｓ）、フランドル、ポカ・ラドン、１９８２）等がある。

抗体の断片の机用および作成もまた周知であり、例えロン（Ｓｈａｒｏｎ）ら、Ｂｉｏｃｈｇｒｎｉｓｔｒｙ、　１５巻、１５９１〜１５９４頁（１９７６）　　およびエーリソヒ（Ｅｈｒｌｅｃｈ）ら、米国特許第４．３５５，０２３号明細書〕；および抗体％分子（ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｈａｌｆ　ｍｏｌａｔｘｂｌｇｓ　）　［オーディドアＣＡｘｄｉｔｏｒｇ　）−ハーグリーヴス（Ｉｉａｒｇｒａａｖａｓ　）、米国特許第４，４７０，９２５号Ｊａ１４Ｆ　）である。更に、このような化合物および不発明の組成物乞用いて、既知の方法によって、例えば、更にハイブリドーマの融合（すなわち、いわゆるクオドローマ（ｑｕａｄｒｏｍａｓ　）を形成すること）によって〔リーディング（Ｒ＃αｄｉｎｇ）、米１特許第４．４７４．４９３号明細曹〕、または為分子の化学的再結することができる。

本発明のハイブリドーマおよび単クローン性抗体は、組換え法によって生成された成熟ヒトＧＭ−Ｃ５Ｆのグリコジル化された形態かまたは非グリコジル化された形態に対して生産される。概して、ヒトＧＭ−Ｃ５Ｆの非グリコジル化された形態は大腸菌（Ｅ、　ｃｏｌｉ　）で産生され、グリコジル化された形態は哺乳類の細胞宿主、例えばＣＶｌｉたはサルのＣＯ５細胞、マウスＬ細胞等で産生される。組換え法により産生される成熟ヒ）ＧＡｆ−Ｃ５Ｆは、標準プロトコルを用いて発現ベクターを宿主細胞に導入することによって生産される〔例えばマニア−・ラボラトリ−、ニュー・ヨーク、１９８２）；オカヤマ（Ｏｋａｙａｍａ　）およびベルブ（ｆｈｒｇ）、Ｍｏ１．Ｃａ１Ｌ。

Ｂｓｏｌ−１２巻、１６１〜１７０頁（１９８２）および３巻、２８０〜２８９頁（１９８３）；ハマー（Ｂα惧げ）、Ｇａｎａｔｉｃ　ｂｘｇｉｎａｇｒｉｎｇ、　２巷、８３．１００頁（１９８０）および米国特許第４，５９９，３０８号明細誉；カウフマン（１：Ｊａｘｆｍａｎ）ら、Ｍｏ１．Ｃａ１１．Ｂｉｏｌ、、２巻、１３０４〜１３１９頁（１９８２）等〕。

細菌のまたは哺乳類の発現ベクターのＩｌ或は、所望のタンパク＊Ｗ暗号化するそのヌクレオチド配列が分かりまたはさもなければ杓用可耗になると、当該技術分野において周知であり、例えばデボア（１）ｇＢｏｇｒ）は米国特許第４，５５１，４３３号明細書で細菌の発現ベクターでの利用のためのプロモーターを開示しており；ゲデル（Ｇｏｅｄｄａｌ）らは米国特許第４，６０１．９８０号明細書で、およびリッグス（Ｒ匂ａｓ）は米国特許第４，４３１．７３９号明細書で大腸菌の発現系による哺乳類タンパク質の生成を開示しており；そして（前記に引用した）リッグス、２９５９〜２９７７頁（１９８５）およびミュレンバツク（Ｍｓｌｌｍｎｂａｃｈ）らの７．　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｕｍ、、２６１巻、７１９〜７２２頁（１９８６）　では細菌での発現用合成遺伝子を構成する方法を開示している。したがって、これらの文献を一照して本明細誉中に引用する。ヒ）　ＧＭ　−ＣＳ　Ｆに開示されており、そこで開示されたヒトＧＭ−Ｃ５Ｆを暗号化するｃＤＮＡを運搬するｐｅｒ）ベクターはＡＴＣＣの８１Ｍ貯蔵室で登録査号５７５９４および５７５９５として寄託されている。ヒトａｍ−Ｃ５Ｆの酵母での生成はミャジマＣＭｉｙａｊｉｍａ）らによって開示されている。ヒトＧＭ−Ｃ５Ｆの大腸菌での生成はリビー（Ｌｉｂｈｙ）らによってＤＮＡ、６巻、２２１〜２２９頁（１９８７）に開示されている。

本発明のハイブリドーマについて特徴的な抗体および抗体断片も、メツセンジャーＲＮＡを抽出し、ｃ　Ｄ　＃　Ａライブラリーを構成し、そして抗体分子のセグメントを暗号化するクローンな選択することによる組換え方法によって生成することができる〔例えばウオール（７７α１１）８１巻、３２７３〜３２７７頁（１９８４）；ボス（Ｂｏｓｓ）ら、ｔｈｅｒｍｉｃ　Ａｅｉｄ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、　１２巻、３７９１〜３８０６頁（１９８４）；アムスター（Ａｍｇｔａｒ）ら、Ｎ５ｃｌｉｉｃ　Ａｃ１ｄ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、　８巻、２０５５〜２０６５頁（１９８０）；およびモーア（ｈｌｏｏｒａ）　　ら、米国特許第４．６４２，３３４号明細誉〕。特に、このような方法を用いて一つの動物種の結合節分をもう一つの動物種の抗体の非結合部分と結合させた穐間率クローン性抗体を生成して、免疫原性を減少させることができる〔例えばリュー（Ｌｉｓ）ら、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｔ仁、８４巻、３４３９〜３４４３頁（１９８７））。

本発明のアンタゴニストを、骨髄性白血病を治療するための薬剤組成物として投与する。このような組成物は、薬剤担体中に不発明の少なくとも１種類の単クローン性抗体、またはその断片の効果的な童を含んでいる。薬剤担体は、本発明の組成物を患者に与えるのに適当な無毒性物質のいずれの許容性の担体であることもできる。概して、このよ５な薬剤の非経口的投与に有用な組成物は二ＣＭａｃｋ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏｍｐａｎｙ）、ペンシルベニア州、イーストン、１９８０：ｌ。或いは、本発明の組成物を、移他可能な薬剤供給系によって患者体内に導入して非経口的に投与される場合、抗体または断片を薬学的に容認できる薬剤担体と一緒に注射可能な形態の単位投与量で配合する。このような担体は本質的に無毒性且つ非治療性である。このような担体の例は、標準食塩水、リンゲル浴液、デキストロース浴液およびハンクス液である。固定油およびオレイン酸エチルのよ５な非水性担体も用いることができる。好ましい担体は５％デキストロース／食墳水である。担体は、等張性および化学的安定性を増大させる物質のような少量の添加剤、例えば緩衝剤および防腐剤を含んでいてもよい。抗体は、凝集体および他のタンパク質を実質的に含まない精製された形態で、約５〜３０ｍ９／ｒｒＬｔ、好ましくは１０〜２０ｍｐ／ｍＪの１度で配合するのが好ましい。

の因子に依存し、アンタゴニストの血清中の代謝速度、白血病に伴なう循環性のＧＭ−Ｃ５Ｆの細胞外濃度、アンタゴニストの免役原性、（例えば、非血清ＧＡｉ−Ｃ５Ｆが阻止されるべきである場合の）標的ＧＭ　−Ｃ５Ｆへの接近可能性、Ｇ、’ｄ−Ｃ５Ｆの受容体に対するＧＭ−Ｃ５Ｆの親和性対アンタゴニストに対するＧＭ−Ｃ５Ｆの相対的親和性の割合等が挙げられる。投薬処法は、患者に与えられるアンタゴニストの量の上限は一貫して副作用が容認できる水準にするのが好ましい。したがって、与えられるアンタゴニストの倉は、ある程度、特定のアンタゴニストおよび治療される扶思の培酷さに依存する。適当な投与量を選択する指標は、抗体の治療的利用についての文献で見出だされる〔例えばフエローネ（Ｆｍｒｒｏｎｇ）ら監１参、Ｈａｎｄｂｏｏｋ　ｏｆ　Ａノｏｎｏｔｌｏｎａｌ　Ａ？Ｉｔｉｂｏｄｉａｚ　（ノージス・パブリケー７ヨンズ＜Ｎｏｇａｓ　Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ）、ニュー・シャーシー州、パーク・リッジ、１９８５）中、バック（Ｂａ、ｔｈ）らの第２２章；およびハーバ−ら監修、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ｔｎ　Ｈｕｍａｎ　Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ　ａｎｄ　Ｔｈｅｒａｐｙ（ラヴエン・プレス（Ｒａｖｅｎ　Ｐｒｅｓｓ）、ニュー・ヨーク、１９７７）中、ラッセル（Ｒｕｓｓｉｒｌ）の３０３〜３５７頁、スミス（Ｓｍｔｔｈ　）らの３６５〜３８９頁〕。好ましくは、アンタゴニストが巣クローン性抗体またはＦα５の大きさにしたその断片から成る場合、その投与量は１日当り約１〜２０１ｎｙ／に９の範囲でなければならない。更に好ましくは、その投与量は１日当つ約１〜ｔｏｍｙ／に９の範囲である。

多くの場合、抗体または断片の免役原性′？：適当な誘導化によって、例えばポリエチレングリコール等を用いて減少させることができる〔ビューチャンプ＜Ｂｍａｕｃｈα−ｍｐ）ら、Ａ＞ｃＬｌ、　Ｂｉｏｃｈａｍ、、１３１巻、２５〜３３頁（１９８３）；およびアブコラスキー（Ａｂｘｃｈｏｗｔｒｋｉ　）ら、Ｊ　、　Ｂｉｏｌ　、　Ｃｈａｍ、、２５２巻、３５７８〜３５８１　頁および３５８２〜３５８６頁〕。

本発明の前記の実施態様の説明は、例示および説明のために示したものである。

それらは本発明の全てを網羅するものではなく、また本発明を開示された厳密な形態に制限するためのものではなく、前記に示したことを考慮して多くの変法および変更が可能であることは当然のことである。本発明の原理およびその実際の用途乞説明し、それによって当該技術者が、予想される特定の利用に適当であるように、種々の実施態様で且つ種々の変法を用いて本発明を最もよく利用すること馨可能にするために、実施態様を選択し且つ記載した。それは本発明の範囲がこれに関して添付される請求の範囲によって定義されることを意味するものである。

本出願人はハイブリドーマＢＶＤ２−５Ａ２．４、ＢＶＤ２−２３Ｂ６．４およびＨＶＤ２−２１Ｃ１１，３を米国、メリーランド州、ロックビルのアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）に、それツレ登録番号ＢＢ９５６７、＃Ｅ９５６８およびＨＥ９５６９として寄託した。これらの寄託は、ＡＴＣＣの特許目的のための培養珈寄託に関する協定（ＡＴＣＣ’ｓ　Ａｇｒｇｅ −ｍｇｎｔ　ｆｏｒ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｉ）ｉｐｏａｉｔ　ｆｏｒ　Ｐａｔｅｎｔ　Ｐｒｒｐｏｓｇｓ）に基づいて与えられる条件で行なったが、これは寄託乞米１特許法（３５Ｕ、Ｓ、Ｃ，）第１２２条および３７　Ｃ，Ｆ、Ｒ。

１．１４によって米国特許および商標局長に利用可能にし且つ米国特許明細書の発行による公衆に入手可能にすることを保証するものであり、これは寄託を維持すること乞必賛とするものである。寄託された菌株の利用可能性は、℃・ずれの政府の代理権の下でもその特許法にしたがって認可された侑利に違反して本発明を実施するための承諾として解釈すべきではない。

寄託は、微生物の寄託に関するブダペスト条約の要件にしたがって変更した。

国際調査報告１＊１ｍＭｌｌ１＠＋ｖｌＡ＠＊１１１Ｎ例−内Ｎ−ＰＣＴ／υ５８９１０２２０６国際調査報告ＵＳ　８９０２２０６

Claims

【特許請求の範囲】

１．ヒトのＧＭ−ＣＳＦに対するアンタゴニストの効果的な量を患者に投与することから成る患者の骨髄性白血病を治療する方法。
２．前記のヒトのＧＭ−ＣＳＦに対するアンタゴニストを、ヒトのＧＭ−ＣＳＦの生物学的活性を阻止することが可能な単クローン性抗体、ヒトのＧＭ−ＣＳＦの生物学的活性を阻止することが可能な単クローン性抗体の断片、およびヒトのＧＭ−ＣＳＦの生物学的活性を阻止することが可能な単クローン性抗体のＨ−鎖可変部およびＬ−鎖可変部から成る結合性組成物から選択する、請求の範囲第１項に記載の方法。
３．前記の単クローン性抗体を、ＢＶＤ２−５Ａ２．４、ＢＶＤ２−２３β６．４およびＢＶＤ２−２１０Ｃ１１．３から選択されたハイブリドーマによって生成する、請求の範囲第２項に記載の方法。
４．前記の投与する段階が、約１ｍｇ／ｍｌ〜２０ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度での前記のアンタゴニストの静脈内投与を含む、請求の範囲第２項に記載の方法。
５．前記の投与する段階が、−日当り約１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ（前記の患者の体重）の範囲の量の前記のアンタゴニストの静脈内投与を含む、請求の範囲第４項に記載の方法。
６．前記の骨髄性白血病が急性骨髄性白血病である、請求の範囲第５項に記載の方法。
７．請求の範囲第１項〜第６項のいずれか１項に記載の方法を行なうのに利用する薬剤組成物の製造におけるヒトのＧＭ−ＣＳＦに対するアンタゴニストの利用。