JPH0327316A - 高脂血症治療剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は下記構造式で表される抗生物質ボーベリシン（
ｂｅａｕｖｅｒｉｃｉｎ） を有効戊分とすることを特徴とする高脂血症治療剤に関
する． 〔従来の技術〕 ボーベリシンはカビが生産する抗生物質として知られて
いる（Ｈａｍｉｌら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　　Ｌｅ
ｔｔ．４２５５頁（１　９　６　９）　）が、アシルコ
エンザイムＡコレステロールアシル転位酵素阻害作用は
知られていない． 現在までに知られているアシルコエンザイムＡコレステ
ロールアシル転位酵素阻害剤として最も強力とされるも
のとしてＣＬ−２８３５４６　（ＦＡＳＥＢ要旨集５３
６５、Ｐ−ＡＩ２１９、１９８８年〉があげられる。

〔発明が解決しようとする課題〕

欧米先進国の心臓病、特に心筋梗塞の患者と、それによ
る死亡者は著しく、また我が国においても近年心臓病に
よる死亡率は年々増加し、死因別死亡者数の第３位（１
９８３年）を占めるに至っている。

古くから、コレステロールは動脈硬化の元凶とされてい
る。血中のコレステロール値が高い症状、高脂血症また
は高コレステロール血症は、動脈特に心臓を取り囲む冠
状動脈の硬化（じゆく状動脈硬化）の原因となりやすく
、これが進行すると血液に支障を来たし、狭心症や心筋
梗塞の発作を起こし、重症の場合は死に至るものである
。

コレステロールは、アシルコエンザイムＡからアシル基
転位によりコレステロールエステルとなり細胞内及び血
中リボ蛋白に蓄積される。このアシル転位反応を触媒す
る酵素がアシルＣｏＡコレステロールアシル転位酵素で
あり、コレステロールの腸管からの吸収及び冠状動脈に
おける細胞の泡末化形或に深く係わっており、これがじ
ゆく状動脈硬化の原因と考えられている。

したがって、アシルコエンザイムＡコレステロールアシ
ル転位酵素阻害活性を有する物質を提供することは高脂
血症の治療上、有用なことである。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者らは、アシルコエンザイムＡコレステロールア
シル転位酵素阻害活性を有する物質を提供することによ
り、コレステロールの小腸でのとり込みを阻害し血中で
のコレステロール濃度を低下せしめ、また動脈硬化の原
因とされる血管壁でのコレステロールの沈着を阻害する
ことにより、狭心症や心筋梗塞の予防、治療を目的とす
る研究を重ねた結果、微生物の代謝産物である抗生物質
ボーベリシンが強力なアシルコエンザイムＡコレステロ
ールアシル転位酵素阻害活性を有することを発見し、本
発明を完威した。抗生物質ボーベリシンは、ボウベリア
・バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ　　　ｂａｓｓｉａｎ
ａが生産する抗カビ及び殺中活性を有する抗生物質とし
て知られ、下記の構造を有することが報告されている。

本物質ボーベリシンは、水に不溶性で、エタノール、ア
セトニトリル、ジメチルスルホキシド、クロロホルム、
酢酸エチルに可溶性の弱酸性、無色の結晶性物質であり
、したがって、本発明の高脂血症治療剤としては、これ
ら物性を考慮した注射剤、経口投与剤、直腸吸収剤、経
皮吸収剤等として調製されるのが好ましい。

注射剤としては、筋肉内投与のために試用される水性懸
濁剤等が挙げられ、直腸吸収剤は一般に座剤の形態で試
用され、経皮吸収剤は貼布剤、点鼻剤、スプレー剤等の
形態として使用され、経口投与剤は錠剤、粒剤、散剤、
カプセル剤、経口用としての形態で使用される。

これらの各種製剤はそれぞれ常法にしたがって、適当な
薬剤、添加物により投与方法に応じた製剤として調製す
ることができる。

ボーベリシンは毒性が低く、マウスに対する急性毒性（
ＬＤｓｏ）は、経口投与で１００ｍｇ／ｋｇ以上、腹腔
内投与で１０ｍｇ／ｋｇ以上であった。したがって、本
物質の人体推定投与量としては、投与経路および投与回
数により異なるが、通常、大人１人ｌ日当たり１０〜１
　０　０ｍｇの範囲が投与される．ボーベリシンはアシ
ルコエンザイムＡコレステロールアシル転位酵素阻害活
性を有する．即ち、リン酸バッフｙ−　（ｐＨ７．４）
１００ｍＭ，ＢＳＡ３０ｐＭＳＡＴＰ　１　０ｍＭ，コ
エンザイムＡ０．５ｍＭ，（１−１Ｃ）オレイン酸３０
μＭ（０．０２μＣｉ）そして酵素溶液としてラット肝
ミクロゾーム画分０．１〜０．２ｍｇ蛋白量を用い、反
応系全量は２００μ２とした。３７℃、３０分、反応後
、コレステロール画分をクロロホルムーメタノールで抽
出し、抽出液を薄層ブレー｝（ＴＬＣ、メルク社製，Ｆ
ｔｓ４”）にスポットし、石油エーテル・ジエチルエー
テル・酢酸（９０：１０：１）で展開し、コレステロー
ルエステル画分をかきとり、その放射活性の変換量を液
体シンチレーションカウンターにて測定することにより
、アシルコエンザイムＡコレステロール転位酵素活性を
測定した．本酵素に対する５０％阻害する濃度を公知の
ＣＬ−２８３５４６物質と算定した結果は次の通りであ
る． ボーベリシン　　　　　　　１．０μｇ　／　ｍ　ｌＣ
Ｌ−２８３５４６　　　　　１．Ｏｐｇ／ｍｌこのよう
にボーベリシンは公知の阻害剤で最も強力とされている
ＣＬ−２８３５４６と同等の阻害活性を有する． さらに、ボーベリシンはアシルコエンザイムＡコレステ
ロールアシル転位酵素阻害活性を細胞レベルで測定する
ことができる，Ｊ７７４．１マクロファージは、培地中
にコレステロール含有リン脂質リポソームを加えておく
と、細胞中にコレステロールを蓄積することがマククロ
ースキーらにより報告されている＊　　（ＭｃＣ１ｏｓ
ｋｅｙ，Ｈ．Ｍ．ｅｔ　　ａ１．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉ
ｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ９６３巻、４５６〜４６７頁、１
９８８年）。この系ヲ用いて３Ｈ−オレイン酸のコレス
テロールエステルへのとり込みを調べることにより、ボ
ーベルシンのアシルコエンザイムＡコレステロールアシ
ル転位酵素阻害活性を細胞レベルで測定することができ
る． 即ち、５Ｑｕｎｉｔｓ／ｍｊ！ペニシリンＧ１５０μｇ
　／　ｍ　Ｉ！ストレプトマイシンを１０％ウシ胎児血
清を含有したＲＰＭ１１６４０培地で２日間、５％ＣＯ
２ガスインキュベータ中で培養したＪ７７４．１マクロ
ファージを遠心にて集菌し％２Ｘ１０’Ｃｅｌｆｓ／ｍ
ｊ！の濃度になるようにＲＰＭＩ１６４０培地に懸濁し
た．これを２４穴マイクロプレート（コーニング社製〉
に０．１４ｍＲずつ分注し、コレステロールーホスファ
チジルコリンからなるリポソーム（コレステロール８０
μｇとホスフプチジルコリン４０μｇを０．３Ｍグルコ
ースｍ液４０μｌで溶解したもの）を加える．さらに、
種々の濃度のボーベリシン溶液（エタノール溶液）を１
０μｉ加え、最後に（９．１　０−’　Ｈ）オレイン酸
（０．５μＣｉ／１０μｌ溶液）を１０μｌ加え、５％
ＣＯ２ガスインキュベーター中３７℃で１２時間培養し
た．１％ＳＤＳ溶液９０μｌを各ウエルに添加して攪拌
後、脂質をブライ・ダイア一法により抽出した．脂質画
分は薄層プレート（メルク社製、Ｆｚｓ４）にスポット
し、石油エーテル、エーテル、酢酸（９０：１０：１）
で展開し、コレステロールエステル画分をかきとり、そ
の放射活性を測定した。その結果、コレステロールエス
テル生成に対する、ポーベリシンおよび公知のＣＬ−２
８３５４６物質の５０％阻害濃度を算定した結果は次の
通りである。

ボーベリシン　　　　　１６ｎｇ／ｍＩＣＬ−２８３５
４６　　１００ｎｇ／ｍｊ２このように、ボーベリシン
は公知の阻害剤で最も強力とされているＣＬ−２８３５
４６物質より約６倍強い阻害活性を示した。

本発明で使用されるボーベリシンは公知の方法ＣＨａｍ
ｉｌら、ｔｅｔｒａｈｅｒｄｒｏｎ　　Ｌｅｔｔ，ｐ．
４２５５　（１９６９））により得ることができるが、
本発明者らの見出した下記参考例による方法によっても
取得することができる。またボーベリシンはその化学構
造式より明らかなごとく、（Ｃｙｃｌｉｃ（Ｄ−　α−
ｈｙｄｒｏｘｙｉｓｏｖａｌｅｒｙｌ−Ｎ−ｍｅｔｈｙ
ｌ−Ｌ−ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｙｌ−Ｄ−　α−ｈｙｄ
ｒｏｘｙｉｓｏｖａｌｅｒｙｌ−Ｎ−ｎ＋ｅｔｈｙｌ−
Ｌ−ｐ’ｈｅｎｙｌａｌｎｙ　１−Ｄ−　ａ　−　ｈｙ
ｄｒｏｘｙ　ｉｓｏｖａ　ｌｅｒｙ　ｌ−　Ｎ−ｔｉｅ
　ｔｈｙ　１−Ｌ−ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｙｌ）　）で
あるので、化学合戊方あるいは酵素的合成法によっても
合成は可能であるので、そのように合成されたものでも
本発明に使用可能である。

参考例 ボウベリア　バシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａｂａｓｓｉ
ａｎａ）（Ｒ．Ｌ．Ｈａｍｉｌｉ　　ａｔａｔ　　Ｔｅ
ｔｒａｈｅｄｒｏｎ　　ＬｅｔｔｅｒｓＮｏ．４−９、
ｐ　４　２　５　５　〜４　２　５　８、１　９　６　
９）の凍結乾燥菌株を無菌的に採取し、５　０　０ｍｌ
三角フラスコに、下記培地にｉ　ｏ　ＱｒｒＪ！を含む
培地中に懸濁した。

イーストエキス Ｍ　ｇ　Ｓ　Ｏ　ａ　　・７Ｈ！ ポリペプトン ＫＨ．ＰＯ４ 寒天 水 ２０ｇ ０　　　　　　　　　　　　　０．５ｇ５ｇ １ｇ １ｇ １　０　０　０ｍｊ！ フラスコを４８時間、２８℃、２２Ｑｒｐｍで振とう培
養した。次に、３０ｆ、ステンレス製培養タンクに２（
ｌの下記培地を入れ、 イーストエキス　　　　　　　　　　　３ｇ麦芽エキス
　　　　　　　　　　　　　３ｇトリプトン　　　　　
　　　　　　　　　５ｇグルコース　　　　　　　　　
　　　　１０ｇ寒天　　　　　　　　　　　　　　　　
１ｇ水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　１　０
　０　０ｍｊ！ｐＨ７．０の調節 を１２０℃、２０分蒸気滅菌した。これに前記種培地２
　０　９ｍＩｌを移植し、２８℃、通気ｆｆｉｌｏｃｆ
ｍにて１６８時間培養した。

培養物２０Ｎを酢酸エチル２（ｌで抽出し、得られた橙
色層を乾固した。

シリカゲル（６０−２３０メソシュ〉クロロホルムに懸
濁し、内径５．０ｃｍのカラムに充填し、槽容積５　０
　０ｍｌ、高さ２５ｃｍとした。前記クロロホルム抽出
物をカラムにチャージし、溶出液各２１のクロロホルム
ークロロホルム・メタノール（９８：２ｖ／ｖ）で段階
的にグラディエント溶出を行った。各フラクション５０
０ｍＪずつ分取し、高速液体クロマトグラフイにて溶出
状態をチェックした．目的物は溶出液９８：２の割合の
ときに溶出された．目的物を含むフラクションを合わせ
、乾固した。

得られた乾固物をメタノール５ｍｌに溶解し、その１ｍ
ｌを７５％アセトニトリルにてつめたＯＤＳカラムに注
入し、ＵＶ２５４ｎｍにて目的物を検出した．得られた
目的物の物理化学的性状は以下の通りであり、これはボ
ーベリシンと一致した。

外観　　　：白色結晶 分子式　　”Ｃａｓ１１％１Ｎ＊ｏｑ ＥＩＭＳ　　：ｍ／ｚ７８３　ＣＭ”　）Ｕｖ’ＵＰ”
　：　２　０　４、２４８、２５６、２６４ｎｍＩＲ福
籠１１：３０００、１７４０、１　６　７　０ｃｍ−’
溶解性　　：溶解：　Ｍ　ｅ　Ｏ　ＩＩ　ＳＣ　Ｈ　Ｃ
　ｌ　ｓ、Ｂｅｎｚｅｎｅ，Ｔ？，ｔ０八Ｃ． 不？’ｉｊ　：　Ｈｔ　Ｏ 呈色反応　二陽性：ｈ，蒸気 陰性：５０％ＩｈＳＯ４ ＮＭＲ　　　：’　Ｈ　　ＮＭＲ　（ＣＤＣＩ−１　）
：０．　　６　　（９Ｈ，ａ，Ｊ＝７．　　０）　　、
０．　　８　　（９Ｈ、ｄ，Ｊ＝７．　　０）　　、２
．　　０　　（３Ｈ，ｍ）　　、２．　　９５　　（３
Ｈ，ｄｄＳ　Ｊ＝１５．　　０，１２．　　０）、３．
０　　（９Ｈ，ｓ）　　、３．　　３５　　（３ＨＳ　
ｄｄ，Ｊ＝１　５０、５．　　０）　　、４．　　９　
　（３Ｈ，ｄ．．Ｊ＝８．　　５）、５．　　５　　（
３ＨＳ　ｄｄ，Ｊ＝１２．　　０、５．　０）、７．　
　１５−７．　　２５　　（１５ｔ｛，ｍ）．実施例　
１ ボーベリシン５ｍｇを含有する錠剤 底一丑ユー−１　　当た　（ｍ ボウベリシン　　　　　　　５ エチルセルロース　　　１９０ タルク　　　　　　　　　　　５ 合計　２　０　０ｍｇ ボーベリシン、エチルセルロース、タルクを均一に混合
し、水を用いて練り合わせ造粒機によって顆粒とする。

温風乾燥後、錠剤プレスで打錠して錠剤を得た。

実施例　２ ボーベリシン５ｍｇを含有するカプセル剤虞一発一一−
　　　　１カプセル当た　（ｍ　）ボーベリシン　　　
　　　　５ 乳ｔＪ！　　　　　　　　　　１　４　ｓ合計１５０ｍ
ｇ 上記威分を均一に混合し、硬カプセルに充填した。

実施例　３ ３ｍｌ中、ボウベリシン５ｍｇを含有する注射剤底一允
−　　　　　　３　ｍ　ｊ！当た　　ｍボウベリシン　
　　　　　　５ 塩化ナトリウム　　　　　　適量 注射用蒸留水　　　　　　　適量 合計　３ｍｌ 各或分を均一な溶液または懸濁液とし、３　ｍ　ｌのア
ンプルに充填し、溶閉した後殺菌した。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 下記構造を有する抗生物質ボーベリシン（ｂｅａｕｖｅ
   ｒｉｃｉｎ） ▲数式、化学式、表等があります▼ を有効成分とすることを特徴とする高脂血症治療剤。