JPH03209319A - 抗レトロウイルス薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、レトロウイルスに起因する各種ウイルス性疾
患の治療や予防に有効な抗レトロウイルス薬に関するも
のである。

最近、特に問題になっているヒト後天性免疫不全症候群
（ＡＩＤＳ）の病原ウイルスであるＨＩＶ　（Ｈｕｍａ
ｎ　ｌｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃ１ｅｎｃｙ　Ｖｉｒｕｓ）
と、成人Ｔ細胞白血病（ＡＴＬ）の病原ウイルスである
ＨＴＬ　Ｖ　−　Ｉ　（Ｈｕｍａｎ　Ｔ−ｃｅｌｌ　Ｌ
ｙｍｐｈｏｔｒｏｐｉｃ　Ｖｉｒｕｓ　ＴｙｐｅＩ）は
ヒトのレトロウイルスとして恐れられている。本発明は
、これらヒトレトロウイルスに対しても有効な抗レトロ
ウイルス薬に関するものである。

［従来の技術コ レトロウイルスは、ウイルス粒子内にＲＮＡ依存ＤＮＡ
合成酵素である逆転写酵素を含む特異なウイルスである
。このレトロウイルス特異の逆転写酵素により、細胞内
でウイルスのＲＮＡからＤＮＡが作られ、このＤＮＡが
宿主細胞の染色体に糺み込まれる。組み込まれたＤＮＡ
からｍＲＮＡが合戊され、各種のウイルス蛋白が作られ
、さらに蛋白の修飾を経てウイルスとして出芽する。

近年、レトロウイルスおよび抗レトロウイルス薬に対す
る関心が高まった理由の１つは、ＡＩＤＳの発見と全世
界的な蔓延にある。ＡＩＤＳは、１９８１年に米国で最
初の患者が発見されて以来、その病原ウイルスの解明と
治療方法の研究が開始された。ＡＩＤＳの起因ウイルス
がＨＩＶであることが明らかにされ、ＨＩＶ感染キャリ
アーの検出も可能となったが、有効な治療方法は未だ確
立されるに至っていない。ＡＩＤＳ患者は米国だけでも
すでに５万人を超え、半数以上がすでに死亡している。

ＨＩＶの感染キャリアーは世界中で１０００万人に達し
ていると考えられ、今世紀末までに、このままゆけば１
億人を超えるとの予想もされている。今までのところ、
ＨＩＶ感染者はキャリアー状態を経てプレＡＩＤＳのＡ
ＲＣとなり、最後はＡＩＤＳとなって感染から１５年以
内に死亡すると考えられている。人類がこれまでに経験
したことのない恐るべき感染症である。

ヒトのレトロウイルス起因疾患として、ＡＩＤＳの他に
或人Ｔ細胞白血病（ＡＴＬ）がある。ＡＴＬの起因ウイ
ルスであるＨＴＬＶ−Ｉについても感染ルートや予防方
法の研究がなされている。

日本だけでもＨＴＬＶ−Ｉの感染キャリアーは１００万
人に達していると考えられ、感染後数十年後にＡＴＬが
発症するとされ、発症率は１／１０００程度といわれて
いるが、ＡＴＬ発症後１〜数年以内に死亡するので、こ
れも大変恐ろしい感染症である。母乳によりキャリアー
の母親から新生児に感染することがわかり、長崎県など
ではキャリアーの母親からの授乳を止めることで母子感
染の防止が実施されている。ＨＴＬＶ−Ｉに対しても有
効な抗ウイルス薬は未だ見い出されていない。

動物においても種々のレトロウイルスに起因する疾患が
知られている。動物のレトロウイルスには、とり骨髄芽
球症ウイルス（ＡＭＶ　；　ａｖｉａｎｍｙｅ１ｏｂｌ
ａｓｆｏｓｉｓ　ｗｉｒｕｓ　）　、とり白血病ウイル
ス、とり肉腫ウイルス、とり細網肉皮腫症ウイルス、マ
ウス乳がんウイルス、マウス白血病ウイルス、マウス肉
腫ウイルス、ねこ白血病ウイルス、ねこ肉腫ウイルス、
ねこＡＩＤＳウイルス、ひつじ白血病ウイルス、うし白
血病ウイルス、うま伝染性貧血病ウイルス、さる白血病
ウイルス、さるＡＩＤＳウイルス、ひひタイプＣウイル
ス、その他多くのレトロウイルスが知られている。これ
ら動物のレトロウイルスによる疾患の治療や予防に有効
な抗レトロウイルス薬も未だ見い出されていない。

ＡＩＤＳの治療薬として、核酸系のアジドチミジン（Ａ
　Ｚ　Ｔ）が許可になり延命効果があるとされるが、骨
髄抑制その他重篤な副作用があり、未だ十分とは考えら
れていない。

抗ＡＩＤＳ薬の研究について記述すると枚挙にいとまが
ないが、例えば、最近の関連する総説論文としては、Ｒ
．ヤーショアン、満屋裕明、Ｓ．プローダーらによるサ
イエンス誌論文〔サイエンス、１８　（１２），　９６
〜１０１１　（１９８ｇ））　、星野洪郎による化学と
工業誌論文〔化学と工業、４２　（８），　　１３５６
〜１３５ｇ　（１９８９）　）　、Ｅ，ｄｅ　Ｃｌｅｒ
ａｑのＴＩＰＳ誌論文［Ｔ　Ｉ　Ｐ　Ｓ，　８．　３３
９〜３４５　（１９８７））　、満屋裕明、Ｓ．ブロー
ダーらのＮａｔｕｒｅ誌論文（Ｎａｔｕｒｅ．　３２５
．７７３〜７７８　（１９８７））などがある。

ＨＩＶの感染から増殖に至る過程で、それぞれ特異な薬
剤の研究がなされている訳である。すなわち、ＨＩＶの
細胞表面への吸着、細胞内への進入、細胞中での逆転写
酵素によるＲＮＡからＤＮＡの合成、ＤＮＡの宿主遺伝
子への組み込み、組み込みＤＮＡからＲＮＡの合成とウ
イルス蛋白の合成、修飾、アツセンブリー、さらに出芽
およびＨＩＶ感染細胞による細胞融合と細胞破壊など、
各過程について薬剤の研究がなされている。中でも、特
に逆転写酵素は、宿主細胞の増殖には関与しないレトロ
ウイルスの増殖に特異な酵素であり、この逆転写過程に
選択的に有効な薬剤が見い出せれば宿主細胞に悪影響を
与えず、標的のレトロウイルスを阻害できるとして期待
されている。

［発明が解決しようとする課題コ 本発明の目的は、レトロウイルスに対して有効な抗レト
ロウイルス薬を提供することにある。

特に、レトロウイルス特異酵素である逆転写酵素に対し
て、阻害作用を有する新しい抗レトロウイルス薬を提供
することにある。

［課題を解決するための手段］ 本発明者らは、自然界に広く存在する天然物の中に抗レ
トロウイルス薬となりうる化合物があるのではないかと
考え、鋭意検討を行なって本発明に到達した。特に、レ
トロウイルスに特異的な逆転写酵素の阻害試験を用いて
初期スクリーニングを行なった。さらには、ＨＩＶを感
染させたリンパ球におけるＨＩＶ感染による細胞変性の
阻止作用についても検討した。

その結果、一般式（Ｉ）： 〔式中、Ｒ，、Ｒ２は水素、炭化水素基、または六員環
のビラノース型のヘキソースもしくは五員環のフラノー
ス型のベントースの配糖体形戊残基であり、Ｘ−は酸の
残基である〕 で表わされるベラルゴニジン、またはその誘導体を有効
成分として含有する抗レトロウイルス薬を見い出し、本
発明を完成するに至った。

本発明の一般式（Ｉ）で表わされるベラルゴニジンまた
はその誘導体は、天然の植物材料から抽出・精製して得
ることもできるし、また合成反応により合戊して得るこ
ともできる。

一般式（Ｉ）中、Ｒ，、Ｒ２は、それぞれ独立に水素ま
たは直鎖、枝分れ、環状の飽和もしくは不飽和の炭化水
素基、あるいは六員環のビラノース型のヘキソースもし
くは五員環のフラノース型のベントースの配糖体形或残
基であるが、好ましくは水素、メチル基などの低級アル
キル基またはグルコースやフラクトースの配糖体形成残
基であり、特に好ましくは少なくともＲ１がグルコール
またはフラクトースの配糖体形成残基である。

一般式（Ｉ）中、Ｘ一は酸の残基であるが、例えば、塩
酸、硫酸、リン酸などの無機の酸の残基、またはシュウ
酸、酢酸、クエン酸、酒石酸、パルミチン酸などの有機
酸の残基が好ましく、特に好ましくは塩酸の残基である
ＣＩ−が選ばれる。

具体的に、一般式（Ｉ）の化合物を例示すると、ベラル
ゴニジンクロライド、ベラルゴニジンク口ライド−３−
グルコシド、ベラルゴニジンク口ライド−３，５−ジグ
ルコシド、ベラルゴニジンク口ライド−３−ガラクトシ
ドなどが挙げられる。

ただし、必ずしもこれら化合物に限定するものではない
。

ベラルゴニジンクロライド−３−グルコシドとベラルゴ
ニジンクロライド−３，５−ジグルコシドは、エゾギク
の花とモンテンジクアオイの花に含まれていることが知
られている。また、これら配糖体を酸加水分解するとア
グリコンのべラルゴニジンクロライドが得られることも
知られている。

天然植物からの抽出・精製あるいは加水分解処理して得
られるベラルゴニジンおよびその誘導体が市販されてお
り、容易に入手可能である。

また、合成反応により本発明の化合物（１）を得ること
も可能であり、２．４．６−｝リヒドロキシベンゾアル
デヒドまたはその誘導体と、４，ω−ジヒドキシアセト
フエノンまたはその誘導体との縮合環化反応により、さ
らには縮合環化反応後、さらに部分的にないしは完全に
加水分解反応、その他修飾反応をほどこして合成するこ
とができる。例えば、Ａ．Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎらはベラ
ルゴニジンク口ライド−３−グルコシドの合成について
報告している（Ｊ．Ｃｈｅｔ　Ｓｏｃ．．　１９２８　
（２）．　１４６０　〜１４７２（１９２８））。

フラボノール類のカンフエロールをＭｇとＨＣ１，Ｌｉ
ＡＩＨ４、Ｎａ−アマルガムなどで還元すると、ペラル
ゴニジンが得られることも知られている。

本発明の化合物（Ｉ）の抗ウイルス作用については、イ
ンフルエンザウイルスに対する抗ウイルス効果が報告さ
れている（Ａｚｅｒｂ．　ｌｅｄ．　Ｚｈ．，　６４（
４），　３３〜３６　（１９８７）　）。すなわち、ソ
連のＺ．Ａ．ｔ，ａｚｙｍｏｙａらがチューリップの花
から分離したシアニジン、ベラルゴニジンおよびデルフ
イニジンの誘導体からなるアントシアニンの混合物が、
とりの胎児繊維芽細胞培養系にてＡ型インフルエンザウ
イルスに対して抗ウイルス作用を有することを見い出し
た。

しかしながら、インフルエンザウイルスとレトロウイル
スとではウイルスの増殖過程が異なり、特にインフルエ
ンザウイルスに対して、抗ウイルス作用を有しても逆転
写酵素の阻害作用を有するかどうかは分らないのはいう
までもない。

本発明者らは、種々の天然物由来化合物について逆転写
酵素阻害作用を有するものを求めて試験した結果、本発
明の化合物（Ｉ）が逆転写酵素阻害作用を有し、本発明
に到達したのである。

逆転写酵素を用いる反応は、遺伝子操作反応におけるｍ
ＲＮＡからｃＤＮＡの合成に利用されている。本発明者
らは、ＡＭＶ由来の逆転写酵素を用いて、石浜　明の論
文〔蛋白質、核酸、酵素、３０（１０），　１１２７　
（１９８５）　］に記載の方法に準じて酵素阻害試験を
行なった。

さらには、ＨＩＶを感染させたリンパ球における細胞変
性阻止試験を行なった。リンパ球としては、ヒト白血病
Ｔ一細胞セルラインＭｏｌｔ−４のクローン８　［１？
．Ｋｉｋｕｋａｖａら、Ｊ．Ｖｆｒｏｌ．．　５７．　
１１５９−１１８２　（１９８８））を使用した。ＨＩ
Ｖは、Ｍｏｌｔ−４／ＨＴＬＶ−ｍセルライン（Ｓ．Ｈ
ａｒａｄａ，　Ｖ１ｒｏｌｏｇ３’，　１４８，　２７
２−２８１　（１９８５）　）の培養上清から得たＨＴ
ＬＶ−ｍを使用した。

本発明の化合物（Ｉ）は、レトロウイルス由来の逆転写
酵素に対して阻害作用を有し、かつレトロウイルス感染
細胞においてレトロウイルスによる細胞変性を阻止する
ことから、レトロウイルスによる感染と増殖の阻害剤と
して有効なことが示された。

ヒトまたは動物への本発明による抗レトロウイルス薬の
適用として、レトロウイルス感染の前、レトロウイルス
感染後のキャリアー状態のとき、またはレトロウイルス
による病状、症状の現れる発症時に投与される。

本発明の抗レトロウイルス薬、すなわち化合物（Ｉ）を
含有した治療用および予防用薬剤組成物は、粉剤、懸濁
剤、溶岐剤、シロップ剤、乳剤、軟膏剤またはクリーム
剤に製剤化できる。非経口投与（静脈内、皮内、筋肉内
、腹腔内など）、または経口投与も行なうことができる
。局所適用、例えば鼻腔内、直腸または腟に適用するこ
ともできる。

本発明の抗レトロウイルス薬中の化合物（Ｉ）の濃度は
、０．１％から１００％まで幅広い範囲とすることがで
き、投与形態によって左右される。

さらに、化合物（Ｉ）の量は、体重１ｋｇ当たり０．１
■から１００■とすることができる。

［実　施　例］ 以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明する。

実施例１ ベラルゴニジンクロライドの逆転写酵素（以下、ＲＴと
略記する）阻害試験結果を示す。

ＲＴは、ＡＭＶ由来ＲＴを用いた。反応は、鋳型として
ｐｏｌｙ（ｒＡ）をテンプレートとしてｐ（ｄＴ）１２
−１８を使用し、基質である３Ｈ−ｄＴＴＰ　（トリチ
ウム標識チミジン３燐酸）の取込み量で、ＲＴ活性を測
定する方法である。

エッペンドルフのポリエチレン製マイクロチューブ（１
．５ｍｌ用）を反応容器とし、反応溶液の紐成は次のと
おりとした。

（ＲＴ阻害反応溶液組成） １Ｍ　　トリスーＨＣＩ　　（ｐＨ７．８）２．　５μ
ｌ ＬＭ　　Ｍｇ　（ＯＡｃ）２　　　　　　　０．５ｔｔ
ｌＬＭ　　ＮａＣｌ　　　　　　　　　　　　２．５ｕ
ｌＯ，５Ｍ　　ＤＴＴ　（ジチオスレイトール）０．５
μｌ ５ｍＭ　３Ｈ−ｄＴＴＰ　　　　　　１．　Ｏｕｌ５υ
／ｍｌｐｏ　Ｉ　ｙ　（ｒＡ）　　ｏ　（ｄＴ）　１２
−１ｇ１．０μｌ ＡＭＶ−ＲＴ　　　　　　　　　　　　１．０μ１薬剤
溶液　　　　　　　　２．　０μｌ八　　　　計 ロ ５０μｌ 薬剤溶液は、反応時の目標薬剤濃度の２５倍濃度の薬剤
１０％ＤＭＳＯ溶液を調製し、使用した。

従って、反応時のＤＭＳＯ濃度は０．　　４％である。

反応は３７℃にて３０分間行ない、反応後１０％ＴＣＡ
（トリクロロ酢酸）溶液５０μｌを添加し、氷水にて冷
却３０分後にガラスミクロ繊維製フィルター（Ｗｈａｔ
ｍａｎ　Ｇ　Ｆ　／　Ｃ直径２．１ａｎ）にて吸引戸過
し、さらに５％ＴＣＡとエチルアルコールにて洗浄後乾
燥し、トルエンシンチレータ溶液に入れ、液体シンチレ
ーションカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ　ＩＩｌｓｔｒｕ
ｍｅｎｔ社製、ＴＲＩ−ＣＡＲＢ　４１１００）にて戸
紙上の３Ｈ量を測定した。コントロール、すなわちＲＴ
阻害薬剤無添加時のＲＴ活性を１００％とし、薬剤添加
時のＲＴ活性を相対比較して求めた。

ベラルゴニジンクロライドを用いた場合の結果を第ｌ図
に示す。ベラルゴニジンクロライドがＡＭＶ由来ＲＴ阻
害作用を有することがわかる。５０％阻害濃度は、約２
０μｇ　／　ｍｌである。

実施例２ ベラルゴニジンク口ライド−３．５−ジグルコシドを用
いて、実施例１と同様にＡＭＶ由来ＲＴの阻害試験を行
なった。

第２図に結果を示す。ベラルゴニジンク口ライド−３．
５−ジグルコシドがＡＭＶ由来ＲＴ阻害作用を有するこ
とがわかる。５０％阻害濃度は、約２０μｇ　／　ｍｌ
である。

実施例３ ベラルゴニジンクロライドの抗ＨＴＶ作用を試験した。

ヒト白血病Ｔ細胞セルラインＭｏｌｔ−４（クローン８
）細胞（Ｒ．　Ｋｉｋｕｋａｖａら、Ｊ，Ｖｉｒｏｌ．
５７．　　１１５９−１１６゜２　（１９８６）　）を
、２４穴マイクロプレート中に２Ｘ１０Ｓ細胞／ｍｌに
調製し、ＨＩＶの１種であるＨＴＬＶ−１［［を感染の
重多度（ＭＯＩ）０．００２で感染させ、３７℃にてＣ
Ｏ２インキュベーター中で培養した。培地には、１０％
ウシ胎仔血清（Ｆ　Ｃ　Ｓ）　、１　０　０　１Ｕ／ｍ
ｌペニシリンＧおよび１００μｇ　／　ｍｌストレプト
マイシンを加えたＲＰＭＩ−１６４０培地を使用した。

またＨＴＬＶ−■は、Ｍｏ　ｌ　ｔ−４／ＨＴＬＶ−ｍ
セルラインＣＳ．Ｈａｒ！ｄｇ　（１９１１５）　Ｅの
培養上清から得たものを使用した。ＨＩＶの感染操作の
際、同時にマイクロプレートの各ウエルに試験薬剤、こ
こではベラルゴニジンクロライドをＤＭＳＯ水に溶解し
たものを加えた後、３日間３７℃にて、さらにＣＯ２イ
ンキュベーター中にて培養した。薬剤投与は、初日に続
き２日目、３日目に同様に追加添加した。

３日後に各ウエルの半量をぬき出して細胞数を半分に減
らし、ぬき出し量と同量の新しい培養液を加え、さらに
初日と同様に薬剤と添加して、さらに２日間培養を続け
た。培地半量交換後２日目にも、さらに薬剤を添加した
。合計５日間培養後、細胞をぬき出し、トリパンブルー
染色を行なった後、顕微鏡下に染色されない生細胞数を
計数した。

死亡細胞のみが染色され識別される。比較のためＨＴＬ
Ｖ−ＩＩＩを感染させないで同様の試験も行なった。

第３図にベラルゴニジンクロライドの試験結果を示す。

１２μｇ　／　ｍｌの薬剤濃度では、ＨＴＬＶ−■感染
させても未感染時と同様に細胞の生育が進み、細胞のＨ
ＴＬＶ−ｍ感染による細胞変性は認められなかった。す
なわち、抗ＨＩＶ作用が確認された。

実施例４ ベラルゴニジンク口ライド−３−グルコシドを用いて、
実施例３と同様の試験を行なった。

第４図に結果を示す。１２μｇ　／　ｍｌの薬剤濃度で
かなりＨＴＶ感染による細胞変性を阻止していることが
わかる。抗ＨＩＶ作用が確認されたわけである。

実施例５ ベラルゴニジンク口ライド−３，５−ジグルコシドを用
いて、実施例３と同様の試験を行なった。

ただし、若干条件を変更して実施した。すなわち、細胞
に対してＨＩＶの感染操作後１時間培養し、その後に薬
剤の投与を行なった。また、３日間培養後、培地を半量
交換し、薬剤投与を行なった後１日培養し、合計４日間
培養時点で細胞数を計数した。

第５図に結果を示す。６０μｇ　／　ｍｌでほぼＨＩＶ
による細胞変性を完全に阻止できた。従って、ペラルゴ
ニジンクロライド−３．５−ジグルコシドは、抗ＨｒＶ
作用を有することが確認できた。

［発明の効果］ 本発明の抗レトロウイルス薬は、レトロウイルスに特異
の逆転写酵素に対して阻害作用を有し、かつレトロウイ
ルス感染細胞において細胞変性を阻止する作用を有する
ため、レトロウイルスに起因する各種ウイルス性疾患の
治療や防止に有効である。

【図面の簡単な説明】

第１図はベラルゴニジンクロライドによる逆転写酵素阻
害試験の結果を、第２図はベラルゴニジンクロライド−
３，５−ジグルコシドによる逆転写酵素阻害試験の結果
を各々示す。 第３図はベラルゴニジンクロライドの抗ＨｒＶ作用を、
第４図はベラルゴニジンク口ライド−３ーグルコシドの
抗ＨＩＶ作用を、第５図はベラルゴニジンクロライド−
３．５−ジグルコシドの抗ＨＩＶ作用を各々示す。

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. （１）一般式（ I ）： ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） 〔式中、Ｒ＿１、Ｒ＿２は水素、炭化水素基、または六
   員環のピラノース型のヘキソースもしくは五員環のフラ
   ノース型のペントースの配糖体形成残基であり、Ｘ＾−
   は酸の残基である〕 で表わされるペラルゴニジンまたはその誘導体を有効成
   分として含有する抗レトロウイルス薬。
2. （２）一般式（ I ）のＲ＿１、Ｒ＿２がともに水素で
   あり、Ｘ＾−がＣｌ＾−であるペラルゴニジンクロライ
   ドを含有する請求項（１）記載の抗レトロウイルス薬。
3. （３）一般式（ I ）のＲ＿１がＤ−グルコースの配糖
   体形成残基であり、Ｒ＿２が水素であり、Ｘ＾−がＣｌ
   ＾−であるペラルゴニジンクロライド−３−グルコシド
   を含有する請求項（１）記載の抗レトロウイルス薬。
4. （４）一般式（ I ）のＲ＿１、Ｒ＿２がともにＤ−グ
   ルコースの配糖体形成残基であり、Ｘ＾−がＣｌ−であ
   るペラルゴニジンクロライド−３，５−ジグルコシドを
   含有する請求項（１）記載の抗レトロウイルス薬。
5. （５）レトロウイルスがヒトレトロウイルスである請求
   項（１）記載の抗レトロウイルス薬。
6. （６）レトロウイルスがヒト後天性免疫不全症候群の病
   原ウィルス、または成人Ｔ細胞白血病の病原ウィルスで
   ある請求項（５）記載の抗レトロウイルス薬。
7. （７）レトロウイルスが動物レトロウイルスである請求
   項（１）記載の抗レトロウイルス薬。
8. （８）レトロウイルスがとり骨髄芽球症ウィルス、また
   はネコ免疫不全症候群の病原ウィルスである請求項（７
   ）記載の抗レトロウイルス薬。