JPH03172185A - エイズ及びｂ型肝炎用のワクチン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

後天性免疫不全症候群（エイズ）は以前はヒト］゛リン
バ向性ウイルスＩＩＩ型（ＩＩＴＬＶ−　ＩＩ１　）　
．　　リンパアデノバシー関連ウイルスＩＬＡＶＩ又は
エイズ関連ウイルスｆＡｌ｛Ｖｌ　とも呼ばれたヒト免
疫不全ウイルス（ｌｌｍ　　（以下，総称して“旧Ｖ”
）がＣＤ４ヘルパー′Ｆ細胞及び他の細胞標的に顕性的
感染したことの龜床的発現である．エイズは日和見感染
及びある神の悪性Ｉｌ！Ｉ！瘍を特徴とする伝染性細胞
性免疫不全症である．類似疾患のエイズ関連合併症ｆＡ
ｌｌｃ）はエイズと多くの免疫学的特徴及び免疫異７；
（を共イＪしており、エイズの臨床的発現に先立つこと
が多い． エイズ及び／又はＡＩＩＣに対するワクチンはＨＩＶに
よる感染の伝染作用を妨げる上で理想的な予防処置であ
る．本出願人らはこのようなワクチンに関して有用な免
疫原を発見した．免疫原は■ロｓＡｇ（Ｂｇ肝炎表面抗
原）及び／以上のＨＩＶエンベローブ断片の５′融合体
である． １　１　Ｉｔ　　／Ｔ１　−！”！　Ｉ工ｔｉｌｌ　ｈ
ヒ　ｒＬ　　１ｆ　　ｔ／　　Ｉ＋　　＋　　−．　ｎ
　：”ｌ＝　ｌ−　　ＦＩＡ　Ｍト　ス．ｉｔ　　ｔｍ
の多＜　４１まだ解明されていない。しかしながら、一
射的持徴のあるものについては明らかになっている。金
部で約９キロ塩基（Ｋｌ１１のゲノムを有したＩＮＮ八
ウイルスであるＨＩＶのヌクレオチド配列は、＋；ａＨ
　、ｐｏｔ　，ｅｎｖ　、ｖｉｒ，　Ｌａｄ．ｒｅｖ及
びｎｅｔ遺伝子番こ相］５する７つの主要なオーブン読
取り枠ｔｏｌｌ１’）を含んでいる。ｇａｇ，ｐｏｌ及
びｅｎｖ　ｉｆｔ伝子はそれぞれコアサブユニット，逆
転写酵素又はプロテアーゼのようなウイルス酵素、及び
外表面（エンベローブ）サブユニットをコードしている
。ｖｉｆ　遺伝子（まウイルス感染性因子についてコー
ドしているが、これは出芽プロセスに影響を与えること
なくビリオンの細胞から細胞への伝達力の増強に関与す
るタンパク質である。Ｌａｔ遺伝子はウイルス感染性に
必要な小タンパク質についてコードするが、その作用メ
カニズムは明らかでない。ｒｅｖ逍｛云丁・はおそらく
不完令にスプライスされたＲＮＡの運搬を促進すること
によってｇａｇ，　ｐｏｔ及びｅｎｖ遺伝−ｒのウイル
スタンパク質の発現を調節していＡ　−　＋＋＋＋Ｆ　
ｉｒｌ４２子は細附竹中にみられるウイルスタンパク質
をコードしており、宿主細胞シグナル系を変化させて，
転写サイレンサーとして機能しているｉｊ（能性がある
。ヌクレオチド配列における末端反復はＨＩＶのような
レトロウイルス多くに共通であって、ウイルス複製及び
宿主染色体への組込み↓こ必要とされる。ＨＩＶグノム
Ｉｌｌｌ造、複製及び調節の一般的ヤｔ質に関する更に
最近の解説Ｃまラトナー、■、，ら，゜゛ヒト゛１゛リ
ンパ向性レ１＝　ＣＪウイルス゜゜、オブライエン．　
Ｓ．Ｊ．　（ｊＡｌｉ集），ジェネティック・マツブス
、コールド・スブＪング−ハ−ハ−、１９８７年、第１
２４−１２！）　ｎ［＋１ａＬｎｃｒ．　　Ｉ．．（！
Ｌ　ａｌ．　　．　”ｌｌｕｍａｎ　’Ｉ”　−　１．
ｙｍｐｂｏｔｒｏｐｉｃ１１＋！Ｌｒｎｖｉｒｕｓｃｓ
　　−　　　　ｉｎ　　Ｑ’　　［ｌｒｉｃｎ，Ｓ．Ｊ
．（ｃｄ．ＩＧｅｎｃＬｉｃ　Ｍａｐｓ．Ｃｏｌｄ　Ｓ
ｐｒｉｎｇＩｌａｒｂｏｒ．　１９８７．ｐｐ．　１２
４＋２９　］　　；フランチニ、Ｇ．ら、ネーチャー、
第３２８巻、第　ｓ：＋ｑｙ＋、１９８７年［　Ｆｒａ
ｎｃｈｉｎｉ．　Ｇ．　ｐｔ．＋１１．．Ｎａｌ．ｕｒ
ｅ．：１２８．　５３９　（１９８７１１　　；バーマ
ス、Ｈ，ジーンズ＆デブ、第２巻、第１０５５頁、１９
８８年（　　Ｖａｒｍｕｓ．　　ｌＩ．．Ｇｃｎｅｓ　
　＆　　Ｄｃｖ．．　　２．１ロ５５　１１９８８）］
　　でみられる。 １１１Ｖ感染を防１Ｆするワクチンを開発する試みは般
に，１つて持異的ウイルス中和抗体の誘導に集中しでい
た。このような抗体の産生に関与する＋１１Ｖｋ面コー
トタンパク質ｆｇｐｌ２０１の領域についてｃｉ明らか
になっている

【ゴードシュミットら、ブ１】シーデｆン
グ・オブ・ナショナル・アカデミー・才ブ・−リ−イエ
ンス・ＵＳＡ　．第８５巻，第４４７８Ｌ′〔、Ｉ　！
＋　８　８年（（ｉｏｕｄｓｍｉＬ　（！Ｌ　＋ｌｌ．
　，　ｌ’ｒｏｃｔ：ｅｄｉｕＢ　ｏｒＮ＋＋Ｌｉｏｎ
ａｌ　　Ａｅｄｔｌｅ＋ｓｙ　　ｏｆ　　Ｓｃｉｅｎｃ
ｅ　　ＩＩＳ八．　　８５．　　４４７８ｆｌ！１８８
１；ホーら、ジャーナル・オブ・バイロロシー，第１；
１巻、第２＋１２４１″Ｅ．　１９８７年（ｌｌｏ　ｅ
Ｌ　ａｌ．．．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｒ　Ｖｉｒｏ１ｏｇ
ｙ．Ｇｌ，２０２４（１９８７１１：マツシタら，ジャ
ーナル・オブ・パイロロジー，第６２巻、第ｚ＋ｏ７ｔ
Ｔ．　＋ｑｓｓｑ：バルカー（Ｐａｌｋｃｒｌら、プロ
シーディング・オブ・ナショナル・アカデミー・１ブ・
Ｉｊイエン久・ＵＳＡ，第８５巻，第１９３２頁、１９
８８年：ラッシェ（　Ｉｔ　ｕ　ｓ　［：　１１　ｅ　
Ｊら，ブロシーデインク・才ブ・ナショナル・アカデミ
ー・才ブ・サイエンス・１１　３　Ａ．第８５谷、第３
１９８頁．　１９８８年：スキナｆｓｋｉｎｎｅｒｌ　
ら、ジャーナル・オプ・パイロロジー、第６２巻２第４
１９５頁、１９８８年１．シかしながら，イＹ意レベル
の中和抗体を容易に誘導するために完全ウイルスコート
タンパク質又はその一部を用いる試みは不成功に終った
〔バーマン（　Ｉｌｅｒｍａｎ　）ら、ブロシーデイン
ク・オプ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンス
ＵＳＡ、第８５巻、第５２００ｊｆ、１９８８年．ヒュ
ー（　ｆｌｕ）ら、ネー−１ヤー、第３２８巻、第７２
１頁．　１９８７年：ラスキーら、リイエンス、第２３
３巻、第２０９頁、１９８６年（　ｌａｓｋｙ　ｐｔ　
ａｌ．．　Ｓｃｉｅｎｃｅ．２３３．２０９（１９８６
）ｌ；　パトニーｆ｝’ｕｔ．ｎｅｙｌら、サイエンス
、第２３４巻、第１３９２１［、■９８６年：ロビーＩ
Ｒｏｂｅｙｌ　　ら、ブロシーデインク・オブ・ナショ
ナル・アカデミー・才ブ・サイエンス　ＵＳＡ、第８３
巻，第７０２３頁、１９８６年；ラッシェら，プロシー
デインク・才ブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイ
エンス・ＵＳＡ、第８４巻，第６９２４頁、１９８７年
１． 本発明の出願人らは新規組換え融合タンパク質ｌ　Ｈ　
Ｆｒ　）合成用の新規ベクターを組立てたが，その場合
のＩＩＦＰとはカルボキシ末端でｌｌＢｓＡｇと融合し
たＨＩＶエンベ【１−ブタンバク質断片配列である．本
発明の融合体はワクチン’２ｈ力に必珀と考えられる中
和抗体応寄を示すことができる。本発明の１１　Ｆ　Ｉ
＋はエイズ及び／又はＡＩＩＣに対する並びに肝炎に対
するワクチンとしてイＴ川である。 本出願は新規Ｒ　Ｆ　Ｉ）に関する遺伝子、それらのク
ローニング及び発現ベクター、ＲＦＰに関する発現系並
びにこれら糾立て体の産生及び得られたＲＦＰの梢製に
関するプロセスに関する６本出願はエイズ及び／又はＡ
ｌｌ（，ｔびに肝炎に対するワクチンとして適したＩｔ
　Ｆ　Ｐの処方にも関するが、その場合に他の抗エイズ
ウイルス剤、犯疫調節剤、抗生物質又はワクチンと組合
せても又はそうでなくてもよい。このような発明はエイ
ズ及び／又はＡＲＣの受動的保訝又は治療用の抗体を誘
導する−Ｌて有用１１犯疫原を提供する。免疫原及びそ
の特異的抗体はイＴ用な註断試薬である。 本発明のＩＩＦＰに関する利点の１つは、それが肝炎及
びエイズを同特に防御するワクチンを提供しうろことで
ある。ここで示される具体的な肝炎疾思はＩ３　ａ肝炎
ウィルスｆｌｌｒｌＶｌ　に此因する疾患である。 エイズはユニーク々特性の集まー）たウイルスｆｌｌｌ
Ｖｌ　に起因する疾患である。ＨＩＶ自体は免疫系を標
的にし、高度に変異した子孫を作り出すことができる逆
転写酵素を有し、免疫系からは隔離され、ｃｎｖ　ｆｉ
ｎｔｄに冶ｉ度＋４変表面（領域）をｆ了する。 四λば，ヒルマン、Ｍ．Ｉ１．．ワクチン、第６巻、第
　１　７　５　ｊｔ、１９８８年［ｌ１ｉ１１ｅｌＩａ
ｎ．Ｍ．ｌｌ．．Ｖａｅｃｉｎｅ，６．１７５ｆｌ！Ｊ
ＩＩＵ　］　　；パーネス．　１３．　Ｍ．　（Ｉｌａ
ｒｎｃｓ．　Ｄ．　Ｍ．　ｌ、サイエンス、第２４０巻
，第７１９頁、１９８８年参明。これらの特性から、本
発明の融合体がエイズワクチンとしてイ１川であろうと
は子想又はｊｔｌｌ待されなかった。 木允明は組換え融合ポリベブチドｆＲＦＰ）に関するが
、その場合のＲＦＰはカルボキシ末端でＢ型肝炎表面抗
原（１１ロｓＡｇｌ　と融合したＨＩＶエンベロ−ブタ
ンパク質断片のアミノ末端融合体である。ＲＦＰの処方
はエイズ及び／又はＡＢＣ並びに肝炎に対するワクチン
として適切であり、その場合に他の抗エイズウィルス剤
，免疫調節剤，抗生物質又はワクＪ−ンと組含せても又
はそうでなくてもよい。本究明はエイズ及び／叉１ｉＡ
Ｉｔじの受動的保謀又は治療川の抗体を請導する上で何
川な免疫原としてのＩｔｌ’ｌ’を提供する。中に，東
疫原及びその特異的抗体はイ１川な課内一式薬である。 虹比反星互な Ｊ．　４ズ　　　　　　：後天性免疫不全症候ＩｔｆＡ
　Ｉｔ　Ｃ　　　　　　　　　：エイズ関連合併ｆａ二
Ｖ　　　　　　　　：エイズ及び／又はＡＩＩＣの推定
病因原に関する一般川詔 であッ”’Ｃ　，ＩＩＴＬＶ−１１１　．　１ＡＶ及び
ＡＩＩＶ株とも梅される 組換λ体融合ボリベ：組換え真核又は原核細胞発ブＪド
（肝１》）　　　　　現系においてスプライスされた外
米ＤＮＡから連続翻訳 産物として発現されたポリ ベブチド又はオリゴベブヂ ドであるが、その場合にお いてスプライスされた外米 ＤＮＡは２以上の異なる起源 のコード配列から得られ、 互いに結合されている 組換え体タンパク質：組換え真核又は原核細胞発現系に
おいて外来ＤＮ＾から 発現されたポリペブチド又 はオリゴペブチド 組換え体発現系　　：外来タンパク質又は外来ボＪベプ
グードを発現する外来 ＤＮ八を含んだ細胞系統，組 織片、器官又は動物らしく は植物を含む生物 アミノ酸 立」辷丑 アラニン アルギニン アスパラギン アスパラギン酸 アスパラギン及び／又は アスパラギン酸 二玉二乙直旦 Ａｌａ Ａｒｇ Ａｓｎ Ａｓｐ Ａｓｘ ンスデイン　　　　　　　　　　　Ｃｙｓグルタミン　
　　　　　　　　　　Ｇｌｎグルタミン酸　　　　　　
　　　　Ｇｌｕグルタミン及び／又は　　　　　Ｇｌｘ
グルタミン酸 グリシン　　　　　　　　　　　　ｃｔｙヒスＪ−ジン
　　　　　　　　　　　ｌｌｉｓイソ口イシン　　　　
　　　　　　ｌｉｅロイシン　　　　　　　　　　　　
Ｌｅｕリジン　　　　　　　　　　　　　ＬｙｓメＪ−
オニン　　　　　　　　　　　ＭｅＬ又はＭ［’ｌ”フ
エニルアラニン　　　　　　　Ｐｈｅブロリン　　　　
　　　　　　　　ｌ’ｒロセリン　　　　　　　　　　
　Ｓｅｒ トレオニン　　　　　　　　　　　Ｔｈｒトリブトファ
ン　　　　　　　　　゛ｒｒｐヂロシン　　　　　　　
　　　　　゛Ｉ’ｙｒバリン　　　　　　　　　　　Ｖ
ａｌ ＩＩＩ　＋？！ｉ　”タンパク質一、゜゜ベブチド”、
“才リゴベブヂド”、゛ポリベブチド”及びそれらの複
数形は５以上のアミノ酸のアミノ酸配列を有する化合物
に関して互換的に用いられてきた．“アミノ酸“とはそ
のコドンが天然に存在しかつ前記アミノ酸の表で示され
た２０の通常アミノ酸のいずれかに関する． 本発明はエイズ又はＡＩＩＣに対して有効なワクチンを
提供し，これは下記アミノ酸配列の抗原ＲＦＰを含んで
いる． ロＵユカ１旦Ｕ江 ＾ＴＯ　　ＡＡＣ　ＡＡＴ　ＡＣＧ　ＣＩＩＴ　ＡＡＡ
　ＡＧＴ　ＡＴＣ　ＣＧＴ　ＡＴＣ　ＣＡＧ　ＡＣＡ　
ＧＧＧ　ＣＣＣ　ＧＧＧ　Ａｌ２Ａ　ＧＣＡ　Ｔｒｒ？
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Ｓｅｒ　Ｉ１ｅ　Ａｒｇ　ＩＩｓ　（；ｉｎ＾ｒｇ　Ｇ
ｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ａｒｇ＾ｌａ　ＰｈｅＣ丁τ　
　＾ＣＡＡτＡ　　ＧＣＡ　　ＡＡＡ　ＡＴＡ　　ＧＧ
Ａ　　＾丁ＣＣ＾Ｃ＾ＡＣ　ＡＴＣ　　＾ＣＡ　τＣＡ
　　ＧＣＡ　　ＴＩ’Ｃ　　Ｃ丁Ａ　ＧＧ＾　ＣＣＣＶ
ａｌ　　Ｔｈｒ　Ｉｌｅ　Ｇｌｙ　Ｌｙｓ　Ｉｌ＠Ｇｕ
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Ｓｅｒ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｃｙｓ５８日 ＾ＣＴ　丁ＴＡＣ丁＾　ＣＴ［；　　ＣＣＡ　　ｍ　Ｇ
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異体らしくはその薬学上＝１容さｈるＩム　． 担１砥Ｄ七ａ４ ４Ｂ７５ ＡＴＣ　　ＴＡＣＡＡ丁ＡＡＧ　ＣＧＴ　ＡＡＡ　ＣＣ
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　　　　　　　　　　　６６９ＴＴＡ　　　ＣＴＡ　　
ＣＴＣ　　ＣＣＡ　　ｍ　　ＧＴｒ　　ＣＡＧ　　ＴＧ
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　ＣＣＴ　Ａ丁Ａ　　Ｔ（Ｇ　Ａ丁Ｃ　　ＡＴＣ　　Ｔ
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　Ａ（；Ｔ　ＣＴＣ　　丁ＡＣ　　ＡＣＣ　　ＡＴＣ　
　（；Ｔｌｌ；　ＡＣＴＳｅｒ　　Ａｌａ　　ｌｉｅ　
　Ｔｒｐ　ＭＥ丁ＭＥＴ　Ｔｒｐ　　Ｔｙｒ　Ｔｒｐ　
Ｃｌｙ　　Ｐｒｏ　　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　　Ｓｅ
ｒ　　Ｉｌｅ　　Ｖａｌ　　ＳｅｒＣＣＣ　　　ｍ　　
Ａ丁Ａ　　ＣＣＣ　　ＣＴＧ　　ＴｒＡ　　ＣＣＡ　　
ＡＴｒ　　ＴｒＣ　　ｍ　　ＴＧＴ　ＣＴＣ　　Ｔｌｌ
；Ｃ　　Ｃ丁＾　丁ＡＣ　ＡＴＴ　　ＴＡＡＰｒｏ　　
　Ｐｈｅ　　Ｔｉｅ　　Ｐｒｏ　　Ｌｅｕ　　Ｉｚｕ　
　Ｐｒｏ　　Ｉｌｅ　　Ｐｈｅ　　Ｐｈｅ　　Ｃｙｓ　
　Ｌｅｕ　　Ｔｒｐ　　Ｖａｌ　　Ｔｙｒ　　Ｉｌｅ又
はその費５＋，４体ｔ　Ｌ　＜　ｌｉその．！ｉ″？上
許容される塩ＨＩＶ及びｉｌｌ　１３１４肝炎ウイルス
断片から形成される組え融合ポリベブグドの　αて 本介明の融合ポリベプヂドは免疫学的目的で提（ｊ％さ
れる。それはエイズ又はＡＲＣの治療又は予防に関して
新規かつ｛Ｔ川な抗原として機能する。それ（まＨＩＶ
感集又は疾思を予防又は治療するため能動的叉Ｃよ受動
的にかつ接触前又は後に用いられるエイズワクチンの主
成分である。 Ａ，スプライスされた　　ＤＮＡインサートの　゛１周
知かつ憤川的な実務に従い、コード配列は他の配列の桔
合、クローニング，変異請発、有機合成又はそれらの組
合せによりＩ）ＮＡ配列を組立てる原１１１及び尖務に
合ったｈ法で製造される。 １１．組換え発現系における組換え融合ポリペプチドの
定規 外’）ｔｌ：　ｉｉＬｉｉ：子発現細胞を｛１｝ること
は現在では比較的簡１ｉｉ々扶術である。このような細
胞は宿：［とじて作用し、本発明の旧ＸＰの場合には酵
１９、真菌、１こり；細胞、植物細胞又は動物細胞を含
む。これら′４トｉ＋細胞の多くについての発現ベクタ
ーは単離されかつ性買がわかっており，慣用的組換えＤ
ＮＡ技術によって対象の外米ＤＮＡインサートを有する
ベクターの組立てに際し出発物質として用いられる．い
かなるＤＮＡであっても、それがＤＮＡイン→Ｊ一トを
発現させるために用いられる宿主細胞から本米｛！１ら
れないのであれば外米である．外米ＤＮＡインサートは
染色体外ブラスミドで又は宿主細胞染色体への全部らし
くは一部の組込み後に発現させてち、あるいは２以上の
分子形の組合せとして宿］Ｌ細胞に現実にｌ＃７ＥＬて
いてちよい．所望の外米ＤＮＡの発現用の宿主細胞及び
発現ベクターの選択ば、主に宿主細胞の入手性、その培
養の難功度、柄主細胞が発現ベクターの複製をサポート
するか否か及び当業者にとって容易に認識される他のフ
ァクターに依存している。 対象の外来ＤＮＡインサートは、Ｉ｛Ｆｌ’コード能力
のある合成配列、同様のクローン化配列又はその組合せ
を含めた、ＲＦＰをコードするいずれのＤＮＡ配列であ
ってもよい．例えば，完全に組換えＤＮＡ配列でコード
されかつ発現されるＲＦＰ６本発明に包含されるが、（
Ｑし他の技術でｉテ１られる１１　１１１ペブヂドを除
外するわけではない。 １１　Ｖ　Ｉ１産生田の（（核細胞発現系を組立てる上
で石川なベクターは、プロモーター及び／又はオペレー
ターのよう７Ｊ：適切な転写活性化ＤＮＡ配列が機能す
るかたちで結合したＲＦＰ−ＤＮＡ配列を含んでいる．
Ｉｌｌ！聖的特徴としては他に適切なリポソーム結合部
位，終結コドン、エンハンサー，ターミネクー又はレブ
リコン要素がある．これらの付加的特徴は制限エンドヌ
クレアーゼ切断及び結合のようへ相川的スブライシング
技術によって適切な部位でベクターにＩΦ人することが
できる。 １１換え真核細胞発現系の好ましい神類である酵１１発
現系では，組換えタンパク質を発現させるための選択神
として通宮り”ツカロミセス・セレビシアエ（Ｓａｃｃ
ｌ＋ａｒｏｓｙｃ＋：ｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅｌを用
いる。 サツ力口ミセス屈の他の種も組換えｌ｝ＦｆｆＪ允現系
に通しており、それには格別限定されないが力−ルスバ
ーゲンシス（ｃａｒｌｓｂｅｒｇｅｎｓｉｓｌ　．ウバ
ルム（　ｕ　ｖ　ａ　ｒ　ｏ　ｍ　）　．ロウキシイ（
ｒｏｕｘｉｉ）、モンタナス（ｍｏｎＬａｎｕｓｌ、ク
ルイベリ（ｋｌｕｙｖｅｒｉ）、エロンギスボラス（ｅ
ｌｏｎｇｉｓｐｏｒｕｓｌ　．ノルベンシス（　ｎ　ｏ
　ｒ　ｂ　ｌ！　ｎ　ｓ　ｉ　ｓ　ｌ　．オビホルミス
（ｏｖｉ　ｆｏｒｖｉｓｌ及びジアスクＪ−カス（ｄｉ
ａｓｔ．ａｊｉｃｕｓｌがある。 Ｓ．セレビシアエ及び穎似酵４は酵母内で活性ｔｔ２現
系の組存てにイＹ川な周知のプロモーターをイ−１して
いるが、それとしては格別限定されずＧＡＰ．ＧＡＩ．
ＩＯ　．　ＡＤｌ＋２、世５及びアルファ接合因子があ
る． ｒｒ　ｒ：　Ｉ３を発現する組換えＭＨ允現系を紹立て
る上でイ『川なＭＦ上ベクターとしては格別限定されな
いが、シャトルベクター、コスミドブラスミド、キメラ
ブラスミド及び２ミクロン環状プラスミドがら｛ＩＩら
れる配列をイ１したベクターがある。 ＲＦＰをコードする適切なＤＮＡ配列のこれらのベクタ
ーへの神大により原１川的にＩＩＦＰに関して０川む組
換えｆｉｌ　Ｅ｝発現系がｆｆＪられるが、この修飾ベ
クターは形質転換又は他の手段で適切な宿主細胞にｔ小
人される． 組換λ体咄乳動物発現系は本発明のワクチン／鬼疫原川
に旧・Ｖを産牛するちう１つの′ＴＺ段である。一射に
、’｛１’ｉ　ｔ：咄乳動物細胞は細胞培養で効果的に
ク臼一ン化されるのであればいかなる細胞であってちよ
い。しかしながら、咄乳動物発現才ブシニ１ンが臓２：
｛培養物及び形質転換動物をも含むよー）１広’１４さ
れつることＧま、当業古にとって明らかである．．組換
え体咄乳動物系発現シスデムを組立てろ１１的にイ『川
な１？１主咄７Ｌ動物細胞としては格別＋！ＩＪ定され
ないが、ベロ（Ｖｅｒｏｌ細胞、ＮＩｌｆ３Ｔ：ｌ．　
Ｇｌ１３、ＣＯＳ、不ズミＣ１２７又はマウス１４細胞
かある。ＩＩ＋ｌｉ乳動物糸発現ベクターはウイルスベ
クター、Ｓ　Ｖ　４　１１、Ｉｔ　ＩＩ　Ｖもしくは他
のウイルスレブリコンをイ１するブラスミドベクター叉
は動物細胞に関するレブリコンのないベクターをベース
にすることができる。 咄．ｌ′Ｌ動物発現ベクターに関する詐細な説明はグ【
ノーバー．　＋３．Ｍ．　（編集）、”ＤＮ＾クローニ
ング：実際のアプローチー，ＩＩＩ１．、１９８５年、
第Ｉ及び１１巻［（ｉｌｎｖｅｒ．Ｄ．Ｍ．　ｉｃｄ．
）．”ｌ）ＮＡ　Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ　Ｉ’ｒａｃＬｉ
ｃａｌＡｐｐｒｏｄｃｌ＋’゜．目１１−　１！１８５
．Ｖｏｌｓ．　Ｉ　ａｎｄ　ＩＩ　）の論文でみられる
。 組換え昆虫発現系は別の本発明のワクチン／免疫原川の
ＲＦＰを産生ずる実川的手段を提供する。 バキュロウイルスがこの系に関する典型的なベクターで
ある。 旧」）（組換え体融合ポリベブヂド）は、アデニル化、
カルボキシル化，グリコシル化、ヒドロキシル化，メチ
ル化，ホスホリル仕又はミリスチル化のような同様の４
−１機合成ベプヂドにはない付加的なかつ望ましい構造
脩飾をうけていてもよい。 これらの付加された特徴は場合により組換え発現系の適
切な選択によって選択してもよい。他方、１１ＦＰ　ｉ
まイ４機合戊の原理及び実施によって伸長された配列を
有していてもよい。 ２ｌ工之支１ 慣用な免疫学的試験又は実旅に従い免疫学的ビヒクルと
して免疫学的ベクター，キャリア又はアジュバントを抗
原に加えてもよい。 アジュバントは本発明のワクチンの製造に際して加えて
６加えむくでもよい．特に揺変性で粘稠か１ｊ４＋　−
　ｊｔ永１［Ｐアル三二つムゲルの旧のミ１ウバンはヒ
トワクチンにとり典型的な奸ましいアジュバン！・であ
る。例えば、本発明の一態様はビヒクルとしてのミョウ
バンアジュバントと免疫原（抗原）として選択された旧
゛Ｐの懸濁液を用いた患ＩイのＴ−１ゾｊ桜種である。 本発明のワクチン／免疫原は、受動的予防らしくは治療
用に又は詮断試薬として用いるため、免疫グロブリンを
発現しているハイブリドーマ細胞系又は形質転換動物に
投与してもよく及び／又（まボリクローナル抗体を｛ｌ
るためＵＩＪｊな個体及び／又は動物神に投与してもよ
い。 本発明のワクチンはド記表１の抗エイズウイルス剤、免
疫誠節削、抗生物質又はワクチンの｛ｆ効沿と組合せて
１ｌ触＋ｉｉ！及び／又は接触後に有効に投与すること
ができる〔出り１！：マーケット・レター（Ｍａｒｋｅ
ｔ　Ｉ．ｃＬＬｅｒｌ　．　１９８７年１１ｉ１：ｌｔ
用，第２［ｉ−２７貞：ジエネテｆツク・エンジニアリ
ング・ニューズ（Ｇ（！ｎｃＬｉｃ　Ｉ：＋＋ｇｉｎｅ
ｅｒｉ＋＋ｇ　Ｎｃｗｓｌ．　　ｌ！１８１１年Ｉ　Ｉ
Ｉ、第８在，第２３頁］。 Ｌ惣ｔ 八１−７２ ベク１＋＋ノ （１１１・１八Ｓ１・ＩＩＩＮ＋ １／ｉイン？ーノＪ．　１１ン） ｂリノノ （｛：八ＩＲＩｓＹＮ＋ （ぷりｌノノｒ士ノート） ノトベノ （（：γ目ｍ・Ｎ１・） （ｂノノクＩ１１′７） 川１（： ｛ンＩハノンｔノノ｝ ネスｂ−＋グト （１・ｌＩｓｆ：八ＩＩＮ＋・１） （本スネノＶ　酸　：ナトリウム １Ｗ八−２：ｌ イルニノル ｆｆｌＩＮＩＩＩＹＩ．＋ （【ハｌルニチハ ベブｔド１ （イククベ１ｊド　配夕１１） 第１表１ ＾・抗ウイルス剤 Ｘ込五 １１ヶノ （ｌ（１．ｈｉバ（１０） トリトン　バイイリイエンノス （’Ｉ’ｒｉＬｏｎ　　ｌｌｉｏｓｃｉｃｎｃｃＳ１１
ｖり冫クトノ・シＩ ｆｃａｒｒｉｎｇＬｏｎ　Ｌａｂｓ） ンンｒグクス （ＳｙｎＬ＋！ｘｌ 本７７冫→　［Ｉｈ （…＋ｒ『Ｉｌ＋ｉｎｎ−ｌ．ｌＩｌｂ＋（二Ｉｌ１！
１？ストラＡｌｌ （＾８Ｌｒａ　　八Ｉｌｌ 【Ｉ−ノ・ぷーレノ　リント ｆｌｌｌｕ＋ｎｔ：−１’ｏｕｌ＋！ｎｃ　　ＳａｎＬ
ｃｌメレル　ドつ （Ｍｃｒｒｃｌｌ　　Ｄｎｗ） ベニノノ１ラ・ラぷ ｆＰｅｎｉｎｓｕｌａ　Ｌａｂｓｌ 週星延 ＡＩＩＣ．　ＩＩＧＩ− エイズ．＾ＲＣ．ＫＳ エイズ．ＡＩｌＣ ＋Ｉｎ感染， ＣＭＶ網股炎 ＋１１Ｖ感染 レｉ｛知一ス ｆＲＦ．ＴｌｃＵＩ．ＯｓＥｌ （ヌクレオ本ス本ノタンパク質） ！Ｒ ｛ノドブノン：ＡＺＴｌ リ７１１ナン ｉｎｌＦＡＩｌｌＩＴＩＮ） （１冫サ７イシンＬＭ　　４２７１ トリメトレルｔ−ト ｔｌＡＯＯｌ ビンゾール （ＶＩｌｌＡＺＯＩ．Ｅｌ ｛リパビリハ ウェル７＋Ｏ冫 １１１：ｌ．ｌ．ＦＥＲＯＮｌ ｛α−インターフェｌハ ゾビラフクス ｉＺＯＶｒＲＡＸｌ （ｒシ知ビＹ） ７Ｆパンスド・パイラル・リリー予 ｆＡｄｖａｎｃｅｄ　　Ｖｉｒａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈｌ エイズ．ＡＢＣ バロース・ウェルカム ｆｌｌｕｒｒｏｕｇｈｓ　ｌｌｅｌ　ｌｅａｓｅ）エイ
ズ（進行型） 八ＲＣ． 小児エイズ　．κＳ． 無症状＋１１Ｖ． Ｊ口ｎ症１１１Ｖ 神経性合併症 ？ドリ？−ラ本 （八ｄｒｉａ　　ｌ、；ｘｂｓ） 八ｌＩＣ ワーナー・ランバート １１ｌｒｎｃｒ−１．＋ｌ＋ｍｂｃｒＬｌ１’ｃＩ１ 」二５Ｆ製３（ ｌｔｌｅｎｏ　　Ｆｉｎｅ　　Ｃｔｏ＋一ＩｎｄｕｓＬ
ｒｙｌ エイズ．ＡｌＩＣ ビラテフク／ＩＣＮ ｆＶｉｒａＬｅｋ／ＩＣＮＩ エイズ．ＡＲ（：，κＳ バローズ・ウェルカム κＳ．ＨＩＶ．レトロビ７ とｆ井用 バロース　ウェルカム エイズ、ＡＲＣ、 叶０ビｒと併用 Ｉｆ虹寵週通屑 八１１１１１’ （ハｌ〔リミン） ｌノＩリゲノ （八樋１’ｌ．ｌＧｌ・Ｎ） ｛；ス冫ブトＩＩＮ八｝ 抗しトｔｒ　−イノクーフ！０冫 ｂ’Ｌ体 ｍ−　１ｉｌｌ　激１人＋　１’ １ブ１ハノ ｆｌｌｐＪｏｌ１『１１ ７１ｆン１ＲＰリサーチ ｆｌｌｕｐｏｒ＋Ｌ Ｉｌｌ：１４　１１ｅ８ｅａｒｒ．＋＋１１Ｆバノスド
　パイイ士ラピ ］ンｔブｉ （Ａｄｖａｎｃｅｄ　　［ｌｉｏｔｈｃｒａｐｙＣｏｎ
＋：ｅｐＬｓｌ サノドス　グ＋ｉイクス・ 進行エイズ　．ＫＳ 八〇Ｃ．ＩＩＧＬ エイズ．＾ＲＣ．ＫＳ ｆ：Ｉ．２４１ｉ．　７：１Ｍ ｆｆ：Ｉ．２４１ｉ，　７：ｌ８１ Ｉｌｌ・Ｃ；−１ １１＋１；−２ イＡ｝４−ル ＋ｌＭｌｌ’ｌｌｌｌｌｌｌ （ハチルノ戸イｂルパメート） １１．−２ ｛イノクー１Ｉイ１冫−２） ｌｎｓＬｉ　Ｌｕｔｃｌ ？メリカン・シナミド ｛八ｍｃｒｉｃｉｉｎ　　Ｃｙｎａ＊ｉｄ）イ＾レク １ｌｓｒｔ：ｇ１ イムレク メリＪ−クス　インスｊｔｊユート ｆＭｃｒｉｃｕｘ　　ｌｎＳＬｉＬｕＬ＋：１セクス （ＣＬＩＬｕＳ１ エイズ．ＡＲＣ．ＰＧｌ．． ＫＳ エイ叉．八ＩＩＣ．ＰＧＩ．． ＫＳ エイズ，ＡＲＣ エイズ，ＫＳ １Ｌ−２ （インクーロイキン−２） イントロンーＡ １１ＮＴＲＯＮ−＾） （ａ−インク−７１ロン） イソノリノンン ｉ１ｓＯＩ’旧ＮＯＳｒＮ［’．＋ １イノシン１冫ノペックス） メチオニン１冫ケ７？リン ＭＴＩ）−１１Ｅ （ムラミルトリベブチド） 子モペンチン ［’ｌ”ｌｌＹＭＯＰＥＮＴＩＮ　ｒＩＰ−５＋（胸腺
化合物） ｕ７工０ン ｆｌｌＯＦＥＲＯＮｌ （ａ−インターフエＵ冫） 組換え１リスロぶエナン トレキサン ｆｆＲＥＸＡＮ＋ （ナルトレキソン） 本７７冫・ラ・ロンユ・イムＩフクス ｆｌｌｎｆｆｍａｎｎ−Ｌａ　ｆｌｏｃｌｔｅＩｍｍｕ
ｎｅｘｌ Ｊイズ　ＫＳ 冫エリンク・ブロー （Ｓｃｔ＋ｅｒｊｎｇ−ＰｌｏｕｇｈｌＫＳ ニｌ−ポート　フ７−７シｘ−ｊイｂルス（Ｎｃｗｐｏ
ｒＬ ＰｈａｒｖａｃＣｕＬｉｃａｌｓ） ＡＩＩＣ．ＰＧＬ．ＨＩＶ ｌｆｉｌ　ｉ′１陽性患者 ＴＮＩ７ｙ−７ノ１−ティｂルズ ｆｆＮｒ Ｐｈａｒ＋＊ａｃｅｕＬｉｃａｌｓ） エイズ．ＡＲ（： チバガイイー （Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙｌ κＳ オルト・フ７−７ノユーｉイカルズ ）　　（ＯｒＬｌ＋ｏ ＰｂａｒｍａｃｅｕＬｉｃａｌｓｌ ＋１１Ｖ感染 本７７冫・ラ・０ンＪ ＫＳ 才ルト・フ７−？冫ｘ−ｊイカルズ エイズ　及びレトロ ビ１療法に伴う 虫度貧血 ７４ン エイズ．ＡＨＣ ＩＮ＋ （ＩＩ’９　１ｃＩ　？Ｉａ合ｊ文’ｉヒｌ入１　　ｒ
’　１ノＩＩ冫ｉグク （Ｇｃｎ（一ｎＬｃｃ＋＋１ ＡＩＩＣ γ−インターフェロン １井川 ｛；，疲生麹道 ベノクム：ｌ　１１　１１　　　　　　　　　　　　　
　リノイメドｆｌ’ｌ（Ｎｉ八Ｍ：１１１１１１　　　
　　　　　　　　（Ｉ．ｙｐｌｕ＋ｕ＋：ｄｌ　　　　
　　　　　　　　　　　　　ｌ’ｃＰ｛ベノクミンノイ
ｕｎ−ト｝ １〕．ワクチン ＼１・ク　　　　　　　　　　　　　　　　　　　メル
クｆ（ｉ；＋Ｂｌ　　　　　　　　　　　　　　　　　
　（Ｍｒ：ｒｃｋｌ　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　エイス，ＡＩＩＣｌ！Ｉ’ｌ：１５−（ｉｍｐ
　　？ｔｊ合体　　　　１１ｙ７　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　ｘ４１．　ＡＩＩＣ餡称・エイズ
（後天性免疫不全症Ｎｊｔｉ）；ＡＩＨ：　　（エイズ
関辿含｛ｉＨ＋ｉｌ　　：　（；ＭＶ　　（ｓ−イス忠
古ヲ失明叉はタヒロ冫）せる「１和見感染を起こすサイ
トメガｃノウイルス）　　：　ＨＩＶ　　（以前１．Ａ
Ｖ、ＩＩ　Ｔ　Ｉ．Ｖ−…又はＡＩＩＶとして知られた
ヒ１〜免疫不全ウイルス）；ＫＳ（カボジ肉Ｉ−ｌＩ）
　　：　ｌ’ｃｌ’　　（Ｉｂｔｉ胞細胞カリニイ肝炎
、］Ｉ和見感巣）　　；　ＩＩＧＬ　　（持続性全身リ
ンパ節症）（能動的叉番ま受動的に投与される）本発明
のワクＪンと抗Ｊ−イズウイルス剤、免疫グロブリン、
免疫調節剤、抗生物質又はワクチンとの組合せ範四（よ
＋’＋ｉｉ記表のリストに限定されず、原則としてエイ
ズ治療に有用ないかなる医薬組成物との組合せであって
もよいと理解される．本発明のエイズ又はＨＩＶワクチ
ンはＨＩＶ感染又は疾患を予防又は治療するため接触前
又は後に用いられるワクチンであって、免疫原に特異的
な免疫応答を生じさせることができる。ＲＦＰの一部と
しての１１口ｓＡｇの選択で、ｌｌｌＩｓＡｇが右益な
免疫応答を誘導しうるｌＩＦｌＶ、デルタウイルス及び
他のウイルスに起因する疾思の予防にまで本発明の範囲
を拡張しうろことも理解される。 実施例１ １　１１　３　２　２におけるＩＨＩＶ　ＤＮＡ　（７
）クローニング＋１ＢＶデーン［Ｄａｎｅｌ粒子（血清
型ａｄｗ　）をヒト血漿（キャリア）から単ｍ梢製し、
ランダースｌＬａｎｄｅｒｓｌ　ら（ジャーナル・オブ
・パイロロジー，第２３巻、第３６８−　３７６頁、１
９７７年）及びルスカｌｌｌｒｕｓｋａｌら（ジャーナ
ル・オブ・パイロロジー、第２１巻、１９７７年）の方
法に従い、二本鎖１１ＮＡをデーン粒子内で内在ポリメ
ラーゼにより合成させた．　ＤＮＡはＳＯＳ中ブロテイ
ナーゼＫにより切断した後フェノール／クロロホルム及
びエタノール沈降による抽出を行い単離した．　ＩＨＩ
Ｖヶノ八ＩＩＮＡをト（二ｏｌｌ１で切断して３．２ｋ
ｂｐ断片を得、これをｐ　Ｉｔ　ＩＩ　：ｌ　２　２の
１・（二ｏｌｌＩ部位に組込んでクローニングＬ　．　
ｐｌｌｌｌＶ／八ＩＩＷ　−　１を形成した．　ｌｌ［
ｌＶ　ＤＮＡ　（７）存在番よ，　ｌ：ｃｎｌｌ　Ｉ切
断，ニトロセルロース膜へのサザンゾ［ｊット転社及び
［３２ｐｌ４識１特異的オリゴヌクレＡヂドプ［１−ブ
とのハイブリッド形成によって命誌した。 ゛夫施例２ ＩＩ　ｆ：　ｌ　８におけるＩＨＩＶ　　ｒｅ　Ｓ２＋
　Ｓ　ＯＲＦの　立てブラ；ｌ．　ミ｝’　ｐｌｌＢＶ
／ＡＩ）Ｗ　−　１　　（前記実施例ｌ）をｌ（ｃｏｌ
ｔ　Ｉ及びＡｃｃ　Ｉで切断し、０．　８ｋｂｐ断片を
ブレパラｊ゛イブアガロースゲル電気泳動で精製した．
１＋ｒｐ　Ｓ２＋　Ｓオーブン説取り枠（ＯＲＦＩの５
′部分な１１１組−ｉ’７−でするため、ＥｃｏＲ　１
部位からＡＴＧまでさかのぼり．　ｌＯｂｐ非翻訳リー
ダー配列、更にＩｆ　ｉ　ｎ　ｄ　ＩＩＩ部ｈ’ｉ．を
経てＦ．ｃｏＲＩ末端に至るＯＲＦを１ｒ８組立てした
４リゴヌクレオチドを合ｌ＆シた．このオリゴヌクレ−
Ｉ−１−ドの配列は以下である： ＡＡ ＴＧＣＡＧＴＧＧ ｐｒｅ　Ｓ２＋　Ｓ　　ＯＲＦの３′部分を再組立てす
るため、Ａｃｃ　１部位から翻訳ターミネーター、更に
Ｉｆ　ｉ　ｎ　ｄ　ＩＩ１部位を経てｎａｍｌｌ　Ｉ末
端に至るＯＲＦを再組立てした第二のオリゴヌクレオチ
ドを合成した。このオリゴヌクレ才チドの配列は以下で
ある：次いで、０．８ｋｂｐ断片及び２神の合成オリゴ
ヌクレオチド対を予めＥｃｏＲ　Ｉ及びｌｌａｍｌｌ　
Ｉで切断されたｐＵｃ１８に結合させてベクターｐＵｃ
Ｉ８　ｐｒＣ２Ｓ＋　Ｓを得た． 実施例３ ＋１［ＩＶ　ＤＮＡ　（７）変１Ｋ１誘一ｐＵｃＩ８　
ｐｒｅ　２Ｓ＋　ＳのＤＮＡ配列分析により、ｐ　Ｉ＋
　１１ｐｒｅ　ＳＧＡＰ３４７／１９ＴのＤＮＡでコー
ドされたｐｒｅ２ｓ＋ｓ配列とはアミノ酸が違ってくる
２つの塩基置換が起きていることが示された〔パレンズ
エラら、バイオテクノロジー、第３巻、第４号、第　：
ｌＩ７−：ｌ２Ｕ　【’ｉ、ｌ　！１　８　５年ＩＶａ
ｌｃｎｚｕｅｌａ　ｅＬ　ａｌ．．Ｉ１ｉｏ１．ｔ！Ｃ
Ｉ＋ｎｏＩｎ＋ζｙ．　：ｌ（４１．３１７−：１２０
［１９Ｆｌ５１　］。双方の１１　１’ｉ．でに関して
同−のボリベブチドを発現させるため．　ＩＨＩＶ　ｐ
ｒｔ：　Ｓ２＋　Ｓ　＋７）８４６ｂｐ　ＯＲＦ　（７
）塩７Ｊ　６　４　ニ１３いて０に代わり゛１゜（　Ｌ
　（！　１１ではな＜　Ｉ’ｈｅをコード）及び１！１
ノ．Ｌ：１５２に！．５いて八に代わりＣ　（Ｇｌｎで
はなくｌｉ８をコード）となっているこれらのヌクレオ
チドを部イＩ′７．持定変異＝ｈ発により変換した。〔
ゾラーら，ヌクレイック・アシッズ・リサーヂ，第１　
ｆ１　５、第１ｉ　４　８　７　　１ｉ　５　０　０　
Ｉ１、■９８２年（Ｚｏｌｌｃｒ　ｅｔ；＋ｌ．．Ｎｕ
Ｃｌ＋１ｉｃ　　八ｅｉｔＪｓ　　１１ｔ：ｓ＋！；ｔ
ｒｃｌ＋．ｌｏ．６４８７−６５００＋１’ｌ｝１２１
１。次いでＩｉＪ適の組存てをフードするアミノ酸配列
を１＃認し、子めｌｌｉｎｄｌｌｌ又はＥｃｏｌｌｒ及
びＩｆ　ｉ　ｎ　ｄ　ＩＩＩで各ノＩ切断されたｐｌｌ
ｃｌ：ｌ及びｐＵｃｌ９に組込んでクＵｌ　−　ニング
し、ブラスミドｐＵｃｌ：ｌ　ｐｒｅ　Ｓ２＋Ｓ及びｐ
ｌＨ：１９　ｐｒ（！Ｓ２＋　Ｓを｛ｉｌた。本発明は
この配列に１；１４定されず．　ＩＩＮＡがＩＨＩＶ抗
原性を有するポリペブＪドについてコードするあらゆる
配列にまで拡’；Ｉ：されることは、ソ１業者にとって
明らかである。 実施例４ 旧Ｖ　ＩＩＧＩ”３０　１ｌｎｓＡ　　融八ＯＨｒ’　
（７）組立て５′ＥｃｏＲＩ宋端からＩＩ　ｊ　ｎ　ｄ
　ＩＩ１部位、ｌ　ｏｂｐ非翻訳リーダー配列、ＡＴＧ
　Ｌかる後１１ＧＩ１３０　０１１Ｆを経て３′ロａｍ
ｔｌｌ末端に至るＩＩＧＰ３０の３０アミノ酸配列につ
いてフードする一対の１４８ｂｐ才リゴヌクレオチドを
含代した。このオリゴ対の配列は以下である： ＧＴＴＣＧＡＡＴＧＴＴＴＴＧＴＴＴＴＡＣＣＡＣＧＴ
ＡＧＴＴＴＣＣＴＡＴＣＴＣＴＡＴＴＴＴＣＴＧＴＧＧ
ＴＴＣＣＴＣＣＧＧＡＡＴＣＴＧＴＴＣＴＡＴＣＴＣＣ
ＴＴＣＴＣＧＴＴｒＴＧＴＴＴＴＣＡＴＴＣＴＴＣＣＴ
ＡＧＧＧＣＣＣＧ　３Ｌ ＡＡＧＧＡＴＣＣＣＧＧＧＣＣＴＡＧ 次いでこの才リゴ対を予めＥｃｏＲＩ及びＤａｍｌｌ　
Ｉで切断されたｐＵｃ１９に結合させて中間ベクター？
ｌＨ：１９　ｌＩＧｌ’３０を４’ｌた．次いで中間ベ
クターｐｌｌｃ＋９　１１ＧＰ：１０をＡｖｒｌｌ及び
１１ａｍｌｌｌでＵＪ断した．　ＯＲＥの３″末端を１
１■成させるため、（実施例２で示されるような）　　
Ａｃｃｌ部イ１゜ｌから翻訳ターミネークー．　ｔｌｉ
ｎｄｌｌ１部位を経て旧ｍｌ１１東端までコードする一
対の合成オリゴヌクレイＪ−ド１１Ｇ／１８ｂｐ）をｌ
ｌａｍｌｌ１部位でベクターと結含させ、ＩＩ′（線バ
ンドをアガロースゲル電気泳動を行って稍製した．　　
０．６５ｋｂｐ　ＳＬｙｌ−八ｃｃｌＩＩ　Ｉ＋　！｛
八ｌ：　ＩＩＮＡ断片（その供給源は実施例３のｐｕｃ
ｌ９１１　ｒ’　ｉ・Ｓ２＋　Ｓ　）を上記ベクターに
結合させて１１【ｖ１１（＋Ｐ；１０／ｌｌＩｌｓＡｇ
融合叶Ｆを得た．この場合にｓｔｙｒｉｔ　Ａｖｒｌ１
部位と適合する。正確なＤＮＡ配列は経験的に確認され
た。 実ｈｂ例５ ＨＩＶ旧’１３５　ＩＩ１１ｓＡ　　融八〇〇Ｆの　立
て丈施例４のＨＩＶ　１１ＧＩ’：１０／ＨＢｓＡｇベ
クターをＥｃｏｌｌｌ鳩びＳｔｙ＋で明断し．　：ｌ．
：１５ｋｂｐベクターをアガ〔ノースゲル市５ｉ詠動後
に桔製した．５′から３′へ０）舶序でＥｃｏＲＩ末端
から旧ｎｄｌｌ１部位、ｌＯｂｐ非翻訳リーダー配列、
＾ＴＧ　．　ＲＰｌ３５　０肝（１１１１１０血清型の
１１１Ｖ　ｘ　：／　／＜　ローブ配列の塩基９０１　
〜９７３１、ｌｌＩｌｓＡｇの＾ＴＧを経てｓｔｙｒ末
端に至る一対の１２０ｂｐ才リゴヌクレ才チドを合成し
た．この合成オリゴヌクレ才チドの配列は以下である ＭＮＮＴＲＫ Ｓ この才リゴヌクレ才チドを前記のように精製された３．
　３５ｋｂｐ直鎖ロＮＡ断片に結合させ、ＲＰＩ：１５
／１１ＢｓＡｇにツイテコードするＨＩＶ　ｒｌＰｌ３
５／ＨＢｓＡｇと命名されたブラスミドを得た． 実施例６ 旧Ｖ　ＲＰＩ４２　ｌＩ［１ｓＡ　　　”ＤＩＩＦ　（
７）　　立て５′から３′への順序で５’Ｅｃｏｌｌｌ
末端からｔｏｂｐ非翻訳リーダー配列、ＡＴＧ　．　Ｉ
ｌｆ’１４２　０１１ＦｆＭＮ血清ｆｆｌ＋７）ＨＩＶ
　エンヘｏ−ブ配列（７）ｆｉ；ｉＬＳ９１６　〜！８
５１．１１ＢｓＡｇのＡＴＧを経てＳｔｙｌ宋端に至る
一対の１１７ｂｐ才リゴヌクレ才チドを合成した．この
配列は以下である： Ｈ Ｙ Ｎ Ｋ Ｒ Ｋ Ｉ　　　　　ＩＩ　　　　　Ｉ　　　　　Ｇ　　　　　
Ｐ　　　　　Ｇ　　　　　Ｒ　　　　Ａ　　　　　Ｆ　
　　　Ｙ　　　　丁　　　　丁このオリゴマ一対を予め
ＥｃｏｌｌＩ及びｓｔｙ　Ｉで切断された実ｊｒ’ｆｉ
例４のベクターＩ１１Ｖ　１１Ｇ＋’：１０／ｌｌ［ｌ
ｓＡｇにＬ′．含させた．　ｌｌｌ’ｌ４２／Ｉｌｎｓ
Ａｇにツいてコードする得られたブラスミドをｐｌＪｃ
１９　１１１Ｖ　ＲＰｌ４２／ＨＢｓＡｇと命名した． 尖施例７ な　現カセット　八〇＋１２−ＬＡＤＩＩ１の組立て幕
＋ＡＤｌｌ２Δｆｉ７（−１１大腸菌クローニングベク
ターＣま，＾０１１２の抑制可能１（プロモーターがら
，唯一の１１ｉｎｄ川部位に神大された外米遺伝子をＳ
．セレビシアエ内で発現させることができる配列を含ん
でいる［ラッセルら，ジャーナル・才ブ・バイオロジカ
ル・ウミストリー，第２５８巻，第２６７４頁，１９８
：ｔ年（Ｒｕｓｓｅｌｌ　ｅｔ　ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａ
ｌ　ｏｆ　ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，
２５８．２６７４（１９８３））　）　。唯一のｔｌ　
ｉ　ｎ　ｄ　ｍ部位はＭ　Ｄ　ＩＩ　２遺伝子の５′非
翻訳フランキング配列の−１ヌクレオチトと転写ターミ
ネーターとの間に付置する，　ｐＡＤ１１２Δ６７（−
１）をＲａａｌｌ及びＥｃｏＲ　Ｉで切断し，　ＤＮＡ
ポリメラーゼＩのクレノウ断片でフラッシュ末端にし，
＾Ｄ１１２プロモーター及びターミネーター含有の４．
９ｋｂｐＦｌｉ片をプレバラティブアガロースゲル電気
泳動で精製した。ｐＵｃ７をＰｓｔｌて切断し．　Ｔ４
ＤＮ＾ポリメラーゼでフラッシュ末端化し．　４．９ｋ
ｂＰ　ＡＤＩ１２　ｐＩ片に結合させた．得られたブラ
スミトをＳａｌＩで切断し，　ｌｌ．９ｋｂｐ断片をプ
レバラティブアガロースゲル電気泳動で精製した．ｐＢ
Ｒ３２２をｌｌｉｎｄｍで切断し、ＤＮＡポリメラーゼ
ｉのクレノウ断片でフラッシュ末端化し、自己結合させ
た．得られたプラスミドをＳａ目で切断し．　４．９ｋ
ｂｐ　Ｓａｌ　Ｉ　！Ｆｒ片に結合させ、ベクターｐＢ
ｒ３２２Δ旧ｎｄｍ−＾Ｄ１１２を得たくこのベクター
は約１．２５ｋｂｐ　ＡＤＩＩ２プロモーター断片の供
給源として役立つ〉． 定現ベクターｐＧ八Ｐ−ＬＭＤＩＩ−２は既に記載され
てわり［クニスカーンら、ジーン、第４６巻，第１：１
５−１４１　　ｔＴ、１９８６年（Ｋｎｉｓｋｅｒｎ　
ｅＬ　ｔ１１．，Ｇｃｎｅ．４Ｇ．＋：＋５−＋ａＮ＋
：＋８ｃｌｌ］　．約０．：ｌ５０ｋｂｐ　ＡＤＩ＋　
１転写ターミネーター断片の供給源として川いた。ＡＤ
ＩＩ！夕一ミネーター断片をＩｆ　ｉ　ｎ　ｄ　ＩＩＩ
及びＳｐｉｌ１で切断して単離し、アガロースゲル電気
詠動で精製した．それをｒ・めＩｆ　ｉ　ｎ　ｄ　ＩＩ
Ｉ及びＳｐｌｌ１で切断されたｐＯｒ３２２と結合させ
た。｛！）られた中問ベクターはＩＩ　ｉ　ｎ　ｄ　Ｉ
ＩＩ及びＳａｌｔで切断して０．　４４ｋｂｐ片をゲル
精製することにより　八０１１ｌターミネークーを単離
するために用いた。次いでこれを約１．２５ｋｂｐ　ｌ
ｌｉｎｄｌｌｌ　−　Ｓａｌ　ｌＡ　Ｉ１　１＋　２ブ
［１モーター断片と結合させ、得られた約１．７ｋｈｐ
　ｐＡｌｌｌｌ２　−　ＬＡＤＩＩＩカセットをゲル単
離した。カセットをＳａｌｔ切断ｐｌｌｒ：１２２　（
ΔＩＩ　ｉ　ｎ　ｄ　Ｉｌｌ　）ベクター（　＋１ｉｉ
記）と鮎合させて発現ベクターｐ［ｌｒ３２２（ΔＩＩ
　ｉ　ｎ　ｄ　ＩＩＩ　ｌρＡＤＩ１２−Ｌ＾０１１ｌ
を得た．実施例８ 発現ヘク’Ｉ　−　ｐＡＤＩｌ２　−　ＬＡＤＩＩＩ　
ニＳけ’：＋ＨＩＶヘプチトＩＩＩＩｓ＾　　　０１｛
Ｆの　ＵてＩｔｊ記丈施例５及び６て記儀された融合Ｏ
ＲＦをＩｔ　ｉ　ｎ　ｄ　ＩＩｒによる切断でｐｌＪｃ
ベクターがら除大し，アガロースゲル１［！．気泳動て
巾離した。次いてｆｌｉｎｄｍ東端のあるこれらのＤＮ
Ａ　ｌｆｌｉ片を予めＩｆ　ｉ　ｎ　ｄ　ｍで切断され
た実施例７のベクターｐＢｒ：１２２　（Δｌｌｉｎｄ
ｍ）ｐＡＩｌｌ１２　−　ＬＡＤＩＩ＋に結合させ，向
きか止確てあることを確認した。 央施例９ シャトルベクターの　　で 前記火施例８て得られたブラスミドをＳａｌｌて切断し
、適切なＤＮＡ断片をアガロースゲル電気泳動で弔離し
た。次いてＤＮＡ断片をｐｃｔ／ｉの唯一のＳａｌＩ部
｛ぐに結合させて組換え酵母シャトルベクターを得た。 この鉗換えプラスくドを用いてＳ．セレビシアエＣＦ４
２株を形質転換させた（エリスら，ウィルス性肝炎及び
肝疾患、アレンＲ．リス社、：ＪＳ＋１１７９　−　１
　１１８６真．　１９８８年（Ｅｌｌｉｓ　ａｔ　ａｔ
．．Ｖｉｒａｌ　　ＩｌｅｐａＬｉＬｉｓ　　ａｎｄ　
　ｌ．ｉｖｅｒ　　Ｄｉｓｅａｓｅ，　　＾ｆｅｎ　　
Ｒ．Ｉ．ｉＳｓ　ｌｎｃ．．ｐｐ１０７９−１１１８６
．１９８８）　）　．　ｍｌ換え酵母クローンを中離し
、棟結ストックとして確守した（クニスカーンら、ヘバ
トロシー、第８巻、第８２＝８７頁，　　１９８８年（
κｎｉｓｋｃｒｎ　ｃｔ　ａｌ．，ｌＩｃｐａｔｏｌｏ
ｇｙ，８．８２−８７．１９８８＞　）。 ゛丈施例１０ １ＩＶ／！ＩＲｓ＾バ融含タンパク質を発現するよう形
質転された　　の　　　び 前記実施例９のクローンを２％タルコースを炭素源とし
て含イ］ずる合成選択（Ｉｃｕ−）培Ｊ１！（カーティ
、Ｃ．ら，シャーナル・オフ・インディアン・マイクロ
ハイオロシー、第２巻，第＋＋７Ｈ．　１９８７年（Ｃ
ａｒｒｙ　Ｃ．ｅＬ　ａｌ．，．Ｉｏｕｒｎａｌ　ｏｆ
’　ＩｎｄｉａｎＭｉｃｒｏｂｉｏ１ｏｇｙ，２，１１
７（１９８７））　）て増舶させた．＃Ｉ１胞を３０℃
て１６〜２４０シ間Ａ６０１’ｌ約３〜５まて増舶させ
た後，炭Ｊ　源とし゛Ｃ１．６％グルコース含イ１の複
合培地（クニスカーン、Ｐ，ら，ヘバトロジー第８通，
第８ＢＩ，　１９８８年）か入った大きなフラスコに接
挿した（接種サイズ＝ＩＯ％ｖｏｌ／ｖｏｌ）。細胞を
更に４５〜４８１１＄問かけてＡ　ｒ．．ｌｏ＝　１２
．０　〜１１１．０まで増舶させたか、その間にクルコ
ース冫国渇により＾Ｄ１１２ブ【１モーターの抑制が解
除された．所望の抗原の発現は免疫プロットの反応性か
ら確認した．兜疵フ【１ットはｌＩｌｌｓＡｇまたはＨ
ＩＶのどちらかと反＋５ずる抗血Ｖ＋’ｉとＩＪ？開し
た．双方の抗血活はトリーボリベブチ１〜と反らし，そ
の分子サイズはｆＡｌｌされた融１’１０１１Ｆの！ｔ
ｌ訳イ物とすべてのケースにおい゛Ｃ同・てあった。 丈施例１ 吋Ｌ刀１川ハ紋立佐旦遁１ Ａ’ｌ’　ＣＬ細胞を前記実施例１０て記載されたよう
に増舶させて］Ｉ■Ｉ収した。同収細胞を使用峙まて−
７０゜Ｃて棟結した，　ＨＩＶ　／ｌｌＢｓＡｇポリベ
ブチト発現棟結細胞をＭＷし、ｌｏｍＭエチレンジアミ
ン四酢酸、ｌＯｓＭベンザミジンＩＩｃＩ　，　１０μ
ｇ／ｍｌペプスタチンＡ、２５μＭＥ−６４及び１１．
１：ｌトリブシンインヒビターユニ・ント／謹１のアフ
′ロチニンを含イｆしたｐｌ＋７．５の０．１Ｍ　ＩＩ
ＥＰＩ：Ｓ緩衝液に１４懸濁した。破壊直前にフェニル
メチルスルホニルフルオリト（２−プロパノール中２　
１１　＋Ｉ　ｍ　Ｍ　）を最終濃度２ｍＭまで加え、細
胞を２０，　ＩｌｌＨｌｐｓｉ　　（約１４ロＯｋｇ／
ｃａ＋２）で加圧ホモジナイリ′一に：｝トリ通して破
壊し、醇ｒ上細胞溶解物を得た。１−リトンＸ　１００
（１’ｒｉＬｏｎＸ　１００１を濃度０．　２５６％土
で加え、細胞砕片をＩＩＩＥＧ：ｌ３５０及びデキスト
ラン１’ｓｆｌＯ間の２相抽出で除去した．抗原含右１
’ＥＧ上＋１１を同収し、抗原を以前記載されたように
免疫アフｆ二ｊ゛イクロマトグラフィーで単離した〔ワ
ンブラーら、ヂャノック及びラーナー（編集）：゜゜ワ
クチンの現代的アプローチ”、コールド・スプリング・
ハーバー・ニューヨーク・コールド・スプリング・ハー
バー・プレス，第２５１−２５６頁、１！＋＋１４年（
ｉｌａｍｐｌｅｒ　ｃｔ　ａｌ．．Ｉｎ　Ｃｈａｎｏｃ
ｋ　ａｎｄ　Ｌｅｒｎｅｒ（ＬＩｄ８．ｌ：　　　”Ｍ
ｏｄｅｒｎ　　Ａｔ＋ｐｒｎａｃｈｅｓ　　ｔ．ｏ　　
ＶａｃｃｉｎｅｓＣｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ；　ｌＩａｒ
ｂｏｒ．ＮＹ．ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ
Ｐｒｃ８ｓ．ｐｐ．２５１−２５６（＋９８４１１］　
．　ＮＩ１４ＳＵＮをリン酸緩南液に対する透析濾過で
除去した．　ｈｔ製された抗原をインビボ試験のために
水酸化アルミニウムに吸γ１させた。 免疫アフｆニティ梢製産物は銀染色ボリアクリルアミド
ゲルによると単一成分であって、その見かけ上の分子星
は約２８．　０００クルトンであった。適切な抗血消と
の免疫プロットでは、精製された産物が抗ｌＩＢｓＡｇ
及び抗旧Ｖ−　ｇｐｌ６０の双方と結合することを示し
た。１゜Ｘ−　ｔＯロの添加前後における細胞溶解物の
（抗＋ｌＢｓＡｇに対する）免疫プロットでは，約２８
，　０００及び３１，０００ダルトンの２つの主バンド
がほぼ等量で存在することを示した．多数の低分子指バ
ンドも異なる強度で存在している．２相抽出後における
上相の主バンドは２８．　００ロダルトン種である．２
相抽出は上相に移行する２８．　０００ダルトンベブチ
ドに選択的であって、３１．０００ダルトンペブヂドは
大部分の低分子批種と共に下相に移行するようであ゜る
。免疫アフィニティ精製産物は主に２８．　０００ダル
トンペブチド、わずかの３１．０００ダルトン種及び極
少獄の低分子量種からなる．この単離法が３１．０００
８を濃縮するのにも適用可能であることは当業者にとっ
て明らかである．電子顕微鏡観察では．　ＨＢｓＡｇ様
粒子が極めて多数存在しかつ粒子凝集物も極めて顕著で
あることが小された。 実ｈ１！１例ｌ２ １；門：ｌ５　ｆｉｌｌｓ＾　抗、による動物の接　ブ
ロトコールミョウバンを一辿の接神に際しアジュバント
として川いた。接神１５；］はＩｌｌ’ｌ：１５／Ｉｌ
ｎｓＡｇ抗原を最終抗Ｊ！：ｉ　心度ＩＵＯＩ１ｇ／ｍ
ｌとなるよう生理塩水に溶解させ゛Ｃ調製した。＋ｉｉ
ｉ　（１って調製したミョウバン（水酸化アルミニウム
ゲル）を最終レベルアルミニウム５１ＨＩ　ＩＬＩＨ／
ｍｌまで溶液に加えた．抗原を室温で２８．７間か目で
ミョウバンゲルに吸着させた．吸着後、抗Ｌｉ　ｌ！！
持ゲルを生理食塩水で２回洗１？１シ、タンパク宣澗度
１００μｇ／ｍｌと収るよう食塩水に再懸濁した。 アフリカミドリリ′ルはそれぞれミョウバンに吸石され
た１｛１）目５／ｌｌｌｌｓＡｇ抗ｆｉｌ＋００ｕｇ川
量で４回ＩＤ　Ｈｌ．　Ｌた．８ｎ１揖を筋肉内に注９
１シた．各川凱はＩ叉は５か｝’ｌ　ｆｊ＠　Ｌて投写
した（０，４、８及び２８週１１）。動物から２又は４
週間隔で抹血した．而γ＋’Ｔ　”Ｊ’ンブルは次の実
施例で記載される特異的抗体のρｉ一生に関するアッセ
イのために各血液から調製した。 実施例１３ “１１＋１１：１５１　Ｇ　”一　に　　る血　の谷血
１＋’；サンプルを酵素結合イムノアトソーベントアッ
セイ（ＥＬＩＳＡ）で分析した。ボリスチレンマイク【
１タイタープレートを４℃においてウエル５リリン酸緩
衝生理ね１水中ＲＰＩ：Ｉｓ　　（遊離合成ベプチトと
して）　０．５　ｕ−ｇてコートした．次いて各ウエＪ
Ｌ４’０．５　％　ツイ−　：／２０含イＩｐｕｓ（Ｐ
＋＋ｓ　−　Ｔ　）　−ｃ洗ｆｉ＋した。＋１ｌＩＳ−
Ｔて律続昂釈ざれた試験血？＋’７をペブチト含イｆウ
ェルに加え、３６゜Ｃてｌ侍間，吸着されたべブチトと
反応させた，ＰＲＳ−Ｔて洗詐後、アルカリホスファタ
ーゼ複合化ヤギ抗ヒトＩｇＧを試験ウェルに加え，３６
℃で１時問反応させた。次いてウＪ．ルな１１１１８−
Ｔで徹底洗浄した．各ウエルにｐｌ１９．８の０．５ｓ
Ｍ　ｋｌｇｃ１２・６１１．０含イｌ−１０％ジエタノ
ールアミン中の０．１％Ｐ−ニトロフエニルホスフェー
トを入れた。次の反応を室温て３｛｝分間続け，しかる
後：ｌ．ＯＮ　ＮａＯＨの添加で終了させた．試験血清
中の抗体とベプチド基質との相亙作用が大きくムるにつ
れて、ウエルに結合するアルカリホスソアクーゼのκは
多く紅る。ホスファターゼｎｌ！ｒ’ｒはＩ）一二トロ
フェニルホスフェートが波長４１１５ｎ＋ｅの光を吸収
する分子物質へ分解するのを媒介４”る。したがって．
　Ｅｌ、ＩＳＡ反応の終点における４　Ｉｔ　５　ｎ　
ｍ光の吸光度とべブチド結合抗体の量との間にはｕ’Ｃ
　ｂＦ的関係が仔圧する。 Ｉｌｌ’　Ｉ　：ｌ５／ｌｌＩｌｓＡｇ抗原で接種され
たすべてのサル番よ、第２表の抗旧》１３５力価で示さ
れるように１１　１１　１　：Ｉ５ベプヂドと特異的に
結合しつる抗体を産生じた。 実地例ｌ４ ＋１１ｖＦｉ！．染ヤＬを特異的に中和する活性に関す
る血清のう　ヰＦ ウイルス中性活性はロバートソンら、ジャーナル・オ・
ブ・パイ口ロジカル・メソッズ、第２０巻，第１９５−
　２０２頁、１９８８年［１１ｏｂｅｒＬｓｏｎ　ｅｔ
．　ａｌ．．．ｌｕａｒｎａｌ　ｏｆ　Ｖｉｒｏｌｏｇ
ｉｒ．ａｌ　Ｍｅｔｈｏｄｓ．　２０．　１９５−２０
２ｆ１！１８８１１に記載されたアッセイにより調べた
．その）′ツセｒは試験血清の特異的＋１１Ｖ中和活性
を測定する．本アッセイは，′ヒトＴリンパ球系のＭ’
『−４細胞が容易にＨＩＶに感染しやすく、ウイルス複
製期間後に感染結果として死ぬという観察にノよづいて
いる。 試験血清をアッセイ前に５６℃で６０分間処理した。こ
の処即は１１］ｖ複製の非特異的肌害剤を排除するのに
必要である。ｎｐｕｉ−　１［１４０細胞培地で連続希
釈された加処処理血清を標準感染量のＨＩＶと混合した
。アッセイ培養物中のすべてのＭＴ−４細胞を７目間後
に殺すのに必要最少量のウイルスを含イｆするように用
量をアッセイ前に決定した。血ｉ青・ウイルス混合物を
３７℃でｌＢｙ間相互作用させた。次いでそれをｌＯ％
牛胎児血清袖充ＲＰＭＩ−　１６４０増殖培地に懸濁し
たＩ．ＯＸｌＯ’のＭＴ−４細胞に加えた。培養物を５
％ＣＯ２雰囲気下３７℃で７目間インキユベートした． インキュベート終了特に、代謝性色素Ｄロ１゛を各培養
物に加えた。この色素は視覚検査上の色が黄已である．
生細胞の佇在下で、その色素は青色を生じる分子種に代
謝変換される．中和されたＨＩＶはＣ的Ｗ１゜−４細胞
内で復製しえず、したがって細胞を殺さむい。このため
，陽性中和は代謝性色素の添加後におけるｊ＋ｔ色の発
色によって評価される。 １１１’ｌ：１５／ｌｌｌｌｓ八］：抗原で接種された
すべてのサル（，Ｌ，第２人の中和活性力価で示される
ように特異的＋１１Ｖ感集中和話性を示した． １；３ 星ヱ去 処隻１ 通Ｚｋ』ｋ立Ｌ 第２表の脚１．． 谷動物にミコウバン吸着抗原１００　ｕｇ／川徂を１ｇ
神した。谷川１１１を０．４、８及び２８週目に筋肉内
拉１ｊ−シた。 ２マイク［Ｊタイタープレート上の延質コーティングと
してＩ＋　１１　１　３５合成ペブチドを用いる終点ｌ
ｊｌ．ｌｓＡ力１曲の逆数 Ｊ終，Ｉｌｉ．ウーｆルス中和力価の逆数＋ｊｉｒ記明
細１ｌ｝は説明目的の実施例と共に本発明の原即につい
て示しているが，本発明の実施にＣま特＋：’ｒ　＋：
ｌ’ｌ求の範囲及びその相′．′１範］川内に属するよ
うなすべての通＝Ｊ７，のバリエーション、改変又はｎ
正を旬含すると理解されるであろう。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ＲＰ１３５／ＨＢｓＡｇをコードする遺伝子。 ２、ＲＰ１３５／ＨＢｓＡｇをコードする遺伝子を含ん
   だベクター。 ３、ＲＰ１３５／ＨＢｓＡｇ合成用の真核細胞発現系。 ４、ＲＰ１３５／ＨＢｓＡｇ合成用の酵母発現系。 ５、ＲＰ１３５／ＨＢｓＡｇタンパク質又はその薬学上
   許容される塩。 ６、ＲＰ１３５／ＨＢｓＡｇタンパク質を含んだエイズ
   ワクチンであって、 上記タンパク質が適切な免疫学的アジュバ ント、キャリア又はベクターと混合され、上記ワクチン
   がＨＩＶ感染又は疾患を予防又は治療するため接触前後
   に用いられ、上記ワクチンが特異的ＨＩＶ中和抗体を誘
   導しうることを特徴とするワクチン。 ７、ＲＰ１３５／ＨＢｓＡｇタンパク質を含んだエイズ
   及び肝炎に対する同時保護用のワクチンであって、 上記タンパク質が適切な免疫学的アジュバ ント、キャリア又はベクターと混合され、上記ワクチン
   がＨＩＶ感染又は疾患並びにデルタウィルスに起因する
   肝炎又は疾患を予防又は治療するため接触前後に用いら
   れ、上記ワクチンが特異的ＨＩＶ中和抗体を誘導しうる
   ことを特徴とするワクチン。 ８、エイズ、ＡＲＣ、肝炎又はそれらの組合せに対する
   予防接種方法であって、 ＲＰ１３５／ＨＢｓＡｇタンパク質を含んだ医薬組成物
   の有効量を投与し、このタンパク質が適切な免疫学的ア
   ジュバントと混合されていることを特徴とする方法。 ９、エイズ、ＡＲＣ、肝炎又はそれらの組合せに対する
   受動的予防用に適した抗体産生の免疫原として有用なＲ
   Ｐ１３５／ＨＢｓＡｇタンパク質含有医薬組成物。 １０、ＲＰ１３５／ＨＢｓＡｇタンパク質又はその特異
   的抗体を含んだ診断試薬。 １１、ＲＰ１４２／ＨＢｓＡｇをコードする遺伝子。 １２、ＲＰ１４２／ＨＢｓＡｇをコードする遺伝子を含
   んだベクター。 １３、ＲＰ１４２／ＨＢｓＡｇ合成用の真核細胞発現系
   。 １４、ＲＰ１４２／ＨＢｓＡｇ合成用の酵母発現系。 １５、ＲＰ１４２／ＨＢｓＡｇタンパク質又はその薬学
   上許容される塩。 １６、ＲＰ１４２／ＨＢｓＡｇタンパク質を含んだエイ
   ズワクチンであって、 上記タンパク質が適切な免疫学的アジュバ ント、キャリア又はベクターと混合され、上記ワクチン
   がＨＩＶ感染又は疾患を予防又は治療するため接触前後
   に用いられ、上記ワクチンが特異的ＨＩＶ中和抗体を誘
   導しうることを特徴とするワクチン。 １７、ＲＰ１４２／ＨＢｓＡｇタンパク質を含んだエイ
   ズ及び肝炎に対する同時保護用のワクチンであって、 上記タンパク質が適切な免疫学的アジュバ ント、キャリア又はベクターと混合され、上記ワクチン
   がＨＩＶ感染又は疾患並びにデルタウイルスに起因する
   肝炎又は疾患を予防又は治療するため接触前後に用いら
   れ、上記ワクチンが特異的ＨＩＶ中和抗体を誘導しうる
   ことを特徴とするワクチン。 １８、エイズ、ＡＲＣ、肝炎又はそれらの組合せに対す
   る予防接種方法であって、 ＲＰ１４２／ＨＢｓＡｇタンパク質を含んだ医薬組成物
   の有効量を投与し、このタンパク質が適切な免疫学的ア
   ジュバントと混合されていることを特徴とする方法。 １９、エイズ、ＡＲＣ、肝炎又はそれらの組合せに対す
   る受動的予防用に適した抗体産生の免疫原として有用な
   ＲＰ１４２／ＨＢｓＡｇタンパク質含有医薬組成物。 ２０、ＲＰ１４２／ＨＢｓＡｇタンパク質又はその特異
   的抗体を含んだ診断試薬。