JPH03155790A - 放線菌発現系転写促進配列 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、放線菌発現系転写促進配列に関する。

更に詳細には、本発明は、ストレプトミセス　カカオイ
（Ｓｔｒａｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｃａｃａｏｉ）のベータ
　−ラクタマーゼ遺伝子（ｂｌａ）の５°領域にあるＳ
ｐｈＩ及びＦ’ｖｕｌｌ切断部位の間に含まれる放線菌
発現系転写促進配列に関する。

（従来の技術及び発明が解決しようとする課題）組換Ｄ
ＮＡ技術を応用して生理活性蛋白質の商業生産が行なわ
れるようになったことに伴い、その生産効率を上げるた
めの転写促進配列が注目されている。遺伝子の転写促進
配列は、その近傍に存在するプロモーターからの転写効
率を促進する働きを有しており、適当なベクターに組込
む場合、プロモーターからの距離、配列の相対位置およ
び連結方向にあまり影響を受けない。しかし、宿主細胞
に対する親和性が異なることから導入する宿主細胞の種
により転写促進効率も異なる。

一般に、転写促進配列はその超厚宿主において最も強力
に活性を示すが、異なる種に組込まれた場合でも高い活
性を示すことが知られている。ストシブ超厚１セス属起
原の転写促進配列としては、従来ストレプトミセス　カ
カオイのベータ　−ラクタマーゼ遺伝子の上流領域にあ
るＳ　ｐ　ｈ　Ｉ　−Ｓ　ｐｈＩ切断部位（１２，４ｋ
ｂ）中に存在することが報告されている「ジャーナル・
オプ・ジェネラル・マイクロバイオロジー（Ｊ、Ｇｅｎ
、Ｍｌｅｒｏｂｉｏｌ、）。

１３３．２９１５（１９Ｂ？）］。本発明者等が調べた
ところ、この配列はベーターラクタマーゼの発現量を数
倍上昇させたが、転写促進配列として実用化するには大
型で取り扱いが容易でない。

本発明者等は、上記公知の配列とは別に、その下流に存
在するＳｐｈＩ−ＢｃｌＩの４．４ｋｂ断片中に強力な
転写促進配列を見出し、本発明を完成した。

゛（課題を解決するための手段） すなわち、本発明は、ストレプトミセス　ヵヵオイのベ
ーターラクタマーゼ遺伝子の５°領域におけるＳｐｈＩ
及び構造遺伝子中に存在するＰｖｕｌＩ切断部位の間に
ある放線菌発現転写促進配列である。

本発明の転写促進配列は、その組込まれた位置および方
向性とは無関係にベータ　−ラクタマーゼ遺伝子の発現
を５０倍増大させる。また、本発明の転写促進配列は、
如何なるストレプトミセス属プロモーターの活性化にも
使用することができる。本発明の転写促進配列を組込む
ことにより遺伝子の発現効率の上昇が期待できる遺伝子
としては、ベータ　−ラクタマーゼ以外に、ヒト成長ホ
ルモン、ヒト成長ホルモン放出因子、ヒトインシュリン
Ａ鎖、ヒトインシュリンＢ１１１、ヒトプロインシュリ
ン、ヒトプレプロインシュリン、及ヒ非−ヒトインター
フェロン、ウィルス抗原、ウロキナーゼ、組織プラスミ
ノーゲン活性化因子、インターロイキンＩＩ等、あらゆ
るペプチドホルモン、酵素、あるいは生理活性ポリペプ
チドをコードする遺伝子を挙げることができる。

本発明の転写促進配列は、ストレプトミセス属の広範囲
の宿主細胞に適用することができる。好ましい宿主細胞
としては、ストレプトミセス属に属する非制限菌株であ
り、例えば、ストレプトミセス　リビダンス　（Ｓ、１
ｉｖｉｄａｎｓ）　Ｔ　Ｋ　２４、ストレプ）！−１＝
７．５へ：／ドＬ／　　（Ｓ、１ａｖｅｎｄｕｌａｅ）
　Ｊ　ＣＭ４９８５等を挙げることができる。非制限菌
株の宿主細胞は、制限酵素を欠くため、形質転換の際、
プラスミドＤＮＡを切断したり、劣化させることがない
。これらの非制限菌株は、例えば、マイクロバイオロジ
カル　レビューズ（Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ−ｏｇ［ｅａｌ
　Ｒｅｖｉｅｗｓ）　４４．２０６．（１９８Ｇ）に記
載の手法により、ストレプトミセス属の菌株から、容易
に選択、分離することができる。

（製造方法） 本発明の転写促進配列は、ストレプトミセスカカオイ　
の遺伝子より得られ、例えば、制限酵素５ｐｈｌおよび
ＰｖｕＩＩによりＤＮＡを切断した断片より取得できる
。さらに詳細に説明すると、本発明の転写促進配列は、
ストレプトミセスカカオイ　の全ＤＮＡを分離し、制限
酵素ＳｐｈＩ、ＰｖｕＩＩにより３．６ｋｂ断片を形成
し、該断片を放線菌ベクターに挿入し、ベータ　−ラク
タマーゼ活性の上昇を示す形質転換体を単離し、該形質
転換体のベクターＤＮＡから転写促進配列を単離するこ
とによって得ることができる。

次に実施例により本発明の転写促進配列およびその製造
法をさらに具体的に説明する。

実施例　１　活性化ＤＮＡ断片の分離 （１）活性化ＤＮＡ断片を含むベータ　−ラクタマーゼ
遺伝子の分離及び放線菌ベクターへの挿入ストレプトミ
セス　カカオイ　ＪＣＭ４５３２Ｔ株（＝ＫＣＣＳＯ’
３５２：理化学研究所・微生物系統保存施設（Ｊａｐａ
ｎ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ　ｏｆＭｉｃｒｏｏｒｇａｎ
ｉｓｉｓ）より入手可能）の全ＤＮＡをホップウッド（
Ｈｏｐｗｏｏｄ　、　Ｄ　、　Ａ　、　）等の方法（１
９８５、ジェネティック・マニピユレーシヨン・オブ・
ストレプトミセス、ア・ラボラトリ−・マニュアル、ノ
ルウィッチ、ニー・ケー　ジジン・イネス・ファウンデ
ーション）　（１９８５，Ｇｅｎｅｔｉｃ　Ｍａｎｉｐ
ｕｌａ−ｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ、
　Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ。

Ｎｏｒｗｉｃｈ、　ＵＫ：　Ｊｏｈｎ　Ｉｎｎｅｓ　Ｆ
ｏｕｎｄａｔｉｏｎ、）に従って抽出し、常法にしたが
って、制限酵素５ｐｈｌ（宜酒造）で完全に切断し、次
に制限酵素Ｂｃｌ■（寅酒造）にて完全に切断したＤＮ
Ａ断片を得た。一方、放線菌ベクターｐ　Ｉ　Ｊ７０２
　（ＡＴＣＣ３５２８７）を制限酵素５ｐｈｌ及び制限
酵素ＢｇｌｌＩ（寅酒造）にて完全に切断した後、マニ
アティス　（Ｍａｎｉａｔｉｓ、Ｊ、）等の方法（１９
８２、モレキュラー・クローニング、ア・ラボラトリ−
・マニユアル、コールドスプリングハーバ−・ラボラト
リ−、コールドスプリングハーバ−ニューヨーク）　　
（１９Ｂ２．　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　ａｔｏｎｉｎｇ：
　Ａｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ、　Ｃｏ１ｄ
　Ｓｐｒｉｎｇ　ＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙ、
　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ）　　に従って、アルカリホスファ
ターゼ（Ａｌｋａｒｉｎｅ　Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ）
　（宜酒造）処理を行なった。この様に処理したベクタ
ーＤＮＡ及びストレプトミセス　カカオイ　ＤＮＡ断片
を混合し、Ｔ４リガーゼ（Ｔ４１ｉｇａｓｅ）　（ベー
リンガーーマンハイム）　によってこれらを結合させ（
方法はマニアティス等による）、ストレプトミセスカカ
オイ　ＤＮＡ断片を組込んだｐｌＪ７０２ｇ？導体ＤＮ
Ａを得た。

（２）ｐｌＪ７０２誘導体のストレプトミセス　リビダ
ンスへの導入 非制限菌株　ストレプトミセス　リビダンスＴＫ２４よ
り、プロトプラストを調製し、これに（１）で示したス
トレプトミセス　カカオイＤＮＡ断片を含むｐ　Ｉ　Ｊ
　７０２を導入する方法は、前述のホ、プウッド等の方
法に従って行なった。プロトプラストからの再生はＲ２
ＹＥ培地（同じ（ホップウッド等の方法中に記載）を用
い、ｐ　Ｉｓ　７０２由来のＤＮＡを含むクローンは、
抗生物質チオストレプトンを添加した寒天培地上での生
育によって耐性と判断し、選択した。これらのうち、外
来ＤＮＡを含むクローンは同培地においてメラニン色素
産生の抑制された株を選択した。

（３）ベータ　−ラクタマーゼ産生株の選択１００μＭ
　　ニトロセフイン（Ｎｉｔｒｏｃｅｆ［ｎ）　（ＢＢ
Ｌ　　マイクロバイオロジー・システムス（ＢＢＬＭ！
ｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　Ｓｙｓｔｅｍｓ））溶液を、Ｒ
２ＹＥ寒天培地上に生育したコロニーにかけ、コロニー
及びその周辺が赤色を呈する株をベータ　−ラクタマー
ゼ陽性株として選択した。

（４）活性化ＤＮＡ配列のサブクローニングこの様にし
てクローニングされた株ＣＭＡ　３８より、常法により
、プラスミドＤＮＡｐＭｃＰ３８を抽出し、制限酵素Ｂ
ｃｌＩ　　にて切断し、べ−ターラクタマーゼ遺伝子を
含む５．８ｋｂのＤＮＡ断片を、プラスミドｐＵｃ１８
（＊酒造）のＢ　ａ　ｍ　ＨＩ切断部位に挿入し、プラ
スミドｐＭＣＰ１２６を得た。ｐＭｃＰ３８に含まれる
ストレプトミセス　カカオイ　ベーターラクタマーゼ遺
伝子及びその上流ＤＮＡ部分の様々な大きさの欠失変異
体を分離するために、次のような方法を用い、ｐＭｃＰ
　ｉ　４１、ｐＭｃＰ１４２、ｐＭＣＰ１４３、ｐＭｃ
Ｐ１４４、ｐＭｃＰ　１４５、ｐＭＣＰ　１４６を得た
。プラスミドｐＭｃＰ１２６を制限酵素Ｘｂａｌ及び制
限酵素ＰｓｔＩにて切断し、大腸菌エキソヌクレアーゼ
ＩＩＩ　（寅酒造）及びマング・ビーン・ヌクレアーゼ
（Ｍｕｎｇ　ＢｅａｎＮｕｃｌｅａｓｅ）　（寅酒造）
にて処理して得られた短くなったプラスミド断片を、大
腸菌ＤＮＡポリメラーゼＩのクレノーフラグメント　（
Ｋｌｅｎｏｗ　ｆｒａｇｍｅｎｔｏｆ　ＤＮＡ　ｐｏｌ
ｙｍｅｒａｓｅ　ｒ）　　（ベーリンガーーマンノ＼イ
ム）にて処理後、Ｔ４ＤＮＡリガーゼにて結合させた。

得られたプラスミドＤＮＡ群を制限酵素ＨｉｎｄｌｌＩ
及び５ａｃｌにて切断し、同じ（Ｈｉｎｄｌｌｌ及び５
ａｃＩにて切断したベクターｐｌＪ４８６（ジェー・エ
ム・ワード等、１９８６、モレキュラー・アンド−・ジ
ェネラル・ジェネティックス、２０３．２４６８　）　
（Ｊ、Ｍ、Ｙａｒｄ　ｅｔａｌ、、１９８６．　Ｍｏ１
．Ｇｅｎ、Ｇｅｎｅｔ、、２０３．ｐ４６Ｂ＞に挿入し
、ストレプトミセス　リビダンス　に形質転換によって
導入した。

得られたプラスミドはそれぞれ、ベータ　−ラクタマー
ゼ構造遺伝子を含む　５．１．４．６．４．１．４．０
．３．５及び２．５ｋｂのＨｉｎｄＩＩＩ−９ａｃＩ断
片を含んでおり、これらを　Ｉ）ＭＣＰ　１４１、ｐＭ
ｃＦ’１４２、　ｐＭＣＰ１４３、　ｐＭｃＰ１４４、
ｐＭＣＰ１４５、ｐＭｃＰｌ　４６と命名した。これら
のプラスミドは、ｐＩＪ４８６由来のｆｄターミネータ
−の存在により、ベクターからの転写活性に影響されず
、純粋に挿入されたストレプトミセス　カカオイＤＮＡ
の活性が測定できる。ベータ　−ラクタマーゼ活性発現
に対してのベクターの影響をなくすためのターミネータ
−は、必要であれば、ｆｄファージ（ＡＴＣＣ１５６６
９−Ｂ２）より制限酵素ＨｉｎｄｌＩＩ処理によって、
３５２ｂｐのＤＮＡプラグメントとして切りだすことが
できる。

（５）ベーク　−ラクタマーゼ構造遺伝子のみをもつプ
ラスミド　ｐＭｃＰ１２２の作製 ベータ　−ラクタ→−ゼ構造遺伝子は制限酵素Ｎｃｏｌ
−Ｂａｌｌ領域に存在し、このＤＮＡ断片をもつプラス
ミドｐ　ＤＭＬ　５３について以前報告されている（１
９８７、ジャーナル・オブ・ジェネラル・マイクロバイ
オロジー、１３３、ｐ２９１５　）　（１９Ｂ？、　Ｊ
、Ｇｅｎｅｒａｌ、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、、１３３゜ｐ
２９１５）。これよりわずかに大きいＤＮＡ断片を有す
るｐＭＣＰ３９　（同上文献参照）を制限酵素Ｂｇ１１
１にて切断し、ｐＩＪ４８６プラスミド由来のｆｄター
ミネータ−断片をＴ４リガーゼを用いて連結し、ｐＭＣ
Ｐ１２２を作製した。このプラスミドは挿入されたスト
レプトミセスカカオイＤＮＡの直前にターミネータ−が
存在するため、ベクターからの転写に影響されず、純粋
に挿入されたＤＮＡの活性が測定できる。

（６）活性化配列の領域 ｐＭｃＰ１７２、ｐＭｃＰ１７３、ｐＭＣＰ　１７４の
作製 プラスミド　ＰＭＣＰ　１４１のベータ　−ラクタマー
ゼ遺伝子の上流約６００ｂｐに存在するＰｖｕｌＩ切断
部位１、同じく上流約３００ｂｐに存在するＰｖｕｌｆ
切断部位２、又は、ベーターラクタマーゼ構造遺伝子内
に存在するＰｖｕＩＩ切断部位３にそれぞれ８ｂｐより
なるＢａｍＨＩリンカ−（５−ＣＧＧＡＴＣＣＧ−３°
、１に酒造）を挿入し、各々　ｐＭｃｐ１７２、ｐＭｃ
Ｐ１７３、ｐＭＣＰ１７４と命名した。

（７）ベーターラクタマーゼ構造遺伝子プロモーター領
域の構造とベータ　−ラクタマーゼ活性 Ｓ１マツピング、ブライマー伸長法の実験で、ベーター
ラクタマーゼ遺伝子の転写は、Ｎｃ。

１部位より約１１０ｂｐ下流の°Ｃ”より開始すること
が判明した（東２図）。従って、ｍＲＮＡ開始点より上
流約１１０ｂｐを含むプラスミド（ｐＤＭＬ５３）及び
上流約３００ｂｐを含むプラスミド（ｐＭｃＰ１２２）
をもつクローンのベータ　−ラクタマーゼ活性は通常の
転写−翻訳系に従い、通常の量だけ発現されているもの
と考えられる。プロモーター配列、リポソーム結合部位
の配列は、通常の放線菌遺伝子での配列と類似しており
、このことを支持している（箪２図）。

（８）活性化配列の効果 作製したクローンのベータ　−ラクタマーゼ活性を小河
原等の方法（１９７５、アンティマイクロバイアル・エ
ージェンッ・ケモセラピー　８、ｐ　４０２　）　（Ｈ
，ｏｇａｗａｒａ　ｅｔ　ａｌ、、　１９７５゜Ａｎｔ
ｉｍｉｃｒｏｂ、Ａｇｅｎｔｓ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ、
、　Ｅｌ、ｐ４０２）に従って測定した。活性は、ベン
ジルペニシリンを基質とし、３０°Ｃにおいて、１分間
に１μｍｏｌのベンジルペニシリンを加水分解する活性
を１ユニツトとした。

ベータ　−ラクタマーゼ構造遺伝子より　上流のＤＮＡ
配列をあまりもたないｐＤＭＬ５３（上流０．１ｋｂ）
　、ｐＭｃＰ１２２　（上流０．３ｋｂ）、ｐＭｃｐ１
４６　（上流０，６ｋｂ）ではベーターラクタマーゼ活
性は１ユニツト／　ｍ　１であったが、このさらに上流
を含むプラスミドｐＭｃＴ’１４１（上流２．７ｋｂ）
、ｐＭｃＰ１４２　（、上流２．５ｋｂ）は、活性を約
５０倍（５０ユニツト／　ｍ　１　）上昇させた・（第
３図）。　しかし、上流２、Ｏｋｂまたはこれより短い
ＤＮＡ断片をもつプラスミドｐＭｃＰ　１４３　（上流
２．０ｋｂ）、１）ＭＣＰ１４４（上流１．９ｋｂ）　
、ｐＭｃＰ１４５（上流１．４ｋｂ）では、活性の上昇
は非常に少なかった（４ユニツト／ｍ１）。この活性化
にこの領域の遺伝子ｂ５必要であることは、り６）にて
作製したｐＭｃＰ１７２、ｐＭｃＰ１７３及びｐＭｃＰ
１７４など、領域内にｓｂｐからなるＢａｍ）（Ｉリン
カ−を挿入したプラスミドをもつ株では、ベータ　−ラ
クタマーゼ活性が、もとのプラスミドｐＭＣＡ　１４１
をもつ株の約１１５０（１ユニツト／　ｍ　１　）に低
下し、全く活性化を示さないことによっても支持される
（第３図）。

実施例　２　　活性化配列による転写活性の促進ドツト
・プロット実験は、ワード（Ｙａｒｄ、Ｊ、Ｍ、）等の
方法により行ない、ＤＮＡプローブとしては１、ｌｋｂ
のＳｐｌＩ−Ｍｌｕｌ断片（第１図（ａ）斜線部分）を
用いた。その結果、これらのクローンでは、ベーターラ
クタマーゼ産生の活性化に伴って、ｍＲＮＡの量が増加
していることが示され、この活性化は転写レベルで起っ
ていることが判明した（第４図）。

実施例　３　　別のレプリコンに存在する活性化配列に
よるベータ　−ラクタマーゼ遺伝子の活性化 （１）活性化配列を含み、完全なベータ　−ラクタマー
ゼ構造遺伝子を含まないプラスミドｐＭＣＰ１７５、ｐ
ＭｃＰ１７６、ｐＭＣＰ　１７７の作製 ネオマイシン耐性をフードするプラスミドｐＩＪ３８５
（ホップウッド等、前出参照）の９５０ｂｐのＳａｃ　
Ｉ断片を調製し、プラスミドｐＳＬ１　（ＪＣＭ４９８
５−ＫＣＣ３−０９８５より常法により分離可能）　（
１９８０，ＦＥＭＳ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、Ｌｅｔｔ９
、　ｐＨ，１９８？、　Ｐｌａｓｍｉｄ、　１７．　ｐ
１５７）のＳａｃ　１切断部位に挿入し、ｐＭｃＰ５０
を作製した。

このｐＭｃＰ５０を制限酵素Ｍｌｕｌにて切断し、１５
５０ｂｐの断片をプラスミドｐＭｃＰ２８（Ｎａｋａｎ
ｏ　ａｔ　ａｌ、　Ｊ、Ａｎｔｉｂｉｏｔ、、　４２：
　４１３−４２２．）のＭｌｕｌ切断部位に・挿入して
、ｐＭｃＰ１７０を作製シた。ｐｃＭＰ１７０のカナマ
イシン耐性遺伝子内にあるＢａｍＨＩ切断部位にｐＭｃ
Ｐ　１７２より調製したベーターラクタマーゼ構造遺伝
子の上流部分を含む　２．ｌｋｂ　　ＢｇｌＩＩ−Ｐｖ
ｕＩＩ−１領域断片を、あらかじめＰｖｕＩＩ−１部位
に挿入したＢ　ａ　ｍ　ＨＩリンカ−を利用して単離し
たＢｇｌｌｌ−ＢａｍＨＩ断片として挿入し、ＢａｍＨ
Ｉ切断部位をその中に持つカナマイシン耐性遺伝子が不
活化したプラスミドｐＭＣＰ　１７５を得たく第５図）
。　　同様に、２．４ｋｂのＢｇｌ　Ｉ　Ｉ−ＰｖｕＩ
　Ｉ−２領域断片を挿入したプラスミドとしてｐＭｃＰ
１７６、また、３．６ｋｂＢｇ　ｌ　Ｉ　Ｉ−Ｐｖｕ　
ｒ　１３領域断片を挿入したプラスミドとしてｐＭｃＰ
１７７を作製した（第５図）。

（２）転写活性化配列のトランスな位置での活性はぼベ
ータ　−ラクタマーゼ構造遺伝子のみを含むプラスミド
　ｐＭＣＰ　１２２を持つ株に、これと細胞内で共存が
可能であり、転写活性化配列又はその一部を含むプラス
ミドｐＭｃＰ１７５、ｐＭｃＰ１７６　　又はｐＭＣＰ
　１７７を形質転換によって導入し、そのベーターラク
タマーゼ活性を測定した。第５図に示すように、ｐＭＣ
Ｐ１２２のみをもつ株に比べて、Ｉ）ＭＣＰ１７７を共
存させた株では１７倍にも活性が増大したが、これより
小さな断片を挿入したｐＭｃＦ’１７６、ｐＭｃＰ　１
７５では活性の増大はあまり起らなかった。よって、こ
の領域による活性化において、少なくとも一つの因子は
トランスに作用することが判った。この際、プラスミド
間で組換えを起していないことはハイブリダイゼーシ目
ンにより確認した。

（発明の効果） 以上述べたことから明らかなように、本発明の転写促進
配列は、ストレプトミセスカカオイのベータ　−ラクタ
マーゼ遺伝子から本発明者等が初めて単離したＤＮＡ配
列であって、従来公知の促進配列に比較して小型でしか
も転写活性が著しく強力である。ストレプトミセス属微
生物は、実質上非病原性で、内・毒素を産生じないこと
に加えて、当該技術分野において広範囲に研究利用され
ていることから、この微生物によるクローニングおよび
形質転換は実用上極めて有益である。ストレプトミセス
属に属する微生物に適用できる強力な転写促進配列が提
供できたことは、この微生物を商業的に活用できる点に
おいて特に重要である。

【図面の簡単な説明】

第１図　プラスミドｐ　ＤＭＬ　５３及びｐＭＣＰ　３
８の制限酵素地図 第２図　ベータ　−ラクタマーゼ遺伝子のプロモーター
付近の塩基配列 第３図　転写促進配列を含む種々の領域をもつプラスミ
ド及びプラスミドを保持するクローンのベータ　−ラク
タマーゼ生産性 各種クローンのドツトプロットハイブリダイゼーション
結果 （左）　Ｔｈ１ｏ−ｒ：ｔｓｒ遺伝子を含むｐＩＪ７０
２からの１．１ｋｂＢｃｌｌ 断片をプローブとしたコントロール （右）　ｂｅｔａ”ｌａｃ：照面のＰｒ、３　（Ｓｐｈ
ｌ−ＭｌｕＩの１．ｌｋｂ断片を プローブとしたもの 全ＲＮＡ量は、それぞれ２５μｇおよび５０μｇで行な
った。 第５図転写促進配列を含むプラスミドを共存させた時の
　ベーク　−ラクタマーゼの生産性の変化 第４図 （Ｑ） ｔｒａｉｎ ＭＡ３８ 第翻 Ωヱ盃ＣＣＣＣＧＡＣＴＧＴＡＡＧＣＧｃｏｌ ＡＴＧＣＧＴＡＴＣＣＧＴＣＣＣＡＣＣＣＧＴＣＧＴＣ
ＴＴＣＴＣＭｅｔＡｒｇｌｌｅＡｒｇＰｒｏＴｈｒＡｒ
ｑＡｒｇＬｅｕＬｅｕＧＡＧＣＣＧＣＴＣＣＣＡＧＣＡ
ＧＧＣＡＴＧＴＡＴＴＣＣＧＴＴＣＴＣＧＧＣＧＣＧＧ
ＴＣＧＣＧＣＣＧＣＴＣＧＣＣＣＴＣＧＴＴＬｅｕＧＩ
ｙＡＩａＶａｌＡＩａＰｒｏＬｅｕＡＩａＬｅｕＶ。 ＴＣＣＧＣＡＴＧＡＡＣＣＧＧＣＧＣＡＣＴＣＧＧＧＴ
ｊＣＴＴ匹３５ ＣＣＧＣＴＧＧＴＧＧＣＣＴＧＣＧＧＴＣＡＧＧＣＧＴ
ＣＧＧＧＣＰｒｏＬｅｕＶａｌＡｌａＣｙｓＧｌｙＧｌ
ｎＡＩａ’３ｅｒＧｌｙ＋００ ＡＣＣＧＴＡＴＧＴＣＣＧＣＡＣＣＧＧＧＡＣＧｊ聾Ｎ
訂ＧＴＴ１０ ００ ＴＣＣＧＡＧＡＧＣＧＧＣＣＡＧＣＡＧＣＣＣＧＧＣＣ
ＴＣＧＧＣ９ｅｒＧＩｕ’５ｅｒＧｌｙＧｌｎＧｌｎＰ
ｒｏＧｌｙＬｅｕＧｌｙＣＴＣＧＣＡＧＣＴＣＡＣＧＧ
ＣＣＧＧＧＣＣＧＣＣＣＧＣＧＧＴＧＧＴＴＧＣＧＧＧ
ＡＣＧＡＧＣＧＣＡＣＡＣＧＧＣＴＣＧＧＣＧＧｌｙＣ
ｙｓＧ　１ｙＴｈｒｓｅｒ　ＡｌｏＨｉｓＧｌｙＳｅｒ
Ａ　１ａＧＣＣＣＧＧＣＣＧＴＴＣＣＧＴＣＴＴＣＣＣ
ＧＴＧＣＧＣＣＣＣＧＡＣＧＣＣＣＡＣＧＡＧＡＡＧＧ
ＡＧＴＴＣＣＧＧＧＣＧＣＴＧＡｓｐＡＩ　ａＨｌｓＧ
ｌｕＬｙｓＧＩｕ　ＰｈｅＡｒｇＡｌａＬｅｕ００ ＧＧＣＧＴＡＣＧＧＣＡＣＧＧＣＡＣＡＧＧＡＧＧＴＣ
ＣＧＧＡＣＢ５ ５ｔｒａｉｎ　　ＭＬＢ 市電１）ｌｕｎｔ　　ｅｎｄ ｇ□ｔ＋ｏｎ 第 ４ Ｔｈｉｏ’ ｂｅｔａ−１ａｃ ・ ・ １Ｊ ４８ら 法 聯 ｐＭＣＰ　１４６ 査　セ ｐＭｃＰ１４５ ・ ６１１−

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）ストレプトミセスカカオイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙ
   ｃｅｓｃａｃａｏｉ）のベータ−ラクタマーゼ遺伝子の
   ５’領域にあるＳｐｈ I 及び構造遺伝子中に存在する
   Ｐｖｕ I I 切断部位の間にある放線菌発現系転写促進
   配列