JPH02502633A - 抗ウィルス性治療用組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 抗ウイルス性治療用組成物 発明の背景 本発明は、外脂質エンベロープを有するウィルスに対して用いる治療用組成物に 関する。

後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）は、現在もつとも恐れられている汎発流行病 である。すでに判明しているとおり、ＡＩＤＳの病因はヒトレトロウィルスであ る。

このウィルスは最近ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウィルス）と呼ばれている。ＨＩＶは Ｔ４リンパ球内に入り込み、そこで増殖する。このウィルスは活性化されたリン パ球内においてのみ増殖することができる。他の細胞、特にマクロファージも感 染するが、１４９７８球の場合とは異なり、これらの細胞はＨＩＶによって簡単 に殺されることはない。ウィルスの増殖によってＴ４リンパ球数が減少しその機 能を果たすことができなくなる。その結果、免疫系が損傷を受け、患者は最終的 には他の感染または腫瘍によって死亡する。

ＨＩＶの遺伝物質であるＲＮＡは、逆転写酵素と共に２種類のタンパク質より成 るウィルスのコアの中に包み込まれている。宿主細胞から出芽する過程において 、ウィルスのコアは宿主の外膜に由来する脂質二分子膜（エンベロープ）に包ま れる。このエンベロープにはまた、ウィルスが宿主細胞の外側に存在する場合に ウィルス特異性組織の唯一の機能成分となるところのウィルス性糖タンパク質も 含まれている。またこれらのエンベロープ糖タンパク質は、エンベロープに包ま れたウィルスの唯一の抗原供給源でもある。このウィルスの構造は、個々が極め て困難である。ＡＩＤＳの拡がりを阻止し、すでに感染している人々を損傷から 守る手段として、現在効率のよい治療薬の開発に向けて努力が続いている。

これまでに臨床試験された治療薬（Ａ　Ｚ　Ｔ、インターフェロン、インターロ イキン、Ｔ４またはＨＩＶに対するモノクローナル抗体）は、いずれも満足でき るものではなかった。

発明の概要 本発明の目的は、上記の障害を解決し、ウィルス性疾患を治療するための、特に エイズおよびＨＩＶと同様の薬剤のメカニズムと共にその他の感染症に対する効 果的な治療用組成物を提供することにある。

本発明はウィルスが入り込むべき“おとり′をどのように設計するかという問題 を解決し、これによってウィルスはエンベロープをはぎ取られることになる。ウ ィルスをわなに閉じ込めた後、多数の段階の処置を採り得るが、しかしこのウィ ルスはもはや宿主、例えば、Ｔ４リンパ球細胞からの出芽後の状態となることは できない。

ＨＩＶは本来外膜中に含まれるＴ４タンパク質と共に細胞内に入ることはよく知 られている。Ｔ４は１４９７８球の膜中に多量に存在するが、単核球やマクロフ ァージにも含まれている。また他の多くの細胞中にも恐らくＴ４が存在すると考 えられる。ウィルスのコアが細胞内に入る間、細胞膜を開いてウィルスのエンベ ロープと融合させる役目を果すのは、ウィルスのエンベロープ糖タンパク質とＴ ４タンパク質との相互作用であると考えられる。

本発明の方法においては、“人工細胞°即ち、１４分子またはこれと同等の物質 をリポソーム膜に組み込んだリポソームを用いて上記のプロセスを模倣する。

リポソームとしては、現在薬物送達システムに使用されているものが適当であり 、最新の例としては、膜内にモノクローナル抗体を有する標的物質が挙げられる 。

その製造方法は、たとえば、Ｇｒｅｇｏｒｙ　Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ編ｒＬｉ ｐｏｓｏａｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｊ第１〜ＩＩＩ巻、ＣＲＣＰｒｅｓｓ社 （Ｂｏｃａ　Ｒａｔｏｎ、　Ｆｌｏｒｉｄａ、１９ｇ４年）に述べられている。

Ｔ４タンパク質は、天然培養細胞から抗Ｔ４抗体を用いて精製してもよく、或い は合成品を用いることもできる。１４９７８球の培養物からＴ４タンパク質を得 る方法は、Ｃ，ＴＥＲＨＯＲＳＴら著、５ｃｉｅｎｃｅ　（１９１１０年）　、 ２０９号、５２０−５２１ページ、およびＥ、　Ｌ、　］？ＥＩＮＨＥＲＺら、 ＰＲＯＣ。

ＮＡＴＬ、　ＡＣＡＤ、　ＳＣ］、　ＵＳＡ　（１９７９年）、７６巻、　４０ ６１−４０６５ベージに記されている。

Ｔ４タンパク質をリポソーム膜中に固定する方法は、Ｇｒｅｇｏｒｙ　Ｇｒｅｇ ｏｒｉａｄｉｓ編、”Ｌｉｐｏｓｏｉｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　”第１〜ｍ巻 、ＣＲＣＰｒｅｓｓ社（Ｂｏｃａ　Ｒａｔｏｎ、　Ｆｌｏｒｉｄａ、　１９８４ 年）に述べられている。

抗ウィルス剤および抗Ｔ４抗体を膜中に含有するリポソームの使用はすでに知ら れている。これらのリポソームは、Ｔ４を保有する細胞に引きつけられ、抗ウィ ルス剤を放出する。

しかし本発明において抗Ｔ４抗体の代わりにＴ４タンパク質自体またはＨＩＶも しくはそれと同様のウィルスとの相互反応に関与しているところのその一部分が 膜内に取り込まれた場合、このリポソームは“おとり°として作用してウィルス を集める。取り込みに際して、ウィルスは自らのエンベロープをおとりの膜の背 後に残してゆく。このようなおとりリポソームのウィルス収集効力は、その保有 Ｔ４分子数に左右される。おとりのサイズにも成る程度の役割があるが、制限因 子ではない。ウィルスの表面／体積比はおとりの表面／体積比を上まわるため、 リポソーム中に取り込まれたウィルス膜は内包されているコアの体積を補てんす る。飲み込まれたウィルスの数が増加するにつれて、膜は衰えていく。リポソー ムの直径は、好ましくは１ないし１０ミクロンの範囲である。生体内においては 、リポソームはナチニラルＴ４保有細胞に対してウィルスと競合する。中身が空 の状態のおとりは抗原性が低いため、Ｔ４標的が多様に増加する。

その結果、ナチュラルＴ４保有細胞の感染率が低下するわけである。

リポソームを用いて収集したウィルスを無害にするためには、多くの処理段階が 考えられる。

（１）それ以上の操作は行なわない。

いずれのリポソームも最終的には生体内で分解されると考えれば、ウィルスのコ アは血液またはリンパ掖のどちらかに晒されることになる。これらのコアは、リ ポソームの分解過程もしくはその後の段階のいずれにおいても、エンベロープに 入り込まない。エンベロープがないと、ウィルス・コアはその感染力をほとんど 失う。その結果、ウィルスは破壊されるか、或いはより好ましい標的免疫応答を 誘発する。即ち、もっとも簡単な治療法として、Ｔ４標識リポソームをおとりと して用いてウィルスのエンベロープをはぎ取り、このリポソームの破壊によって ウィルスのコアを放出する方法が挙げられる。

（２）外的操作によっておとりを破壊する。リポソーム中に磁化性粒子を含有さ せることが可能である。ウィルスを収集した後、強力な磁場を用いてこれらの粒 子を磁化し、つぎに回転磁場により回転を与える。この操作によってリポソーム 膜が破壊され、中身、即ちエンベロープをはぎ取られたウィルスのコアがこぼれ 落ちる。磁化性粒子の凝集を防ぐため、高周波交流磁場を用いて磁性をただちに 除く。

（３）おとりに抗ウィルス剤を負荷する。適当な抗ウィルス剤の例としては、仏 国特許明細書第７Ｌ２７．５３６　／　２．２４５．４７４号記載のヘテロポリ アニオン組成物、リバベリ販されている）、或いはＧａ１ｅら著ｒ　Ｍｏ１ｅｃ ｕｌａｒ　Ｂａ５ｉｓｏｆ　Ａｎｔｌｂｌｏｔｉｃ　Ａｃｔｉｏｎ　　（６７８ ページ、第２版、Ｖｉｌｅｙａｎｄ　５ｏｎｓ編、１９７２年）に述べられてい るクリンダマイシンが挙げられる。

ウィルスがリポソーム内に入り込む際にエンベロープをはぎ取られるため、酵素 によるコアタンパク質の破壊が充分に可能となる。リポソームの自然破壊もしく は強制破壊によってこのプロセスが完了する。

（４）おとりを第二の安定な抗原（抑制された免疫系でさえも反応するもの）で 標識してもよい。基本的には上記のプロセスと同様に、リポソームの破壊は免疫 応答によるものと考えられる。

（５）Ｔ４リンパ球を活性化し、休眠ウィルスと接触させる。活性化は外部から 行なってもよく、例えば適当なリンホカインを注入するか、または上記（４）の 操作を行なう。一方、リポソームはウィルスと競合し、自身に対する免疫応答を 引き起こす。活性化によって感染１４９２８球によるウィルスの発現が促進され 、その過程においてウィルスが死に新しい世代がこぼれ落ちておとりにより拾い 上げられる。これは、主要な宿主であるＴ４リンパ球からウィルスを完全に除去 する機会を提供する。

添付されている請求の範囲は、本発明を特徴づけるところの新規性の諸種の性質 について個々に述べるものであり、本開示の一部分を構成している。また添付の 図面ならびにその説明は本発明の好ましい実施例を示すものであり、本発明、そ の操作上の利点および本発明を用いることによって達成される目的をよりよく理 解するために参照する必要がある。

図面の簡単な説明 第１図はヒト免疫不全ウィルスＣＨＩ　Ｖ）の内部構造を示す図である。

第２図はウィルスが宿主細胞と結合する瞬間を示す図である。

第３図は、第２図のウィルスの脂質層が宿主細胞の脂質層と融合した状態を示す 図である。

第４図は、第２図の宿主細胞から新しいウィルスのコアが出芽する様子を示す図 である。

第５図は、Ｔ４タンパク質を保有するリポソームより成る本発明によるおとりを 示す。

第６図は、第５図に示すおとりに入り込むウィルスのいろいろな段階を示すもの である。

好ましい実施例の詳細な説明 第１図は、ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）の現在判明している構造を示す。遺 伝物質１はＲＮＡ０形をとる。

このＲＮＡは、逆転写酵素２を伴なっており、この逆連写酵素は宿主細胞内に放 出される際に、リボ核酸（ＲＮＡ）を宿主自身のＤＮＡに取り込まれるデオキシ リボ核酸（ＤＮＡ）に転写する。２種類のコアタンパク質３．４は、上記のＲＮ Ａと酵素とをウィルス・コア５の中に封じ込める。ウィルスの外側のエンベロー プは、脂質二分子膜６である。ウィルス・エンベロープの糖タンパク質７は、脂 質二分子膜６中に埋め込まれている。ウィルスの直径は約１０分の１ミクロンで ある。

第２図は、宿主細胞８に結合する瞬間のウィルスを示す。エンベロープ糖タンパ ク質７が細胞膜タンパク質９（現在知られている限りではＴ４タンパク質である ）と結合する。タンパク質７とタンパク質９との相互作用によってふたつの脂質 層６および１０が共に引っ張られるため、これらの脂質層が融合する。その結果 、第３図の矢印１１で示°されるように、ウィルス・コアラが細胞内へ入り込む 道が開かれるわけである。宿主細胞の酵素がコア・タンパク質を切断するため、 ＲＮＡおよび逆転写酵素が放出される。

第４図は、新しいウィルス・コア１２の宿主細胞８からの出芽を示す。Ｔ４リン パ球の場合、この時点で細胞８が死に、新しいウィルスが噴出して循環系に拡散 する。

第５図は、Ｔ４タンパク質もしくはこれと同等の物質を保有するリポソームより 成るおとりを示す。リポソームｌＩ２０は脂質２分子膜であり、天然の細胞膜と 似ている。

おとりは循環系から離脱するとは考えられてなく、好ましいタイプのリポソーム として、直径１〜ｌＯミクロンの大型ユニラメラ小胞（ＬＵＶ）が挙げられる。

Ｔ４タンパク質２１は、おとりの膜２０中に取り込まれる。ＨＩＶの天然細胞内 への侵入に関与しているのは、このＴ４タンパク質全体またはその一部であると 思われる。リポソームには、さらに抗ウイルス性コア剤２２が含まれていてもよ い。ウィルスのコアがリポソーム中に入りさえすれば、このウィルス・コアを分 裂させる事ができる酵素が所定の機能を充分に果たす。

さらにリポソームには磁化性物質（粒子）２３が含まれていてもよい。これによ って、おとりを外部から管理下において破壊できる。

第６図は、おとり中に入り込むウィルスの諸種の段階を示す。ウィルス２４は８ ２０に近づいている。別のウィルス２５のエンベロープは、すでにおとりの膜２ ０と融合しており、そのコア２Ｂは矢印２８で示されるように、リポソーム内部 ２７へ入り込みつつある。すでにリポソーム内部に入っているウィルス・コア３ ０の膜２９は、リポソーム膜２０に組み込まれている。抗ウィルス剤として機能 する可能性のある酵素は、０３１で示されている。矢印３２で示されるように、 外部の磁場によって磁化性粒子２３を磁化し、回転させることもできる。周囲の 液体の効力によって最終的にはおとりが崩壊し、中味が循環系中に放出される。

粒子２８の磁性をただちに除くことによって、凝集を防止することが可能である 。

ＦＩＧｔＪＲＥ　　１ ＦＩＧＵＲＥ　　２ ＦＩＧＵＲＥ　　３ ＦＩＧＵＲＥ　　４ ＦＩＧＵＲＥ　　５ ＦＩＧＵＲＥ　　６ 国ＷＡｖ４査報告 ｉ、１．＋＾−１．−、ＰＣτ／ＥＰ　ε７１０ｏε０６国際調査報告

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．外脂質エンベロープを有するウィルスに対して用いる治療用組成物において 、リポソームとタンパク質との結合によってタンパク質（２１）をリポソーム膜 （２０）中に固定し、ウィルス（２４、２５）のエンベロープ・タンパク質（２ ９）と相互作用させる事によって、リポソームにウィルス・コア（２６、３０） を包み込ませる事を特徴とする組成物。 ２．請求の範囲第１項記載の組成物において、リポソーム膜（２０）中のタンパ ク質がヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）と相互作用を行なう事のできるＴ４タン パク質、その一部またはそれと同等の物質であるため、ＨＩＶのコアがリポソー ム内に入り込む事を特徴とする組成物。 ３．請求の範囲第１項または第２項記載の組成物において、リポソームに抗ウィ ルス剤（３１）、好ましくはウィルス・コアのタンパク質を破壊させる事のでき る酵素が含まれる事を特徴とする組成物。 ４．請求の範囲第３項記載の組成物において、前記抗ウィルス剤がヘテロポリア ニオン組成物、リバベリン、またはクリンダマイシンである事を特徴とする組成 物。 ５．請求の範囲第１項ないし第４項のいずれかに記載の組成物において、リポソ ーム膜（２０）がＴ４以外にさらにリポソームに対する免疫反応を誘発する事の できる抗原を含有する事を特徴とする組成物。 ６．請求の範囲第１項ないし第５項のいずれかに記載の組成物において、リポソ ーム内にさらに回転磁場によってリポソームを破壊する事ができる磁化性物質、 好ましくは粒子状のもの（２３）を含有する事を特徴とする組成物。 ７．請求の範囲第１項ないし第６項のいずれかに記載の組成物において、リポソ ームが大型ユニラメラ小胞（ＬＵＶ）である事を特徴とする組成物。 ８．請求の範囲第１項ないし第７項のいずれかに記載の組成物において、リポソ ームの直径が１ないし１０ミクロンの範囲内である事を特徴とする組成物。