JPH02500242A - ヒトｂ親リンパ性ウイルス（ｈｂｌｖ）の試験方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ヒトＢ親すンパ性ウィルス（ＨＢ　Ｌ　Ｖ）の試験方法新しいヒトＢ親すンパ性 ウィルス（）Ｉ　Ｂ　Ｌ　Ｖ）と命名されたＮＤＡウィルスは、リンパ増殖障害 を存する患者の血液リンパ球から単離された。このウィルスは形態学的にはヘル ペス族に属するが、Ｉ（ＢＬＶは以下に示すように従来特性化されていない。Ｉ （ＢＬＶはＡＩＤＳ及び非・ＡＩＤＳ患者における何等かの悪性と関連するが、 しかし、ＡＩＤＳの病源体であるヒトＴ−細胞親リンパ性ウィルスタイプｍ　（ ＨＴＬＶ−ＩＩ［）とは明確に異る。

ＨＢＬＶは大きい二本鎖ＤＮＡゲノムを含有し、Ｂ細胞を選択的に感染するのに 対し、一方、ＨＴＬＶ−ｍは一本鎖ＲＮＡゲノムを含有し、Ｔ・細胞を選択的に 感染し、細胞溶解性である。

ＨＢＬＶウィルスのヌクレオキャプシドは１６２個のキャブツマ−を有する二十 面体対称のものであり、脂質膜内にエンベロープされている。このウィルスエン ベロープの外表面は短いとげで覆われている。エンベロープされたピリオンの直 径は約１８０ｎｍであり、ヌクレオキャプシドは約１１００ｎの直径である。キ ャプシドとエンベロープの間の空間３５〜４０ｎｍは非晶質物質で満たされてい る。ヌクレオタフパフ質核即ちヌクレオイドは約６５ｎｍの直径であり、場合に 応じて桿状或いは非対称である。

一時細胞或いは帯血液細胞の感染は、感染後４〜１゜日後に特徴的な大細胞を生 成する。これらの細胞は小白血球の２〜４倍の直径であり、培養液中約１週間後 に細胞病源性及び細胞溶解性変化を示す。これらの細胞の核はしばしば高度に回 旋状であり、顕著な特徴なしに主に真正染色質クロマチン及び仁形成体を含有す る。殆んどの感染細胞により多数のピリオンが放出される。

発明の概要及び背景 本発明はヒト血清におけるヒトＢ親すンパ性ウィルス（ＨＢＬＶ）感染或いは抗 体の検出及び診断を説明する。

ＨＢＬＶの検出に用いられる好ましいアッセイはウェスタンプロット或いは免疫 螢光アッセイ（ＩＦＡ）である。

ヒトＢ親すンパ性ウィルス（ＨＢＬＶ）は、各種リンパ増殖性障害を有する患者 の末梢血液白血球から単離された新たに発現されたＤＮＡウィルスである。この ＨＢＬＶウィルスの超構造特性並びにその形態発生は、このウィルスをヘルペス ウィルス族におくが、この族の如何なる公知のものとも類似性及び相違を有する 。免疫電子顕微鏡研究はウィルスが単離された患者はウィルスベローブ及びウィ ルスの内部成分の両者に高度に特異的な抗体を作ることを示している。免疫学的 、分子、生物学的及び宿主範囲の研究はＨＢＬＶウィルスが従来説明されていな いことを示す。

感染血液試料からの単核細胞の培養液は一次細菌或いは帯血液細胞を用いた培養 ４〜１０日後に相当数の特徴的な大細胞を発達させる。電子顕微鏡分析はＨＢＬ Ｖウィルス粒子が大細胞中には存在するが、小リンパ球には不存在であることを 示す。この感染細胞は小リンパ球の直径の２〜４倍であり、如何なる初期の明瞭 な細胞変成変化を示さない。しかしながら、培養液中１週間後、細胞変成及び細 胞溶解変化が容易に観察可能となる。具体的には、感染細胞の核がしばしば高度 に回旋状であり、クロマチンは主として真正染色質であり、及び顕著な特徴なし に仁形成体を含有した。この細胞質はかなり大きＬ）Ｇｏ１ｇｊ装置、異った大 きさの小胞、顕著な粗い細胞質網状構造の配列及び豊富なミトコンドリアを示す 。これらの細胞の一般的外観はリンパ起源の高度に多形増殖性芽球のそれである 。

ＨＢＬＶウィルスの主ため超構造特徴はヘルペスウィルス族のそれと一致する。

ヌクレオキャプシドは１６２個のキャブツマ−を有する二十面対称を有し、脂質 膜内にエンベロープされている。このウィルスエンベロープの外表面は短いとげ で覆われている。エンベロープされたピリオンの直径は約１８０ｎｍであり、ヌ クレオキャプシドの直径は約１１００ｎである。キャプシドとエンベロープの間 の空間３５〜４０ｎｍは主として非晶質物質で満たされている（この構造はは幾 つかのヘルペスウィルス類について説明されている外被と同一であるように思わ れる）。ヌクレオタンパク質核、即ちヌクレオイドは約６５ｎｍ直径である。場 合に応じて、ヌクレオイドは桿状或いは非対称である。

細胞外ウィルスの特異的免疫標識化は、予備吸収された患者の血清及びヤギ内で 産生されたヒトガンマグロブリンに対する抗血清を用いて超構造レベルで起こり 、フェリチン或いはペルオキシダーゼのいずれかを用いて標識化される。殆んど の感染細胞により多数のピリオンが放出され、細胞の表面に緊密なりラスターと して表わされる。実質的に全てのピリオンはそれらの周縁で標識化される。場合 によっては、標識がピリオン中に侵入することがあり、あるピリオンのエンベロ ープは無傷でなく、患者の血清のあるものがウィルスの内部成分並びにウィルス エンベロープに対する抗体を含有することを示している。

本発明のＨＢＬＶウィルスはヒト血液帯細胞をＨＢＬＶで感染することにより繁 殖され、より詳細に具体的開示において説明される。

図面の説明 第１図は顆粒状、核、及び細胞質免疫螢光染色を示すＨＢＬＶ−感染拡大細胞（ 感染後５日）、免疫螢光分析を示す。バックグラウンド（矢印）内の小細胞は患 者の血清と反応しなかった。

第２図は、ＡＩＤＳ−関連リンパ腫を有する患者がら帯血液白血球を示す。

寄託の陳述 分子クローンｐＺＶＨ１４により例示される本発明の主題、ヒトＢ親すンパ性ウ ィルスはメリーランド州ロックビルのアメリカン・タイプ・カルチャー・コレク ション（Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ ）にＡＴＣＣＮＣＬ４０２４７として寄託されており、本願の許可後、３０年間 の期間或いはその様な寄託物に対する最終要求後５年間或いは特許の有効期間の うち最も長い期間の間維持される。この寄託物は、培養物が寄託期間内に突然変 異するか或いは生育可能でなくなった場合には取替え本発明はヒトＢ親すンパ性 ウィルス（ＨＢＬＶ）の単離及び精製、感染血液血清のそのウィルスのｉｎ　ｖ ｉｔｒｏ試料の診断及び検出及びＨＢＬＶに特異的に結合する抗体の検出より構 成される。好ましい実施態様においては、ＨＢＬＶ−感染細胞を用いて免疫螢光 アッセイ（ＩＦＡ）及びウェスタンプロットアッセイがウィルスが元々単離され た六人の患者中のＨＢＬＶに対する抗体を検出する。

ヒトＢ親すンパ性ウィルスは下記表１に示されるような患者から単離された。

Ｂ細胞リンパ腫を有する 急性リンパ球白血病　１　＋　＋ アンギオ免疫芽球リンパ　２　＋　十 節症 ＊ＡＩＤＳ−後天性免疫不全症候群 本発明の一部を形成する免疫螢光アッセイも又新鮮な組織培養液中及び培養末梢 血成帯細胞中におけるＨＢＬＶの検出及び新鮮なヒト帯血液リンパ球における感 染の追跡において用いられる。

ＨＢＬＶのスクロース勾配精製。　ヘパリン化された末梢血液白血球或いはヒ） ＩＩ帯血液単核細胞をＦｉｃｏｌ　１−Ｈｙｐａｑｕｅ中でバンド化し、ＰＨＡ −Ｐ　（５μｇ／ｍｌ）刺戟に引続き３６℃において４８時間細胞培養液中にお いて樹立した。細胞を次いで１０％ウシ胎児血清（５６℃で３０分間熱不活性化 ）及び５μｇ　／　ｍｌヒドロコーチシンを補給したＲＰＭＩ−１６４０中で増 殖させた。感染細胞から得られた凍結上澄液を解凍し、２５０ｍ１管中に集め、 ５ｏｒａｌｌ　ＧＳＡｏ−ター内で３５０Ｏｒｐｍにて５℃で１０分間回転させ た。清澄化上澄液をＳ　Ｗ　２８管に移し、１７，０００ｒｐｍにて５℃で９０ 分間回転及びペレット化した。得られたベレットを１０ｍＭＴｒｉｓ−ＣＩ　ｐ Ｈ７，４，１０ｎＭ　ＮａＣａ１，１ｍＭＥＤＴＡ（ＴＮＥ）中で３００μｇの 容量まで再懸濁させ、１５〜６０％スクロース勾配上に重層し、５Ｗ４１０−タ ー（ＢｅｃｋＤａｎ　）内で２０．ＣＣ１００ｒｐにて５℃で３０分間回転させ た。１ｍｌの両分を勾配の頂部から集めた。各両分を１０ｍ！に稀釈し、５Ｗ４ １０−ター内で１７．００Ｏｒｐｍにて９０分間回転及びペレット化した。ベレ ットを３００マイクロリツターのＴＮＥ中に再懸濁させ、アリコートについてウ ィルスの存在及びウィルス感染性についてアッセイを行った（ＥＬＩ、ＳＡ及び ウェスタンプロットにより）。ヒトＢ親すンパ性ウィルスは両アッセイにより画 分４〜９において容易に検出され、ピークは画分５〜７にあった。各画分からの 核酸の抽出は画分５〜９における二本鎖ＤＮＡの存在を示し、ピークは画分７に ある。ウィルスは又５Ｗ４１勾配ペレツト中において電子顕微鏡により検出され た。

上記操作による新鮮な未凍結上澄液から精製されたウィルスを詳細な電子類′＠ 鏡に用いた。

スクロース勾配画分のアリコートについて、ｐＺＶＨ１４インサートをプローブ として用いるＤＮＡドツトプロット分析によりＨＢＬＶの存在をアッセイするこ とができる。ｐＺＶＨ１４分子クローンはアメリカン・タイプ・カルチャー・コ レクションから受理番号４０２４７として得られる。

免疫螢光アッセイ及びウェスタンプロットアッセイはＡＩＤＳ及び非ＡＩＤＳの いずれの起源のＢ細胞リンパ腫を包む各種造血悪性におけるＨＢＬＶ感染及びＨ ＢＬＶ抗体の検出のための好ましいアッセイである。

ＨＢＬＶ抗体の存在は次の病気群において高められるが、しかし、本発明はこれ らの特定の病気に限定されるものではない： バーキッツリンパ腫； ホジキン病； 成人において「急性単球増加症一様症候群」として特徴付ｊｔられるタホ湖に見 られたものと同様な新たに説明された感染病症候群； 及び、 カリブ及びアフリカ起源の子供において診断されたようなＡＬＬ。

液単核細胞の感染を次のように細胞なしの伝達により行った； １）　新鮮な血液試料をＲＰＭＩ−１６４０で１＝１に稀釈し、Ｆｉｃｏｌｌ勾 配上で回転した（及びバンド化した）。

２）　バンド化された分子細胞を洗浄し、２０％ＦＣＸＳ及びＲＰＭＩ−１６４ ０中のＰＨＡ−Ｐ（５μｇ／ｍｌ）及びＨＣ（５μｇ／ｍｌ）の存在下に培養液 中に入れた。

３）　２４時間後、ポリブレン（２μｇ／ｍｌ）を培養液に添加し、及び４８時 間後細胞をペレット化した。

４）　新たに採取した或いは凍結感染培養上澄液の１ｍｌアリコールをベレット に添加し、しばしば撹拌しながら３７℃で１時間インキュベートした。

５）　新鮮な培地［ＲＰＭＩ−１６４０中１０９６ＦＣＳ及びＨＣ（５μｇ／ｍ １））を次いで懸濁液に添加し、培養し、３６℃でインキュベートした。

６）　感染後、２〜１０日以内に特徴的な拡大された屈折性細胞が見えるように なる。上澄液を免疫螢光法及び培養液の視覚観察により測定された感染のピーク において採取し、更に伝達する。

細胞におけるＨＢＬＶ感染の検出。　ＨＢＬＶ感染細胞をｌＯ％ＦＣＳ、５ｕｔ ｒ／ｒｎｌ　ＨＣを含有する培地１６４０中に維持し、３６℃でインキュベート する。未感染細胞を同様に処理するが、しかし、対照として用いられる。これら の細胞におけるＨＢＬＶの感染はＩＦＡを用いてアッセイされる。小細胞試料を 異つた時点で取出し、細胞をＰＢＳ中において洗浄し、ＨＢＬＶ抗体陽性血清及 びＨＢＬＶ抗体陰性血清で染色する。感染細胞は）ｉＢＬＶ抗体による核におけ る最初のＩＦ染色を示す大細胞である（第２図）。これらの陽性細胞は殆んど拡 大細胞である（第１図及び第２図参照）。対照細胞はＩＦ染色を示さない。

ＨＢＬＶ抗体の検出。　（ａ）スクリーニング−ＨＢＬＶに特異的に結合する抗 体は、抗原目標としてニトロセルロース膜（Ｍｉｌｌｉｔｉｅｒ　９６ウ工ル形 式）上に堆積された感染細胞質の稀釈液を用いて便利に且つ高感度に測定される 。ヒト抗体の結合はアルカリホスファターゼ複合抗−ヒトＩｇＧ及び標準的酵素 化学を用いて定量される。細胞細胞質の量及び試験抗体の稀釈率は陰性対照ヒト 抗血清未感染細胞細胞質を対照として用いる予備実験におけるシグナル対ノイズ 比の最適比によりめられる。ウェル当り５０００個の細胞の等量及び１／４００ 乃至１／１６００の稀釈率の試験抗体稀釈率が通常用いられる。感染細胞と同一 起源の未感染細胞よりなる対照ウェルは最高の特異性が必要とされた場合に含ま れる。

（ｂ）ウェスタンプロット−感染細胞細胞質を５ＤＳ−ＰＡＧＥにより分離し、 標準的方法によりニトロセルロース膜に移した。陰性対照血清及び陽性血清の感 染及び非感染細胞タンパク質への結合の比較は、感染細胞細胞質及びウィルス陽 性血清についてのみ表わされる独特なバンドの存在を示す。核、細胞質、及び細 胞培養上澄液画分の比較は細胞上澄液に最高濃度の抗原を示す。

間接免疫螢光アッセイ。　ＨＢＬＶの単離、及び繁殖のための上記操作と共に、 次のものはヒトＢ親すンパ性ウィルスの後期ウィルスキャプシド抗原に対するＩ ｇＧ抗体を検出するＨＢＬＶに対するアッセイである。

ヒト帯血液（ＣＢ）単核細胞をＰＨＡ−Ｐ　（５μｇ／ｍｌ）で４８時間刺戟し 、その後細胞をポリブレン（２μｇ　／　ｍｌ　）で４８時間処理する。−次ヒ トｎａ細胞をＰＨＡ−Ｐで、次いでＰｏ１ｙｐｒｅｎｅにより刺戟する。これら の細胞を次いで上記の如くヒトＢ親すンパ性ウィルスで感染する。

ＨＢＬＶ液を感染ＣＢ細胞がらそれらが〉２５〜３０％の巨大細胞を示す時点で 採取し、この細胞を次いで参照血清（陽性及び陰性）を用いて間接免疫螢光アッ セイにより試験する。ＨＢＬＶ感染に対して陽性の一人の患者からの血清、或い は強いＩＦＡ反応性を示すその他の血清はＨＢＬＶに対して＞１：８０の力価を 含む。この操作において用いられた陰性血清はＨＢＬＶに対して抗体を有さない 少なくとも二つの血清である。未感染血液細胞は４８時間ＰＨＡ−Ｐ刺戟された 。ＦＩＴＣアフィニティ精製抗精製抗ヒト１ｇ尺びＬ）を１＝１５にてヤギ或い はウサギ中で調製した。ガラススライドをテフロン被覆し、未被覆６關のＩＤ円 を育した。１Ｆ搭載溶液を用いて細胞をガラススライドに固定した。

１ｉ　（ｆｆ。　ＨＢＬＶ＞２５〜３０％拡大巨大細胞〉１０μｇ／　ｍｌ　） で感染されたヒト帯血液細胞をＰＢＳ中（Ｃａ　及びＭｇ　なし）で１１０００ ｒｐにて３０℃で３回洗浄した。洗浄細胞を、退化細胞を除去するために、リン パ球分離培地中に入れた。洗浄細胞をＣａ＋＋及びＭｇ　を有するＰＢＳ中に懸 濁させ（×１０５個細胞／ｍｌ）、テフロンスライド上に堆積させた。同様に、 未感染血液細胞をスライド上に堆積させ、感染細胞と同様にして処理した。細胞 を迅速に風乾し、次いで冷アセトン（２０℃に保たれた）中で室温において１０ 分間固定した。固定細胞を水分を避けるためにスライド箱内にて一２０℃にて保 存した。全ての被試験血清は５６℃で１ｉ２時間インキュベートし、次いで沈澱 物質を避けるために分類した。血清を次いでシェーカー或いはロッカーを用いて １０分間隔でＰＢＳ　（Ｃａ　及びＭｇ　なし）中で２回の稀釈で１＝１０にて 稀釈した。スライドを次いで風乾し、ＦＩＴＣ抗ヒト抗ヒト１スＧイド上に堆積 し、４０分間インキュベートし、３回洗浄し、風乾し、及びカバースリップを用 いてＩＦ搭載溶液を搭載した。

搭載スライドは螢光の損失なしに、この搭載溶液と共に４℃において１週間保存 される。

スライドを免疫螢光スコープ上で読取り、陽性及び陰性抗体力価を評点する。陽 性血清は僅かに細胞内にドツト状染色を有する拡大細胞の明緑色核染色を示した 。陽性細胞の数は感染度と共に変る。陰性血清は感染及び未感染細胞の両者に染 色を示さない同様に、陽性血清は未感染細胞にＩＦ染色を示さない。ＦＩＴＣの みでインキユベートされた細胞は感染及び未感染細胞に染色を示さない（第１ａ 参照）。ＨＢＬＶに対する抗体の終点力価は最終稀釈率における無染色或いは弱 染色のいずれかに基づく。実際の力価は僅かに染色した細胞を示す抗体の稀釈率 及び完全に陰性である引続く稀釈率に基づいて計算される。

ウィルス膜抗原を検出するために（第１ｂ図）、ＨＢＬＶ感染及び未感染生存細 胞（非固定）を血清のない培地中で３回洗浄し、患者の血清で４℃において３０ 分間処理した。細胞を再び洗浄し、アフィニイー精製ＦＩＴＣ抗−ヒトＩｇＧで 更に３０分間処理し、培地中で洗浄し、及び上記膜螢光性を検査した。斑点状表 面螢光を示すＨＢＬＶ感染細胞を第２ｂ図に示す。

以下の具体例は、例１に用いられた特定の試薬を含有する診断試験キットが本発 明の範囲内であることにおいて、本発明の詳細な説明するものである。

例１．　各種病気を含有する血清におけるＨＢＬＶ膜抗原（ＭＡ　）抗体の検出 細胞の調製において、ＨＢＬＶ感染された生きた帯面液（ＣＢ）細胞（Ｉ　Ｘ　 １０／ｍｌ）を血清のない培地中において２回洗浄した。同様に、ＰＨＡ−Ｐ刺 戟未感染ＣＢ細胞も又洗浄して対照として用いた。

試薬＝　（ａ）ウィルスキャプシド抗体を含有する患者から得られたＨＢＬＶ− ＭＡ抗体；　（ｂ）正常な健常供与者からのＨＬＢＶ陰性抗体；　（ｃ）Ｆ　Ｉ ＴＳ抗ヒトＩｇＧ　（Ａ、Ｐ、）。

操作： （１）　洗浄されたＨＢＬＶ感染及び未感染ＣＢ細胞を１１０００ｒｐにおいて ５分間遠心分離した。

（２）　遠心分離された細胞を＜５Ｘ１０５／ｍｌの密度で血清のない培地中に 懸濁した。

（３）　懸濁細胞を各種稀釈率の未知の血清並びにその他のＨＢＬＶ陽性及び陰 性参考血清に添加した。細胞を３７℃で４５分或いは４℃で１／２時間インキュ ベートした。

（４）　インキニベーション後、細胞を１１００Ｏｒｐで遠心分離し、血清のな い培地中で３回洗浄し、で遠心分離した。遠心分離後、上澄液を廃棄し、ＦＩＴ Ｃ複合体を細胞に添加した（複合体の１：１５稀釈）。

（５）　細胞を３７℃で４５分間、或いは４℃で１／２時間インキュベートした 。

（６）　細胞を血清のない培地で３回洗浄し、同−培地中にｌＸＩＯ３／ｍｌの 密度で再懸濁の状態に保った。

（７）　懸濁細胞を含有する一滴をガラススライド上に堆積し、ガラスカバース リップを細胞上に置き、膜螢光性を検査した。

染色パターン。ＭＡ陽性細胞は完全な環或いは１／２の環、或いはＨＢＬＶ抗原 を含有する細胞質の廻りのキャッピングのいずれかの明るい緑がかった染色を示 した（第１ｂ図）。死亡細胞は通常全細胞の黄色染色を帯びた。陰性対照細胞は 環の血清検出による如何なる染色、或いは試験された血清の稀釈によるキャッピ ングもなく、それはその稀釈率における抗体に対して陽性を表わした。

ＨＢＬＶ及びヘルペスシンブレツクウィルス形態の比較 特　徴　ＨＢＬＶ　ＨＳ　Ｖ ヌクレオイドの直径　６０〜８０ｎｗ　５０〜７０ｎｍキャプシドの直径　９５ 〜１１０５ｎ　９５〜１００ｎｎ＋キヤプシドの対称性　二十面体　二十面体キ ャプシドにおける　１６２　１６２ キャブツマ−の数 外被の厚み　２５〜４５ｒ＋ｍ　Ｌばしば不明瞭２５〜４０ｎｍ エンベロープされた ピリオンの直径　１６０〜２００ｎｗ　１５０〜２２０ｎｍゆ 例３ ヒト及びシミアンヘルペスウィルス類に対して調製されたモノクローナル抗体及 び超免疫血清を説明されるような間接免疫螢光操作によりＨＢＬＶ感染細胞との 反応性の試験を行った。

ＨＢＶ及びＨＣＭＶに対するモノクローナル抗体は１：４０の稀釈率で使用し、 １：１０の稀釈率の正常腹水でのＨＳＶ−Ｔ及び■、ＶＺＶ及びＨＶＳは１：１ ５及び１：１０の稀釈率で用いた。アフリカミドリザル及びレーザスサルＣＭＶ に対する超免疫血清は熱不活性化しく５０℃　３０分）、及び１０，０００ｒｐ ｍで清澄化させて１：１０の稀釈率で用いた。示された血清に加えて、ＥＢＶＳ ＣＭＶ、ＨＳＶ−１び■、及びＶ　Ｚ　Ｖ　ｌ：：対する抗体を含有するヒト血 清も又ＨＢＬＶ感染細胞と反応しなかった。ＣＭＶに対する抗体を含有するアフ リカミドリザル及びレーザスの血清は又ＨＢＬＶで試験した際に陰性であった。

ＥＢＶ及びＨＣＭＶに対するモノクローナル抗体、及び正常マウスからの腹水は ＧａｒｙＰｅａｒｓｏｎ博士（ジョージタウン大学医学校、ワシントンＤ、Ｃ， ）からの贈物であった。ｖＺｖ及びＨＶＳに対するモノクローナル抗体はＮａｎ ｃｙ　Ｃｈｕｎｇ博士（ベイラー医科大学、ヒユーストン、テキサス州）及びＪ ｏｈｎ　Ｄａｈｌ−ｂｅｒｇ博士（ＮＣＩ、ベセスダ、メリーランド州）からそ れぞれ得られた。ＨＳＶ−Ｉ及び■モノクローナル抗体はｐｕｐｏｔｎｔ　（ボ ストン、マサチニーセッツ州）から購入した。精製アフリカミドリザル及びレー ブスＣＭＶに対する超免疫血清はＡｂｌａｓｈｉ　８士によりウサギにおいて予 め調製された。

用いられた略号：　ＨＢＬＶはヒトＢ親すンパ性ウィルス、ＥＢＶはエプスタイ ン−バーウィルス；ＨＣＭＶ。

ヒトサイトメガロウィルス、ＨＳＶはヘルペスシンプレックスウィルス、ＶＺＶ はバリセラーシスターウィルス；ＨＶＳはへルペスウイルスサイミリ；　ＶＣＡ はウィルスキャプシド抗原、ＭＡは膜抗原。

ＨＢＬＶ感染帯血液単核細胞をＨＢＬＶ陰性血清で染色したところ免疫螢光のな い相当な数の大細胞が得られた。結果を表４に示す。

例４ 旧世界及び新世界の霊長類からの血清を説明されるような間接免疫螢光によりＨ ＢＬＶに対する抗体を試験した。

旧世界の霊長類からの血清のあるものは、Ｐ、　Ｋａｎｋｉ博士（バーバード公 衆衛生学校、ボストン、マサチニーセッツ州）からの贈物であった。全ての血清 は５６℃で３０分間不活性化され、遠心分離により清澄化してから用いた。ＨＢ ＬＶ−感染帯血液白血球、Ｐ３ＨＲ−１（ＥＢＶ−ＶＣＡを発現する樹立細胞系 ）及びＨＳＣ−株■により感染されたツクロウザル腎臓細胞を比較のために用い た。感染細胞が細胞変成効果を示した場合には、細胞をアセトン中に固定してＩ ＦＡに使用した。

３匹のツクロウザル及び１匹のワタボウシマーモセットに予めＨＶＳを接種した 。これらの動物からの血清はヘルペスウイルスアテレス（Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕ ｓ　ａｔｅｌｅｓ）と交叉反応したＨＶＳ後期抗原に対する抗体を保有した。結 果を表５に示す。

ＦＩＧ、２Ａ ＦＩＧ、２Ｂ 国際調査報告

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. １．アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション受理番号４０２４７の全て の特性を具現することを特徴とする分子クローンｐＺＶＨ１４。
2. ２．ヒトＢ親リンパ性ウイルス（ＨＢＬＶ）ビリオンの抗原部位に特異的に結合 する抗体の診断及び検出方法であって、ＨＢＬＶ或いはこの画分をＨＢＬＶで感 染された疑いのあるヒト血清からの抗体と接触させ、及び抗原−抗体複合体の形 成を測定することを特徴とする方法。
3. ３．その有効成分としてヒトＢ親リンパ性ウイルス（ＨＢＬＶ）、ＨＢＬＶのウ イルス抽出物、ＨＢＬＶ抗原、ＨＢＬＶ抗体、及び前記成分の任意の画分よりな る群から選ばれた１種以上の成分を含んでなる診断試験キット。