JPH0249663B2 - - Google Patents
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- JPH0249663B2 JPH0249663B2 JP58133616A JP13361683A JPH0249663B2 JP H0249663 B2 JPH0249663 B2 JP H0249663B2 JP 58133616 A JP58133616 A JP 58133616A JP 13361683 A JP13361683 A JP 13361683A JP H0249663 B2 JPH0249663 B2 JP H0249663B2
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Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
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- G01N33/60—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances involving radioactive labelled substances
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は体外に取り出されたリンパ球を測定す
ることにより、癌の検査を被検査者に苦痛を与え
ないで、簡便かつ正確に行なう方法に関するもの
である。
ることにより、癌の検査を被検査者に苦痛を与え
ないで、簡便かつ正確に行なう方法に関するもの
である。
例えばアクリジンオレンジ、テトラサイクリ
ン、ヘマトポルフイリン等の光感受性物質が癌組
織に対し高い親和性及び集積性を有し、かつ本性
質を利用して光照射下にて制癌作用を発揮するこ
とは知られている。すなわち、これらの光感受性
物質を投与して癌組織に集積させ、300〜400mW
程度のレーザー光あるいは紫外線を照射すると光
化学反応によつて癌組織を選択的に破壊すること
ができるのである。
ン、ヘマトポルフイリン等の光感受性物質が癌組
織に対し高い親和性及び集積性を有し、かつ本性
質を利用して光照射下にて制癌作用を発揮するこ
とは知られている。すなわち、これらの光感受性
物質を投与して癌組織に集積させ、300〜400mW
程度のレーザー光あるいは紫外線を照射すると光
化学反応によつて癌組織を選択的に破壊すること
ができるのである。
このような光感受性物質とレーザーシステムに
よる方法は体内における反応を利用した癌の検査
及び治療方法としては画期的であるが、この方法
には次のような問題点があつた。すなわち、光感
受性物質が静脈内に投与されてから腫瘍部位に蓄
積されるまで通常３日間程度かかること、投与時
及びその後２〜３週間は光に極めて過敏な状態に
なるところから皮膚炎、色素沈着等の防止のため
その間暗室に居る必要があること、及びレーザー
内視鏡による検査可能な部位が胃、肺などに制限
されることなどがあり、本法は一時に多数の被検
者を検査するスクリーニング方法には不適当であ
つた。
よる方法は体内における反応を利用した癌の検査
及び治療方法としては画期的であるが、この方法
には次のような問題点があつた。すなわち、光感
受性物質が静脈内に投与されてから腫瘍部位に蓄
積されるまで通常３日間程度かかること、投与時
及びその後２〜３週間は光に極めて過敏な状態に
なるところから皮膚炎、色素沈着等の防止のため
その間暗室に居る必要があること、及びレーザー
内視鏡による検査可能な部位が胃、肺などに制限
されることなどがあり、本法は一時に多数の被検
者を検査するスクリーニング方法には不適当であ
つた。
本発明者らはこれらの点を改良すべく研究を行
ない、先に体外に取り出された細胞又は組織にヘ
マトポルフイリンを混入し、光照射により生成さ
れたラジカルを電子スピン共鳴測定装置で測定す
る方法など（特願昭58−83651号）を開発した。
そして、さらに簡便な方法を開発すべく研究を進
めた結果、ヘマトポルフイリン等のリンパ球に対
し親和性を有する物質を放射性同位元素で標識化
する方法を開発し、この方法によれば大量の被検
体を容易に処理することができることを見出して
本発明を完成するに至つた。
ない、先に体外に取り出された細胞又は組織にヘ
マトポルフイリンを混入し、光照射により生成さ
れたラジカルを電子スピン共鳴測定装置で測定す
る方法など（特願昭58−83651号）を開発した。
そして、さらに簡便な方法を開発すべく研究を進
めた結果、ヘマトポルフイリン等のリンパ球に対
し親和性を有する物質を放射性同位元素で標識化
する方法を開発し、この方法によれば大量の被検
体を容易に処理することができることを見出して
本発明を完成するに至つた。
すなわち本発明は、放射性同位元素により標識
されたヘマトポルフイリン又はその誘導体を、体
外に取り出されたリンパ球と接触せしめ、該ヘマ
トポルフイリン又はその誘導体のうちリンパ球と
未反応のものを分離し、その後放射能を測定する
ことを特徴とする罹癌患者由来のリンパ球の測定
方法に関するものである。
されたヘマトポルフイリン又はその誘導体を、体
外に取り出されたリンパ球と接触せしめ、該ヘマ
トポルフイリン又はその誘導体のうちリンパ球と
未反応のものを分離し、その後放射能を測定する
ことを特徴とする罹癌患者由来のリンパ球の測定
方法に関するものである。
放射性同位元素を標識する化合物は、ヘマトポ
ルフイリン及びその誘導体である。誘導体はリン
パ球に対し親和性を有するものであり、例えば R1、R2、R3、R4、R5、R8は−CH3、−
CH2CH3、−CH（OH）CH3のいずれかであり、
R6、R7は −（CH2）oCOOH（ｎ＝２〜４）である。
ルフイリン及びその誘導体である。誘導体はリン
パ球に対し親和性を有するものであり、例えば R1、R2、R3、R4、R5、R8は−CH3、−
CH2CH3、−CH（OH）CH3のいずれかであり、
R6、R7は −（CH2）oCOOH（ｎ＝２〜４）である。
ＺはFe++、Co++、Mn++などの２価の金属原
子又は水素原子である。
子又は水素原子である。
などが含まれる。
本発明における最も重要な要件としてはこれら
の化合物が放射性同位元素で標識されていること
である。放射性同位元素は3H、14C、57Co、59Fe、
54Mnなどであり、これらの同位元素による標識
化は一般化合物を標識化する常法によつて行なう
ことができる。すなわち、例えばトリチウムの場
合には目的化合物とキヤリアーフリーのトリチウ
ムガスをアンプルに入れて密封した後、電離領域
中に２〜３週間程度放置すればよい。14Cの場合に
は常法によつて14C標識されたメチル基あるいは
エチル基を置換すればよく、２価の金属原子の場
合には目的化合物と放射性金属原子を室温下で１
〜２時間放置しておけばよい。
の化合物が放射性同位元素で標識されていること
である。放射性同位元素は3H、14C、57Co、59Fe、
54Mnなどであり、これらの同位元素による標識
化は一般化合物を標識化する常法によつて行なう
ことができる。すなわち、例えばトリチウムの場
合には目的化合物とキヤリアーフリーのトリチウ
ムガスをアンプルに入れて密封した後、電離領域
中に２〜３週間程度放置すればよい。14Cの場合に
は常法によつて14C標識されたメチル基あるいは
エチル基を置換すればよく、２価の金属原子の場
合には目的化合物と放射性金属原子を室温下で１
〜２時間放置しておけばよい。
リンパ球は被検者から採取したものである。本
発明の方法は癌の有無を検査するスクリーニング
方法として利用できるところに特徴があり、その
場合にはリンパ球は静脈等から採血した血液を用
いる。血液中にはマクロフアージが含まれている
が、このマクロフアージは前述の放射性同位元素
で標識されたヘマトポルフイリン又はその誘導体
（以下、「標識化合物」という。）を取込んで誤判
断の原因となるので、これを予め除去する必要が
ある。好ましい除去方法の例としては、シリカゲ
ルあるいはセフアデツクスなどに吸着させる方法
が一般的である。
発明の方法は癌の有無を検査するスクリーニング
方法として利用できるところに特徴があり、その
場合にはリンパ球は静脈等から採血した血液を用
いる。血液中にはマクロフアージが含まれている
が、このマクロフアージは前述の放射性同位元素
で標識されたヘマトポルフイリン又はその誘導体
（以下、「標識化合物」という。）を取込んで誤判
断の原因となるので、これを予め除去する必要が
ある。好ましい除去方法の例としては、シリカゲ
ルあるいはセフアデツクスなどに吸着させる方法
が一般的である。
シリカゲルに吸着させる場合には、全血に対し
８〜12％（ｖ／ｖ）程度になるようにシリカゲル
懸濁液を投入し、35〜38℃で８〜12分間必要によ
り撹拌しながら放置してシリカゲルにマクロフア
ージを吸着させ、比重遠心操作によりこのシリカ
ゲルを除去すればよい。セフアデツクスの場合に
は、セフアデツクスカラムに比重遠心法にて調製
した白血球（顆粒球、好中球、マクロフアージ、
リンパ球等を含む。）を投入すると、リンパ球以
外の細胞がセフアデツクスに吸着されるのでカラ
ムからの流出する素通り分画を集めればよい。
８〜12％（ｖ／ｖ）程度になるようにシリカゲル
懸濁液を投入し、35〜38℃で８〜12分間必要によ
り撹拌しながら放置してシリカゲルにマクロフア
ージを吸着させ、比重遠心操作によりこのシリカ
ゲルを除去すればよい。セフアデツクスの場合に
は、セフアデツクスカラムに比重遠心法にて調製
した白血球（顆粒球、好中球、マクロフアージ、
リンパ球等を含む。）を投入すると、リンパ球以
外の細胞がセフアデツクスに吸着されるのでカラ
ムからの流出する素通り分画を集めればよい。
リンパ球は測定精度を高めるために血液から分
離してから標識化合物と接触させるのがよい。分
離方法としては、例えば遠心法で比重分離すれば
よい。静脈から採血した血液中のリンパ球を検体
とする場合には癌の有無を検出しうるにとどま
り、癌の部位まで知ることはできないが、患部か
ら取り出した組織について本発明の方法を適用す
れば癌の部位も確認しうることはいうまでもな
い。
離してから標識化合物と接触させるのがよい。分
離方法としては、例えば遠心法で比重分離すれば
よい。静脈から採血した血液中のリンパ球を検体
とする場合には癌の有無を検出しうるにとどま
り、癌の部位まで知ることはできないが、患部か
ら取り出した組織について本発明の方法を適用す
れば癌の部位も確認しうることはいうまでもな
い。
標識化合物をリンパ球と接触させる方法として
は、標識化合物を104〜107cpm／0.1ml程度、好ま
しくは105〜106cpm／0.1ml程度の濃度にPH7.3〜
7.7程度のリン酸緩衝液等の緩衝液などに溶かし、
例えばその0.1mlにリン酸緩衝生理食塩溶液など
に105〜107個／0.5ml程度の濃度に浮遊させたリ
ンパ球液0.5mlを添加するだけでよい。この混合
液を35〜39℃で40〜80分間程度インキユベートし
て反応させる。
は、標識化合物を104〜107cpm／0.1ml程度、好ま
しくは105〜106cpm／0.1ml程度の濃度にPH7.3〜
7.7程度のリン酸緩衝液等の緩衝液などに溶かし、
例えばその0.1mlにリン酸緩衝生理食塩溶液など
に105〜107個／0.5ml程度の濃度に浮遊させたリ
ンパ球液0.5mlを添加するだけでよい。この混合
液を35〜39℃で40〜80分間程度インキユベートし
て反応させる。
反応後はリンパ球と反応した標識化合物と未反
応の標識化合物とを分離する。分離方法として
は、反応物と未反応物とで比重が異なるところか
ら例えば遠心して沈澱物と上清とを分離すればよ
い。沈澱物は必要によりリン酸緩衝生理食塩溶液
あるいは単なる生理食塩水などに懸濁して再度遠
心することにより洗浄を行なう。
応の標識化合物とを分離する。分離方法として
は、反応物と未反応物とで比重が異なるところか
ら例えば遠心して沈澱物と上清とを分離すればよ
い。沈澱物は必要によりリン酸緩衝生理食塩溶液
あるいは単なる生理食塩水などに懸濁して再度遠
心することにより洗浄を行なう。
次に、こうして分離された反応物又は未反応物
の放射能を測定する。放射能は公知の測定装置を
用いて測定すればよく、例えば、液体シンチレー
シヨンカウンターあるいは57Co、59Feなど該種に
よつてはガンマーシンチレーシヨンカウンターな
どを利用することができる。
の放射能を測定する。放射能は公知の測定装置を
用いて測定すればよく、例えば、液体シンチレー
シヨンカウンターあるいは57Co、59Feなど該種に
よつてはガンマーシンチレーシヨンカウンターな
どを利用することができる。
ヘマトポルフイリン等の癌組織に親和性を有す
る化合物は光感受性を有することが体外に取り出
した検体を測定する場合にはかえつて妨げになつ
ていた。すなわち、光化学反応により誘起される
螢光及びフリーラジカルは寿命が10-6秒以下と極
めて短かいために定量が難しく、また、紫外線あ
るいは螢光光度計を用いて定量する場合には細胞
自体による非特異的干渉がある。これに対し、本
発明の方法は細胞による非特異的干渉を全く受け
ず、癌検査を容易にかつ正確に行なうことができ
る。本発明の方法は一時に大量の検体を処理でき
るところから癌の定期検査等スクリーニングに多
大な威力を発揮しうるものである。
る化合物は光感受性を有することが体外に取り出
した検体を測定する場合にはかえつて妨げになつ
ていた。すなわち、光化学反応により誘起される
螢光及びフリーラジカルは寿命が10-6秒以下と極
めて短かいために定量が難しく、また、紫外線あ
るいは螢光光度計を用いて定量する場合には細胞
自体による非特異的干渉がある。これに対し、本
発明の方法は細胞による非特異的干渉を全く受け
ず、癌検査を容易にかつ正確に行なうことができ
る。本発明の方法は一時に大量の検体を処理でき
るところから癌の定期検査等スクリーニングに多
大な威力を発揮しうるものである。
以下、実施例を示す。
実施例 １
標識方法はトリチウムガス照射法により行なつ
た。
た。
ヘマトポルフイリン500mgをキヤリアフリーの
トリチウムガス15Ciとともにアンプルに入れて密
封した後、電離領域中に２〜３週間放置して標識
した。
トリチウムガス15Ciとともにアンプルに入れて密
封した後、電離領域中に２〜３週間放置して標識
した。
被検者の静脈から採血した血液にマクロフアー
ジ除去用シリカゲル懸濁液（KAC−２、(株)日本
抗体研究所（製））を全血に対して10％加え、37
℃で15分間インキユベートして顆粒球、好中球、
マクロフアージ等をシリカゲルに付着させた。こ
のシリカゲル処理血液５容量部に対し、
Separate−Ｌ（MUTO PURE Chemicals）３〜
４容量部を重層し、1500rpmにて20分間遠心にし
リンパ球を分離した。
ジ除去用シリカゲル懸濁液（KAC−２、(株)日本
抗体研究所（製））を全血に対して10％加え、37
℃で15分間インキユベートして顆粒球、好中球、
マクロフアージ等をシリカゲルに付着させた。こ
のシリカゲル処理血液５容量部に対し、
Separate−Ｌ（MUTO PURE Chemicals）３〜
４容量部を重層し、1500rpmにて20分間遠心にし
リンパ球を分離した。
前述の標識ヘマトポルフイリン１mgを2.0mlの
エタノールに溶解し、PH7.5の0.005mMリン酸緩
衝液を加えて30万cpm／0.1mlの濃度とした。一
方、リンパ球をPH7.5のリン酸緩衝生理食塩溶液
に106個／0.5mlに浮遊させ、この浮遊液0.5mlに標
識ヘマトポルフイリン溶液0.1mlを加えて37℃で
60分間インキユベートさせた。
エタノールに溶解し、PH7.5の0.005mMリン酸緩
衝液を加えて30万cpm／0.1mlの濃度とした。一
方、リンパ球をPH7.5のリン酸緩衝生理食塩溶液
に106個／0.5mlに浮遊させ、この浮遊液0.5mlに標
識ヘマトポルフイリン溶液0.1mlを加えて37℃で
60分間インキユベートさせた。
反応終了後、反応液を４℃に冷却し、1500rpm
にて５分間遠心後、上清を除去した。沈澱物であ
るヘマトポルフイリン結合リンパ球に生理食塩水
２mlを加えて懸濁後遠心洗浄操作を２回繰返して
から、遠沈管底部の沈澱物の放射線強度を液体シ
ンチレーシヨンカウンターにて測定した。
にて５分間遠心後、上清を除去した。沈澱物であ
るヘマトポルフイリン結合リンパ球に生理食塩水
２mlを加えて懸濁後遠心洗浄操作を２回繰返して
から、遠沈管底部の沈澱物の放射線強度を液体シ
ンチレーシヨンカウンターにて測定した。
健建常者20例及び消化器系ガン、卵巣ガン、子
宮ガンなどの各種ガン患者30例について得られた
結果を次に示す。なお、この値は健常者のリンパ
球を内標としたインデツクスで表示している。
宮ガンなどの各種ガン患者30例について得られた
結果を次に示す。なお、この値は健常者のリンパ
球を内標としたインデツクスで表示している。
正常者平均値0.98標準偏差0.29
ガン患者平均値2.54標準偏差0.75
実施例 ２
前記の化学式においてR1、R3、R5及びR8が−
CH3、R2及びR4が−CH（OH）CH3、R6及びR7
が−CH2CH2COOH、そしてＺが水素原子であ
る。ヘマトポルフイリン誘導体を実施例１と同様
にしてトリチウムを標識し、これを用いて実施例
１と同様にして同じ検体を測定した。
CH3、R2及びR4が−CH（OH）CH3、R6及びR7
が−CH2CH2COOH、そしてＺが水素原子であ
る。ヘマトポルフイリン誘導体を実施例１と同様
にしてトリチウムを標識し、これを用いて実施例
１と同様にして同じ検体を測定した。
測定結果の実施例１との相関関係はγ＝0.98、
スロープ1.05、インターセプト値0.15であり、実
施例１とほとんど変らない結果が得られた。
スロープ1.05、インターセプト値0.15であり、実
施例１とほとんど変らない結果が得られた。
Claims (1)
- １ 放射性同位元素により標識されたヘマトポル
フイリン又はその誘導体を、体外に取り出された
リンパ球と接触せしめ、該ヘマトポルフイリン又
はその誘導体のうちリンパ球と未反応のものを分
離し、その後放射能を測定することを特徴とする
罹癌患者由来のリンパ球の測定方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13361683A JPS6025452A (ja) | 1983-07-23 | 1983-07-23 | 罹癌患者由来のリンパ球の測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13361683A JPS6025452A (ja) | 1983-07-23 | 1983-07-23 | 罹癌患者由来のリンパ球の測定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6025452A JPS6025452A (ja) | 1985-02-08 |
| JPH0249663B2 true JPH0249663B2 (ja) | 1990-10-30 |
Family
ID=15108976
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13361683A Granted JPS6025452A (ja) | 1983-07-23 | 1983-07-23 | 罹癌患者由来のリンパ球の測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6025452A (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60135765A (ja) * | 1983-12-23 | 1985-07-19 | Jeol Ltd | 癌罹病由来のリンパ球の測定方法 |
| IT1204775B (it) * | 1986-01-31 | 1989-03-10 | Rosella Silvestrini | Kit per la determinazione dell'attivita' proliferativa nei tumori umani |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59208460A (ja) * | 1983-05-13 | 1984-11-26 | Jeol Ltd | 癌罹病に由来する細胞からの高ラジカルの発生を検知する方法 |
-
1983
- 1983-07-23 JP JP13361683A patent/JPS6025452A/ja active Granted
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS59208460A (ja) * | 1983-05-13 | 1984-11-26 | Jeol Ltd | 癌罹病に由来する細胞からの高ラジカルの発生を検知する方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6025452A (ja) | 1985-02-08 |
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