JPH0233358B2 - Guramusenshokuhoho - Google Patents
GuramusenshokuhohoInfo
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- JPH0233358B2 JPH0233358B2 JP11778081A JP11778081A JPH0233358B2 JP H0233358 B2 JPH0233358 B2 JP H0233358B2 JP 11778081 A JP11778081 A JP 11778081A JP 11778081 A JP11778081 A JP 11778081A JP H0233358 B2 JPH0233358 B2 JP H0233358B2
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Links
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Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明は新規なグラム染色方法、更に詳細に
は、グラム陽性菌の媒染とグラム陰性菌の脱色を
同時に行い、簡単な操作で、グラム陽陰性菌を明
瞭に鑑別することのできるグラム染色方法に関す
る。 細菌等の微生物はグラム陽性菌とグラム陰性菌
とに大別され、その染色性、形態及び配列の違い
により、ある程度の菌種名が推測される。 その鑑別法の中で最も価値があり、また最も広
く用いられているものの一つはグラム染色方法で
ある。グラム染色方法には種々の方法が提案され
ているが、その中で最も汎用されている方法はハ
ツカー（Hucker）の変法であり、微生物を先ず
パラローズアニリン系紫色色素（例えばクリスタ
ルバイオレツト、ゲンチアナバイオレツト等）で
前染色し、次いでルゴール液でグラム陽性菌を媒
染し、アルコールでグラム陽性菌の脱色を行い、
更にサフラニン又はフクシン液で対比染色する方
法である。 しかし、この方法は、媒染と脱色を別個に行
わなければならないので操作が煩雑である、ア
ルコールによる脱色操作において、その処理が不
充分であるとグラム陰性菌の脱色が完全に行われ
ず、また過度に行うとグラム陽性菌も脱色されて
しまう、媒染剤のルゴール液は光に対して不安
定であり、長期間の保存が不可能である、パラ
ローズアニリン系の紫色色素は対比染色の赤色色
素と対比し難い等の欠点があつた。 そこで、本発明者は、斯かる欠点を克服せんと
鋭意研究を行つた結果、前染色剤としてパラロー
ズアニリン系青色色素を使用し、ピクリン酸又は
その塩のアルコール溶液で媒染と脱色を同時に行
うことにより上記目的が達成されることを見出
し、本発明を完成した。 すなわち、本発明は、微生物をパラローズアニ
リン系青色色素で前染色し、次いでピクリン酸又
はその塩のアルコール溶液で処理してグラム陽性
菌の媒染とグラム陰性菌の脱色とを同時に行うグ
ラム染色方法である。 本発明方法を実施するには、まず常法に従つ
て、臨床材料、培養菌等をオブジエクトグラス等
に塗抹し、乾燥した後、火炎、エタノール、ホル
ムアルデヒド等で固定する。 次いで、これをパラローズアニリン系青色色素
で前染色する。パラローズアニリン系青色色素と
しては、例えばビクトリアブルーＢ等が挙げられ
る。当該色素は適当な溶剤に0.05〜１％溶解して
前染色液とし、これを上記オブジエクトグラス全
面に注ぐか、あるいはオブジエクトグラスを前染
色液に浸漬して前染色を行う。後者の場合には約
１分間の浸漬で充分に染色が行われる。 斯くして前染色した微生物は充分に水洗した
後、ピクリン酸又はその塩のアルコール溶液で処
理する。ピクリン酸又はその塩は通常１〜３％ア
ルコール溶液とするのが好ましい。当該処理は、
前染色を行つた微生物に前染色液が溶出しなくな
るまでピクリン酸又はその塩のアルコール溶液を
注ぐか、あるいは当該溶液にオブジエクトグラス
を出し入れする操作を前染色液が溶出しなくなる
まで行うことによつてなされる。斯くするとき、
ピクリン酸によつてグラム陽性菌は濃青色に染色
され、グラム陰性菌は脱色される。 次いで、更に常法に従つて、サフラニン液、フ
クシン液等で対比染色すればグラム陰性菌が赤色
に染色されるので、濃青色に染色されたグラム陽
性菌と明瞭に区別でき、グラム陽陰性菌の鑑別を
行うことができる。 叙上の如く、本発明方法は、グラム陽性菌は
濃青色に、グラム陰性菌は赤色に染色されるの
で、従来の濃紫色と赤色の対比に比較し明瞭に区
別できる、グラム陽性菌の媒染とグラム陰性菌
の脱色を同時に行い得るので、操作が簡単であ
る、ピクリン酸又はその塩のアルコール溶液に
過度に浸漬してもグラム陽性菌の青色は脱色され
ない、ピクリン酸又はその塩のアルコール溶液
は安定で長期間の保存が可能である等従来法に比
較し種々の利点を有する。 次に実施例を挙げて説明する。 実施例 １ 試薬： ○イ 前染色液 ビクトリアブルーB1ｇを純エタノール20ml
に溶解し（Ａ液）、またシユウ酸アンモニウム
0.8ｇを蒸留水80mlに溶解し（Ｂ液）、Ａ液及び
Ｂ液を混和して液する。 ○ロ 媒染脱色液 ピクリン酸２ｇを純エタノール100mlに溶解
する。 ○ハ 対比染色液 フクシン0.1ｇを蒸留水100mlに溶解し、過
する。 操作： 微生物をオブジエクトグラスに塗抹し、乾燥
後火炎で固定して微生物塗抹グラスとする。 前染色液をバツトに入れ、これに微生物塗抹
グラスを１分間浸漬する。 水洗し、水を充分にきる。 媒染脱色液をバツトに入れ、これに前染色し
た微生物塗抹グラスを出し入れし、この操作を
前染色液の溶出がなくなるまで行う。 水洗し、水を充分にきる。 対比染色液をバツトに入れ、これに媒染脱色
液で処理した微生物塗抹グラスを１分間浸漬す
る。 水洗、乾燥後鏡検する。 結果： グラム陽性菌は濃青色に、グラム陰性菌は赤色
に染色された。各菌のグラム染色性は第１表のと
おりである。 尚ハツカーの変法としては、前染色：クリスタ
ルバイオレツト、媒染：ルゴール液、脱色：エタ
ノール、対比染色：サフラニンを用いた。
は、グラム陽性菌の媒染とグラム陰性菌の脱色を
同時に行い、簡単な操作で、グラム陽陰性菌を明
瞭に鑑別することのできるグラム染色方法に関す
る。 細菌等の微生物はグラム陽性菌とグラム陰性菌
とに大別され、その染色性、形態及び配列の違い
により、ある程度の菌種名が推測される。 その鑑別法の中で最も価値があり、また最も広
く用いられているものの一つはグラム染色方法で
ある。グラム染色方法には種々の方法が提案され
ているが、その中で最も汎用されている方法はハ
ツカー（Hucker）の変法であり、微生物を先ず
パラローズアニリン系紫色色素（例えばクリスタ
ルバイオレツト、ゲンチアナバイオレツト等）で
前染色し、次いでルゴール液でグラム陽性菌を媒
染し、アルコールでグラム陽性菌の脱色を行い、
更にサフラニン又はフクシン液で対比染色する方
法である。 しかし、この方法は、媒染と脱色を別個に行
わなければならないので操作が煩雑である、ア
ルコールによる脱色操作において、その処理が不
充分であるとグラム陰性菌の脱色が完全に行われ
ず、また過度に行うとグラム陽性菌も脱色されて
しまう、媒染剤のルゴール液は光に対して不安
定であり、長期間の保存が不可能である、パラ
ローズアニリン系の紫色色素は対比染色の赤色色
素と対比し難い等の欠点があつた。 そこで、本発明者は、斯かる欠点を克服せんと
鋭意研究を行つた結果、前染色剤としてパラロー
ズアニリン系青色色素を使用し、ピクリン酸又は
その塩のアルコール溶液で媒染と脱色を同時に行
うことにより上記目的が達成されることを見出
し、本発明を完成した。 すなわち、本発明は、微生物をパラローズアニ
リン系青色色素で前染色し、次いでピクリン酸又
はその塩のアルコール溶液で処理してグラム陽性
菌の媒染とグラム陰性菌の脱色とを同時に行うグ
ラム染色方法である。 本発明方法を実施するには、まず常法に従つ
て、臨床材料、培養菌等をオブジエクトグラス等
に塗抹し、乾燥した後、火炎、エタノール、ホル
ムアルデヒド等で固定する。 次いで、これをパラローズアニリン系青色色素
で前染色する。パラローズアニリン系青色色素と
しては、例えばビクトリアブルーＢ等が挙げられ
る。当該色素は適当な溶剤に0.05〜１％溶解して
前染色液とし、これを上記オブジエクトグラス全
面に注ぐか、あるいはオブジエクトグラスを前染
色液に浸漬して前染色を行う。後者の場合には約
１分間の浸漬で充分に染色が行われる。 斯くして前染色した微生物は充分に水洗した
後、ピクリン酸又はその塩のアルコール溶液で処
理する。ピクリン酸又はその塩は通常１〜３％ア
ルコール溶液とするのが好ましい。当該処理は、
前染色を行つた微生物に前染色液が溶出しなくな
るまでピクリン酸又はその塩のアルコール溶液を
注ぐか、あるいは当該溶液にオブジエクトグラス
を出し入れする操作を前染色液が溶出しなくなる
まで行うことによつてなされる。斯くするとき、
ピクリン酸によつてグラム陽性菌は濃青色に染色
され、グラム陰性菌は脱色される。 次いで、更に常法に従つて、サフラニン液、フ
クシン液等で対比染色すればグラム陰性菌が赤色
に染色されるので、濃青色に染色されたグラム陽
性菌と明瞭に区別でき、グラム陽陰性菌の鑑別を
行うことができる。 叙上の如く、本発明方法は、グラム陽性菌は
濃青色に、グラム陰性菌は赤色に染色されるの
で、従来の濃紫色と赤色の対比に比較し明瞭に区
別できる、グラム陽性菌の媒染とグラム陰性菌
の脱色を同時に行い得るので、操作が簡単であ
る、ピクリン酸又はその塩のアルコール溶液に
過度に浸漬してもグラム陽性菌の青色は脱色され
ない、ピクリン酸又はその塩のアルコール溶液
は安定で長期間の保存が可能である等従来法に比
較し種々の利点を有する。 次に実施例を挙げて説明する。 実施例 １ 試薬： ○イ 前染色液 ビクトリアブルーB1ｇを純エタノール20ml
に溶解し（Ａ液）、またシユウ酸アンモニウム
0.8ｇを蒸留水80mlに溶解し（Ｂ液）、Ａ液及び
Ｂ液を混和して液する。 ○ロ 媒染脱色液 ピクリン酸２ｇを純エタノール100mlに溶解
する。 ○ハ 対比染色液 フクシン0.1ｇを蒸留水100mlに溶解し、過
する。 操作： 微生物をオブジエクトグラスに塗抹し、乾燥
後火炎で固定して微生物塗抹グラスとする。 前染色液をバツトに入れ、これに微生物塗抹
グラスを１分間浸漬する。 水洗し、水を充分にきる。 媒染脱色液をバツトに入れ、これに前染色し
た微生物塗抹グラスを出し入れし、この操作を
前染色液の溶出がなくなるまで行う。 水洗し、水を充分にきる。 対比染色液をバツトに入れ、これに媒染脱色
液で処理した微生物塗抹グラスを１分間浸漬す
る。 水洗、乾燥後鏡検する。 結果： グラム陽性菌は濃青色に、グラム陰性菌は赤色
に染色された。各菌のグラム染色性は第１表のと
おりである。 尚ハツカーの変法としては、前染色：クリスタ
ルバイオレツト、媒染：ルゴール液、脱色：エタ
ノール、対比染色：サフラニンを用いた。
【表】
【表】
実施例 ２
本発明法（実施例１と同じ）と第２表に示す比
較法１及び２によつて行つた結果は第３表のとお
りである。
較法１及び２によつて行つた結果は第３表のとお
りである。
【表】
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 微生物をパラローズアニリン系青色色素で前
染色し、次いでピクリン酸又はその塩のアルコー
ル溶液で処理してグラム陽性菌の媒染とグラム陰
性菌の脱色とを同時に行うことを特徴とするグラ
ム染色方法。 ２ 更に対比染色を行う特許請求の範囲第１項記
載のグラム染色方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11778081A JPH0233358B2 (ja) | 1981-07-29 | 1981-07-29 | Guramusenshokuhoho |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11778081A JPH0233358B2 (ja) | 1981-07-29 | 1981-07-29 | Guramusenshokuhoho |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5820198A JPS5820198A (ja) | 1983-02-05 |
| JPH0233358B2 true JPH0233358B2 (ja) | 1990-07-26 |
Family
ID=14720129
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11778081A Expired - Lifetime JPH0233358B2 (ja) | 1981-07-29 | 1981-07-29 | Guramusenshokuhoho |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0233358B2 (ja) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6250494A (ja) * | 1985-08-30 | 1987-03-05 | Daido Steel Co Ltd | 電気亜鉛めっき用通電ロール |
| US4916061A (en) * | 1987-12-14 | 1990-04-10 | Fisher Scientific Company | Gram staining method and kit |
| CN104245955B (zh) | 2012-03-19 | 2018-03-16 | 文塔纳医疗系统公司 | 改进了对革兰氏阴性细菌的结晶紫‑碘复合物的脱色的革兰氏染色方法 |
| CN108593392B (zh) * | 2018-01-26 | 2020-09-04 | 广州江元医疗科技有限公司 | 一种阴道分泌物染色液及其制备方法 |
-
1981
- 1981-07-29 JP JP11778081A patent/JPH0233358B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5820198A (ja) | 1983-02-05 |
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