JPH0231676A - ミデカマイシン耐性遺伝子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、ミデカマイシン耐性遺伝子に閃するものであ
る。

（従来の技術及び発明が解決しようとする問題点）放線
菌は、抗生物質をはじめとする有用物質の生産菌として
微生物工業に於て広く使用されて（する最も重要な醗酵
微生物である。

ところで、ストレプトマイセス・マイカロ７アシエンス
Ｓ　Ｆ　−８３７（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｍｙｃ
ａｒｏｆａｅｅｎｓＳＦ−８３７）株の好気培養によっ
て生産される抗生物質（特公昭４Ｇ−２８８３４号公報
）は［Ｓ「−８３７物質１あるいは［ミデカマイシンＡ
、Ｊという名称で知られていて、ダラム陽性菌に抗菌力
を有する抗生物質であり、特に抗生物質耐性化原菌に対
してすぐれた抗菌力を有している。

当然ながら本菌はミデカマイシンに対する自己耐性を有
している。このミデカマイシン耐性遺伝子を含むＤＮＡ
断片を単離すれば、放線菌の育種あるいは遺伝解析など
に極めて価値ある結果が期待できる。

（問題点を解決するための手段） 本発明者らは、放線菌を宿主として放ａｍ由来のプラス
ミドを用いた系でストレプトマイセス・マイカロアアシ
エン７、染色体ＤＮＡからミデカマイシン耐性遺伝子を
含むＤ　Ｎ　Ａ断片をそれぞれ単離すると共にミデカマ
イシン耐性という遺伝的指標を有するプラスミドの構築
に成功した。

すなわち、本発明によるミデカマイシン耐性遺伝子は、
第１図に示すストレプトマイセス・マイカロ７アシエン
ス（ＳｊｒｅｐｔｏＩＩＩｙｃｅｓ　ｍｙｃａｒｏｆａ
ｃｉｅｎｓ）の染色体ＤＮＡを制限酵素Ｒａｍ旧で切断
して得られる１゜５キロベースの断片に対応するＤＮＡ
中に含まれる。

（遺伝子の定義） 本発明によるミデカマイシン（以下、Ｈｄ＋ａという）
耐性遺伝子は、ストレプトマイセス（Ｓ）・マイカロア
アシエン基の染色体ＤＮＡを制限酵素Ｂａｍ旧で切断し
て得られる１、５キロベースの断片に対応するＤＮＡ中
に含まれ、またその制限酵素切断地図は第１図に示した
通りのものである。

ここで、［第１図に示すＳ、マイカロアアシエン基の染
色体ＤＮＡを制限酵素Ｂａｍ１ｌｌで切断して得られる
１、５キロベースの断片に対応するＤＮＡＪとは、この
Ｂａｍ１ｌｌ切断断片そのものの外に、それと同じ塩基
配列のＤＮＡおよびその縮重異性体ならびにその遺伝的
に等価な改変体をも意味するものである。後者のＤＮＡ
の具体例は、Ｓ、マイカロアアシエン基の変異株のＢａ
ａ＋旧−切断断片および合成りＮＡである。ここで、［
縮重異性体Ｊとは縮重関係にある塩基配列において異な
る異性体を、主な「遺伝的に等価な改変体」とは塩基の
置換、付加あるいは削除がなされていても帯有遺伝情報
に実質的に差がないＤＮＡを意味するものである。従っ
て、そのようなり　Ｎ　Ａ中に含まれるべき本発明によ
るミデカマイシン耐性遺伝子ら、その塩基配列に関して
同様の許容度を持つものである。

本発明によるＨｄ−耐性遺伝子の好ましい具体例は、Ｓ
、マイカロアアシエン基またはその変異株の染色体ＤＮ
Ａを制限酵素Ｂａｗｌ（Ｉで切断して得られる１、５斗
ロベース（Ｋｂ）の断片に含まれるものである。

（遺伝子の生産） 本発明によるＭｃｌ−耐性遺伝子は人工的に合成しても
よいが、Ｓ、マイカロアアシエン基またはその変異株か
ら得るのがふつうである。

（１）生産菌 ＤＮＡ供与体としてのＨｄｗａ生産菌は、ストレプトマ
イセス・マイカロアアシエン基またはその変異株である
。

Ｓ、マイカロアアシエン基としては、Ｓ、マイカロア７
シエンスＳＦ　　８３７株がある。この菌は、ストレプ
トマイセス・マイカロアアシエン基・ノブ・エスピーと
して微生物工業技術研究所に寄託されている（ＦＥＲＮ
−Ｐ　２６２）。また、アメリカン・タイプ・カルチャ
ー・コレクシ３ンに＾ＴＣＣ２１４５４として寄託され
ていて分譲可能な状態にある。

Ｓ、マイカロアアシエン基の変異株としては、本発明の
性質からいって、第１図に示した制限酵素切断地図を与
えるＤＮＡを有するものである神←÷去４゜ （２）遺伝子のクローニング 選んだ）４ｄｍ生産菌の菌体より、全Ｄ　Ｎ　Ａを５Ｄ
Ｓ−７エ／−ル法（Ｍ、Ｃ，Ｓｍ１ｔｈ　ｅｔ　ａｔ、
：Ｍｅｊｈｏｄｓ　ｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ　１２ｔ
　５４５（１９６７））などの公知の方法で抽出する。

抽出されたＤＮＡを制限酵素Ｄａｍ旧で切断すれば、目
的の遺伝子含有ＤＮＡ断片が各種のＤＮＡ断片と共に得
られる。

このようにして得られるＤ　Ｎ　Ａ断片混合物から目的
の遺伝子含有断片を取出ししがもこれを多量に得るため
には、ベクターとしての適当なウィルス性または環状プ
ラスミドへの組込みおよび生成ハイブリッドプラスミド
による宿主菌の形質転換、形質導入またはトランスフェ
クションを含む遺伝子組換え技術を利用することができ
る６一般的な遺伝子組換え技術に関しては、たとえば、
高木康敬著「遺伝子操作実験法」（講談社）を参照する
ことができる。

その上うな組換え技術の一例を挙げれば、下記の通りで
ある。すなわち、上記の供与体ＤＮＡのＢａｍ１ｌｌに
よる切断の際にベクタープラスミドを共存させておいて
このベクタープラスミドも同時にＢａｍ旧部位で切断す
るか、あるいはこのベクタープラスミドを別にＢａｍｔ
ｌｌで切断しておいてから上記供与体ＤＮＡのＢａｍ１
ｌｌ切断物と混合し、適当なりガーゼたとえばＴ４す〃
−ゼで処理して、ベクタープラスミドにＳ、マイカロア
７シエンスＳＦ　　８３７のＤＮＡＩｒ片を組込んだキ
メラプラスミドを含むプラスミド混合物を得る。この場
合に使用しうるベクタープラスミドとしては、　Ｂａｍ
旧切断部位を有していると共にＢａ１ｏｌｌｌで切断さ
れたときに増殖可能な断片を与えるものが一般に適当で
ある。

その由来は放線菌、大腸菌、枯草菌その池の合目的な微
生物であリウるが、具体例を挙げれば放線菌由来のもの
としてｐｌＪ７０２（、Ｊｏｈｎ　１ｎｎｅｓ研究所よ
り入手可能。文献：Ｊ、Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｎｉｃｒｏｂ
ｉｏｌｏｇｙ＋　１２Ｌ２７０３−２７１４（１９８３
））およびｐｌＪ６８０（Ｊｏｈｎ　ＩｎｎｅｓＭ究所
より入手可能。文献：　Ｇｅｎｅｔｉｃ　Ｍａｎｉｐｕ
ｌａｔｉｏｎｏｆ　Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　Ａ　Ｌ
ａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ　（１９８５））、
その池がある。宿主菌から目的プラスミドを取得するに
は、上記文献の記載の技術その池遺伝子組換えに慣用さ
れているところに従えばよい。　次に、得られたプラス
ミド混合物により宿主菌を形質転換させる。宿主菌とし
ては、用いるベクターの種類に応じて、放線菌、大腸菌
、枯草菌その池の微生物の中から適当なもの、就中形質
転換効率がよ（、Ｍｄｍに対する感受性の高いものを選
べばよい。

ベクターが放線菌プラスミドである場合の宿主菌として
は放線菌が使用されるが、その場合の艮体例としてはＳ
、リビダンス６６（ＦＥＲＮ　ＣＰ−７３７）が挙げら
れる。

Ｍｄ輪生産菌のＤＮＡ断片を組込んだベクターを宿主菌
に導入するためには、宿主菌やベクターの種類によって
最も効率のよい方法が選ばれるが、放線菌のプラスミド
ベクターを使用する場合は、宿主菌のプロトプラストを
形質転換するのが最も一般的な方法である。

形質転換によって得られた組換え体の選別には、用いる
ベクターの保有する遺伝的指標、例えば、抗生物質耐性
、ポック形＊（ＨｏＪ、Ｂｉｂｂｅｔａｌ、：　Ｍｏ１
ｅｃ。

（：ｅｎ、ｆ；ｅｎｅＬ、　　１５４．　１５５　　（
１９７７）、　　Ｎａｔｕｒｅ　　２７４＋　　３９８
（１９７８））等が利用できる。

このようにして得られた組換え体よりＭｃ１ｍ耐性遺伝
子を含むものを選別するためには、？ｋ１ｍ耐性の発現
によって生じたＨｄｍ耐性株の選別を行なうのが最ら効
率的である。そのためには、先ずＭｄｍの宿主菌に対す
る最小阻止濃度を調べ、その濃度以上のＨａ−を含む選
択培地で生訂するクローンを選別する。

得られたＨｃｌ■耐性クローンを培養し、菌体より公知
の方法（Ｈａｎｓｅｎ　ｅｔ　ａｔ、：　Ｊ、Ｂａｃｔ
ｅｒｉｏｌ、ｔ　１３５．．２２７、　（１９７８））
によってプラスミドを単離、制限酵素処理によって挿入
ＤＮＡ断片を取り出し、アガロースデル電気泳動によっ
てＭｄｍ耐性遺伝子を含むＤＮＡ断片を単離することが
できる。なお、　Ｍｃ１ｍ耐性遺伝子のクローンである
ことの確認は、単離したプラスミドを再び宿主菌に導入
してＭｄｗ耐性の発現を調べることによって行なえばよ
い。

得られたＤＮＡ断片を各種制限酵素によって更に切断し
、７〃ロースゲル電気泳動を行なって各断片の大きさを
分析することにより、制限酵素切断地図を作成すること
ができ、更に各断片を適当なベクターに組込んで、再ク
ローニングを行なうことによ’）、Ｍｄｍ耐性遺伝子の
構造解析を行なって、その特性を明らかにすることがで
きる。本発明のＭｄｍ耐性遺伝子を含むＤ　Ｎ　Ａの制
限酵素切断地図が第１図に示す通りであることは前記し
たところである。

（バイブリドプラスミド） Ｈｄｍ耐性遺伝子を組込むべきベクタープラスミドが放
線菌プラスミドである場合のハイブリッドプラスミドの
具体例は、クローニングに関連して既に前記した通りで
ある。

ハイブリッドプラスミドの具体例の一つは、ｐＨ５Ｈ・
１である。Ｉ）１４ｍＭ−１は、放線菌プラスミドｐｌ
Ｊ６８０（５，３Ｋｂ）ｌ：Ｈｄｍ耐性遺伝子を含む１
，５ＫｂノＤ　Ｎ　Ａ　１片を連結してなる放線菌プラ
スミド（６，８Ｋｂ）である（第２図）。このプラスミ
ドは、それによって形質転換された菌として徽工研に寄
託されている（ＦＥＲＮ　Ｐ−１０１０２）。

これらの１４ｄ鶴耐性プラスミドは、それぞれで対応宿
主菌を形質転換させると、宿主菌にＭｃｉｍ耐性を発現
させることができる。たとえば、本発明の１４ｄ纏耐性
遺伝子を含むＤＮＡｌｌｉ片を放線菌プラスミドｐｌＪ
６８０に組込んだ９ＭＳ１４−１（第２図）でストシブ
１マイセス・リビダンス６６を形質転換させると８００
μｇ／−１のＭ（１−耐性を示す組換え体が得られた。

Ｘ塞舛上 ストレフトマイセス・マイガロファシェンス５Ｆ−８３
フ株（ＡＴＣＣ２１４５４）　ヲＴ　Ｓ　Ｂ　培地（Ｄ
ｉｆｃ。

Ｔｒｙｐｔｉｅ　Ｓｏｙ　Ｂｒｏｔｈ　　３．０％）５
−１に植菌し、３０℃で２４時間培養し、これを種菌と
して５ＧＧＰ培地に３％植菌量で植えついだ。５ＧＧＰ
培地は、０．４％バクトベブトン、０．４％イーストエ
キストラクト、１．０％グルコース、Ｏ，ＯＳ％軸ＳＯ
，・７Ｈ２０，０，０１１４に８□Ｐ０４、ｐＨ７，０
〜７．２（５０論１）にグリシン３％を添加したもので
ある。これを３０°Ｃで２４時間振盪培養に付し、１０
０００　Ｘ　ｇ／　１０分間の遠心分離で集菌した。

この菌体からスミス等の公知の方法（Ｍｅｔｈｏｄｓ　
ｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ　１２−＋　５４５．　（１
９６７））で全ＤＮＡを抽出精製し、ＴＥＳＬバｙ　７
７−　（１０＠ＩＮ　Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ　ｐｉｆ８．０
．　］ｍＭＥＤＴＡ、　２．５ｍＭ　ＮａＣ１）で透析
して供与体ＤＮＡとした。

この様にして得た供与体ＤＮＡｌ０μｇを、総量２００
μ＆の５ＱＩｌＩＨＴｒｉｓ４Ｃ１ｐＨ７，５，１００
ＬａＨＮａＣｌ、１０ｍＨｓｇｃ　ｌ　２．１−ジチオ
入レイトール組成の反応液中で制限酵素ＢａｍＨ１１０
単位を加えて、３７℃で２時間反応させた。

プラスミドｐｌＪ６８０Ｄ　Ｎ　Ａ　　２μｇを、総ｊ
１４０μｌの５０Ｉ＊ｌ４Ｔｒｉｓ−ＨＣＩ　ＤＨ７，
５，１００ｍＭ　ＨａＣｌ、１０Ｊ　１４［１ｃ１２．
１ｍＭジチオスレイトール組成の反応液中で制限酵素Ｄ
ａｍ旧２単２単位えて、３７℃で２時間反応させた。

これを７０℃で１０分間加熱して酵素を失活させてか呟
１／２０１の１８　ｂｉｓ−）ＩＣＩ　ｐＨ９，０を添
加し、カーフ・インテスチン・フルカライン・ホスファ
ターゼ（ｃ、ｉ、ａ、ｐ）を１０単位加えて、３７℃で
６０分間反応を行なった。

供与体ＤＮＡおよびプラスミドＤ　Ｎ　Ａの反応液のそ
れぞれにＴＥＳＨハフ　７７−（０，２８Ｔｒｉｓ−Ｈ
ＣＩｐＨ８，０，２０ｍ１４　ＥＤＴ＾、　５０ＩＩＭ
ＮａＣ１）が飽和した７工７−ル溶浪を等量ずつ加えて
１分間振盪し、両方の液を合併した。これを１１０００
０Ｘ／　５分間の遠心分離後、上層（水層）をパスツー
ルピペットで取り出した。

ＤＮＡを含むこの水層部分をエチルエーテル抽出に付し
、フェノールを除去してから２倍量のエタノール、１／
１０ｉの３Ｍ酢酸ナトリウムを加え、−８０℃に２時間
放置後、１００００　Ｘ　ｇ／　１０分後の遠心分離で
ＤＮＡを沈澱させた。

この様にして得たＤＮＡを５００μｌのエタノールで洗
浄し、減圧下で乾燥してから、５０μｐの加熱滅菌した
純水に溶解した。このＤＮＡを７０℃で１０分間加熱処
理し、ついで室温まで徐冷し、バッファー（０，６６Ｈ
Ｔｒｉｓ−１１ｃＩ　ｐ）１７．６．６ＥｎＨＭｇＣｌ
□、　０．１Ｍジチオスレ、イｔ−ル、　１０ｍＨＡＴ
Ｐ）５μｌとＴ４リガーゼｌＯ単位とを加えて２２℃で
４時間反応させて１．ＩＪ６８０とストレプトマイセス
・マイカロ７アシェンスＤＮＡとの岨換え体ＤＮＡを調
製した。

このＤＮＡによる宿主菌ストレプトマイセス・リビダン
ス６６（Ｌｏｇ＋ｏｖｓｋａｙａ　ｅｔ　ａｌ、：　に
ｅｎｅｔｉｃｓ＋　６８゜３４１、　（１９７１））の
形質転換は、チエイタ−等の公知の方法（Ｃｕｒｒ、　
Ｔｏｐｉｃｓ　Ｈｉｃｒｏｂｉｏｌ、　Ｉａ−ｕｎｏｌ
、＋　９６゜６９（１９８１＞）　ｌこより行なった。

すなわち、５０ｍ　ｌのＹＥＭＥ培地（３４％シタ糖、
０．３％イーストエキストラクト、０．５％バクトベブ
トン、０．３％マルトエキストラク）、１％グルコース
＋　５ｍ１４　ＭｇＣｌ□、０゜５％グリシン、　ｐＨ
７，０）ｌこストレプトマイセス・すビダンス６６を接
種して３０°Ｃで３６時間振盪培養を行ない、１１００
００Ｘの遠心分離で菌糸を集めて１０．３％シシ糖溶液
で１回洗浄したのち、１抛１のＰ培地（０，３８シヨ糖
＋　１．４ｍ１４　Ｋ２ＳＯ４１１０１ＩＨ１０１ＩＨ
＋　０．４論８ＫＩＩ２ＰＯ１，２５１１ＨＣａＣ１２
，２５＋Ｑ１４　ＴＥＳ緩衝液、　ｐＨ７，２゜１１５
００量微量元素溶Ｈ）に懸濁させた。次いで、最終濃度
１１１ｇ／ｍｌになるように卵白リゾチームを加え、３
０℃に３０分間保温してプロトプラストを形成させ、プ
ロトプラスト化しなかった菌糸は綿濾過で除去した。８
００Ｘｇ／７分間の遠心分離によってプロトプラストを
集め、Ｐ培地で１回洗浄してから２０ｍ　ｌのＰ培地に
懸濁させた（微量元素溶液の組成（１リットル中：　４
０ｍｇ　２ｎＣ１□、　２００ｍｇ　ＦｅＣｌ、　・６
８２０、　１０＋＋ｇ　　ＣｕＣｌ２　・２１１２０＋
　　１０ｓ＋ｇ　ｌ’１ｎｃＩ２＠　４＋１２０．　１
０ｍｇＮａＪ＋Ｏｔ　・１０ＬＯ＋　１０１１１１　（
Ｎｆｌ＋）ＪＯｔ０２＋　６４ＬＯ））＝プロトプラス
ト液１００μｍ、　３／２濃度に調製したＰ−マレイン
酸緩衝液（２，５％シタ糖、　１．４ｍ１４　Ｋ２Ｓ０
．。

１１５００量微量元素溶液、　１００ｍＭ　ＣａＣＬ、
　５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ−マレイン酸、　ｐＨ８，０）　
１００μ！１組換え体ＤＮＡ溶液５０μｌおよ１３７５
μｌのポリエチレングリコール溶液（ポリエチレングリ
コール＃１０００３３％／Ｐ−マレイン酸緩衝液）を混
合し、１分間室温放置する。このプロトプラスト液を０
．１ｍｌずつ６枚の直径９ｃＩ＋１円形プラスチック製
ベトリ皿に調製したＲ２ＹＥ寒天培地（０，３Ｍシタ糖
、１．’ｂ＋ｌ’ｌ　Ｋ２ＳＯ４，５０ＪＭｇＣ１２，
１％グルフース、　０．０１％カザミノ酸、１．’５０
量？ａ量元素溶液、　０．４Ｊ　ＫＨ２ＰＯ１，２０１
＋１８　ＣａＣｌ２゜０．３％プロリン、　２５Ｊ　Ｔ
ＥＳ緩衝液ｒ　ｐ１４７．２＋　　５ｍＭＮａ０Ｉ１．
０．５％イーストエキストラクト、２．２％寒天）にそ
れぞれ塗布して３０°Ｃで１日培養後、チオストレプト
ン２００μｇ／ｍｌを含む滅菌水を重層し、さらに４日
間培養した。プロトプラストから再生した寒天培地上の
菌を、ミデカマイシン１００μ２だ虐を含むＮＡ培地（
Ｄｉｆｃｏ　Ｎｕｔｒｉｅｎｔ　Ａｇａｒ　２．３％）
にビロード布を用いてそれぞれレプリカして、３０°Ｃ
で２日間培養した。この結果、２個のミデカマイシン耐
性クローン株が得られ、選択培地りのこれらのフロニー
をそれぞれエーゼでか島取り、ガラス製ボッターホモジ
ナイザーを用いて滅菌水０．１〜０．２ｍｌに分散させ
、これをＲ２ＹＥ培地に塗布して３０’Ｃで５日問培養
した。

得られた２株のミデカマイシン耐性ストレプトマイセス
・リビダンス６６を各々５０論１のＹ　Ｅ　Ｍ　Ｅ培地
に接種し、３０℃で２日間振盪培養した培養菌体からハ
ンセン等による公知の方法（Ｊ、Ｂａｅｔｅｒｉｏｌ。

１３５、２２７（１９７８））でプラスミドを抽出した
。これらのプラスミドにより再びストレプトマイセス・
リビダンス６６を形質転換させた場合、いずれもミデカ
マイシン耐性が発現した。２株から得たプラスミドを制
限酵素Ｂａ醜旧で切断し、０．８％ア〃ロース電気泳動
により調べたところ、いずれも５．３ＫｂのｐｌＪ６８
０の他に、１．５ＫｂのＤＮＡ断片が認められた。

更に、これらのプラスミドをＢｇｌ　ＩＩ　、ＥｅｏＲ
Ｉなどの制限酵素で切断して詳しく調べたところ、１．
５ＫｂのＤＮＡ断片がプラスミドｐｌＪ６８０に対して
組込まれている方向性は一定ではなかった。しかし、１
．５ＫｂＤＮＡの挿入方向が異なる２種類のプラスミド
で形質転換したストレプトマイセス・リビダンス６６の
ミデカマイシンに対する耐性度はいずれも８００μｇ／
Ｉｌ＋であって、挿入方向の違いによる耐性度の変化は
なかった。

また、このミデカマイシン耐性又トレブトマイセス・リ
ビダンス６６はエリスロマイシン（こ対しても耐性を示
した。

１．５ＫｂＤＮＡ中１こコードされるミテ゛力°ンイシ
ン耐性遺伝子の制限酵素地図を第１図に示し、またこの
ＤＮＡ断片を組込んだｐ［Ｊ６８０をｐｔ４ｓＨ−１と
命名して第２図にその制限酵素地図を示した。

（関連微生物の寄託） 本発明によろミデカマイシン耐性遺伝子を組込んだプラ
スミドによって形質転換された微生物。

すなわちストレプトマイセス・リビダンス６６（ｐｕｓ
Ｍ−１）は、ＦＥＲＮ　Ｐ−１０１０２として工業技術
院微生物工業技術研究所（ｉ工研）に寄託されている。

この微生物の菌学的性質は導入されているプラスミドｐ
ＮｓＮ　−１に基因するものを除けば、ホスト微生物の
ストレプトマイセス・リビダンス６６のそれと変わらな
い。このストレプトマイセス・リビダンス６６の菌学的
性質は、特開昭５９−１７５８８９号公報およびＪ。

ｏｆ　Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、　９．２５８（１９７２）に
開示されており、またこの微生物はＦＥＲＮ　ＢＰ−７
３７として徽工研に寄託されている。

本発明によるミデカマイシン耐性遺伝子の供与体である
ストレプトマイセス・マイカロ７アシエンス５Ｆ−８３
７は微生物工業技術研究所に寄託されている（ＦＥＲＮ
−Ｐ　２６２）。また、アメリカン・タイプ・カルチャ
ー・フレクシタンにＡＴＣＣ２１４５４として寄託され
ていて分譲可能な状態にある。

（発明の効果） 本発明によるミデカマイシン耐性マーカーを有する７リ
スミドは、抗生物質などの有用物質の生産菌である放線
菌を宿主とする組換えＤＮＡ実験のベクターとして利用
することかできる。又このような放線菌宿主−ベクター
系による組換えＤＮＡ実験によって放線菌の育種あるい
は遺伝解析などを行な）ことにより、極めて価値ある結
果が期待できる。さらに、ミデカマイシン生産菌の生産
性向上に利用することができる。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明にかかわるミデカマイシン耐性遺伝子
の制限酵素切断地図を示す。 第２図は、本発明によるプラスミドｐＭｓＭ−１の制限
酵素切断地図を示す。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）第１図に示すストレプトマイセス・マイカロフア
   シエンスの染色体ＤＮＡを制限酵素ＢａｍＨＩで切断し
   て得られる１．５キロベースの断片に対応するＤＮＡ中
   に含まれるミデカマイシン耐性遺伝子。