JPH02204418A - ソマトトロピン製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明（儂、長期間に亘りてソマトトロピン全コントロ
ールして放出するソマトトロピンの投与法、よジ詳ａン
こは、ソマトトロピンの放ｍをコントロルして動物にソ
マトトロピンｋ　投’ｉ　ｆるための改良式７２．た＃
ｉ放物に関する。

長期間に亘ってソマトトロピンを放出するソマトトロピ
ンの多数の非経口投与法が＋ｂ′、案さｔＬ　ＴＩＪい
る。このような投与システムが有効でめるためには、い
くつかの要求ｔ？１ｌ１１１だす必要がある。即ち、第
１に目的とする生物学的幼来葡発揮するのＱ゛こ十分な
程度に薬物の放出速度が早くなければならない。第２に
オーバー・ドーズを避けるのにおるいは薬物の無駄な消
費金避けるのに十分な程度に薬物の放出速度が遅くなけ
れはならない。第３に目的とする生物学的効果音発揮す
るのに十分な迷夏で長期間に亘って禁物が放出されるよ
うに薬物の投与讐が十分でなければならない。第４に非
経口投与用に便利なようにその投与谷麓が少ｌ〈なけれ
ばならない。

ポリペプチドは、それぞれその６次元構造及び他の物質
との相互作用が相違するため、適当なビークル中でポリ
ペプチドを長期間に亘って有効に放出できるｊｌｌｉＪ
能性茫予測することは：不ｒ＝ｆ能である。

しかしながら、ポリペプチドの生物学的活性盆錯効に且
つ経済的方法で発揮ざセ−るためＫは、多くの場合ポリ
ペプチドを長期間に亘って放出でさる組成物の開発が必
要でおる。

ソマトトロピンｔコントロールして放出する１つのアグ
ローテとして、体液中に吸収される速度を遅くするよう
な注射町ＭＩ　Ｚもしくは移植可能なマトリックス組成
物中にソマトトロピンを製剤化する方法である。このよ
りな方法では、ソマトトロピンを抗水和剤の任意の存在
下で生体適付性オイル中に分散させる（欧州時計公開番
号１７７．４７８二１９８６年４月９日公開）。ソマト
トロピンは、デキストリン、デキストラン、各種の大豆
ガムなどの水浴解性もしくは水分散性のカーボハイドレ
ートｚｖマ・−と混合し、得らノ′Ｌるコンプレックス
金溶液、分散液あるいはペーストとして投与する〔欧州
／＃計公開歪号１９３．９１７　：　１９８６年９月１
０日〕。

ンマトトロビン金コレステロールとともにＡ仕して圧ｍ
成型して移植用マトリックスとする方法もある（例えば
、１９８４年６月５日にＫｅｎｔ　Ｋｌ４されたＵ、Ｓ
、　Ｐａ、ｔｅｎｔ　４，４５２，７７５　）。ｌＪ、
Ｓ。

ｐａｔｅｎｔ　４＋８３６．７３６（１９８９年ソ月５
日にＭａｉｒｉらに付与された）ＶＣは、結合剤もしく
はマトリックスの非存在下でソマト）Ｌｌｌ”ン金圧縮
して移植す能なベレットもしくは錠剤？ｒ：得る方法が
記載されている。

ポリペプチドの放出をコントロ・−・ルして投与する他
の方法としては、ポリペプチドの製剤全含有するブイス
ペンサーも（〜くはポンプ金柑いる方法がある。生物学
的活性物質ケ継続して供給するだめの各種の注入デバイ
スが提案されている。移植ポンプの１つのタイプは、固
い半透過性膜内に浸透剤と活性成分の製剤とを含有する
浸透性デイスペンサーであってその半透過ｔ１１：膜を
通って囲りの組織から水分が吸収される浸透性デイスペ
ンサーである。このデイスペンサーにおいては、水が吸
収されて浸透剤の容量が上昇して活性成分を外へ押し出
すようにして活性取分が放出され生体に吸収で？Ｌる。

このような浸透性移植デイスペンサーの例としては、Ｕ
、Ｓ、　Ｐａｔｅｎｔ　３，９９５．６３２（Ｎａｋａ
ｎｏら）、Ｕ、Ｓ、　Ｐａｔｅｎｔ　４３．８４５．７
７　Ｌｌ（Ｔｈｅｅｕｗｅｓら）及びｔｒ、ｓ、　Ｐａ
ｔｅｎｔ　Ａ　３，７６　［Ｊ、８０５（Ｈｌｇｕｃｈ
ｉ　）　Ｋ記載δれたデイスペンサーかめる。

Ｕ、Ｓ、　ｐａｔｅｎｔ　／１６３．９９５＋６３２に
記載されたデイスペンサーは、デイスペンサーの下部に
浸透剤を含有する１つの区画と、デイスペンサーの上部
に活性成分を含有する第２の区画と、これら２つの区画
を分離する移動可能なバリヤーもしくはピストンとから
なっている。このデイスペンサーの場合、浸透剤が膨張
するにつれて、ピストンｔ−第１の区画の万へ押し上げ
、活性成分が出口部分から押し出される。このタイプの
ものを、１ブツシユタイプ”インブラント・もしくはデ
イスペンサーと言うことができる。σ、Ｓ、　Ｐａｔｅ
ｎｔ　Ａ　３，７６０，８０５に記載されたデイスペン
サーは、浸透剤を含有する区画内に活性取分を含むフレ
ツキシプルなバックを有しこのバックが出口部分に連結
しているデイスペンサーである。この場合には、水が吸
収され浸透剤が膨張するにつれて、バックが破れて活性
成分が出口部分から押し出される。活性取分がバック中
に含有されているこのタイプのデイスペンサーは、“崩
壊性バックタイプ”インブラントもしくはデイスペンサ
ーと言うことができる。他の各種の注入デバイスも多く
報告されてお多、特にインスリン投与用の各種のデバイ
スが報告されている。そのいくつかは移植されて用いら
れるものであシ、他のいくつかはカニユーレによシ外部
から装層されて活性成分を体液中に注入するものである
。

このような注入デイスペンサーのいずれの場合にも、活
性成分は典屋的には水性もしくは非水性の分散製剤中に
含有されている。ソマトトロピンの場合には、このよう
な注入システムを用いて投与するのが困難である。ソマ
トトロピンは、生物学的に非活性となるような分子変形
を受けやすい。

例、ｔば、ソマトトロピンはダイマーまたは凝集体を形
成する類句かめりそのため非活性となる。この１頃向は
一般的に水の存在によって促進される。

更に、溶液などの可動性相中に高−度で蛋白が存在する
場合にダイマーあるいは［４の傾向はより一層促進され
ることが観察されている。ｌた、デイスペンサーが移［
される動物の体温などの高い温度でダイマーもしくは凝
集体形成が促進される。

従って、非経口投与に望ｌしいとされるＩｗｉ−度混台
物タイブの一台に、生物学的活性のロスを最も受けやす
いと言える。更には、多くの蛋白ホルモンの水への溶解
性は低い。製剤中に同温状のホルモン粒子が存在する場
合、あるいは投与中にそのような粒子が形成される場合
には、ポンプの排出口が詰るようになってホルモンのア
ベイラビリティ−が減少する。このような問題を避ける
１つの方法として、活性ポリペプチドを比較的希釈した
濃度で製剤中に存在式せる方法がある。このアプローチ
は、例えば、注入デバイスによりインスリン全投与する
製剤の開発に利用されている。このような製剤中には比
較的低濃度のインスリンが用いられている。

従来、凝集しやすいタイプの蛋白ホルモンを投与するた
めの製剤の開発に多くの努力が払られれ”（イる。例え
ば、（Ｊ、Ｓ、　Ｐａｔｅｎｔ　Ａ　４．５７１，５２
６（Ｇｒｏｄｓｋｙら）には、インスリンの凝集を抑制
する試薬を含有する水性Ｍｉ底物の調製が記載されてい
る。抗凝集剤は、２つのカルボキシ部分と少なくとも１
つのアミン部分を有する化合物でめシ、グルタミン酸及
びアスパラギン酸が特に好ｌしい。

この試薬を水性系でインスリンと混合し、ｐｕｔ−この
抗凝集剤の等電点付近に調整する。

Ｕ、Ｓ、　ｐａｔｅｎｔ　４４１４３９＊１８１　（Ｂ
ｌａｃｋａｈｅａｒ　）には、水性蛋白ホルモン溶液を
グリセロールもしくは他のポリオールとめらかしめ混合
し、その後にこの溶液をドラックデリバリ−システムに
導入する方法が記載されている。グリセロールもしくは
他のポリオールは、長期間の保存期間中に蛋白が沈澱す
るの′ｆｔ阻止するのに十分な菫で加えられる。蛋白／
ポリオール酸液は、移植注入ポンプの加圧された薬剤保
４貯Ｒ器中に注入される。上ｍｌ特吐明祠書の実施例に
はインスリンｔ′話・有する組成物が記載δれている。

Ｕ、８．　Ｐａｔｅｒｘｔ　Ａ　４Ｉ６７５＊　１８４
　（Ｈａｓｅｇａ、ｗａら）には、ウィルス注の苦涌を
処置するためのインターフェロン組成物が記載δ力、て
いる。この組成物は、５価もしくはそれ以上の多価アル
コール性糖アルコール（好ｌしくはグリセリン）１５−
６０係、ｐ”ｋ：　３　６に維持するだめの有機バソフ
ァーメ用的に用いられる薬学的担体もしくは希釈剤、及
び有効量のヒトインターフェロンを含有しティる。安定
剤として、アニオン性の界面活性剤もしくはアルブミン
がこの組成物中ｅこ官有ざｎでいる。

パンファーは、クエン酸塩、コハク酸塩、歯石酸塩、７
マル酸塩、グルコン酸塩、シュウ酸塩、酢酸塩などであ
る。リン酸塩などの無機バッファ〜ではインターフェロ
ンの安定性が改善さｔＬないことが上ｄＣ特計明細書に
は記載されている。

ＰＣＴＷＯ８５／（Ｊ２１１８号明細書には、ホルモン
調製物などの蛋白の沈澱全阻止するためにドラッグデリ
バリ−システム中にグリセロールを用いることが記載さ
れている。蛋白の生物活性全維持するために蛋白の最適
声値の１μｍユニット内に耐液のｐＪｉを維持するため
にリン酸パンファーなどのバッファー・が用いらｔして
いる。スルフェート化インスリンのメ＆遇Ｐ１４は５．
５で必り、中性のスタンダードインスリンの揚台には７
．４であることが記載されている。沈澱が庄じるの？防
ぐためｅこインスリンの専箪点（５，４）は避けること
、よた蛋白の変性ケ生にるアルカリ側のｐｉ（（８，０
以上）は避けることが記載妊れている。明細書の実ゐ例
１には、１Ｒ１当ジ２０−４０ユニツトのブタインスリ
ン（約１−２９　）、Ｄ。２チフエノール、１２ｍＭ重
炭酸ナトリウム及び８０ムｉｔ％グリセロールを含有す
る組成物が記載さハ５ている。Ｃの組成物は移植注入ポ
ンプにより投与１れる。この記載はインスリンに１髪ら
れているが、この明細書に０４成長ホルモン、グルカゴ
ンなどの他の蛋白も同様Ｖこ沈澱？生じやすいことが述
べられている。

発明の要旨 本発明のいくつかの目的のうちで特に注目すべきは、浸
透性デイスペンサーなどの移植用ディスベン丈−などか
ら長期間に亘ってンマトトロビン倉投与するのに用いる
ことのできるデイスペンサー組Ｍ、物金提供することで
ある。このような組成物は実質的−度のツマ）トロピン
？含有し、長期の保存期間に鼠ってソマトトロピンは化
学的ニ安定で生物活性全維持し且つ物理的ＶＣも安定で
沈澱を形成せず、史には長期の投与期間に区って生体温
匿で化学的に安定で生物活性を維持し物理的ｅζも安定
でお夕、ｌだこの組成物は生体温度で容易に投与し得る
ものである。

本発明の史て他の目的は、本発明の組成物’ｔ　１４装
する方法′ｆ：提供することでおる。

しかして、本発明は、ソマトトロピンデイスペンサー組
成物に関し−、該組成物は、少なくとも約１０チの生物
活性ソマトトピン好筐しくにウシもしくはブタンマトト
ロピン：グリセロールモしくはトリス（ヒドロギシメチ
ル〕アミノメタンなどの６つのヒドロキシ基を有する有
効量の安定化ポリオール：及び動物にソマト）ロビンｋ
　長ＪＪ　間に亘って投与するために当該組成物を有効
に使用するのに十分な期間ソマトトロピンがその生物活
性全維持し得る範囲のｐＨ６達成するた、めに十分な童
のバッファーからなる。

好ましい１つの態様においては、本発明のＭｉ戟物は、
約４゜５と、約７もしくはソマトトロピンの等電点のど
ちらか大きい方の値との間の１１１１１１直を有する。

好筐しｈバッファーとしては、ヒスチジン塩酸塩、アル
カリ金属ホスフェートバッファ〜トリス〔ヒドロキシメ
チル〕アミノメタンの塩酸塩、クエン酸塩パンファー　
あるいは目的とするｐＨ値ゲ達成する他のいずれかのバ
ッファー等を挙げることができる。本発明の組成物は、
ソマトトロピンが賦形剤混会物中に取シ込まれる割会い
全改善するために湿潤剤金含有していてもよい。

更に本発明は、上記した組成物を長期間に亘って動物に
投与することからなる、動物へのソマトトロピンの投与
法に関する。

更には、上記した組成物の調製法であって、ポリオール
とバッファーの水性溶液そして任意の界面活性剤と全混
合し、この賦形剤で単一層が形成される１でソマトトロ
ピンを湿潤化させることからなる上記ＩＩ製法も本発明
の目的とする方法である。

好ましい態様の記載 遺伝子組換えにより製造されるソマトトロピンは典型的
にはアルカリ条件下で単離精義される。

このため、ソマトトロピンの水性溶液は、ｌ炭酸ナトリ
ウムなどの残渣アルカリバッファーの存在によりアルカ
リ性であることが多い。このような水性溶液は実質的に
生物活性を有していることが証明されている。ソマトト
ロピンの希釈浴液は高い−でも安定であるが、高−での
ソマトトロピン溶液は少なくとも化学的には不安定とな
り、特に高濃展でこの傾向がある。ソマトトロピンはダ
イマーを形成して凝集する傾向があり、このため非凝集
体での蛋白ホルモンとしての生物活性がしばしば失なわ
れる。

ソマトトロピンの化学的安定性はその水性システムのＦ
８ｔ−低下させることによって達成できることが見出さ
れているが、最適な化学的安定性は、通常は、蛋白の溶
解性が最も低い等電点の比較的近くの一範囲で達成され
ている。従って、満足すべき化学的安定性を有する浴液
は典型的には物理的には安定ではなく、蛋白は沈澱する
頌同がめり、他方、高い溶解性全維持するーでの浴液は
典型的には化学的には不安定であり、急速にその生物活
性が失なわれる。

本発明により、高割合いのソマトトロピンを含有スるデ
イスペンサーソマトトロピン組成物の物理的安定性、化
学的安定性及び生物活性は、ダイマー化及び凝集化が阻
止されるようなレベルの一僅に維持するためにバッファ
ー化しつつ実負的割合いのポリオールを加えることによ
って維持でさることが見出された。蛋白ホルモンの溶解
性は、等電点の比較的近くの−であっても達成される。

本発明の組成物は、実質的割合いのソマトトロピンを含
有し、最初に調製した時と同様に実質的生物活性を発揮
し、長期間保存後であっても実質的レベルの生物活性を
維持し、液相からソマトトロピンが沈澱する傾向が低い
ものである。本発明のデイスペンサー組成物は、注入デ
イスペンサー、％　ニ浸透性デイスペンサーを用いて放
出をコントロールしながら投与するのに用いることがで
きる。

不発ｑｖｃよれば各種のソマトトロピンヲ有効に製剤化
することができる。本発明に用いることのできるソマト
トロピンの例としては、例えば、ニワトリ、シチメンチ
ョウなどの処置用のトリノマトトロビン；魚などの処置
用の水生動物ソマトトロピン；ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤ
イなどの処置用の哺乳動物ソマトトロピンなどが挙げら
れる。特に、ウシソマトトロピン及びブタソマトトロピ
ンが有用である。

ソマトトロピンを多意に生産する能力があるため、組換
えＤＮＡ技術を用いてンマ））ロビンを微生物学的に発
現するのが好箇しい。更には、組換えＤＮＡ技術により
、天然のソマトトロピンの配列と類似したあるいは相違
する配列を有するバリアントラ主座することが可能であ
る。天然のウシ及びブタソマトトロピンの配列は、Ｓｅ
ｅｂｕｒｇｅｔａｌ・。

ＤＮＡ、Ｖｏｌ、　２　ｓ　１１６１　ｙ　　ｐｐ、３
７　４５　（１９８３）に記載されており、本８Ａ細書
にその記載全引用する。

ウシソマトトロピンバリアントの例としては、これらに
限定さｎないが、以下に示すアミノ酸配列を有するポリ
ペプチドが挙げられる（尚、ここに示されていない部分
のアミノ酸配列は天然のソマトトロピンのアミノ酸配列
と同じである）：ＮＨ２−ｍａｔ−ｐｈｏ（１）−ｐｒ
ｏ（２）　、　、　、　、１．ｅｕ、（１２６）　−、
−、Ｉ）１１８　（１９０）−ＣＯＯＨ２−ｍｅｔ−ｐ
ｈｅ（１）−ｐｒｏ（２）−０゜、ｖａ＋（１２６）−
１−Ｉｈｅ（１９０）−ＣＯＯＨＮＥＴｓ＝ａｌａ−ｐ
ｈ（！（１）＝ｐｒｏ（２）−−−−ｖａコ（１２６）
＝−−−ｐｈｅ（１９０）Ｃでｍ４−ａｍ−ｐｂａ（１
）−ｐｒｏ（２）−、。、コ、ｅｕ（）２シＳ、３．、
、、ｔｌθ（１９θ）−ｃｏａｘＮＨ２−Ｉ）１１θ（
１）−ｐｒｏ（２）、　、　、、コｅｕ（１２６）、−
−、Ｉｔ）ｅ　（１９［Ｊ）（ＸＸ）丁（１％−ｐｈｅ
（ｉ　）−ｐｒｏ（２）−−、、ｖａコ、（１２６）−
−−−ｐｈｅ（１９０）−ｏｘｘ＋ＮＨｚ”１１０１ｔ
−ａｓｐ−ｇｌＪｊｌ−１１ｌ１０１ｔ−ａｓｐ−−−
（１２ｋＳ）−＄ａ（９０）−Ｑ）ＯＨＮＨ２−ｍｅｔ
ｆｆｉｓＰ−ｇ］−ｕ’−ｐｈｉ（１）−ＦＯＣ２）　
−−−−Ｖ７ａｌ（１２５）　−−−−ｐｈｅ（１９０
，）Ｃｏｏ）１」七−ＩＩＢｔ（４）−５ｅｒ（５）、
　−，１ｅｕ（１２５）　−−−−ｐｈｅｃｉ’；’ｏ
〕−ｃｏｏｒ＋１％−ｍａｔ（４）−ｓｅｒ（５）　、
　、、　、ｖａ：ｉ、（１２＜５）　−−−−ｐｈｅ（
１９０）−ｃｏｏｎＮＨａ−ｍｅｔ−ｐｂａ（ｌｆｌ）
　−、、、，１θｕ（１２Ｉ５）−、−ｐ）＞θ（１９
０）ａｙｃｘｘＮＨ＋−ｒｒｋＥｊｔ　ｐｈｉ（１０）
、＋＋　、、、ｖａコ、（１２５）８．、−ｍｅ（１９
（Ｊ）−Ｃ（Ｉ）Ｈ上記した舖１番目のバリアントはＮ
−末端にメチオニル残基金有し１２６２６番目置にロイ
シル残基金有し、本明細書ではメチオニルウシンマドト
ロピンｌたは”ＮＨ８”と言り。上記した第６着目のバ
リアントはＮ−末端にアラニル残基を有し１２６２６番
目置にバリルＪＡ基を有し、本ＢＡ細書ｒＵ７ラニルー
パリルウシソマトトロビンまたは＠ａｌａ−Ｖａ’ｌ　
ＢＳＴ　”；ｉたは”　Ａ−ＢＳＴ　’と言う。

ブタソマトトロピンパリアントの例としては、これらに
限定されないが、例えば以下に示したアミノ酸配列を有
するポリペプチドが挙げられる（尚、ここに示していな
い部分のアミノ酸配列は天然のソマトトロピンと同じで
ある）：ＮＨ２−ａ、１ａ−ｐｈｅ（１）−−−−Ｐｈ
ｅ（１９０）−ＣＯＯＨＮＨ２−ｍｅ　ｔ　−ｐｈｅ　
（ｌルー　−−ｐｈｅ（１９０）−ｃｏｏＪ（ＮＨ２−
ｒｎｅ　ｔ（４）−Ｐｒｏ（５）　９．７．Ｐｈｅ　（
１９０）−ＣＯＯＨＮＨ２−ｍｅｔ−１ｅｕ（６）　−
−−−ｐｈｅ（１９０）−ｃｏｏｎＮＨ２−ｍｅｔ−ｓ
ｅｒ（８ル−−−ｐｈｅ（１９０）−ｃｏｏＨＨ２−ｍ
ｅｔ−ｐｈｅ（１０）−−−ｐｈａ（１９０）−ｃｏｏ
ｎ上記した第１番目のバリアントはＮ−末端にアラニル
残基を有し、本明細書ではアラニルブタソマトトロピン
筐たは’　ＡＰＳ　”と言う。上記した第２番目のバリ
アントは本明細書ではメチオニルブタソマトトロピンま
たは”　ＭＰＳ　”と言う。

上記したバリアントのＮ−末端におけるメチオニル残基
は、発現中あるいは発現後に除去することもできる。ま
た、次の配列ニ ーｇｌｕ−ａｍａ、−ｔｙｒ−１１ｅ−ｐｒｏ−ｇｌｕ
−（上記したウシ及びブタソマトトロピン配列の３２−
３８番目に相当する） における１つもしく祉それ以上のアミノ酸残基は除去さ
れていてもよい。このようなタイプの欠失は欧州特許公
開番号２８２，３１８及び２８２．３１９（両者とも１
９８８年９月１４日に公開）に記載されている。ソマト
トロピン活性金有する他の欠失バリアント、例えば３２
−４５番目のアミノ酸残基が欠失したバリアントも用い
ることができる。

本発明のｉ成物勿用いて最も効果的に投与することので
きるソマトトロピンは、メチオニン以外のＮ−末端基を
有するソマトトロピンである。ある種のＮ−メチオニル
ンマトトロビンはバッファー化ポリオール製剤中でその
生物活性が有意に減少したが、ＡＰＳとＡ−ＢＳＴとが
好ましいソマトトロピンである。

１安定化ポリオール”とは、物理的に安定な組成物中で
ソマトトロピンを維持できる、即ち、保存期間中あるい
は投与期間中に望１（−くない程度には沈＃を生じない
Ｊ：うな５個のヒトμキシ基を有するポリオール企意味
する。グリセロールが好ましいポリオールであるが、ト
リス（ヒドロキシメチル）−アミノメタンなどの他のポ
リオールも用いることができる。

ソマトトロピンが生物活性を示す範囲内に組成物の−を
コントｏ−ルするために、生理学的に親和性？有するパ
ン７アーを用いる。−股に、溶液のＰＨはその最小値が
約４６５好１しくに約５より好ｌしくは５゜７であり、
その最大値が約７以上でソマトトロピンの等電点でｂる
ようにする。ＡＰＳ。

等電点は７゜（５、ＭＰＳの等電点は７，６、Ａ−ＢＳ
Ｔの等を点は８．６である。これらの等電点は、ソマト
トロピンのバルク製造の際に得られるスタンダード七ツ
マ−の等電点である。他のべ１ｒアント、他の綽導体及
び他の形態のバリアントは標準的技術によって測定する
ことができる。ＡＰＳの場合、最適…は約６．１と約７
．［Ｊの間でらシ、Ａ−ＢＳＴの場合、最適１！」は約
６．１と約７．５の間である。各種のバッファーを用い
ることができるが、バッファーはアルカリ金属ホスフェ
ートが好ましい・　目的とする−範囲でバッファー化す
るためには、バッファーはリン酸２水素ナトリウムまた
はリン酸２水素カリウムなどの一塩基性リン酸塩から実
質的になるのが好筐しい。目的とする一範囲にコントロ
ールするための他の有効なバッファーは、ヒスチジン塩
酸塩などのヒスチジン水素化ノーライドである。

−範囲全維持する他のバッファーとしては、クエン酸塩
バッファー、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン
の塩酸塩などの酸付加塩があげられる。これらのトリス
（ヒドロキシメチルコアミノメタン塩はヒドロキシ基を
有し、める状況下では安定化ポリオールとして作用する
ことができる。

目的とする一範囲を維持できれば他のいずれのバッファ
ーも使用可能である。

尚、本発明のｆｆｉ底物の−を直接測定することは実際
的ではない。しかしながら、ｉｍｍ初物−を実際に測定
するには、組成物の少量、例えば１［ｔ−約１　［１１
１１Ｊの水に入れ、得られる混合物の−を測定する。組
成物の実際のβ値はこのようにして測定されるβ値に極
めて近似している。いずれにせよ、このような希釈状態
での測定−値が本明細書でのＩｉｉ底物の一値である。

本発明の組成物を調製する際にバッファー／ポリオール
賦形剤によるソマトトロピンの湿潤化を促進するために
、ノニオン性界面活性剤などの湿潤剤を用いるのが好ｌ
しい。特に好ましいノニオン性界面活性剤は、工Ｃ工Ａ
ｍｅｒｉｃａｓ工ｎｃ・からＴｙｅｅｎ　８０の商品名
で販売されているソルビタンモノオレエートのトリ（ポ
リオキシエチレン）エステルなどのポリエトキシ化ソル
ビタンエステルである。

ソマトトロピンの賦形剤としてバッファー化ポリオール
賦形剤を用いることにより、該賦形剤液でのソマトトロ
ピンの溶解性が上昇して高レベルのソマトトロピンを含
有させることができるという大きな利点が得られる。更
には、有意量の水を含有するＭｉ成物中に高濃度でソマ
トトロピンが存在するにもかかわらず、バッファーによ
ってβ値が維持されてダイマー及び他の凝集体の形成が
阻止される。ソマトトロピンが真の溶液中あるいはコロ
イド溶液中のいずれに存在しているかは決定されていな
いが、ソマトトロピンは、放置されている状態でもある
いは組成物が注入ポンプの排出口を通過し剪断力の影響
を受ける状態でも、沈澱せずあるいは賦形剤から分離す
ることもない。組成物中でのソマトトロピンの濃度は、
少なくとも約１［１ｗｔ％、好壕しくに少なくとも約１
５ｗｔ優、より好１しくは少なくとも約２　Ｑ　ｗｔ％
、更に好ましくは少なくとも約２５　ｗｔ係あるいは約
６０ｖｔ％である。ンマトトロビン磯度は、約４５　ｗ
ｔチ、好萱しくは約４０ｗｔ優、より好１しくは約３５
　ｗｔチの高濃度でもよい。ポリオール濃度は少なくと
も約２［Ｊｗｔチｌｆｃは２５ｖｔ俤であシ、８０ｗｔ
％、７０ｖｔ俤、６［ＪＷｔ’Ｊ、５０ｗｔ％または４
　［ｌ　ｗｔ優の高濃度でもよい。比較的高＃度のグリ
セロールにより細菌阻止効果が得られる。

少なくとも約５０％のグリセロールを含有する賦形剤に
よ勺細菌阻止効果が得られると一般に考°見られる。更
に、本発明の組成物は、ノニオン性の界面活性剤などの
湿潤剤ｔ１約０．Ｕ　７　ｗｔ　％もしくは約Ｑ、５ｗ
ｔ優と約０．７ｗｔチもしくはｌ　ｗｔ憾の間の最適範
囲で含有するのが好１しく、時として２　ｗｔ　ｅ４の
ノニオン性界面活性剤を含有するのが好ましい。リン酸
塩バッファーの場合には典型的には４％−７ｆｔ−含有
するバッファー塩を除いて、！１１成物の残少は典型的
には水である。組成物は、少なくとも約７　ｗｔ　＊　
％好１しくは少なくとも約１５　Ｗｔ　％の水を含有す
るのが望１しく、約２５　ｗｔ％と約３５　ｗｔ　％の
間の範囲で水を含有するのが更に望ましい。

本発明の組成物は通常は透明で均質な単一相である。約
４℃の典型的保存温度では、本発明の組成物は固型状も
しくは半固型状である。動物の体温では本発明の組成物
はその粘度が減少して粘稠な液となる。このように本発
明の組成物は、全ての温反において流動性を有するわけ
ではないがデイスペンサーｍ酸物となシ得るものである
。温度が変動するにつれて組成物の粘度が変化すること
は、３３％ＡＰＳ、３３．５％／リセロール及び３３．
５　％　Ｉ　Ｍリン酸ナトリウムバッファーを含むＭ放
物金側にとって説明することができる。この組成物は１
０°Ｃで２．υｏ　ｏ、ｏ　ｏ　ｏセンデボ４フ以上の
粘度を有し、２５℃で約２１５．υＤ（Ｊセンチポイズ
の粘度を有し、６７℃で約２３．０　［Ｊ　Ｏセンチポ
イズの粘度含有する。

約２５係未満の級反のツマ）トロビ′ン金含有する比較
的希釈されたｍＨ，物では、水及びバッファーに対する
ソマトトロピンのｘｉｘ比【実践的に一定に維持し且っ
ソマトトロピンの一度がＸ少フるにつれてポリオールの
使用割合いと増加ざぜるのが望ましい。例えば、４４チ
グリセロール金含有する１０チＡＰＳ溶液は多少のＡＰ
Ｓが沈澱しゃすく、７８％グリ七ロールを含有する組成
物は物理的に安定であることが見出６れた。２５チ未満
のソマトトロピン濃度では、水に対するソマトトロピン
ｏ、ｔｔ比ｔｉ約ｏ。９と約１４１の範囲内に、ホスフ
ェートバッファーに対するソマトトロピンのＸｔ比は約
５．５と約７の範囲内に維持するのが好ＩＬ２い。

任意の湿潤剤？除いて、２５％未満のソマトトロピン濃
度の組成物の残Ｑは本質的に社ポリオールであるのが好
ましい。

ソマトトロピン濃度が２５％を越えるにつれて、ポリオ
ールの濃度をできるだけ高く維持するためにソマトトロ
ピンに対する水及びバッファーの重量比全減少式せるの
が好ましい。１−かじながら、ポリオール含有量は粘度
によ、０　ｆｒｉｌｌ限を受けるので、ソマトトロピン
の濃度が２５チを越える場合にはポリオールの最大眞度
扛約４０−４５壬である。

ポリオールａ度が高いと物理的安定性が上昇するが、粘
度が上昇して組成物の取り扱いが困難になる。

本発明の組成物の化学的安定性は、温度と保存期間に応
じてその保存中は維持δれねばならない。

例えば、室温では最適組成のＡＰＳ組成物は６ケ月もし
くはそれ以上の期間生物活性金欠なりことなく保存でき
る。生体温度ではいくらかの生物活性のロスはおるが、
そのロスの割合−はわずかで必り、時間に応じて上昇す
る。本発明の組成物は、要求される期間以上に亘って十
分な生物活性を維持できる。従って、ソマトトロピン金
投与することによって達成される公知の生物学的効果金
得るのに本発明の組成物は有用である。このような生物
学的効果として線、例えば、乳を分泌する哺乳動物での
乳の産生の上昇、飼料効果の上昇、Ｈ，艮の促進、乳房
の柔組織の増量、脂肉対赤身の比の上昇などでらる。得
られる効果はソマトトロピンの投与量、授乳状況及び成
長状況（例えば、乳を分泌しているかどうか、妊娠して
いるかどうかなど）などに依存している。本発明のｆ１
１ｉ放物によれば、単回投与によシ約６週間あるいはそ
れ以上に亘ってソマトトロピンｔ−コントールして放出
することができる。

本発明の方法によれば、ポリオールとバッファーとを混
合することにより液状賦形剤が潤製できる。バッファー
溶液の最初のｆ８は約４．０−約４．４の範囲内にある
のが有利である。バッファーはリン酸２．！Ｘ素アルカ
リ金属塩を含むのが好ましく、特に、ポリオールと混合
する以前の一度が１．Ｊ。５−２Ｍであるのが好ましい
。ポリオールをバッファー溶液と温片する前に、ポリオ
ールにアニオン性界面活性剤全席えるのが好ｌしい。液
状賦形剤は典型的には滅菌濾過によって滅菌され、次い
で濾過滅菌された賦形剤はソマトトロピンと混合する前
に加温される。

本発明の方法の１つの態様においては、ソマトトロピン
粉末全滅菌した液状賦形剤に加える。しかしながら、ソ
マトトロピン粉末全天童の液状賦形剤に加える前に、そ
の液状賦形剤で湿らすのが好筐しｂｏこれは各種の方法
によって行なうＣとができる。例えば、攪拌ミキサー金
偏えたタンクなどの攪拌容器中で混合すればよい。この
場合には、液状賦形剤の表面上が波形となシンマドトロ
ぎン粉末の湿潤化が促進されるように十分な速度で且つ
空気泡が液状賦形剤中に取り込１れない速度で液状賦形
剤を機械的に攪拌する。ソマトトロピン粉末が液状賦形
剤の表面上で湿潤比重れるにつれて、液状賦形剤が取り
込１れる層中に１クリ一ム層”が形々兄される。更に攪
拌することによｐ湿潤化した粉末が分散し溶解して本発
明の組成物全形成する。他の態様で鉱、ローリングボト
ルらるいはドラム中で攪拌を行なうことができる。どの
ような混合法を用いてもよいが、剪断力が最低であって
空気のエントレインメントが最少となるのが好ましい。

組成物に吸収されたガスを除去するには、吸収された空
気が除かれる葦で攪拌しないで放置してもよい。

本発明の！ｌｌ動物、いずれのタイプの注入デリバリ−
デバイスによっても投与することができる。

移植用デリバリ−デバイスが好ましい。特に、浸透圧駆
動移植用デリバリ−デバイスが好筐しい。

ソマトトロピン組成物は、移植ポンプの１わりの生体液
が混入しないように保護されていることが重要である。

これは、１わルの生体液が不透過性のデイスペンサーチ
ャンバー中に本発明の１底物を設けることによって達成
される。

第１図及び第２図は、移植用の浸透圧駆動デイスペンサ
ーを示す。

第１図はブツシュタイプのデイスペンサーの断面図であ
る。このタイプのデイスペンサーでは、デイスペンサー
１と２の壁によって固定された構造カ形成され、ピスト
ン４によって分離された２つのチャンバー３及び５を包
囲するように形成される。浸透圧エンジンチャンバー５
には、水溶解性塩またはその飽和溶液：ヒドロデルと言
われる水膨張性ポリマー：あるいはヒドロデルと水溶解
性塩とｔ″組合わせたものなどの浸透活性剤が含有され
ている。浸透活性剤の例は、Ｕ、８．　ＰａｔｅｎｔＡ
　３．９９５．６３２　ＣＫａｎｅｋｏら）及びσ、Ｓ
、　ＰａｔｅｎｔＡ　４，３２７，７２５　（Ｃｏｒｔ
ｅｓｅら）に記載されており、こｎらの記載を本明細書
に引用する。浸透活性剤は、ヒドロデル、あるいはヒド
ロデルと水溶解性塩との混合物が好ましい。浸透圧エン
ジンチャンバーを囲む壁２の少なくとも１部は、反透圧
エンジンチャンバー中に水が吸収されるように水透過性
でなければならない。半透過性壁用の好適な物質として
は、浸透膜ｌｆｃは逆浸透膜として知られた物質が挙げ
られ、これらの多くはＵ、Ｓ。

Ｐａｔｅｎｔ　／１６４，３２７，７２５に記載されて
いる。水が浸透圧エンジンチャンバーに吸収されるにつ
れて、チャンバーのサイズが大きくなり、ピストン４を
活性成分チャンバー３の方へ押しやる。本発明の組成物
は活性成分チャンバー３中に含有さヘビストンが押され
るにつれてオリフィス６から押し出ちれる。ピストンは
、変形可能でデイスペンサー壁と常に接触してソマトト
ロピン組成物ト浸透圧エンジンとが接触することを避け
るような、ワックスまたエラストマーなどの適当な物質
から構成される。活性成分チャンバーの壁は、組成物の
安定性に影響を与える生体液のンマトトロビンＭｉ属物
への混入を防ぐために、水不透過性もしくは実質的に水
不透過性でなければならない。不透過性は、不透過性ラ
イナー全挿入しあるいは不透過性コーティング全行なう
ことにより壁を不透過性物質で構成することによって達
成される。これを達成する代表的ポリマーとしては、不
透過性ポリエチレン、ポリテトラフルオロエチレン、ポ
リカーボネート、ポリスチレン、ポリアミド、ポリホル
ムアルデヒド、ポリメラミンホルムアルデヒド、ポリス
ルホン、スチレンブタジェンラバー、不透過性ポリウレ
タン、ボリグロビレン、ポリビニルクロライドなどが挙
げられる。

第２図は、折力たたみ可能なバッグタイプのデイスペン
サーを示し、これはＡｌｚａ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ
よ勺商品名ＡＩ　ｇｏ　ｔ■０８ｍ０ｔｉＣＰｕｍｐと
して購入することができる。ソマトトロピン組成物１３
は不透過性フレツキシブシバツク１２中に含有されてい
る。このパンクは固定された半透過性壁１１内に含有さ
れている。バッグと壁との間には浸透活性剤１４が含有
されている。壁を通ってｌわ夛の生体液から水が吸収さ
れるにつれて、浸透活性剤の体積が増大し、バッグが変
形し、ソマトトロぎン組放物が分配チューブ１５から押
し出される。この構成体は一緒に保持され、シール１６
と７ランジ１１によってシールされる。外部の膜はブレ
ンドセルロースエステルであり、折りたたみ可能なバッ
クは熱可塑性ハイドロカーボンエラストマーである。

他のタイプの移植用浸透圧デイスペンサー及び他のタイ
プの注入ポンプは当業者に公知である。

デイスペンサーのキャパシティー、本発明の組放物中の
ンマトトロビン濃度及びデイスペンサーからの組成物の
供給速度は全てコントロール可能であり、それによって
所望する期間に亘って所望の速度でソマトトロピン全投
与できる。好ましい投与速度は、所望の生物学的応答、
動物の品種及び大＠さに依存する。例えば、ブタへの好
ましい投与速度は、１日当クンマドトロピン約０゜５〃
ｌ刀≧ら約１０グであり、好ｌしくは、１日当シソマド
トロピン約１９から約５ダである。乳の分圧、を促進す
るための、あるいは成長もしくは飼料効果を促進するだ
めのウシへの好筐しい投与速度は、１日当ｐ約２ダから
約６υ〜、好筐しくけ１日当シ約５９から約２５Ｗｙで
ある。ブタに投与する場合６週間もしくはそれ以上の有
効投与期間が達成され、ウシの場合１　ｔ）−１２週間
の有効投与期間が達成される。

以下に本発明を実施例に五役説明する。

例　　１ 一塩基性すン酸塩−水和物？水に加え、てｐＨ４−４，
８のリン酸ナトリウム１．ＬＩ　Ｍ　浴液【作りて賦形
剤′ｆＩ：調製した。グリセロールとＴｗｅｅｎ　８０
　ｋ　Ｃ（Ｄバッファー溶液に加えて、１優Ｔｗθｅｎ
　８０．４９．５チグリセロール及び１゜０Ｍリン酸ナ
トリウム溶液４９．５俤を含有する賦形剤金得た。

この賦形剤音用いて、シリンジ中で一連のＡＰＳ／ホス
フェート／グリセロール製剤金調袈した。

製剤調製の際には、プランジャー【除いたシリンジのバ
レル中でＡＰＳ粉末の１ｆを測定した。あらかじめ決め
られた一足蓋の賦形卸ｊｔシリンジに入れ、次いでプラ
ンジャーを挿入して、はとんどの空気全ボートから押し
出した。シリンジを室温で２−３　ｒｐｍで回転し及び
／又ｆ−１３７°Ｃでインキュベーター中ＶＣ数時間１
区いた。Ｔｗｅｅｎ　８　ＬＩ　Ｉｔ加えることによっ
て溶液の形成が促進されプこ。同様にして、パドルミキ
サー中で一連の製剤盆調表した。

液の表面上ＶＣ，波形が形成されるに十分な程度に速く
且つ空気のエントレインメントが最少になるのに十分な
程度に遅く混合して最適混会盆達成し／こ。

例　　２ ＡＰＳ　３　Ｑ　ｗｔ　ｌｂ　、グリセロール５３−５
　ｗｔ％、水３３．５　ｗｔ　％及び十分盪のヒスチジ
ン塩酸塩（約３　Ｗｔ　％　）を含有する水性ＡＰＳ４
１１成物全調製して、−約６．０の組成物を得た。比較
用として、６０チＡＰＳ水溶液；十分にのヒスチジン塩
酸塩？含有する６０チＡＰＳ水溶液（ｐＨ６，ＩＪ）；
十分艙のヒスチジン塩基を言む６０壬ＡＰＳ　’７Ｃ浴
叔（−罎８゜５）：３　［１％　ＡＰＳの５０襲グリセ
ロール溶液、従って６０％ＡＰｓ、３５％グリセロール
及び６５％水からなる溶液金それぞれｉｉｌ［した。そ
れぞれの溶液’ｔ３７°Ｃで４日間保存し、その後サイ
ズ排除１（ＰＬＯに付して形成式れたダイマーの割合い
？測定し７ζ。

ダイマーが大量に形ｇｇれた場合には化学的安定性が低
いこと金示している。七れぞれの溶液？視覚的に調べて
その曇シぐ必いを調べた。溶液の曇りは組成物の沈澱及
び物理的安定性の欠除を示す。

テストにより得られた結果は表１に示した。

表　　１ ｐＨ９，５６，Ｃ１８−５９，５６，０ダイ１−優　４
６゜７　　３，５　　　２７．４　　　３６．０　　　
２．ｌ５Ｋ−ＨＰＬＣ ＋二組酸物が良好な安定性を示したこと金表わす。

二Ｍｉ抵９勿が安定性に省っていたことｔ衣ｖ丁。

ＡＰＳ　／ヒスチジン・ＨＣｉ／水及びＡＰＳ　／ヒス
チジン・Ｈ（Ｊ　／グリセロール／水組成物の生物活性
全成熟した雌性ラットバイオアッセイにより測定した。

テストグロトコールによれば、成熟した雌性Ｈａｒｌａ
ｎ　、　　Ｓｐｒａｑｕｅ−Ｄａｗｌｅ７ラツト（２２
［Ｊｇ）に、テストすべ＠溶液を含有するＡｌｚｅｔ　
ｐｕｍｐ　ｆ移植した。ポンプ中に含まれる溶液の各ｉ
ｔはそれぞれのラットについて同じであった。テストす
べき溶液上それぞれ含有するポンプが移植されたラット
の体重増加を観察した。得られる結果は第３図にプロッ
トした。両者の溶液とも表１のデータで示されるように
化学的に安定であったが、グリセロールとヒスチジン・
ＨＣＩと２組会わせた浴液は優れた物理的安定性とより
長い生物活性を示した。

例　　３ 約３　Ｑ　ｗｔチＡＰＳ　、　　３４．７　ｗｔ係グリ
セロール、２９−９ｗｔ１水、Ｑ−７ｗｔ％Ｔｗｅｅｎ
　５０及び十分量の一塩基性リン酸ナトリウム（約４．
８ｗｔ優）を含有する水性ＡＰＳｔｍｔｘ物を調製して
、−約６．６の組成物を得た。比較用として、３０　％
　７１ＩＰＳ水溶液；６０％ＡＰＳと０−５　Ｍ　Ｎａ
Ｈ２ＰＯ４に含有する水溶液；及ヒ３０　％　ＡＰＳと
１−ＯＭ　ＮａＨ２ＰＯ４’ｔ”含有する水浴液をそれ
ぞれ調製した。それぞれの溶液ｔ−３７℃で４日間保存
し、その後それぞれをサイズ排除ＨＰＬＣに付して、形
成されたダイマーの割会いを測定した。それぞれの溶液
について、溶液の物理的安定性の欠除を示す曇夛ぐあい
を調べた。これらのテストの結果とそれぞれの溶液の両
値を表２に示した。

表　２ ９．５ ダイ−ｒ−ａ）　　４６．。

部−ＨＰＩＣ ６，７ ６，６ ６，３ ６，３ ６，５ １，４ テストした各種の賦形剤、形成されたダイマー及び物理
的状態は表３に１とめて示した。

表　　３ ＣＳ＝透明溶液またはシロップ ＰＰＴ　＝沈＃（物理的に安定でない）水 ｉ　、　Ｑ　Ｍ　ＮａＨ２ｐｏ４ ０．５　Ｍ　ＮａＨ２ＰＯ４ ４６，７ ６，３ ３，６ ９，５ ６，３ ６，７ Ｓ ＰＰＴ ＰＰＴ 例　　４ ３０、％ＡＰＳ及び５０％グリセロール水溶液賦形剤並
びに十分量の一塩基性または二塩基性リン酸ナトリウム
を用いて、−がそれぞれ６．５．７．３及び９．５の３
の製剤￥Ｃ詞袈した。それぞれ３つの製剤を３９℃で１
４日間保存し、サイズ排除クロマトグラフィーによりそ
れぞれのダイマー％ｆ：測定した。−６，５の製剤は２
．９チダイマー　ｐ）１７．３の製剤は１０．６％ダイ
マー、セしてｐ）１９．５の製剤は７３．０％ダイマー
全含有していた。

２つの製剤、即ち、１つは３Ｕ％ＡＰＳ、５％％ノリン
酸ナトリウム、３５チグリセロール及び３０％水を含有
し−６，４であ多、第２の製剤は３０％ＡＰＳ、３％ヒ
スチジン塩酸塩、３３．５係グリセロール及び３３．５
％水を含有しｐｉ（６である。

これらの製剤に、４℃、２２℃、３７℃及び４５℃で長
期間の安定性テストに付した。第４図にホスフェート／
グリセロール製剤の場合の時間に対するダイマー形成を
プロットし、第５図にヒスチジン／グリセロール製剤に
ついてプロットした。テストの結果から、ホスフェート
／グリセロール裂創が優れていることが判る。ヒスチジ
ン・ＨＣ／／グリセロール裂剤１製剤ｔ、ＡＰＳ　ｏ女
定性全維持するには有効であるが、ホスフェート／グリ
セロールＩＩＪはどけ有効ではなく、時間がたつといく
分黄色になった。

例　　５ ３Ｕ％ＡＰＳ％　　５チモノリン酸ナトリウム、６５チ
グリセロール及び６０％７Ｋ　を含有Ｌｔ＝Ｊ（６，４
の製剤を調製した。この製剤を室温で各種の期間保存し
、例２で用いたラツトバイオアンセイによりテストした
。比較として、ラットにホルモン？与えないコントロー
ル、及び新たにＡ真したＡＰＳ　／ホスフェート／グリ
セロール浴液を用いり他ノコントロールを同様にテスト
した。こｎ、らのバイオ７ツセイの結果全第６図にプロ
ットした。

同様のＡＰＳ　／ホスフェート／グリセロールに各種温
度で４−５チ月間保存したものについてもバイオアッセ
イした。これらの結果は第７図に示した。

例　　６ それぞ）Ｌｌ、５チ、６．０壬、６．０チ及び６０俤Ａ
ＰＳを含有する製剤金調裂した。５υ係グリセロールの
賦形剤中のＡＰＳと５［３％ＩＭモノリン酸ナトリウム
／水溶液と？混合して６０チＡＰＥ表剤金調製した。他
の製剤は、６（コ係製剤にグリセロールを加えて希釈し
て作成した。Ａｌｚｅ迎浸透圧デイスベンプ゛−モデル
２　Ｍ　Ｌ　４を用いて投与した場合のＡ、ＰＳの投与
蓋？各−度から計算すると−ｆ：れぞｎ、、ＡＩ）ｓ　
１．　２．、４．５及び２２．５　Ｉｎ？　／　ｄａｙ
の投与量でおった。ブツシュタイプの浸透圧デイスペン
サーを用いた場合の投与１は４２日間で１日当シＡＰＳ
　１．３−１．６　ｕＩｇであった。これらのそれぞれ
のシステムについてラットの成長アッセイを実施した。

得られる結果は第８図にプロットした。

例　　７ ６０チＡＰＥ、　　３チヒスチジン塩酸塩、３３．５％
グリセロール及び３３．５　％水金含有し」約６．０の
製剤を調製した。この製剤全８匹の雑種の去勢した雄ブ
タに、２００１４．１４日Ａｌｚｅｔ＃浸透圧デイスペ
ンサーを用いて１日当５　ＡＰＳ　３．６〜金投与した
。充填したデイスペンサー金耳の後に皮下移植し、第２
のデイスペンサーに１４日後に移植した。１日の平均体
！　（ＡＤＧ）と１日の平均飼料（ＦＣ）とをそれぞれ
のブタについて記録しＰＣ／ＡＤＧ　ｔ−求めた。低い
値の飼料効果がよい飼料効果である。

２８日間の処理期間に亘って得られた平均した結果全１
ホルモン金与えない同様のネガティブコントロール及び
毎日ＡＰＳ３．６ＩｎｆｉＩｔ−含有する２５ｍＭ１炭
酸ナトリウム（ｐｉ−１９，５）　ｋ与えた同様のポジ
ティブコン）Ｏ−ルの結果とともに表４に示した。

表　　４ １５日及び２９日目に飼料効果の改善及びインスリン様
成長因子工のレベル上昇が観察され、これによって、Ａ
ＰＳが１４日間の移植期間に亘って効果的に投与された
ことが確認された。

例　　８ １群９匹の去勢したブタ７群についてＡＰＳで処置した
。用いた製剤中には以下の菫のＡＰＳ及び１Ｍモノリン
酸ナトリウムが水中に含有していた＝１．５チＡＰ８及
び１．８チホス７工〜ト溶液；３．Ｕ％ＡＰＳ及び３．
５１ホスフェート溶液；　４．５　＊　ＡＰｓ及び５．
３’ｊホス：７エー）溶液ｐ　６−ＣＪ　％　ＡＰＳ及
び７．［ｌチホスフエート溶液；１５％ＡＰＳ及び１７
．５％ホスフェ−）８２；　及び６０％ＡＰＳ及び３５
％ボスフェート溶液。それぞれの製剤の残りはグリセロ
ールである。デイスペンサーによりこれらの製剤全意図
する投与量で毎日投与した。コントロールとして２つの
コントａ−ルｉｔ−用いた。Ｂ１１チ、１つが未処置の
群〔ネガティブコントロール〕、他の１つがＡＰＳのＰ
Ｈ９，５！炭酸ナトリウムバッファー溶液を用層で１日
当シＡＰＳ　２ダを毎日注射した群（ポジティブコント
ロール）である。処置１はブツシュタイプインブラント
により投与し、処置２−７は４週間の２シＡ１ｚｅ＃ｙ
透圧デイスペンサー金用いて投与した。処ｔＪＩｔ６と
７は、５週目の最初に、２週間のＡｌ　ｚａ　ｔ■浸透
圧ディスペンテ−で再移植した。このデイスペンサーに
は意図するＴＲＴ＃ 処置処方 ２　１）〆ｄａｙ；　Ａｌｚｅｔデイスペンサー；　１
．５％ロード３　　２９’ｄａｙ；　Ａ１ｇｅｔディス
ペンテ−；　３．［７％”−ド４　　３１１Ｖｂｙ；　
Ａ１ｚｅｔデイスペンサー；４．５％ロード５　　４１
＋Ｉｐ／ｄａｙ；　Ａｌｚｅｔデイスペンサー；６．０
％ロート６　１０　ＩｎＶｄａ７ｔ　Ａ１ｇｅｔデイス
ペンサー；　１５．［Ｊ％Ｏ−）”７　２［Ｊ　”Ｆｄ
ａ７＊　Ａｌｚｅｔデイスペンサー；　　３Ｌ１．Ｕ％
ロード処１ｔ１Ｕ６Ｍ間、処置２−５＃−１５週間、処
置６及び７は６週間継続した。これらの処置についての
ＡＤＧ、Ｂ’Ｃ及びＰＩＦｉ　′ｆ：表５に示し、ネガ
ティブコントロール及びポジティブコントロールと比較
シた。

以下の通）である。

処置１．６及び７は、６週間に亘って活性なＡＰｓ’ｌ
有効に供給したことが判る。処置４及び５Ｆ１．５週間
に亘って活性なＡＰＳ　ｆ有効に供給した。

処ｆ２及び６は効果が観察できた最初と同じであった。

テストに用いた各種の製剤の安定性を、閉じたシリンジ
中で６７°Ｃで７日間及び２８日間インキュベーション
することによ少観察した。製剤中に存在するダイマー優
はサイズ排除クロマトグラフィーによシ測定した。得ら
れる結果は表６に示した。

表　　６ １．５　　　　　　７・６ ３、Ｏ６゜７ ４、５　　　　　　　　２．６ ６．０　　　　　　　２．２ １５．０　　　　　　　１．８ ３Ｄ、［Ｊ　　　　　　　　３．Ｌ１ １２．３ ６．１ ４．５ ６．４ ２．６ ５．３ 例　　９ １群９匹のブタ６群を用いて、異なる製剤音用いて異な
るＡＰＳの投与速度の効果全詞べた。全てブツシュタイ
プの浸透圧デイスペンサー全周いて投与した。デイスペ
ンサーにより、３０４Ａｐｓ２含有する製剤を２η／ｄ
ａｙの毎日の投与量で投与した。１つの製剤は６０チＡ
ＰＳ、３５壬グリセロール及び３５％ＩＭ水性モノリン
酸ナトリウムからなる。他の製剤は１５％ＡＰＳ　ｔ″
含有る。２つの製剤金６０優製剤と同様に（うて調製し
たが、それぞれ［１，０７［３％及びＩＬＩ−７［Ｊ　
％　Ｔｗｅａｎ”　８［Ｊ湿潤剤を含有していた。第５
番目の製剤はホスフェート／グリセロール賦形剤中に４
０　％　ＡＰＳ及び０．６％　Ｔｗｅｅｎ　８０　ｋ含
有していた。意図した毎日の投与量が達成されるように
１つもしくは２つのデイスペンサーを移植した。処置は
以下の通りである。

ＴＲＴ＃ 処置処方 ４、　　　　Ｑ、Ｑ７％Ｔｗθｅｎ　８０で１と同じ５
、　　　０−７０％Ｔｗｅｅｎ８０で１と同じ６週間に
亘って調べた。但し処１１２は６週間俊に終止した。得
られるＡｌ１１［）ＸＦＣ及びＦＭの結果全表７に示し
、ＡＰＳ　１に与えないネガティブコントロールとＡＰ
Ｓのｐ）１９．５　、］Ｕ炭酸炭酸塩バッファ液浴用い
てＡＰＳＴｈ２り／ｄａＪの投与蓋で毎日投与したポジ
ティブコントロールと比較した。

ホスフェートグリセロール中に３０％ＡＰＳｉ含有する
多数のデイスペンサーをテストの終シに回収し、その内
容物を分析してダイマー／凝集体を測定した。ダイマー
／凝集体ｔは、回収した全ソマトト、ロピンの１ｏｔｓ
未満であり、このことから投与期間に亘って良好な安定
性を有していたことが判明した。６週間目の最後及びテ
ストの最後で、ホスフェート／グリセロール処［（１−
６）の全てについてブタソマトトロピンレベルとインス
リン様ａ長因子工のレベルとが上昇していた。これは４
２日間に亘って活性なＡＰＳが投与されたことを示すも
のである。

例１０ ホスフェートグリセロール／賦形剤中にＮ−アラニルウ
シソマトトロピン（Ａ−ＢＳＴ）’を含有する製剤ｔ−
ｉ＆　送圧ポンプを用いて投与してこのホルモンの乳分
泌に対する効果を＃４べた。

産後９３−２５２日目Ｏ３７匹の後産の授乳ホルスタイ
ンウシｔ５つの処置群に分けた。これらのウシに７つの
方法によりＡ−Ｂ８Ｔｉ投与した。１つの方法では、Ａ
−ＢＳＴ　ｆ　７　Ｃ１ｒｎｈｌ　］［炭酸ナトリウム
バッファーに溶解し、１日１回９．０１＃　ｋ毎日注射
するかあるいは１回４．５〜を２回毎日注射して投与し
た。１４日間タイプ２ＵＯ２Ａ１ｚθｔ■浸透圧デイス
ペンサーあるいは２８日間タイプ２ＭＩ、４７ｕｚｅ　
ｔ”　９透圧デイスペンサーを移植してＡ−ＢＳＴｔ−
投与した。２ＵＬ１２デイスペンサーには、２５係Ａ−
ＢｓＴ、　　４５．８俤グリセロール、２８．６％１Ｍ
モノリン酸ナトリウム及び０．６１　ＴＶθａｎ　３υ
を含有する表剤と充填した。２Ｕυ２デイスペンサーの
３つ’ｔｚ　１２６１ｎ９Ａ−ＢＳＴ　）／　ミｆｋＡ
イ’７　イー／ソードーズとして隔週ごとに移植した。

２ＭＩ、４デイスペンサーには、１５俤Ａ−ＢＳＴ　、
　６７．２　％グリセロール、１７．４％１Ｍモノリン
酸ナトリウム及び［Ｊ、４　％　Ｔｗｅｅｎ　８０　ｔ
”含有する裂創を充填した。

２ｍＬ４デイスペンサーはテストの最初に移植し、テス
ト期間中のノミナルドーズが２５２ダとした。

ウシの乳の生産をテスト期間中モニターした。

コントロールのウシに対して処置したウシでは乳の産生
の上昇が見られ（ｋ＆　／　ｄａｙ及び上？＃優〕、そ
の結果を表８に示し第９図にグロツトした。

表　　８ １　２．７　８．５’Ａ　３．５１１．Ｌｌｌ　４．２
１６．２５Ｊ２６・５２１．６％　６．３２υ、９％８
．３２７．６俤３　５．３１Ｂ、Ｌｌｌ　５．３１８．
ＬＩ’ｊ　７．４２５．１係４　６．３２１．９係４．
３１４．９％６．６２２．９チ１−４　５．３１７．６
ｆｉ　５．ＣＩ　１６．６俤６．８２２．ひ５　６．２
２１．８優４，９１７．３優４，４１５．５係１−５　
５．５１８．５％５．Ｃ１１６，圀６．３２１．２チ４
．１　１２．９嗟 ７．５２４．９％ ６．４２１．７％ ４．８　１６．７％ ５．８１９．６９６ ３．２１１．３％ ５．６１７．８％ 乳の産生は、Ａ−ＢＳＴの注射に応答して迅速に上昇し
、このような応答は４週間維持された。

Ａｌｚａｔダイスペンサー処置したウシの乳の産％に化
ＦｉＡ−ＢＳＴ　ｔ−注射した群よ）遅れていたが、乳
産生応答の強さは４週間に亘って同じでめった。５週間
目も、剋ｚａｔデイスペンサーを移植した２りツクルー
プでは乳の産生は４週間月のレベルト同じでおり、この
ことは少なくとも６５日間はｊ、ｎｖｉｖｏ　′″ｃＡ
−ＢＳＴが維持されていたこと？示している。

例１１ 意図するＡＰＳ童及び賦形剤を用いて多数のＡＰＳ組成
物を調製した。それぞれの組成物について−とダイマー
の割会い全測定した。組成物は３９’Ｃ！で保存した。

ダイマーの割合いは、１４日、２８日、及び４５日後に
サイズ排除ＨＰＬＣによシ測定し、組成物の透明度は４
５日後に調べた。組成物及び得られる結果を表９に示し
た。

上記の結果から、本発明の組成物は、長期間に亘って、
化学的及び物理的安定性？有しつつ生物活性を有するソ
マトトロピンを投与することができることが判る。

本発明の範囲内において各種の変更が可能であり、以上
に記載した記述及び図面に含”ｆＡる全ての事項は本発
明を説明するものであって限定するものではない。

【図面の簡単な説明】

第１図及び第２図は移植用浸透圧駆動注入デバイスを示
す。 第６図、第６図、第７図及び第８図は、例２．５及び６
でテストしたラットの成長の結果金示すグラフである。 第４図及び第５図は例６でテストしたダイマー／凝集体
の形成の結果？示すグラフである。 第９図は例１　ｆＪでテストした乳産生の結果を示すグ
ラフである。

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. （１）少なくとも約１０重量％の生物活性ソマトトロピ
   ン、有効量の安定化ポリオール、及び十分量のバッファ
   ーであつて動物に長期間に亘つてソマトトロピンを投与
   するための当該組成物を有効に使用するために十分な期
   間ソマトトロピンの生物活性が維持されるｐＨを達成す
   るのに十分量のバッファーを含むデイスペンサーソマト
   トロピン組成物。
2. （２）少なくとも約１５重量％の生物活性ソマトトロピ
   ンを含有する請求項１の組成物。
3. （３）少なくとも約２０重量％の生物活性ソマトトロピ
   ンを含有する請求項１の組成物。
4. （４）ソマトトロピンが、ウシソマトトロピン及びブタ
   ソマトトロピンから選ばれる請求項１の組成物。
5. （５）ソマトトロピンがＮ−アラニルソマトトロピンで
   ある請求項５の組成物。
6. （６）ソマトトロピンが、ａｌａ−ｖａｌウシソマトト
   ロピン及びアラニルブタソマトトロピンから選ばれる請
   求項５の組成物。
7. （７）安定化ポリオールが、グリセロール及びトリス（
   ヒドロキシメチル）アミノメタンから選ばれる請求項１
   の組成物。
8. （８）安定化ポリオールを、組成物の約２０重量％−約
   ８０重量％含有する請求項１の組成物。
9. （９）組成物が、約４．５と、約７もしくはソマトトロ
   ピンの等電点のいずれか大きい値との間のｐＨ値を示す
   請求項１の組成物。
10. （１０）バッファーが、ヒスチジン塩酸塩及びアルカリ
    金属リン酸塩バッファーから選ばれる請求項９の組成物
    。
11. （１１）更に湿潤剤を含有する請求項１の組成物。
12. （１２）湿潤剤がノニオン性界面活性剤である請求項１
    １の組成物。
13. （１３）ノニオン性界面活性剤がポリエトキシ化ソルビ
    タンエステルである請求項１２の組成物。
14. （１４）少なくとも約１０重量％の生物活性ソマトトロ
    ピン、約２０重量％−約８０重量％の安定化ポリオール
    、及び当該組成物が約４．５と約７もしくはソマトトロ
    ピンの等電点のいずれか大きい値との間のｐＨ値を示す
    のに十分量のバッファーを含有するデイスペンサーソマ
    トトロピン組成物。
15. （１５）安定化ポリオールがグリセロールである請求項
    １４の組成物。
16. （１６）バッファーが、ヒスチジン塩酸塩及びアルカリ
    金属リン酸塩から選ばれる請求項１４の組成物。
17. （１７）ソマトトロピンが、ウシソマトトロピン及びブ
    タソマトトロピンから選ばれる請求項１４の組成物。
18. （１８）ソマトトロピンが、ａｌａ−ｖａｌウシソマト
    トロピン及びアラニルブタソマトトロピンから選ばれる
    請求項１７の組成物。
19. （１９）更に湿潤剤を含有する請求項１４の組成物。
20. （２０）少なくとも約１０重量％の生物活性ウシもしく
    はブタソマトトロピン、約２０重量％−約８０重量％の
    グリセロール、及び当該組成物が約４．５と約７もしく
    はソマトトロピンの等電点のいずれか大きい値との間の
    ｐＨ値を示すに十分な量のバッファーを含むデイスペン
    サーソマトトロピン組成物。