HUT52395A - Process for producing long-acting somatotropin composition - Google Patents

Description

A találmány szomatotropinok szabályozott leadást - hosszabb időtartam alatt - biztesite körülmények között történő adagolására, közelebbről egy továbbfejlesztett készítményre vonatkozik, amely •zomatotropinok szabályozott leadást biztosító köΗ

J . - 2 rülmények között állatoknak való beadagolására alkalmas.

A technika állása szerint számos különböző eljárást javasolnak parontorálisan bevitt szommtotropinok szabályozott folosabaditására. Egy ilyen rendszernek, annak érdekében, hogy hatásos legyen, ssámoa követelménynek kell eleget tennie·

Elsősorban a felszabadulás sebessége elég magas kell, hogy legyen a kívánt biológiai hatás elérése érdekében·

Másodszoria felszabadulás sebességének elég alacsonynak kell lennie a túladagolás elkerülésére vagy az aktív fehérje veszteség megakadályozására*

Harmadszori a dózisnak elég magasnak kell lennie olyan tartalék képzése érdekében, amely hosszabb időtartamon át elégséges és ezen idő alatt a felszabadulás a kívánt biológiai hatás szempontjából megfelelő sebességgel megy végbe·

Negyedszer: a dózis-térfogat a parenterális bevitel egyszerűsége érdekében elég alacsony kell, hogy legyen·

Mivel minden egyes polipeptid különböző - pl«a. háromdimenziós szerkezet és más anyagokkal való kölcsönhatás tekintetében lehetetlen előrelátni, hogy magas polipeptid-bevitel mellett, megfelelő vivőanyaggal, elérhető-e a szabályozott, hatásos felszabadulás. Mégis sok esetben ilyen nyújtott felszabadulást biztosító készítményeket kell kifejleszteni, ha a polipeptid biológiai aktivitását hasznos, gazdaságos módon kívánjuk érvény ősit «ml.

Az egyik megközelítés, a szabályozott felszabadulás biztosítására, a azomatotropin olyan injektálható vagy beültethető mátrix alakú készítményként való kiszerelése, amely csökkenti a polipoptidnek a környező testfolyadékekban való eldódáaa zo• · ·

- 3 beooógót • Az egyik ilyen módszer szerint a szomatotropint egy biokempatibilis olajban diszpergálják, adott esetben egy hidra** táláét gátié anyag jelenlétében / 1. az 1986,04.09-n közzétett 177,479 zz. európai szabadalmi bejelentést /. Egy másik megoldás szerint a szomatotropint egy vizoldható vagy vízben disspergáIható szénhidrát-polimerrel. / amilyen a dextrin, dextrán vagy a különböző gumik / komplexszé alakítják. Ezt a komplexet viszik be páréntorálisan oldat, diszperzió vagy pép alakjában /1. az 1986.09.10-n közzétett 193,917 sz. európai szabadalmi bejelentést /·

A 4,452,775 az, amerikai egyesült államok-beli szabadalmi leírás szerint / szabadalmas Kent, a megadás napja 1984.06·05· / a szómatatropint koleszterinnel készitik ki és komprimálják, beültethető mátrix kialakítása céljából· A 4,836,736 ez. amerikai egyesült államok-beli szabadalmi leírás / szabadalmas Azain et al·, a megadás napja 1989·Ο9·Ο5· / beültethető pelleteket vagy tablettákat ismertet, amelyeket úgy állítanak elő, hegy a azamatatropint kötőanyag vagy mátrix nélkül tömörítik·

A polipeptidek esetében egy további lehetőséget nyújt a szabályozott felszabadulás mellett történő bevitelre egy elosztó vagy szivattyú alkalmazása, amely a polipeptid-késsitményt tartalmazza· A biológiailag aktív anyagok folyamatos továbbítására számos különböző tipusu infúziós berendezést javasolnak· A beültethető szivattyú egyik formája egy ozmotikus elosztói ez egy ozmotikus anyagot ée egy. az aktív komponenst tartalmazó készítményt foglal magában egy merev, félig áteresztő membránon belül· Ezen keresztül viz áramlik be a környező ««övetekből, A bekerült víz hatására az ozmotikusán aktív anyag térfogata megnői ennek hatására az aktív anyag kilépni kényszerül a zárt térből és felszabadul, ennek következtében a gazdaszervezet által abszorbeálható.

Beültethető ozmotikus elosztókat Írnak le a 3,995,632 sz, / szabadalmas Kakano et el, /, a 3,845,770 sz, / szabadalmas Theouwes et al. / és a 3,760,805 sz. / szabadalmas Higuchi / amerikai egyesült államok-boli szabadalmi leírásban,

A Nakano által leírt elosztó egy alsó rekesszel rendelkezik, az elosztó alap-felületén: ez tartalmazza az ozmotikusán aktív anyagot, míg az aktív anyag egy második részben, az elosztó felső részében helyezkedik el, A két részt egy mozgatható gát vagy dugattyú választja el egymástól. Amint az ozmotikus anyag kiterjed, benyomja a dugattyút a második részbe: ennek hatására az aktív anyag egy kimenő nyíláson kilépni kényszerül, Ezt a szerkezet-típust ·* nyomással működő** beültethető eszközként vagy elosztóként fogjuk említeni,

A Higuchi által leírt elosztó az aktív anyagot egy flexibilis zsákban tartalmazza! egy kilépő nyíláshoz kötődik oz a zsák, egy olyan térben, amelyben az otáotlkus anyag van jelen, Viz felszívásának hatására az ozmotikus anyag kiterjed, a zsák összeesik és így az aktív anyag kilépni kényszerül a kimeneti ) nyíláson át. Erre a berendezés-féleségre, amelyben az aktív anyag egy zsákban foglal helyet, úgy fogunk hivatkozni, mint az * összecsukható zsák tlpusu * beültethető eszközre vagy elosztóra.

Számos más Infúziós berendezést javasolnak, különösen Inzulin bevitelére. Ezek közül egy®⁸·*·* beültetnek, míg másokat a testen kívül viselnek| ezek kanüllol vannak ellátva az aktlv anyagnak a testfolyadékokba való injektálására.

Ezeknek az insulin-adagolóknak mindegyikében az aktív anyag jellegzetesen egy adagelható készítményben van jelen, amely vizes vagy nemvizes lehet. A szomatotropinok esetében az egy hasonló infúziós rendszeren keresztül való bevitel nehézségekkel jár. A szomatotropinok molekuláris változásoknak bánnák kitéve, amelyek ezeket biológiailag inaktívvá tehetik. így pl. a szomatotropih molekulák hajlamosak dl merek és aggregátumok képződése közbeni összekapcsolódásra és ezek a termékek biológiailag nem aktívak. Ezt a tendenciát víz jelenléte általában gyorsítja.

Ezenkívül megfigyelték, hogy a dimerizálódási vagy aggregát-képzési tendencia fokozódik, ha a fehérje magas koncentrációban mobilis fázisban, pl. oldatban van jelen. Továbbá: a dimerek és aggregátumok képződése magasabb hőmérsékleten - így az állati test hőmérsékletén, amelybe az adagolót beültetik intenzivebbé válik. Ily módon egy olyan jellegű koncentrált keverék, amely a parenterális bevitel szempontjából kívánatos, maximális mértékben sebezhető a biológiai aktivitás elvesztése tekintetében.

Megemlítendő még, hogy számos fehérje hormon vizoldhatósága korlátozott. Szilárd hormon-részecskék jelenléte a készítményben, vagy ilyenek képződése kicsapódás következtében a szállítási folyamat közben csökkentheti a hormon hozzáférhetőséget a szivattyú továbbító vezetékeinek eltömődése révén stb. Ezeknek a problémáknak az elkerülésére úgy járhatunk el, hogy az aktív polipeptidet viszonylag alacsony koncentrációban alkalmazzuk a kiszerelt készítményben, amelyet beadagolunk. Ezt

- 6 a megközelítést alkalmazzák pl. az inzulin infúziós berendezésekkel való bevitelére szolgáló készítmények kifejlesztése során. Az ilyen készítményekben az inzulin koncentrációját viszonylag alacsony értékre állítják be.

A technika állásából számos kísérlet ismerhető meg olyan jellegű/fehérje hormonok A bevitelére szolgáló készítmények kifejlesztésére, amelyek aggragálódásra hajlamosak. A 4,371,523 sz. amerikai egyesült államok-beli szabadalmi leírás / szabadalmas Grodsky et al. / pl. egy vizes készítmény előállítását Írja le, amely az inzulin aggregációjának csökkentésére egy adalékanyagot tartalmaz. Az aggregáci© ellen ható anyag egy olyan vegyület^: amely 2 karboxil-cs©portot és -legalább 1 aminocsoportot tartalmaz. Különösen kitüntetett a glutaminsav és az aszparaginsav. Ezt az anyagot vizes rendszerben összekeverik az inzulinnal és a pH-t kb. az aggregáció ellen ható anyag izoelektromos pontjára állítják be.

A 4,439,131 sz· amerikai egyesült államok-beli szabadalmi leírás szerint / szabadalmas Blackshear et al. / glicerint vagy egy más poliolt kevernek össze a vizes fehérje hormon oldattal, mielőtt azt bevinnék a gyógyszer-adagoló rendszerbe kerülő oldatba., A glicerint vagy más poliolt ahhoz megfelelő mennyiségben adagolják, hogy megakadályozza a fehérje kicsapódását a hosszabb időtartamú tárolás során. A- fehérje/poliel oldatot egy beültethető infúziós szivattyú nyomás alatt álló gyógyszertároló tartályába injektálják. A leírásban közölt kiviteli példák inzulint tartalmazó készítményeket imák le.

A .4,675,184 sz. amerikai egyesült államok-beli szabadalmi leírás / szabadalmas Hasegawa et al. / vírusos betegségek ke— ··· ·· · • · · · • · ο ο ο • · · • · · · • ·· ·

Kelésért» szolgáié interferon kész!tményeket Ír le· A keverékek összetétele & következés

15-60# triel vagy magasabb pelihidroxiles cukoralkehel / előnyösen glicerin /, egy szervéé puffer a pH 3-6 értéken való tartására, egy szokásos gyógyászati vivőanyag vagy higité és hatásos mennyiségű hután interferon.

stabilizáléként a keverék egy anionos felületaktív anyagot vagy albumint is tartalmazhat. Pufférként citrát, szűkeinát, tartarát, fuiaarát, glukonát, oxalát vagy ecetét alkalmazható· Szervetlen pufferek - pl· foszfátok - a közöltek szerint nem fokozzák az interferon stabilitását.

A W0 85/02118 zz. PCT közzétételi irat / bejelentő Wigness et al. / glicerin alkalmazását írja le a fehérjék - pl· hormon -készítmények - kicsapódásának megakadályozására olyan gyógy** szer-adagoló berendezésekben, amelyek megfelelő működése at infundált anyag fluiditusának függvénye. Puffért - pl, foszfát-puffért - alkalmaznak annak érdekében, hogy a pH-t a fehérje pH-optimumához képest 1 pti-egységen belül tartsák. így megőrizhető a fehérje biológiai aktivitása. Az optimális pH az inzulin-szulfát esetében a leírtak szerint 3,5 és a standard semleges inzulin esetében 7,4. A találmány kinyilvánított célkitűzése az inzulin izoelektromos pH-jának / 5,4 / elkerülése, amely kicsapódáshoz vezet, és a lúgos / 8-nál magasabb / pH elkerülése, amely a fehérje denaturál ódását váltja ki.

A szabadalmi leírás 1. példája elvan készítményt ismertet, • ο ο 00 · · · • ο · · ο · • · ο ο 0 · « • · · · ···· amely 20-40 egységnyi / 'kb. 1-2 / sertés-inzulint / milliliterenként /, 0,2'' fenolt, 12 mY nétrium-bidrogénkartonátot és 80 térf.# glicerint tartalmaz. Az ismertetett készítmények alkalrn:sok eg?’ hr!ltethető infúziós ezivsttyu segítségével veié bevitelre, Rsr a konkrét tárgyáléb inzulinra koriétozódik, fc leírás megállapít js?_t hogy más lnfundálható fehérjék, így .a növekedési hormon, & gluk&gen st'. ugyancsak ki v«r- téve ugyanezeknek a kiCFapadérl problémáknak,

A túlélmény több tárgya közül az egyik egy olyan adagolható készítmény előállít'ε··&, amely alkalmas e_wy ezomatotropin hoszezabb ifőtírt^mon ét való bevitelére egy beültethető idagoléból, így egy ozmotikus adagolóval. További tárgyai a követkesőkI

- olyan kíszitciány előállítás?, amely a szórni.tetropint nagy koncentrációban tartalmazzaj

- olyan készit-n'ny előállítása, amelyben a szematotropln kémiailag stabil és bioaktiv marad, megőrzi fizikai stabilitását és hosszú tárolási időszakok alatt nem képez csapadékot , vs1amint kémiailag stabil, bioaktlv és fizikailag stabil ma• rád testhőmérsékleten olyan időtartamon át, amelyet a szomatotropin tartós bevitele megkíván és

- olyan készítmény előállítása, amely a testhőmérsékleten könynyen adagolható.

Tehát röviden Összefoglalva a találmányts ennek célja adagolható szórnatotropin készítmény előállítása, amely legalább kb. 10/ bioaktlv bz»<í. totropint / előnyösen szarvasmarha- vagy sertés-szoiiuitotropint /, hatásos mennyiségű stabilizáló soliolt - ez 3 hidroxilcsoportot tartalmaz, mint a glicerin vagy • ··*· '99 999

9 9 9 9 99

9 999 9 99

9 9 9 99 999 a trisz/hidroxi-üietil/-aminometán - ás megfelelő mennyiség# puffért tartalmas · Ez utóbbi rendeltetése a pH olyan tartományban való tartása, amelyben a szem&tetrepin megőrsl Melániái aktivitását megfelelő időtartamon át annak érdekében, hegy a készítményt hatásosan alkalmazhassuk a szematetrepln egy állati szervezetbe való tartós bevitelére·

Egy kitüntetett kiviteli mód esetében a készítmény pH-ját kb· 4,5 és vagy kb. 7 vagy kb, a szematetrepln izeelektronra pontja / a kettő közül a magasabb / közötti pH-ra állítjuk be· Kitüntetett puffer pl· a hisztidin-hidroklorid, egy alkállfás-foszfát puffer, a trisz/hidrexi-metil/-aminometán-hldreklorlA és egy citrát-puffer vagy bármely más puffer, amellyel a kívánt pH elérhető·

A készítmény tartalmazhat e^y nedvesitőszert is annak a sebességnek a növelésére, amellyel a hígító folyadék felvosal a szórnatetropint·

A találmány további tárgya: eljárás a szematetrepln állati szervezetbe való bevitelére, azzal jellemezve, hegy as állatba egy bizonyos időn át az előbbiekben leirt készítményeket visszük be Infúzióval·

A találxaány szerinti eljárás - a fent leírt Bzomatotrepln-készitmények előállítására - abból áll, hegy a paliéit ás egy vizes puffer-oldatot, és kívánt esetben a felületaktív anyagot Összekeverjük, a szómatatropint eszel a hígítóval nedvesítjük és így egyfázisú készítményt nyerünk·

Az ábrák rövid leírása a következő:

Az 1· és 2· ábra beültethető, ozmézisnyomás hatására működő infúziós berendezések vázlatát mutatja be·

A 3·, 6., 7. és 8. ábra a 2·, 5. és 6. példa szerint vág10 zett patkány-tenyésztési vizsgálatok eredményeit mutatja be grafikusan.

A 4· és 5, ábra grafikusan ábrázolja a 3* példa szerinti dimer/aggregétűm képződési vizsgálatok eredményeit,

A 9, ábra a 10, példa szerinti tejtermelési vizsgálatok eredményeit ábrázolja grafikusan,

A kitüntetett megvalósítási módokat a következőkben ismertetjük,

A rekombinációval előállított szórnatotropinokat általában lúgos körülmények között különítjük el és tisztítjuk. Ebből következően a szomatotropln vizes oldatai lúgosak lehetnek, a visszamaradó lúgos pu^fer / pl, nátrium-hidrogénkarbonát /jelenléte hatására. Kimutattuk, hogy az ilyen vizes oldatok jelentős biológiai aktivitással rendelkeznek, Míg a híg szomatotropin oldatok magas pH-η stabiluk lehetnek, a magas pH-ju szórnatotropin Oldatok - különösen magas koncentrációk mellett - legalább biz·nyes mértékben hajlamot mutatnak a kémiai insta bilitásra, A szómatatropin hajlamos diaerek és aggregátumok képzésére, amelyek gyakran nem rendelkeznek a nem-agglomorálédott fehérje hormon biológiai aktivitásával.

Bár azt találtuk, hogy a szomwtotropinok kémiai stabilitása növelhető a vizes rendszer pli-jának csökkentésével, az optimális kémiai stabilitás rendszerint az izoelektromos ponthoz viszonylag közeli pH-tartománybán érhető el, amelyben a fehérje oldhatósága minimális. Ennek következtében azok az oldatok, amelyek kielégítő kémiai stabilitással rendelkeznek, fizikailag általában nem stabilak, azaz a fehérje kicsapódásra hajlamos, Hazai szemben a magas oldhatóság fenntartására meg• ··«· ·· * ·· • ♦ · · · · · · • · ·«··· · • · · · · · ·. · • · · ·· · * · ····

- 11 Μ» felelő pH-ju oldatok kémiailag általában nem stabilak, azaz biológiai aktivitásukat az időben elég gyorsan elvesztik·

A találmány szerint azt találtuk, hogy egy adagolható szomatotropin készítmény fizikai stabilitása, kémiai stabilitása és biológiai aktivitása / a készítmény magas szomatotropin koncentrációja mellett / megőrizhető oly módon, hogy jelentős monpnyisógü poliolt adagolunk, ós pufferőiünk a rendszer pH-jónak olyan szinten való tartáséra, amelyen a dimerizácié ós az aggregátum-képződés gátolt.

A fehérje hormon oldatbavitele még sz izoelektromoa ponthoz aránylag közeli pH-η is elérhető. A találmány szerinti készítmények jelentős mennyiségű szomatotropint tartalmaznaki jelentős / as előállítás időpontjának megfelelő / biológiai aktivitást mutatnak» est a bioaktivitás-szintet még hosszabb tárolási időtartam után is megőrzik és nrna hajlamosak arra, hogy a szomatotropin kicsapódjék a folyadékfázisbél. A találmány szerinti adagolható készítmények alkalmasak egy infúziós elosztóból· különösen egy ozmotikus elosztóból való szabályozott felszabadulás elérésére.

A találmány szerinti eljárással különböző ssometotropinek hatékonyan alakíthatók át készítményekké. Példák a találmány szerint használható szórnatotreplnokrai

- madár-szomatotropinok, csirke, pulyka stb. kezeléséről viziállatok szomatotropinjel, hal stb. kezelésére és különösen

- emlŐe-ssomatotropinok, ember, szarvasmarha, sertés, juh, kecske stb. kezelésére.

Különösen hasznos a szarvasmarha; - és a oortés-ssomatotropin.

• ···

Előnyösen rekombináns DKS technikát alkalmazunk a ssomatotropin mikrobiológiai után való kifejezésére, mivel ez a,médser jelentős mennyiségű szomatotropin termelésére képes· Ezenkívül a rekombináns 3FS teohnikák lehetővé teszik variánsok termelését, amelyek vagy hasonló szekvenciával rendelkeznek, mint a természetben előforduló szón®totropinok, vagy különböznek attól·

A természetben előforduló szarvasmarha és sertés ssematotropinok szekvenciáját Seeburg et al. / DNA, vei· 2, Ko.,1, p. 37-45, 1983 / Írja le? est a helyet a hivatkozás révén a leirás részévé tesszük·

A szarvasmarha szórnatotropln variánsok közé tartósnak / de nem korlátozódnak ezekre / a következő aminoeav-szokvenoiával rendelkező polipeptidok? ezekben a nem-meghatározott aminosav maradékok hasonlók a természetben előforduló szomatotropinokban találhatókhoz:

MH₂-met-fe/l/-pro/2/....leu/126/..·.fe/190/-C00H •···val/126/*···

SH₂-ala-fe/l/-pro/2/ •···leu/126/····

BHg-fe/l/-pro/2/··.. leu/126/..·.fe/19O/-COOÍl

NHg-met-asp-glu-fe/l/-pro/2/·...leu/126/....fe/19O/-COOH ••••val/126/·..·

KH₂-met/4/-szer/5Z....leu/126/....fe/19O/-COOH •···val/126/····

NH₂-met-fe/10/....leu/126/....fe/190/-C00H

....val/126/····

- 13 Az előbbi jegyzékben szereplő első változatra - amelyben egy metionil-mara-dék alkotja az K-terminálist és egy leuoin-maradék van jelen a 126. helyzetben - a leírásban úgy fogunk hivatkozni, mint metionil-szarvasmarha-szomutotrepinra /’*KIBS/ és a jegyzékben feltüntetett harmadik változatra - amelyben egy alanil-mar&dek képezi az N-terminálist és valil-fflaradék van jelen a 126. helyen - úgy hivatkozunk, mint alanil-valil-szarvasmarha-szoraa totropinra / ala-val-BS'f” vagy A-BST /.

A Mrtés -szomatotropin változatok közé tartoznak / de nem korlátosodnak ezekre / a következő aminosav-szekvenciával rendelkező polipeptidek, amelyekben a nem-meghatározott aminooav-csoportok hasonlók a természetben előforduló szórnatetropinokban jelenlevőkhöz»

NH₂-ala-fe/l/·...fe/19O/-COOH HH₂-met-fe/l/....fe/19O/-COOH KH₂-met/4/-pro/5/....fe/19O/-COOH NH₂-met-leu/6/....fe/190/-Cü0ii NH₂-met-szer/8/....fe/19O/-COOH MI₂-met-fe/10/....fe/190/-C00H

Az előbbi jegyzékben szereplő első változatot - amely alanil-csoportot tartalmaz N-terminálisként - úgy fogjuk említeni, mint alanil-sertés-szomatotropint vagy APS”-t. A felsorolásban másodikként említett változatra a leírásban úgy fogunk hivatkozni, mint metionil-sértés-?,zouifetotropinra vagy MPS^w-re.

Magától értetődő, hegy az előbbiekben Isirt változatokon jelenlevő további l’-terminális metienil-csoportok ugyancsak eltávolíthatók, az expresszié alatt vagy után.

Ugyancsak magátél értetődő, ho^y egy vagy több aisinosav el*·0·

- 14 hagyható az alábbi szekvenciából / amely az előzőkben leirt szarvasmarha és sertés szomstotropin szekvencia 32-33 tagjának felel meg /:

-glu-arg-ala-tyr-ile-pro-gluEzt a doléció-tipust írja le a 282,318 és 282,319 sz. 1988.09.14-n közzétett - európai szabadalmi bejelentés.

Más, szomatotrepin aktivitással rendelkező delóciés variánsok / pl. azok, amelyekben a 32.-45. aminosav hiányzik / ugyancsak használhatók.

A találmány szerinti készítményben való bevitel esetében a leghatékonyabbnak azokat a szomatotroplnokat találtuk, amelyek N-terminális csoportja metionintél eltórő.Egyes N-metionil-szonatotropinok erősen csökkent biológiai aktivitást mutatnak a pufferezett paliéi késsitmónyben. Kitüntetett szomatotropin az APS és az A-BST.

A stabilizáló poliol* kifejezés bármely, 3 hidroxil-csoportot tartalmasé polielt jelent, amely a szomatotropint fizikailag stabil készítményként tartja fenn, azaz arra vezet, hogy a szómatatropin nem csapódik ki nemkivánt mértékben egy ésszerű tárolási vagy adagolási periódus során. Kitüntetett poliol a glicerin, de használhatunk más poliolokat is, amilyen pl. a trisz/hidroxi-metil/amino-metán.

A készítménybe egy fisiolégiaSlag kompatibilis puffért viszünk be, annak érdekében, hogy a készítmény pH-ját azon a ta-rtományon belül tartsuk, amelyben a szomatotrepin biológiailag aktív. Az oldat pH-ja általában min. kb. 4,5 vagy előnyösen kb. 5 vagy még előnyösebben 5,7 és max. kb. 7 111. kb. a szomatotrepin iseeloktromos pontja / a két utóbbi érték kö15 sül a nagyabb /.

Az APS izeelektromos pontja. 7,6; az MPS-á 7,3 és az A-BST-é 8,6· Ezek az izoelektromos pont értékek a standard monomer formáknak felelnek meg, amelyek az ilyen szamatatropinok kereskedelemben hozzáférhető tételeiben rendelkezésre állnak· hás változatok, más származékok és más alakok izoelektromos pontjai a szokásos módszerekkel határozhatók meg· Az APS esetében az optimális pH a kb. 6,1 - kb. 7,0 tartományban van, mig az A-BS'f esetében kb. 6,1 - kb· 7,5 között. Bár különböző pufferek alkalmazhatók, előnyben részesítjük az alkálifém-foszfát puffereket· A kívánt pH tartománybanjtellépő puffer-hatás elérésé re különösen előnyös, ha a puffer lényegében egy monobázisos foszfát, amilyen pl. a nátrium- vagy kálium-dihidrogén-foszfát·

Egy másik hatásos puffer a pii-n&k a kívánt tartományban való beállítására egy hisztidin-hidrogén-halogenid, pl· a hisztidin-hidroklőrid·

További pufferek, amelyek fenntartják ezt a ph-tartományt, a citrát-pufferek és a trisz/hidroxi-metil/anino-metán savaddioiós eói, pl. hidrokloridjíi. Ezek a trisz/hidroxi-metil/-amino-metán-sók hidroxil-csoportokat is tartalmaznak és egyes esetekben stabilizáló paliéiként hathatnak· Bármely más puffer is alkalmazható, amely képes a pH-nak a kívánt tartományban való tartására.

Közbevetőleg meg kell jegyeznünk, hagy a találmány szerinti készítmény ph-jának közvetlen mérése nem feltétlenül oldható meg minden esetben· Gyakorlatilag a mérés elvégzésére úgy járhatunk el, hogy kismennyiségü / pl, 1 cseppnyi / ké • · · · szitmónyt bemérünk kb. 10 ml vízbe és meghatározzuk a kepeit keverék pH-ját, Feltételezhető, hogy ezzel a méréssel erősen megközelítjük a készítmény tényleges pH-ját és mindenesetre az ilyen hígításban mért pH-t » leírás céljaira azonosnak tekintjük magának a készítménynek a pH-jával.

Annak elősegítésére, hogy a készítmény előállítása során a puffer/poliol hígító nedvesítse a szomatotropint, előnyösen egy nedvesitőszert is alkalmazunk, amilyen egy nemionos felületaktív anyag· Ez a felületaktív anyag egyben gátolja a habzást· Különösen kitüntetett nemionos felületaktív anyag egy poli-etoxilezett szerbitán-észter, pl· a szerbitán-mono-oloát tri/polioxi-etilén/-észtere / a kereskedelemben Tween 80 néven szerezhető be, gyártja az ICI Americas Inc· /·

Pufferezett poliol higité alkalmazása a szomatotropin esetében azzal a jelentős előnnyel jár, hogy nagy terhelés érhető el, mivel a szomatotrepin igen jél oldhaté a higité folyadékban· Ezenkívül annak ellenére, hegy a szomatotrepin nagy koncentrációban van jelen egy készítményben, amely jelentős mennyiségű vizet is tartalmas· a puffer által fenntartott pH megakadályozza dimerek és más aggregátumok képződését· Bár naa határoztuk meg, hogy a szometotropin valódi oldatban vagy kolloid oldatban van jelen, a szomatotrepin nem csapódik ki vagy másként sem válik.ki a hígítóból, sem állás közben, sem annak a súrlódásnak a hatására, amely akkor lép fel, amikor a készítmény áthalad a kivezető szakaszon és kinyitja az infúziós pumpát.

A szomatotropin koncentrációja a készítményben legalább kb.

·.·· •ί * · ♦ · 4 .

• · · · » « _β , .·_Λ · · · · · · · · •*· *........

- η 10 tömegé, előnyösen legalább kb· 15 tömeg/, előnyösebben legalább kb, 20 tömeg# és még előnyösebben legalább kb· 29% vagy akár 30tömeg% fölötti érték· A szomatatropin koncentráció elérhet magos értéket, igy kb· 45 tömeg#-·t is; értéke előnyösen kb· 40 tömeg#, előnyösebben kb· 35 tömeg/·

A poliol-kencontráció legalább kb· 20 vagy 25 tömeg# és maximális értéke ÖO, 70, 6o, 50 vagy 40 tömeg?)· Aránylag magas glicerin-koncentráció ezenkívül bakteriesstatikus hatást fejt ki· Általában az vehető figyelembe, hogy egy legalább kb· 50 tömeg# glicerint tartalmazó higitó baktertosztetikus hatást fe$t ki.

A készítmény továbbá előnyösen tartalmaz egy nedves!tőszort, igy egy nemionos felületaktív anyagot, amelynek optimális koncentrációja kb· 0,0t va_My kb· 0,5 tömeg# és kb. 0,7 vagy 1 tömeg% között helyezkedik el, esetleg 2 tömeg/ a felső határ·

A készítmény pH-ját - eltekintve a puffer-sótol, amelynek mennyisége egy foszfát-puffer esetében általában 4-7 tömeg# a viz határozza meg· Kitüntetett esetben a készítmény legalább kb· 7# , előnyösebben legalább kb· 15/ vizet, ás még előnyösebb esetben kb· 25 - kb. 35 tömeg# vizet tartalmaz.

A készítmény általában tiszta, homegén és egyfázisú· Kb· 4*C tárolási hőmérsékleteken a készítmény szilárdnak vagy félig szilárdnak tűnik· Az állati test hőmérsékletén a készítmény viszkozitása csökken és viszkazus folyadék képződik· Xly módon a készítmény minden hőmérsékleten adagelhatóvá válik anélkül, hogy könnyen folyó anyag lenne.

A készítmény viszkozitásának a hőmérsékletváltozás hatására fellépő változása egy olyan készítmény viszkozitása pél<á-

-18ján szemléltethető, amely 33% APS-t, 33,5% glicerint ás 33,5% 1M menonátrlum-fessfát puffért tartalmas. 10*C-on ennek a készítménynek a visskozitása 2,000,000 oontipoiso-nál nagyobb, 25*C-on kb. 215,000 centlpolse ée 37*C-en kb. 23,000 oentlpelse·

A találmány szerinti vlszenylag híg késsltményokben / amelyekben e szemetetrepln koncéntráciéja kb· 25% alatti / kívánatos a ssematetrepln lényegében állanáé tömegarányának fenntartása mind a vízhez, mind a pufforhez képest és olyan pellel-ardnyok alkalmasába, amelyek a ozomatotropln-konoentráclé csökkenésével növekednek·

Pl· azt találtuk, hogy egy 44% glicerint tartalmazó 10%-es APS oldat esetéből blsonyos mennyiségű APS ki csap adhat, de egy 78% glicerint tartalmasé készítményt fizikailag stabilnak találtunk· 25%-ndl kisebb ozomatotropln konoentráolék ecetében a szamatetropin/viz arányt előnyösen a kb· 0,9 - kb· 1,1 tartományban, míg a ssomatotropln/foszfát-puffer tömegarányt a kb·

5,5 - kb· 7 tartományban tartjuk· Az adott esetben alkalmaséit nedvesltőszertől eltekintve előnyösen úgy hatöressük meg a 25 %-nál kevesebb szomatotropint tartalmasé készítmények összetételét, hegy ezek főtömege lényegében pellel legyen·

Mövokvé ezematotrepln-konoontrácle mellett / ha pl· a ssematotropln kenoontrácléja 25% fölé emelkedik / a víznek én a puffemek a szórnatetropinhoz viszonyított mennyisége előnyösen csökken, mlmellott a pollel-konoentráolét a lehető legmagasabb értéken tartjuk. A pellel-tartalmat azonban limitálják a viszkozitásra vonatkozó meggondolások! Így a 25%-nál magasabb homon-tartalsu készítmények esetében a maximális pellel-

-koneentráeié kb. 40-45%. Magasabb poliol-koncentrációk előny ösek a fizikai stabilitás asompontjábél, de olyan viszkeitást eredményezhetnek, amely bonyolulttá teszi a készítmény késelését,

A találmány sserinti készítmények kémiai stabilitását a tárolás alatt a hőmérséklet és a tárolási idő ogy kombináciés tartományán belül tarthatjuk fenn. Szobahőmérsékleten >1, ogy optimális ASP-késsitmény 6 hónapon vagy ennél hosszabb léén át tárolható a biológiai aktivitás kimutatható csö/kkonéso nélkül, Testhőmérsékleten van bizonyos mértékű bloaktivitás-voostoeég, <o a csökkenés sebessége mérsékelt és as idővel lineáris· A késsitményok teljes mértékben megőrzik a megfelelő biológiai aktivitást sokkal hosssabb időn át, mint amekkorára a legtöbb alkalmasás esetében ssükség van,

Bnnek követkestében a késsitmények hassnosak esőknek as ismert biológiai hatásoknak as elérése szempontjából, amelyek a ssematotroplmek bevitele révén bistesithatók. Ilyen biológiai hatások pl, a követkesőkt

- a tejtermelés fokozása emlősökben a laktációs periódusban,

- a tápanyag-hasznosítás fokosása,

- a növekedés gy ámítása,

- a tejmirigyek funkcióképességének növelése és

- a ssir/hua arány javítása,

As elért eredmények függnek a aaomatotropin bevitt mennyiségétől és as állat laktációs statusáétól ill, növekedési fázisától / asas attól, hogy as állat a laktációs periódusban van, vemhes stb. /· A találmány szerint szabályesett felszabadulás érhető el, egyetlen adag révén, amely hatás kb. 6 héten vtgj «linói heaasabb Időtartamén át fennáll·

A találmány aaerlnti eljárd· alapján egy hígító felyadéket állítunk elő, a peliel áa a puffer ösasekeveréaável· A puffar* -eldat kiindulási pH-ja előnyösen a kb. 4,0 - kb· 4,4 tartemányba esik· A puffer előnyösen egy alkálífém-díhldregón-feesfátet tartalmas, előnyösen 0,5 - 2,0 M keneentráoiéban, víaee eldatban óa est as eldat·t keverjük ösase a peliellal· Aa anlenes felületaktív anyagét előnyösen aselőtt adjuk a pelíelhas, mielőtt est öaasekeveménk a puffer-eldattál· A hígító felyadóket általában aterlleasttt / pl· aterll asürésaal /, majd a •terű, asürt hígítót a eaematetreplnnal valé öaaaekevmrós •lőtt felmelegltjük.

A találmány aaerlnti eljárás egyik megvalósítási médjg szerint asematetrepin pert adagelunk a aterllesett hígító felyadákhes. Mielőtt asenban a asematetrepín pert hesaáadnánk a felyadák főtömegóhea, előnyösen nedvesítjük a hígítóval· Bs különböző módeken végeshető el·

A keveróa történhet pl. egy kevert«tett edényben, pl· egy lapátkeverővei ellátett tankban· Ilyen körülmények kösött a felyadók főtömegét mechanikusan keverjük, elyan sebességgel, amely elégség·· ahhea, hegy hullámekat keltaen a felületen és igy elősegítse a per nedvesítését, de asen sebesség alatt, amelynek hatására légbuberákek lépnének be a felyadók fÖtömégóbé· Amiker a per a hígító főtöm egének 'felületén nedvesítetté válik, egy *krémasertt réteg* képadóik abban a róssben, amely* bői a nedvesített per átkerül a felyadák fŐtömegébe. A keverés tevábbá ast a aélt saelgálja, hegy a nedvesített per diaspergálédjék a felyadók főtömegében, amelyben a találmány aserlmtí kéealtmény keletkesóaa kösben eldédík·

Egy másik megvalósítási mád szerint a keverés egy forgó üvegben vagy dobban végezhető* Bármilyen keverési módszer alkalmazható, de előnyben részesítjük ezeket, amelyek mlnimálie aurlódással járnak és igy minimálisra csökkentik .a levegő bevonását. Annak érdekében, hegy az elnyelt gázokat eltávolitsuk a készítményből, úgy járhatunk el, hegy azt kevertotée nélkül magasabb hőmérsékleten állni hagyjuk, amíg a bekerült levegő eltávozik·

A találmány szerinti készítmény bármilyen tipuau infúziós adagoló berendezéssel bevihető a szervezetbe* Előnyben részesítjük a beültethető továbbító szerkezeteket* Különösen előnyösek az ozmotikus hajtéelvan alapuló beültethető adagoló berendezések* Lényeges, hogy a szórnatotropin-készltmény védett legyen a beültethető pumpát környező testfolyadékok által való szennyeződéstől. Ez úgy érhető el, hogy a készítményt egy olyan elosztékamráben tartjuk, amely a környező folyadékokkal szemben hatásos mértékben féligáteresztő.

Az 1* és 2* ábra beültethető, ozmotikus működésű adagolók vázlatát mutatja be.

Az 1* ábra egy nyomásos tipusu adagoló keresztmetszetét tünteti fel. Egy ilyen tipusu adagoló esetében az adagoló 1 és 2 fala merev szerkezetet képez, amely magában foglalja a 3 és 5 kamrából álló szakaszt, mimellett ezeket a kamrákat a 4 szivattyú választja el. Az 5 ozmotikus motor kamra egy ozmotikusán aktív anyagot tartalmaz, amilyenek pl* a következők»

- egy vizeldhaté só vagy egy vizeldhaté só telített oldata;

- egy víz hatására duzzadó polimer, amelyre a továbbiakban mint hidrogélre fogunk hivatkozni;

- vagy egy hidrogél és egy vizeldhaté só keveréke.

......

• · ····· . ···*··* * ····· ·

-^2Az ozmotikus aktivitású anyagokra példákat találhatunk a 3,995,632 sz· amerikai egyesült államok-beli szabadalmi leírásban / szabadalmai Kakano et al. / és a 4,327,725 sz· amerikai egyesült államekvbeli szabadalmi leírásban / szabadalmas Corteso et al· /, amelyeket e hivatkozás révén a leírás ró ősévé teszünk.

Előnyben részesítjük azt a megoldást, amikor az ozaorikusan aktív anyag egy hidrogél vagy egy hidrogél ée egy visoldhaté sé keveréke·

A 2 falnak az ozmotikus motor kamrát” körülvevő szakasza lsgalább részben vízáteresztő kell, hogy legyen, annak lehetővé tételére, hogy víz szivárogjon be az ozmotikus motor kamrába·

A féligáteresztő fal elkészítésére megfelelő ; anyagok a szakember számára ozmózis- vagy fordított ozmózis membránok gyanánt ismert anyagok közül kerülhetnek ki| özekből néhányat a Corteso-f. szabadalmi leírás ismertet·

Amint víz lép be az ozmotikus motor kamrába, ennek mérető megnő és ennek hatására a 4 dugattyú benyomódik a hatóanyagot tartalmasé 3 kamrába. A hatóanyagot tartalmazó kamrában a találmány szerinti készítmény van jelen, amely a 6 nyílásén keresztül kiprésolődik, amint a dugattyú előremezeg.

A dugattyú előállításához megfelel bármilyen anyag / pl. viasz vagy egy elasztomer /, amely deformálható, oly módon» hogy érintkezésben maradjon az adagoló falával, amint az előrehalad, annak elkerülésére, hogy érintkezés jöjjön létre a csórnatotropín készítmény Ós az ozmotikus motor között.

A hatóanyagot tartalmasé kamra fala vizátnemorosstŐ vagy • · · » · ··· ο · lényegében vizátnemeresztő kell, hogy legyen, hegy igy megvédje a szomatotropin-készitm'nyt a környező testfolyadéokkal veié szennyeződéstől, ami káros lehet a készítmény stabilitása szempontjából· A vizátnemeresztés azáltal érhető el, hagy a falat vizátnemeresztő anyagbél állítjuk elő; vagy egy vizátnemoresztő bélést alkalmazunk 111. visátnemeresztő bevonatot viszünk be.

Ez a feladat pl· a következő jellegzetes polimerek alkalmazásával oldhat» meg: vizátnemeresztő polietilén, poli-tetrafluor-etilén, polikarbonát, polistirol, »oliamii, polifonnaldehid, polimelaminvfmraaldehid, pollszulfon, stlrol-butadlén-gumi, vizátnemeresztő poliuretán, polipropilén, polivinil-klorid stb*

A 2. ábre egy Összecsukhat· zsák tipusu adagelet mutat be, amely a kereskedelemben hozzáférhető / Alzet® ozmotikus slivattyu, gyártja az Alza Co. /, A 13 ozomatotropin-készitményt a 12 vlzátnemeresztő flexibilis zsákban helyezzük el· Ezt a zsákot egy 11 merev,vízre félig áteresztő fal veszi körül· A zsák és a fal között található a 14 ozmotikusán aktív anyag· Amint a falon keresztül a környező testfolyadékokbol viz szivárog be, az ozmotikusán aktív anya, térfogata megnő, ennek hatására a zsák bezárul és a szomatotropin-készitmény kilépni kényszerül a 15 adagoló csövön keresztül· A szerkezetet egy 16 dugó és egy 17 perem fogja össze és zárja le.

A külső membrán egy cellulóz-észter-keverék, mig az összecsukod· zsák egy hŐrelágyuló szénhidrogén elasztomerből készül·

A szakember számára más tipusu beültethető ozmotikus adagolók és más tipusu infúziós pumpák is ismertek·

Az elosztó kapacitása, a találmány szerinti készítmény szómat atropin-konc ént rációja és az adagolóból való kilépés sebes?·» sége egyaránt szabályozható annak elérésére, hogy a készítményt a kívánt sebességgel a kívánt időtartamon át adagoljuk· A kitüntetett adagolási sebesség függ az elérni kívánt biológiai hatás típusától és az állatfajtától, 111. ennek márététői.

Sertések hizlalásának befej esésére pl. kitüntetett adagolási sebesség a kb. 0,5 mg/nap - kb. 10 mg/nap szómat atropin-tartomány, előnyösen a kb. 1 mg - kb· 5 mg /nap szomatotropin· Szarvasmarhák esetében a laktáoió fokozására, a növekedés gyorsítására vagy a tápanyag-hasznosítás javítására a kitüntetett adagolási sebesség a kb. 2 mg - kb. 60 mg/nap szomatotropin tartományba esik és előnyösen kb. 5 mg - kb· 25 mg szómatatropin/ nap.

Sebés-hizlolás befejezése esetében a hatásos adagolási időtartam 6 hét vagy ennél több, síig szarvasmarhák esetében 10-12 hét vagy ennél több.

A találmányt a következő példákkal illusztráljuk·

1· példa

Hígítót állítunk elő oly módon, hogy 1,0 M nátrium-foszfát oldat előállítására monobázisos nátrium-íoszfát-monohidrátot oldunk vízben; as oldat pH-ja 4 - 4,8· Ehhez a puffer-oldathoz glicarint és Tween 80-at adunk olyan hígító előállítására, amely 1% Tweent, 49,5% glicerint és 49»5% 1,0 M nátrium-foszfát oldatot / ill. ennek egyenértékét / tartalmazza·

Az előbbiek szerint előállított hígítót alkalmazva egy sorozat APS/foszfát/glicerln készítményt állítunk elő, fecskén- 25 -

dókban· Ezeknek a készítményeknek az előállítása serén as APS pert bemérjük a fecskendő-testbe, amelyből a du.ottyut eltávoli tettük. Előre meghatározott mennyiségű higitót adunk be a fecskehdőbe, * dugattyút visszahelyezzük és a levegő nagyrészét eltávolitjuk a kiléeő nyílásból. A fecskendőt ezután szobahőmérsékleten 2-3 ford./perc sebességgel forgatjuk és/vagy több érára 37^eC hőmérsékletű inkubátorba helyezzük· Tween 80 hozzáadása elősegíti oldat képződését· xiasonló módon egy készítmény-sorozatot állítunk elő lapátos keverővei ellátott edényekben. Optimális keveredést olyan keverési sebesség beállításával érünk el, amely elégséges hullám keltéséhez a folyadék felszínén, de elé* alacsony a levegő belépésének minimálisra csökkentéséhez,

2, példa

Vizes APS-készitményt állítunk elő, amely 30 tömegé APS-t,

33,5 tömegé glicerint, 33»5 tömeg% vizet és kellő mennyiségű / kb. 3 tömegé / hisztidin-hidrokloridot tartalmaz kb, 6,0 pH-ju készítmény előállítására·

Összehasonlítás céljából további oldatokat állítunk elő, amelyek összetétele:

- 30 % APS vízben,

- 3ü% APS megfelelő mennyiségű hisztidin-hidroklorid puffért

- pH 6,0 beállításához - tartalmazó vízben,

- 30% APS megfelelő mennyiségű hisztidin bázist - a pH 8,5-re való beállításához - tartalmazó vízben ás

- 30% APS 50%-os glicerinben·

Az oldat végső összetétele így» 30?' APS, 35% glicerin és 35^ víz

- 26 Az oldatokat 4 napon át 37*C-on tartjuk, nojd a diner-képződés mértékének meghatározására nagyság alapon kizárásos HPLC-nek vetjük alá / nagymennyiségű diner képződése a kémiai stabilitás hiányára mutat /.

Az oldatokat ezennel megvizsgáljuk a zavarosság megállapítására; ez a készítmény kicsapódására és a fizikai stabilitás hiányára mutat.

Ezeknek a vizsgálatoknak as eredményeit az 1.Táblázatban mutatjuk be.

1.Táblázat

Viz Hisz-HCl Hisz-bázis 50%gllcerin Hisz-HCl . vízben 50% glicerinben

	9.5	6,0	3.5	9.5	6,0
diner,% BPLC	46,7	3.5	27,4	36,0	2.1
fizikai stabilitás	♦		♦	4·	+
kéniai stabilitás		+			♦

♦ i a készítmény stabilitása jé

- t a készítmény stabilitása alacsony

Az APS/hisstidin-HCl/viz és az APS/hisztidin.HCl/glioorin/ • ο

- 27 viz készítmények biológiai aktivitásét felnőtt nőnemű patkányokkal végzett kísérlettel határozzuk meg. A kísérleti előivar írás szerint/erett nőnemű Harlan, Sprague-üawley patkányokba / 220 g / a vizsgálandó oldatot tartalmazó Alzet-pumpákat ültetünk be. A pumpába, bemért oldat térfogata mindegyik patkány esetében azonos. Megfigyeltük azoknak a patkányoknak a tömeg-gyarapodását, amelyekbe a két vizsgált oldatot tartalmasé pumpák valamelyikét beültettük·

Ezeknek a kísérleteknek az eredményeit a 3. ábrán diagramban mutatjuk be. Sár mindkét oldat kémiailag stabil - amint az 1.Táblázat adatai ezt mutatják -, a glicerinnel való kombinálás nagyobb fizikai stabilitást és nagyobb hosszutávu biológiai aktivitást biztosit.

3. példa

Vizes APS-késsitményt állítunk elő, amely kb. 30 tömegé APS-t, 34,7 tömegé glicerint, 29,9 tömegé vizet, 0,7 tömegé Tween 80-at és megfelelő mennyiségű / kb. 4,8 tömegé / monobázisos nátrium-foszfátot tartalmaz ahhoz, hogy o készítmény pH értékét kb. 6,6-re állítsa be.

Összehasonlítás céljából elkészítjük a következő összetételű oldatokat:

- 30% APS vízben, • 30% APS és 0,5 ü 1 ahgPO^ vízben,

- 30% APS és 1,0 M NaHgPO* vízben.

Az oldatokat 4 napon át 37*0-on tároljuk, majd nagyság szerinti kizárásos HPLC-nek vetjük alá, a képződött dlmer mennyiségének meghatározására.

*·» ♦·· • · · · • ··♦ ·· • · ···· ·· ♦» ····»

Ugyancsak megvizsgáljuk az oldatok zavarosságát, amely fizikai stabilitás hiányára mutat·

Ezeknek a vizsgálatoknak az eredményeit ée a különböző datek pH értékeit a

2.

Táblázatban mutatjuk be ol-

2, Táblásat pH

ViB ben

9»5

6,7

6,3 gliC· lí NaH₂P0₄

6,5 diner, % hplc fizikai ata bilitás

A különböző vizsgált hígítók, a diner-képződés és a fizikai állapot az egyes készítményekre vonatkozóan öossogezve a 3· Táblázatból tűnik ki.

3.Táblázat

Vi ze s ké s zitmény ek _stabilí t ás a

APS W	Táralási.	2S	Fizikai, megjelenés
Hígít·	idő, .
•ra	HPLC (% dimer)
10^	víz	0	0.9	9.5	CS
20	rí	0	1.6	9.5	CS
30		0	4.1	9.5	CS
15	π	24	13.3	9.5	CS
30		24	30.0	9.5	CS
30	50%-es gli	ce- 24	19.2	9.5	CS
	rin
30	3% hisz-HCl	24	1.9	6.0	PPT
	vízben
30	tt	24	44.6	9.5	CS

/pH beáll./

30	VÍZ	96	46.7	9.5	CS
30	3% hisz-HCl vízben	96	3.5	6.0	PPT
30	3% hisz-bázis vízben	9ó	27.4	8.5	CS
30	3% hisz-HCl 50% glicerin	96	2.1	6.0	CS
30	1,0 M NaH2PO4	96	3.3	6.3	PPT
30	0,5 M ”	96	3.3	6.7	PPT
30	50% 1,0 M NaH2·.	-96	1.4	6.5	CS

PO., 50% glicerin

CS = tiszta eldat vagy szirup

PPT = kicsapédett / fizikailag nem stabil /

4. példa

Hárem készítményt állítunk elő, amelyek 30‘λ APS-t és 50%-es vizes glicerines higitít tartalmaznak és amelyek elkészítések·? megfelelő mennyiségű menebázises vagy dibázises nátrium-feszfútet veszünk ehhez, hegy e.jií-t 6,5-re, 7,3-re ill.

9,5-re állítsuk be.

Ezeket » készítményeket 14 napén át 39*C-en táréijuk, és a méret szerinti exkluzies kremategráfiával meghatérezzük a dlmer %-es mennyiségét, A pH 6,5 készítmény 2,9%, a pH 7,3 készítmény 10,6% és a pH 9,5 készítmény 73,0% diáért tartalmaz.

Két készítményt állítunk elő; az egyik összetétele:

30% APS, 5% menenátriuoi-feszfét, 35% glicerin és 30% víz, pH

6,4 ill. a másiké:

30%· APS, 3% hisztidin-hidreklerid, 33,5% glicerin és 33,5% víz, pH 6.

Ezeket a készítményeket hesszu időtartamú stabilitás-vizsgáié teknak vetjük alá 4*C, 22^eC, 37*C és 45*C hőmérsékleten.

A dimer-képződést az idő függvényében a feszfát/glicerines készítmény esetében a 4. ábrán, a hisztidin/glicerines készítmény esetében pedig az 5. ábrán mutatjuk be, diagram alakjában.

A vizsgálatik arra mutatnak, hegy a feszfát/gllcerines készítmény jebb ainőáégü. A hisztidin/glicerines készítmény hatáses az APS stabilitása megőrzése szemeentjábel, de nem elyen hatékeny, mint a feszfát/glicerinee készítmény és idővel kismért ékb en m _g«árgul ·

5. példa

Előállítunk egy készítményt, amely 30% APS-t, 5% mononátrium-foszfátot, 35% glicerint és 30% vizet tartalmaz, pH 6,4· Ezt a készítményt szobahőmérsékleten különböző ideig tároljuk ás a 2. példa szerinti biológiai vizsgálat / patkány / elvégzésével teszteljük· összehasonlítás céljából egy olyan kontrollt futtatunk, amelyben a patkányoknak nem adunk hormont, és egy másik kontrollt is alkalmazunk, frissen elkészített APS/foszfát/glícerines oldat alkalmazásával·

Ezeknek a biológiai vizsgálatoknak az eredményeit diagram, bán a 6. ábrán mutatjuk be.

Hasonló biológiai vizsgálatokat végzünk hasonló APS/foszfát/glicorines mintákkal, amelyeket 4-5 hónapon át és különböző hőmérsékleteken tárolzunk. Ezeknek a vizsgálatoknak az eredményeit a 7. ábrán látható diagramban mutatjuk be·

6· példa

1,5%; 3,0%; 6,0% és 30% APS-t tartalmazó készítményeket állítunk elő· ^A 30% APS-t tartalmazó készítményt úgy állítjuk elő, hogy az A?S_t hozzákeverjük egy hígítóhoz, amely 50% glicerint és 50% 111 vizes mononátrium-foszfát oldatot tartalmaz· A többi készítményt úgy állítjuk alő, hogy a 30%-os készítményt glicerin hozzáadásával hígítjuk.

Ezeket a koncentrációkat u_fcy határoztuk meg, hogy azok Alzet^ 2MXL4 ozmotikus adagolóval beadva Íj 2; 4,5 ill. 22,5 mg/nap AP3 dózist szolgáltassanak. Alkalmazunk egy nyomásos tisusu ozmotikus adagolót is, amellyel 42 napon át 1,3 ~ 1,6 mg/nap APS vihető be.

íindegyik ilyen rendszerrel elvégezzük a p&tkány-tenyéssté • · · ·

- 32 sí vizsgálatokat· Az eredményeket a 8· ábra szerinti diagram mutatja be·

7. példa

Előállítunk egy készítményt, amely 30% APS-t, 3% hisztidin-hidrokloridot, 33,5% glicerint és 33,5% vizet tartalmaz} pM kb. 6,0. Ezt a készítményt egy csoport / 8 db / hibrid ártánynak adjuk be, 200/Ul-os, 14 napos Alzet^R ozmotikus adagoló alkalmazásával, amellyel 3,6 mg/nap APS beviteli sebesség érhető el.

A megtöltött adagolót szubkután ültetjük be az állatok fülének belső oldalán és 14 nap múlva egy második adagolót ültetünk be·

Mindegyik sertés esetében meghatározzuk az átlagos napi tömeg-növekedést / ADG / és az átlagos napi tápanyag-fogyasztást /FC/· A tápanyag-hasznosítást /FE/ minden egyes állatra az FC/ADG hányadosként számítjuk ki· Minél alacsonyabb ennek értéke, annál jobb a tápanyag-hasznosítás.

A kezelt sertésekre vonatkozó átlag-eredményeket - a 28 napos kezelési periódusra vonatkoztatva - a 4« Táblázatban mutatjuk be· Itt közöljük a hasonló, negatív kontroll sertés csoport eredményeit / ezek nem kaptak hormont / és a hasonló pozitív kontroll sertés csoport adatait is / az utóbbiaknak napi injekció alakjában 3,6 mg APS-t vittünk be 25 ®M, pH 9,5 nátrium-hidrogén-karbonát oldatban /·

4. Táblázat

Negatív kontroll Pozitív Kezelt sertés kontroll /nem kezelt / /napi inj· /

- 33 1.-14. nap

ADG / kg/nap /	0,64	0,67	0,60
PC / kg/nap /	2,67	1,92	1,85
FB	4,22	3,02	3,27
15.-28. nap
ADG / kg/nap /	0,74	0,66	0,58
PC / kg/nap /	2,66	1,76	1,68
PB	3,64	2,71	3,49
1.-28. nap
ADG / kg/nap /	0,69	0,66	0,60
PC / kg/nap /	2,66	1,84	1,75
FE	3,89	2,84	3,17

A megnövekedett tápanyaghasznositási tényezők és a magasabb inzulia-szerti I. növekedési faktor szintek, amelyek a 15· és 29· napon megfigyelhetők, megerősítik azt a tényt, hogy az APS hatásosan bejutott a szervezetbe a 14 napos beültetési periódus alatt· β· példa

Hét, 9-9 keresztezett ártányból éllé csoportot kezelünk

APS-sel. Az alkalmazott készítmények a következő mennyiségű

APS-t és 1M mononátrium-foszfátot tartalmazzák vízben»

- 1,5% APS 1,8%

- 3,0% APS 3,5%

- 4,5% APS 5,3%

- 6,0% APS 7,0% foszfát-oldattal foszfát-oldattal foszfát-oldattal foszfát-oldattal és

15% APS 17,5% foszfát-oldattal

- 30% APS 35% foszfát-oldattal.

Az alapanyag mindegyik készítmény esetében a glicerin.

• 4 · ·

- 34 4

Az adagol· berendezésok a készítményokot megfelelő dózisokban adagolják ahhoz, hogy a jelzett napi dózisokat elérjük, 2 kontroli-csoportot alakítunk kit az egyik nem részesül kezelés ben / negatív kontroll /, míg & másik injekció alakjában 2 mg/nap APS-t kap pH 9,5 nátrium-hidrogénkarbonát puffőrben / pozitív kontroll /·

Az 1, kezelést e nyomásos tipusu bellitethető berendezéssel végezzük, a 2.-7, kezelés esetében pedig az adagolást 2 ml-es Álzet^R tipusu ozmotikus adagolóval végezzük és ennek időtartama 4 hét, A 6. és 7, kezelést úgy végeztük, hogy az 5, hét víe 4én beültettünk egy további 2 hatos Alzot^R tipusu ozmotikus adagolót, amelyok olyan APS készítményt tartalmaztak, hogy fenntartható legyen a jelzett napi adagolás, A bevitt APS ;^-oe mennyiségét és a kapott napi adagolást a következőkben mutatjuk bot

Kezelés, sorszám

1,3-1,4 mg/nap; nyomásos tipusu adagoló; 30% APS

2	1	fflg/nap;	Alzet-f, adagoló;	1,5% APS
3	2	mg/nap;	- M ▼ ;	3,0% APS
4	3	mg/nap;		4,5% APS
5	4	mg/nap;		6,0% APS
6	10	mg/nap;	- - ;	15,0% APS
7	20	mg/nap;	- « - I	30,0% APS

Az 1, kezelést 6 héten, a 2.-5, kezelést 5 héten, míg a

6, és 7, kezelést 6 héten át folytatjuk. Az ezekre a kezeié-

sekre vonatkozó ADG, PC és PS értékeket az 5· Táblázatban mutatjuk be, a pozitív és a negatív kontroliokkal kapott ereimé nyekkel öeozehasonlitva·

<Φ US > > • · rd

«3* O1

<Φ cn ό

in cn m

rH >lű

cn cn

co ’φ •

O US > cn

co

rd 10

co

η cn

co •

in σι

«0 •

10 «4«

• 04

04

• 04

• 04

• 04

04

• rd

• 04

rd

04

rd LA

0»

US

cn

o

rH

CO

σ«

o

σι

θ'

Φ

rd

CO

ιφ

m

r*

θ'

US

cn

O

CO

co

co

rH

us

<0

10

US

Φ

cn

• ·

•

•

•

•

•

•

•

•

«

•

•

•

•

•

•

•

rd

04

rd

04

rd

rH

rd

04

04

rH

04

rd

cn

m m* m

CO

rd

04

cn

σ

rH

04

co

04

o

O

σι

rd VO

cn

co

10

O

co

tn

O

O

o

04

σι

rH

m

• ·

•

•

•

•

•

•

•

•

«

•

•

•

•

rH C4

04

04

cn

04

cn

rd

cn

cn

cn

cn

04 rH

US

co

<Φ

rH

cn

O

co

M*

cn

m

θ'

co

σι

cm cn

in

rd

O

σ>

σ>

O

<Φ

CO

’Φ

04

σι

<Φ

in

• ·

•

•

•

•

•

•

•

•

•

•

•

•

rH 04

CM

rd

cn

CM

f0

cn

cn

*Φ

cn

<n

> «Φ

co

04

CO

rH

<n

M1

in

cn

04

04

’Φ

in

rH CO

<Φ

cn

rH

O

<φ

in

r>

cn

cn

θ'

<φ

co

• ·

•

«

•

•

•

•

•

•

*

•

•

•

•

H 04

04

cn

cn

rH

cn

cn

cn

10

cn

04

rH

O >

t>

<0

cn

co

cn

<Φ

rH

10

o

04

rd

in

CO

ο σ»

O

co

rH

cn

CO

04

10

cn

θ'

co

rH

US

• ·

•

•

•

•

•

•

•

•

*

•

•

•

•

H 04

cn

cn

co

04

cn

CO

<φ

cn

-Φ

in co

o

o

in

o

θ'

m

H

in

o

co

rd

cn

cn

cn

rd

rH

<-< co

m

co

04

rd

σι

o

04

o-

co

cn

r4

co

co

• ·

•

•

•

•

•

•

•

•

*

•

•

•

•

*

•

•

rH 04

04

cn

<φ

cn

n

cn

in

cn

<0

cn

«Φ

i> •Η -P •rl

N Ο &

ο» cn co

θ'

i0 m

> cn co

04

θ' <φ

'Φ

cn

rH rH cn

04 co

04

o

o

cn

σι

US

θ'

CO

o

US

σι

σι

04

04

♦ ·

•

•

•

•

•

•

•

•

•

•

•

•

•

•

•

•

rH 04

04

rH

cn

04

04

04

cn

Ί1

04

cn

cn

cn

rH

o

rd

θ'

rd

σι

rd

Ol

cn

O

co

04

in

cn

US

in

<φ

’Φ

}>

rd

rd

rd

o

CO

«Φ

O

O

cn

O

θ'

θ'

co

co

<φ

o

in

in

co

•H

Q

•

•

•

•

•

•

•

•

•

•

•

•

♦

•

•

•

•

•

-P

h

rd

cn

cn

cn

rd

04

cn

cn

cn

'φ

cn

CÖ

-P

ω

fi

o

0

β

-P	Λ				p
χφ	SD			-P
Λ	Λ	-p	-p		43
	Ο	0 MD	0 Ό)	0 43	0
•	quw ·	Q 0 M 43	QUW 43	Ű 0 H	őua ·
rd	< fa fa 04	< fa fa ·	< fa fa ·	< fa fa *	< fa fa \0

cn m o fa ω fa ····

- 37 >1 cm σ> οο

C0 Η νθ

CM CM r- χο ο > σι m • · ·

Η CM ·· ··· ·· ·· · ·· • · · · · ··· · · · • ···· · ·· · ·♦··

	h in cn co co cn
ml	•	•	•
		rH	CM

ιη ιη σι > co ’Φ • · * ι-H CM m| co cn co cn > >

CM CM cn σ o o o o • · · h cn cn

H|

-P •d N 0 CM

	rd rd
i>	. 0
•d	h
-P	-P
tí	fi
6ű	0
Φ	Λ1
fi

co in io σι cn m* • · · cn cn > m in co o co • · · cn cn

CM > σι η ’Φ • · · cn cn cn ο 'φ ο σι co • « « rd CM CM cn cn cm cn cn io cn cn

hét
• -·
1 .	□
•	ŰUM
r-t ;	< fa fa

p XB:

Ό

I

cn lű H co > >

• « · cn cn

O lO > o <n <n

H CM CM m σ· ’φ co cn ο • · · cn <φ

Ο H fa fa • ο : 0.0 ···· »· · • ο 0 0 _ ο ··· ο · • ♦ · ···· • ο ·· ·

- 38 Αζ 1·, 6. és 7. kezelés az aktív APS hatékony leadását biztositja a kezelés teljes, 6 hetes időtartama alatt· A 4· és 5· kezelés aktív APS hatékony leadását biztosítja a kezelések 5 hetes időtartama alatt. A 2· és a 3· kezelés közel áll ahhoz a küszöbhöz, amelyjalatt hatás nem észlelhető·

A vizsgálatban alkalmazott különböző készítmények stabilitását úgy állapítjuk meg, hogy a zárt fecskendőket - amelyok a készítményeket tartalmazzák - 37*C-on inkubáljuk, 7 és 28 napon át· A készítményekben jelenlevő diner %-os mennyiségét méret szerinti kizárásos kromatográfiával határozzuk meg· Az

eredményeket a 6. Táblázatban foglaljuk össze.
	6. Táblázat
APS. %	DIMER,%
	7 na p	28 nap
——	———	——————
1.5	7,6	12,3
3.0	3.7	6,1
4.5	2,6	4.5
6,0	2.2	3.4
15,0	1,8	2,6
30,0	3.0	5,3
	9. példa
Vizsgálatokat végzünk 6 csoport, 9-9	db, a hizlalás befe-

jezése előtt állé sertéssel, amelynek során összehasonlítjuk az APS különböző sebességgel és különböző készítményekkel való bevitelének hatását. Valamennyi esetben a nyomásos típusu ozmotikus adagolót alkalmazzuk.

Az adagoló egy 30% APS-t tartalmazó készítményt olyan se-

bességgel visz be, hogy a napi dózis 2 mg/nap· Az egyik készítmény összetételei

30% APS, 35% glicerin és 35% 1M vizes mononátrium-foszfét.

Egy másik készítmény 15% APS-t tartalmaz·

Előállítunk két további készítményt, amelyek a %30%-oshoz hasonlók, de 0,07 % 111· 0,70% Tween^R 80-at mint nedvesítőszert tartalmaznak·

Egy ötödik készítmény összetételei

40% APS, 0,6% Twoen 80 foszfát/glicerinee hígítóban.

A jelzett módon 1 vagy 2 adagolót Ültetünk be, a jelzett napi dózisok biztosítására· A kezelések a következők!

No· A kezelés leírása

2 mg/nap féssfát-glicorln; 1 oleszto-adagoló / 30% APS /

3 mg/nap foszfét-glicerin; 1 adagoló / 30% APS / és 1 további adagoló / 15% APS /

4 mg/nap foszfát-glloorin; 2 adagoló / mindkettő 30% APS / mint 1, 0,07% Twoen 80 mint 1, 0,70% Twoen 80

2,8 mg/nap foszfát-glicerin * 0,6% Twoen 80; 1 adagoló / 40% APS /

A vizsgálatot 6 hétig végeztük / o 2 kezelés kivételével, amelyet 3 hét ükén megszakítottunk /.Az ADG, PC és PE eredményeket a következő 7.Táblázatban mutatjuk be, egy negatív kontroli-csoporttal / ez nem kapott APS-t / és egy pozitív kontroli-csoporttal / 2 mg/nap APS injekció pH 9,5 hidrogénkarbonát pufferben / összehasonlítva·

-p cd N 'ώ t—4 £! «cd * co h|

’d* rH H

in ’d*

Ό cn cn

co •

o cn cn tn

’d* <0 ’d*

o σ«

rí tn in o cn ’d*

co CN

in CN

•

Ό <0

co «

cn o

• CN

• cn

CN

• cn

CN

cn

s?

CN

10

o

O

10

cn

o

o

cn

in

CN

rí

CN

r-

rH

«0

cn

co

<O

cn

cn

rí

in

*O

rí

o

o

in

in

•

•

•

•

•

•

•

•

«

•

•

•

•

•

•

rH

CN

CN

CN

cn

cn

cn

cn

in

rí

cn

cn

co

co

rí

co

cn

*o

cn

00

i0

rH

iO

tű

CD

’d*

M*

o

r»

in

rí

co

o

rí

m

iO

’d*

’d*

•

•

•

•

•

•

•

•

«

•

•

•

•

•

•

r4

CN

CN

CN

’d·

cn

cn

cn

’d*

cn

’d*

co

in

CN

>0

’d*

rí

cn

m

CN

’d·

’d*

rí

in

cn

in

o

CN

CN

C

CN

CN

in

co

co

σ>

o

10

in

•

•

•

•

•

•

•

•

•

•

•

4

•

•

•

H

CN

CN

CN

cn

CN

’d1

CN

cn

rí

cn

cn

O

co

cn

cn

’d*

co

co

rí

’d*

O

cn

’d*

co

’d·

cn

C'

CO

σ>

1

1

1

1

1

1

•

•

•

•

•

•

•

•

•

|

I

1

1

1

1

CN

CN

CN

CN

CN

cn

>

CN

O

>

co

co

04

C0

CN

in

in

C

cn

o

*O

o

’d*

cn

cn

<—l

cn

cn

CN

*0

H

rí

co

cn

rí

•

•

•

•

•

•

«

•

»

•

•

•

•

•

•

rH

CN

CN

CN

cn

CN

cn

co

m

cn

’d*

J> •ri -P •H

N O ái t-4 j t—í o'· Í4.

•P β O co ’d* cn rIOlű

ΗΠΝ cn tn cn σ> > o cn cn

Ö rí cn cn cn

ΙΛΗ Ψ CO CN CO cn cn ’d* h cn cn ’d* m cn cn

Negatív

co	cn cn		’d* cn cn	’d* o	in	’d* H ’d*
H rH	co cn	co	co m tn	> m	o	co iű ’d*
• ·	4 4	4	4 4 4	4 4	4	4 4 4
cn ’d*	cn	cn	cn ’d*	m	m	cn ’d*

+5	-P	P	-P	•P
Ό·	rÖ·		Ό
		0 5	o	0 43 '
	δ u « ·	Q U W	q υ ω v;	Ű U M .
• . rí'	< fa fa w	2 fa fa	<3 fa fa	<fafa

in tn n σ> > h	o σ> •	H > rH
	cn y	cn	• cn
C	o	cn	cn	H	r4
co	10	CM	co	rH	in
•	•	•	•	•	•
	cn			cn	cn
rH	o	CM	<<	co	co
o		co	co	o	10
•	•	•	•	•	•
H	cn	cn		n	cn
<3*	in	cn	CM	cn
O	o	00	cn	cn	CM
•	•	•	•	•	•
r-i		cn		CM	cn

III III

III III

cn c- in	m ίο o
0^0	co o tn
• · ·	• · ·
cn <«	cm cn

r4 > x •rl 0 •P h •rl 40 N P 0 O p4 Ü

	fi
	r-T
tí	0
40	h
Ö	40
tó	S
0	0
Í3	X

+3 ό x:

r4>lű c*n>

• « · cn cn in cn o φ h cn • · · cn cn ¢4 cn m CO CM • · · cn

νφ x:

•

Ό •

r4 u ω fa fa

- 42 A vizsgál-t végén több adagolót - amely 30% APS-t tartalmazott foszfát/glicorinben - kinyerünk és meghatározzuk tartalmát a dimer/aggrogátum tarta-lom magállapitására· Azt találjuk, hogy a diner/aggregátum tartalom a teljes kinyert szórnatotropin mennyiség 10%-ánál kisebb, ez a készítmény jó stabilitására mutat az adagolási periódus során. A harmadik hét végén és a vizsgálati időtartam végén valamennyi / 1.-6· / foszfát/glicorints kezelés azsal az eredménnyel jár, hogy a keringésben nő a sortós-szomatotropin és as inzulin-szerű X. növekedési faktor szintje· Est a biológiailag aktív APS 42 napos adagolása hatékonyságának további bisonyitékaként tekinthetjük.

10. példa

Vizsgálatokat végzünk annak meghatározására, hogy az N^alanil-szarvasmarha-szomatotropin / A-BST / adagolása hogyan befolyásolja a laktadót. Ecálbél egy, a hormont foszfát/glicerin hígítóban, ozmotikus pumpában tartalmasé készítményt adagolunk.

multipara, laktáoiós fázisban levő Holstein tehenet - a szülés után 93-252 nappal - 5 kezelési csoportba sorolunk. As A-BST-t különböző eljárásokkal visszük be ezekbe a tehenekbe.

Az egyik eljárás szerint az A-BST-t 70 mM nátrium-hidrogénkor bonét puffőrben oldjuk és vagy naponta injektáljuk / 9,0 mg /injekció /, vagy naponta kétszer adagoljuk / 4,5 - 4,5 mg/injekeié /·

Az A-BST-1 14 napos, 2002 vagy 28 ma pos, 2A5L4 Alzet^R ozmotikus adagolók beültetésével visszük be. A 2002 tipusu adagolókat a következő összetételű készítménnyel töltjük megt 25% A-BST, 45,8% glicerin, 28,6% 1M mononátrium-foszfát és ···· ··

- 43 0,6% Tween-80.

A 2002 adagolók közül hármat kéthetenként Ültetünk be, 126 mg A-BST nominális kétheti dózis bevitelére·

A 2ML4 tipuou adagolókat a következő összetételű kéositaénynyel töltjük magi

15% A-BST, 67,2% glicerin, 17,4% 1M monenátrium-feszfát és 0,4% Tween-80.

í 2ML4 adagolót ültetünk be a vizsgálati időszak kezdetén, amely 252 mg nominális dózist eredményez a vizsgálati periódus alatt.

A vizsgálat időtartama alatt megfigyeljük a tehenek tejtormoléoót· A koséit tehenek tejtermelésének növekedését a kontroll tehenekkel szemben / mindkettőt kg/nap értékben ós %-os növekedésként / a 8. Táblásatban mutatjuk be és a 9· ábrán ábrázoljuk diagramban·

8.Táblásat

Alzet adagoló

	14 nap	2002	28 nap	2ML4
Hét	kg/nap	%	kg/nap	%
—	———		———	——
1	2,7	8,5	3.5	11,0
2	6,5	21,6	6,3	20,9
3	5,3	18,0	5,3	18,0
4	6,3	21,9	4,3	14,9
1.-4.	5.3	17,6	5,0	16,6
5	6,2	21,8	4,9	17,3
1.-5.	5,5	18,5	5,0	16,8

• ···· ♦ . % ··· oo • a · ·· • · · · · • ·0 ο e · • ···· · ·· · ····

Injekciók «6 lx/nap

4,5 mg 2x/nap

Hét	kg/nap	%	kg/nap	%
1	4,2	13.2	4,1	12,9
2	8.3	27,6	7,5	24,9
3	7.4	25,1	6,4	21,7
4	6,6	22,9	4,8	16,7
1.-4.	6,8	22,6	5,8	19.3
5	4,4	15,5	3,2	11.3
1.-5.	6,3	21,2	5,3	17,8

A tejtermelés gyorsan nő as injektált A-BST hatására és es a reakció a 4 hetes periódus alatt fennmarad. A tejtermelésben bekövotkoső váltósán as Alsot-adagoléval végsott késelés esetében kevésbé gyors, mint as A-BST injekciót kapott csoportban, de a tejtermelést reakció nagyságrendje, 4 hót figyelembevételével, hasonlónak tekinthető.

heti oremény alapján as állapítható meg, hogy a tejtstmslés a 4 heti ssinten marad abban a két csoportban, amelybe Alzet-adagolókat ültettünk be. Bs arra mutat, hogy as A-BST in vi ve legalább 35 napon át biológiailag hatásos marad.

11. példa

Több ABS készítményt állítunk ölő a 9.Táblázatban jelzett ABS koncentrációval és hígítóval. Mindegyik készítmény esetében meghatározzuk a pH-t és a éimer mennyiségét. A készítményeket 39*C-on tároljuk. 14, 28 ée 45 nap elteltével moghatárossuk as

- 45 •gyss késsitmények diaer-kenosntrácíéját· nagyság szerinti sxklusíés kroBategráfla segítségével· 45 nap után as sgy·* késsít ények átlétsséságát is megfigyeljük. A keverékek össsstételét és as eredményeket a 9•Táblázatban mutatjuk be.

···· • ·

- 46 m o

CL, • · · · · • · · · · • · · ·· · · m

<S

P

N •H

N Ö β 40 |

40	•o	N ='	1
N	<0	n r	ε
«	<0	•rl	1,
•rt	•rí	40
40

ni	C4		σ>	Ό
•	•	•	•	•
			ιΟ	Ch
r4	r-i	n	ni	1-t

lű		co	cn	cn
•	•	•	•	•
<N	H	o	o
H	H	n	ni	r-t

9.Táblázat

σ>		. ω	r»	XO
•	•	•	•	•
co	co	o	m	φ
		ni	H

rn	in	o	σ>	•	•rt
		H	cn	cn	B ö 1 \
cn	n	O	o	•Φ	r-l
in	in	H	lű	cn
•	•	•	•		40
Φ			lű	xo	Φ

	^5			^5
n	rn	cn	co	cn
n	cn	cn	cn	m

- 47 ········ ·· ·· · · · · · · • · ·*· · · · ··· ······ ··· ·· ·· · ····

Az előbbiek alapján látható, hogy a találmány szerinti ké0 szitmény lehetővé tessi a biológiailag aktív ssomatotropin igen hosszú időtartamokon át való bevitelét, kiváló kémiai és fislkai stabilitás mellett.

Mivel as előbbi eljárásokban különböző változtatások hajthatók végre anélkül, hogy a találmány oltalmi köréből kilépnénk, kijelentjük, hogy a* előbbi leírásban tartalmazott vagy a kísérő ábrákon bemuta-tott minden anyagot szemléltetésként és nem korlátosé jellegűnek kell tekinteni.

Claims (23)

1. Szabadalmi igénypontok

   1· Adagéibató szomatotropin készítmény, azzal jellemezve· hegy legalább kb· 10% biológiailag aktív szómatatropint, hatásos mennyiségben egy stabilizáló poliolt és megfelelő mennyiségű puffért tartalmas a pH olyan tartományba való beállítására, amelyben a ssenatotropin megfelelő időn át megtartja biológiai aktivitását ahhoz, hogy hatékonyan legyen alkalmazható a szamatatropin állati szerveseibe történő bevitelére szolgáié készítmény·
2. 2· As 1· igénypont szerinti készítmény, ássál jellemesve, hogy legalább kb· 15 tömeg% biológiailag aktiv szemetotropimt tartalmaz·
3. 3· Az 1. igénypont szerinti készítmény, azzal jollemezvo, hogy legalább kb. 20 tömog% biológiailag aktiv ssómatatropint tartalmas·
4. 4· Az 1· igénypont szerinti készítmény, ássál jellemezve, hogy a szemetetropint a szarvasmarha ssonatotropln és a sertés szomatotropin közül választjuk ki.
5. 5· A 4· igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy Bzomatotropinként M-alanil-BZonatotropint alkalmazunk·
6. 6· As 5· igénypont szerinti készítmény, azzal jellemesve, hogy Bzomatotropinként Ala-Val-ozarvasmarha-szonatotropint vagy Ala-sortés-szamatatropint alkalmosunk·
7. 7· Az 1. Igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve, hogy a stabilizáló poliolt a glicerin és a triss/hidroxi-metil/-amino-motán közül választjuk ki·
8. 8· Az 1· igénypont szerinti készítmény, azzal jellenezve.

   ·· ·· • ο · a · · • ··· · · · • · ······ ·· ·· · ···· hogy « stabilizáló poliolt a késsitaény kb. 20 - kb· 80 tömsg%-ának mogfelölő aennyiségbon slkalaassuk.
9. 9· Az 1. igénypont szerinti készitaény, ássál jellemezve» kb.

   hogy a készitaény pH értékét kb. 4,5 és kb. 7 között, vagy a •somatotropia isooloktroaos pontja között állítjuk be, ha es

   7-nél aagasabb.
10. 10. A 9. igénypont szerinti késsitmény, ássál jolleaesvo, hogy pufforként hisztidin-hidrokloridot vagy egy alkálifém-foszfát-puffért alkalmazunk.
11. 11. As 1. igénypont ssorinti késsitaény, ássál jolleaesvo, hogy egy nodvesitőssort is tartalmaz.
12. 12. A 10. igénypont ssorinti késsitaény, ássál jellemezve, hogy nedvesítő·serként egy neaionos felületaktív anyagot alkalmasunk.
13. 13. A 12. igénypont ssorinti késsitaény, ássál jellemezve, hogy nealonos felületaktív anyagként egy poll-etoxllesott szerbi tdh-észfrmt^lkalaazunk·
14. 14. Adagolható szoaatotropin késsitaény, saely legalább kb.

    10 tömeg* biológiailag aktív szoaatotropint, kb. 20 - kb. 80% mennyiségű stabilizáló poliolt és kellő mennyiségű puffsrt tartalmas ahhoz, hogy a késsitaény pH-ját kb. 4,5 és kb. 7 között vagy kb. a szoaatotropin izooloktroaos pontja között állítsuk be, ha os az utóbbi aagasabb.
15. 15. A 14. igénypont ssorinti készítmény, azzal jellemezve, hogy stabilizáló poliolként glicerint tartalmaz.
16. 16· A 14, igénypont szerinti késsitaény, azzal jellemezve, hogy pufforként hisztidin-hidrokloridot vagy egy alkálifém-foszfát puffért alkalmazunk· οοοο · ·· Ο ο · ο · · • · ··· · · · • · · · · ο ·0 ο ··· ·· ·· ο ···· ρ - 50 1
17. 17. Α 14. Igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezre, hogy szórnatetropinként ssarvasmarha-szamatatropint vagy sertés-ssomatotropint tartalmaz.
18. 18. A 17. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezre, hogy szomatotropinként Ala-Val-ssarvasmarha-ssomatotropint vagy Ala-sortés-ssomatotropint tartalmas.
19. 19. A 14. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezre, hogy egy nedvesítéssert is tartalmaz.
20. 20. Adagolható szoaa|otropin készítmény, azzal jellemezve, hogy legalább kb. 10 tömeg# bioaktiv szarvasmarha- ragy sertés—szómatatropint, kb. 20 - kb. 80% glicerint és megfelelő mennyiségű puffért tartalma ehhez, hegy a készítmény pH-ját kb. 4,5 és kb. 7 között, vagy kb· a ssomatotropin isoeloktromos pontja között állítsuk be, ha os utóbbi magasabb.
21. 21· Eljárás ssomatotreplnnak as állati szervezetbe való bevitelére, azzal jellmawisw· hogy as állati szerroaotbe infusiéval egy adott időtartamon át egy ssomatotropin készítményt viszünk be, amely legalább kb. 10% biológiailag aktív szórnatetropint, hatásos mennyiségű stabilizáló poliolt és megfelelő mennyiségű puffért tartalmas olyan pH-tartomány elérése érdekében, amelyben a ssomatotropin az infúzió Időtartama alatt megtartja biológiai aktivitását·
22. 22· Eljárás szemetetropinnak as állati szervezetbe való bevitelére, aszal jellemezve, hogy az állati szervezetbe egy adott időtartamon át egy ssomatotropin kóssitményt viesűnk be lnfusiéval, amely késsitmény legalább kb· lOtömog# biológiailag aktív szomatetropint, kb· 20 - kb· 80% stabilizáló paliéit és kellő mennyiségű puffért tartalmaz ahhoz, hogy a késsitmény pH-ja *vee ·* · ·♦ • · 9 9 »

    9 ♦·· · · 4 • · · ···· ·

    -51 a kb. 4,5 és 7 közötti, vagy a szamatatrapin izaelektramas pant*ja közötti ,ρΗ-tartemányban helyezkedjék el, ha ez utóbbi magasabb.
23. 23. Eljárás szamatetrepinnak az állati szervezetbe való bevitelére, azzal jellemezve, hagy az állati szervezetbe egy adatt időtartamán át infúzióval egy szamatatrapin készítményt viszünk be, amely legalább kb. 10 tömeg% bialógiailag aktív szarvasmarha- vagy sertés-szamatatrapint, kb. 20 - kb. 80% glicerint és megfelelő mennyiségű puffért tartalmaz ahhaz, hegy a készítmény pH-ja a kb. 4,5 és kb. 7 vagy kb. a szamatatrapin izaelektramas pentja között helyezkedjék el, ha ez utóbbi magasabb.