JPH02142489A - 分化誘導因子の腫瘍細胞への抗体媒介的またはリガンド媒介的運搬 - Google Patents

Abstract

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め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、分化誘導因子の腫瘍細胞への抗体およびリガ
ンドによっての運搬を媒介する組成物およびそれらを使
用する方法に関する。

抗腫瘍トキシンおよび細胞毒薬物は、それらを腫瘍関連
抗体に共有結合を介して直接結合することによって、腫
瘍細胞へ到達させられてきた（Ｇ。

グレゴリアゾイス（Ｇ　ｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ）ら、合
成系による薬物の標的への運搬、ニューヨーク　プレナ
ムプレス（１９８６））。

更に、抗腫瘍トキシンおよび細胞毒薬物は、それらをマ
イクロスフイア（小球）を介して腫瘍関連抗体に間接的
に結合することによって腫瘍細胞へ運搬されてきた〔マ
イク９スフイアと薬物療法、Ｓ、Ｓ、デイヴイス（Ｄ　
ａｖｉｓ）ら編、ニューヨーク　エルセヴイア社刊（１
９８４））。マイクロスフイアとは、少なくとも１．０
μｍまでの直径をもつ合成または天然の粒子（例えばリ
ポソーム）であって、１０〜１１００ｎの直径をもつナ
ノスフイアを包含する。

しかし、抗腫瘍トキシンおよび細胞毒薬物を腫瘍関連抗
体に直接または間接的に結合する上記のやり方には大き
い短所がある。より詳しく言えば、直接または間接結合
によって生じる抗体−十キシン複合体および抗体−細胞
毒薬物複合体は、マクロファージ、クップファー細胞、
その他の網内細胞系細胞によって、腫瘍へ到達できる前
に、速やかに取り込まれてしまう。その結果、複合体の
１％未満が実際に腫瘍に到達できるだけである。さらに
、抗体の特異性が腫瘍細胞に限定されていない場合には
、すなわち標的抗原が種々の正常細胞によっても発現さ
れる場合には、複合体は腫瘍細胞に向けられるだけでな
く、正常細胞へも向けられる。かくして、従来法によっ
て抗体に結合された抗腫瘍トキシンまたは細胞毒薬物は
、腫瘍細胞に対するのと同様に正常細胞に対しても高い
毒性をもつので、それらは、正常細胞系に、特にマクロ
ファージおよびその他の網内細胞系細胞に、重大な機能
障害をひき起す。その結果、これらの複合体を用いて試
験管内で特異的な抗腫瘍効果が認められても、生体内で
はそのような特異的抗腫瘍効果はより不十分なものとな
る（Ｙ、カオ（Ｋ　ａｏ）ら、Ｂ　ｉｏｃｈｉｍ、　　
Ｂ　１ｏｐｈｙｓ、　　　Ａｃｔａ　、　　６７７　：
４５３−４６１　　（１９８１））；ｃ、カービー（Ｋ
ｉｒｂｙ）　ら、Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉ、、２７　：　２２
２　Ｂ　−２２３０（１９８０））　。

分化誘導因子は、試験管内で、腫瘍細胞の表現型を変化
させて、非腫瘍原性細胞のそれと似たものにする、すな
わち「接触被阻害性」、低細胞飽和密度、接触配位、軟
寒天中でのコロニー形成不能などを誘導、誘起すること
が認められている（Ｌ、Ｍ、バット　（Ｐａｔｔ）　ら
、Ｎ　ａｔｕｒｅ、　。

２７３：３７９−３８１　（１９７８）；Ｄ、ツァオ（
Ｔｓａｏ）　ら、Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　　、　　４
２　：　１０５２−１０５８　（１９８２）；ｙ、Ｓ゛
、キム（Ｋ　ｉｍ）ら、Ｇａｎｎ　、　Ｍｏｎｏｇｒ　
、　　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ、　　、　　２９　：９３
−１０３　（１，９８３）；’ｒ、スギムラら、Ｇａｎ
ｎ　、　　Ｍｏｎｏｇｒ　、　　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ
、　　、　　２９　：　３−１５　（１９８３）；Ｎ、
プラシャド（Ｐ　ｒａｓｈｓｄ）ら、　Ｃａｎｃｅｒ　
　Ｒｅｓ、　　　　　４７　　：　　２７１７−２４２
４（１９８７）；およびり、リューベン（Ｒｅｕｂｅｎ
　）（１９８７））。しかし、今日までのところ、生体
内で腫瘍原性ないしは悪性疾患を同様に変える研究は試
みられていない。試験管内で腫瘍細胞の表現型に変化を
生じさせるのに必要な分化誘導因子の濃度は、極めて低
く、正常細胞に対しては細胞毒とはならない。生体内で
分化誘導因子を使用するのは、結合されていない分化誘
導因子の所要全身濃度が特定の器官に対して毒性を呈し
うるので、より困難である。かくして、今日まで、生体
内で悪性表現型を正常細胞表現型へ変換するのに分化誘
導因子を成功裏に使用できた例はない。

さらに、今日まで腫瘍細胞指向性の抗体または何らかの
特定のリガンドを介して分化誘導因子を、試験管内であ
れ、生体内であれ、標的に到達させる研究は発表されて
おらず、実施されてもいない。

これは、抗腫瘍トキシンおよび細胞毒薬物を、腫瘍細胞
指向性の抗体または特定のリガンドを介して腫瘍細胞へ
到達させる研究が多数なされていることとは驚くほどの
対照をなす。さらに、試験管内であれ生体内であれ、分
化誘導因子を腫瘍細胞へ到達させる最も効果的な方法を
突き止めるだめの研究は今日まで行われていない。

それゆえ、本発明の一つの目的は、腫瘍関連抗原または
リガンドを介して分化誘導因子を効率的に且つ特異的に
標的へ到達させるのに有用な組成物を提供することであ
る。

本発明の他の目的は、腫瘍関連抗原またはリガンドを介
して分化誘導因子を効率的に且つ特異的に腫瘍細胞へ到
達させて、腫瘍細胞を効果的に処置できるような方法を
提供することである。

本発明のこれらおよびその他の目的は、以下に述べる本
発明の詳細な説明から明らかとなるであろう。

一実施態様にあっては、本発明の上記の目的は、分化誘
導因子をその中に含有する合成または天然のマイクロス
フイア、好ましくはガングリオシドリポソームに複合さ
せた腫瘍関連抗体またはリガンドによって達成される。

他の実施態様にあっては、本発明の上記の目的は、分化
誘導因子をその中に含有する合成または天然のマイクロ
スフイア、好ましくはガングリオシドリポソームに複合
させた腫瘍関連抗体またはリガンドの医薬として有効な
量を腫瘍患者に投与することからなる腫瘍処置法によっ
て達成されている。

さらに別の実施態様にあっては、本発明の上記の目的は
、分化誘導因子に複合させた腫瘍関連抗体またはリガン
ドによって達成されている。

さらに他の実施態様にあっては、本発明の上記の目的は
、分化誘導因子に複合させた腫瘍関連抗原またはリガン
ドの医薬として有効な量を腫瘍患者に投与することから
なる腫瘍処置法によって達成されている。

上述のように、一実施態様においては、本発明の上記の
目的は、分化誘導因子を含有する合成または天然のマイ
クロスフイア、好ましくはガングリオシドリポソームに
結合させた腫瘍関連抗体またはりガントによって達成さ
れた。

分化誘導因子を、腫瘍関連抗原またはリガンドによって
生体内腫瘍細胞へ特異的に送達することができる。その
結果、該腫瘍細胞の悪性度を低減または排除できる。す
なわち、本発明の複合体は、腫瘍細胞に対して分化誘導
効果を示し、それによって腫瘍細胞の正常細胞への転化
を惹起する。さらに、正常細胞へ送達されたときには、
本発明の複合体はそれらに何らの作用も及ぼさず、かく
して副作用が回避される。さらに、ガングリオシドリポ
ソーム中のガングリオシドが、本発明の複合体がマクロ
ファージまたは網内細胞系と相互作用するのを防止する
と考えられる。かくして、本発明の複合体の高い割合の
部分を腫瘍細胞へ特異的に到達させることができる。

本発明で使用する個々の合成マイクロスフイアは特に限
定されるものではない。かかる合成マイクロスフイアの
例として、ラクチドグリコリドコポリマー、ポリアクロ
レイングラフトコポリマーカルボキシメチルデキストラ
ン、ポリラクチドおよびポリスチレンから形成されたも
のが挙げられる（Ｓ、　　Ｓ、デイヴイスら編「マイク
ロスフイアと薬物療法」、ニューヨーク　エルセヴイア
社刊（１９８４））。

上記のコポリマー類は、単独でまたは組合せて、本発明
の合成マイクロスフイアに採用できる。

本発明で使用する個々の天然マイクロスフイア、すなわ
ちリポソームも特に限定されるものではない。好ましい
のはガングリオシドリポソームである。

本明細書において、「ガングリオシドリポソーム」とは
、ガングリオシド含有脂質二重層を意味する。

本発明で使用する脂質二重層を構成する基礎的なリポソ
ーム成分は、燐脂質である。本発明で使用する燐脂質は
特定のものに限定されるものではない。かかる燐脂質の
例としては、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジ
ステアリルホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン
およびホスファチジルエタノールアミンが挙げられる。

さらに、コレステロール、そのアナログおよびジアセチ
ル燐酸エステルのような他の脂質を脂質二重層に含有さ
せて、ガングリオシドリポソームを安定化することがで
きる。

上記リポソーム成分は、本発明のガングリオシドリポソ
ーム中に単独でまたは組合せて使用することができる。

ガングリオシドリポソームに用いる燐脂質の量は本発明
にとって特に限定的なものではない。−般に、燐脂質は
、本発明のガングリオシドリポソームの約５０〜６０重
量％を占める。

ガングリオシドリポソームに用いる他の脂質の量も本発
明にとって特に限定的ではない。一般に、これらの他の
脂質は、本発明のガングリオシドリポソームの約２５〜
３０重量％を占める。

本発明で用いる個々のガングリオシドリポソームも特に
限定されるものではない。かかるガングリオシドの例と
しては、ＧＴ　　　ＧＴ、およびｌｂ’ ＧＱｌ　（Ｓ、ハコモリ、脂質研究）１ンドブツク第３
巻［スフィンゴ脂質の生化学Ｊ、Ｊ、Ｎ、カンファーら
編、ニューヨーク　プレナムプレス、１−１６５頁（１
９８３）およびり、スヴエンネルホルム（Ｓｖｅｎｎｅ
ｒｈｏｌｍ）　、Ｊ、　　Ｌｉｐｉｄ　　Ｒｅｓ、　。

５　：１４５　（１９６４））などのポリシアルガング
リオシドおよびＧＭ、ＧＭ　　およびＬＭ１３　　　　
　　１ａ （Ｓ、ハコモリ、脂質研究ハンドブック第３巻「スフィ
ンゴ脂質の生化学Ｊ、Ｊ、Ｎ、　カンファーら編、ニュ
ーヨーク　プレナムプレス、１−１６５頁（１９８３）
３などの高密度モノシアリルガングリオシドが挙げられ
る。

ポリシアリルＧｌｃの存在はガングリオシドリポソーム
の負電荷を著しく増大させるので、ポリシアリルガング
リオシドを本発明で使用するのが好よしい。このものは
、ガングリオシドリポソームとマクロファージおよび網
内細胞系細胞との相互反応を阻害すると考えられる。す
なわち、ガングリオシドリポソーム中へのポリシアリル
ガングリオシドの配合は、腫瘍関連抗体への結合に好都
合な構造を提供するだけでなく、高度に負荷電性のポリ
シアリルＧｌｃが、ガングリオシドリポソームとマクロ
ファージおよび網内細胞系細胞との望ましからざる相互
反応を回避する。

上記のガングリオシド類は、単独でまたは組合せて、本
発明のガングリオシドリポソームに使用することができ
る。

ガングリオシドリポソーム中に含有されるガングリオシ
ドの量は、網内細胞系との相互反応を阻害するのに十分
なおよび／または腫瘍関連抗体またはリガンドを固定す
るのに十分な量とする。−般に、ガングリオシドリポソ
ーム中に含まれるガングリオシドの全は、本発明のガン
グリオシドリポソームの約１０〜２０重量％である。

本発明で用いる個々の分化誘導因子は特に限定されるも
のではない。かかる分化誘導因子の例としては、ｎ−酪
酸またはその塩、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）　
、１２−０−テトラデカノイルホルボール−１３−アセ
テート（ＴＰＡ）、ジヒドロテレオシジンＢ１テレオシ
ジンＢ１テレオシジンＡおよびレチン酸が挙げられる。

上記の分化誘導因子は、単独でまたは組合せて、本発明
のマイクロスフイアに使用することができる。

マイクロスフイア中に、好ましくはガングリオシドリポ
ソーム中に含まれる分化誘導因子の合は、腫瘍の分化を
誘発するのに十分な量とするが、この酋は、採用した特
定の分化誘導因子および処置すべき腫瘍に応じて変化す
る。一般に、マイクロスフイア中に、好ましくはガング
リオシドリポソーム中に含まれるべき分化誘導因子の量
は、マイクロスフイアと複合させた腫瘍関連抗体または
リガンド１ｍｇ当り約２．０〜２０ｍｇ、好ましくは同
基準で約１０〜２０ｍｇ、より好ましくは約１５〜１８
ｍｇである。

分化誘導因子は、マイクロスフイア中に水溶液の形で含
まれる。該溶液は、生理的緩衝食塩水、ＫＣ９，ＣａＣ
Ｑ２　、ＮａＨＣＯ３およびグルコースを含有する生理
的緩衝食塩水であるリンゲル−タイロード溶液またはリ
ンゲル−ロック溶液またはＫ　ＣＱ　ＳＣａ　ＣＱ　２
　、Ｍ　ｇ　Ｓ　ＯＬおよび燐酸塩炭酸塩を含有する生
理的緩衝食塩水であるクレープスーリンゲル液のごとき
溶媒に分化誘導因子を溶解または分散することにより調
製する。所望により、これらの溶液にビタミン類および
／またはアミノ酸類を添加してもよい。

分化誘導因子を含有する合成マイクロスフイアを調製す
る方法は、本発明にとって決定的に重要なことではない
。本発明において使用し得る分化誘導因子含有合成マク
ロファージの調製法として、例えば、Ｌ、　Ｒ，ペッツ
（Ｂ　ｅｔｔｓ）ら、Ｆ　ｅｒｔｉ　ｌ　。

５ｔｅｒｉ１．．３１　：　５４３−５５１　（１９７
９）；及びＳ、　Ｓ、デイヴイスら編「マイクロスフイ
アと薬物療法」、ニューヨーク　エルセヴイア社刊（１
９８４）に記載の方法が挙げられる。要約して言えば、
合成マイクロスフイア形成性コポリマーを溶媒及び分化
誘導因子と混合する。次に、溶媒を蒸発させると、分化
誘導因子を含有する合成マイクロスフイアが形成される
。

分化誘導因子を含有するガングリオシドリポソームの調
製法は、本発明にとっては特に限定されるものではない
。本発明に用い得る分化誘導因子含をガングリオシドリ
ポソームの調製法として、例えば、Ｓ、　Ｍ、ジョナサ
ン（Ｊ　ｏｎａｔｈａｎ　）ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　　
Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ａｃｔａ　、　　１９３　：　８２−
９１　（１９６９）またはＳ、バック（Ｂａｔｚｒｉ　
）ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　　Ａｃ
ｔａ　、　　２９８　：１０１５−１０１９　（１９７
３）に記載の方法が挙げられる。要約すれば、脂質成分
及びガングリオシドをクロロホルム−メタノール溶媒系
、（２’：１　（ｖ／ｖ））に溶解し、窒素気流中で蒸
発乾固する。乾燥残留物を次に、分化誘導因子含有生理
的緩衝食塩水中で２〜３時間超音波処理するか、または
エタノールまたはテトラヒドロフランに溶解して、分化
誘導因子含有生理的緩衝食塩水中に注入する。生じた分
化誘導因子含有ガングリオシドリポソームは、例えば、
Ｄ、　　Ｌ、　ウルダル（Ｕ　ｒｄａｌ）ら、Ｊ、　　
Ｂｉｏｌ　、　　Ｃｈｅｍ　、　　　２５５　：１０５
０９−１０５１６　（１９８０）に記載されているよう
なセファロース４Ｂでのゲル２濾過（こよって精製でき
る。別法として、後記実施例１に記載の方法を、分化誘
導因子含有ガングリオシドリポソームの調製に用いるこ
ともできる。

本発明で使用する個々の腫瘍゛関連抗体は特に限定され
るものではない。かかる腫瘍関連抗体の例としては、Ｗ
、Ｗ、ヤング（Ｙ　ｏｕｎｇ）ら、Ｊ。

Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、、１５０　：１００８−１０１９（１
９７５）に記載のようにマウスをサルモネラ・ミネソタ
エのＬｅｘ糖脂質で免疫することによって調製されるＩ
ｇＧ３抗Ｌｅｘ抗体であるＳＨ１抗体；黒色腫に特異的
な抗ＧＤ３　；結腸直腸癌に特異的な抗シアリルジフコ
シル２型鎖（ＦＨ６）；胃腸症に特異的な抗Ｌｅｙ；お
よび、肺癌、乳癌、結腸癌を含む種々のタイプのヒト上
皮癌に特異的な抗シアリルＴｎ　（Ｓ、ハコモリら、Ｎ
ａｔｌ　。

Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎ５ｔ　、　、　　７１　：　２３１
−２５１（１９８３）；　Ｓ、　ハ：７モリ、Ａ　ｎｎ
、　　Ｒｅｖ。

Ｉｍｍｕｎｏｌ、　、　　２　：１０３−１２６　（１
９８４）　　；およびＳ、ハコモリら、「モノクローナ
ル抗体と機能性細胞株Ｊ　、Ｒ，Ｈ，ケネット（Ｋｅｎ
ｎｅｔ　）ら編、ニューヨーク　プレナムプレス、６７
−１００頁（１９８４））が挙げられる。

上記腫瘍関連抗体は、本発明のマイクロスフイアに複合
させるとき、単独または組合せて使用できる。

本発明で用いる個々の腫瘍関連リガンドも特に限定され
るものではない。かかる腫瘍関連リガンドの例としては
、次のものが挙げられる：（１）腫瘍細胞に対して高度
に特異的ではないが、の標準的レクチン； （２）大部分がβ−ガラクトシル残基指向性の腫瘍関連
レクチン（Ｈ，−Ｊ、ガビウス （Ｇａｂｉｕｓ　）ら、Ｃａｎｃｅｒ　Ｌｅｔｔ　、　
、　　３１　：１３９−１４５　（１９８６）；および
Ｈ，−Ｊ。

２８７　（１９８５））。分化誘導因子または分化誘導
因子含有マイクロスフイアに連結されたβ−ガラクトシ
ル構造は、β−ガラクトシル残基指向性レクチンを含有
する腫瘍細胞へ分化誘導因子を運搬するための有用なリ
ガンドとなりうる。種々の腫瘍関連レクチンの系統的分
析から、分化誘導因子に連結されたの糖質（炭水化物）
構造も、分化誘導因子を腫瘍細胞に到達させるのに有用
であろう； （３）ホルモン類。ある種の腫瘍細胞、例えば若干の乳
癌および実質的に全ての悪性絨毛膜上皮腫は女性ホルモ
ンのエストロゲンに依存性である。前立腺癌はエストロ
ゲンまたはアンドロゲン感受性である。かかるホルモン
に結合された分化誘導因子は、特定のタイプのホルモン
依存性腫瘍細胞へ指向させることができる；（４）腫瘍
細胞の活発な増殖に必須の因子、例えばトランスフェリ
ン、腫瘍細胞成長因子αおよびβ。

上記の腫瘍関連リガンドは、本発明のマイクロッイアに
複合させるに当って、単独でまたは組合せて使用するこ
とができる。

分化誘導因子を含有するマイクロスフイア、好ましくは
ガングリオシトリずソームに複合させた腫瘍関連抗体ま
たはリガンドの量については、本発明は何ら限定される
ものではない。一般には、分化誘導因子含有マイクロス
フイアに複合させた腫瘍関連抗体またはリガンドの量は
、マイクロスフイア１マイクロモル当り約１６０〜５．
０μｇであり、より好ましくはマイクロスフイア１マイ
クロモル当り約２．０〜５μｇである。

分化誘導因子含有合成マイクロスフイアは、［マイクロ
スフイアと薬物療法Ｊ、Ｓ、Ｓ、タイプイスら編、ニュ
ーヨーク　エルセヴイア社刊（１９８４）中に記載され
ている方法で、腫瘍関連抗体またはリガンドに複合させ
ることができる。

要約して言えば、合成マイクロスフイアと腫瘍関連抗体
またはリガンドとを、適当な緩衝液中で混合すると、合
成マイクロスフイア表面の疎水性のため、そこへ腫瘍関
連抗体またはりガントが付着する。別法として、アルデ
ヒド基含有合成マイクロスフイアを、下記に述べる過沃
素酸塩−酸化ガングリオシドリポソームへ腫瘍関連抗体
またはリガンドを結合させるのと同様にして、シアノ水
素化硼素を用いての還元アミノ化によって、腫瘍関連抗
体またはリガンドのカルボキシル基に結合させることが
できる。さらに、アジド基含有合成マイクロスフイアは
、腫瘍関連抗体またはリガンドのカルボキシル基に結合
させることができる。また、カルボキシ−Ｎ−スクシン
イミド基含有合成マイクロスフイアは、腫瘍関連抗体ま
たはリガンドのアミノ基に結合させることができる。

分化誘導因子含有ガングリオシドリポソームに腫瘍関連
抗体を結合させる方法については、本発明は特に限定さ
れるものではない。例えば、（ｉ）ガングリオシドリポ
ソームを腫瘍関連抗体のアミノ基に、メタ過沃素ナトリ
ウムによるガングリオシドのシアル酸部分の酸化とそれ
に続く水素化硼素アトリウムによる腫瘍関連抗体の処理
によって、結合することができる；（ｉｉ）ガングリオ
シドリポソームを腫瘍関連抗体に、ホスファチジルコリ
ンのアミノ基を腫瘍関連抗体のカルボキシル基に結合さ
せるカルボジイミドを用いて、結合することができる；
そして、（ｉｉｉ　）ホスファチジルコリンのアミノ基
と腫瘍関連抗体のカルボキシル基との間にチオエーテル
架橋を生ぜしめるＮ−ヒドロキシスクシンイミジル−３
−（２−ピリジルジチオ）−プロピオネ−）　（ＳＰＤ
Ｐ）を用いて、ガングリオシドリポソームを腫瘍関連抗
体に結合させることができる。

本発明において、腫瘍関連抗体またはリガンドのガング
リオシドリポソームとの複合化は必ずしもガングリオシ
ドの関与するものであるとは限らない。即ち、ホスファ
チジルエタノールアミンを修飾してビオチニルホスファ
チジルエタノールアミンとし、ガングリオシドリポソー
ムに組込むことができる。ビオチニル基は、次に、Ｄ、
　　Ｌ、ウルダル（Ｕｒｄａｌ）ら、Ｊ、　　Ｂｉｏｌ
　、　　Ｃｈｅｍ　。

２５５　：１０５０９−１０５１６　（１９８０）に記
載されているように、アビジンを介して腫瘍関連抗体ま
たはリガンドに結合させることができる。

例えば、Ｌ、　Ｄ、　　レーゼルマン（Ｌ　ｅｓｅｒｍ
ａｎ　）、［リポソーム、薬物および免疫適応細胞の機
能」、Ｃ，ニコラウ（Ｎ　１ｃｈｏｌａｕ　）ら編、ニ
ューヨークアゾミックプレス、１０９−１２２頁（１９
８１）およびＰ、マシ（Ｍａｃｈｙ）ら「細胞生物学お
よび薬理学におけるリポソーム」、ロンドン　ジョンリ
ツビーアンドカンパニー　１００−１５３’頁（１９８
７）に記載されているような、蛋白質をリポソームに複
合化させるための他の周知の方法も、本発明に採用でき
る。しかしながら、ガングリオシドリポソーム中のガン
グリオシドに腫瘍関連抗体またはリガンドを結合させる
のが好ましい。

その理由は、ガングリオシドは天然物であって、ガング
リオシドリポソームとマクロファージおよび網内細胞系
細胞との望ましくない相互反応を防止してくれるからで
ある。

さらに一つの実施態様では、本発明の前記目的は、分化
誘導因子を含有する合成または天然のミクロスフイア、
好ましくはガングリオシドリポソームに複合させた腫瘍
関連抗体まだはリガンドの医薬として有効な量を腫瘍患
者に投与することからなる腫瘍処置方法によって達成さ
れる。

上記の投与すべき分化誘導因子含有複合体の医薬として
有効な■は、投与対象者の年令、体重、性、種、マイク
ロスフイア中に含まれている分化誘導因子の量、分化誘
導因子の活性、腫瘍関連抗体またはリガンドの結合親和
性ならびに患者内の腫瘍の量に応じて変動するであろう
。−膜内には、投与すべき医薬としての有効量は、約０
．３〜１．０Ｄ／ｋｇ体重、好ましくは約０．５〜１．
０ｍｇ／　ｋｇ体重である。

分化誘導因子を含有する上記複合体は、投与に先立って
希釈する。希釈には、医薬として許容しうる希釈剤を採
用できる。医薬として許容しうる個々の希釈剤について
は、本発明は特に限定されるものではない。かかる医薬
として許容しうる希釈剤の例としては、生理的緩衝食塩
水、リンゲル液、ビタミンカクテルおよびアミノ酸ビタ
ミンカクテルが挙げられる。

上記の分化誘導因子含有複合体は、情況に応じて種々の
投与法を用いて担腫瘍患者に投与できる。

かかる投与法の例としては、実質的に全ての種類の癌に
対しての静脈内投与、卵巣癌および胃腸癌に対しての腹
腔内投与、および外科的処置の間の動脈内投与が挙げら
れる。

投与される特定の分化誘導因子含有腫瘍関連抗体または
リガンド複合マイクロスフイアは、処置すべき特定の腫
瘍に依存するであろう。すなわち、分化誘導因子含有マ
イクロスフイアに複合化させるのに選ばれる特定の腫瘍
関連抗体またはリガンドは、処置すべき腫瘍に対して特
異的なものである。

また、マイクロスフイア中に含有させるべく選択される
特定の分化誘導因子は、処置すべき腫瘍に対して強い分
化誘導効果を有するものである。

本発明のガングリオシドリポソームに用いるべき特定の
燐脂質を選択するための特定のパラメーターはない。合
成形態のものは一定した組成、性質、入手可能性を有す
るので、天然燐脂質よりもジパルミトイルホスファチジ
ルコリンのような合成燐脂質を用いる方が好ましい。

さらに、ガングリオシドリポソームに用いるべき特定の
ガングリオシドを選択するための特定のパラメーターも
ない。任意のガングリオシドを、腫瘍関連抗体またはリ
ガンドを結合するのに採用し得る。しかしながら、ガン
グリオシドリポソーム上に高密度の負電荷を達成するた
めには、ポリシアリルガングリオシドが好ましい。

他の一実施態様では、本発明の前記の目的は、分化誘導
因子に複合させた腫瘍関連抗体またはリガンドによって
達成される。

腫瘍関連抗体またはリガンドに複合化すべき分化誘導因
子の個々の量については、本発明は特に限定されない。

一般には、腫瘍関連抗体またはリガンドに複合化される
分化誘導因子の量は、腫瘍関連抗体またはリガンドの結
合活性を低下させない最大許容量とすべきである。通常
は、約１．０〜１０モルの分化誘導因子を腫瘍関連抗体
またはりガント１．０モルに複合化させる。

各分化誘導因子は、各々が異なる官能基をもつので、腫
瘍関連抗体またはりガントへの結合に異なる方法を必要
とする。分化誘導因子をカルボキシル、アミノ、アジド
またはアルデヒド基に共有結合に依り結合させる諸方法
は当該技術分野で周知である。例えば、ｎ−酪酸は、カ
ルボジイミド法を用いて、腫瘍関連抗体またはりガント
のアミノ基に結合させることができる。この目的には、
例えば、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピ
ル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）やＮ−ヒドロキル
スルホスクシンイミド（スルホ−ＮＨ３）（Ｊ、Ｖ、ス
タロス（Ｓ　ｔａｒｏｓ　）ら、Ａｎａｌ　、　　Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ、　、　　１５６　：　２２０−２２２（１
９８６））などの、多くのカルボジイミド試薬を容易に
入手できる。分化誘導因子が−ＳＨ基を含むときは、Ｎ
−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロ
ピオネート（ＳＰＤＳ）を用い得る［Ｊ、カールソン（
Ｃａｒｌｓｓｏｎ　）ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　　Ｊ、　
、　　１７３　：　７２３−７３７（１９７８））。

もう一つの実施態様においては、本発明の前記の目的は
、分化誘導因子複合腫瘍関連抗体またはリガンドの医薬
として有効な量を腫瘍患者に投与することからなる腫瘍
処置方法によって達成される。

投与すべき分化誘導因子複合腫瘍関連抗体またはリガン
ドの医薬として有効な量は、投与対象患者の年令、体重
、性、種、複合体中に含まれる分化誘導因子の量、分化
誘導因子の活性、腫瘍関連抗体またはリガンドの結合親
和性および患者中の腫瘍の世に応じて変動するであろう
。−膜内には、投与すべき、医薬として有効な量は、約
０．１〜１．０ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは約０．５〜
１．０ｍｇ／ｋｇ体重である。

分化誘導因子複合腫瘍関連抗体またはリガンドは、投与
に先立ち、希釈する。希釈には、医薬として許容しうる
希釈剤を採用できる。医薬として許容しうる特定の希釈
剤によって本発明が限定されるもではない。かかる医薬
として許容しうる希釈剤の例としては、生理的緩衝食塩
水、リンゲル液、ビタミンカクテルおよびアミノ酸ビタ
ミンカクテルが挙げられる。

分化誘導因子に複合させた腫瘍関連抗体またはリガンド
は、状況に応じた種々の投与法を用いて、担腫瘍患者に
投与できる。かかる投与法の例としては、実質的に全て
の種類の癌に対しての静脈内投与、卵巣癌および胃腸癌
に対しての腹腔内投与および外科的処置の間の動脈内投
与が挙げられる。

個々の分化誘導因子複合腫瘍関連抗体またはリガンドは
、処置すべき特定の腫瘍に依存するであろう。すなわち
、特定の分化誘導因子複合腫瘍関連抗体またはリガンド
は、処置すべき腫瘍に対して特異的なものとする。また
、特定の腫瘍関連抗体またはリガンドに複合された分化
誘導因子は、処置すべき腫瘍に対して強い分化誘導因子
をもつものとする。

以下の実施例は、説明の目的でのみ挙げるものであって
、本発明の範囲を限定する意図は全くない。

実施例 実施例１ 本実施例では、主要脂質成分としてのホスファチジルコ
リンおよびコレステロール、ガングリオシドとしての０
Ｍ３ガングリオシド、分化誘導因子としてのｎ−酪酸、
腫瘍関連抗体としてのＳＨ１抗体の使用を述べるが、前
述のような他の主要脂質成分、前述のような他のガング
リオシド、前述のような他の分化誘導因子および前述の
ような他の腫瘍関連抗体またはリガンドも、本実施例の
操作法を用いて、本発明の精神および範囲から逸脱する
ことなく、他の分化誘導因子含有腫瘍関連抗体（または
リガンド）複合ガングリオシドリポソームの調製に使用
できた。

ホスファチジルコリン（合成のジパルミトイル誘導体）
、コレステロールおよび０Ｍ３ガングリオシドを、１：
０．７５：０．１または１：０．５：０．０５のモル比
で、またホスファチジルコリン１０マイクロモルに対し
て１．０ｇの割合のｎ−酪酸を、クロロホルム−メタノ
ール溶媒系（２：　１　（、ｖ／ｖ）　）に溶解させた
。溶液を２５°Ｃでよく混ぜ、Ｎ２気流下に３０℃で乾
燥した。次に、ホスファチジルコリン１０マイクロモル
当り１．　０ｍ１２の０．５Ｍ燐酸緩衝食塩水（ｐＨ６
，５）を加えた。（本発明が使用した特定の緩衝液やｐ
Ｈによって限定されるものではないことを付記しておき
たい。）次に、ブランソン（Ｂ　ｒａｎｓｏｎ）　５２
００型ソニケーター中で超音波処理を３〜５時間行った
。超音波処理は室温で行ったが、超音波処理の間に温度
が徐々に上昇し、１時間後には約４０℃に達した。超音
波処理は、固相の燐脂質／コレステロール／ガングリオ
シド混合物をガングリオシドリポソームに転化するため
に実施した。得られた超音波処理物を、０．０５Ｍ燐酸
緩衝食塩水（ｐＨ６，５）１．ＯＱに対して一夜透析し
て、過剰の分化誘導因子、すなわちｎ−酪酸を除去した
。

得られたｎ−酪酸含有ガングリオシドリポソーム中のガ
ングリオシドを、８．０ｍＭメタ過沃素酸ナトリウムに
より室温、暗所で２時間酸化して、ガングリオシド中の
シアル酸のＣ７１ｆｆ−級水酸基をＣ７アルデヒド基に
転化させた。該アルデヒド基は、のちの腫瘍関連抗体と
のアミノ化に感受性ではあるが、マイクロスフイアおよ
び網内細胞系細胞との相互反応を防止するガングリオシ
ドの必須の基であるシアル酸残基のカルボキシル負電荷
を変化させない。得られたｎ−酪酸含有酸化ガングリオ
シドリポソームを次に燐酸緩衝食塩水（ｐＨ６，５）２
．ＯＱに対して一夜透析して、過剰のメタ過沃素酸ナト
リウムを除去した。

得られたｎ−酪酸含有ガングリオシドリポソーム１０マ
イクロモルを、ＩｇＭ３抗Ｌｅｘ抗体であるＳＨ１抗体
１０ｍｇ１＝、０．０５Ｍｖ＃酸緩衝食塩水（ｐＨ６，
５）中の水素化シアノ硼素ナトリウム１．６マイクロモ
ルを加え、室温で１８時間インキュベートすることによ
って、結合させた。

その後、反応混合物を、前もって０．０５Ｍ燐酸緩衝食
塩水（ｐＨ７，４）で平衡化したセファロース４Ｂカラ
ム（シグマケミカルカンパニー）により、４℃で分離し
た。ｎ−酪酸含有抗体複合ガングリオシドリポソームを
、同じ緩衝液により、ボイド容量的５０ｍ１２で、溶出
した。この操作を用いて、ｎ−酪酸含有ガングリオシド
リポソーム１０マイクロモルに複合化されたＳＨＩ抗体
約１．０ｍｇが得られた。

実施例２ ＨＲＴ−１８細胞への試験管内での運搬ＨＲＴ−１８細
胞を、熱不活性化ウシ胎児血清１０９（ｕｖ／ｖ）添加
ＤＭＥＭ培地（ギブコ）中で、３７℃で培養した。細胞
を、９６大のファルコントレーに、２０００個／ウェル
の割合で植えた。次に、（：）実施例１と同様にして但
しガングリオシドを省略して調製した、リポソーム０．
０３マイクロモル当り０．５マイクロモルのｎ−酪酸を
含有するリポソーム懸濁液１０μＱ；（ｉｉ　）実施例
１記載の通りにして調製したｎ−酪酸含有抗体複合ガン
グリオシドリポソーム１０μＱ；または（ｉｉｉ　）生
理的緩衝食塩水１０μＱをウェルに加えた。ＨＲＴ−１
８細胞のインビトロでの増殖阻害についてのこれらの添
加の効果を第１図に示す。詳述すると、第１図は、ｎ−
酪酸含有抗Ｌｅｘ抗体複合ガングリオシドリポソームを
含有する熱不活性化ウシ胎児血清１０％（Ｖ／Ｖ）添加
ＤＭＥＭ培地中インビトロで培養したＨＲＴ−１８細胞
の数の増加（黒丸と実線）を、抗Ｌｅｘ抗体に複合させ
なかったリポソームを含有する同じ培地（白抜きの正方
形と破線）と比較して示している。対象の増殖曲線（白
抜きの三角形と点線）は、リポソームなしの同じ培地で
の細胞増殖を示す。

第１図に示すように、本発明のｎ−酪酸含有抗体複合ガ
ングリオシドリポソームは、インビトロでＨＲＴ−１８
細胞の増殖を阻害するのに有効であった。

さらに、抗体複合ｎ−酪酸含有ガングリオシドリポソー
ムで処理したＨＲＴ−１８細胞は、形態上の変化を受け
た。すなわち、それら細胞は平らになり、境界が明確に
なり、細胞成長挙動が正常細胞のそれに似てきた。すな
わち細胞増殖が接触により阻害された。

実施例３ Ａ、リポソームの蓄積 ヌードマウスに、５Ｘ１０８個／匹のＨＴ−２９細胞（
ＡＴＣＣＮｏ、ＨＴＢ−３８）を皮下接種した。腫瘍が
約１４日で直径０．　５〜１．　０ｃｍまで大きくなっ
たとき、マウスに、（ｉ）実施例２記載のようにして調
製したリポソーム懸濁液０．２ｍＱ／マウスまたは（１
１）実施例１記載のようにして調製したｎ−酪酸含有抗
体複合ガングリオシドリポソーム０．　２ｍ１２／マウ
スを静脈内注射した。リポソーム懸濁液およびｎ−酪酸
含有抗体複合ガングリオシドリポソームは、ともに前も
って、調製時にコレステロールの代わりに１４０−コレ
ステロール（デュポン、マサチューセッツ州ボストン）
を使用することによって標識付けしておいた。

リポソーム懸濁液またはｎ−酪酸含有抗体複合ガングリ
オシドリポソームの投与から６．１２．２４および４８
時間後にマウスを屠殺した。次式を用いて、各マウスの
腫瘍、腎、肝、牌および肺におけるリポソームの蓄積を
評価した：第２Ａ〜２Ｅ図に結果を示す。

第２Ａ図に示されている様に、ＨＴ−２９腫瘍における
ｎ−酪酸含有抗体複合ガングリオシドリポソーム（黒丸
と実線）の蓄積だけが時間の関数として増加した。他方
、’１Ｒ２Ｂおよび２Ｅ図に示す様に、マウスの腎およ
び肺において、リポソーム懸濁液及びｎ−酪酸含有抗体
複合ガングリオシドリポソームの時間の関数としての蓄
積があったが、リポソーム懸濁液とｎ−酪酸含有抗体複
合ガングリオシドリポソームとの間に差は認められなか
った。また、第２０および２Ｄ図に示す様に、マウスの
肝および牌には、リポソーム懸濁液、ｎ−酪酸含有抗体
複合リポソームのいずれも時間の関数として蓄積される
ことが実質的になかった。

このことは、腎、肝、脛および肺への抗体複合ガングリ
オシドリポソームの蓄積が抗体に依存しないこと、すな
わち特異的標的到達というよりも非特異的沈積になって
いることを証明している。これと驚くほど対照的に、Ｈ
Ｔ−２９腫瘍中のガングリオシドリポソームの蓄積は明
らかに複合抗体の存在に依存している。

ヌードマウスに、−匹当り５Ｘ１０”個のＨＴ−２９細
胞またはＨＲＴ−１８細胞を皮下接種した。腫瘍が約５
〜１０日で直径０．３〜０．５ｃＩ１１まで太き（なっ
たとき、（ｉ）実施例２記載のようにして調製したリポ
ソーム懸濁液０．２ｍ（）／マウス；（ｉｉ）実施例１
記載のようにして調製したｎ−酪酸含有抗体複合ガング
リオシドリポソーム０．２ｍ（２／マウス；または（ｉ
ｉｉ　）生理的緩衝食塩水０．２ｍＧ／マウスを５日毎
に静脈内注射した。

第３および４図において、注射日を上部欄に矢印で示し
た。腫瘍重量を次のようにして推定した：腫瘍重ｆｆｉ
　（ｍｇ）　＝０．　５ｘ長さ（ｍｍ）　Ｘ幅２（ｍｍ
２） 結果を第３および第４図に示す。

第３および４図に示す様に、ｎ−酪酸含有抗体複合ガン
グリオシドリポソーム（黒丸と実線）を注射した動物で
は、腫瘍の成長が、無処置対照（白抜き三角形と点線）
またはリポソーム懸濁液、すなわち無複合リポソーム（
白抜きの正方形と破線）を注射した動物と対照的に、明
瞭に阻害された。これらの結果は、ｎ−酪酸含有抗Ｌｅ
ｘ複合リポソームの投与による腫瘍成長の特異的阻害を
証明するものである。

実施例４ 本実施例は、ラクチドグリコリドコポリマーまたはポリ
アクロレイングラフトコポリマーから導いた合成マイク
ロスフイア、分化誘導因子としてのｎ−酪酸および腫瘍
関連抗体としてのＳＨ１抗体の使用を記載するが、前述
のような他の合成マクロファージ、前述のような他の分
化誘導因子および前述のような他の腫瘍関連抗体または
リガンドも、本実施例の操作法を用いて、本発明の精神
および範囲から逸脱することなく、他の分化誘導因子を
含有する腫瘍関連抗体（リガンド）複合化合成マイクロ
スフイアの調製に利用できた。

塩化メチレン２０噌、ラクチドグリコリドコポリマー９
２７ａ＋ｇおよびｎ−酪酸約２５０ｆｆ１ｇ〜１、Ｏｇ
よりなる有機溶液を、０．２７重ｎ％のポリビニルアル
コールを含有する水２５　ＯｍＱ中へ迅速に注入する。

次に、２２℃で塩化メチレンを蒸発させて、ｎ−酪酸含
有合成マイクロスフイアを調製する。得られたｎ−酪酸
含有合成マイクロスフイアを次にＳＨＩ抗体１０ｍｇと
０．０５Ｍ燐酸緩衝食塩水（ｐＨ７，４）中で２４時間
インキュベートする。腫瘍関連抗体が、合成マイクロス
フイア表面の疎水性のために、合成マイクロスフイア表
面に結合される。次に、生じた混合物を、前もって０．
０５Ｍ燐酸緩衝食塩水（ｐ　Ｈ７，４）で平衡化してお
いてセファロース４Ｂカラムにかけて、遊離の腫瘍関連
抗体を含まない腫瘍関連抗体複合合成マイクロスフイア
を調製する。

別法として、ポリアクロレイングラフトコポリマーから
、例えば紫外線を触媒として用いる接触反応によって合
成マイクロスフイアを形成することができる。例えば、
ポリスチレン０．１ｇ、ポリエチレンオキサイドの０．
４％（ｗ／ｖ）水溶液４．０−、アクロレインの２０％
（Ｗ／　Ｖ　）水溶液２．０ｍｌおよび５ＤＳＯ，０１
ｍｇを混合する。

溶液中に窒素ガスを１０分間バブルさせて、重合開始に
先立って溶存酸素を除去する。溶液を、コバルトガンマ
線源を用いて、線ｆｆ１０．１２Ｍ　ｒ　ａ　ｄ　７時
で７時間照射する。照射後、形成された合成マイクロス
フイアを遠心分離により分取する。水溶液中に分化誘導
因子を溶解することによって、分化誘導因子をそれら合
成マイクロスフイア中にカプセル化することができる。

これらの合成マイクロスフイアを用いるとき、それらへ
の腫瘍関連抗体の結合は、０．１Ｍ燐酸緩衝食塩水（ｐ
Ｈ５，２）中で実施する。より詳しく述べると、ｎ−酪
酸含有合成マイクロスフィア２．０ｍｇを、ＳＨ１抗体
５．０ｇと混合する。反応混合物を３０秒間超音波処理
した後、室温で一夜回転させる。複合後、反応混合物を
遠心分離する。合成マイクロスフイアを、１．０Ｍエタ
ノールアミンと０．１％（ｖ／ｖ））ウィーン２０から
なる溶液（ｐＨ９，５）１．０−に懸濁させ、３時間回
転させて、残存する反応性基をブロックする。次に、腫
瘍関連抗体またはリガンド複合合成マイクロスフイアを
燐酸緩衝食塩水（ｐＨ７，４）でよく洗う。

実施例５ 抗Ｌｅｘ抗体複合ｎ−酪酸の調製 本実施例は、分化誘導因子としてのｎ−酪酸および腫瘍
関連抗体としてのＳＨＩ抗体の使用を記載するものであ
るが、前述したような他の分化誘導因子および前述した
ような他の腫瘍関連抗体またはリガンドも、本実施例の
操作法を用いて、本発明の精神および範囲から逸脱する
ことなく、他の腫瘍関連抗体（リガンド）複合分化誘導
因子の調製に利用できた。

ＳＨＩ抗体１０ｍｇ、ｎ−酪酸０．１ｍｇおよび５．０
ｍＭ　　Ｎ−ヒドロキシスルホスクシンイミド（ペプチ
ドのカルボキシル基と反応して、第一級アミンと容易に
反応する活性エステルを形成する触媒）からなる水溶液
に、カルボジイミドを総濃度０．１Ｍまで加えた。反応
混合物のｐＨを、燐酸緩衝食塩水（ｐＨ８，０）で７．
４に調製し、室温で一夜インキユベートした。得られた
抗Ｌｅｘ抗体複合ｎ−酪酸を、前もって０．０５Ｍ燐酸
緩衝食塩水（ｐ　Ｈ７，４）で平衡化したセファデック
スＧ−１００カラム（シグマケミカルカンパニー）を用
いて、４℃で、未反応成分から分離した。抗ＬｅＸ抗体
複合ｎ−酪酸は、同じ緩衝液により、溶出体積２．０〜
６．０ｍＧで溶出された。この操作を用いて、抗Ｌｅｘ
抗体約２．　０ｍｇがｎ−酪酸１０μｇに結合された。

以上、本発明を詳細に、またその特定の実施例を挙げて
説明したが、本発明の精神および範囲から逸脱すること
なしに、それに種々の変更、改良を施し得ることは、当
業者にとっては明らかなことであろう。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ｎ−酪酸を含有するガングリオシドリポソー
ムに結合させたＳＨＩＨＩＯ２いての、Ｌｅｘ抗原を高
度に発現するヒト結腸癌ＨＲＴ１８細胞の試験管内成長
阻害を示す。 第２Ａ図は、ｎ−酪酸を含むガングリオシドリポソーム
に結合させたＳＨＩＨＩＯ２マウス中のヒト結腸癌ＨＴ
−２９細胞における蓄積レベルを示す。 第２Ｂ図は、ｎ−酪酸を含むガングリオシドリポソーム
に結合させたＳＨＩＨＩＯ２マウス腎臓における蓄積レ
ベルを示す。 第２Ｃ図は、ｎ−酪酸を含むガングリオシドリポソーム
に結合させたＳＨＩＨＩＯ２マウス肝臓における蓄積レ
ベルを示す。 第２Ｄ図は、ｎ−酪酸を含むガングリオシドリポソーム
に結合させたＳＨＩＨＩＯ２マウス肺臓における蓄積レ
ベルを示す。 第２Ｅ図は、ｎ−酪酸を含むガングリオシドリポソーム
に結合させたＳＨＩＨＩＯ２マウス肺臓における蓄積レ
ベルを示す。 第３図は、ｎ−酪酸を含むガングリオシドリポソームに
結合させたＳＨＩＨＩＯ２ヒト結腸癌ＨＴ−２９腫瘍の
生体内成長阻害を示す。 第４図は、ｎ−酪酸を含むガングリオシドリポソームに
結合させたＳＨＩＨＩＯ２いて、ヒト結腸癌ＨＲＴ−１
８腫瘍の生体内成長阻害を示す。 （以　上） ＩＧ　２０ ＩＧ　２Ｅ 云、？（ｆ′、≦２

Claims (22)

【特許請求の範囲】
1. （１）分化誘導因子を含有する合成または天然のマイク
   ロスフィアに複合させた腫瘍関連抗体またはリガンド。
2. （２）該天然マイクロスフィアがガングリオシドリポソ
   ームであることを特徴とする請求項１に記載のガングリ
   オリポソームまたはマイクロスフィア複合腫瘍関連抗体
   またはリガンド。
3. （３）該ガングリオシドリポソームが、主要成分として
   、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジステアリル
   ホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン及びホスフ
   ァチジルエタノールアミンからなる群の少なくとも一員
   から選ばれた燐脂質からなることを特徴とする請求項（
   ２）に記載の合成または天然マイクロスフィア複合腫瘍
   関連抗体またはリガンド。
4. （４）該ガングリオシドリポソーム中の該ガングリオシ
   ドが、ＧＴ＿１＿ｂ、ＧＴ＿１＿ａ及びＧＱ＿１からな
   る群の少なくとも一員から選ばれたポリシアリルガング
   リオシドならびにＧＭ＿３、ＧＭ＿１＿ａおよびＬＭ＿
   １からなる群の少なくとも一員から選ばれた高密度モノ
   シアリルガングリオシドからなる群の少なくとも一員か
   ら選ばれたものであることを特徴とする請求項（２）に
   記載の合成または天然マイクロスフィア複合腫瘍関連抗
   体またはリガンド。
5. （５）該合成マイクロスフィアが、ラクチドグリコリド
   コポリマー、ポリアクロレイングラフトコポリマー、カ
   ルボキシメチルデキストラン、ポリラクチドおよびポリ
   スチレンからなる群より選ばれた少なくとも一員から形
   成されていることを特徴とする請求項（１）に記載の合
   成または天然マイクロスフィア複合腫瘍関連抗体または
   リガンド。
6. （６）該分化誘導因子がｎ−酪酸またはその塩、ジメチ
   ルスルホキシド、１２−Ｏ−テトラデカノイルホルボー
   ル−１３−アセテート、ジヒドロテレオシジンＢ、テレ
   オシジンＢ、テレオシジンＡおよびレチン酸からなる群
   より選ばれた少なくとも一員であることを特徴とする請
   求項（１）に記載の合成または天然マイクロスフィア複
   合腫瘍関連抗体またはリガンド。
7. （７）分化誘導因子を含有する合成または天然のマイク
   ロスフィアに複合させた腫瘍関連抗体またはリガンドの
   医薬として有効な量を腫瘍患者に投与することを特徴と
   する腫瘍処置方法。
8. （８）該天然マイクロスフィアがガングリオシドリポソ
   ームであることを特徴とする請求項（７）に記載の方法
   。
9. （９）該ガングリオシドリポソームが、主要成分として
   、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジステアリル
   ホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン及びホスフ
   ァチジルエタノールアミンからなる群の少なくとも一員
   から選ばれた燐脂質からなることを特徴とする請求項（
   ８）に記載の方法。
10. （１０）該ガングリオシドリポソーム中の該ガングリオ
    シドが、ＧＴ＿１＿ｂ、ＧＴ＿１＿ａ及びＧＱ＿１から
    なる群の少なくとも一員から選ばれたポリシアリルガン
    グリオシドならびにＧＭ＿３、ＧＭ＿１＿ａおよびＬＭ
    ＿１からなる群の少なくとも一員から選ばれた高密度モ
    ノシアリルガングリオシドからなる群の少なくとも一員
    から選ばれたものであることを特徴とする請求項（８）
    に記載の方法。
11. （１１）該合成マイクロスフィアが、ラクチドグリコリ
    ドコポリマー、ポリアクロレイングラフトコポリマー、
    カルボキシメチルデキストラン、ポリラクチドおよびポ
    リスチレンからなる群より選ばれた少なくとも一員から
    形成されていることを特徴とする請求項（７）に記載の
    方法。
12. （１２）該分化誘導因子がｎ−酪酸またはその塩、ジメ
    チルスルホキシド、１２−Ｏ−テトラデカノイルホルボ
    ール−１３−アセテート、ジヒドロテレオシジンＢ、テ
    レオシジンＢ、テレオシジンＡおよびレチン酸からなる
    群の少なくとも一員より選ばれたものであることを特徴
    とする請求項（７）に記載の方法。
13. （１３）該医薬として有効な量が約０．３〜１．０ｍｇ
    ／ｋｇ体重であることを特徴とする請求項７に記載の方
    法。
14. （１４）該医薬として有効な量が約０．５〜１．０ｍｇ
    ／ｋｇ体重であることを特徴とする請求項（１３）に記
    載の方法。
15. （１５）該合成または天然マイクロスフィアに複合され
    た腫瘍関連抗体またはリガンドを静脈内、腹腔内または
    動脈内投与することを特徴とする請求項（７）に記載の
    方法。
16. （１６）分化誘導因子に複合させた腫瘍関連抗体または
    リガンド。
17. （１７）該分化誘導因子がｎ−酪酸またはその塩、ジメ
    チルスルホキシド、１２−Ｏ−テトラデカノイルホルボ
    ール−１３−アセテート、ジヒドロテレオシジンＢ、、
    テレオシジンＢ、テレオシジンＡおよびレチン酸からな
    る群の少なくとも一員より選ばれたものであることを特
    徴とする請求項（１６）に記載の方法。
18. （１８）分化誘導因子に複合させた腫瘍関連抗体または
    リガンドの医薬として有効な量を腫瘍患者に投与するこ
    とを特徴とする腫瘍処置方法。
19. （１９）該分化誘導因子がｎ−酪酸またはその塩、ジメ
    チルスルホキシド、１２−Ｏ−テトラデカノイルホルボ
    ール−１３−アセテート、ジヒドロテレオシジンＢ、テ
    レオシジンＢ、テレオシジンＡおよびレチン酸からなる
    群の少なくとも一員より選ばれたものであることを特徴
    とする請求項（１８）に記載の方法。
20. （２０）該医薬として有効な量が約０．１〜１．０ｍｇ
    ／ｋｇ体重であることを特徴とする請求項（２０）に記
    載の方法。
21. （２１）該医薬として有効な量が約０．５〜１．０ｍｇ
    ／ｋｇ体重であることを特徴とする請求項（２０）に記
    載の方法。
22. （２２）該分化誘導因子に複合された腫瘍関連抗体また
    はリガンドを静脈内、腹腔内または動脈内投与すること
    を特徴とする請求項（１８）に記載の方法。