JPH0213335A

JPH0213335A - 人レトロウィルスの感染に対する小動物の感作方法

Info

Publication number: JPH0213335A
Application number: JP1097242A
Authority: JP
Inventors: Gaetano Filice; ガエタノ　フィリチェ; Paolo Martino Cereda; パオロ　マルティノ　チェレダ; Paolo Cornaglia Ferraris; パオロ　コルナリア　フェッラリス
Original assignee: Co Pharma Corp Srl
Current assignee: Co Pharma Corp Srl
Priority date: 1988-04-18
Filing date: 1989-04-17
Publication date: 1990-01-17
Also published as: EP0338453A3; IT8820227A0; EP0338453A2; IT1225262B

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分計）本発明は、レトロウィルス、％に人免疫不全ウィルス（
ＨＩＭ）の感染に対する実験室ま次は野性の小動物の感
作方法、および生体内医薬またはワクチン試験に使用さ
れる前記ウィルスに感作し友小動物に関する。

（背景技術およびその問題点）後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ　）に関係する健康上
の問題はよく知られている。即ち、向う数年の間に、世
界人類に対してこの伝染病が拡大するとの観測がアシ、
ワクチンの開発に係る研究への努力を太いに刺激してい
る。ワクチンの調製および研究の主たる要件の一つとし
て、毒性および裂つ剤の有効性セ評価をなし得る適当な動物モデルが手に入
るか否かが問題である。現在のところ、嘱ＡＩＤＳの病因剤であるＨＩＶウィルスに感染ちる唯一
の動物種は、チンパンジーである。（Ｇａｊｄｕｓｅｋ
ＤＣ，ｅｔ　ａｌｌｌｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｈｉ
ｍｐａｎｚｅｅ　ＢｙＨｕｍａｎ　Ｔ−１ｙｍｐｈｏｔ
ｒｏｐｉｃ　Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ　Ｉｎ　Ｂｒａ
ｉｎＡｎｄ　０ｔｈｅｒ　’ｌ”１ｓｓｕｅｓ　Ｆｒｏ
ｍＡＩＤＳ　Ｐａｔｉｅｎｔｓ　　。

Ｌａｎｃｅｔ　１：５５−５６．　１９８５；　Ｆｕｌ
ｔｓ　ＰＮ、　　ｅｔ　ａｌ、。

’Ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ　Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　
Ｃｈｉｍｐａｎｚｅｅｓ　ＷｉｔｈＨｕｍａｎ　Ｔ　−
１ｙｍｐｈｏｔｒｏｐｉｃ　Ｖｉ　ｒｕｓ　Ｔｙｐｅ　
［［／ｌｙｍｐｈａ−ｄｅｎｏｐａｔｈｙ　　Ａｓ５ｏ
ｃｉａｔｅｄ　　Ｖｌｒｕｓ　　二　Ａ　　Ｐｏｔｅｎ
ｔｉａｌＭｏｄｅｌ　Ｆｏｒ　Ａｃｑｕｉｒｅｄ　Ｉｍ
ｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　Ｓｙｎｄｒｏｍ　。

Ｊ、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ　　５８：１１６．　１９８６）
しかしながら、チンパンジーは、ＡＩＤＳと呼ばれる疾
病にかかることはなく、ただ免疫性の相互作用金示すだ
けであるため、理想的なモデルではない。この事実にも
かかわらず、チンパンジーは、フリーウィルスおよび／
または感染細胞にさらした後、ワクチン接種によりもた
らされる防御の度合を分析するのに適し次モデルである
。チンパンジーモデルによ、９　ＡＩＤＳ用ワクチンの
研究するにあたっての主たる問題点としては、（１）頭
数が限られていること、（２）価格が高いこと、（３）
取扱いが困難なこと、および（４）防御攬の選定が挙け
られる。

ネズミ、ラット、ハムスター、モルモット、ウサギやト
ガリネズミ等の小動物について、ＨＩＶや感染細胞の接
種が行われているが、倒れの場合でも、感染したとの報
告はない。（Ｍｏｒｒｏｗ、　ＷＪＷ。

ｅｔ　ａｌ、　　Ｓｍａｌｌ　Ａｎｔｍａｌｓ　Ａｒｅ
　Ｎｏｔ　５ｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅＴｏ　Ｈｕｍａｎ　
Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　Ｖｉｒｕｓ　Ｉｎ
ｆｅｃｔｉｏｎ　。

Ｊ　ｇｅｎ　ｖｉｒｏｌ　６８：２２５３−２２５７．
１９８７）従って、現在のところ、ネズミ、ラット、ウ
サギ、モルモット、ハムスター、猫、犬等の最も一般的
な実験室動物は、ＨＩＭに対するワクチンの前臨床研究
用としてのモデルの開発に適したものとは考えられてい
ない。

（発明の目的）本発明の目的は、人免疫不全ウィルス（ＨＩＭ）を霊長
類以外の動物に有効に感染させる方法を提供することで
ある。

本発明のもう一つの目的は、ＡＩＤＳおよび関連疾病研
究用として、安価な動物モデルを提供することである。

本発明のさらにもう一つの目的は、ＡＩＤＳまたｆｌ　
ＡＩＤＳ関連錯体（ＡＲＣ）？含む、人免疫不全ウィル
ス（ＨＩＶ）感染等のレトロウィルス感染を防止ま九は
軽減するために使用されるワクチン等の治療薬の有効性
を決定するための、安価で優効な方法を提供することで
ある。

前記本発明の目的ならびに他の目的は、本明細書により
当業者には明らかである。

（発明の構成と効果）本発明による方法は、小動物中に無菌性腹膜炎を誘起し
、次いで、有効量のレトロウィルスと有効量のインター
ロイキシ−２（ＩＬ−２）、必要に応じてフイトヘムア
グルチニン（ＰＨＡ）ｉ併して前記小動物に投与するこ
とより成る。

さらに、もう一つの様態として、本発明は、無菌性腹膜
炎を誘起し得る有効量の薬剤と、有効量のレトロウィル
スおよびインターロイキン−２よシ成る試験キットに関
する。

さらに、本発明は、動物中のレトロウィルスに起因する
感染を防止するに際し、ワクチンの有効性を決定する方
法において、有効量のワクチンを動物に投与し；該動物
を、無菌性腹膜炎全誘起する有効量の薬剤で処理し：処
理動物に、有効量のレトロウィルスおよびインターロイ
キン−２を投与し；次いで、該動物について、レトロウ
ィルス感染の有無を検定してワクチンの有効性全決定す
ることより成る方法を提供するものである。

本発明方法によりもたらされる感染症は、ＡＩＤＳやＡ
ＢＣ等の既知の疾病の原因となる、例えば、人免疫不全
ウィルス（ＨＩＶ）’ｉ含む人レトロウィルス等のレト
ロウィルスにさらすことにより生じる種々の疾病を含む
。さらに、サル免疫不全ウィルス（ＳＩＶ）にさらすこ
とによって生じる種々の感染症も含むものであシ、これ
らは、レトロウィルスやＨＩＶに代るサル用薬剤を用い
ることによ）、本発明方法に係る動物中に誘発されるも
のである。

このようなサル免疫不全ウィルスは、人においても疾病
を生じるものとして知られている。

ここで、１人免疫不全ウィルス（）ｉＩＶ）Ｊとは、Ｈ
ＩＶ−１り（ブ、ＨＩＭ−ＩＩ　タ（７’、ＨＩＶ−Ｉ
ｌｌ　タイプを含む種々のレトロウィルスの血細呈よシ
成ることを意図している。これらのレトロウィルス種は
、例えば、ＨＴＬＶ−１、）ｉＴＬＶ　−ｕ　、　ＨＴ
ＬＶ−Ｉｌｌのような人Ｔ−細胞リンパウイルス（）ｉ
’Ｉ’ＬＶ’　）とも称せられる。

人免疫不全ウィルスｔ−動物に感染させる方法としては
、人免疫不全ウィルスとインターロイキン−２（ＩＬ−
２）およびＴ−細胞ミトゲン等のミトゲン又はミトゲン
化合物と全併用して投与することもできる。このような
ミトゲン化合物としては、例えば、フィトヘムアグルチ
ニン（ＰＨＡ）、コンカナパリンＡ　（Ｃｏｎ　Ａ　）
　、ポークライード・ミトゲン（ＰＷＭ）やリボ多糖類
（ＬＰ８）等を挙げることができる。これらは、お互い
に併用してもよい。

好ましいミトゲン化合物は、几ＰＭＩ　１４４０等の製
薬的に許容されたキャリヤー中のＰＨＡである。

本発明の実施にあたっては、赤インゲン豆から抽出され
た蛋白質であるフイトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）′に
ミトゲン薬剤とすることが有利である。

Ｐ）ＬＡは、Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｒｐ
、、　Ｐ、０．　Ｂｏｘ１４ｓＯｓ、　ｓｔ、　Ｌｏｕ
ｉｓ、　Ｍｉｓｓｏｕｒｉ、　Ｕ、Ｓ、Ａ、　　よシ市
販されている。

コンカナバリ：／　Ａ　（Ｃｏｎ　Ａ　）　ハ、ナタマ
メから単離サレタ植物蛋白で６Ｄ、Ｍｉｌｅｓ　−Ｙｅ
ｄａ　Ｌｔｄ。

よシ市販されている。

ＰＷＭ＋ＬＰ８も、攬々の販売元よシ市販されている。

例えば、ポークライード・ミトゲｙ　（ＰＷＭ　）は、
Ｕｎｉｔｅｄ　５ｔａｔｅｓ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ
　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ。

Ｐ、０．　Ｂｏｘ　２２４００．　Ｃ１ｅｖｅｌａｎｄ
、　０ｈｉｏ　ａ４１２２゜本発明により感作し得る動
物としては、ウサギ、ラット、ネズミ、ハムスター、モ
ルモット、トガリネズミ、猫、犬等を挙げることができ
る。使用および取扱いの点で特に好ましいものは、ウサ
ギ１、　ラットおよびネズミである。本発明方法によれ
ば、ＨＩＭまたは他のレトロウィルスによる感染ｔ−１
００％の効率で誘起することができる。研究すべき動物
中の血清転換は、感染後、１年以上の期間にわたって持
続していた。ＨＩＶにさらした後に生じた、　感染は、
抗）ＩＩＶ抗体、ｐ２４の存在を決定する目的のために
、血清分析の手段により決定され文。抗体の特異性ｈ、
多価抗ＨＩＶ人血清、抗ｐ２ａ、ｇｐａ１゜ｇｐ１２０
単一特異性精製ひつじ抗体を用いる競争ＥＬＩＳＡ試験
の方法により確認され念。また、ｐ２４抗原の特異性は
、多価抗）ｉＩＶ人血清を用いるＥＬＩ８Ａ中和試験の
方法により確認された。感染後２乃至６ケ月後、研究す
べき動物から末梢血液り７７球（ＰＢＬ）６除去し皮。

ＥＬＩＳＡ試験により、マクロファージ培養物の上澄液
中でｐ２４抗原の存在を評価した。感染細胞は、免疫螢
光検査法で、ペルオキシダーゼまたは単一クローンＫｐ
１７と接合シタ抗ＨＩＶ抗体、ＨＩＶＣ）ｐ２４．　ｇ
ｐ１２０　抗体を用いることにより同定した。単離した
ウィルスは、適当な細胞（Ｈ９，ＣＥＭま九は人リンパ
球）中で増殖させ、リンパ球は、同じ細胞中で共培養に
供した。そして、ＥＬＩＳＡ試験により、上澄液中でｐ
２４抗原の評価を行った。培養物の上澄液は、逆トラン
スクリプターゼ活性試験にかけた。感染細胞は、免疫螢
光検査法で、ペルオキシダーゼと単一クローン抗ｐ１７
と接合した抗ＨＩＶ抗体、ｐ２４゜ｇｐ１２０　　抗体
を用いて同定する。

単離したつ４　ルスｆ　Ｈ９細胞（５ｃｉｅｎｃｅ　２
２４　　。

４９７、１９８４）　　中で増殖する一方、培養物中の
レトロウィルスの存在を電子顕微鏡観察により確認した
。単離し几つィルスｔ−同様な方法で第２のグループの
動物に腹腔内接種し、上記したように、感染の血清分析
ならびにＰＢＬからのウィルス再単＃Ｉを行った。ＨＩ
Ｖ接種ウィルスと動物から単離したウィルスのゲノムの
分子分析を、感染細胞から抽出し、エンドヌクレアーゼ
で処理し、さらに放射性りンで標識付けしたＨＩＭ消息
子で処理したＤＮＡの交雑により行りた。接種ＨＩＶウ
ィルスおよび単離ウィルスの蛋白質を、感染細胞の上澄
液を遠心分離して得た沈降物のポリアクリルアミドゲル
（８Ｄ８−　ＰＡＧＥ　）中で電気永動分離し、蛋白質
ｆ　Ｃｏｍｐａｓｓｉｅ　ｂｌｕｅ　に染色することＫ
よ）分析した。これらの蛋白質ｔ−２つのウィルス蛋白
を含むストリップを用いたウェスタン法（Ｗｅｓｔｅｒ
ｎ　ｂｌｏｔ　）により同定し、電場に移行し、単一ク
ローン抗ｐ２４．　ｇｐ４１．　　ｇｐｔ２０抗体、人
多価抗ＨＩＶ血清、ウサギの単一特異性血清でのベリカ
プシド（ｐｅｒｉ−ｃａｐｓｉｄｅ　）　（ｅｎｖ　９
　）の免疫優性エピトープに対する評価を行った。感染
げっ菌類の再単離ウィルスは、全体として人ＨＩ■と同
一であることが発現する。

無菌性腹膜炎の誘起は、公知の手順により行われる。例
えば、自発食菌作用のような食菌作用を活性化するよう
なペプチドの存在又は不存在下、チオグリコール酸塩、
タフトシン、メルク、リステリア菌のホモジネート、フ
ロインドアジュバント、メタ過ヨウ素酸ナトリウム、カ
ゼインナトリウム、貝、グリコーゲン・タイプ■、クレ
ブシェラ・オキシト力・グリコプロティン（ＫｌｅｂＳ
ｉｅｌｌａｏｘｉｔｏｃａ　ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ
　）　（Ｂｉｏｓｔ１ｍ■５ｈａｒｐｅｒ。

Ｍｉ　ｌａｎ、　Ｉｔａｌ！／　）等の薬剤を腹腔内投
与することにより行われる。動物の種類によって異なる
が、２乃至５％濃度のチオグリコール酸塩生理溶液を、
１乃至１０−の量で投与することが特に好ましい。

蒸留水中の４％チオグリコール酸塩（ＭｅｒｃｋＧｍｂ
Ｈ、Ｇｅ　ｒｍａ　ｙ　）　１１、通常ウサギに対して
α５乃至２−の投与量で投与される。

無菌性腹膜共金誘起する他の方法も、同じく有効である
ことが証明されている。例えば、チオグリコール酸塩は
、滅菌したＰＢＳ中、メルクの懸濁液によジ置換また添
加することができる。（通常、１乃至１０ｗｔ％タルク
懸濁液は、ネズミに対してＶｓ２ｍ、　　ラットやハム
スターに対してｆ１４Ｑｙｄ。

モルモットに対して５０ｍ１の量で用いられる。）ヘハ
リンは、好ましくは５Ｕ／ゴの投与量で添加される。

動物を、食菌細胞の効果を上げることのできる化合物で
前処理することも好都合である。例えば、米国特許＠４
，５６７．１８２号に開示され之化合物は、ネズミに対
して体重１１＃当たシ１乃至５０１Ｍ１の範囲の投与量
で好適に皮下投与することができる。

好適な投与プロトコールとしては、ＩＷ／４Ｘ１０日間
、５”ｆ／に＃ＸｔＯ日間、２５ｑ／ｋＩＩＸ７　　日
間、５日当Ｂｓｏｑ／ｈである。最後に述べた投与量は
、感染ウィルスと共に腹腔内に注射されるのが好ましい
Ｏ実験的な感染は、無菌性腹膜炎の誘起後数日、通常は４
日または５日後に、好ましくは、ウィルス）ＩＩｖまた
は感染細胞の培養物の上澄液中に存在するフリーウィル
スに感染した細胞を用い、ｉｌｌ乃至１ｍｃｔ／耐濃度
の組換えインターロイキン−２とＰＨＡ（を乃至１０　
ｍｃｆ／ｘｉ　）の存在下に行われる。

必要に応じて、滅菌等張食塩水中１０乃至１００■の量
でＰＨＡ’ｉ動物に対して腹腔内注射してもよい。ネズ
ミに対しては、滅菌等張食塩水２１中約３５μ？の量が
投与量として適していることが証明されておシ、一方、
ウサギに対しては、より高い投与量、通常５０μを以上
が必要である。コンカナバリｙ　Ａ　（Ｍｉ　ｌｅｓ　
−Ｙｅｄａ　Ｌｔｄ、　）は、必要に応じて、ＰＨＡ　
Ｋ代って、または併用して１乃至２００μｔの投与量で
用いることができる。滅菌等張食塩水２．０耐中５０μ
？の投与量が、ネズミの感染に適していることが判って
いる。

直接ＨＩＶ感染の場合、感染投与量としては、動物１頭
当シ（Ｌ９Ｘ１０　　　乃至２．２Ｘ１０−５感染単位
が適当である。感染細胞を用いる場合、動物の大きさに
よって異なるが、動物１頭当、９（Ｌ５乃至２−の値で
、３乃至１０Ｘ１０’個の細胞が投与される。

また、本発明は、人免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）等のレ
トロウィルスを動物に感染させる試験キットを提供する
ものであシ、このキットは、無菌性腹膜炎を誘起し得る
有効量の薬剤と、有効量の人免疫不全ウィルス等のレト
ロウィルスとインターコイキン−２とを含有している。

レトロウィルスを動物に感染させる方法に関する上記種
々の様態が同様にこの試験キン）Ｋも適用することがで
きる。従って、例えば、フィトヘムアグルチニン、コン
カナパリンＡ１ボークウイード・ミトゲンやリポ多糖類
のミトゲン化合物、或いはこれらの混合物を含むことが
できる。レトロウィルスハ、）ｉＩＶ−１，Ｉ（ＩＶ−
１１，）ｉＩＶ−１１を等の血細型を含む人免疫不全ウ
ィルス（）ｉＩＶ）’ｉ含むことを意図している。

さらに、かかるキット中の無菌性腹膜炎を誘起する薬剤
としては、チオグリコール酸塩、タフシン、メルク、リ
ステリア菌のホモジネート、フロイントアジュバント、
メタ過ヨウ素酸ナトリウム、カゼインナトリウム、貝、
グリコーゲン・タイプ■、タレプシェラ・オキシト力・
グリコプロティンを挙げることができる。

また、かかるキラトラ用いて感染することのできる動物
の種類としては、上述のものが適用できる。投与経路、
上記薬剤、ウィルス、インターロイキン−２、ミトゲン
化合物の夫々の有効量も前述の通シであシ、本発明の試
験キットに採用することができる。これらは、対象とす
る動物やレトロウィルスによって変えることができる。

本発明の方法によれば、防御の正確な評価のため、既知
量のレトロウィルスまたはワクチンで予め処理した動物
内のレトロウィルスによって感染した細胞を接種するこ
とができる。動物のモニターは、サンプリングラ＜シ返
し行うことにより、非常に安価に容易に行うことができ
る。また、既知量のウィルスを接種した動物中の抗ウイ
ルス性製薬製剤の予防処置効果についても評価すること
ができる。

（実施例）本発明方法を、ウサギおよびネズミを用いた下記実施例
によりさらに説明するが、本発明はこれらに限定される
ものではない。

実施例１〔ウサギの感染〕４’ＸｆｙＦグリコール酸塩（Ｍｅｒｃｋ、　Ｄａｒｍ
ｓｔａｄｔ　）の滅菌水溶液１．８ｄ’ｉ１１頭のウサ
ギに接種して無菌性腹膜炎を誘起した。１頭のウサギは
、腸わなの穿口の後に生じた敗血性腹膜炎のため死亡し
た。４日後、５頭のウサギに対して、ＣＬ　５　ｍｃｔ
　／ｄの組換えインターロイキン−２（ＩＬ−２）と５
ｍｃｆ／−のＰＨＡ　（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ
　Ｃｏｒｐ、　Ｕ、Ｓ、Ａ、）の存在下、ＨＩＶ　（Ｄ
ｒ、几、Ｃ，Ｇａ１ｌｏ　Ｃ）実験室テ得たｌ−１９／
ＨＩＶ）に感染した細胞（ＩＸｌ　０ｅ７）　１ｒ：接
種した。また、第２のグループ４頭に対しては、フリー
ウィルス（Ｈ９／）ｉＩＶの上澄液）細胞とＩＬ−２（
α５　ｍｃｆ　／　ｒｄ　）を接種した。さらに、残シ
の３頭に対しては、Ｈ９に感染していない細胞（１Ｘ１
［］Ｃ７）とＩＬ−２（α５　ｍｃｆ　／　ｍｌ　）　
ｔ−接種した。

〔感染の決定〕

（ａ）　　血清分析１４日後、ＥＬＩＳＡ試験にょシ感染動物から得た血清
中に、抗ＨＩＶ抗体とＨＩＶの抗原を発見した。

抗体の特異性は、競争試験により呈示され、また、抗体
り工ｖの特異性は、中和試験によ）呈示された。

約１年後、その値は減少したものの、抗体、抗原の両者
に陽性を呈している。

（ｂ）　　ウィルス単離接糧後６ケ月後、Ｈ９／ＨＩＭ感染した細胞を接種し九
３頭のウサギの中、２頭からの末梢血液のリンパ球を採
取し、長期培養に供した。培養後７日後、ゆ着率核細胞
（マクロファージ）がフリーＨＶ抗ｉｔ放出した。免疫
ペルオキシダーゼ試験の結果、最小比率の陽性細胞が発
見された。陽性細胞のウィルス防御は最低である。Ｒ９
細胞の共培養とともに、ウィルス製産は増大した。Ｒ９
細胞の共培養後、ゆ着を起こさなかった細胞（リンパ球
）は、上澄液中に１−ＩＩＶ抗原を放出し念。典温的な
人レトロウィルス形態をもつピリオンが電子顕微ｆＡＫ
よシ観察された。リンパ球の約３乃至５％は、ペルオキ
シダーゼ陽性を呈した。逆トランスクリプターゼ活性の
１００，０００　ｃｐｍ７ｍ１以上が、培養物の上置液
中で発見された。

（Ｃ）生体内移行１頭のウサギに対して、ウサギから単離したつ４＃ス（
Ｈ？／ＨＩＶ−Ｒｆ）（ｔｘｌｏ　Ｃ７）を接種し喪。

２５日後、抗ＨＩＶ抗体および抗ＨＩＶ抗原が発見され
、この陽性は１５０日以上にわたって残った。

１４日後、Ｒ９細胞を共培養し念後、ＨＩＭ−Ｒ１ウイ
ルスを感染したウサギから摘出し７ｊ　ＰＢＬよりレト
ロウィルス（ＨＩＶ−Ｒ２）’を単離した。最近、２頭
のウサギに対して、ウィルスＨＩＭ−几２（ＩＸｉＯｅ
７細胞、Ｈ９／ＨＩＶ−几２）全接種し、２週間後に、
血清転換を発見し念。

実施例２〔ネズミの感染〕実施例１と同様の方法で、ネズミ？−頭当り２Ｘ１０　
　ケのＲ９−）ＩＩＶ−ｍＢ感染細胞（ｐ２４抗原によ
り検出される上澄液の０．Ｄ、が２以上で、几、Ｔ。

が９０．０００　ｃｐｍ／ｍｌ　ｎ）　ｆ用いて感染し
た。無菌性腹膜炎は、ネズミ１頭当９４％チオグリコー
ル酸塩溶液１１を投与することにより予め誘起した。

市販のＥＬＩＳＡ試験（Ｂｅｈｒｉｎｇ　−Ｅｎｚｉｇ
ｎｏｓｔ　−ＨＩＭ−ｍｉ　ｃｒｏ■）を用いて、ＨＩ
Ｖに対するＩｇＧ抗体の存在を検出した。感染動物の全
てにおいて、ＥＬＩＳＡ試験に対して陽性結果を得た。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）無菌性腹膜炎を小動物に誘起し、次いで、フリー
のレトロウィルスまたはトトロウィルスに感染した細胞
をインターロイキン−２および必要に応じて、フィトヘ
ムアグルチニンおよび／またはコンカナパリンＡの存在
下に接種することより成ることを特徴とする人レトロウ
ィルスに対する小動物の感作方法。
（２）該小動物が、ウサギ、ラット、ネズミ、モルモッ
ト、ハムスター、トガリネズミ、猫または犬である特許
請求の範囲第１項に記載された方法。
（３）感染が、ウィルスまたはウィルスに感染した細胞
の上澄み液に存在するフリーウィルスに感染した細胞の
接種により誘起される特許請求の範囲第１項に記載され
た方法。
（４）該インターロイキンおよびフィトヘムアグルチニ
ンが、感染細胞の培養物またはウィルス懸濁液中、それ
ぞれ０．１乃至ｍｃｇ／ｍｌおよび１乃至１０ｍｃｇ／
ｍｌ存在する特許請求の範囲第１項に記載された方法。
（５）該インターロイキンが０．５ｍｃｇ／ｍｌ存在す
る特許請求の範囲第４項に記載された方法。
（６）該無菌性腹膜炎を、チオグリコール酸塩、タフト
シン、タルク、リステリア菌のホモジネート、フロイン
トアジュバント、メタ過ヨウ素酸ナトリウム、カゼイン
ナトリウム、貝、グリコゲン・タイプII、クレブシェラ
・オキシトカ・グリコプロテイン（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌ
ａ　ｏｘｉｔｏｃａ　ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ）を投
与することに誘起される特許請求の範囲第１項に記載さ
れた方法。
（７）ウィルスが、人免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）であ
る特許請求の範囲第１項乃至第６項の何れかに記載され
た方法。
（８）無菌性腹膜炎を誘起することのできる有効量の薬
剤と、有効量のレトロウィルスおよびインターロイキン
−２より成ることを特徴とする試験キット。
（９）レトロウィルスに起因する感染を防止するに際し
、小動物におけるワクチンの有効性を決定する方法にお
いて、ａ）小動物に有効量のワクチンを投与し；ｂ）該小動物を、無菌性腹膜炎を誘起する有効量の薬剤
で処理し；ｃ）処理動物に、有効量のレトロウィルスおよびインタ
ーロイキン−２を投与し；そしてｄ）該小動物について
、レトロウィルス感染の有無を検定してワクチンの有効
性を決定することを特徴とする方法。
（１０）実験目的で、人免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）の
感染に対して感作した小動物。