JPH02131575A - Ｈｉｖ―２変異株 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、一般にｌ｛ＩＶ−２レトロウイルスの新規株
に関する。さらに詳しくは、本発明は、ヨーロピアン●
コレクンヨン・オブ・アニマル・セル・カルチャー［Ｅ
ｕｒｏｐｅａｎ　Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ　ｏｌ’　Ａｎ
ｉ＠ａｌ　Ｃｅｌｌ　Ｃｕｌｔｕｒｅ（ＥＣＡＣＣ）、
ボートンダウン、ソールズベリー、ウイルトンア、英国
］に寄託されているＨＩＶ−２ＴＹ株に例示されるよう
なＨＩＶ−２レトロウイルスのｒＴＹ型」株に関する。

（従来の技術および発明が解決しようとする課題）２種
の関連はするか別々のウイルスが、後天性免疫不全症候
群（ＡＩＤＳ）を引き起こし得ることが決定されている
、すなわち、ヒト免疫不全ウイルスｌ（ＨＩＶ−１）お
よびヒト免疫不全ウイルス２（Ｈｌｌ−２）である。異
なるＨＩＶ−１株が単離されてきているけれども、これ
らはその主要タンパク質に共通の抗原部位を有している
。この関連性のために、特定の感染株が何であるかにか
かわらず、感染者の血液中の抗Ｈ　Ｉ　Ｖ　−　１抗体
を検出するための抗原源として原型株を用いることが可
能になる。

１１！Ｖ−２型感染の最初の証拠は、１９８５年に西ア
フリカで発見された［バリン（Ｂａｒｉｎ）らのＬａｎ
ｃｅｔ１９８５；［１：１３８７〜１３８９］。このウ
イルスは単離され、Ｈ　Ｔ　Ｌ　Ｖ−Ｉ　Ｖと命名され
た［ノＪンキ（Ｋ　ａｎｋｉ）らのＳ　ｃｉｅｎｃｅ２
−３　２、２３８〜２　４　３（１　９　８　６）１．
ついでモンタニｘ（Ｍｏｎｔａｇｎｉｅｒ）と彼の同僚
は、１９８５年に西アフリカのΔＩＤｓ患賃から他のＨ
ＩＶ−２型感染株をｌｉ離し、これをＬＡＶ−２と名付
けた（１）ＣＴＷＯ８７／０４４５９）。ついで１９８
７年には、アルバート（Ａ　ｌｂｅｒｔ）らか、Ａ　ｉ
ｄｓ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ａｎｄ　Ｉｆ　ｕｍａｎ　Ｒ
ｅｔｒｏｖｉｒｕｓＳ１　９　８　７、３，３〜１０に
おいて西アフリカからの他の＋ｌｌＶ２ヒトレトロウイ
ルスを単離したことを開示している（Ｓ　Ｂ　Ｌ６６６
９）。

文１駄中の証拠から、ＩＩＴＬＶ　　ＩＶ（ＩＩＩＶ２
　　ＰＫ　　２８９）中離物は、おそらくサル牛（免疫
不全ウイルスＭＡＣ−２５１感染細胞培養物か，３分か
れたものであろうことか今や示されている。

しかしながら、ｔ−　Ａ　Ｖ　−　２とＳ　Ｂ　ｌ−　
−−　６６　６　９についでは、ＨＩＶ−１とは区別さ
れる型のヒト免疫不全と関連付けられている。｝｛　ｌ
　Ｖ　−　１とＨｌｖ−２のゲノムはヌクレオチドレベ
ルにおいて約５０％の相同性がみられるだけであり、Ｈ
　Ｉ　Ｖｌの原型株はＨＩＶ−２抗体の検出のための抗
原源として用いることはできない。ＨＩＶ−１の場合と
同様にＨ　Ｉ　Ｖ　−　２についでも複数のウイルス株
が検出されており、特定の感染株が何であるかにかかわ
らず抗Ｈ［Ｖ−２抗体を検出するため、抗原源として用
いるための原型株を決定することが重要になってきてい
る。

アルバートらは新たに単離したＳＢＬ−６６６９の開示
の中で、この株をＨＴＬＩ−４、ｌ−　Ａ　Ｖ＝２およ
びＨＴＬＶ−１［ＩＢと比較している（Ａｉｄｓ　Ｒｅ
ｓｅａｒｃｈ　ａｎｄ　Ｈｕｍａｎ　Ｒｅｔｒｏｖｉｒ
ｕｓ，　　ｌ　９　８７、３：３〜１０）。彼等は、Ｌ
　Ａ　Ｖ　−　２およびＳＢＬ−６６６９がヒトＴ細胞
株であるＨＵＴ　　７８、Ｃ　Ｅ　Ｍ，　Ｊ　ｕｒｋａ
ｔおよびＵ　９３７に容易に感染し複製することを見出
した。彼等はまた、ＨＴＬＶ−ＩＶ、ＬＡＶ−２、ＳＢ
Ｉ、−６６６９お上びｌｉＴＬＶ−１１１Ｂのいずれも
か、分子のおよその大きさｈ川２０ｋｌ）の外部糖タン
パク′肖を自一していることを見出した。彼等はまた、
Ｌ．　Ａ　Ｖ２、ＨＴＬＶ−ＩＶおよひＳＢＬ−６６６
９のいずれもか交差血清学的分析において同し反応を小
すことからこれらが完全に交差反応性であることを示し
た。アルバートは、西アフリカ単離物（｝１１’　Ｌ　
Ｖ　−　Ｉ　Ｖ、ＬＡＶ−２およひＳ　ｔ３Ｌ．−６６
　（’３９）のいずれからの抗原も池の２つにタ・ｊし
て産生された抗体を検出するための原４Ｑ株として機能
し得ると結論づけたか、このことかこの種の他のウイル
ス中離物にも当てはまるかとうかを決定するためにさら
に研究をする必星かあると注意を喚起している。

（課題を解決するための手段） 本発明は、標準もしくは原シ１１月＋　１　Ｖ−２株と
して使用するのに適し、Ｓ　Ｄ　Ｓ　：ｌ４リアクリル
アミ１・ゲル電気泳動（ＰＡＧＥ）によるウイルスタン
パク質の分析により１５０ｋＤの糖タノパク質を含も抗
原プロフィルを有することを特徴とする、＋−１　１１
−２レトロウイルスの新規なｒＴＹ型」株を提供するも
のである。本発明のＴＹ株の例示としては、ＥＣＡＣＣ
［バクシーン・リサーチ・アンド・プロダクンヨン・ラ
ホラトリーズ（Ｖａｃｃｉｎｅ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ａ
ｎｄ　Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅ
ｓ）、バブリノク・ヘルス・ラボラトリー・サービス（
Ｐ　ｕｂｌｉｃＨ　ｅａｌｔｈ　Ｌ　ａｂｏｒａｔｏｒ
ｙ　Ｓ　ｅｒｖｉｃｅ）、センター瞭フォア・アプライ
ド・マイクロバイオロジー・アンド・ノサーチ（Ｃｅｎ
ｔｒｅ　ｆｏｒ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ
ｏｇｙａｎｄ　Ｒ　ｅｓｅａｒｃｈ）、ポ１トンダウン
、ソールズベリー、ウイルト／アＳＰ４　　０ＪＧ，英
国〕に受託番号Ｖ−８８０６　１００　１として１９８
８年６月１０日に寄託されているＨ　Ｉ　Ｖ−２レトロ
ウイルスのＴＹ株を挙げることができる。

本発明のＨ　Ｉ　Ｖ　−　２レトロウイルスの新規株は
、寄託株のＳＤＳ　　ＰＡＧＥ分析により明らかなよう
に、ｌ１０ｋＤおよび３９ｋＤのＥｎｖ遺伝子産物、６
８ｋＤおよび３４ｋＤのＰｏｌ遺伝子産物並びに２５／
２６ｋＤおよび１７ｋＤのＧａｇ遺伝子産物をさらに含
む抗原プロフィルを有することを特徴とす本発明による
ＨＩＶ−２レトロウイルス株は、１１ＵＴ７８細胞、Ｓ
ＵＰ　Ｔ−１細胞およひＵ９３７細胞中での複製能、並
びに２４日間インキユベートした後のＣＥＭ細胞中で曳
製できない点でＴ　Ｙ株と共通しているように思われる
。

本発明はさらに、ＴＹ株ウイルスタンパク質のＳＤＳＩ
）ＡＧＥ分析により１５０ｋＤの糖タンパク實の存在か
認められることを特徴とする、精製中ＡＭ　Ｔ　Ｙ　”
ｔ’．　ｔｉ　ｌ　Ｖ−２レトロウィルスタンパク質を
１含む組成物および抗原調製物をも提供する。

本発明の別の！ｆｆｌ　様として、生物学的体液中の抗
Ｈ　Ｉ　Ｖ−２抗体の存在をインビトロで検出するため
の方法であって、該生物学的体液を精製抗原調》ン物ま
たは精製単離したＴＹ型｝−！ＩＩ−２レトロウイルス
タンパク質を含む組成物（たとえば、ＴＹ　Ｉ！’！株
Ｈ　Ｉ　Ｖ−２タンパク質の粗製ウイルス溶解物）と接
触させ、ついで試料中の抗体と抗原との間で生成した免
疫学的′ｆＭ合体を検出することを特徴とする方法が提
供される。

つぎに本発明を実施例に基づいてさらに詳しく説明する
か、本発明はこれらに限られるものではない。なお、下
記実施例は、ＨＩＶ−２　ＴＹの最初の単離、該株が増
殖する細胞株、抗原プロフィルを決定する方法、および
｝｛　Ｉ　Ｖ　−　２株による感染を検出するための診
断アッセイとして使用する司能性についで説明するもの
である。

ＴＹ株ウイルスは、フランスに住むＡ　Ｉ　ＤＳ（力Ｊ
二肺炎）に感染していると診断されたポルトガル人女性
（Ｔ．Ｙ．）の血漿から最初に単離され、ｌ］ＵＴ７８
１［Ｄ胞株（アメリカン・タイプ・カルチャー・コレク
／ヨン、受託番号ＴＩＢｌ６１）を感染するのに用いら
れた。前以て行ったスクリーニングによると、このウイ
ルス株は｝ＩＵＴ　　７８、ＳＩＪＰＴ−１およびＵ　
９３７細胞株中ではよく復製したか、モンテニエらの株
（ＷＯ８７／０４４５９、ＥＣＡＣＣに８７．０１．Ｉ
ＯＯ１および８７．０　１．１００２の受託番号で寄託
）と違って２４日間インキユベートした後のＣＥＭ細胞
中では複製することができなかった。

ＴＹ株の抗原プロフィルを確かめるために、新鮮な１０
１漿（２度Ｑ）をＨＵＴ　　７Ｂ細胞（ＩＸＩＯ”個）
とともに３７゜Ｃで２時間インキユベートした。新鮮な
培地で洗浄した後、２０％ウシ胎仔血清および抗生物質
を加えたＲＰＭＩ１６４０（ギブコ）培地中で細胞を培
養した。細胞変性効果（巨細胞の生成）が、劇的な細胞
死を伴うことなく２〜３週間以内にみられた。ｌ箇月後
、１００％近い細胞が免疫蛍光によりＨ　Ｉ　Ｖ　−　
２陽性であった。そのとき以来、｝−｛Ｉ１−２ＴＹ細
胞株はＨＩＶ−２ウイルスおよび抗原を絶え間なく産生
じ続けた。

ＨＩＶ−２７Ｙ抗原の調製は、継代２日後に集めたウイ
ルス感染ＨｕＬ７８培養からの上浦液（３０ａ＋Ｃ）を
ペレノト化することにより行った。培ｊ？　ｉｎｋを０
．４５μ贋の１漠を通して濾過し、２０，００　０　ｒ
ｐａ＋のｓｗ２７ｏ一夕−（ヘノクマン）中テ２０％ン
ｉ糖クッンヨン（ｃｕｓｈｉｏｎ）（８　ｘＱ）に２時
間通すことによりウイルスを濃縮した。ついでウイルス
ヘレノトヲ溶解バソファ−（０．０５モル／ｌ２トリス
Ｊ｝−Ｉ　Ｃ　Ｌ　ｐＨ　７　．　２、０．１５モル／
ｌ２ＮａＣ１、１％ト１１トンＸＩＯＯ，１％デオキ／
コール酸ナトリウム、０　１％ドテンル硫酸ナトリウム
）（２００μの中に１リリ濁した。

溶解したウイルス調製物（２００μＣ）を２倍に濃縮し
た試料ハノファ−（０．１６Ｍ｝リス−｝−１　３Ｐ０
４中の４％ＳＤＳ、０．２Ｍジチオスレイトール（Ｄ′
ＦＴ）、２０％グリセロールおよび０．０００２％ブロ
ムフェ／−ルブルー、ｐＨ　６．　８）（２　００μＱ
）と混合し、ドテンル硫酸ナトリウムの存在下での１２
，５％ポリアクリルアミド平板ゲル上の電気泳動により
分画した［レムリ（Ｌａｅｍｍｌｉ，　ＪＫ．）のＮａ
ｔｕｒｅＳ　１　９７０；２２７：６８０〜６８５］．
電気泳動後、移動バッファ一（ＩＯミリモル／Ｑ　トリ
スーＨ　Ｃ　ｌ、ｐＨ７．０、２ミリモル／ＱＥＤＴＡ
，５０ミリモル／ｉ！ＮａＣｌ）を３回交換してゲルを
３０分間洗浄した。

ついでニトロセルロース／ゲル「サンドイッチ」を室温
で３６時間インキコベートすることにより、ゲル中のタ
ンパク質をニトロセルロースに受動的に移動させた。つ
いでニトロセルロースシ一トを、０．１５モル／ρＮａ
Ｃ　ｌ（Ｐ　Ｂ　Ｓ　）を含有する１０ミリモル／ｆ２
　リン酸ナトリウムハノファ一（ｐＨ７４）中の３％ウ
シｍｌ青アノレブミン（ＢＳＡ）とともに３７°Ｃで１
時間インキユベートし、Ｑ．５ｃｘのストリップにカッ
ティングした。０　２０％ツイーン２０を含有するＰＢ
Ｓ（ＰＢＳ−Ｔ）中で３回洗浄した後、ＰＢＳ−Ｔ中の
ｌ％ＢＳＡを加えた１）　Ｂ　Ｓ中での試験試料の１　
：２　０　０希釈液（２．５ｍＱ）中で各ストリノプを
室温にて一夜インキユベートした。ス１・リップをＰＢ
Ｓ−Ｔで５回洗浄した。

アフィニティー精製しビオチン標識したヒツ／ＩｇＧ抗
ヒト免疫グロブリン（ＰＢＳ−Ｔ中で１２００に希釈，
アマーシャム）をストリップに加え、３７゜Ｃで１時間
インキユベートした。｝）　Ｂ　Ｓ　−　Ｔで３回洗浄
した後、前以て生成させたストレブトアビジンービオチ
ン化西洋ワサビペルオキンターゼ複合体（アマ−／ヤム
）のＰＢＳ−Ｔ中の１：２００希釈液をストリノプに加
え、室温にて３０分間インキコベートした。３回洗浄し
た後、ジアミノヘンジジンの新たな溶液（ＰＢＳｌ００
ｚ（！中に？０Ｒ９、０．Ｏｌ％過酸化水素水を添加）
を加えることによりベルオキンダーゼ活性を比色分析的
に検出した。

第１図はウエスタンブロッティングの結果を示すもので
あり、第１図中、レーンａ，　ｂおよびＣ中の抗原はそ
れぞれＨ　Ｉ　Ｖ−　１（ＨＴＬＶ−１　１　１■）、
ＨＩＶ−２　１゛ＹおよびＨＩＶ−２　　ＰＫ　　２８
９［フィリス・シェイ・カン牛（Ｐｈｙｌｌｉｓ　Ｊ　
．　Ｋａｎｋｉ）、７’ハー１■メント・キャンサー・
バイオロジー（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｃａｎｃ
ｅｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ）、ハーバード・スクール・オブ
・パブリ，ク・ヘルス（Ｈａｒｖａｒｄ　Ｓｃｈｏｏｌ
　ｏｆ　Ｐｕｂｌｉｃ　｝｛ｅａｌｔｈ）、ボストン、
ＭＡ］であり、試験血清は１の列の方は抗Ｈ　Ｉ　Ｖ１
、２の列の方は抗ＨＩＶ−２であった。予想されるよう
に、Ｈ　Ｉ　Ｖ　−　２変異体タンパク質のいずれも抗
Ｈ　Ｉ　Ｖ−１抗体に強く結合することはなかった。両
株からのタンパク質は抗１−｛　Ｉ　Ｖ−２血清に対し
ては強く結合し、Ｉ−１１Ｖ−２ＴＹタンパク質は１５
０ｋＤタンパク實の存在によってｌ−ＩＩＶ〜２　　Ｐ
Ｋ　　２８９タンパク質とは識別された。

第２図のウエスタンブロノティングでは、上半分のレー
ンｌ−１７の抗原はＨＩＶ−２　ＴＹであり、下半分の
レーン１〜１７の抗原はＨ　Ｉ　Ｖ２　　ＰＫ　　２８
９である。図に示した両゛ト分において、レーン１−１
．２の試験血請はすへて｝｛　Ｉ　Ｖ２に対する抗体に
ついで陽性であり、一方、レーンｌ３〜１７の試験血請
はＨＩＶＩに対する抗体についで陽性であった。レーン
１３〜１７の結果は、Ｈ　Ｉ　Ｖ　−　１抗体とＨ　Ｉ
　Ｖ　−　２抗原との間の交差反応性か非常に小さいこ
とを示した。レーン１−１２において、ＨＩＶ−２　Ｔ
Ｙ抗原および１−｛　Ｉ　Ｖ〜２　　ＰＫ　　２８９抗
原は、それぞれｇｐｌ２０バンドを生成した。しかしな
から、Ｈ　Ｉ　Ｖ　．−　２ＰＫ２８９抗原は１５０ｇ
ｐバントを全く生成せず、これに対してＨＩＶ−２ＴＹ
抗原は試験した各異なるＨ　Ｉ　Ｖ　−　２抗血清につ
いでｇｐ１５０ハンドを生成した。

診断用に使用する場合の典型的な例においては、ポリス
チレンビーズを抗原でコーティングする前に、単離した
ＨＩＶ−２　′ｒＹを界面活性剤および超音波処理によ
り破砕し不活化する。ついでコーティングビーズを試料
希釈液およびヒト血清もしくは血漿とともにインキユベ
ートする。試料中のＨ　Ｉ　Ｖ−２に対する抗体は、固
相上のＨ　Ｉ　Ｖ２　　ＴＹ抗原に結合する。未結合物
質を吸引しビーズを洗浄した後、西洋ワサビペルオキシ
ダーゼで標識したヒトＩｇＧに対するヤギ抗体（抗ヒト
ｌｇＧ：ＨＲＰｏ）をビーズー抗原−抗体複合体ととも
にインキユベートする。ついで未結合酵素結合体を吸引
しビーズを洗浄する。つぎに過酸化水素を含有する０−
フェニレンジアミン（ＯＰＤ）溶液をビーズに加え、イ
ンキユヘートした後、ビーズに結合したＨＩＶ−２に対
する抗体の量に比例して黄色〜オレン７色の発色を生じ
る。

診断に使用する場合の他の典ヤ的な例においては、ｌ１
■■−２　ＴＹに対するヒト抗体（Ａｂ）をコーティン
グしたポリスチレンビーズを試料かまたはコントロール
とともにインキユベートする。試料中のＨ　Ｉ　Ｖ−２
抗原（Ａｇ）はビーズに結合する。

インキュベート後、未結合物質を吸引し、ビーズをδＬ
浄する。ついでＨＩＶ−２ＴＹに対するウサキ抗体をビ
ーズとともにインキユベートすると１１１■−２抗原に
結合する。未結合物質を吸引し、ビーズを洗浄する。西
洋ワサビペルオキシターセで標識したウサギＩｇＧに対
するヤギ抗体（抗ウサキＩｇＧ・！−ＩＲＰＯ）をビー
ズとともにインキユベートするとウサキ抗体に結合する
。未結合物質を吸引し、ビーズを洗浄する。つぎに、過
酸化水素を含有する０−フ二二レンジアミン（Ｏ　Ｐ　
Ｄ）溶１をビーズに加え、インキュヘート後、ビーズに
結合したＨ　Ｉ　Ｖ−２抗原の量に比例して黄色〜オレ
ンジ色の発色が生じる。１Ｎ硫酸を加えることによって
酵素反応を停止させ、分光光度計を用いて４９２ｎｓに
おける色の強度を読み取る。

以上の記載は本発明の理解を明確にするためのちのであ
り、これから無用の限定を考えるへきてはな《、当業者
には本発明の範囲内の態様および＋り点は明らかであろ
う。たとえば、診断用に使用する場合において、ＨＩＶ
−２ＴＹ抗原を得るには、感染細胞株（すなわちＨＵＴ
　　７８）を採取し、細胞を超音波処理し、細胞膜およ
び他の破片を沈澱させるために溶液を遠心分離にかけて
もよい。ついで、残留する粗製のウイルス溶解物をボノ
スチレンビーズに加えることかできる。コーティングし
たビーズは、ＨＩＶ−２に対する抗体を検出するために
、試料希釈液およびヒト血ｌ＾もしくは血漿とともにイ
ンキユヘートする。

【図面の簡単な説明】

第１図は、抗Ｈ　Ｉ　Ｖ　−　１血清および抗ＨＩＶ２
血清と反応させることにより｝｛ＩＶ−１（ＨＴＬＶ−
１ｔ！Ｂ）、｝｛ＩＶ−２ＴＹおよびＨＩＶ２ＰＫ２８
９の抗原プロフィルを比較したウエスタンブロノティン
グを示す模式図、第２図は、ＨＩＶ−２ＴＹおよびＨ　
Ｉ　Ｖ　−　２ＰＫ　　２８９の抗原プロフィルを比較
したウエスタンブロソティングを示す模式図である。 特許出願人　アポノト・ラボラトリーズ代　理　人　弁
理士　青　山　　葆はかｌ名図面の浄書（内容に変更な
し） 第　１１！！！！ 血清 抗ＨＩＹ−１ 血清 抗ＨＩＴ−２ ａｂｃ ａｂｃ ４１一 ｌ ｌ１−● ａコＨＩＶ−１　（ＷＬＶ−ｍＢ） ｂ−ＨＩＶ−２　ＴＹ ｃ諧ＨＩＶ−２ＰＫ２８９ 図面の浄ＩＦ（内容に変更なし） 手続補正書 （方式） し 第 図 平成 １年１０月１２口

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. （１）ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動によるウ
   ィルスタンパク質の分析により、１５０ｋＤの糖タンパ
   ク質を含む抗原プロフィルを有することを特徴とする、
   ＨＩＶ−２レトロウイルスのＴＹ型株。
2. （２）ＥＣＡＣＣに受託番号Ｖ−８８０６１００１で寄
   託されている請求項（１）記載のＴＹ型株。
3. （３）さらに１１０ｋＤおよび３９ｋＤのＥｎｖ遺伝子
   産物、６８ｋＤおよび３４ｋＤのＰｏｌ遺伝子産物、並
   びに２５／２６ｋＤおよび１７ｋＤのＧａｇ遺伝子産物
   を含む抗原プロフィルを有する請求項（１）記載のＴＹ
   型株。
4. （４）ＨＵＴ７８細胞、ＳＵＰＴ−１細胞およびＵ９３
   ７細胞中での複製能を有する請求項（１）記載のＴＹ型
   株。
5. （５）精製単離したＴＹ型ＨＩＶ−２レトロウイルスタ
   ンパク質を含む組成物。
6. （６）ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動によるウ
   ィルスタンパク質の分析により、１５０ｋＤの糖タンパ
   ク質の存在が認められることを特徴とする請求項（５）
   記載の組成物。
7. （７）ＴＹ型ＨＩＶ−２レトロウイルスタンパク質を含
   むことを特徴とする精製単離した抗原調製物。
8. （８）生物学的体液中の抗ＨＩＶ−２抗体の存在をイン
   ビトロで検出する方法であって、該生物学的体液を請求
   項（７）記載の精製抗原調製物と接触させ、ついで生成
   した免疫学的複合体を検出することを特徴とする方法。
9. （９）生物学的体液中の抗ＨＩＶ−２抗体の存在をイン
   ビトロで検出する方法であって、該生物学的体液を請求
   項（５）または（６）記載の組成物と接触させ、ついで
   生成した免疫学的複合体を検出することを特徴とする方
   法。