JPH01502118A - チオール反応性架橋剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 チオール反応性架橋剤 介皿且分団 本発明は、少くとも１個の他の反応性官能基に共有結合で結合された少（とも１ ｗＪのチオール反応性（Ｌｈｉｏｌ−ｒｅａｃＬｉｖａ）官能基を有する架橋剤 及びその製法に関する。さらに詳しくは、本発明は少くとも１個の異種の反応性 官能基に共有結合で結合された少くとも１個のチオール反応性官能基を有する複 素官能性（ｂｐ、ｔｅｒｏ。

ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ）架橋剤及びその製法に関する。

３貝ｐ宣景 架橋剤は良く知られており、そうした架橋剤のかなりの範囲のものが商業的に入 手することができる。広い意味で、架（４削は、共に共有結合で結合された１個 又はそれ以上の反応性官能基を汀する。この共有結合は、直接の結合でもよいが 、多くの場合それらの反応性官能基は、スペーサーとなる結合（Ｉｉｎｋａ（Ｈ ｅ）にそれぞれが共有結合で結合し、スペーサー結合（ｓｐａｃｅｒ　ｌ１ｎｋ ａｌ□）に、ｈり隔てられている。これらの反応性官能基は同じでも、菫なって も（複素反応性架橋剤）よい。

架橋剤の一つの適用は、他の化学的な存在物（ｃｎｔｉＬｙ）に共有結合で結合 されたポリペプチド又はタンパク質からなる複合（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）化合物 の製造である。そのような複合化合物の例として、酵素又はキレート化された放 射線不透過性もしくは放射性金属原子のような、シグナル生産性の化学的存在物 に共有結合で結合された抗体；トキシン又はキレート化された放１・１性金属原 子のような細胞毒性の化学的な存在物に共有結合で結合されたＩ九体；及び抗原 性被分析体に共有結合で結合された酵素などがあげられる。

診断や細胞標的治療に使用するために、抗体又は抗体断片をシグナル生産性の化 学的な存在物又は細胞毒性の化学的な存在物に結合させるために架橋剤を使用す ることは、がなりの関心を集めている。アミノ基反応性活性エステルのような異 種の官能基に共有結合で結合されたチオール反応性官能基を有する複素官能性架 橋剤を用いてそのような複合分子を製造することが知られている。

すなわち、複素官能性架橋剤は、まず、抗体を結合させたい化学的な存在物と反 応させられる。この反応は、例えば、化学的な存在物のアミノ基を複素官能性架 橋剤上のアミノ反応性官能基と反応させることにより行うことができる０次に、 抗体又は抗体断片の遊離のスルフィドリル（ｓｕｌｐｈｄｒｙｌ）　Ｍを複素反 応性架橋剤のチオール反応性官能基と反応させて、目的の複合分子を生成させる 。

チオール特異的官能基としてマレイミドを用いる、ヘテロ２官能性架橋剤（すな わち、２つの反応性官能基を有する複素官能性架橋剤）が知られている。このよ うな架橋剤の例としては、抗体又は抗体断片と、酵素又は細胞毒化合物とを含む 複合分子の製造に使用されてきたｎ−マレイミド−ベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシ コハク酸イミドエステル（ＭＢＳ）がある、（オサリバン（０°５ｕｌｌｉｖａ ｎ）、Ｍ、Ｊ、１ｊｊｌ　（１９７９）　、八ｎａ１．　Ｂｉｏｃｈｅｗ、、１ ００　．１００−１０８；フレイタフグ（Ｆｒｅｙｔａｇ）　、　Ｊ、Ｈ，％、 （１９８４）、　ＣＩｊｎ、　Ｃｈｅｌｌｌ、、　３０　。

４７１−４２０　；　ニール　（Ｙｏｕｌｅ）、Ｒ，Ｊ、Ｍ　（１９８４）　、 ＰＮＡＳ　ＬＩＳＡ　、７７　。

５４８３−５４８６）　、マレイミド系のへテロ２官能性架橋剤の種々の誘導体 も知られている。これらのマレイミド架橋剤は、非常に反応性があり、容易に加 水分解してマレアミック酸になる。一般に、これらはスルフィドリル基に対して 特異性が低く、特に、複合分子の製造の際に、得られる分子が確実に各共役基を １つずつ持つようにするためにしばしば必要とされる、ｐＨや化学Ｈａ的爪で使 用すると、特異性が低い。

チオール特異的官能基としてα−ハロ酸誘導体を使用する複素２官能性架橋剤も 知られている。マレイミド剤よりも反応性は低いが、これらは、容易に加水分解 して対応するα−ヒドロキシ酸誘導体とそれらの互変異性体になる。アルデヒド 互変異性体は本質的に非特異的であり、かつチオール基に対するα−ハロ酸誘導 体の全体としての特異性を減少させる。

公知の複素２官能性架橋剤の低特異性は、反応生成物の複合（ｃｏｍｐｌｅｘ） 混合物を結果的に生じさせる。複合混合物は、チオール反応性基と、抗体又は結 合された化学的存在質の非チオール基との非特異的反応から生じる０例えば、公 知のチオール反応性基は、通常、アミノ基に対して競争反応性を示し、複合重合 生成物を生成するに到る。不要な副反応は、結合された化学的な存在物が飽和環 状窒素化合物（例えば、多環式（ａ＋ａｃｒｏｙｃｌｉｃ）キレート化リガンド に存在するもの）のような第２級アミンを有する場合には、特に不利である。こ れらの混合物は、分離困難であるばかりでなく、複合化合物が生体内（ｉｎ　ｖ ｉν０）使用される場合には絶対的な純度が、最高に重要である。

１１ｒ’Ｌｃを用いるタンパク質の同定という無関係な分野において、システィ ン残基の特異的標識として４−ビニルピリジンを使Ｊ１目゛ることができること が注目されている。（フルマー（Ｆｕｌｌ＊ｅｒ）＋Ｃ，Ｓ、　（［１，（１９ ８４）　、＾ｎａ１．　Ｂｉｏｃｈｅ＋＊、　１４２．３３６−３３９）　。

尤皿二皿皿 本発明によれば、少くとも１つの他の反応性官能基に共有結合で結合された少く とも１つのチオール反応性官能基を有する架橋剤において、該チオール反応性官 能基が、芳香族窒素複素環、又は、その誘導体と共役ルているビニル基を含むこ とを特徴とする架橋剤が提供される。

本発明の１つの好ましい様相において、私達は、少くとも１つの異なる反応性官 能基に共有結合で結合された少（とも１つのチオール反応性官能基を有する複素 官能性（ｈｅＬｅｒｏｆｕｎｃｔｉｏｎｉｌ）架橋剤において、該チオール反応 性官能基が芳香族窒素複素環又はその誘導体と共役しているビニル基を含むこと を特徴とする複素官能性架橋剤を提供するものである。

本発明による化合物において、芳香族窒素複素環は、１個、２個又は３個の窒素 原子を有することができ、それぞれの場合において、前記ビニル基は窒素原子の 少なくとも１つに対して、ｏ　−又はｐ−の位置にある。ｌ又は２個のビニル基 が各芳香族窒素複素環に備わっていてもよい、ビニル基は、対に並んだ２個の芳 香族窒素複素環で置換されていてもよい、ｌもしくは複数の窒素複素環及び／又 は１もしくは複数のビニル基は、それぞれ電子吸引性基で置換されていてもよい 、前記他の官能基は、場合によってはスペーサー結合を介して、芳香族窒素抜に 直接共有結合で結合されるか、あるいは芳香族核とともに対に並んでビニル基に 共有結合で結合されているかのいずれかであってもよい、好ましくは、チオール 反応性官能基は２−ビニルピリジンの誘導体である。

本発明は、特に、架橋剤のチオール反応性官能基に関するものであることが明ら かとなるであろう、架橋剤の残る部分は、通常のタイプのものでよい、１又は複 数の他の官能基は、別の化学的な存在物（ｃｈｅｓｉｃａｌ　ｅｎｔｉｔｙ）と 共有結合を形成できるいずれの基でもよい、好ましい化合物においては、該官能 基は活性化されたエステルである。同様に、２つの官能基はスペーサー結合を介 し。

て共有結合により結合、されていてもよい、このスペーサーの結合は官能基の間 に最良の間隅をもたらすように選択でき、また溶解性及び該結合の柔軟性につき 所望の特性を与えるようにＭＩＲできる。チオール反応性官能基の必須の特徴は 、芳香族性窒素複素環と共役しているビニル基である。

我々は、本発明の複素官能性架橋剤が、従来技術の架橋剤に比し°ζ、スルフィ ドリル基に対して著しく改良された特異１′、１を（Ｔすることを発見した。こ の改良は、結合されるべき化合物の１方又は両方が第２級アミン、特に飽和窒素 環を有する場合に特に顕著である０本発明のある種の化合物、特に下に示ず式（ ２１，Ｃ１１及び（４）の化合物は、また、ずぼらしい速度で、チオールと反応 し、付和本発明による複素２官能性架橋剤の具体例は、式（Ｉａ）〜（Ｉｓ）　 ：の化合物及びこれらの誘導体であって、少くとも１つの窒素？３！素環及び／ 又はビニル基が電気吸引性基によって置換されているものである〔式中、Ｒは他 の官能基であり、場合によってはスペーサー結合を介して結合されていてもよい 、〕。

式（１ａ＞〜（１ｍ）の化合物において、Ｒは、好ましくは活性化されたエステ ルである。

特に有用な架橋剤は式（１ａ）及び（１ｍ）の化合物並びにこれらのｖ、Ｒ体で あって、少くとも１つの窒素複素環及び／又はビニル基が電子吸引性基によって 置換されているものである。

これらの種類のもののうち、特に好ましい化合物群は、式（２）：〔ここで、Ｘ は共有結合又はスペーサー基である；Ｒは官能法である；Ｒ’ｌＲ”及びＲ３は 同一でも異なってもよく、各々水素原子又は電子吸引性基である。ン 式（２）の化合物において、官能基Ｒは、例えば活性化されたエステルでもよい し、例えば−ｃｏｔｃ　（ここでＲ４は、置換フェニル基、例えばｐ−ニトロフ ェニル基のようなニトロフェニル基なとＸがスペーサー基である場合には、Ｘは 、例えばｃｌ−、アルキレン基（例えば、エチレン、プロピレン）（該アルキレ ン基は場合によっては、フェニレンで置換されていてもよい）、ｃｌ、□、アル コキシＣ＋−Ｓアルキレン（例えば、メトキシメチレン、メトキシエチレン）、 フェニレン、又はｃＳ−７シクロアルキルＣ、−、アルキレン（例えば、シクロ ヘキシルメチレン）であってもよい。

Ｒ１、Ｒ１又はＲ３が電子吸引性基であるときは、それは、例工ｔｆ、ハｏケ： ｙ原子又バーＮＯｘ　＊　−ＣＯ，ＩＩ　Ｉ　−ＣＯ２Ｒ’　（ココテ、Ｒ５は Ｃ１−４アルキル基である）　、−ＣＯＲ’　、Ｃｌｌ０　、ＣＮ　、ＣＦｓ　 。

−５０！ＮＲ’Ｒ’　（、：、、：？’、　Ｒ’　４；ｉ：、ＲＳについて定義 されたとおりである）もしくはフェニル基であってもよい。

Ｒ１，Ｒ１又はＲ３がハロゲン原子であるときは、フッ素、塩素、臭素又はヨウ 素の原子である。

式（２）の化合物のうちで特に有用なものは、式（３）：（ここで、Ｘ及びＲは 、前記定義のとおりである）で表されるものである。

Ｒが−Ｃｏ！Ｒ’の基（ここで、Ｒ’は前記定義のとおり）である、この種の化 合物が好ましい。

本発明における特に好ましい化合物は、式（４）：（ここで、ＸはＣトコアｌレ コキシＣＩ−！アＪレキレン、特にメト４−ジメチレン基であり、・Ｒ４はニト ロフェニル基、特にｐ−二トロで表される。

本発明による化合物は、下記の方法によって製造することができる。すなわち、 −Ｃに、式（１ａ）〜（１ｍ）の化合物は、１又は２以上のビニル基が導入され るように設計された反応によって、公知のピリジル、ビピリジル、ピリミジニル 又はトリアジニルの出発物質から製造することができる。そのような合成を、下 記に、特に式（１ｊ）、（ｌｋ）及び（１ｍ）の化合物製造について下に具体的 に説明するが、式（１１の他の化合物の製造にも同様に適用することができる。

すなわち、Ｒが基−Ｘ−ＣＯＲ’テある式（１ｍ）（７）化合物は、式（５）（ ここで、Ｍ′″は陽イオン、例えばナトリウムイオンのような金属イオン、又は ピリジニウムイオンである）の塩又はその反応性誘専体（例えば無水物）を、ア ルコールＲ’　Ｏ１１を用い、必要に応じてジシクロへキシル中ルポジイミドの ようなカップリング剤の存在下にエステル化することによって製造することがで きる。反応は、適当な溶媒、例えばジクロロメタンのようなハロゲン化炭化水素 中、適当な温度、例えば周囲温度で進行させることができる。

式（５）の塩は、式（６） （ここで、＾ＩＫは例えば、メチル基のようなアルキル基である）で表される対 応するアルキルエステルを、例えば、塩基（例、水酸化ナトリウム又は水酸化リ チウムのような無機塩基）を用い、ジクロロメタンのような溶媒中で加水分解し 、必要な場合はさらに通常の方法による陽イオン交換によって所望の陽イオンに 置換することにより製造することができる。

式（６）の中間体は、式（７）： の対応するケトンと、試薬（Ｒ’）　ｓｌ’−ＣＩＩＲ’　（ここで１ｖは、例 えばフェニル岱のような了リール基である）とを用いて、エーテル（例、テトラ ヒドロフランのような環状エーテル）のごとき溶媒中、例えば−１０°〜−１０ ０℃（例、−７８℃）の低温において；あるいは式（７）のケトンと試薬（Ｃ１ ｌｉ）　５ｓｉｃｌＩＲ’Ｍεｃｚとを用い、塩化チオニルの存在下、テトラヒ ドロフランのような溶媒中、例えば０℃のごとき温度で、製造することができる 。

試薬（Ｒ”）　ｉｆ”＝Ｃ１ｌｚ及び（ＣＩ＋３）　ｚｓｉｃｌｌＲ’Ｍｇｃ　 １は、標？ｌＩ、的な手法で製造することができる。

式（７）の中間体ケトンは、式（８）：で表される対応するアルコールを、酸化 剤、例えば二酸化゛７ンカ′ンを用い、ジクロロメタンのような溶媒中、例えば 、室温で酸化することにより製造することができる。

ＨｖＢに、式（８）のアルコールは、適当な２−リチオピリジン（対応する２− ハロピリジンから標準的な手法で製造される）を、式（９）： （ここで、Ｒ１は７５−　Ｘ−Ｃ０ｔＡＩｋ又はその前駆体である）のアルデヒ ドと、ｎ−ブチルリチウムの存在下、低温、例えば−７８℃においてテトラヒド ロフランのような溶媒中で反応させ、必要な場合には、さらに基Ｒ１のいずれか を基−Ｘ−Ｃ（ｈ＾ｌｋに変換することによって製造することができる。

式（９］のアルデヒドは、対応するピリジンメタノールを、例えば二酸化マンガ ンを用い、ジクロロメタンのような溶媒中、例えば室温で、酸化することによっ て製造することができる。この反応の出発物質であるピリジンメタノールは、公 知化合物であるか、あるいは、公知化合物の製造に使用される方法に類似した方 法によって製造することができる。

この一般的な反応系統の具体例においては、メガアルコキシアルキレン基である 式（８）の化合物を数段階で製造することができる。

すなわち、最初に、Ｒ＠が基−（ＣＢ、）−ＯＲ’　（ここでｍは、１〜３の整 数であり、Ｒ，はジメトキシトリチル基のような保１，５ｉ１である）である式 （９）の化合物を、上述した２−リチオピリジンと反応させることにより、基− Ｘ−ＣＯ，Ａ１ｋが−（ＣＬ）　−ＯＲ”　テ！ｔＡされている式（８）の化合 物を得る。標準的な手法とＲ？とは異なる保護基、例えばハロゲン化シリルとイ ミダゾールのような塩基を用い、ジクロロメタンのよ、うな溶媒中でシリル化す る方法によって、２箇ｌソＩＩＪｉＧＲｃ”イ１，７こ１（Ｊｅ＋’ａＬＩＬｆ ；（ここで、ＲＩ＠は、Ｒ９とは異なる保護基、例えばｔ−ブチルジフェニルシ リル基である）が生成する。該式０のの化合物は、次し１で例えば、基Ｒ９がジ メトキシトリチル基でありＲ１６がｔ−ブチルジフェニルシリル基である場合に は、ジクロロメタン中で無水臭化亜鉛を用いることにより、選択的に脱保護され てアルコールａυ： を生成する。

次に、アルコールａＯを、例えば適当なノ１０アルカノエート（ｈａｌｏａｌｋ ａｎｏａｔｅ）、ｎ−ブチルリチウム、テトラヒドロフランのごとき溶媒を用い 、低温、例えば−７８℃でアルキルで通常の手法（例えば、シリル基はテトラヒ ドロフランのような溶媒中でテトラブチＪＩ／アンモニウムフロリドを用いて除 去することができる）を用いて保護５Ｒ’・を除去することにより式（８）で表 される目的の中間体を生成する。

Ｒ＠が基−（Ｃ１１□）、ＯＲ’である式（９）の化合物は、通常の保護方法を 用い、対応するアルコール（すなわち、Ｒ？が−０１１である）を保護すること によって製造することができる。この反応の出発物質であるアルコールは、公知 化合物であるか、又は公知化合物の製造に用いられる方法に類似の方法によって 製造することができるかのいずれかである。

式＋５１．１６）、　＋７）、　＋８）、　＋９）、むの及びａＯの中間体化合 物は新規な化合物であり、本発明の別の様相を構成するものである。

別の方法により、式（１ｊ）及び（１ｋ）の化合物は式１２（８）又は１２１ｂ ｌ　： のピリジン類を出発物質として用いて製造することができる。これらの化合物を 、リチウムジイソプロピルアミドと反応さ・…た後、フェニルセレネニルハロゲ ン化物、例えば塩化物と、テトラ上１：ロフランのような溶媒中、低温、例えば −７８℃で反応させることにより、式１３（ａ）又は１３　ｌｂ）　：のフェニ ルセレニル化中間体を生成する。これらを、次に、水性アルコール中、例えば０ ℃で、過ヨウ素酸ナトリウム／重炭酸ナトリウム混合物で処理することにより式 １４１ａ）又は１４１ｂ）　：の中間体を生成する０次いで、これらの中間体に ある１ＡＩｋを、例えば式（１ｍ）の化合物の製造に関して上述した所望のＲで 置換することができる。

本発明のさらに別の様相により、私達は、本発明の架橋剤、特に、化学的な存在 物に共有接合により結合し、かつチオール特異的官能基をチオール基との反応に 利用できるように残している式（Ｊ）、　＋２１．　（３１又は（４）の化合物 を提供するものである。ごのよ・）な試薬は、必要な時に所望のポリペプチドの チオール基にすぐ結合させられるように保存することができる。

例えば、該架橋剤はチオール反応性官能基を遊離の状態に残したままで、シグナ ル生産性の化学的な存在物又は細胞毒性の化学的な存在物に結合させることがで きる。

このような化合物は、適当な抗体に結合させるために、保存し、使用することが でき、＃断や治療への通用上融通性のある試薬が得られる。これらの化合物は、 チオール反応性官能基がより大きな特異性を有するために分子間反応が減退する 基なので、公知の架橋剤を用いて製造された試薬よりも安定である。

では、本発明を実施例により説明する。

五差！凶」υａΔ岐呪 次に示す中間体の製造及び実施例において、融点は全て電熱（Ｅｌｅｃｔｒｏｔ ｈｅｒｍａｌ）融点測定装置で記録され、修正されていない。

必要な時には、溶媒及び試薬は使用する前に乾燥された。ピリジンとジメチルホ ルムアミド 燥された．テトラヒドロフランは、ナトリウムケタール／ベンゾフェノフケチル から蒸留された．ジクロロメタンは水素化カルシウムから蒸留された．ｔ−ブチ ルクロロジフェニルシラン及び２−ブロモピリジンは、使用前に水素化カルシウ ムで乾燥された。

メチルトリフェニルホスホニウムプロミドは、減圧下で乾燥された．非水性反応 は全て炉で乾燥されたガラス容器を用いて窒素雰囲気下で行なわれた．薄層クロ マトグラフィー（丁．１．ｃ．）は、シリカ上で行われた．温度の単位は全て℃ である．「乾燥された」とは無水ＶＡ酸マグネシウム上での乾燥を意味する。

中間体１ ピリジンジメタツール（１３．９２ｇ）の乾燥ピリジン（２００ｍｊりｆｆｌ拌 溶液に、ジメトキシトリチルクロリド（３３．８Ｂ，）を、ピリジン（１　０　 ０ｍＪりの溶液として３時間かけて滴下し°ζ加えた．反応混合物を、さらに１ 時間攪拌した後、減圧蒸留によヮてＢ縮した．反応混合物をＣｌｌｚＣ　ｌ　ｔ に（４　０　０ｍｊりに＋６　ｊｌ’ｉ’　Ｌ／、飽和ＮａｌｌＣＯ３溶液（４ 　０　０ｍｊりで洗浄した．さらに水相をＣＩｌｔｌ！。

（４　０　０ｍｊりで抽出し、有機相を合わせた後に乾燥、濾過し、溶媒を減圧 蒸留によって除去した．フランシュ（ｆｌａｓｈ）クロマト　゛グラフィーによ る精製（８：２のジエチルエーテル／ヘキサンで溶離）により中間体１（２６． ７７ｇ）を、黄色ガラス（＋ｍ．ｐ．　３　８。

−４０°、Ｔ．１．ｃ．　Ｒｆ値（８：２ジエチルエーテル／ヘキサン）０、２ ０）として得た。

中間体２ 中間体１（２２，０８ｇ）を、乾燥Ｃｌ１ｚ（／！＊　（１５０ｍｆｆ）に溶解 し、室温で攪１↑した。二酸化マンガン（１３０，５ｇ）を一度に加え、反応混 合物を１６時間撹拌した後、セライトに通じて濾過して過剰の二酸化マンガンを 除去した。溶媒を減圧蒸留によって除去してｔＩＩ製の生成物を得た。フラッシ ュクロマトグラフィーによる精製（ｌ：１ジエチルエーテル／ヘキサジで溶離） によって黄色ガラス、ｍ、ｐ、　４３°−４５°、Ｔ、１．ｃ、　Ｒｆ値（１： 　１ジエチルエーテル／ヘキサン）０．３５として中間体２　（１６，９２ｇ） を得た。

土皿体ユ ２−ブロモピリジン（１１，０６ｇ）の乾燥テトラヒドロフラン（１５０ｍ／） 溶液で１、−７８℃である攪拌されたものに、温度が一７０°を超えて上昇しな いようにしなからｎ−ブチルリチウム（１，６Ｍヘキサン溶液４３．７５ｍ１） を滴下して加えた。反応混合物をさらに１５分間攪拌した。得られた深赤色溶液 に、中間体２（２９，７５ｇ）をテトラヒドロフラン（５０ｍ７りの溶液として 滴下して加えた。生成した紫色の溶液を一７８°で１５分間攪拌した後、徐々に 室温まで温まらせた。

反応混合物を飽和Ｎａ１１ＣＯｉｔＯ液（２００ｍｊりに注ぎ込み、ＣＩ＋、（ Ｊ。

（２００ｍｆｆ）で２回抽出した。有機相を合わせた後、乾燥、濾過し、溶媒を 減圧蒸留によって除去した。フラッシュクロマトグラフィーによる精製（ジエチ ルエーテルで溶離）により、黄色ガム、Ｔ、１．ｃ、　Ｒｆ値（ジエチルエーテ ル）０．２２、として中間体３（３１，２２ｇ）を得た。

中間体３（１６，５４ｇ）の乾燥ジメチルホルムアミド（２００ｍｊり％ｉ液で 、攪拌されているものに、イミダゾール（８，７１ｇ）ヲ一度に加工、次に、ｔ −ブチルクロロジフェニルシラン（１４，０２ｇ）を、これも一度に加えた０反 応混合物を室温で７２時間攪拌した後、溶媒を減圧蒸留によって除去した。残留 物をジエチルエーテル（２００ｍｌ）に溶解し、飽和Ｎａ１ｌＣＯｓ溶液（２０ ０ｍｊりで洗浄した。さらに水性相をジエチルエーテル（２００ｍＮ）で抽出し 、有機相を合わせた後に乾燥し、溶媒を減圧蒸留によって除去した。１：１ジエ チルエーテル／ヘキサンで？８Ｆｉｌｌするフラッシュクロマトグラフィーによ る精製により、白色ガラス、ｓ＋、　ｐ。

５０°−５２°、Ｔ、１．ｃ、　Ｒｆ値（１：１ジエチルエーテル／ヘキサン） ０．２２として中間体４（２１，１１ｇ）を得た。

土皿止工 中間体４（１０，０ｇ）（Ｄ乾燥ＣＩＩｚＣＩ！ｚ　（２００ｍＮ）溶液テ攪拌 されているものに、無水臭化亜鉛（１４，８６ｇ）を一度で加えた０反応混合物 を１５分間攪拌して、得られた赤色溶液を飽和ＮａＨＣＯ，溶液（２００ｍＩり 中に注ぎ込んだ、有機相が分離し、さらに水性相をＣＨｔＣｌｚ　（２００ｍＡ りで抽出した。有機相を合わせた後に乾燥、濾過し、溶媒を減圧蒸留によって除 去した。ジエチルエーテルで溶離するフラッシュクロマトグラフィーによる精製 により、黄色油状物、Ｔ、１．ｃ、　Ｒｆ値（ジエチルエーテル）０．１（ｉと して中間体５（２，２７ｇ）を得た。

中間体６ 中間体５（２，２７ｇ）の乾燥テトラヒドロフラン（５０＋ｎ６）溶液で、−７ ８″′−１度で攪拌されているものに、ｎ−ブチルリチウム（１，６Ｍへ十サン 溶液３．７５ｍ＃）を滴下して加えた０反応混合物を、−７８°でさらに１５分 間攪拌した。得られた深赤溶液をカニユーレを介してブロモエチルアセテート（ ２，７５ｇ）の温度７８°であるテトラヒドロフラン（２５ｍｌ）溶液に加えた ０反応混合物を一７８°で３０分間ｉ拌した後、放置して室温まで温めさせ、さ らに１８時間撹拌した０反応混合物を飽和Ｎａ１ｌＣ０３溶液（１５０ｍｊ２） 中に注ぎ込み、ＣＩＩｔＣｊ！ｔ　（１５０ｍＮ）で２回抽出した１合わせたを 機相を乾燥、濾過し、溶媒を減圧蒸留によって除去したところ、粗製の生成物を 得た。ジエチルエーテルで溶離するフラッシュクロマトグラフィーによる精製に より、黄色油状物、Ｔ、１．ｃ、　Ｒｆ　（ｌｉ（ジエチルエーテル）０．３０ として中間体６（１，９２ｇ）を得た。

生胛生１ 中間体６（１，９２ｇ）を乾燥テトラヒドロフラン（２０ｍｌりに溶解させ、こ の溶液にテトラブチルアンモニウムフルオリド（５％の水を含むテトラヒドロフ ランを溶媒とするＩＭｍ液３．６５ｒｒ１）を加えた０反応混合物を室温で１６ 時間攪拌した後、飽和Ｎａ１ｌＣＯｓ溶液（５０ｍｌり中に注ぎ込み、Ｃ１１ｚ Ｃｊ！ｚ　（５０ｍｌ’）　テ２回抽出した０合わせた有機相を乾燥、濾過し溶 媒を減圧蒸留によって除去した。フラッシュクロマトグラフィーによる精製（ｎ １゛酸エチルで溶離）により、黄色油状物、Ｔ、１．ｃ、　Ｒｆ値（酢酸エチ１ ｂ）０．２３、として中間体？（０，８６ｇ）を得た。

生皿生工 中間体７（０，８６ｇ）の乾燥Ｃｌ１ＩＣＪ　ｚ　（５０ｍ　Ｊ　）　？ｎｎ液 面攪拌れているものに、二酸化マンガン（７，８３ｇ）を一度に加え、反応混合 物を室温で１６時間攪拌した０次に、反応混合物をセライトで濾過して、過剰の 二酸化マンガンを除去し、減圧蒸留によって溶媒を除去した。０１１□ＣＺＩ／ ｉ−プロパツールで溶離するフラッシュクロマトグラフィーによる精製で、油状 物、Ｔ、１．ｃ、　Ｒｆ値（１９：　Ｉ　ＣＩＩｔＣｌｚ　／　ｉ−プロパツー ル）０．３２、として中間体８（０，８６ｇ）を得た。

裏施爽上 メチルトリフェニルホスホニウムプロミド（０，３３７ｇ）の乾燥テトラヒドロ フラン（１５ｍ／）を媒体とし、攪拌されている０℃の懸濁液に、ｎ−ブチルリ チウム（１，６Ｍヘキサン溶液０．５９ｍ　ｊ！　）を滴下して加えた０反応混 合物を室温まで温まらせ、さらに１時間攪拌した。得られた黄色溶液をカニユー レを介して中間体８（０，２７ｇ）のテトラヒドロフラン（１５ｍｆｆ）溶液（ この中間体８の溶液は、添加前に、４人のモレキュラーシーブを通して攪拌され ている）に−７８°で滴下して加えた。

反応混合物を室温まで温まらせ、３時間撹拌した。得られた白色懸濁液をセライ トで濾過し、溶媒を減圧蒸留によって除去した。

１９：１のＣｌ１ｚＣ１ｔ　／　１−ブタノールで溶離するラジアル（ｒａｄｉ ａｌ）クロマトグラフィーによる精製により、無色油状物、Ｔ、１．ｃ、　Ｒｆ 値（１９：ＩＣＩＩ□１！、、・／１−ブタノール）０．１３、として実施°　 例１の化合物を得た。

大川■１ この実施例においては、種々の反応及び多くの化合物が反応系統Ａにおけるもの である。

・１−ピリジンジメタツールの−鯵　保１ピリジンジメタツール（７ｇ）の乾燥 ピリジン（１００ｍｌ）溶液で撹拌されているものに不活性雰囲気上室温でジメ トキシトリメチルクロリド（１６，９４ｇ　）を、ピリジン（５０ｍ１）の溶液 として、２時間かけて滴下して加えた。

次に、その反応混合物をさらに１時間攪拌し、減圧蒸留により濃縮した後、ＣＩ ＩｚＣＩｇ　（２００ｍ　ｌ　）　ニ溶解し、飽和ＮａＨＣＯコ溶液（２００ｍ ｊりで洗浄した。水性相を、さらにＣ１１ｚＣＩｚ　（２００ｍ　ｌ　）で抽出 し、合わせた有機相を乾燥、濾過し、溶媒を減圧蒸留により除去した。精製を、 中圧力ラムクロマトグラフィー（８：２のｐｔｚｏ／ヘキサンで溶＾Ｉｔ）２′ ′行い、黄色固体として生成物１　１１．５１ｇを得た。

融点３８°−４ｏ。

ＮＭＲδ（ＣＤＣＩ　、） ７．３０（４１１，ｄ、　８．４１１２．　ＭｅＯＣＣＩＩＣＣＩＩＣｆｉ）　 。

６．７３（４１１，ｄ、　８．４１１ｚ、　＋１ｅＯｃｃＨｃｊｊｃｃ旦Ｃ１１ ）　。

６．６０−７．７３（８１１，＊、芳香族性）。

４．５５（２Ｈ，ｓ、ＣｕｔＩＯｌｌ）　。

４．２７（２１１，ｓ、ＣＩＩｚＯＣＡｒｘ）及び３．６３（６１１，ｓ、ＯＭ ｅ）。

反長１ニニＸＦ’−Ｊ　ｆされたアルコールのアルキルｕ１ぴ朋ｆｌ ま底惣工 Ｎａ１ｌ（０，８４ｇ　）の乾燥ＤＭＦ　（５０ｍｊりを媒体とし撹拌されてい る懸濁液に、窒素雰囲気下、室温で、アルコール１（７，３１ｇ）を、ＤＭＦ　 （５０ｍｆ）ｔａ液として滴下して加えた。　Ｉ＋□の放出が起こり、反応混合 物をさらに１時間ｉ’ｌＬＩ↑した。こうして形成されたアルコキシドをカニユ ーレを介してメチルブロモアセテート（３，９８ｇ）の０℃ＤＩＩＰ（５０ｍｊ り溶液に滴下して加えた後、さらに１時間１毘Ｉ↑した０次に、反応混合物を飽 和Ｎａ１ｉＣＯｚ溶液（１５０ｍｊり中に注ぎ込み、生成物をエーテル（２００ ｍｉりで２回抽出した０合わせた有機相を乾燥（ＭｇＳＯ４）　Ｌ、濾過した。

溶媒を、減圧蒸留によって除去して粗生成物を得た。この粗生成物を、精製しな いで、３：２のＣｌＩＣｌ３　／メタノール（２５０ｍｌりと水（２５ｍｌ）と を合わせてなる溶媒に溶解し、過剰のｐ−トルエンスルボン酸を加えた。得られ た深赤色溶液をさらに１時間ｍ１１Ｎシた後、飽和Ｎｉ１ｌＣＯユ熔液（２５０ ｍｅ）中に注ぎ込み、Ｃｌ１ｚＣｈ　（２５０ｍＰ、）で２回抽出した０合わ・ 旺た有機相を乾燥、濾過し、溶媒を減圧蒸留によって除去した。ｉｎ生成物を中 圧力ラｌ、りＵ７トグラフイー（９：　Ｉ　Ｃ１ｈＣｂ　／メタノールでｆ′ｊ ｊ削）によって精製すると、黄色油状物としてアルコール■１．７８　ｇを得た 。

Ｒｆ値（９：　Ｉ　Ｃｌ１ｚＣ１ｚ　／メタノール）０．２９ＮｔｌＲδ（ＣＤ ＣＩ　ｓ） ７．６５（ｑ、　７．２１１ｚ、芳香族性）。

７．２９（Ｌ、　６．６１１ｚ、芳香族性）。

４．７０（４１１，ｓ、　ＣＩＩｘＯ）４．１９（２１１，ｓ、　ＣＩＩｚＯＣ ＝０）。

特表平１−５０２１１８　（９） ４．２０−４．４５（Ｉｌｌ、　ｂｒｓ、　０１ｌ）及び３．７３（３１１，ｓ 、Ｏ，Ｍｅ）。

マススペクトル（Ｍ’　＋１）　２１２．０９２２８（Ｃ１１１１１１４Ｎ０４ は２１２．０９２２８となる）応３−アルコール■のアルデヒド■への酸化アル コールＩＩ（０，５４ｇ）の乾燥ＣＨｘＣｂ　（１０ｍ　ｌ　）溶液の攪拌され ているものに、Ｍｎ０ｔ　（６，５３ｇ）を一度に加えた０反応混合物を室温で 攪拌し、その反応の次に目Ｃを行った＊　ｔｌｃがアルコールの不存在を示した 時、反応混合物を濾過しく必要ならば繰り返して）過剰のＭｏｏｔを除去した。

溶媒は減圧蒸留によって除去した。８；２エーテル／ヘキサンで溶離する中圧力 ラムクロマトグラフィーによって精製した。アルデヒドｍｏ、３４ｇが油状物と して分離された。

Ｒ（（直（８：２エーテＪし／ヘキサン）０．３５ＮＭＲδ（ＣＤＣｌｚ） ９．９３（ＩＩｌ、　ｓ、　ＣＩＩ＝０）　。

７．１０−８．００（３１１，ｍ、芳香族性）。

４．７２（２１１，ｓ、　Ｃ１ｌ□０）。

４．１８（２１１，ｓ、　０ＣＩｂＣＪ）及び３．６３（３１１，ｓ、　ＯＭｅ ） マススペクトル（Ｍ”　＋１）　２１０．０７８８（Ｃｌｏ１１＋□ＮＯ，は２ １０．７６６３となる）「応４−アルデヒド■のライフティグ「応ＰｈｓＰＭｅ Ｂｒ　（１，４３ｇ　：　ｌ’ｈ＝フェール基）の乾燥ＴＩＩＦ（１０ｍｊ２） 懸濁液で攪拌されているものに、窒素雰囲気下、室温でｎ−ブチルリチウム（１ ，５５Ｍヘキサン溶液２．５８ｍｊりを滴下して加え、赤色溶液を得た。さらに １５分間攪拌後、反応混合物を一７８°で５分間面１↑し、次に室温まで温まら せ、１１□０　（２０ｍｊり中に注ぎ込み、エーテル（２０ｍｆｆｉ）で２回抽 出した１合わせた有機相を乾燥しくＭｇ５ＯＪ、濾過し、溶媒を減圧蒸留によっ て除去した。ラディアルクロマトマトグラフィ−（１：１エーテル／ヘキサンで 溶離）によって精製し、ビニルピリジン■０、５５　ｇを得た。

Ｒｆ（直（１：　１エーテル／ヘギサ：／）０．１９ＮＭＲδ（ＣＤＣＩｉ） ６．８３−７．６３（３１１，ｖａ、芳香族性）。

５．２１（１１１ｌ　ｄｄ、１．２．　ｌ１ｌｌｚ、ＣＩｌ　＝Ｃｌ１ｚ）−４ ，４８（２夏ｌ＋５ｒｃｎｆｆｉｏ）。

３．９５（２１１，ｓ、　０Ｃ１ｌｚ＝Ｏ）及び３．４７（３１１，ｓ、　ＯＭ ｅ） マススペクトルＣＭ’　＋　１　）　２０８．０９７４（Ｃ＋＋ｌＩ＋、Ｎｏｗ は２０８．０９７４　となる）応５−ビニルピリジン■の脱保冨　びエステル化 ビニルピリジンＩＶ（０，０６ｇ）をＣＦＩｔＣｌｔを加えたメタノール（３ｍ ｊり　−ＩＩ□Ｏ（１ｍｊり中に溶解した溶液に、攪拌しながら、Ｌｉ０ｎ（０ ，０１２ｇ　）を１度に加えた０反応混合物を室温で攪拌し、その反応の次にｔ ｌｃを行った。出発物質の全てが反応した時、反応混合物を減圧下に蒸留してｔ ｔｉ　ｋｍし、ピリジンに溶解し、次にピリジニウムダウエックス（Ｄｏｗｅｘ ）カラム（２０位過剰）を流下させた。減圧蒸留によって溶媒を除去して、脱保 護された酸をピリジニウム塩として得た。粗生成物を乾燥Ｃ１ｌ、Ｃ１□（５ｍ ｆ）に溶解し、ｐ−ニトロフェノール（０，０６３ｇ）を加えた。溶液に、撹拌 しながら室温で、ジシクロへキシルシクロジイミ１ご（０，６２ｇ）を、Ｃｌ１ ｚＣＩｚ　（３ｍ　Ｉｔ　）溶液として加えた。

１０分後、沈澱が生成した０反応混合物をさらに３０分間攪拌した０反応混合物 を濾過し、減圧蓋留によって溶媒を除去した。ラディアル（ｒａ＋＋１ａｌ）ク ロマトグラフィー（２，５％エーテル／Ｃ１１□Ｃ１□で溶＾１１）によって精 製し、本発明の−・テロ２官能性架橋剤■を、定量的に得た。

Ｒｆ（２，５％工　−１し／ＣＩＩ＊Ｃ１ｚ）　ｏ、２　５ＮＭＲδ（ＣＤＣＩ ３） ７．２７−８．４７（７１１，＋ｅ、芳香族性）。

４．８５（２１１，ｓ、　０ＣＩｌｚ）及び４．５１　（２１１，ｓ、０ＣＩＩ ｚＣ□Ｏ）マススペクトル（Ｍ　＋　＋１　）　３１５．０９８０９（Ｃｌｉｌ ｌ＋５ＮｔＯｓは３１５．０９８０８となる）国際調査報告 国際調査報告

Claims (15)

【特許請求の範囲】
1. １．少くとも１個の他の反応性官能基に共有結合で結合された少くとも１個のチ オール反応性官能基を有する架橋剤において、該チオール反応性官能基が芳香族 窒素複素環又はその誘導休と共役しているビニル基を含むことを特徴とする架橋 剤。
2. ２．請求の範囲第１項記載の架橋剤であって、チオール反応性官能基が、少くと も１個の異なる反応性官能基に共有結合で結合されているもの。
3. ３．式（１ａ）〜（１ｍ） ▲数式、化学式、表等があります▼（１ａ）▲数式、化学式、表等があります▼ （１ｂ）▲数式、化学式、表等があります▼（１ｃ）▲数式、化学式、表等があ ります▼（１ｄ）▲数式、化学式、表等があります▼（１ｅ）▲数式、化学式、 表等があります▼（１ｆ）▲数式、化学式、表等があります▼（１ｇ）▲数式、 化学式、表等があります▼（１ｈ）▲数式、化学式、表等があります▼（１ｉ） ▲数式、化学式、表等があります▼（１ｊ）▲数式、化学式、表等があります▼ （１ｋ）▲数式、化学式、表等があります▼（１ｌ）又は▲数式、化学式、表等 があります▼（１ｍ）の化合物及びこれらの誘導体であって、少くとも１つの窒 素複素環及び／又はビニル基が電子吸引性基で置換されているもの〔式中、Ｒは 官能基であり、場合によってはスペーサー結合を介して結合されていてもよい〕 。
4. ４．式（１ａ）又は（１ｍ） ▲数式、化学式、表等があります▼（１ａ）▲数式、化学式、表等があります▼ （１ｍ）の化合物及びこれらの誘導体であって、少くとも１つの窒素複素環及び ／又はビニル基が電子吸引性基で置換されているもの〔式中、Ｒは官能基であり 、場合によってはスペーサー結合を介して結合されている〕。
5. ５．請求の範囲第３項又は第４項に記載の化合物であって、Ｒが活性化されたエ ステルであるもの。
6. ６．式（２）： ▲数式、化学式、表等があります▼〔ここで、Ｘは共有結合又はスペーサー基； Ｒは官能基；及びＲ１，Ｒ２，及びＲ２は、同一でも異なってもよく、各々、ハ ロゲン原子又は電子吸引性基である〕の化合物。
7. ７．請求の範囲第６項記載の化合物であって、Ｘが、共有結合、又はＣ１−６ア ルキレン基（場合によりフェニレン基で置換されていてもよい）、Ｃ１−３アル コキシＣ１−３アルキレン基、フェニレン基もしくはＣ５−７シクロアルキルＣ １−３アルキレン基であるもの。
8. ８．請求の範囲第６項又は第７項に記載の化合物であって、Ｒ１，Ｒ２及びＲ３ が各々水素原子又は−ＮＯ２，−ＣＯ２Ｈ，ＣＯ２Ｒ５（ここで、Ｒ５はＣ１− ４アルキル基）、−ＣＯＲ５，−ＣＨ０，−ＣＮ，−ＣＦ３，−ＳＯ２ＮＲ５Ｒ ６（ここでＲ６はＲ５に対して定義されたとおりである）もしくはフェニル基で あるもの。
9. ９．請求の範囲第６〜８項のいずれか１項に記載の化合物であって、Ｒが基−Ｃ Ｏ２Ｒ４（ここで、Ｒ４はアリール基又はイミドである）であるもの。
10. １０．式（３）： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔ここで、Ｘは共有結合又はスペーサー基であり、Ｒは官能基である〕 の化合物。
11. １１．請求の範囲第１０項記載の化合物であって、Ｒが基−ＣＯ２Ｒ４（ここで Ｒ４はアリール基又はイミド基である）であるもの。
12. １２．式（４）： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔ここで、ＸはＣ１−３アルコキシＣＩ−３アルキレン、基であり、Ｒ４はニト ロフエニル基又は▲数式、化学式、表等があります▼の基である〕の化合物。
13. １３．式： ▲数式、化学式、表等があります▼
14. １４．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ の化合物。
15. １５．請求の範囲第１項記載の化合物であって、前記の反応性官能基が、化学物 質に共有結合により結合されており、かつチオール特異性官能基をチオールとの 反応に利用できる状態で残しているもの。