JPH01290627A

JPH01290627A - 抗腫瘍剤

Info

Publication number: JPH01290627A
Application number: JP11811488A
Authority: JP
Inventors: Chikao Nishino; 親生西野; Koji Kobayashi; 孝次小林
Original assignee: Mitsubishi Kasei Corp
Current assignee: Mitsubishi Kasei Corp
Priority date: 1988-05-17
Filing date: 1988-05-17
Publication date: 1989-11-22

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は抗腫瘍剤に間する。

（発明の目的）本発明者等は種々の植物中に含まれる生理活性物質を探
索し、それらの薬効について検討中のところ、傘形右目
（Ｕｍｂｅｌｌｉｆｌｏｒａｅ）に属するミズキ科（０
」ｌまｕ）植物であるミズキ（Ｃｏｒｎｕｓ　ｃｏｎｔ
ｒｏ−ｖｅｒｓａ　ＬＬＬｉＬ、）の葉中に含有される
、ある種のベンゾフラノン化合物及びその誘導体が優れ
た抗腫瘍作用を示すことを確認し本発明を達成した。即
ち本発明の要旨は、３ａ−ヒドロキシ−３，３ａ、？、
７ａ−テトラヒドロ−６（２Ｈ）−ベンゾフラノン又は
３ａ−アセトキシ−３、３ａ　、　？　、　７ａ−テト
ラヒドロ−６（２ｆｔ）−ベンゾフラノンを有効成分と
する抗腫瘍剤に存する。

（目的を達成するための手段）本発明の詳細な説明するに、本発明の抗Ｉｔｌ瘍剤の有
効成分である３ａ−ヒドロキシ−３，３ａ、７．７ａ−
テトラヒドロ−６（２■）−ベンゾフラノン（化合物ｌ
という）及び３ａ−アセトキシ−３、３ａ　、　？　、
　７ａ−テトラヒドロ−６（２１１）−ベンゾフラノン
（化合物２という）は、夫々次式（１）及び（２）に示
す構造で示され、何れも例えばＰｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓ
ｔｒｙ、２３巻、１１号、２６１７〜２１６９頁に記載
されている既知の物質である。

化合１ｐ１１１：化合物２：これ等の化合物は、夫々例えば次のようにして得ること
ができる。即ち（１）式で示される化合物ｌは、例えば
ミズキ（Ｃｏｒｎｕｓ　ｃｏｎｔｒｏｖｅｒｓａ　Ｌｅ
ｉＬＬ、）の葉を適当な溶媒で抽出処理し、さらにカラ
ムクロマトグラフィーにより精製することによって単離
することができる。また、（２）式で示される化合物２
は、化合物ｌをピリジン溶媒中において、無水酢酸を用
いてアセチル化することによフて得ることができる。

化合物ｌ及び化合物２は、ヒーラ（ＨｅＬａ）細胞（ヒ
ト子宮頚癌＃Ａ織から分離された細胞株）及びマウス白
血病環！ＩＩＩ胞のようなｉｔｓ細胞株に対し優れた増
殖阻止作用を示し、抗ＩＩ瘍剤として有用である。

抗腫瘍剤として用いる場合、静脈内注射、皮下注射、経
口カプセル等の方法で投与され、投与量は成人に対し、
水溶剤（注射）ではｌ−１００Ｂ／　ｋｇ体重、経口剤
では５〜５００　ｍｇ／ｋｇ体重の範囲である。注射、
点滴用製剤とするときは、単位投与量アンプルあるいは
添加防腐剤と共に多投呼量容器中に提供される。この製
剤は、懸濁液、溶液、油性又は水性ビヒクル中の乳液の
ような形態であってよく、グルコース、ゼラチンのよう
な懸濁液、レシチン、リノール酸のような安定化剤、ア
ーモンド油、ココナツト油のような非水性ビヒクル、ｐ
−ヒドロキシ安息香酸メチルのような防腐剤を含んでい
てもよい。

本発明の抗！！瘍剤を経口投与製剤とするには、カプセ
ルのような腸管からの吸収に好適な形態で提供されるこ
とが好ましい。カプセルでは、ゼラチンのような結合剤
、乳糖のような賦形剤、ステアリン酸マグネシウムのよ
うな安定剤、馬鈴薯澱粉のような崩壊剤を含有させるこ
とができる。また、シクロデキストリンのような包接剤
による包接化合物とし、更に該包接化合物をアクリル酸
メチル・メタアクリル酸共重合体のような腸溶性皮膜形
成物質を用いて皮膜を施すことができる。製剤化の方法
は、注射、点滴用製剤、経口投与用製剤のいずれの場合
においても常法でよい。

（実施例）以下、本発明を実施例及び参考例を挙げて更に詳細に説
明するが、本発明は、その要旨を超えない限り以下の実
施例に限定されるものではない。

実施例１［ヒーラ細胞増殖抑制試験］後記の製造例によって得られた表１に示す試料化１合物
（化合物ｌ及び化合物２）を、ジメチルスルホキシドに
溶解し、これを５％仔修生清を加えたイーグルＭＥＭ培
地で所定濃度に希釈し、９６穴のマイクロプレートに１
００μｍ７穴で分注した。

これに、ＩＸ　１０５個／■１にｔｌｌｉｉ！ｔ、たヒ
ト子宮頚癌！ａ織由来のヒーラ細胞（ＨｅＬａ　Ｓ３）
の浮遊液を１００μｌ／穴加えた。これを炭酸ガス雰囲
気下、３７℃で４日間培養した後ゲンチアナバイオレッ
ト染色液でマイクロプレートの底に付着増殖したヒーラ
細胞を染色した。水で過剰の染色液を洗浄後、染色され
たヒーラ細胞の色素をエタノール（１００μｍ／穴）で
溶出し、その濃度を分光光度計で測定した。

細胞数と染色された色素の量は比例するので、上記で測
定した試料の各濃度に対する色素濃度をプロットし、こ
のグラフから対＠（試料化合物が無い場合）におけるヒ
ーラ細胞の数（１００％とする）の５０％に相当する試
料化合物の濃度をＩＣ５０として求めた。その結果を表
１に示した。

表　　ｌ実施例２［マウス白血病培養細胞に対する細胞毒性試験］ローズ
ウェルバーク　メモリアルインステイチュート培地（Ｒ
ｏｓｅｗｅｌｌ　Ｐａｒｋ　Ｍｅｍｏｒｉａｌ　Ｉｎｓ
ｔｉｔｕｔｅＭｅｄｉｕｍ）１６４０に、加熱失活した
牛胎児血清を１０％濃度で、またペニシリンＧをｔｏｏ
　ｕｎｉｔｓ／ｍｌ濃度、ストレプトマイシンをｌＯＯ
μｇ／ｍｌ濃度で、夫々添加したものを細胞の培！Ｉ液
として用いた。

９６大のマイクロプレートに、各種の濃度の後記の製造
例で得られた表２に示す試料化合物（化合物ｌ及び化合
物２）を含む上記の培地を１００μｍ／穴で分注した。

これにマウス白血病培！Ｉ細胞Ｐ−３８８を含む上記の
培養液（ＩＸ　ｔｏ！ｉ　ｃｅｌｌ／　ｍｌ）ｔｏｏ　
ｍｌ／穴を加え、炭酸ガスのインキュベーター中にて３
７℃で３．５日間培養した。

抗ｌｌ瘍活性は、ＩＣ５ｏ［１１胞増殖の５０％を阻害
するのに必要な検体の濃度（μ８／１）で表す］の値に
より判定した。１ｃｓａ値は、細胞数を光学顕微鏡下で
計数し、各濃度に対する細胞数をプロットし、このグラ
フから対照（試料化合物が無い場合）におけるＰ−３８
８細胞の数（１００％とする）の５０％に相当する試料
化合物の濃度をＩＣ５Ｇとして求めた。

その結果、マウス白血病培！！細胞Ｐ−３８８に対する
試料化合物のＩＣ５ｎ値は表２の通りであった。

表　　２参考例１３ａ−ヒドロキシ−３，３ａ、７．７ａ−テトラヒドロ
−６（２１１）・ベンゾフラノン（化合物ｌ）の単離：
傘形孔口（υ璽ｂｅｌｌｉｆｌｏｒａｅ）に属するミズ
キ科（ら」ｌま■）の植物であるミズキ（Ｃｏｒｎｕｓ
　ｃｏｎｔｒｏ−ｖｅｒｓａ　ｔｌｉｌＬｉｌ−＞の新
鮮な葉４．２５　ｋｇ（ｔＷ　ｉ　１１　）ヲメタノー
ル１８，０００　＋ｉｌ中に浸漬し、室温で１４日間放
潰して抽出処理し、抽出液を減圧上濃縮して９０．７　
ｇの残渣を得た。

この残渣をシリカゲル（“シリカゲル６０″メルク社１
１）９００ｇを充填したカラム５本を用い、各種組成の
ベンゼン−酢酸エチル液（１０：Ｏ１６：４．４：６及
び０：１０）各２０００ｓ　Ｉを溶出液として、この順
序で逐次溶出させた後、引続いてカラムに各種組成の酢
酸エチル−メタノール液（９５：５．９：ｌ、８：２及
び６：４）各２００Ｏｎ＋　１を溶出液として、この順
序で逐次溶出させた。

上記の溶出液のうち、活性成分を含む酢酸エチル−メタ
ノール（９５：５）及び（９：Ｉ）溶出液を夫々採取し
、減圧上濃縮して夫々残渣１．５９　ｇ及び２．８３　
ｇを得た。上記の残渣を一緒にし、シリカゲル３００８
を充填したカラムに吸着させ、酢酸エチルを溶出液とし
て溶出させ、溶出液を３０１宛分取し、活性画分（最初
から２５〜３６の溶出画分）２．６８　ｇを得た。

上記の活性画分を、分取高速液体カラムクロマトグラフ
ィー［野村化学社＠Ｊ　Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ　３０−３
，１０Ｘ　２５０　＋ｕａ；ｌ出液酢酸エチル；流速３
．５ｍｌ／　ａｋｉｎ；検出器紫外線２５２　ｒｖｌに
より精製し、保持時間１０分の画分より３ａ−ヒドロキ
シ−３＋　３　ａ　＋　７　＋　７　ａ−テトラヒドロ
−６（２Ｈ）−ベンゾフラノン９６３　ｍｇを得た。

本物質の比旋光度、Ｕ■吸収スペクトル（ＵＶ）、ＩＲ
吸収スペクトル（ＩＲ）、ＩＨＮＭＲ１＋３ＣＮＭＲ及
びマススペクトル（ＭＳ）の測定結果は次の通りであっ
た。

［（Ｘ　］２５−１．５３＠（ｃ　Ｏ，５４，ＭｅＯＨ
）ＵＶ（ＭｅＯＨ）λｓｅｘ　ｒｖ（ｌｏｇε）＝２２
４（３，６２）ＩＲ（ｎｅａｔ）シｍｓ、１ｃｍ−’：
３４００，１６７０．１０７０．７８５ＩＨＮＭＲ（Ｃ
ＤＣｌ２．２５０　ＭＨ２）δ２．３０（２Ｈ，ＩＩ、
Ｈ２−３）＋２．５６（ＩＮ　、ｄｄ、　＋６．９，５
．３．　Ｈ−７）　、　２．８１（Ｉ）Ｉ　、ｄｄ　、
　＋６．９，４．６゜Ｈ−７）　、３．４２（１８、ｂ
ｒｓ、ＯＨ）　、４．００（２Ｈ、ｍ、　Ｈ２−２）　
、　４．２３（ＩＨ。

ｄｄｄ、５．３，４．６．１．５．Ｈ−７ａ）、５．９
８（ＩＨ，ｄ、　＋０．１．Ｈ−５）。

６．７７（１８，ｄｄ、＋０．１，１．５．Ｈ−４）１
３ｃ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ２．６２．５　ＭＨ２）８３９
．４４（Ｃ−３）、３９．９１（Ｃ−７）、６６．０１
（Ｃ−２）、７５．２０（Ｃ−３ａ）、８１．２９（Ｃ
−７ａ）。

１２８．２９（Ｃ−５）、１４８．１９（Ｃ−４）、１
９６．９５（Ｃ−６）ＭＳ　　ｖｓ／ｚ　　１５４（Ｃ
ｓＨ＋ｎ０３．Ｍ會、５）、＋３６（Ｍ會−８２０，５
）。

＋１２（Ｍ童−ＣＨ２ＣＯ，４４）、＋１０（Ｍ争−Ｃ
２Ｈ４０，ｔｏｏ）参考例２３ａ−アセトキシ−３，３ａ、７．７ａ−テトラヒドロ
−６（２Ｉｉ）−ベンゾフラノン（化合物２）の製造：
参考例１で単離した３ａ−ヒドロキシ−３，３ａ、７．
７ａ−テトラヒドロ−６（２１１）−ベンゾフラノン（
化合物１）の５０■８を０．２１のピリジンに溶解し、
この溶液に０℃で無水酢酸５０　ｍｇを添加し室温で１
２時間放置して反応させた０反応物に水５１を加え、次
いで１０−１のクロロホルムを加えて抽出処理し、クロ
ロホルム層を分取して希塩酸、飽和重炭酸ソーダ次いで
飽和食塩水で逐次洗浄した。得られたクロロホルム液を
硫酸マグネシウムで乾燥して減圧下濃縮し、得られた残
渣を分取薄層クロマトグラフィー（２０Ｘ２０　ｃｒａ
、厚さ１　ｍｍ）にかけ、ヘキサン−酢酸エチル（１：
Ｉ）により展開して４８　Ｂの化合物２を油状物として
得た。

本物質の比旋光度、Ｕｖ吸収スペクトル（ＵＶ）、ＩＲ
吸収スペクトル（ＩＲ）、ＩＨＮＭＲ，＋３ｃ　ＮＭＲ
及びマススペクトル（ＭＳ）の測定結果は次の通りであ
った。

［α］２ｓ−０．６４°（ｃ　２．９６．ＭｅＯＨ）ｕ
ｖ（ＭｅｏＨ）λｓｅｘ　　ｎｗ＋（Ｉｏｇε）：２２
３（３，７６）ＩＲ（ｎｅａｔ）ｌ／　ｍ、ａｍ−’：
１７４０，１６９０．１０７５，７８５ＩＮ　ＮＭＲ（
ＣＤＣＩｓ、９０　ＭＨｚ）６２．０９（３）１．ｓ、
０ＣＯＣＨａ）。

２．４８（２Ｈ、ｔ、？、１　、　Ｈ２−３）　、２．
６７（ＩＨ、ｄｄ　、　ＩＴ、　１．３．７．Ｈ−７）
　。

２．９７（ＩＨ，ｄｄ、１７．ｌ、４．６．Ｌ？）、３
．９４（２Ｈ，ｔ、？、１．Ｈ２−２）。

４−３７　（Ｉ　Ｈ、ｄ　ｄ　ｄ　、４−６．３−７　
＋　１．７　、Ｈ−７ａ　）　、６−０６　（Ｉ　Ｈ、
ｄ　ｄ　。

１０．３，０．４．Ｈ−５）、６．９７（ＩＨ，ｄｄ、
１０．３，１．７．Ｈ−４）ＨＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ２．
２２．５　　ＭＨ２）８２１．０６（ＣＯ（Ｈａ）。

３８．６２（Ｃ−３）、３９．５６（Ｃ−７）、６５．
５５（Ｃ−２）、７９．６５（Ｃ−７ａ）。

８０．７６（Ｃ−３ａ）、１２９．２３（Ｃ−５）、１
４４．０３（Ｃ−４）、１６９．８５（ＣＯＣＨｓ）、
１９５．４８（Ｃ−６）ＭＳ　　ｍ／ｚ　　１５４（Ｍ
号−ＣＨ２Ｃ０，２）、＋３６（Ｍ”−ＣＨ５ＣＯＯ）
１．１００）（発明の効果）本発明の抗腫瘍剤は、前記実施例に示すように、ヒーラ
細胞、マウス白血病環！Ｉｍ胞のような腫瘍細胞株に対
し優れた増殖阻止作用を示す。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）３ａ−ヒドロキシ−３，３ａ，７，７ａ−テトラ
ヒドロ−６（２￥Ｈ￥）−ベンゾフラノン又は３ａ−ア
セトキシ−３，３ａ，７，７ａ−テトラヒドロ−６（２
￥Ｈ￥）−ベンゾフラノンを有効成分とする抗腫瘍剤。