JPH01283268A - 新規二官能性化合物およびその製法 - Google Patents
新規二官能性化合物およびその製法Info
- Publication number
- JPH01283268A JPH01283268A JP1070743A JP7074389A JPH01283268A JP H01283268 A JPH01283268 A JP H01283268A JP 1070743 A JP1070743 A JP 1070743A JP 7074389 A JP7074389 A JP 7074389A JP H01283268 A JPH01283268 A JP H01283268A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- group
- amine
- tyrosine
- substituted
- aromatic
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 19
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 4
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims abstract description 12
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims abstract description 7
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000002843 carboxylic acid group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 11
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 abstract description 8
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 abstract description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 abstract description 6
- 150000003667 tyrosine derivatives Chemical group 0.000 abstract description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 abstract description 5
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 abstract description 4
- 150000001412 amines Chemical group 0.000 abstract description 4
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 abstract description 4
- NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N phloretic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 12
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N hydrazine Substances NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 9
- 235000002374 tyrosine Nutrition 0.000 description 7
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 3
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 4-aminobenzoic acid Chemical compound NC1=CC=C(C(O)=O)C=C1 ALYNCZNDIQEVRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- PIINXYKJQGMIOZ-UHFFFAOYSA-N 1,2-dipyridin-2-ylethane-1,2-dione Chemical group C=1C=CC=NC=1C(=O)C(=O)C1=CC=CC=N1 PIINXYKJQGMIOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MISJXUDJCSZFAH-UHFFFAOYSA-N 1-sulfanylpyridin-2-one Chemical compound SN1C=CC=CC1=O MISJXUDJCSZFAH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- MFRZPLYKVDHOSN-UHFFFAOYSA-N 4-(2-isocyanoethyl)morpholine Chemical compound [C-]#[N+]CCN1CCOCC1 MFRZPLYKVDHOSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003143 4-hydroxybenzyl group Chemical group [H]C([*])([H])C1=C([H])C([H])=C(O[H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- XUIIKFGFIJCVMT-GFCCVEGCSA-N D-thyroxine Chemical compound IC1=CC(C[C@@H](N)C(O)=O)=CC(I)=C1OC1=CC(I)=C(O)C(I)=C1 XUIIKFGFIJCVMT-GFCCVEGCSA-N 0.000 description 1
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011481 absorbance measurement Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 229960004050 aminobenzoic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 125000000664 diazo group Chemical group [N-]=[N+]=[*] 0.000 description 1
- 238000006193 diazotization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 125000000219 ethylidene group Chemical group [H]C(=[*])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 229940099472 immunoglobulin a Drugs 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- CNHYKKNIIGEXAY-UHFFFAOYSA-N thiolan-2-imine Chemical compound N=C1CCCS1 CNHYKKNIIGEXAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 1
- 125000005413 thiopyridyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229940034208 thyroxine Drugs 0.000 description 1
- XUIIKFGFIJCVMT-UHFFFAOYSA-N thyroxine-binding globulin Natural products IC1=CC(CC([NH3+])C([O-])=O)=CC(I)=C1OC1=CC(I)=C(O)C(I)=C1 XUIIKFGFIJCVMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003668 tyrosines Chemical class 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54353—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals with ligand attached to the carrier via a chemical coupling agent
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
- C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
- C07D213/62—Oxygen or sulfur atoms
- C07D213/70—Sulfur atoms
- C07D213/71—Sulfur atoms to which a second hetero atom is attached
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Pyridine Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Apparatus For Radiation Diagnosis (AREA)
- External Artificial Organs (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、一般式Ｉ
〔式中、Ａはアミン置換された芳香族基を表わし、Ｘは
１〜１０個の炭素原子を有する炭化水素基を表わす〕の
化合物に関する。
１〜１０個の炭素原子を有する炭化水素基を表わす〕の
化合物に関する。
タンパク質へ反応性基を導入するためには、例えばティ
ラセン（Ｐ、 Ｔｉｊｓｓｅｎ ）著、バートン（Ｒ，
Ｈ，Ｂｕｒｄｏｎ ）、フォノ クニスンベルク（Ｐ、
Ｈ，Ｖｏｎ Ｋｎｉｐｐｅｎｂｅｒｇ）編のプラクテイ
ス・アンド・セオリー・オシ・エンデイム・イムノアッ
セイで（Ｐｒａｃｔｉｃｅ ａｎｄ Ｔｈｅｏｒｙ ｏ
ｆ ｇｎｚｙｍｅ工ｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ ）、エル
ゼヴイーアーフエアラーク（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ−Ｖｅｒ
ｌａｇ ）刊１９８５に記載されている一連の試薬が公
知である。このような試薬は、例えば２−イミノチオラ
ン（Ｊｕθ等、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒ７ １ ７
、 ５３９９ 〜５４０５ 頁（１９７８））、Ｎ−
スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）−プロ
ピヘート（Ｃａｒｌ−ｓｓｏｎ等、Ｂｉｏｃｈｅｍ、
Ｊ、 １７３．７２３〜７３７（１９７８）Ｌアセチル
メルカプトコハク酸無水物（Ｋｌｏｔｚ ｕｎｄ Ｈｅ
１ｎｅｙ 、 Ａｒｃｈ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ。
ラセン（Ｐ、 Ｔｉｊｓｓｅｎ ）著、バートン（Ｒ，
Ｈ，Ｂｕｒｄｏｎ ）、フォノ クニスンベルク（Ｐ、
Ｈ，Ｖｏｎ Ｋｎｉｐｐｅｎｂｅｒｇ）編のプラクテイ
ス・アンド・セオリー・オシ・エンデイム・イムノアッ
セイで（Ｐｒａｃｔｉｃｅ ａｎｄ Ｔｈｅｏｒｙ ｏ
ｆ ｇｎｚｙｍｅ工ｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ ）、エル
ゼヴイーアーフエアラーク（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ−Ｖｅｒ
ｌａｇ ）刊１９８５に記載されている一連の試薬が公
知である。このような試薬は、例えば２−イミノチオラ
ン（Ｊｕθ等、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒ７ １ ７
、 ５３９９ 〜５４０５ 頁（１９７８））、Ｎ−
スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）−プロ
ピヘート（Ｃａｒｌ−ｓｓｏｎ等、Ｂｉｏｃｈｅｍ、
Ｊ、 １７３．７２３〜７３７（１９７８）Ｌアセチル
メルカプトコハク酸無水物（Ｋｌｏｔｚ ｕｎｄ Ｈｅ
１ｎｅｙ 、 Ａｒｃｈ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ。
Ｂｉｏｐｈｙｓ、 ９６．６０５〜６１２頁（１９６２
））またはＳ−アセチルメルカプト酢酸−Ｎ−ヒドロキ
シスクシンイミＶエステル（Ｒ，Ｊｕｌｉａｎ 等、Ａ
ｎａｌ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、 １３２．６８〜７３ （
１９８３））である。このような化合物はそれぞれ、タ
ンパク質の遊離アミノ基と反応するので、反応性基だけ
全遊離アミン基、例えばリジンのε−アミノ基またはＮ
末端アミノ基を有するタンパク質またはペプチドに導入
することができる。しかしながら、反応性アミノ基をわ
ずかだけ受は容′れるかまたは反応性アはノ基を全く受
は容れないタンパク質がある。
））またはＳ−アセチルメルカプト酢酸−Ｎ−ヒドロキ
シスクシンイミＶエステル（Ｒ，Ｊｕｌｉａｎ 等、Ａ
ｎａｌ、 Ｂｉｏｃｈｅｍ、 １３２．６８〜７３ （
１９８３））である。このような化合物はそれぞれ、タ
ンパク質の遊離アミノ基と反応するので、反応性基だけ
全遊離アミン基、例えばリジンのε−アミノ基またはＮ
末端アミノ基を有するタンパク質またはペプチドに導入
することができる。しかしながら、反応性アミノ基をわ
ずかだけ受は容′れるかまたは反応性アはノ基を全く受
は容れないタンパク質がある。
ＳＨ−反応性基をタンパク質またはペプチドのチロシン
でカップリングすることができる試薬は、ダンカン（Ｄ
ｕｎｃａｎ ）等によって、ジャーナル・オプ・イムノ
ロジカル・メソッズ（Ｊ。
でカップリングすることができる試薬は、ダンカン（Ｄ
ｕｎｃａｎ ）等によって、ジャーナル・オプ・イムノ
ロジカル・メソッズ（Ｊ。
１：ｍｍｕｎｏｌ、 Ｍｅｔｈｏｄｓ ）第８０巻、１
３７〜１４０頁（１９８５）に記載されている。しかし
ながら、これらの試薬は、高い過剰量で使用する心安が
あり、従って相当な規模で副反応が進行する可能性があ
る。
３７〜１４０頁（１９８５）に記載されている。しかし
ながら、これらの試薬は、高い過剰量で使用する心安が
あり、従って相当な規模で副反応が進行する可能性があ
る。
従って本発明の課題は、チロシンにカップリングされる
ことができる基を有し、かつタンパク質またはペプチド
へ結合した際には副反応が小規模で進行する二官能性化
合物を提供することであった。
ことができる基を有し、かつタンパク質またはペプチド
へ結合した際には副反応が小規模で進行する二官能性化
合物を提供することであった。
この課題は、一般式Ｉ
〔式中、Ａはアミン置換された芳香族基、およびＸは１
〜１０個の炭素原子を有する炭化水素基を表わす〕の化
合物によって解決される。
〜１０個の炭素原子を有する炭化水素基を表わす〕の化
合物によって解決される。
Ｘは、有利に１〜６個の炭素原子を有する炭化水素基で
ちり、特に有利にはエチリデン基である。
ちり、特に有利にはエチリデン基である。
アミン置換された芳香族基Ａは、例えば自体公知の方法
によリシア・戸ニウム塩に変換することができ、このシ
ア・戸ニウム塩は、再び容易にチロシンまたはチロシン
誘導体の芳香族環に結合し、その後還元によってチオピ
リジル基が脱離され、かつ８Ｈ−基が得られる。
によリシア・戸ニウム塩に変換することができ、このシ
ア・戸ニウム塩は、再び容易にチロシンまたはチロシン
誘導体の芳香族環に結合し、その後還元によってチオピ
リジル基が脱離され、かつ８Ｈ−基が得られる。
特に有利な本発明による化合物は、次の通りである：
Ｎ−（４−アミノベン・戸イル）”Ｎ’−（ピリジルジ
チオグロビオニル）−ヒドラジン、Ｎ−（４−アミノベ
ン・戸イル）−Ｎ’−（ピリジルジチオアセチル）−ヒ
ドラジン、 Ｎ−（４−アミノベンゾイル） −Ｎ／ −（ピリジル
ジチオブチリル）−ヒドラジン、 Ｎ−（２−アミノベンゾイル）−Ｎ’−（ビリジルジチ
オグロビオニル）−ヒドラジン、Ｎ−（２−アミノベン
ゾイル）−Ｎ’−（ピリジルジチオアセチル）−ヒドラ
ジン、 Ｎ−（２−アミノベンゾイル）−Ｎ’−（ピリジルジチ
オブチリル）−ヒドラジン。
チオグロビオニル）−ヒドラジン、Ｎ−（４−アミノベ
ン・戸イル）−Ｎ’−（ピリジルジチオアセチル）−ヒ
ドラジン、 Ｎ−（４−アミノベンゾイル） −Ｎ／ −（ピリジル
ジチオブチリル）−ヒドラジン、 Ｎ−（２−アミノベンゾイル）−Ｎ’−（ビリジルジチ
オグロビオニル）−ヒドラジン、Ｎ−（２−アミノベン
ゾイル）−Ｎ’−（ピリジルジチオアセチル）−ヒドラ
ジン、 Ｎ−（２−アミノベンゾイル）−Ｎ’−（ピリジルジチ
オブチリル）−ヒドラジン。
適当なのは、同様に、アミン置換された芳香族基Ａが付
加的に一回寸たけ数回アルキル置換されている化合物で
ある。アミン置換は、−回または数回芳香族基Ａで行な
わｎでよい。
加的に一回寸たけ数回アルキル置換されている化合物で
ある。アミン置換は、−回または数回芳香族基Ａで行な
わｎでよい。
本発明の化合物によって、タンパク質またはペプチドと
のカップリング反応の際に、使用した試薬の約１４の新
が取りこまれるので、従って反応には試薬の約６倍の過
剰量だけを使用すべきであることが、意想外にも判明し
た。
のカップリング反応の際に、使用した試薬の約１４の新
が取りこまれるので、従って反応には試薬の約６倍の過
剰量だけを使用すべきであることが、意想外にも判明し
た。
本発明のもう一つの対象は一般式■の化合物の製法であ
り、この場合には、カルボン酸基のアルキル部分に１〜
１０個の炭素原子を有するピリジルジチオアルキルカル
ボン酸−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミダエステルを、芳
香族環でアミン置換された芳香族カルボン酸と反応させ
る。
り、この場合には、カルボン酸基のアルキル部分に１〜
１０個の炭素原子を有するピリジルジチオアルキルカル
ボン酸−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミダエステルを、芳
香族環でアミン置換された芳香族カルボン酸と反応させ
る。
ピリジルジチオアルキルカルボン酸−Ｎ−ヒドロキシス
クシンイミドエステルは、相応するピリジルジチオアル
キルカルボン酸から、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミｒか
よヒ縮合剤、例えばジシクロへキシルカルボジイミド、
ジイソグロビル力ルざジイミｖ寸たけモルホリノエチル
イソシアニドとの反応によって得られる。
クシンイミドエステルは、相応するピリジルジチオアル
キルカルボン酸から、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミｒか
よヒ縮合剤、例えばジシクロへキシルカルボジイミド、
ジイソグロビル力ルざジイミｖ寸たけモルホリノエチル
イソシアニドとの反応によって得られる。
ピリジルジチオアルキルカルボン酸のための出発物質は
、相応するメルカプトアルキルカルボン酸である。この
出発物質は２，２′−ピリジルジスルフィドとの反応に
よって、所望の化合物に変換される。
、相応するメルカプトアルキルカルボン酸である。この
出発物質は２，２′−ピリジルジスルフィドとの反応に
よって、所望の化合物に変換される。
有利には、ピリジルジチオプロピオン酸−Ｎ−ヒドロキ
シスクシンイミドニステルハ、芳香環の位背でアミン置
換された芳香族カルゼン酸のヒドラジドと反応される。
シスクシンイミドニステルハ、芳香環の位背でアミン置
換された芳香族カルゼン酸のヒドラジドと反応される。
有利な化合物Ｎ−（４−アミノ−ベン・戸イル）−Ｎ’
−（ヒｌＪジルジチオプロピオニル）−ヒドラジン全製
造するには、ビリジルジチオグロビオン酸−Ｎ−ヒνロ
キシスクシンイミドエステルをｐ−アミノ安息香酸ヒｒ
ラジドと反応させる。
−（ヒｌＪジルジチオプロピオニル）−ヒドラジン全製
造するには、ビリジルジチオグロビオン酸−Ｎ−ヒνロ
キシスクシンイミドエステルをｐ−アミノ安息香酸ヒｒ
ラジドと反応させる。
本発明の別の対象は、チロシンまたはチロシン誘導体、
殊（（ペプチド捷たはタンパク質中で結合したチロシン
またはチロシン誘導体ＫＳＨ−基を導入するために、一
般式■の化合物、有利にＮ−（４−アミノペン・戸イル
）−Ｎ’−（ピリジルジチオプロピオニル）−ヒドラジ
ンを使用することである。この場合本発明による化合物
・：は、基Ａのアミン置換によりチロシンの芳香環に結
合され、還元によってチオぎリジル基は脱離され、この
場合にＢＨ−基が生じる。
殊（（ペプチド捷たはタンパク質中で結合したチロシン
またはチロシン誘導体ＫＳＨ−基を導入するために、一
般式■の化合物、有利にＮ−（４−アミノペン・戸イル
）−Ｎ’−（ピリジルジチオプロピオニル）−ヒドラジ
ンを使用することである。この場合本発明による化合物
・：は、基Ａのアミン置換によりチロシンの芳香環に結
合され、還元によってチオぎリジル基は脱離され、この
場合にＢＨ−基が生じる。
本発明の有利な実施形において、基Ａのアミノ基は、チ
ロシンまた７／ｉチロシン誘導体との反応前に、自体公
知の方法によりシア・戸化さｎｌその次にこのシア・ア
ル化合・物はチロシンまたはチロシン誘導体と反応され
、かつ還元剤の作用によってＳＨ−基の遊離が惹起され
る。この場合、璧元剤は、チオール、例えばジチオトレ
イトールであるのか有利である。
ロシンまた７／ｉチロシン誘導体との反応前に、自体公
知の方法によりシア・戸化さｎｌその次にこのシア・ア
ル化合・物はチロシンまたはチロシン誘導体と反応され
、かつ還元剤の作用によってＳＨ−基の遊離が惹起され
る。この場合、璧元剤は、チオール、例えばジチオトレ
イトールであるのか有利である。
適当ナチロシン誘導体の例は、チロキシンおよびトリョ
ードチロニンである。本発明によりＢＨ基を導入するこ
とかで責るタンパク質の例は、Ｒ８ＡＸＩｇ（）および
ｌＨＢｓＡｇ （Ｂ型肝炎−表面抗原）が、である。
ードチロニンである。本発明によりＢＨ基を導入するこ
とかで責るタンパク質の例は、Ｒ８ＡＸＩｇ（）および
ｌＨＢｓＡｇ （Ｂ型肝炎−表面抗原）が、である。
本発明によれば、ｓＨ−基をチロシン側鎖に導入するこ
とが可能になる。本発明による化合物のジアゾ化後の有
利な組人込みの際に、ジアゾ基が生じ、従って組み込＆
率は、簡単なＵＶ−測定によって測定することができる
。ＳＨ−基の遊離は、本発明によれば選択的に還元剤の
添加によって初めて行なわれ、かつ同様にＵＶ測定によ
って続行することができる。
とが可能になる。本発明による化合物のジアゾ化後の有
利な組人込みの際に、ジアゾ基が生じ、従って組み込＆
率は、簡単なＵＶ−測定によって測定することができる
。ＳＨ−基の遊離は、本発明によれば選択的に還元剤の
添加によって初めて行なわれ、かつ同様にＵＶ測定によ
って続行することができる。
また、本発明によれば、８Ｈ−反応性基、つ捷りビリジ
ルジチオ基、すなわちＳＨ−基と反応可能な基の導入が
可能である。更に、還元過程は製造の際には不要である
。
ルジチオ基、すなわちＳＨ−基と反応可能な基の導入が
可能である。更に、還元過程は製造の際には不要である
。
以下の例につき発明明金さらに詳述する。
例 １
Ｘ−（４−アミノペン・戸イル）−Ｎ／ −（ピリジル
ジチオプロピオニル）−ヒげラジンの合成ｐ−アミノ安
息香酸ヒげラジば２４２叩をジオキサン／水（３Ｍ）２
ＯＴｎｌ中に入れる。これ（Ｃピリジルジチオプロピオ
ン酸−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル５００〜
を加える。
ジチオプロピオニル）−ヒげラジンの合成ｐ−アミノ安
息香酸ヒげラジば２４２叩をジオキサン／水（３Ｍ）２
ＯＴｎｌ中に入れる。これ（Ｃピリジルジチオプロピオ
ン酸−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル５００〜
を加える。
室温で４時間攪拌し、次ｌＣ］ｌ：空中で蒸発乾固させ
、メタノールから再結晶させる。結晶？吸引ろ過し、ク
コロホルムで洗浄し、かつ真空中ＣａＣｌ２上で乾燥さ
せる。
、メタノールから再結晶させる。結晶？吸引ろ過し、ク
コロホルムで洗浄し、かつ真空中ＣａＣｌ２上で乾燥さ
せる。
収量：５００〜−理論値の８９係
１Ｈ−ＮＭＲ（［Ｄ］ａ−ＤＭ８０／ＣＤｒ５ＣＯ２Ｈ
） ：δ＝ ２．６６ （ｔ。
） ：δ＝ ２．６６ （ｔ。
Ｊ ＝ ６．６ Ｈｚ、２ Ｈ）；３．０９ （ｔ、Ｊ
−６，６ＨｚＩ ２Ｈ）； ６．６ （ｄ、 Ｊ −７
，２ＨｚＩ ２ Ｈ）； ７．２２ （ｑ、 Ｊ ＝４
．５ Ｈｚ、 １ Ｈ）； ７．６３ （ｄｌ Ｊ ＝
７．２ ＨｚＩ ２ Ｈ）；７．８１ （ｍ、２ Ｈ
ａ；８．４７ ｐｐｍ （ｄ、 Ｊ −４−５Ｈｚ、
ＩＨ）。
−６，６ＨｚＩ ２Ｈ）； ６．６ （ｄ、 Ｊ −７
，２ＨｚＩ ２ Ｈ）； ７．２２ （ｑ、 Ｊ ＝４
．５ Ｈｚ、 １ Ｈ）； ７．６３ （ｄｌ Ｊ ＝
７．２ ＨｚＩ ２ Ｈ）；７．８１ （ｍ、２ Ｈ
ａ；８．４７ ｐｐｍ （ｄ、 Ｊ −４−５Ｈｚ、
ＩＨ）。
例 ２
に−（４−アミノベンゾイル）−Ｎ’−（ピリジルジチ
オグロピオニル）−ヒドラジンのヒツジ−免疫グロブリ
ンとのカップリング ａ） 試薬溶液の製造 Ｎ−（４−アミノペン・戸イル）−Ｎ’−（ビリジルジ
チオグロピオニル）−ヒドラジン５雫（１４，４μモル
）を、０℃で５ Ｎ ＨＣｌ Ｏ，２Ｍ中に溶かす。こ
れにＮａＮ０□水溶液１０μｔ （２２０η／コ）を加
え、０℃で１０分間攪拌し、２Ｍ尿素１０μｔを加え、
かつ再度０°Ｃで１０分間攪拌する。反応溶液を氷冷水
で２μモル／ｄに希釈し、直ちに使用する。
オグロピオニル）−ヒドラジンのヒツジ−免疫グロブリ
ンとのカップリング ａ） 試薬溶液の製造 Ｎ−（４−アミノペン・戸イル）−Ｎ’−（ビリジルジ
チオグロピオニル）−ヒドラジン５雫（１４，４μモル
）を、０℃で５ Ｎ ＨＣｌ Ｏ，２Ｍ中に溶かす。こ
れにＮａＮ０□水溶液１０μｔ （２２０η／コ）を加
え、０℃で１０分間攪拌し、２Ｍ尿素１０μｔを加え、
かつ再度０°Ｃで１０分間攪拌する。反応溶液を氷冷水
で２μモル／ｄに希釈し、直ちに使用する。
ｂ）ヒツジ−免疫グロブリンとのカップリング０．１Ｍ
ホウ酸塩緩衝液（ｐＨ９，２）中のヒツジ−免疫グロビ
リン５００μｔに０．８ Ｍホウ酸塩緩衝液５００μ／
、（ＰＩ−１９，２）を加える。０℃で次の物質を少な
くとも５回に分けて交互に加える： Ｑ、１４ ＭＮａ
ＯＨ５００１１ｔおよび前記の試薬溶液５０μｔ０これ
によれば免疫グロブリン１モル当り試薬１５モルが使用
されていることになる。
ホウ酸塩緩衝液（ｐＨ９，２）中のヒツジ−免疫グロビ
リン５００μｔに０．８ Ｍホウ酸塩緩衝液５００μ／
、（ＰＩ−１９，２）を加える。０℃で次の物質を少な
くとも５回に分けて交互に加える： Ｑ、１４ ＭＮａ
ＯＨ５００１１ｔおよび前記の試薬溶液５０μｔ０これ
によれば免疫グロブリン１モル当り試薬１５モルが使用
されていることになる。
０°Ｃで２０分間、その後２５°Ｃで２Ｄ分間インキュ
ベートし、かつセファデックス（５ｅｐｈａ−ｄｅｘ
） Ｇ ２５で脱塩する。
ベートし、かつセファデックス（５ｅｐｈａ−ｄｅｘ
） Ｇ ２５で脱塩する。
結合試薬の普Ｍの決定には、吸光度（ＯＤ）を４２０ｎ
ｍで測定し、次式にあてはめる：タンパク質濃度の測定
後、組み込み率４．８＝１が得られる。
ｍで測定し、次式にあてはめる：タンパク質濃度の測定
後、組み込み率４．８＝１が得られる。
Ｃ）ジチオトレイトールを用いてのＳＨ−基の遊離
タンパク質溶液を、２Ｍ酢酸でｐＨ４，５に調節し、か
つジチオトレイトールを加え２３ｍＭにする。２５°Ｃ
で２０分間インキュベートする。
つジチオトレイトールを加え２３ｍＭにする。２５°Ｃ
で２０分間インキュベートする。
３４３ ｎｍにおける吸光率測定（遊離されたチオピリ
ドンの吸光度）によって遊離されたＳＨ−基を測定する
。８．０８で割った吸光率の上昇（ＯＤ ３４３ ）に
よシＳＨ−基の濃度８モル／Ｍが得られる。負荷度ＳＨ
−基５／ＩｇＧ１分子が得られる。
ドンの吸光度）によって遊離されたＳＨ−基を測定する
。８．０８で割った吸光率の上昇（ＯＤ ３４３ ）に
よシＳＨ−基の濃度８モル／Ｍが得られる。負荷度ＳＨ
−基５／ＩｇＧ１分子が得られる。
同様に、ＨＢｓＡｇ （Ｂ型肝炎表面−抗原）およびＨ
ＢｅＡｇ （Ｂ型肝炎ｅ抗原）の際には、試薬のきる。
ＢｅＡｇ （Ｂ型肝炎ｅ抗原）の際には、試薬のきる。
一般に、提供された試薬の３分の１が組み込まれる。
代理人 弁理士 矢 野 敏 雄
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） 〔式中、Ａはアミン置換された芳香族基を表わし、Ｘは
１〜１０個の炭素原子を有する炭化水素基を表わす〕の
化合物。 ２、請求項１記載の化合物の製法において、カルボン酸
基のアルキル部分に１〜１０個の炭素原子を有するピリ
ジルジチオカルボン酸−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド
エステルを芳香環でアミン置換された芳香族カルボン酸
のヒドラジドと反応させることを特徴とする請求項１記
載の化合物の製法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3809986.1 | 1988-03-24 | ||
| DE3809986A DE3809986A1 (de) | 1988-03-24 | 1988-03-24 | Verbindungen zur einfuehrung einer sh-gruppe in tyrosin |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01283268A true JPH01283268A (ja) | 1989-11-14 |
| JPH0552828B2 JPH0552828B2 (ja) | 1993-08-06 |
Family
ID=6350603
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1070743A Granted JPH01283268A (ja) | 1988-03-24 | 1989-03-24 | 新規二官能性化合物およびその製法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4925945A (ja) |
| EP (1) | EP0339264B1 (ja) |
| JP (1) | JPH01283268A (ja) |
| AT (1) | ATE109468T1 (ja) |
| DE (2) | DE3809986A1 (ja) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU4946297A (en) * | 1996-10-09 | 1998-05-05 | Akzo Nobel N.V. | A composition comprising an immobilised, acylated peptide |
| KR100465353B1 (ko) * | 1999-04-22 | 2005-01-13 | 주식회사유한양행 | 하이드라진 유도체 및 그의 제조방법 |
| WO2004037164A2 (en) * | 2002-06-21 | 2004-05-06 | University Of Utah Research Foundation | Crosslinked compounds and methods of making and using thereof |
| US10865383B2 (en) | 2011-07-12 | 2020-12-15 | Lineage Cell Therapeutics, Inc. | Methods and formulations for orthopedic cell therapy |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE430062B (sv) * | 1977-03-04 | 1983-10-17 | Pharmacia Fine Chemicals Ab | Kopplings- eller tioleringsreagens |
| SE8302758L (sv) * | 1983-05-17 | 1984-11-18 | Pharmacia Ab | Sett for uppspjelkning av disulfidbindningar och derigenom erhallen forening |
| US4723012A (en) * | 1985-03-25 | 1988-02-02 | Japan Tobacco Inc. | Desmosine derivatives having a disulfide bond and preparation of artificial antigen using the same |
| US4797491A (en) * | 1986-03-17 | 1989-01-10 | Cetus Corporation | Compound 1-(3-(2-pyridyldithio)propionamido)-12-(5-hydrazidoglutaramido)-4,9-dioxadodecane |
-
1988
- 1988-03-24 DE DE3809986A patent/DE3809986A1/de not_active Withdrawn
-
1989
- 1989-03-22 US US07/327,304 patent/US4925945A/en not_active Expired - Fee Related
- 1989-03-22 DE DE58908128T patent/DE58908128D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1989-03-22 EP EP89105157A patent/EP0339264B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1989-03-22 AT AT89105157T patent/ATE109468T1/de not_active IP Right Cessation
- 1989-03-24 JP JP1070743A patent/JPH01283268A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0552828B2 (ja) | 1993-08-06 |
| DE58908128D1 (de) | 1994-09-08 |
| ATE109468T1 (de) | 1994-08-15 |
| EP0339264B1 (de) | 1994-08-03 |
| DE3809986A1 (de) | 1989-10-05 |
| US4925945A (en) | 1990-05-15 |
| EP0339264A1 (de) | 1989-11-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5053503A (en) | Chelating agents | |
| US5601824A (en) | Homobidental, trifunctional linkers used in immunologically active conjugates | |
| CA1120398A (en) | Coupling reagent of immuno-active molecule to an enzyme | |
| Denny et al. | 125I-labeled crosslinking reagent that is hydrophilic, photoactivatable, and cleavable through an azo linkage. | |
| JPS6121227B2 (ja) | ||
| US4543211A (en) | Conjugate having cytotoxicity and process for the preparation thereof | |
| JP2648162B2 (ja) | ビオチニル化剤 | |
| JPS5836308B2 (ja) | 抗体の製造方法 | |
| US4794082A (en) | Biotinylating agents | |
| US4287345A (en) | Polyfunctional disulfide compounds having S--S exchange reactivity | |
| US4798795A (en) | Biotinylating agents | |
| JPH02227098A (ja) | マレイミド基を測定する方法および測定剤 | |
| JPH01283268A (ja) | 新規二官能性化合物およびその製法 | |
| JP3544549B2 (ja) | ピリジン誘導体 | |
| AU664192B2 (en) | Conjugated moieties for chelating paramagnetic metals | |
| US4472301A (en) | Propranolol immunogen and antibodies | |
| US5484722A (en) | Biopolymer and effector substance conjugates, process for the preparation thereof and their use | |
| JPH0625143B2 (ja) | イミダゾリド | |
| EP0113102A2 (en) | Procainamide and napa immunogens, antibodies labeled conjugates, and related derivatives | |
| Moroder et al. | Immunoassays of peptide hormones and their chemical aspects | |
| CA2062240A1 (en) | Labeled hydantoin derivatives for immunoassays | |
| US4673763A (en) | Alpha-functionalized derivatives and labeled conjugates of procainamide and NAPA | |
| JP2884063B2 (ja) | 両親媒性重合体 | |
| FRIEBEL et al. | Semi-reversible cross-linking. Synthesis and application of a novel heterobifunctional reagent | |
| JPS6052745B2 (ja) | 新規な化合物 |