JPH0552828B2 - - Google Patents
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Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、一般式
〔式中、Ａはアミン置換された芳香族基を表わ
し、Ｘは１〜10個の炭素原子を有する炭化水酸基
を表わす〕の化合物に関する。 〔従来の技術〕 タンパク質へ反応性基を導入するためには、例
えばテイツセン（P.Tijsse）著、バードン（R.H.
Burdon）、フオンクニツペンベルグ（P.H.Von
Knippenberg）編のプラクテイス・アンド・セオ
リー・オブ・エンザイム・イムノアツセイズ
（Practice and Theory of Enzyme
Immunoassays）、エルゼヴイーアーフエアラー
ク（Elsevier−Verlag）刊1985に記載されている
一連の試薬が公知である、このような試薬は、例
えば２−イミノチオラン（Jue等、Biochemistry
17、5399〜5405頁（1978））、Ｎ−スクシンイミジ
ル−３−（２−ピリジルジチオ）−プロピオネート
（Carl−sson等、Biochem.J.173、723〜737
（1978））アセチルメルカプトコハク酸無水物
（Klotz und Heiney、Arch.Biochem.Biophys.
96、60〜612頁（1962））またはＳ−アセチルメル
カプト酢酸−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエス
テル（R.Julian等、Anal.Biochem.132、68〜73
（1983））である。このような化合物はそれぞれ、
タンパク質の遊離アミノ基と反応するので、反応
性基だけを遊離アミノ基、例えばリジンのδ−ア
ミノ基またはＮ末端アミノ基を有するタンパク質
またはペブチドに導入することができる。しかし
ながら、反応性アミノ基をわずかだけ受け容れる
かまたは反応性アミノ基を全く受け容れないタン
パク質がある。 SH−反応性基をタンパク質またはペブチドの
チロシンでカツプリングすることができる試薬
は、ダンカン（Duncan）等によつて、ジヤーナ
ル・オブ・イムノロジカル・メソツズ（J.
Immunol.Methods）第80巻、137〜140頁（1985）
に記載されている。しかしながら、これらの試薬
は、高い過剰量で使用する必要があり、従つて相
当な規模で副反応が進行する可能性がある。 〔本発明が解決しようとする課題〕 従つて本発明の課題は、チロシンにカツプリン
グされることができる基を有し、かつタンパク質
またはペブチドへ結合した際には副反応が小規模
で進行する二官能性化合物を提供することであつ
た。 〔課題を解決するための手段〕 この課題は、一般式 〔式中、Ａはアミン置換された芳香族基、および
Ｘは１〜10個の炭素原子を有する炭化水素基を表
わす〕の化合物によつて解決される。 Ｘは、有利に１〜６個の炭素原子を有する炭化
水素基であり、特に有利にはエチリデン基であ
る。 アミン置換された芳香族基Ａは、例えば自体公
知の方法によりジアゾニウム塩に変換することが
でき、このジアゾニウム塩は、再び容易にチロシ
ンまたはチロシン誘導体の芳香族環に結合し、そ
の後還元によつてチオピリジル基が脱離され、か
つSH−基が得られる。 特に有利な本発明による化合物は、次の通りで
ある： Ｎ−（４−アミノベンゾイル）−N′−（ピリジル
ジチオプロピオニル）−ヒドラジン、 Ｎ−（４−アミノベンゾイル）−N′−（ピリジル
ジチオアセチル）−ヒドラジン、 Ｎ−（４−アミノベンゾイル）−N′−（ピリジル
ジチオブチリル）−ヒドラジン、 Ｎ−（２−アミノベンゾイル）−N′−（ピリジル
ジチオプロピオニル）−ヒドラジン、 Ｎ−（２−アミノベンゾイル）−N′−（ピリジル
ジチオアセチル）−ヒドラジン、 Ｎ−（２−アミノベンゾイル）−N′−（ピリジル
ジチオブチリル）−ヒドラジン。 適当なのは、同様に、アミン置換された芳香族
基Ａが付加的に一回または数回アルキル置換され
ている化合物である。アミン置換は、一回または
数回芳香族基Ａで行なわれてよい。 本発明の化合物によつて、タンパク質またはペ
ブチドとのカツプリング反応の際に、使用した試
薬の約1/3の量が取りこまれるので、従つて反応
には試薬の約３倍の過剰量だけを使用するべきで
あることが、意想外にも判明した。 本発明のもう一つの対象は一般式の化合物の
製法であり、この場合には、カルボン酸基のアル
キル部分に１〜10個の炭素原子を有するピリジル
チオアルキルカルボ酸−Ｎ−ヒドロキシスクシン
イミドエステルを、芳香族環でアミン置換された
芳香族カルボン酸と反応させる。 ピリジルチオアルキルカルボン酸−Ｎ−ヒドロ
キシスクシンイミドエステルは、相応するピリジ
ルジチオアルキルカルボン酸から、Ｎ−ヒドロキ
シスクシンイミドおよび縮合剤、例えばジシクロ
ヘキシルカルボジイミド、ジイソプロピルカルボ
ジイミドまたはモルホリノエチルイソシアニドと
の反応によつて得られる。 ピリジルジチオアルキルカルボン酸のための出
発物質は、相応するメルカプトアルキルカルボン
酸である。この出発物質は２，2′−ピリジルジス
ルフイドとの反応によつて、所望の化合物に変換
される。 有利には、ピリジルジオプロピオン酸−Ｎ−ヒ
ドロキシスクシンイミドエステルは芳香環の位置
でアミン置換された芳香族カルボン酸のヒドラジ
ドと反応される。 有利な化合物Ｎ−（４−アミノ−ベンゾイル）−
N′−（ピリジルジチオプロピオニル）−ヒドラジ
ンを製造するには、ピリジルジチオプロピオン酸
−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルをｐ−
アミノ安息香酸ヒドラジドと反応させる。 本発明の別の対象は、チロシンまたはチロシン
誘導体、殊にペブチドまたはタンパク質中で結合
したチロシンまたはチロシン誘導体にSH−基を
導入するために、一般式の化合物、有利にＮ−
（４−アミノ−ベンゾイル）−N′−（ピリジルジチ
オプロピオニル）−ヒドラジンを使用することで
ある。この場合本発明による化合物は、基Ａのア
ミン置換によりチロシンの芳香環に結合され、環
元によつてチオピリジル基は脱離され、この場合
にSH−基が生じる。 本発明の有利な実施形において、基Ａのアミノ
基は、チロシンまたはチロシン誘導体との反応前
に、自体公知の方法によりジアゾ化され、その次
にこのジアゾ化化合物はチロシンまたはチロシン
誘導体と反応され、かつ還元剤の作用によつて
SH−基の遊離が惹起される。この場合、還元剤
は、チオール、例えばジチオトレイトールである
のが有利である。 適当なチロシン誘導体の例は、チロキシンおよ
びトリヨードチロニンである。本発明によりSH
基を導入することができるタンパク質の例は、
RSA、IgGおよびHBsAg（Ｂ型肝炎−表面抗原）
が、である。 本発明によれば、SH−基をチロシン側鎖に導
入することが可能になる。本発明による化合物の
ジアゾ化後の有利な組み込みの際に、ジアゾ基が
生じ、従つて、組み込み率は、簡単なUV−測定
によつて測定することができる。SH−基の遊離
は、本発明によれば選択的に還元剤の添加によつ
て初めて行なわれ、かつ同様にUV測定によつて
続行することができる。 また、本発明によれば、SH−反応性基、つま
りピリジルジチオ基、すなわちSH−基と反応可
能な基の導入が可能である。更に、還元過程は製
造の際には不要である。 〔実施例〕 以下の例につき本発明をさらに詳述する。 例 １ Ｎ−（４−アミノベゾイル）−N′−（ピリジルジ
チオプロピオニル）−ヒドラジンの合成 ｐ−アミノ安息香酸ヒドラジド242mgをジオキ
サン／水（３：１）20ml中に入れる。これにピリ
ジルジチオプロピオン酸−Ｎ−ヒドロキシスクシ
ンイミドエステル500mgを加える。室温で４時間
撹拌し、次に真空中で蒸発乾固させ、メタノール
から再結晶させる。結晶を吸引ろ過し、クロロホ
ルムで洗浄し、かつ真空中CaCl2上で乾燥させ
る。 収量：500mg＝理論値の89％ 1H−NMR（〔Ｄ〕6−DMSO／CD3CO2H）：δ＝
2.66（ｔ、Ｊ＝6.6Hz、2H）；3.09（ｔ、Ｊ＝6.6Hz、
2H）；6.6（ｄ、Ｊ＝7.2Hz、2H）；7.22（ｑ、Ｊ＝
4.5Hz、1H）；7.63（ｄ、Ｊ＝7.2Hz、2H）；7.81
（ｍ、2H）；8.47ppm（ｄ、Ｊ＝4.5Hz、1H）． 例 ２ Ｎ−（４−アミノベンゾイル）−N′−（ピリジル
ジチオプロピオニル）−ヒドラジンのヒツジ−
免疫グロブリンとのカツプリング (a) 試薬溶液の製造 Ｎ−（４−アミノベンゾイル）−N′−（ピリジ
ルジチオプロピオニル）−ヒドラジン５mg
（14.4μモル）を、０℃で5NHCl0.2ml中に溶か
す。これにNaNO2水溶液10μl（220mg／ml）を
加え、０℃で10分間撹拌し、2M尿素10μlを加
え、かつ再度０℃で10分間撹拌する。反応溶液
を氷冷水2μモル／mlに希釈し、直ちに使用す
る。 (b) ヒツジ−免疫グロブリンとのカツプリング
0.1Mホウ酸塩緩衝液（PH9.2）中のヒツジ−免
疫グロビリン500μlに0.8Mホウ酸塩緩衝液
500μl（PH9.2）を加える。０℃で次の物質を少
なくとも５回に分けて交互に加える：
0.14MNaOH500μlおよび前記の試薬溶液50μl。
これによれば免疫グロブリン１モル当り試薬15
モルが使用されていることになる。 ０℃で20分間、その後25℃で20分間インキユ
ベートし、かつセフアデツクス（Sepha−dex）
G25で脱塩する。 結合試薬の量Ｍの決定には、吸光度（CD）
を420nｍで測定し、次式にあてはめる： Ｍ（ミリモル／ｌ）＝OD420／3000 タンパク質濃度の測定後、組み込み率4.8：
１が得られる。 (c) ジチオトレイトールを用いてのSH−基の遊
離 タンパク質溶液を、2M酢酸でPH4.5に調節
し、かつジチオトレイトールを加え20ｍＭにす
る。25℃で20分間インキユベートする。343n
ｍにおける吸光率測定（遊離されたチオピリド
ンの吸光度）によつて遊離されたSH−基を測
定する。8.08で割つた吸光率の上昇（OD343）
によりSH−基の濃度μモル／mlが得られる。
負荷度SH−基５／IgG・１分子が得られる。 同様に、HBsAg（Ｂ型肝炎表面−抗原）およ
びHBsAg（Ｂ型肝炎ｅ抗原）の際には、試薬の
使用された過剰量に応じてそれぞれSH基0.2〜
２モル／タンパク算１モルを組み込むことがで
きる。一般に、提供された試薬の３分の１が組
み込まれる。
し、Ｘは１〜10個の炭素原子を有する炭化水酸基
を表わす〕の化合物に関する。 〔従来の技術〕 タンパク質へ反応性基を導入するためには、例
えばテイツセン（P.Tijsse）著、バードン（R.H.
Burdon）、フオンクニツペンベルグ（P.H.Von
Knippenberg）編のプラクテイス・アンド・セオ
リー・オブ・エンザイム・イムノアツセイズ
（Practice and Theory of Enzyme
Immunoassays）、エルゼヴイーアーフエアラー
ク（Elsevier−Verlag）刊1985に記載されている
一連の試薬が公知である、このような試薬は、例
えば２−イミノチオラン（Jue等、Biochemistry
17、5399〜5405頁（1978））、Ｎ−スクシンイミジ
ル−３−（２−ピリジルジチオ）−プロピオネート
（Carl−sson等、Biochem.J.173、723〜737
（1978））アセチルメルカプトコハク酸無水物
（Klotz und Heiney、Arch.Biochem.Biophys.
96、60〜612頁（1962））またはＳ−アセチルメル
カプト酢酸−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエス
テル（R.Julian等、Anal.Biochem.132、68〜73
（1983））である。このような化合物はそれぞれ、
タンパク質の遊離アミノ基と反応するので、反応
性基だけを遊離アミノ基、例えばリジンのδ−ア
ミノ基またはＮ末端アミノ基を有するタンパク質
またはペブチドに導入することができる。しかし
ながら、反応性アミノ基をわずかだけ受け容れる
かまたは反応性アミノ基を全く受け容れないタン
パク質がある。 SH−反応性基をタンパク質またはペブチドの
チロシンでカツプリングすることができる試薬
は、ダンカン（Duncan）等によつて、ジヤーナ
ル・オブ・イムノロジカル・メソツズ（J.
Immunol.Methods）第80巻、137〜140頁（1985）
に記載されている。しかしながら、これらの試薬
は、高い過剰量で使用する必要があり、従つて相
当な規模で副反応が進行する可能性がある。 〔本発明が解決しようとする課題〕 従つて本発明の課題は、チロシンにカツプリン
グされることができる基を有し、かつタンパク質
またはペブチドへ結合した際には副反応が小規模
で進行する二官能性化合物を提供することであつ
た。 〔課題を解決するための手段〕 この課題は、一般式 〔式中、Ａはアミン置換された芳香族基、および
Ｘは１〜10個の炭素原子を有する炭化水素基を表
わす〕の化合物によつて解決される。 Ｘは、有利に１〜６個の炭素原子を有する炭化
水素基であり、特に有利にはエチリデン基であ
る。 アミン置換された芳香族基Ａは、例えば自体公
知の方法によりジアゾニウム塩に変換することが
でき、このジアゾニウム塩は、再び容易にチロシ
ンまたはチロシン誘導体の芳香族環に結合し、そ
の後還元によつてチオピリジル基が脱離され、か
つSH−基が得られる。 特に有利な本発明による化合物は、次の通りで
ある： Ｎ−（４−アミノベンゾイル）−N′−（ピリジル
ジチオプロピオニル）−ヒドラジン、 Ｎ−（４−アミノベンゾイル）−N′−（ピリジル
ジチオアセチル）−ヒドラジン、 Ｎ−（４−アミノベンゾイル）−N′−（ピリジル
ジチオブチリル）−ヒドラジン、 Ｎ−（２−アミノベンゾイル）−N′−（ピリジル
ジチオプロピオニル）−ヒドラジン、 Ｎ−（２−アミノベンゾイル）−N′−（ピリジル
ジチオアセチル）−ヒドラジン、 Ｎ−（２−アミノベンゾイル）−N′−（ピリジル
ジチオブチリル）−ヒドラジン。 適当なのは、同様に、アミン置換された芳香族
基Ａが付加的に一回または数回アルキル置換され
ている化合物である。アミン置換は、一回または
数回芳香族基Ａで行なわれてよい。 本発明の化合物によつて、タンパク質またはペ
ブチドとのカツプリング反応の際に、使用した試
薬の約1/3の量が取りこまれるので、従つて反応
には試薬の約３倍の過剰量だけを使用するべきで
あることが、意想外にも判明した。 本発明のもう一つの対象は一般式の化合物の
製法であり、この場合には、カルボン酸基のアル
キル部分に１〜10個の炭素原子を有するピリジル
チオアルキルカルボ酸−Ｎ−ヒドロキシスクシン
イミドエステルを、芳香族環でアミン置換された
芳香族カルボン酸と反応させる。 ピリジルチオアルキルカルボン酸−Ｎ−ヒドロ
キシスクシンイミドエステルは、相応するピリジ
ルジチオアルキルカルボン酸から、Ｎ−ヒドロキ
シスクシンイミドおよび縮合剤、例えばジシクロ
ヘキシルカルボジイミド、ジイソプロピルカルボ
ジイミドまたはモルホリノエチルイソシアニドと
の反応によつて得られる。 ピリジルジチオアルキルカルボン酸のための出
発物質は、相応するメルカプトアルキルカルボン
酸である。この出発物質は２，2′−ピリジルジス
ルフイドとの反応によつて、所望の化合物に変換
される。 有利には、ピリジルジオプロピオン酸−Ｎ−ヒ
ドロキシスクシンイミドエステルは芳香環の位置
でアミン置換された芳香族カルボン酸のヒドラジ
ドと反応される。 有利な化合物Ｎ−（４−アミノ−ベンゾイル）−
N′−（ピリジルジチオプロピオニル）−ヒドラジ
ンを製造するには、ピリジルジチオプロピオン酸
−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルをｐ−
アミノ安息香酸ヒドラジドと反応させる。 本発明の別の対象は、チロシンまたはチロシン
誘導体、殊にペブチドまたはタンパク質中で結合
したチロシンまたはチロシン誘導体にSH−基を
導入するために、一般式の化合物、有利にＮ−
（４−アミノ−ベンゾイル）−N′−（ピリジルジチ
オプロピオニル）−ヒドラジンを使用することで
ある。この場合本発明による化合物は、基Ａのア
ミン置換によりチロシンの芳香環に結合され、環
元によつてチオピリジル基は脱離され、この場合
にSH−基が生じる。 本発明の有利な実施形において、基Ａのアミノ
基は、チロシンまたはチロシン誘導体との反応前
に、自体公知の方法によりジアゾ化され、その次
にこのジアゾ化化合物はチロシンまたはチロシン
誘導体と反応され、かつ還元剤の作用によつて
SH−基の遊離が惹起される。この場合、還元剤
は、チオール、例えばジチオトレイトールである
のが有利である。 適当なチロシン誘導体の例は、チロキシンおよ
びトリヨードチロニンである。本発明によりSH
基を導入することができるタンパク質の例は、
RSA、IgGおよびHBsAg（Ｂ型肝炎−表面抗原）
が、である。 本発明によれば、SH−基をチロシン側鎖に導
入することが可能になる。本発明による化合物の
ジアゾ化後の有利な組み込みの際に、ジアゾ基が
生じ、従つて、組み込み率は、簡単なUV−測定
によつて測定することができる。SH−基の遊離
は、本発明によれば選択的に還元剤の添加によつ
て初めて行なわれ、かつ同様にUV測定によつて
続行することができる。 また、本発明によれば、SH−反応性基、つま
りピリジルジチオ基、すなわちSH−基と反応可
能な基の導入が可能である。更に、還元過程は製
造の際には不要である。 〔実施例〕 以下の例につき本発明をさらに詳述する。 例 １ Ｎ−（４−アミノベゾイル）−N′−（ピリジルジ
チオプロピオニル）−ヒドラジンの合成 ｐ−アミノ安息香酸ヒドラジド242mgをジオキ
サン／水（３：１）20ml中に入れる。これにピリ
ジルジチオプロピオン酸−Ｎ−ヒドロキシスクシ
ンイミドエステル500mgを加える。室温で４時間
撹拌し、次に真空中で蒸発乾固させ、メタノール
から再結晶させる。結晶を吸引ろ過し、クロロホ
ルムで洗浄し、かつ真空中CaCl2上で乾燥させ
る。 収量：500mg＝理論値の89％ 1H−NMR（〔Ｄ〕6−DMSO／CD3CO2H）：δ＝
2.66（ｔ、Ｊ＝6.6Hz、2H）；3.09（ｔ、Ｊ＝6.6Hz、
2H）；6.6（ｄ、Ｊ＝7.2Hz、2H）；7.22（ｑ、Ｊ＝
4.5Hz、1H）；7.63（ｄ、Ｊ＝7.2Hz、2H）；7.81
（ｍ、2H）；8.47ppm（ｄ、Ｊ＝4.5Hz、1H）． 例 ２ Ｎ−（４−アミノベンゾイル）−N′−（ピリジル
ジチオプロピオニル）−ヒドラジンのヒツジ−
免疫グロブリンとのカツプリング (a) 試薬溶液の製造 Ｎ−（４−アミノベンゾイル）−N′−（ピリジ
ルジチオプロピオニル）−ヒドラジン５mg
（14.4μモル）を、０℃で5NHCl0.2ml中に溶か
す。これにNaNO2水溶液10μl（220mg／ml）を
加え、０℃で10分間撹拌し、2M尿素10μlを加
え、かつ再度０℃で10分間撹拌する。反応溶液
を氷冷水2μモル／mlに希釈し、直ちに使用す
る。 (b) ヒツジ−免疫グロブリンとのカツプリング
0.1Mホウ酸塩緩衝液（PH9.2）中のヒツジ−免
疫グロビリン500μlに0.8Mホウ酸塩緩衝液
500μl（PH9.2）を加える。０℃で次の物質を少
なくとも５回に分けて交互に加える：
0.14MNaOH500μlおよび前記の試薬溶液50μl。
これによれば免疫グロブリン１モル当り試薬15
モルが使用されていることになる。 ０℃で20分間、その後25℃で20分間インキユ
ベートし、かつセフアデツクス（Sepha−dex）
G25で脱塩する。 結合試薬の量Ｍの決定には、吸光度（CD）
を420nｍで測定し、次式にあてはめる： Ｍ（ミリモル／ｌ）＝OD420／3000 タンパク質濃度の測定後、組み込み率4.8：
１が得られる。 (c) ジチオトレイトールを用いてのSH−基の遊
離 タンパク質溶液を、2M酢酸でPH4.5に調節
し、かつジチオトレイトールを加え20ｍＭにす
る。25℃で20分間インキユベートする。343n
ｍにおける吸光率測定（遊離されたチオピリド
ンの吸光度）によつて遊離されたSH−基を測
定する。8.08で割つた吸光率の上昇（OD343）
によりSH−基の濃度μモル／mlが得られる。
負荷度SH−基５／IgG・１分子が得られる。 同様に、HBsAg（Ｂ型肝炎表面−抗原）およ
びHBsAg（Ｂ型肝炎ｅ抗原）の際には、試薬の
使用された過剰量に応じてそれぞれSH基0.2〜
２モル／タンパク算１モルを組み込むことがで
きる。一般に、提供された試薬の３分の１が組
み込まれる。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 一般式 〔式中、Ａはアミン置換された芳香族基を表わ
し、Ｘは１〜10個の炭素原子を有する炭化水素基
を表わす〕の化合物。 ２ 請求項１記載の化合物の製法において、カル
ボン酸基のアルキル部分に１〜10個の炭素原子を
有するピリジルジチオカルボン酸−Ｎ−ヒドロキ
シスクシンイミドエステルを芳香環でアミン置換
された芳香族カルボン酸のヒドラジドと反応させ
ることを特徴とする請求項１記載の化合物の製
法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3809986A DE3809986A1 (de) | 1988-03-24 | 1988-03-24 | Verbindungen zur einfuehrung einer sh-gruppe in tyrosin |
| DE3809986.1 | 1988-03-24 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01283268A JPH01283268A (ja) | 1989-11-14 |
| JPH0552828B2 true JPH0552828B2 (ja) | 1993-08-06 |
Family
ID=6350603
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1070743A Granted JPH01283268A (ja) | 1988-03-24 | 1989-03-24 | 新規二官能性化合物およびその製法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4925945A (ja) |
| EP (1) | EP0339264B1 (ja) |
| JP (1) | JPH01283268A (ja) |
| AT (1) | ATE109468T1 (ja) |
| DE (2) | DE3809986A1 (ja) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998015572A1 (en) * | 1996-10-09 | 1998-04-16 | Akzo Nobel N.V. | A composition comprising an immobilised, acylated peptide |
| KR100465353B1 (ko) * | 1999-04-22 | 2005-01-13 | 주식회사유한양행 | 하이드라진 유도체 및 그의 제조방법 |
| CA2489712C (en) * | 2002-06-21 | 2016-07-12 | University Of Utah Research Foundation | Crosslinked compounds and methods of making and using thereof |
| WO2013010045A1 (en) | 2011-07-12 | 2013-01-17 | Biotime Inc. | Novel methods and formulations for orthopedic cell therapy |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE430062B (sv) * | 1977-03-04 | 1983-10-17 | Pharmacia Fine Chemicals Ab | Kopplings- eller tioleringsreagens |
| SE8302758L (sv) * | 1983-05-17 | 1984-11-18 | Pharmacia Ab | Sett for uppspjelkning av disulfidbindningar och derigenom erhallen forening |
| US4723012A (en) * | 1985-03-25 | 1988-02-02 | Japan Tobacco Inc. | Desmosine derivatives having a disulfide bond and preparation of artificial antigen using the same |
| US4797491A (en) * | 1986-03-17 | 1989-01-10 | Cetus Corporation | Compound 1-(3-(2-pyridyldithio)propionamido)-12-(5-hydrazidoglutaramido)-4,9-dioxadodecane |
-
1988
- 1988-03-24 DE DE3809986A patent/DE3809986A1/de not_active Withdrawn
-
1989
- 1989-03-22 AT AT89105157T patent/ATE109468T1/de not_active IP Right Cessation
- 1989-03-22 EP EP89105157A patent/EP0339264B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1989-03-22 US US07/327,304 patent/US4925945A/en not_active Expired - Fee Related
- 1989-03-22 DE DE58908128T patent/DE58908128D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1989-03-24 JP JP1070743A patent/JPH01283268A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0339264B1 (de) | 1994-08-03 |
| US4925945A (en) | 1990-05-15 |
| JPH01283268A (ja) | 1989-11-14 |
| DE58908128D1 (de) | 1994-09-08 |
| DE3809986A1 (de) | 1989-10-05 |
| EP0339264A1 (de) | 1989-11-02 |
| ATE109468T1 (de) | 1994-08-15 |
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