JPH01201159A - 分析器具 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、液体試料中の抗原もしくは抗体を検出、また
はその量を測定するための分析器具に関し、さらに詳し
くは血液、血しよう、血清、尿、縛 を髄液等の体液を試料とする・素免疫測定法を実施する
ための分析器具に関する。

（従来の技術） 血液、血しよう、血清、尿、を髄液等の体液を繕 試料とする・素免疫測定法は、臨床診断を目的とし急速
な進歩を遂げており、マイクロプレート、プラスチック
ビーズなどを用いる代表的なものから、全て機械が測定
を行う全自動アッセイシステムまで様々なタイプがすで
に登場している。

しかし、いずれも非常に手間がかかる１、あるいは装置
が非常に高価であるなどの問題点が残されており、使用
者は熟練した技術者、あるいは大規模な病院や検査セン
ターなどに限られていた。

そこで近年、小型の容器内で反応を行う簡易な縛 ・素免疫測定法の開発があいついでいる（特開昭６１−
１７３１６０号等）。これらは、多孔性のメンブレンに
抗原あるいは抗体を固定化した反応基体を容器に保持し
、体液成分中の抗体あるいは抗原を反素免疫測定法で用
いられている測定原理ミたとえばサンドイツチ法、競合
法などが全て使用可能である。また、その測定操作は、
検体、試薬を順次加えていくだけなので熟練技術は必要
とはせず、高価な装置も不用である。

（発明が解決しようとする課題） しかし、従来用いられている簡易型の分ｔｆｒＲ具は、
特開昭６１−１７３１６０号に示されているように、メ
ンプラン上での反応時間のコントロールのためのサンプ
ル保持層、あるいは反応試薬を含浸しておくビヒクル、
あるいは不溶性の不純物を除去するプレフィルタ−１あ
るいは全血試料から血球を分離する血球分離膜など、種
々のオーバーレイアを用いている場合が多い。これらの
オーバーレイアは検体が透過した後は不用となり、その
後の測定に支障をきたすため、分析器具から取り外し廃
棄する必要がある。

この場合、取り外したオーバーレイアは検体である体液
サンプルで汚染されており、不用意に取り扱うと種々の
病気の感染の危険性がある。

そこで、本発明が解決しようとする課題はかかる危険性
をなくすることにある。

（課題を解決するための手段） 本発明者はかかる課題を解決すべく鋭意検討した結果、
従来測定中に取り外して廃棄していたオーバーレイアを
分析器具の容器内の別の部分に収納することを着想し、
本発明に到達した。本発明は、液体試料中の抗原もしく
は抗体を検出するか又はその量を測定するための分析器
具であって、該分析器具は、該液体試料を導入するため
の開口部を設けた容器内に（イ）抗体又は抗原を固定化
した反応基体および（０）該液体試料を前処理するため
のオーバーレイアををし、該オーバーレイアは、該液体
試料を前処理するために該基体の上に位置することがで
き、かつ、該液体試料処理後該基体の上から該容器内の
任意の位置に移動することができることを特徴とする分
析器具である。

本発明の分析器具は、サンドイツチ法、競合法などの従
来から知られているエンザイムイムノアツセイの手法に
より、血液、血しよう、血清、尿またはを髄液等の液体
試料中の抗原もしくは抗体を検出するか又はその量を測
定するためのものである。そのために、本発明の器具は
、抗体又は抗原を多孔性メン・レン等に固定化した反応
基体を有している。液体試料が反応基体に到達すると、
液体試料中の抗原もしくは抗体が基体上に担持された抗
体もしくは抗原により捕捉され、さらに、標識抗体、発
色剤等により、試料中の抗原もしくは抗体が検出される
か又はその量が測定される。

上記のようにして液体試料中の抗原もしくは抗体を測定
するにあたり、液体試料が直接反応基体に注がれること
は好ましくないことか多い。このため、本発明の器具に
は、反応基体上に（反応基体に直接接して又は直接接す
ることなく）オーバーレイアが置かれる。本発明におい
て、オーバーレイアは主として下記のために置かれるも
のである。

（イ）不溶性の不純物または不溶性物質を多く含む試料
が検体である場合、プレフィルタ−として用いるため、 （０）全血試料が検体である場合、血球分離が必要とな
り、そのための分離膜として用し）るため、（ハ）反応
時間を確保する必要がある場合、サンプル保持層として
用いるため、 （ニ）反応操作を簡略にするために反応試薬をあらかじ
め含浸させた層が必要な場合、その含浸層として用いる
ため、 （ネ）液体試料を直接反応基体に注ぐこと力（好ましく
ないために、上記以外の目的で液体試料の前処理用とし
て用いるため、 上記のような目的のために用いられるオーツ（−レイア
としては、繊維状材料（ガラス繊維、セルロース繊維等
）からなる濾紙が好ましし）。

本発明の分析器具は、上記の反応基体およびオーバーレ
イアを主構成要素とするが、これら（よ容器の中に入れ
られている。液体試料は容器の開口部を通して、オーバ
ーレイア上に注力くれ、つ〜１で前処理された液体試料
は反応基体上に到達する。

反応基体の下には通常吸収）くラドが置かれ、反応後の
液体試料が吸収される。

血液等の体液成分は、種々の病原菌、ウイルスなどに汚
染されていることが多い。このため、試料の前処理がな
されたオーバーレイアはかかる病原菌、ウィルス等が付
着し、汚染されることとなる。従来、オーバーレイアは
前処理後、以後の分析操作の障害になるため、分析器県
外に取り除かれていたが、汚染されたオーバーレイアが
散逸して、感染事故を引きおこすおそれが高い。このた
め、本発明の器具では、前処理後のオーバーレイアは取
り外されることなく、反応基体上から分近器具内の任意
の位置に移動することができるようになっている。

オーバーレイアの収納個所は、分析器具本体内に収納で
きるようにしてあれば特に限定されるものではないか、
以下の実施例に示すように、反応基体の横に収納スペー
スを設け、分析容器表面に出たスライドレバーを引っ張
ることにより、反応基体上のオーバーレイアを収納スペ
ースに移動させるのが簡便である。分析容器内部にはオ
ーバーレイアの移動がスムーズにできるようにレール等
の誘導路を設けるのが望ましい。

以下、実施例によって本発明の分析器具について具体的
に説明を行うが、本実施例は本発明の器具の一例を示す
ものであり、これによって本発明のｆｌ囲が限定される
ものではない。

（実施例） Ａ、器具の態様 オーバーレイア収納機構のついた血中のｈＣＧ（人じゆ
う毛ゴナドトロピン）検出用の分析器具を作成した。第
１図に分析器具の外観、第２図〜第５図にその内部構造
を模式的に示した。図に示す器具では、反応基体（６）
の上にオーバーレイア（１）が設けられ、液体試料は開
口部（反応孔）に注がれ、オーバーレイアを通って反応
基体に到達し、反応後の試料は下の吸収パッド（７）に
吸収されるようになっている。

反応基体は、固相化用担体として多孔性のニトロセルロ
ース膜（孔径０．４５μｍ）を用いて１次抗体を固定化
したものであり、以下のようにして作製した。多孔性の
ニトロセルロール膜を、スリット状の吸引濾過装置（ハ
イブリスロットシステム、ベセスダリサーチ社）ｆこセ
ットし、１次抗体であるマウス抗ｈＣＧ（α鎖）モノク
ローン抗体をＰＢ　Ｓ　（０，０２Ｍリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ７，４）　、０．１５Ｍ食塩）にｌμｇｈＱの１度で
溶解した固相化用溶液を、アスピレータ−で吸引しなが
ら０．１１Ｉｌ１２分注することにより、ニトロセルロ
ース膜上に固定化した。この膜を室温で風乾した後、１
次抗体を固相化した部分とクロスする位置にバイブリス
ロフトシステムのスリットか来るように、もう−度セッ
トし、このスリットにヤギ抗マウスＩｇＧ抗体をＰＢＳ
にｌμｇ／ｒｏＱの濃度で溶解した溶液を、アスピレー
タ−で吸引しなからＯ，ｌａ＋（分注することにより固
定化した。この膜を室温で風乾した後、ブロッキング液
（１％ウシ血清アルブミン１０．０５％Ｔｖｅｅｎ２０
／　ＰＢＳ）に、室温で１８時間浸漬した後、室温で風
乾したものを反応基体とした。オーバーレイアーとして
は、ガラス繊維製フィルターを用い、吸収パッドとして
は、酢酸セルロース繊維をパッドに加工したものを用い
た。

この分析器具では、分析容器の上面にオーバーレイアＯ
とスライドレバー（３）が設けられているので、スライ
ドレバーを左右に動かすことにより、オーバーレイアと
ダミーのフレーム（２）がスライドし、交互に分析容器
の上面の反応孔の下に移動することができるようになっ
ている。本器具ではこのようにしてオーバーレイアが収
納されるようになっている。また、オーバーレイアとダ
ミーのフレームは一体成形したものを用い、分析容器外
枠（５）に設けられた誘導路（４）に沿って移動するこ
とにより、左右のぶれをなくシ、ダミーのフレームが反
応孔の下に正確に位置するようにした。

Ｂ、器具の使用 図のようなオーバーレイア収納機構のついた本発明の分
析器具を用いてｈＣＧｉａ度がそれぞれ、０．２５．１
００ＯＩＵ／ＩＱの血清について３回ずつ測定を行った
。測定は以下の方法で行った。まず、検体の血清０．１
＋ｆ２を試験管に入れた。次に、アルカリフォスファタ
ーゼ標識したマウス抗ｈＣＧ（βｍ）モノクローン抗体
を１％ウシ血清アルブミンおよび０．０５％のＴｖｅｅ
ｎ２０を含むＰＢＳにＪｕｇ／ｌａ（の濃度に溶解した
溶液を０．１ｍＱ加えて、２〜３分後に溶液がすべてオ
ーバーレイアを通過するまで静置した。

さらに第１図に示したように、分析器具のスライドレバ
ーが左にきた状態で、検体血清と標識抗体の混合溶液を
、まん中のオーバーレイアの上に注入した。２〜５分後
に反応溶液が全てオーバーレイアを通過した後、スライ
ドレバーを右いっばいまで靜かにスライドさせた。オー
バーレイアのかわりにあられれたダミーのフレームで囲
まれた反応用に、発色試薬を１ｍ１２加えた。発色試薬
の組成は、ＢＣＩ・（５−ブロモ−４−クロロインドキ
シルフォスフェート）のＤＭＦ溶’に１（５ｍｇ／ｍ＆
）　０．１ｍｆ２と、ＮＢＴ　にトロブルーテトラゾリ
ウム）の０．１５Ｍベロナール酢酸緩衝液（ｐ！（９，
６）溶液（ｌｒａｇ／＋＋＋ｊ）　１１と、２Ｍ−Ｍｇ
Ｃｊ、２０μＱを、９−のＯ，１５′Ｍベロナール酢酸
緩衝液溶液に加えたものである。３〜５分後に反応基体
の中央部にあられれる記号が「＋」であるか「−」であ
るかを目視で判定した。

その結果、０！Ｕ／ｍ１７ではすべて「−」と判定され
、２５．１００ＯＩＵ／−はずべて（−＋、ｊと判定さ
れた。この結果は、オーバーレイアをとりはずす従来の
ｉす定器具を用いた場合の結果とまったく一致するもの
であった。

（発明の効果） 以上のように、本発明の分析器具は液体試料を前処理し
た後のオーバーレイアを分析器具内に収納することかで
きるようになっているので、試料により汚染されたオー
バーレイアの散逸を防ぐことができる。これにより、汚
染されたオーバーレイアにもとづく感染事故の発生を防
ぐことができる。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の器具の概要を示す斜視図であり、第２
図は使用前の本発明の器具を示す平面図であり、第３図
はその断面図である。第４図はオーバーレイアを収納し
た状態の本発明の器具を示す平面図であり、第５図はそ
の断面図である。 図中、 １・・・オーバーレイア　　２・・・ダミーのフレーム
３・・・スライドレバー　　４・・・スライドの際の誘
導路５・・・容器外枠　６・・・反応基体 ７・・・吸収パッド 特許出願人　株式会社　り　ラ　し

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 液体試料中の抗原もしくは抗体を検出するか又はその量
   を測定するための分析器具であつて、該分析器具は、該
   液体試料を導入するための開口部を設けた容器内に（イ
   ）抗体又は抗原が固定化された反応基体および（ロ）該
   液体試料を前処理するためのオーバーレイアを有し、該
   オーバーレイアは、該液体試料を前処理するために該基
   体の上に位置することができ、かつ、該液体試料処理後
   該基体の上から該容器内の任意の位置に移動することが
   できることを特徴とする分析器具。