JPH01153683A - アミノ置換チオピリリウム化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は新規ピリリウムおよびそれらの使用法、詳細に
は癌細胞の治療における使用法に関する。

〔従来の技術〕

２．４および６位が未置換もしくは置換フェニルで置換
されたピリリウムはこれまでに報告されている。米国特
許第４，３４１，８９４号明細書には、それらは増感剤
として電気光導電性組成物に有用であることが記載され
ている。特願昭６３−７８３０４号においては、ある種
のチオピリリウムが抗腫瘍組成物、具体的にはある種の
癌および黒色腫の治療において有用であることが示され
ている。（従来は、かかる化合物はチアピリリウムとも
呼ばれていた。）〔発明が解決しようとする課題〕 上記報告に記載された化合物はいずれも本発明の化合物
、すなわちフェニル置換基の少啄くとも２個がアミノ基
を有するものとは異なるものである。従来記載されてき
たビリリうムの幾つかは、幾つかの種類の癌の治療にお
ける効能を示している。解決すべき問題点は癌の治療に
おいて更に改良された効能を有する新規ピリリウムを提
供することである。

〔課題を解決するための手段〕

本発明の一つの観点によれば、上記の問題点は構造式（
１） （式中、ＱはＯｌＳまたはＴｅであり、Ｒ３はＨ１１〜
３個の炭素原子を有するアルキルまたはアルコキシまた
は Ｎ（Ｒ４）２・（Ｈ２’）　、、であり、Ｒ４はＨまた
は１〜３個の炭素原子を有するアルキルであり、 ＺおよびＺ′は独立にアニオンであり、ｎは０または１
であるが、但し、（Ｈｚ’）基は１個しか存在しないも
のとする）を有する新規ピリリうムによって解決される
。

本発明のもう一つの観点によれば、上記問題点は、下記
の構造式 （式中、Ｒ４およびＲ２はそれぞれ Ｎ（Ｒ４）２・（Ｈ２’）　、またはＨであり、Ｒ３は
Ｎ（＋２４）２−（ＦＩＺ’）、、、Ｈまたは１〜３個
の炭素原子を有するアルコキシであるが、但し、フェニ
ル環の少な（とも２個はそれぞれメタ−もしくはバラ−
位に −Ｎ（Ｒ４）２−　（Ｈ２’）　、、置換基を有しティ
るものとし、Ｒ４はＣＨ３またはＨでありかつＲ３−Ｒ
３のそれぞれにおいて同じものであるかまたは異なるも
のであることができ、 ＺおよびＺｌは独立にアニオンであり、ｎはＯまたは１
であるが、但し、（１１２’）基は１個しか存在しない
ものとする）を有するピリリウムの好ましい種類によっ
て解決される。　　　゛本発明者らは、本発明の新規ピ
リリウムが癌細胞の効果的な化学療法的治療のような著
しい特性を提供することを見出した。この治療は分化癌
および黒色腫に特に有用である。それらは電気光導電性
組成物の増感剤としても有用である。本明細書に用いら
れる「分化癌（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｃｌ、ｃａ
ｒｃｉ−ｎｏｍａｓ）　」とは、（米国の６５才以上の
男性人口の約５０％に起こる）前立腺癌の約９０％を占
める腺癌、はとんどの偏平上皮細胞癌および総ての移行
細胞癌である。この用語は肺のエンバク細胞癌もしくは
大細胞癌または余り分化していない癌は包含しない。か
かる癌は本発明によって影響されるとは思われない。

本文記載の分化症の効果的治療は、腫瘍の成長の後退お
よび／または抑制、および腫瘍の緩解を生じる。本発明
によって治療可能な具体的な器官癌には、肺癌（前記し
たものを除り）、結腸癌、乳癌、膀胱癌、前立腺癌、膵
臓癌、胃癌、腺癌、食道癌、舌癌、鼻咽頭癌、膵臓癌、
卵巣癌および翠丸癌がある。

本発明は、アミノ基で置換された少なくとも２個のアリ
ールを有する２、４．６−トリアリールピリリウム染料
およびチオおよびテルロ類似体を特徴とする。

更に具体的には、本発明のピリリウム染料は前記に示さ
れた構造式（Ｉ）を有するものであり、最も好ましいも
のは前記構造式（ビ）を有するものである。Ｒ１−Ｒ４
については、アルキルの例にはメチル、エチル、プロピ
ル、イソプロピル、アミルおよびｔ−アミルがある。ア
ルコキシの例はメトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソ
プロポキシ、アミルオキシおよびｔ−アミルオキシであ
る。Ｑの選択によって、化合物はピリリウム、チオピリ
リウムまたはテルロピリリウムのいずれかになる。最も
好ましい染料はチオピリリウムである。

本明細書で用いられる「アニオン」とは、染料のカチオ
ンを用いて合成することができる任意のアニオンである
。例えば、テトラフルオロボレートとベルクロレートは
有用なアニオンである。

［製薬上受容可能なアニオン」とは、宿主哺乳類に対し
て毒性を持たないアニオンを意味する。有用な製薬的ア
ニオンには、クロリド、プロミド、ヨーダイトおよびフ
ルオリドのようなハロゲン化物；脂肪族および芳香族ス
ルホネート例えばメタンスルホネート、トリフルオロメ
タンスルホネート、ｐ−トルエンスルホネート（トシレ
ート）、ナフタレンスルホネートおよび２−ヒドロキシ
エタンスルホネートのようなスルホネート；シクロヘキ
サンスルファメートのようなスルファメート；メチルス
ルフェートおよびエチルスルフェートのようなスルフェ
ート；重硫酸塩；ホウ酸塩；リン酸ジメチル、リン酸ジ
エチルおよびリン酸水素メチルのようなリン酸アルキル
およびジアルキル；゛　ピロリン酸トリメチルおよびピ
ロリン酸水素ジエチルのようなピロリン酸塩；およびカ
ルボン酸塩、好ましくはカルボキシ−およびヒドロキシ
−置換カルボン酸塩がある。カルボン酸塩の好ましい例
には酢酸塩、プロピオン酸塩、バレリン酸塩、クエン酸
塩、マレイン酸塩、・フマル酸塩、乳酸塩、コハク酸塩
、酒石酸塩および安息香酸塩がある。

癌細胞の治療にとって、最も好ましいアニオンはハロゲ
ン化物である。

例えば、この種類の有用なチオピリリウムには、前記ア
ニオンのいずれかによって形成される塩があり、これら
のチオピリリウムは表−１に示す。

ｌ二よ Ｔ−１２，６−ビス（３−アミノフェニル）−４−（４
−（ジメチルアミノ）フェニルコチオピリリウムクロリ
ド、 Ｔ−２２，４，６−）リス（４−アミノフェニル）チオ
フェニルクロリド、 Ｔ−３２，６−ビス（４−アミノフェニル）−４−フェ
ニルチオピリリウムクロリド、Ｔ−４２，６−ビス（４
−アミノフェニル）＝４−（４−メトキシフェニル）チ
オピリ・　リウムクロリド、 Ｔ−５２，６−ビス（４−アミノフェニル）−４−（４
−（Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノ）フェニルコチオピリリウ
ムクロリド、 Ｔ−６２，６−ビス（４−ジメチルアミノフェニル）−
６−フェニルチオピリリウムペルクロレート、 Ｔ−７２，６−ビス（４−アミノフェニル）−４−（４
−（Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノ）フェニルコチオピリリウ
ムテトラフルオロポレート。

上記複塩も有用であり、これらはｎ＝１であるときに上
記構造式（Ｉ）について生じる。例えば、ジクロリドは
アミン窒素原子を塩酸でプロトン化することによって８
周製することができる。

金−成 下記の反応工程（ＩＩ）は本発明のチオピリリウムの一
合成法である。

以下≦、白 Ｎ　（ＣＨ３）２ ■ 下記の調製は説明のためのものである。

■製適土　１．５−ビス（４−アミノフェニル）−３−
（４−（Ｎ、Ｎ−ジメチルアミ ノ）フェニル〕ペンター１．５−ジオ ン（上記化合物（１）） ４′−アミノアセトフェノン（１４；９７ｇ、　　０．
１１１モル、２当量）と４−Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノ−
ベンズアルデヒド（８，２８ｇ、　　０．０５６モル）
とをテトラヒドロフラン（ＴＨＦ、　　１５０ｄ）中で
混合して溶解した。カリウムｔ−ブトキシド（１２，４
３ｇ、　０．１１１モル、２当量）を−度に加えて、深
紅色溶液を生じた。反応混合物を室温で３時間撹拌し、
塩化アンモニウム（６ｇ）を加えた。ジクロロメタンを
加えて、混合物を濾過して無機塩を取り除いた。

濃縮した後、残渣を熱クロロホルム（Ｌｏｏｍ）で粉砕
して濾過し、濾液を保存した（濾液Ａ）。沈澱を熱クロ
ロホルム（３００ｄ）で粉砕して濾過し、濾液を濃縮し
て、３．４３ｇ　、（１５％）の（１）を生成した。固
形残渣（７，４７ｇ）は、水性溶液からジクロロメタン
抽出により、３．０３ｇ　（１４％）の（１）と４．４
４４　ｇの無機塩とからなることが示された。濾液Ａを
濃縮した後、エタノールで粉砕した。不溶性固形物を纏
めて、熱クロロホルム（４００ｄ）に溶解し、濾過し、
濾液を濃縮したところ、かなり純粋な（１）　６．８０
ｇ　（３０％）を生成した（総酸率５９％）。

’Ｈｎｍｒ　（３００Ｍｎ２．　ＣＤ３ＣＮ）：６７．
７４５　（４１（、ｄ、　Ｊ＝８．６４　Ｈｚ）；７．
０９０　（２Ｈ，ｄ、　Ｊ　＝　８．６４　Ｈｚ）；６
．６３２　（４Ｈ，ｄ、　Ｊ　−８，６３１（ｚ）；６
．６２８　（２Ｈ，ｄ、　Ｊ　＝　６．７０　Ｈｚ）；
４．７９３　（４）１　ｂｒ　ｓ）； ３．８０７　（ＩＨ，ｍ（５）、　Ｊ＝７．２９　Ｈｚ
）；３．２２４　（２８，ｄｄ、　Ｊ−１５，８６，２
，１１＋１ｚ）；３．１１５　（２Ｈ，ｄｄ、　Ｊ＝１
５．８６．３．１５　　Ｈｚ）；２．８５３　（６Ｈ，
ｓ）； ＩＲ（ＫＢｒ）： ３４７０ｃｍ−’　（ｍ）； ３３６０ｃｍ伺（Ｓ）： ３２２０ｃ＋＋伺（ｍ）： １６６０ｃ＋＋ｒ’　　（Ｓ）； １６３０ｃｍ−’　　（ｓ）； １５９０ｃ＋ｎ−’　　（ｓ）。

ＦＤＭＳ：　　ｍ／ｅ　４０１　（Ｍ＋）。

！　　１　、５−ビス〔４−アセタミドフェニル）　−
３−（４−（Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノ）フェニル〕ペン
ター１，５− ジオン（前記化合物（２）） １．５−ジケトン（’１）（２，００ｇ、４．９８ｇミ
リモル）を１２５ｍＲフラスコに入れた。無水酢酸（２
０ｄ、過剰量）を加え、混合物を１時間撹拌したところ
、淡黄褐色溶液を生じ、これをＴＬＣ分析したところ（
１）は見られなかった。水（５０ｍＮ）を加え、混合物
を撹拌して均一にした。

次に、混合物を１０％ＮａＯＨ（２００ｍｌ　）に空け
て、ジクロロメタン（３Ｘ７５ｄ）で抽出した。まとめ
た抽出液を乾燥しくＮａ２５Ｏ４）、濃縮した。残渣を
フラッシュ（３２〜６３メツシユ、）シリカゲルパッド
を通してクロマトグラフィを行い（ジクロロメタンで適
用、酢酸エチルで溶出’）　、１．５９ｇ　（６６％）
の（２）を得て、カラムの最上部に赤色のピリリウムバ
ンドが残った。

’）ｌ’ｎｍｒ　（３００ＭＨ２，ＣＤ３ＣＮ）：δ８
．５６８　（ＩＨ，ｂｒ　ｓ）； ７．９１９　（４８，ｄ、　Ｊ　＝　８．７２　Ｈｚ）
；７．６５８　（４Ｈ，ｄ、　Ｊ　＝　８．６８　Ｈｚ
）；７．１０４　（２Ｈ，ｄ、　Ｊ　＝　８．６１　Ｈ
ｚ）；６．６３９　（２Ｈ，’　ｄ、　Ｊ　＝　８．６
８　Ｈｚ）；３．８４８　（ＩＨ，ｍ（５）、　Ｊ＝７
．３０　Ｈｚ）；３．３５４　（２Ｈ，ｄｄ、　Ｊ＝１
６．３９．６．５９　　Ｈｚ）；３．２７２　（２Ｈ，
ｄｄ、　Ｊ＝１６．３７．７．８７　　Ｈｚ）；２．８
５４　（６１１，ｓ）；２．１７２　（６Ｈ，ｂｒ　ｓ
）；２．１７２　（６８，ｂｒ　ｓ）。

ＩＲ（ＫＢｒ）： ３３２０ＣＴｌ＋−’　（ｍ、ｂｒ）；１６７０ｃｍ−
’　（ｓ、ｂｒ）； １５９０ＣＴＩ＋−’　（ｓ）。

ＦＤＭＳ　：　　血４８５（Ｍ４）； ４７１　（Ｍ”　−ＣＨ３＋Ｈ）。

ｍ上　２，６−ビス（４−アミノフェニル）−４−（４
−（Ｎ、Ｎ−ジメチルアミ ノ）フェニルコチオピリリウムクロリ ド（前記化合物（３）） 保護された１、５−ジケトン（２）（２，５０ｇ、５．
１５ミリモル）と、五硫化リン（４，５９ｇ、２０．６
ミリモル、４当量）と、塩化リチウム（１，５３ｇ、３
６．１ミリモル、７当量）を酢酸（３０ｍｌ）中で混合
し、還流温度まで３時間加熱した。反応混合物を熱時濾
過し、沈澱を熱酢酸とメタノールで洗浄した。濾液をエ
ーテルで希釈したところ、ガム状沈澱を生じ、これを集
めて減圧−で乾燥した。この固形物を熱メタノール（２
００ｍＮ）で粉砕し、濾過して、残渣（約１．２　ｇ　
）を真空で乾燥した。この固形物にメタノール（３０＋
ｊりと濃塩酸とを加え、紫色溶液を９０°Ｃまで７２時
間加熱した。冷却後、溶液をエーテルで希釈して、紫色
沈澱として（３）（６６３ｍｇ、（２）から３０％）を
得た。

’Ｈｎｍｒ　（３００ＭＨ２，ＣＤ３０Ｄ）：６８．４
７８　　（２Ｈ，ｓ）； ８．１８１　　（２Ｈ，ｄ、　　Ｊ　　＝　　９．３１
　Ｈｚ）；７．９３２　　（４０，ｄ、　　Ｊ　　＝　
　８．７４　Ｈｚ）；７．０４８　　（４Ｈ，ｄ、　　
Ｊ　　”　　８．７６　Ｈｚ）；７．０００　　（２Ｈ
，ｄ、　　Ｊ　　＝　　９．２３　Ｈｚ）；３．２２４
　　（６Ｈ，ｓ）。

ＩＲ（ＫＢｒ）： ３３９０ｃｍ−’　　（ｍ、ｂｒ）； １６００ｃｍ−’　　（ｍ）； １５５０ｃｍ−’　　（ｓ、ｂｒ）； １５０５ｃｍ−’　　（ｓ）。

ＦＤＭＳ：　　　３９Ｂ　　（Ｍ”　）；３８４　　（
７χ、　　Ｍ−ＣＩ（３＋Ｈ）。

ＵＶ／可視（ＣＨ３０Ｈ，εＸ　１０−”）　：λｌ１
１．．２９３ｎｍ　　（１４，１）；３３２　ｎｍ　　
（１３，８）； ５６９　ｎｍ　　（５２，０）。

他の有用な合成法には、下記のような反応（ＩＩＩ）〜
（Ｖｌ）がある。

以下余白 ＮＨ２ＮＨ２ ＮＨ２ＮＨ２ 血 ＼、／ ＮＨ２ＯＣＨ３ ０Ｃ，Ｈ３ ■ ／＼ Ｍ　　１．５−ビス（３−アミノフェニル）−３−（４
−Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノ フェニル）ペンタ−１，５−ジオン （前記反応工程における化合物（４））３′−アミノア
セトフェノン（１０，０ｇ　、　　０．０７４モル、２
．０当量）と４−Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノベンズアルデ
ヒド（５，５２ｇ、０．０３７モル）とをＴＨＦ　１０
０ｍｆｆ１中で混合して溶解した。カリウム１−ブトキ
シド（８，３０ｇ、０．０７４モル、２．０当量）を全
量を一度に加えた。発熱反応が認められ、溶液は無色か
ら褐赤色に変化した。反応混合物を室温で３日間撹拌し
、その時点で平行に達したものと判定した。溶媒を減圧
で留去し、残渣をジクロロメタンで粉砕し、濾過した。

濾液を濃縮して、残渣をフラッシュシリカゲルバンド（
前記）上でクロマトグラフィに掛けて（２：１酢酸エチ
ル：ヘキサン溶出液）、純粋な（４）（１，４２ｇ、１
０％）と少量の副生成物の混入した（４）（４，８５ｇ
、３３％）を得た。

’Ｈｎｍｒ　（３００Ｍ）１２．　ＣＤＣ１３）ニア、
３７　（２Ｈ，ｄ、　Ｊ＝　７．５５　Ｈｚ）；７．２
６　（２Ｈ，ｓ）； ７．２３　（２）１．　ｔ、　Ｊ＝　７．８０１（ｚ）
；７．１５　（２Ｈ，ｄ、　Ｊ＝　８．６０　Ｈｚ）；
６．８６　、（２Ｈ，ｄｄ、　Ｊ　＝　１．９３．７．
８３　Ｈｚ）；６．６８　（２１（、ｄ、　Ｊ＝　８．
６２　）１ｚ）；３．９６　（１）１．　ｍ（５）、　
Ｊ　＝　６．９６　）１ｚ）；３．７８　（４Ｈ，ｂｒ
　、ｓ）； ３．４１　（２Ｈ，ｄｄ、　Ｊ　＝　７．０５．１６．
２５　Ｈｚ）；３．２５　（２Ｈ，ｄｄ、　Ｊ＝７．０
３　Ｈｚ。

１６、２７　Ｈｚ）　； ２．９１　、（６Ｈ，ｓ）。

ＦＤＭＳ：　　　ｍ／ｅ　４０１　　（Ｍ”　）。

ｎ　　２．６−ビス（３−アミノフェニル）−４−（４
−Ｎ、Ｎ−−ジメチルアミ ノフェニル）チオピリリウムクロリド （前記化合物（５）） 調製例３の１．５−ジケトン（化合物（４））（１，７
２ｇ、４．２８ミリモル）と三硫化リン（３，３４ｇ、
１４．９９ミリモル）と塩化リチウム（１，２７ｇ　、
　２９．９６ミリモル、７当量）とをフラスコに入れ、
氷酢酸（２２ｍＲ）を加えた。反応混合物を還流温度ま
で３．５時間加熱して、熱時濾過した。生成する沈澱を
酢酸で洗浄し、総ての紫色を除き、沈澱を捨てた。濾液
をエーテルで希釈して、ガム状固形物を得て、これをメ
タノールからエーテル添加によって再結晶して、紫色沈
澱５２９ｍｇを得た。これをメタノール（２０、ｍ１ｌ
）に溶解して濃塩酸（８ｍｌ　）で処理し、混合物を９
０°Ｃで２４時間加熱してホスファミドを分離した。室
温まで冷却したところ、青色法ｉ１（１６２ｍｇ）状の
化合物（５）を生成し、これは更に精製する必要はなか
った。

’Ｈｎｍｒ　　（３００ＭＨｚ、　　ＤＭＳＯ−６６）
：８．８０１　　（２Ｈ，ｓ）； ８．４５５　　（２Ｈ，ｄ、　　Ｊ　　＝　　９．３１
　　Ｈｚ）；７．３３　　（４）１．　　ｍ）； ７．２９９　　（２Ｈ，ｓ）； ７．００７　　（２Ｈ，ｄ、　　Ｊ　　＝　　８．４２
　Ｈｚ）；６．９７８　　（２Ｈ，ｄ、　　Ｊ　　＝　
　９．３２　Ｈｚ）；３．２４１　　（６８，ｓ）。

ＦＤＭＳ：　　　ｍ／ｅ　３９Ｂ　　（Ｍ”　）；３８
４　　（７ｚ５Ｍ　“−ＣＨ３＋Ｈ）。

ＵＶ／可視（ＭｅＯＨ，εＸＩＯ−”）：２４３　ｎｍ
　　（２７，４）； ３７５　ｎｍ　　（９，４）； ５５６　ｎｍ　　（３７，６）。

皿製炎Ｉ　ｉ　、５−ビス（４−アミノフェニル）−３
−（４−アセタミド−フェニル） ペンペンタ−１，５−ジオン（前記化 合物（６）） ４′−アミノアセトフェノン（５，０ｇ、３７ミリモル
、２当量）と４−アセタミドフェニルデヒト（３，０２
ｇ、１８．５ミリモル）とを、ＴＨＦ　５０ｍｆｌ中で
混合して溶解した。カリウムｔ−ブトキシド（４，１５
ｇ、　３７ミリモル、２当量）を−度に加えたところ、
反応混合物は直ぐに赤色になった。室温で一晩撹拌した
後、ＴＬＣ分析を行ったところ出発物質はなく、多量の
沈澱が見られた。混合物を希塩化アンモニウム溶液に空
けて、塩化メチレン（２Ｘ７５ｄ）と１＝１塩化メチレ
ン：アセトニトリル（２ｚ７５ｍＮ）とで抽出した。ま
とめた抽出液を乾燥しくＭｇ５０４）、濃縮すると、観
察可能なほどの不純物は含有しない化合物（６）７．２
７ｇ（９５％）を得た。

’Ｈｎｍｒ　（３００ＭＢ２．　ＣＤ３ＣＮ）：８．２
１１　（ＩＨ，ｂｒ　ｓ）； ７．７２９　（４Ｈ，ｄ、　Ｊ　＝　８．４５　Ｈｚ）
；７．３６０　（２Ｈ，ｄ、　Ｊ　＝　８．１９　Ｈｚ
）；７．１８１　（２Ｈ，ｄ、　Ｊ　＝　８．２８　＋
１ｚ）；６．６１６　（４Ｈ，ｄ、　Ｊ　＝　８．４９
　Ｈｚ）；４．８０５　（４Ｈ，ｂｒ　ｓ）； ３．８６１　（ＬＨ，ｍ（５）、　Ｊ＝７．０９１１ｚ
）；３．２４３（２）１．　”ｄｄ、　　Ｊ　　＝１６
．０４．　５．８３　Ｈｚ）；３．１８２　　（２８，
ｄｄ、　　Ｊ＝１５．９８．　８．２０　Ｈｚ）；２．
１９３　　（３８，ｓ）。

ＦＤ’ＭＳ：　　　ｍ／ｅ　４１５　　（Ｍ”　　）。

璽製拠５　１，３．５−）リス（４−アセタミドフェニ
ル）ペンタ−１，５−ジオン （前記化合物（７）） 調製例４の１，５−ジケトン（化合物（６））（３，Ｏ
Ｏｇ、７．２２ミリモル）を過剰量の無水酢酸（３０ｄ
）を用いて室温で激しく撹拌しながら処理した。ＴＬＣ
分析によれば、２時間後には化合物（６）の総ては消費
されており、水１００ｒｄを加えた。この混合物を１．
５時間撹拌した後、１０％水酸化ナトリウム溶液３００
ｄに空けた。これにより淡黄色沈澱を生じ、これを集め
て風乾したところ、化合物（７）　３．２２ｇ’　（８
９％）を生成し、この化合物は更に使用するのに十分に
純粋であった。

’Ｈｎｍｒ　（３００ＭＨｚ、　Ｃ１１３ＣＮ）：８．
５６　（２Ｈ，ｂｒ　ｓ）； ８．１９　（ＩＨ，ｂｒ　ｓ）； ７．９０　　（４Ｈ，ｄ、　　Ｊ＝　　８．６６　Ｈｚ
）；７．６４　　（４）１．　　ｄ、　　Ｊ＝　　８．
４５　）１ｚ）；７．３８　　（２Ｈ，ｄ、　　Ｊ＝　
　８．４３　Ｈｚ）；７．２０　　（２Ｈ，ｄ、　　Ｊ
＝　　８．４５　Ｈｚ）；３．９０　　（ＩＨ，ｍ（５
）、　　Ｊ　　＝７．２０　Ｈｚ）；３．３８　　（２
Ｈ，ｄｄ、　　Ｊ　＝１６．６０．　６．５９　Ｈｚ）
；３．３０　（２Ｈ，ｄｄ、　　Ｊ　＝１６．５９．　
７．７５　Ｈｚ）；２．１６　　（６Ｈ，ｓ）； ２．０９　　（３Ｈ，ｓ）。

ＦＤＭＳ：　　　ｍ／ｅ　４９９　　（Ｍ”　）；３２
２　　（Ｍ”　　　ＡｃＮＨＰｈＣＯＣＨｚ）。

実旌孤主　２，４．６−）リス（４−アミノフェニル）
チオピリリウムクロリド（前記 化合物（８）） トリスアセタミド（前記化合物（，７））　（２，００
５６ｇ、４．０２ミリモル）と三硫化リン（４，０６ｇ
、１８．２ミリモル、４．５当量）と塩化リチウム（１
，２ｇ、２８ミリモル、７当量）とを混合して、氷酢酸
２５ｍ！を加えた。混合物を還流温度に３時間加熱した
ところ、沈澱を有する赤色溶液を得た。これを熱時濾過
し、沈澱を酢酸で洗浄した。赤色に着色した物質は沈澱
中に残っていたので、これを水（５０ｄ）で粉砕し、残
りの固形物を集めて風乾した。更に、酢酸濾液をエーテ
ルで希釈して、生成する沈澱を集めた。固形物をまとめ
て、熱メタノール（７５ｄ）で粉砕し、濾過した。残渣
固形物（６２３＋ｎｇ）をメタノール（３０ｍＲ）と濃
塩酸（１２ｍＲ１過剰量）で処理し、混合物を還流温度
に３日間加熱した。室温まで冷却した後、混合物をアセ
トニトリルとエーテルで希釈し、固形物を集めた。これ
をメタノールからアセトニトリルとエーテルとの添加に
よって再結晶したところ、化合物（８）２８７ｍｇ　（
化合物（７）から１８％）を得た。

’Ｈｎｍｒ　（３００ＭＨｚ、　ＤＭＳＯ−ｄａ）＋８
．３８９　（２Ｈ，ｓ）； ８．１９８　（２Ｈ，ｄ、　Ｊ　＝　８．８３　Ｈｚ）
；７．９４６　（４Ｈ，ｄ、　Ｊ　＝　８．６８　Ｈｚ
）；６．８２５　（６１１，見掛けはｄ、　Ｊ＝８．５
４　Ｈｚ）５．７　（６Ｈ，ｂｒ　ｓ）、　　　　　　
’ＦＤＭＳ：　　　ｍ／ｅ　３７０　（Ｍ”　）；３５
５　　（Ｍ　　”−ＣＲ２）。

ＵＶ／可視（ＭｅＯＨ，ｔ　ｘｌＯ−３）　：２５０　
ｎｍ　　（１１，６）； ２７９　ｎｍ　　（１２，５）； ３３４　ｎｍ　　（１３，１）； ５３５　ｎｍ　　（４３，４）。

ｊＬｉ！Ｊｌ　　１　、５−ビス（４−アミノフェニル
）−３−フェニルペンタ−１，５−ジオ ン（前記化合物（９））　（反応工程図Ｖ）４′−アミ
ノアセトフェノン（５，０ｇ、３７ミリモル、２当量）
とベンズアルデヒド（１，９６ｇ、１８．５ミリモル）
とをＴＩ（Ｆ　２５ｄに溶解した。カリウムも一ブトキ
シド（４，１５ｇ、３７ミリモル、２当量）を−度に加
え、ＴＨＦ　２５ｍ１で洗浄した。反応混合物は直ぐに
赤色に変わり、室温で一晩撹拌したところ、ＴＬＣ分析
では極僅かの出発物質しか観察されなかった。溶媒を減
圧で留去し、残渣を水（４０ｍＮ）と酢酸エチル（４０
ｍＮ）との間で分配した。層を分離して、水性層を追加
の酢酸エチル（２Ｘ４０ｍｌりで抽出した。有機溶液を
まとめて、乾燥しくＭｇ５０４）、溶媒を留去すると、
化合物（９）６、６４　ｇ　（１００％）を得て、この
化合物は更に使用するのに十分に純粋であった。

’Ｈｎｍｒ　（３００ＭＢ２．　ＣＤ３ＣＮ）ニア、７
４４　（４）１．　ｄ、　Ｊ　＝　８．６０　Ｈｚ）；
７．２４　（５Ｈ，、’ｍ）： ６．６３１　（４８，ｄ、　Ｊ　＝　８．６３　Ｈｚ）
；４．８０３　（４Ｈ，ｂｒ　ｓ）； ３．９３　（ＩＨ，ｍ（５）、　Ｊ　＝　７．２　Ｈｚ
）；３．２６６　（４Ｈ，ｍ）。

［１，５−ビス（４−アセタミドフェニル）−３−フェ
ニルペンタ−１，５− ジオン（前記化合物（１０）） 調製例６の１，５−ジケトン（化合物（９））（６，５
１ｇ、１８．５ミリモル最大量）を過剰量無水酢酸（３
８ｍｆｆｉ）で処理したところ淡赤色溶液を得た。

混合物で室温で３時間撹拌したところ、その間に溶液は
黄色スラリーになった。水（１００ｉＦりを加えて、混
合物を２時間撹拌し、１０％水酸化ナトリラム溶液（４
００ｍ）に空けた。生成する黄色沈澱を濾過して風乾し
たところ、化合物（１０）　６．９６ｇ（８５％）を得
て、核磁気共鳴分析を行ったところ純粋であり、そのま
ま使用した。

’Ｈｎｍｒ　（３００ＭＨｚ、　ＤＭＳＯ−６６）：１
０．３６３　（２Ｈ，ｓ）； ７．８９０’（４Ｈ，ｄ、　Ｊ　＝　８．６８　Ｈｚ）
；７．６８３　（４Ｂ、　ｄ、　Ｊ　＝　８．７０　Ｈ
ｚ）；７．２９４　（２Ｈ，ｄ、　Ｊ　＝　７．４３　
Ｈｚ）；７．２０８　（２Ｈ，ｔ、　Ｊ　＝　７．３２
　）１ｚ）；７．１０１　（１８，ｔ、　Ｊ　＝　７．
２　Ｈｚ）；３．８６　（１）１．　ｍ（５）、　Ｊ　
＝　６．５　Ｈｚ）；３．３８　（４Ｈ，ｍ）　； ２．０７５　（６）１．　ｓ）。

ＦＤＭＳ：　　ｍ／ｅ　３５Ｂ　（Ｍ”　）。

実隻尉土２　、６−ビス（４−アミノフェニル）−４−
フェニルチオピリリウムクロリ ド（前記化合物（１１）） 保護基を有する１、５−ジケトン（１０）（５，０ｇ、
１１．３ミリモル）と三値化リン（１０，１ｇ、４５．
２ミリモル、４当量）と塩化リチウム（３，３５ｇ、７
９．１ミリモル、７当量）とをフラスコ中で混合して氷
酢酸６０ｄに懸濁した。反応混合物を還流温度に３時間
加熱して赤色溶液を得て、これを熱時濾過した。沈澱を
酢酸で洗浄し、まとめた濾液をエーテルで希釈して、ガ
ム状沈澱を得た。これを集めて、メタノールからアセト
ニトリル（１部）とエーテル（５部）とを添加すること
によって再結晶した。

これにより、保護基を有するチオピリリウム塩２．０８
７　ｇを得て、その１．８０ｇ　（３，９７ミリモル）
をメタノール（７５ｍｌ）と濃塩酸（３０ｍｌ！、過剰
量）とに溶解した。混合物を還流温度に７２時間加熱し
て、アセタミドを開裂させた後、室温まで冷却した。紫
色溶液をアセトニトリルとエーテルとで希釈して、生成
する沈澱を集めて（１，１５６ｇ、（１０）から３０％
）、風乾した。

’Ｈｎｍｒ　（３００Ｍ）Ｉｚ、　ＤＭＳＯ−（Ｌ）：
８．４３　（２Ｈ，Ｓ）； ８．１６　（２ｔ（、ｄ、　Ｊ＝　７．０９．０．９９
１（ｚ）；８．０３　（４Ｈ，ｄ、　Ｊ＝　８．８１　
Ｈｚ）；７．６６　　（３Ｈ，ｍ）； ６．７９　　（４１，ｄ、　　Ｊ＝　　８．７７　Ｈｚ
）；４．１　　（４Ｈ，ｂｒ、　　ｓ）。

ＦＤＭＳ：　　　ｍ／ｅ　３５５　　（Ｍ”　　）；３
６７　　（７Ｌ　　Ｍ”　　−Ｈ＋ＣＩ（３）。

ＵＶ／可視（ＭｅＯＨ，εＸ１０−’）：３４７　ｎｍ
　　（２９，３）； ４’６９　ｎｍ　　（７，８）； ６１３　ｎｍ　　（３０，６）　　。

ａ　　１．５−ビス（４−アミノフェニル）＝３−　（
４−メトキシフェニル）ペンター１．５−ジオン（前記
化合物（１２））４′−アミノアセトフェノン（５，ｏ
ｇ、３７ミリモル、２．０当量）と４−メトキシベンズ
アルデヒド（２，５１ｇ、１８．５ミリモル）とを室温
でＴ）ＩＰ　（２５Ｉｄ）に溶解した。カリウムｔ−ブ
トキシド（４，１５ｇ、３７ミリモル、２．０当量）を
激しく撹拌しながら加え、ＴＨＦ　２５ｍ１で洗浄した
。溶液は直ぐに深紅色に変わり、室温で一晩撹拌した後
にＴＬＣ分析を行ったところ、極僅かの出発物質しか観
察されなかった。溶媒を減１圧で留去し、残渣を水（４
０ｍ）と酢酸エチル（４０１ｒＩｌ）との間で分配した
。層を分離して、水性相を酢酸エチル（２×４０戚）で
抽出した。まとめた有機溶液を乾燥しくＭｇ５Ｏ４）　
、溶媒を留去したところ化−合物（１２）６．９２ｇ　
（９６％）を得て、これは更に使用するのに十分純粋で
あった（プロトン核磁気共鳴分析）。

’Ｈｎｍｒ　（３００ＭＨｚ、　ＣＤ：＋ＣＮ）ニア、
７４２　（４Ｈ，ｄ、　Ｊ　＝　８．６２　Ｈｚ）；７
．１８８　（２Ｈ，ｄ、　Ｊ　＝　８．６０　Ｈｚ）；
６．７９０　（２Ｈ，ｄ、　Ｊ　＝　８．６０　Ｈｚ）
；６．６３１　（４）１．　ｄ、　Ｊ　＝　８．５８　
Ｈｚ）；４．７９９　（４８，ＭＳ）； ３．８７９　（ＬＨ，ｍ（５）、　Ｊ＝　７．０６　Ｈ
ｚ）；３．７３２　（３Ｈ，ｓ）； ３．２４１　（２Ｈ，ｄｄ、　Ｊ＝　１６．４０．７．
０５　）１ｚ）；３．１８０　（２Ｈ，ｄｄ、’　Ｊ＝
　１６．１４．７．．８４　Ｈｚ）。

ＦＤＭＳ：　　ｍ／ｅ　３８８　（Ｍ”　）。

Ｍ　　１，５−ビス（４−アセタミドフェニル）−３−
（４−メトキシフェニル） ペンタ−１，５−ジオン（前記化合物 調製例８の１．５−ジケトン（化合物（１２））（６，
３４ｇ、１６．３ミリモル）を５００ｍ＋！フラスコに
入れて、無水酢酸（４２ｍｌ、過剰量）を加えた。混合
物を室温で３時間撹拌したところ、赤色溶液を得て、こ
れをＴＬＣ分析を行ったところ化合物（１２）を含有し
ていなかった。水（１００ｄ）を加えて、混合物を３時
間撹拌し、１０％水性水酸化ナトリウム（４００ｍｌ）
に空けた。これによって赤色の扱いにくいガム生成物を
生じ、これはさらに精製することなく直接に次の段階に
用いた。

尖脩皿ｌ　２．６−ビス（４−アミノフェニル）−４−
（４−メトキシフェニル）チオピ リリウムクロリド（前記化合物（１４）、反応工程図■
） ガム状の保護された１、５−ジケトン（１３）（２，４
０ｇ、５．０８ミリモル）を三値化リン（４，５３ｇ、
２０．３ミリモル、４．０当量）と塩化リチウム（１，
５１ｇ、３５．５ミリモル、７．０当量）と混合した。

米酢酸（３０ｍ）を加えて、混合物を還流温度に３時間
加熱したところ、赤色溶液を生じた。この溶液を熱時濾
過し、集めた固形物を酢酸で洗浄した。

まとめた濾液をエーテルで希釈したところ、ガム状沈澱
を生し、これをメタノールからアセトニトリルとエーテ
ルとを添加することによって再結晶すると、二つの生成
物（総量９２’８ｍｇ）として保護されたチオピリリウ
ムを得た。この内の５７０ｍｇをメタノール（２５ｍｊ
りに溶解して、濃塩酸（１０ｍ！、過剰量）を加えた。

混合物を還流温度に７２時間加熱してアセタミドを開裂
させた後、室温まで冷却した。アセトニトリルとエーテ
ルとを沈澱（１４）に加えて、沈澱を集めて乾燥した（
４１４ｍｇ、化合物（１３）から３１％）。

’Ｉｔ　ｎｍｒ　（３００Ｍｌｌｚ、　ＤＭＳＯ−ｄｂ
）：８．４３１　（２Ｈ，ｓ）； ８．２５４　（２Ｈ，ｄ、　Ｊ　−８，７６Ｈｚ）；８
．００４　（４Ｈ，ｄ、　Ｊ　＝　８．８４　Ｈｚ）；
７．１８７　（２Ｈ，ｄ、　Ｊ　＝　８．８３　Ｈｚ）
；６．７８７　（４Ｈ，ｄ、　Ｊ　＝　８．７９　Ｈｚ
）；３．９１１　　（３Ｈ，ｓ）。

ＦＤＭＳ：　　　ｍ／ｅ　３８５　　（Ｍ”　）；３７
０　　（Ｍ”　　　ＣＨ２）。

ＵＶ／可視（ＭｅＯＨ，ｔ　ＸＩＯ−３）：２３５　ｎ
ｍ　　（１６，８）； ３９４　ｎｍ　　（２６，４）； ｎｍ　　（１７，２）； ５９５　ｎｍ　　（３１，８）。

１」■し４桝 電気光導電性の有用性を前記米国特許第４，３４Ｌ８９
４号明細書に記載の通りに実施する。この有用性は当該
技術分野では周知であるので、更に詳しく説明する必要
はない。

補乳頻の分化癌または黒色腫の治療法では、この染料は
製薬上受容可能なキャリヤーに添加する場合には特に有
用である。製薬上受容可能なキャリヤーはチオピリリウ
ム染料を十分に溶解する溶媒のような任意のキャリヤー
であることができる。

ヒトに用いる好適なキャリヤー溶媒の好ましい例の中に
は、５％デキストロース水溶液またはエタノールとポリ
オール例えばポリエトキシル化亜麻仁油との混合物であ
り、ナショナル・キャンサーインスティテユート（Ｎａ
ｔｉｏｎａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ）か
ら「ダイリューエンド（Ｄｉｌｕｅｎｔ）１２　Ｊとし
て入手し得るものがある。

他の受容可能なキャリヤー溶媒には、膀胱内治療用のジ
メチルスルホキシド（Ｄ）１５０）および静脈内および
腹腔内注射用の等張索塩水がある。

更に他の有用なキャリヤーには下記のような物質がある
。

ゼラチン、天然糖例えばスクロースまたはラクトース、
レシチン、ペクチン、スターチ（例えばコーンスターチ
）、アルギン酸、チロース、タルク、セキショウシ、シ
リカ（例えばコロイド状シリカ）、グルコースセルロー
ス、セルロース誘導体例えばセルロースのヒドロキシル
基が部分的に低級脂肪族アルコールおよび／または低級
飽和オキシアルコールでエーテル化されたセルロースエ
ーテル（例えば、メチルヒドロキシプロピルセルロース
、メチルセルロース、ヒドロキシプロルセルロース）、
ステアリン酸塩例えばメチルステアレートおよびグリセ
リルステアレート、１２〜２２個の炭素原子を有する脂
肪酸特に飽和酸のマグネシウムおよびカルシウム塩（例
えば、ステアリン酸カルシウム、ラウリン酸カルシウム
、オレイン酸マグネシウム、バルミチン酸カルシウム、
ベヘニン酸カルシウムおよびステアリン酸マグネシウム
）、乳化剤、油脂特に植物性油脂（例えば、ピーナツ油
、亜麻仁油、オリーブ油、ごま油、綿実油、とうもろこ
し油、麦芽油、ヒマワリ種子油、たら肝油）、飽和脂肪
酸（Ｃ＋　ｚＨ２ａＯ□〜Ｃｌ１ｌＨ３６０□およびそ
れらの混合物）のモノ−、ジーおよびトリーグリセリド
（例えば、グリセリルモノステアレート、グリセリルジ
ステアレート、グリセリルトリステアレート、グリセリ
ルトリラウレート）、製薬上適合性の一価もしくは多価
アルコールおよびポリグリコール、例えばグリセリン、
マンニトール、ソルビトール、ペンタエリトリトール、
エチルアルコール、ジエチレングリコール、トリエチレ
ングリコール、エチレングリコール、プロピレンゲリコ
ール、ジプロピレングリコール、ポリ（エチレングリコ
ール）および他のポリアルキレングリコール並びにこれ
らのアルコールおよび多価グリコールの誘導体、（２〜
２２個の炭素原子、特に１０〜１８個の炭素原子を有す
る）飽和もしくは不飽和脂肪酸と一価の脂肪族アルコー
ル（１〜２０個の炭素原子を有するアルカノール）また
は多価アルコール例えばグリコール、グリセリン、ジエ
チレングリコール、ペンタエリトリトール、ソルビトー
ル、マンニトール、エチルアルコール、ブチルアルコー
ル、オクタデシルアルコール等とのエステル、例えばグ
リセリルステアレート、グリセリルパルミテート、エチ
レンジステアレート、エチレンジラウレート、エチレン
ジアセテート、モノアセチン、トリアセチン、グリセリ
ルオレエート、エーテル化した多価アルコールのエステ
ル、安息香酸ベンジル、ジオキソラン、グリセリンホル
マル、テトラヒドロフルフリルアルコール、１〜１２個
の炭素原子を有するアルコールのポリグリコールエーテ
ル、ラクタミド、ラクテート例えば乳酸エチル、炭酸エ
チル、シリコーン（特に中粘度ジメチルポリシロキサン
）、炭酸マグネシウム等。

更に他の添加物および組成物の調製法は、最先の文献、
例えば１９８６年７月１日発行の米国特許第４．５９８
，０９１号明細書に見出すことができる。染料およびキ
ャリヤーの輸送の有用な方法には、移植された薬剤ポン
プ、静脈内（ＩＶ）、腹腔内（ＩＰ）および膀胱内注射
がある。

投与水準は分化癌（または黒色腫）に用いられるチオピ
リリウム染料によって変わる。この投与量は、グツドマ
ン（Ｇｏｏｄｍａｎ）とギルマン（Ｇｉｌｍａｎ）の「
治療学の薬理学的基礎（↑ｈｅ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏ
ｇｉｃａｌＢａｓｉｓ　ｏｆ　Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ
ｓ）　Ｊ　　（６版）、１６７５〜１７３７頁、副標題
が「投薬療法の設計と最適化（Ｄｅｓｉｇｎａｎｄ　Ｏ
ｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｄｏｓａｇｅ　Ｒｅｓ
ｉｍｅｎｓ）」（マクミラン・パブリッシング・カンパ
ニー（ＭａｃｍｉｌｌａｎＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｇｏ
、）　、ニュー　・ヨーク、１９８０年）に記載されて
いる技法を用いて当業者によって決定される。化学療法
剤に対して一般に用いられる投与量と臨床試験と以下に
説明されるヌードマウスでのプロトコールにおいて見出
されるｔｔ＋ｓ。投与量との間に示されている相関とに
基づいて、ヒトが消費する投与量は、ＴＶ注射では３週
間毎に１５０〜３００■／ｍｌ、４〜８日間−日当たり
５〜１０■／眩または３日間もしくは１週間に一度で６
週間−日当たり７０〜９０■／ボであることが推定され
るＣ’ｍｇ／ｒｒｒ」とは通常の通り患者の体表面積１
ボ当たりのミリグラム数を表す）。

■学班広夏拠 ヒトの癌に対する有効性は、ヌードマウス−ヒト異種移
植片モデルにおける試験（これ以後は［ヌードマウスプ
ロトコール」と呼ぶ）によって推定することができる。

これは、例えばＪｏｕｒｎａｌｏｆ　ｔｈｅ　Ｎａｔｉ
ｏｎａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ、　７４
巻、４号、８９９〜９０３頁、特に８８９頁（１９８５
年４月）に示唆されている。ヌードマウス、すなわち胸
腺機能が欠除したマウスを無病原体条件で飼育かつ保持
したもの（Ｊ、Ｎａｔｌ、Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｎ５ｔ、５
１：　６１５−６１９（１９７３）を参照されたい〕を
生体内実験に用いた。それぞれの実験に就いて、同産児
で同性の３月令以上で体重が少なくとも２５ｇのヌード
マウスに癌細胞を注射または移植した。

−ｓａ、ｉｕｗ　　ヌードマうスプロトコールを用いる
黒色腫試験 無胸腺マウスの腹腔に移植したとき成長が速やかなヒト
黒色腫細胞ラインＬＯＸを用いた。無胸腺マウスの皮下
に継代した腫瘍を無菌条件下で切除して、４ｍｍメツシ
ュの金属格子を用いて単細胞懸濁液に移した。次に、赤
血球を０．１７モル塩化アンモニウムと４°Ｃで３０分
′間インキュベーションすることによって溶解した。次
にトリパン・ブルーを用いて生存能力を測り、ダルベツ
コ−改質イーグル培地（ＤＭＥ）０．２ｍｆｆ１中で作
成した５×１０ｈの生存可能な細胞を一群の無胸腺スイ
スｎｕ／ｎｕマウスに腹腔内（ＩＰ）に注射した（０日
）。

次に、マウスを無作為に治療およびコントロール群（５
％デキストロース）とに分けて、腹腔内注射による治療
を開始した。

実施例６では、５匹のマウスは表−１の薬剤Ｔ−５の５
ｍｇ／ｋｇを投与され、各週の月曜、水曜および金曜日
に総数１１回の注射を受けた。５匹のマウスは同じ日に
コントロールの５％デキストロース溶液を同容量投与さ
れた。

第１図は実施例６の結果を示し、Ｔ／Ｃ＝３６６％とな
り、生存率の著しい向上と腫瘍の緩解を示している（産
業において向上の受容される点は、Ｔ／Ｃ＞　１４５％
となる任意の値である）。

実施例７では、マウスの調製と治療は、第１日目として
水曜日に開始し次いで土曜日に（および水曜日と土曜日
に）３週間８ｍｇ／ｋｇの水準でＴ−５を投与したこと
以外は実施例６と同様であった。

コントロールマウスでは、デキストロース溶液のみを投
与された。結果を第２図に示す。生存率は３３８％であ
り、コントロール群に対して著しい増加を示した。

−！ｌ’ｌ、ｋｕ８　　ヌードマウスプロトコールを用
いる卵巣癌（０１／ＣＡＲ−３） 実施例６および７を、ヒト卵巣癌ライン０ＶＣＡＲ−３
を異種移植した雌ヌードマウス（８〜１２週令）に投与
を行ったことを除いて、繰り返した。実施例６における
８匹のマウスと実施例７の８匹のマウスを選択して、癌
細胞を注射した１日後にそれぞれ２．５および５■／ｋ
ｇの量でチオピリリウムをＩＰ投与することによって治
療した。これは次のようにして繰り返した。１週間に３
回の注射を６週間行った。８匹のマウスをコントロール
群として用いて、５％デキストロース水溶液０．２５ｍ
ｆｆ１を注射した。

結果を第３図に示す。染料はいずれの場合にもＴ／Ｃ＞
４５０％であり、これは他のチオピリリウムに比較して
効力が実質的に改良されている。

実茄」Ｉおよび９　　ＩＰ投与されるチオピリリウム染
料を用いるマウス膀胱癌 の治療 ＭＢ４９腫瘍細胞、すなわち発癌物質７，１２−ジメチ
ルベンズ（ａ）アントラセンによって誘発されたマウス
癌細胞を常法によって得て、正常な雄ＢＤＦＩマウスの
腹腔内に注射した（５Ｘ１０６／マウス）。それぞれの
薬剤で処理した群およびコントロール群は５匹のマウス
であった。実施例８では、５ｍｇ／ｋｇのＴ−５を１週
間に３回ずつ３週間、第１日目から開始して投与した。

実施例９では、３■／ｋｇを１週間に３回ずつ３週間で
あった。結果は、第４図に示されるように、実施例８で
はＴ／Ｃは２４４％であり、実施例９ではＴ／Ｃは３４
４％であった。

表−１のチオピリリウムＴ−６を用いて行った同様な実
験では、腫瘍の接種後２１日口のコントロール動物の腫
瘍成長と比較した腫瘍成長の平均抑制率は２１．６％で
あった。これらの値はコントロール（水で治療した動物
）の膀胱の平均重量と薬剤治療した動物の膀胱の平均重
量との差をコントロール動物の膀胱の平均重量で割り、
この分数に１００を乗することによって算出される。（
この実験では、マウスの膀胱に細胞懸濁液を注入する前
にＭＢ４９腫瘍細胞（４Ｘ１０６）を０．０５ｍｇ　／
　ｍｆｌの薬剤とを混合することによって投与した。

（４−Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノフェニル−２−フェニル
−６−（２−ピリジル）チオピリリウムクロリドを異種
移植したヒト黒色腫および卵巣癌について試験した。こ
の化合物は、６−置換基がフェニル環ではなくてピリジ
ル環であり、２−および６−環状置換基が両方共アミノ
基を欠いていることを除いて、本発明のＴ−５と類似し
ている。

これらの結果は（前記「関連の出願明細書」に挙げられ
ているが）黒色腫に対してはＴ／Ｃは２２７％であり、
卵巣癌に対してはＴ／Ｃは３４０％であった。これらの
結果はそれら自体有為な緩解を実証しているが、本発明
のＴ−５について得られたそれぞれ３６６％および〉４
５０％はど良好ではなかった。この比較から、本発明の
チオピリリウムは黒色腫および分化癌に対して一層大き
な効力を有することが明らかである。これはまた、アミ
ノ置換基によって溶解度が増加することによって生じる
ものと思われる。

以下余白 進Ｊり旧九伝 実施炎用二用　　他のチオピリリウム これらの実施例は動物モデルで試験を行わなかったが、
これらのチオピリリウムがＴ−５に類似の試験管内試験
結果を示すことからヒト黒色腫および分化癌において同
様な効力を示すものといえる。試験管内試験は次のよう
にして行い、ＩＣｓ。

濃度を確認した。（ＴＣｓｏは、化合物を試験する細胞
ラインの半数を殺す試験管内濃度である。）濃度が小さ
くなればなるほど、毒性は高くなる。

ヒト肺癌ラインのＩＣ５ｏ値については、密着性単層培
養を用いた。平板培養の２日前にアメリカン・タイプ・
ティッシュ−・カルチャー・コレクション（Ａｍｅｒｉ
ｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｔｉ５ｓｕｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｃ
ｏ１１ｅｃ−ｔｉｏｎ）から入手した細胞の数を選択し
てストックとして成長させ、試験管内試験の時点で細胞
がプラトーに到達しないような数にした。分析の第１日
日に、このストックからの指数的に成長する細胞を非同
期的に５％（Ｖ／Ｖ）胎児性仔牛血清とコラポレーティ
ブ・リサーチ社から人手した５％（Ｖ／Ｖ）ＮＶ血清と
２０ｍＭＨＥＰＥＳ緩衝液すなわち４−（２−ヒドロエ
チル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸とを補足した
ＲＰＭ１１６４０培地からなる通常の完全培地に懸濁し
た。これを通常の９６ウ工ル組織培養プレートに二連供
給マニホールドを備えた七トス／パーキン・エルマー（
Ｃｅｔｕｓ／Ｐｅｒｋｉｎ　Ｅｌｍｅｒ）自動分取装置
を用いて移した。これらの細胞を、次に５％ＣＯ７を含
有する加湿雰囲気中で３７°Ｃで４８時間インキュベー
ションした。選択された細胞を、次いで５％ＣＯ□を含
有する加湿雰囲気中で３７°Ｃで各種の量の対象とする
化合物の存在で赤色光の下で３時間インキュベーション
した。化合物を６６−１ｏ範囲の濃度で試験した。薬剤
処理した細胞を、次に前記の完全培地で１度洗浄し、４
細胞倍化時間（これらの細胞ラインについては約７日間
）を達成するのに適当な時間完全培地中でインキュベー
ションした。培地を除去し、細胞をイーストマン・コー
ダック社（ＥａｓｔｍａｎＫｏｄａｋ　Ｃｏ、）から入
手し、（カルシウムまたはマグネシウムカチオンのない
）リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）、ｐＨ６．８５に溶解し
た０、１％（ｗ／ｖ）中性赤色染料で３７°Ｃで１〜２
時間染色した。細胞を同じＰＢＳで２度洗浄して、乾燥
した。過剰の中性赤色染料はそれぞれのウェルから５０
％（ｖ／ν）エタノール／１％（ｖ／ｖ）水性氷酢酸で
溶出した。それぞれのウェルの吸光度を５４０ｎｍに設
定したパーキン・エルマー（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ
）製吸光度デンシトメーターを用いて定量した。所定濃
度の化合物についての細胞成長の抑制率は、下式を用い
て計算される。

但し、Ａｔ＝供試薬剤で処理された細胞の吸光度、Ａ・
＝溶媒あみで処理されたコント・−ルの吸光度、 Ａｂ＝培地とウェルのみの吸光度（バックグラウンド）
。

これらの結果をＦ　（ｘ）対試験化合物の対数濃度とし
てプロットした。次に、プロットしたデーターを、下記
の関数についての曲線に適合させた。

但し、Ｘ−試験化合物の濃度、 Ａ＝　Ｉ　Ｃ５゜値（プロット上の５０％抑制）および Ｂ＝適合させた関数の指数。

Ｌ　１２１０白血病細胞についてＩＣ５ｏを計測するた
め、懸濁液培養を用いた。細胞を接種する時点で１０％
（ｖ’／ｖ）　ＮＶ血清、無仔牛血清、および２０ｍＭ
ＨＥＰＥＳ緩衝液を補足し、目的とする化合物を既に加
えであるＲＰＭ１１６４０培地に３Ｘ１０’の濃度で接
種したことを除き、単層培養の方法にしたがった。

これらを直ちに通常の２４ウエルプレートに加えて、４
細胞倍化時間（この細胞ラインでは４８時間）インキュ
ベーションした。ＺＦ型コールタ−・カウンターを用い
て細胞数を計数した。Ｆ　（ｘ）は下式から得られた。

Ｎｏより小さくはならない。

Ｎｕ−溶媒以外では処理されなかったコントロールにお
いて検出された細胞数、およびＮｏ＝最初に接種した細
胞数。

表−２に結果を示す。

聚づ４　：　セイ４ （数が小さくなればなるほど、染料は一層有効または毒
性が高くなる。） 帯　　　　　の　　１４〜１５ グツドイヤー・タイヤ・アンド・ラバー・カンパニー（
Ｇｏｏｄｙｅａｒ　Ｔｉｒｅ　ａｎｄ　Ｒｕｂｂｅｒ　
Ｃｏｍｐａｎｙ）から結合剤として販売されているバイ
チル（Ｖｉ　ｔｅｌ）ＰＥ１０１ポリエステル７９．５
％と有機光電導性物質（電子供与体）２０％と、試験さ
れるチオピリリウム塩増感剤（電子受容体）０．５％と
からなる光電導層を有する電子写真要素を調製し、無水
マレイン酸とと酢酸ビニルとのコポリマーのカルボキシ
エステルラクトンのナトリウム塩をコーティングしたポ
リ（エチレンテレフタレート）の電導性支持体に乾燥厚
みが８　ｐｍで塗布した。

用いた光電導性物質は（Ａ）トリフェニルアミンと（Ｂ
）４．４’−ビス（ジエチルアミノ）−２，２′−ジメ
チルトリフェニルメタンである。

試験した増感剤は２．６−ビス（４−アミノフェニル）
−４−（４−（Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノ）フェニル〕チ
オピ、リリウムテトラフルオロボレート（表−１のＴ−
７）であった。

フィルムを初期電圧Ｖｏに対して正に帯電して、初期電
圧が２００ボルトまで減少するまで２５工ルグ／ｃｍｌ
／秒の強度を有する５８０ｎｍの単色光に露光した。こ
れらの要素の感度を「単色光露光要件」、すなわち（Ｖ
ｏ−２００）ボルトを生じるのに要するエルグ／ｄで表
した露光として記録した。結果を下記の表−３に示す。

１４　　　　　＾　　　　５８０　６００　４００　　
　　２３Ｂ１５Ｂ５８０５００３００１１３ 増感剤を持たないコントロールコーティングでは、実際
の計測には５８０ｎｍでの放電に時間が掛かり過ぎる。

したがって、データーはこの波長でのチオピリリウム増
感剤による光電導性物質ＡおよびＢの増感を示す。

本発明のチオピリリウムの他のものは、前記米国特許第
４，３４Ｌ８９４号明細書に示されるように、全体とし
てこの種類に共通なこの特性によって比較し得る電気光
電導性コーティングの増感を生じるものと仮定すること
ができる。

〔発明の効果〕

本発明の化合物が既存のチオピリリウムに比較して哺乳
類の癌細胞の治療に顕著な効力を有することは、本発明
の有利な技術的効果である。

【図面の簡単な説明】

第１〜４図は、本発明の染料で処理した担癌マウスを未
処理のままのマウスのコントロール群と比較した生存率
をプロットしたグラフである。これらのプロットにおい
て、「生存率（％）」とは問題とする時点（ｄａｙ）で
生存し続けている全群（処理「Ｔ」またはコントロール
’ＣＪ　）の百分率を意味する。５０％データーの点は
統計的に重要であるので、Ｔ／Ｃの計算で選択する。 以下余白 薯と（Ｊと １　　　寸　　　１　　〜　　−　　　〇′！ａと６と ｎ　　　寸　　　１　　〜　　　−　　０薯とρと 唖　　　　ｑ　　　　１　　〜　　　−　　　Ｏｍと６
と

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下記の構造式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、ＱはＯ，ＳまたはＴｅであり、 Ｒ＿３はＨ、１〜３個の炭素原子を有するアルキルまた
   はアルコキシまたは Ｎ（Ｒ＿４）＿２・（ＨＺ＾１）＿ｎであり、Ｒ＿４は
   Ｈまたは１〜３個の炭素原子を有するアルキルであり、 ＺおよびＺ＾１は独立にアニオンであり、 ｎは０または１であるが、但し、（ＨＺ＾１）基は１個
   しか存在しないものとする）を有するピリリウム。 ２、下記の構造式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ′） （式中、Ｒ＿１およびＲ＿２は独立に Ｎ（Ｒ＿４）＿２・（ＨＺ＾１）＿ｎまたはＨであり、
   Ｒ＿３はＮ（Ｒ＿４）＿２−（ＨＺ＾１）＿ｎ、Ｈまた
   は１〜３個の炭素原子を有するアルコキシであるが、但
   し、フェニル環の少なくとも２個はそれぞれメタ−もし
   くはパラ−位に −Ｎ（Ｒ＿４）＿２・（ＨＺ＾１）＿ｎ置換基を有して
   いるものとし、Ｒ＿４はＣＨ＿３またはＨでありかつＲ
   ＿１〜Ｒ＿３のそれぞれにおいて同じものであるかまた
   は異なるものであり、 ＺおよびＺ＾１は独立にアニオンであり、 ｎは０または１であるが、但し、（ＨＺ＾１）基は１個
   しか存在しないものとする）を有するピリリウム塩また
   は化合物。