JPH01137987A - 高度不飽和脂肪酸グリセリドの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （ａｌ産業上の利用分野 本発明は、炭素数が１８以上でかつ二重結合を３個以上
有する高度不飽和脂肪酸（以下、ＰＵＦＡという）を含
むグリセロリン脂質から、ホスホリパーゼＣおよびリパ
ーゼの存在下でＰＵＦＡグリセリドを製造する方法に関
するものである。

ｆｂｌ従来の技術 ＰＵＦＡは一般に高等動植物から微生物に至るまでの広
範囲な生物の体内や分泌物に脂質として存在し、その生
物種に必須な脂肪酸であるといわれてきたが、近年では
魚類あるいは藻類のＰＵＦＡが魚類に対する必須脂肪酸
として配合飼料に用いられたり、また人間に対する生理
活性、薬理作用も解明され、その有用性が認識されてい
る。

二重結合が２個以下の通常の脂肪酸が主に中性脂質、い
わゆるグリセリドとして存在するのに対して、ＰＵＦＡ
はリン脂質などの極性脂質として存在することが多い。

かかるＰＵＦＡのリン脂質を単離・精製する場合、生体
から単離した極性脂質は中性脂質と比較して酸化、異性
化を受けやすく、劣化しやすい傾向があり、安定性の点
で劣るなどの欠点を有している。このため、ＰＵＦＡを
より安定な形態に変換し、産業的に有用な物質として利
用することが望まれている。この目的を達成する手段と
しては、通常、酸あるいはアルカリなどの化学薬品を加
熱状態で作用させて加水分解し、遊離するＰＵＦＡを分
離、精製して脂肪酸またはその低級アルコールエステル
あるいはグリセリドとする方法が考えられる。また、酵
素法で加水分解やエステル交換させ、同様に脂肪酸また
は脂肪酸エステルとして使用することにも可能性はある
。

しかしながら、化学的手法を用いれば酸、アルカリさら
には加熱処理によってＰＵＦＡそのものが酸化、異性化
、重合などの好ましくない副反応を受け、後処理の精製
工程が複雑になる。また、脂質を加水分解あるいはエス
テル交換する酵素法としては、リパーゼを用いる手法が
あるが、通常のリパーゼではＰＵＦＡは反応しにくいと
いわれており、またリン脂質などの極性脂質は基質にな
りにりく、熱履歴によるＰＵＦＡの劣化は防げるものの
、産業的に実用化できる手段はこれまでに見出されてい
ない。

ホスホリパーゼＣは微生物の培養濾液、高等動物の脳、
肝臓、肺臓、赤血球などに存在する酵素で、一般にホス
ファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミンな
どのリン脂質のリン酸部とグリセリド部のエステル結合
を加水分解する酵素して知られている。ホスホリパーゼ
Ｃはスフィンゴミエリンなどのリン脂質も加水分解する
。また、最近の例ではホスホリパーゼＣは米ヌカ中に存
在することが確認され、抽出・分離されている（高野ら
、東京農業大学農学果報、　２８　（ｍ３）　、２６２
　（１９８４）　）。しかしながら、これらのホスホリ
パーゼＣはいずれも炭素数１８以下あるいは二重結合が
２個以下の不飽和、もしくは飽和脂肪酸が結合したリン
脂質を基質とした加水分解にのみ用いており、本発明で
対象基質とする炭素数１８以上、かつ二重結合が３個以
上のＰＵＦＡからなるリン脂質についての知見は見当た
らない。

また、リパーゼは周知のとおり油脂加水分解酵素であり
、グリセリドを加水分解する手段として従来より研究さ
れ、工業的にも実用化されている。

リパーゼに関する研究としては加水分解のほか、エステ
ル交換反応（Ｒ，Ｗ、５ｔｅｖｅｎｓｏｎ　ｅｔ　ａｌ
、、Ｊ、Ａｍ。

Ｏｉｌ　Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、　５６，６７６（１９７９
）、特開昭５２−１０４５０６など）、エステル合成反
応（Ｙ、Ｔｓｕｊｉｓａｋａ　ｅｔ　ａｌ、。

Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ａｃｔａ、　４８９
．４１５（１９７７）、白木ら。

化学と生物、　１６，３９３（１９７８）など）、グリ
セリンと脂肪酸とのエステル化法（特公昭５１−７７５
４．特公昭５７−２３５３５　）、モノグリセリドの製
造法（特開昭５９−１１８０９４）などの提案がなされ
ているが、いずれも使用している脂肪酸は炭素数１８ま
でのものであり、本発明で使用するＰＵＦＡでは検討さ
れていない。　　　　　゛ （Ｃ１発明が解決しようとする問題点 本発明の目的は生体中に存在するＰＵＦＡを安定な形態
で産業的に有効利用することにあり、該ＰＵＦＡが比較
的多量に存在する極性脂質のうちリン脂質を変換させる
方法において、従来行われていた化学的方法に比べて低
温、常圧での温和な反応を利用し、前述のような好まし
くない副反応を抑制し、簡易かつ経済的に製造する方法
を見出すことにある。また、本発明の他の目的は従来で
は不可能ないしは困難であったＰＵＦＡを含むリン脂質
の変換を容易ならしめることにある。

＋ｄＪ問題点を解決するための手段 本発明は、上記の目的を達成すべく、本発明者が鋭意検
討を行った結果、完成されたもので、ＰＵＦＡを含むグ
リセロリン脂質をホスホリパーゼＣの存在下に加水分解
し、ついで該加水分解物とＰＵＦＡおよび／またはＰＵ
ＦＡエステルとをリパーゼの存在下に反応させることを
特徴とする高度不飽和脂肪酸グリセリドの製造法である
。

本発明でいうＰＵＦＡとは、炭素数が１８以上でかつ二
重結合を３個以上有するものであり、なかでも生理活性
を有するω−３もしくはω−６脂肪酸と称されるものを
さす。これらの例としてはα−リルン酸（ＣＩ８＋：ｌ
ω−３）　、ｒ−リルン酸（Ｃ１１１！３ω−６）、エ
イコサトリエン酸（Ｃ２０１３ω−３およびＣ２゜、３
ω−６）、エイコサテトラエン酸（Ｃｚａｒ４ω−３）
、アラキドン酸（Ｃ２ｏｚω−６）、エイコサペンクエ
ン酸（Ｃ２゜、５ω−３）、ドコサトリエン酸（Ｃ２□
、３ω−６）、ドコサテトラエン酸（Ｃ２□、４ω−６
）、ドコサヘキサエン酸（ＣＺ□１６ω−３）、テトラ
コサテトラエン酸（Ｃ２４１４ω−６）などがあげられ
る。これらは魚類、カニ、エビなどの軟甲類、貝類、藻
類、微生物などの生体牛脂質として存在する。本発明で
は、これらのＰＵＦＡは単独であるいは混合系で使用す
ることができる。

本発明において該ＰＵＦＡを含むグリセロリン脂質とは
、上記のＰＵＦＡを含むグリセロリン脂質であり、した
がって該グリセロリン脂質が上記以外の脂肪酸を含んで
いてもさしつかえない。これらの脂肪酸としてはミリス
チン酸、バルミチン酸、パルミトオレイン酸、ステアリ
ン酸、オレイン酸、リノール酸などが例示でき、またイ
ソあるいはアンチイソ型脂肪酸、ヒドロキシ脂肪酸を含
んでいてもよく、単一または混合物となっていてもよい
。また、本発明で使用できるグリセロリン脂質としては
ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミ
ン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルセリ
ン、ホスファチジン酸あるいはこれらのリゾ体、ホスフ
ァチジルグリセロール、カルシオリピンなどがあげられ
、これらのいずれか１種もしくは２種以上の混合状態で
も用いることができ、また、天然物から抽出、濃縮され
たものであっても、合成品であっても差し支えない。ま
た、該グリセロリン脂質は該ＰＵＦＡを含むモノ、ジあ
るいはトリグリセリドのいずれかまたは混合物を含有し
ていてもよい。　　さらに、本発明に用いるホスホリパ
ーゼＣは前述のごとく微生物、高等動物の臓器、植物な
どから採取できるものでよいが、経済的な面がらは微生
物由来のもの、植物由来のものが好ましい。これら例と
しては微生物としてストしブトマイセス属（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ　ｈａｃｈｉｊｏｅｎｓｉｓ；特公昭５
２−３９９１８など）、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄ
ｏｍｏｎａｓ　５ｃｈｕｙｋｉ−１１ｉｅｎｓｉｓ；特
公昭５５−３３３０８．　Ｐ、ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ
。

Ｐ、ａｕｒｅｏｆａｃｉｅｎｓなど）、アクネ１−バク
ター属（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ　ｃａｌｃｏａｃ
ｅｔｉｃｕｓなど）、バチルス属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　
ｃｅｒｅｕｓ＋Ｂ、ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓなど）
、スタフィロコッカス属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕ
ｓ　ａｕｒｅｕｓなど）、クロストリジウム属（Ｃｌｏ
ｓｔｒｉｄｉｕｍ　ｐｅｒ−ｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｃ１，
ｎｏｖｙｉなど）などがあげられる。これらの微生物か
らホスホリパーゼＣを得るには、常法によりこれらの微
生物を培養し、培養濾液あるいは菌体を破砕した抽出液
から溶剤沈澱法、塩析などで沈澱させ、透析、電気泳動
、ゲル濾過、吸着などで分画し、精製処理をほどこして
濃縮液として、さらには減圧あるいは凍結乾燥などの処
理で粉末状として得ることができる。また、植物由来の
ホスホリパーゼＣを得るには、たとえば米胚芽あるいは
米ヌカから抽出でき（高野ら、東京農業大学農学果報３
冊（歯３）　、２６２（１９８４）、同様に精製処理し
て使用することができる。

加水分解したグリセロリン脂肪と反応させるＰＵＦＡは
、前述したＰＵＦＡを含む脂質を魚類、藻類、微生物な
どから常法により抽出、加水分解したもの、あるいは必
要に応じて溶剤分別、吸着、尿素付加処理などにより精
製したものを使用することができ、またＰＵＦＡエステ
ルとしては該ＰＵＦＡとメチルアルコール、エチルアル
コール、プロピルアルコール、ブチルアルコール、エチ
レングリコール、プロピレングリコール、グリセリンな
どとのエステルを用いることができる。

なお、このＰＵＦＡは前期のグリセロリン脂質に含まれ
るＰＵＦＡと同じ種類であっても異なる種類であっても
よい。

さらに本発明に用いるリパーゼは動植物、微生物由来の
いずれのリパーゼを用いてもよいが、活性および価格な
どの面などから微生物起源のものが好ましい。これらの
例としてはキャンディダ属（Ｃａｎｄｉｄａ　ｃｙｌｉ
ｎｄｒａｃｅａ、Ｃ，ｌ１ｐｏｌｙｔｉｃａなど）由来
のもの、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　
ｆｌｕｏｒｅ−ｓｃｅｎｓなど）由来のもの、ペニシリ
ウム属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｃｙｃｌｏｐｉｕｍ
など）由来のもの、ムコール属（Ｍｕｃｏｒ　ｍ１ｅｈ
ｅｉなど）由来のもの、リゾプス属（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ
ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　）由来のものなどの５０℃以上で
も活性を有する耐熱性リパーゼのほか、アスペルギルス
属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｇｅｒ　）由来のも
の一すゾプス属（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ　ｄｅｒｅｍａｒ、
Ｒ，ｊａｖａｎｉｃｕｓなど）由来のもの、ジオトリカ
ム属（Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍｃａｎｄｉｄｕｍなど）由
来のものなどの常温リパーゼを用いることができる。な
お、本発明ではこれらの属および種の微生物およびリパ
ーゼに限定されるものではない。

＝１０− 次に本発明で使用するホスホリパーゼＣおよびリパーゼ
は、これらを固定化物としたものとして用いることがで
きる。一般に、酵素はｐＨおよび温度安定性改良、活性
維持、再使用などを目的として水あるいは溶媒に不溶性
の固定化酵素とする方法がとられており、アルギン酸塩
、セルロース、デキストラン、ポリスチレン、ポリアク
リルアミド、ポリビニルアルコール、イオン交換樹脂、
磁製体、多孔質物質、光架橋性樹脂などの固定化担体に
酵素を吸着、イオン結合あるいと共有結合、包括させる
が、本発明でもこれらの方法でホスホリパーゼＣおよび
リパーゼを粒状、膜状もしくはシート状の固定化物とし
、反応に使用できる。かかる方法を用いることにより反
応の連続化が可能となる。

本発明の方法によりリン脂質を変換させるには次のよう
にする。すなわち、動物、藻類、微生物などの生体から
抽出・濃縮した、あるいは化学的に合成した炭素数１８
以上かつ二重結合を三個以上有するＰＵＦＡを含むグリ
セロリン脂質をガラス製あるいはステンレス製容器に採
り、必要に応じて不活性有機溶媒、たとえばヘキサン、
ヘプタン、エーテルなどで溶解し、されに適量、好まし
くは該グリセロリン脂質の１１５〜５倍量の水対リン脂
質０．０１〜３０重量％のホスホリパーゼＣあるいはそ
の固定化物、さらに必要に応じてホスホリパーゼＣの反
応に最適なｐＨ１好ましくはｐＨ５〜１１、望ましくは
６〜１０に調整した緩衝液および賦活剤としてカルシウ
ム、マグネシウム、亜鉛などを塩化物、リン酸塩、水酸
化物などの状態で添加したのち、攪拌もしくは振とうし
ながら不活性気体、たとえば窒素ガスなどを吹き込みつ
つ、２０〜８０℃、好ましくは４０〜７０°Ｃまで昇温
し、この状態で加水分解反応を行わしめる。

リン脂質はそれ自体が乳化剤としての作用を有するため
、通常のリパーゼによる油脂加水分解で必要とするポリ
ビニルアルコール、ポリビニルピロリドンなどの非反応
性乳化剤は本発明では不用である。約１時間〜７２時間
、本加水分解反応を行う。この反応によりグリセロリン
脂質のリン酸基−グリセリド基が切断される。なお、本
反応は固定化ホスホリパーゼＣを充填したカラム方式で
行わしめることもできる。すなわち、ガラス製またはス
テンレス製円筒管に該固定化物を詰め、前述の組成物で
乳化状態とした反応液を液循環ポンプなどを介してカラ
ムの一方から滴下、もしくは微加圧下に流入せしめ、他
方から取り出し、また必要に応じてカラム内に反応液を
循環させ、一部を取り出し、反応を行わせることができ
る。反応過程は反応液のＴＬＣ（薄層クロマトグラフィ
ー）、ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）、アル
カリ滴定法などの分析方法により加水分解物の生成経過
を把握でき、これにより反応時間を調節することもでき
る。

反応終了後、８０°Ｃ以上に５〜３０分間加熱するか、
ＥＤＴＡのごとき酵素活性阻害剤を添加してホスホリパ
ーゼＣ活性を失わせ、遠心分離処理をし、さらに適量の
水で洗浄し、水層を除去した後、無水硫酸ナトリウムあ
るいは塩化カルシウムなどの脱水剤を添加して加水分解
物層を乾燥させる。

次に加水分解物層にＰＵＦＡおよび／またはＰＵＦＡエ
ステルを、ＰＵＦＡとして反応等モルないし５倍モル重
量添加し、さらに対反応生成物０．０１〜３０重量％の
リパーゼあるいはその固定化物を加え、前述の加水分解
反応と同様に必要に応じてカルシウム、マグネシウムな
どの賦活剤、緩衝液（ｐ　Ｈ４〜８好ましくはｐＨ５〜
７）を添加した後、不活性ガス気流中攪拌もしくは振と
うしながら耐熱性リパーゼの場合は５０°Ｃ以上、好ま
しくは５０〜７０℃、常温リパーゼの場合は、２０〜２
５℃、好ましくは３５〜４５℃で約１時間〜約７２時間
反応させる。この反応により、前記加水分解物と添加し
たＰＵＦＡとが結合する。なお、本反応はパンチ方式の
ばかホスホリパーゼＣの場合と同様にカラム方式で実施
できる。反応液のＴＬＣ，ＨＰＬＣなどの分析法により
反応過程を把握でき、これにより反応時間をコントロー
ルすることもできる。

反応後、ホスホリパーゼＣの場合と同様にリパ−ゼを失
活させ、遊離状態のＰＵＦＡが生成物系中に存在する際
には常法により脱酸処理し、またＰＵＦＡエステルが存
在する際には溶剤分別、吸着カラムクロマトグラフィー
などの精製処理をほどこして目的物であるＰＵＦＡグリ
セリドを得ることができる。

（ｅ）実施例 実施例１ 特開昭６０−１２６０９１号公報記載の方法に準拠して
糸状菌カニンガメラエレガンス（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ
ｅｌｌａｅｌｅｇａｎｓ；ＮＲＲＬ　１３７Ｂ　）を培
養し、菌体を溶剤抽出してγ−リルン酸（１８＋３ω−
６）を主成分とするリン脂質を得た。このリン脂質はホ
スファチジルコリン、リゾホスファチジルコリン、ホス
ファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシト
ールであり、構成脂肪酸はγ−リルン酸を主成分（ＧＬ
Ｃ純度９０％）とし、α−リルン酸、リノール酸、オレ
イン酸、ステアリン酸、バルミチン酸などであった。

このグリセロリン脂質１００ｇを攪拌機および冷却管つ
き四ソロフラスコ（５００ｍｊりに採り、ｎ−ヘキサン
１００ｍ７！で溶解した後、ホスホリパーゼＣ（Ｐｓｅ
ｕｄｏｍｏｎａｓ　５ｃｈｕｙｋｉｌｌｉｅｎｓｉｓ由
来天野製薬■製品）５ｇ、精製水５０ｇ、０．５Ｍ　）
リス塩酸緩衝液（ｐＨ８，５＞１０ｍ１を添加した。

窒素ガスを吹き込みながら、２００ｒｐｍで攪拌しつつ
、６０℃で２４時間反応させた。反応物の一部をクロロ
ホルム／メタノール／酢酸を展開溶媒としたＴＬＣ（薄
層クロマトグラフィー）で分析したところ、上記リン脂
質のスポットが消え、ジグリセリドが生成していること
を確認した。

反応停止後、８０℃に１５分加熱し、遠心分離して水層
を除き、さらに５回水洗を行い、水層を除いた後、無水
硫酸ナトリウム′を用いて溶媒層を乾燥した。

次にこの溶媒層に上記菌体から溶剤抽出した脂質の一部
を常法により、ケン化分解して得たγ−リルン酸を主成
分（Ｇ　Ｌ　Ｃ純度９３％）とする混合脂肪酸５０ｇ１
リパーゼ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｆｌｕ。

ｒｅｓｃｅｎｓ由来、天野製薬■製品＞５　ｇ、０．１
ＭＩＪン酸緩衝液（ｐＨ６，５）３ｍｌを添加し、窒素
ガス気流中、２００ｒｐｍで攪拌しながら、６５℃で２
４時間反応させた。反応液をＧＬＣガス（ガスクロマト
グラフィー）で分析してところ、ジグリセリドは存在せ
ず、トリグリセリドが生成していることを確認した。こ
の後、常法によりリパーゼを失活させ、遊離脂肪酸を脱
酸し、乾燥して目的のＰＵＦＡ）ジグリセリドを得た。

実施例２ 甲殻類レシチンとしてカニのリン脂質（リン脂質組成：
ホスファチジルコリンを主成分（５０％）として、リゾ
ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミ
ン、リゾホスファチジルエタノールアミン、ホスファチ
ジルイノシトール；脂肪酸組成：エイコサペンクエン酸
（純度２５％）を主成分としてドコサヘキサエン酸、ア
ラキドン酸、オレイン酸、パルミチン酸）１０ｇ、ｎ−
ヘプタン２０ｍ７！、東京農業大学農学部果報、Ｕ（ｌ
ｋ　３　）　、２６２（１９８４）記載の方法に準じて
単離した米糠由来のホスホリパーゼＣ０，３ｇ、精製水
５ｍ！および０．３Ｍ）リス塩酸緩衝液（ｐＨ９，５）
３ｍｊｌ！を用い、実施例１と同様に７０℃で４０時間
反応させ、ＴＬＣ分析によりジグリセリドの生成を認め
、酵素失活化、遠心分離、水洗、乾燥処理を行った。イ
ワシから採取した油脂を常法によりケン化分解し、溶剤
分別法およびカラムクロマト法で精製した後、これにエ
チルアルコールでエステル化したエイコサペンクエン酸
エチル（ＧＬＣ純度９４％）４．５ｇ、リパーゼ（Ｃａ
ｎｄｉｄａ　ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ由来１名糖産業■
製品）０．３ｇをケイソウ土粉末０．５ｇに精製水０．
３ｍｊ！で吸着させた固定化リパーゼを添加し、５０℃
で２４時間反応させ、反応液のＧＬＣ分析によりトリグ
リセリドの生成を認めた。この後リパーゼを失活化、シ
リカゲルカラムクロマトグラフィーにより過剰のＴ−リ
ルン酸エチルを分離、精製して目的のＰＵＦＡトリグリ
セリドを得た。

実施例３ 海産緑藻クロレラミニュティシマ（Ｃｈｌｏｒｅｌｌａ
ｍｉｎｕｔｉｓｓｉｍａ）を海水中で培養した細胞を集
め、洗浄して細胞をホモゲナイザーで破砕し、クロロホ
ルム／メタノール溶媒で抽出してリン脂質を含むクロレ
ラ脂質を得た。リン脂質組成はホスファチジルコリン、
リゾホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノール
アミン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン
酸であり、その構成脂肪酸組成はエイコサベンクエン酸
を主成分としてアラキドン酸、リルン酸、リノール酸、
バルミチン酸であった。このクロレラのリン脂質５０ｇ
を、ｎ−デカン２０　ｍ　Ａおよび０．１Ｍ）リス塩酸
緩衝液（ｐＨ９，０＞５０ｍｎと攪拌して乳化状態にし
た。一方、実施例２記載の米糠由来のホスホリパーゼＣ
１ｏｇを２％アルギン酸ナトリウム水溶液に混合、溶解
し、これを１％塩化カルシウム水溶液中に滴下してゲル
状の固定化ホスホリパーゼＣを得、ガラス管（２，５Ｃ
：ＩＱ径Ｘ　５　Ｑ　ｃｍ長）に詰めた上記クロレラの
リン脂質の乳化液を液送ポンプによりカラムの下部から
１０ｍβ／ｈｒのスピードで送入させ、上部より流出す
る液に０．５Ｍ水酸化ナトリウム水溶液を連続的に供給
して、中和し、さらに解乳化を行い、溶剤層を塩化カル
シウムで乾燥させた。この反応液にイワシから採取した
油脂を常法によりケン化分解して得たエイコサペンクエ
ン酸２５ｇを加え、この液を固定化リパーゼ（Ｍｕｃｏ
ｒ　ｍ１ｅｈｅｉ　　由来、デンマーク・ノボインダス
トリー社製品）を詰めたガラス管カラム（２，５ｃｍ径
Ｘ５Ｑｃｍ長）に前述の加水分解時と同様に流入させ、
流出する反応物を脱酸処理し、その組成をＧＬＣにより
分析したところ、主成分はエイフ　　　　　　−サペン
クエン酸トリグリセリドであった。

実施例４ 特・開閉５１−９１２１３号公報記載のリン脂質合成法
に準拠して１，２−ジアラキドニルホスファチジルコリ
ンを合成し、これとアラキドン酸（試薬、東京化成■製
品）を用い、実施例１と同様に反応を行い、高純度アラ
キドン酸トリグリセリド　を得た。

（ｆ）発明の効果 本発明の効果は次のようである。

■　本発明によれば、生体中に存在し、生理活性のある
高度不飽和脂肪酸を不安定なリン脂質から安定なグリセ
リドの形態に変換することができる。

■　本変換法は酵素を温和な反応条件下に作用させるた
め、化学的方法に比べて酸化、異性化重合、着色などの
好ましくない副反応を抑制でき、製造時の経済的メリッ
トが大きい。また目的物も高純度、高品質のものが製造
できる。

■　従来では不可能ないしは困難とされていたＰＵＦＡ
を含むリン脂質の変換が、２種類の酵素（ホスホリパー
ゼＣおよびリパーゼ）を用いることにより可能となった
。

■　この２種類の酵素は固定化酵素にすることにより、
またカラム方式により連続化することができ、省力化、
省エネルギー化に役立つ。

■　生成物である高度不飽和脂肪酸グリセリドは食品、
医薬品、化粧品、農薬、診断薬、分析用および一般試薬
などの広範囲な産業分野において利用できる。

特許出願人　　日清製油株式会社 手続補正書 昭和６屏８．」］日 特許庁長官　　小　川　邦　夫　殿 １、事件の表示 昭和６２年特許願第１６３４１７号 ２、発明の名称 高度不飽和脂肪酸グリセリドの製造法 ３、補正をする者 事件との関係　　　特許出願人 住所　　東京都中央区新川−丁目２３番１号本件に関す
る連絡は下記にお願いします。

郵便番号　２２１ 住　　所　神奈川県横浜市神奈用区千若町ｌ−３名　　
称　日清製油株式会社　研究所　乙フｌｐ町＼雷　　二
天　ＤＬＲ（４６１）ｎ１９１１４、補正の対象 （１）明細書の発明の詳細な説明の欄 ５、補正の内容 （１）明細書第９頁８行ｒ２６２　（１９８４）Ｊをｒ
２６２　　（１９８４））Ｊと訂正する。

（２）同第９頁下から１行「前期」を「前記」と訂正す
る。

（３）同第１０頁１２行ｒＲｈｉｚｏｐｕｓｃｈｉｎｅ
ｎｓｉｓＪをｒＲｈｉｚｏｐｕｓｃｈ　ｉ　ｎｅｎｓ　
ｉ　ｓＪと訂正する。

（４）同第１０頁下から６行［ｄｅｒｅｍａｒＪを「ｄ
ｅｌｅｍａｒＪと訂正する。

（５）同第１１頁８〜９行「磁製体」を１磁性体」と訂
正する。

（６）同第１１頁１０行「あるいと」を「あるいは」と
訂正する。

（７）同第１２頁４〜５行「水対リン脂質」を「水、対
リン脂質」と訂正する。

（８）同第１６頁３〜４行「由来天守」を「由来２天野
」と訂正する。

（９）同第１７頁３行ｒＧＬｃガス」をｒＧＬＣ」と訂
正する。

（ｔｅｌ同第１７真下から３行「農学部集軸」を１農学
集報」と訂正する。

αυ同第１８真下から２行「緑藻」を「藻類」と訂正す
る。

（ロ）同第２１頁３行「異性化重合ｊを「異性化、重合
」と訂正する。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）炭素数が１８以上でかつ二重結合を３個以上有す
   る高度不飽和脂肪酸を含むグリセロリン脂質を、ホスホ
   リパーゼＣの存在下に加水分解し、ついで該加水分解物
   と炭素数が１８以上で、かつ二重結合を３個以上有する
   高度不飽和脂肪酸および／または該高度不飽和脂肪酸エ
   ステルとをリパーゼの存在下に反応させることを特徴と
   する高度不飽和脂肪酸グリセリドの製造法。