JPH01135796A - 合成ペプチドの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、合成ペプチドの調製方法に関するものである
。さらに詳しくは、本発明は、新しいラセミ化しないペ
プチド合成方法に関するものである。

〔従来の技術〕

例えばＴｈｅ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、　Ｖｏｌｔ、＾ｃａ
ｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ。

１９７９又はＰｒ１ｎｃｉｐｌｅｓ　ｏｆ　ｐｅｐｔｉ
ｄｅｓ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ。

Ｓｐｒｉｎｇｅｒ、　１９８４のような専門的著書に従
って、多くの場合において以下の反応に従って、酸であ
る生成基ＥＯＨを中和させることのできる有機塩基の存
在する中で、その酸性末端が活性化され（Ｅ）アミン末
端が保護されている（Ｐ）ようなペプチド鎖を、その酸
性末端のみがエステル化されるようなもう一つのペプチ
ド鎖と縮合させることにより・ペプチド合成を実現する
ことは周知のことである二以下余８ 活性化 結合 いかなるものであれ使用される塩基は、活性化の段階又
は結合の段階の間にペプチドの重大なラセミ化を誘発す
る。

ところが、ペプチド合成においては、大部分のペプチド
がジアステレオアイソマーの形でのみ活性状態にあると
いうことは良く知られている。ラセミ化は、縮合の後得
られた生成物の活性損失をひきおこし、このことは、キ
ラル的に活性状態の原料が往々にしてきわめて高価格で
あるために非常に大きな障害となる。ペプチドは、厳し
い分析規格を要求する薬品業界で使用されており、その
合成に際してジアステレオアイソマーの混合物の形で得
られた場合精製されなくてはならない。この精製が非常
に費用のかかる作業なのである。

従って、業界はずいぶん以前から、一定の明確なキラル
純度をもつ活性ペプチドを抽出方法と薄皿できるような
コストで得ることができるようにする、天然生成物に基
づく抽出方法と競合する化学的方法を探し求めてきた。

例えばジシクロへキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）のよ
うな活性剤及び下記のような添加剤を用いることにより
最大限にラセミ化を抑止してペプチドを調製することが
知られている： Ｎ−ヒドロキシサクシニミド、 ヒドロキシ−１ベンゾトリアゾル、 Ｎ−ヒドロキシノルボルネーン−５ジカルボキシミド−
２，３、 一般に、ペプチドに対してアミノ酸を１つずつ加えるこ
とのできる合成技法によりウレタン基によりＮ保護され
たアミノ酸をあまりラセミ化することなく縮合させるこ
とが知られている。これに対して、アミン官能基がアシ
ル基と置換された場合（言訳、山田及び桑田著、Ｐｅｐ
ｔｉｄｅ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ。

１９８２年、６９）又は、ペプチド鎖の１部を成す場合
、ラセミ化率はもはや無視できないものとなり、２５％
にも達しうる。

ラセミ化率は、活性アミノ酸、保護基、活性試薬及び活
性化反応条件により変わり、特にアシルタイプの保護基
を用いる場合１００％になりうる。

〔１発明が解決しようとする課題〕 本発明は、先行技術において残された問題点を解決する
ことを可能にする。本発明は′、安価な原料から、他の
実験条件（Ｄ　ＣＣと添加剤又は塩化ピバロイル及び第
三アミン又はＢＯＰＣ＆’と第三アミン）では無視でき
ないラセミ化に導くようなバリンのその他のバリンに対
する結合の際９９％以上のキラル純度を呈するペプチド
合成を、化学的方法で達成することを可能にする。

以下金白 〔課題を解決するための手段〕 本発明の目的は、以下のことを特徴とする光学的に活性
な合成ペプチドの調製方法にあるニー第１の工程におい
て、その窒素官能基が保護されているペプチド又はアミ
ノ酸のＯ−シリル化された誘導体（Ｉ）を調製すること
。

−第２の工程において、０−シリル化されたペプチド又
はアミノ酸をリンのハロゲン化誘導体（Ｉｆ）により活
性化すること。

一第３の工程において、該活性化されたペプチド又はア
ミノ酸（ＩＩＩ）を、酸性官能基が保護されアミン官能
基がＮ−シリル化されたものであるようなペプチド又は
アミノ酸士と、縮合せしめること。

従って、本発明によると、特に活性化工程（Ｂ）及び結
合工程（Ｃ）においてあらゆる塩基の介入を避けること
ができる。本発明は、特にシリル化された成分が１つ以
上のアミノ酸を含んでいる場合に興味深いものである。

ヨーロッパ特許第１８４２４３号により、トリアルキル
シアノシランを用いてペプチド又はアミノ酸のシリル化
された誘導体を調製し、その後これらのシリル化された
誘導体を活性化されたペプチド又はアミノ酸と結合させ
るという方法も知られている。シリル化に際してシアン
化水素酸の遊離がみられ、この水素酸の毒性はひじよう
に高いため、業界の計画全てからこの方法は除外されて
いる。

一方、当該特許において用いられる活性剤は、多大なラ
セミ化が現われることなくペプチドフラグメントに対し
用いることができないものである。

〔具体的な説明〕。

本発明の反応は、以下の等式により概略的に表わすこと
ができる： 以下余白 ＋Ｒ，Ｒ５Ｒ，ＳｉＸ ここで式中： Ｒ′ ／ ・Ａは塩素又は−Ｎ　　　基を表わし、ここで＼ 　ＩＩ ☆　Ｒ′は水素、又はｎを１〜４までの数とするアルキ
ル基Ｃ１Ｈ２ｎ＋１　を表わし、☆　Ｒ”はｎを１〜４
までの数とするアルキル基ＣＪ２ｎ＋１　、又はアルキ
ル基が１〜４個の炭素原子を含むトリアルキルシリル基
を表わし、あるいは☆　Ｒ′及びＲ”はアルキルシリル
オキジアルキき、 −Ｒは、メチル又はトリフルオロメチル基であってもよ
い。

・Ｑは、先行技術で知られている方法において用いられ
ているアミン基、Ｎ末端の保護基の１つである（Ｇｒｏ
ｓｓ及びＭｅｉｅｎｈｏｆｅｒ共著、Ｔｈｅ　ｐｅｐｔ
ｉｄｅｓ。

Ｖｏｌ３．＾ｃａｄｅ＋ｓｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、１９８１
年）。

制限的な意味をもたない例として、Ｑはｔ−ブチルオキ
シカルボニル（ＢＯＣ）　、ベンジルオキシカルボニル
（Ｚ）、フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏ
ｃ）、ベンゾイル、トリフルオロアセチル、ホルミル基
であってよい； ・Ｒ，及びＲ７は、水素であるか又はメチル基である。

・Ｒ２及びＲ−は、以下の置換基の中から選ぶことがで
きる：水素、線形又は枝分れしたアルケニル又はアルキ
ル基ＣｎＨ２，＋、（なおｎは１から４までの整数値で
ある）、ベンジル基又は以下に制限的でないリストが示
されている基（原子団）のうちの１つ： ＱａＨＮ−ＣＯ−ＣＨ２−、Ｑ、ｌＮ−Ｃ０−ＣＨ２−
ＣＨ２−、Ｒ，，０□Ｃ−Ｃ１１２−、Ｒ，。０□Ｃ−
Ｃ１，−ＣＨ，−。

なおここにおいて、Ｑ、、Ｑ、、Ｑｓ、Ｑ、、Ｑｓ。

Ｑ、、Ｑｔ及びＱ８は、先行技術（Ｇｒｏｓｓ及びＭｅ
ｉｅｎ−ｈｏｆｅｒ著、Ｔｈｅ　ｐｅｐｔｉｃｌｅｓ、
　Ｖｏｌ、３．＾ｅａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ−１９８
１年）において知られている方法で用いられている側鎖
の保護基である。制限的な意味をもたない例として、Ｑ
、はベンジル基、ブロモ−２ベンジル又はジクロロ−２
，６ベンジル基であってよく、Ｑ２はベンジル又はｔ−
ブチル基、Ｑ、はベンジル、ｔ−ブチル、トリチル、ア
セトアミドメチル又はベンザミドメチル基、Ｑ４はトリ
フルオロアセチル、ｔ−ブチルオキシカルボニル又、は
ベンジルオキシカルボニル基であることができ、Ｑｓが
Ｈである場合Ｑ、はニトロ、Ｐ−メトキシベンゼンスル
フォニル又はメシチレンスルフォニルであるか或いはＱ
、及びＱｓが同時にアダマンチルオキシカルボニル基で
構成されていてもよい、Ｑ７はフェナシル、ベンジルオ
キシメチル又はし−ブトキシメチル基、Ｑ、はベンツヒ
ドリル、ジメトキシベンツヒドリル又はキサントヒドリ
ル基であることができる。

・Ｒ２及びＲｓは、以下の置換基の中から選ばれる：水
素又はｎを１〜４までの数としてアルキル基ＣｎＨ２ｎ
＋＋　。

・Ｒ１はＲ２と、又Ｒ２はＲ６と２〜５個の炭素原子を
含むシクロポリメチレン鎖を形成することもできる。

置換基Ｒ２及びＲ８が結合している炭素原子は、Ｌ又は
Ｄの立体配置を有し、Ｒ２＝　Ｒ：＋及びＲ，＝Ｒ１で
ある場合を除き非対称ｃ′″）である。

・Ｘ及びｙは１〜１５までの整数である。

・Ｒ４，Ｒｓ及びＲ６は、水素、ｎを１〜４の数とした
アルキル基ＣｎＨ２ｎ＋１の中から選ばれる。ただしこ
の場合これら３つの項が同時に水素でないことを条件と
する。

−ＲＩＧは、先行技術（Ｇｒｏｓｓ及びＮｅ１ｅｎｈｏ
ｆｅｒ著Ｔｈｅ　　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ、　　Ｖｏｌ、３
．　　＾ｃａｄｅ＋ｍｉｃ　　Ｐｒｅｓｓ、　１９８１
）内で知られている方法において用いられている側鎖の
酸性官能基及び酸性官能基Ｃ末端の保護基のうちの１つ
である。制限的でない例として、メチル、エチル、フェ
ニル、ベンジル又はｔ−ブチル基を挙げることができる
。

リン試薬ＸＰＩ又はゞは、酸化状Ｆｆ［又はＶのリンの
誘導体、特に以下のものの中から選ばれる：■ ×２ なお式中： Ｘは、塩素又は臭素である。

Ｒは、ｎを１〜４の数とするアルキル基ＣｎＨ２ｎや１
、フェニル基又はオキソ−２オキサゾリジニル−３基で
ある。

Ｚ及びＹは、酸素又は硫黄の原子である。

特に限定的に言うと、塩化ビフェニルホスホニル（Ｄｐ
ｐ　　Ｃ１）（Ｒ＝ＣｓＨｓ、ｙ＝ｏ、ｘ＝ｃｔトｔル
化学式■）及び塩化Ｎ、Ｎ’−ビスーオキソー２オキサ
ゾリジニル−３ホスフイニル（ＢＯＰ　−ＣＩ）式Ｖ）
を用いる。

これらの条件の下で、活性化された誘導体（ＩＩＩ）は
、Ｕ＝Ｒ１−ＺＲ又は−ＮＲ，Ｒ，Ｚ及びＹは前述の値
を有するものとして下記の一般式の混合無水物である： 酸性官能基のシ・リル化反応は、Ａ　、Ｒ４，Ｒｓ及Ｒ
６の各項が前記のものと同じ意味をもつものとして式＾
５ｉＲ＝ＲｓＲｓのシリル化試薬との反応により、Ｎ保
護されたペプチド又はアミノ酸を用いて行なうことが望
ましい。

アミン官能基のシリル化反応はできれば、Ａ。

Ｒ４，Ｒ５及びＲ６の各項が前記のものと同じ意味をも
つものとして式＾５ｉＲ４ＲｓＲ，のシリル化試薬と対
応するエステルの間の反応により、ペプチド又はアミノ
酸を用いて行なうことが望ましい。

これらのシリル化反応は、先行技術により知られている
条件の下で行なわれる。

アミノ酸又はペプチドの誘導体は、例えばエーテル（テ
トラヒドロフラン）、ハロゲン化された脂肪族溶剤、エ
ステル、ニトリル（アセトニトリル）又はアミド（ＤＮ
Ｆ）といっな溶剤の中にシリル化剤と共に導入される。

一実施態様によると、特に、１リツトルあたり０．１モ
ルから１モルの溶剤中アミノ酸又はペプチド濃度が用い
られる。

アミノ酸又はペプチドに対するシリル化剤の濃度として
は１〜３モルを用いると有利である。

本発明をよりうまく利用するためには、アミン官能基が
保護されそして酸性官能基がＯ−シリル化されているよ
うなペプチド又はアミノ酸をリンの有機誘導体と接触さ
せることから成る第２の工程の間に、脂肪族又は芳香族
の溶剤中に窒素又はアルゴンのような不活性ガス流の下
で第１の方法に従って作業することが好ましい。

活性化されたペプチド又はアミノ酸を溶解することがで
き、かつこれともリン誘導体とも反応しないようなあら
ゆる溶剤を用いることができる。

溶剤は、特に塩化メチレン、クロロホルム、ジク・ロロ
ー１．２エタン、クロロベンゼン、アセトニトリル、テ
トラヒドロフランの中から選ばれる。

本発明に従った方法の第二の実施態様に従うと、リン誘
導体によるペプチド又はアミノ酸の活性化の際に溶液中
にエポキシ−１，２−アルカン又は−シクロアルカンの
中から選ばれたエポキシドを付加することもできる。エ
ポキシ−１，２シクロペンタン及びエポキシ−１，２プ
ロパンを用いることが好まれる。この第二の実施態様に
おいては、溶剤としてクロロホルム又は塩化メチレンを
用いることが好ましい０反応源度は特に−１０℃から３
０℃までの間で変化しうる。

アミノ酸又はペプチドに対する前記試薬のモル比が０．
８から０．９５までであるようなリン化試薬の量を用い
ることが望ましい。

リン誘導体とアミノ酸又はペプチドの間の反応は、でき
れば−１５℃と３０℃の間の温度で行なわれることが望
、ましい。溶剤中のリン誘導体又はアミノ酸又はペプチ
ドのモル濃度は、溶剤１リツトルあたり０．０１モルか
ら０．１モルであることが好まれる。

活性化反応の時間は、本発明の第２の工程の第一の実施
態様に従うと３０分から２時′間、第二の実施態様によ
ると１０分から１時間の間で変化することが有利である
。

結合反応（Ｃ）に関しては、ヨーロッパ特許第１８４２
４３号にあるような先行技術においては、カルボキシル
官能基及びアミノ官能基に対しシリル化誘導体を結合さ
せることが知られているが、これらの方法のいずれにお
いても窒素官能基に対しシリル化された誘導体−とリン
基により活性化された・　誘導体の間の結合は記されて
いない、ところが、この明確に規定された結合が、ラセ
ミ化の不在に関し全く予期せぬ結果をもたらすのである
。

本発明に基づく方法の第３段階又は結合反応は、不活性
ガスの大気の下でできれば一１０℃と２０℃の間の温度
で活性化されたアミノ酸又はペプチドの溶液に対してシ
リル化されたアミノ化合物を付加することにより行なわ
れる。亜鉛又は銅のハロゲン化物の中から選ばれた金属
触媒を付加するへ　と有利である。

結合反応の時間は２時間〜２４時間の間で変化する。

もう一つの方法は、アミノ化合物の付加の前に反応媒質
内に、制限的な意味のない例としてＮ−ヒドロキシスク
シニミド、Ｎ−ヒドロキシノルボルネーン−５ジカルボ
キシミド−２，３、ヒドロキシ−１ベンゾトリアゾール
、ジヒドロ−３，４ヒドロキシ−３ケト−４ベンゾトリ
アジン−１゜２．３の中から選ばれる添加剤を導入する
ことから成る。この試薬は、セシウム塩、テトラアルキ
ルアンモニウム塩又はテトラアルキルフォスフオニウム
塩の形で用いることができる。

本発明は、いかなる場合であれ本発明を制限するものと
考えられてはならない以下の例を用いて、以下により完
全に記述されている。

肛 無水塩化メチレン（アミジノにより安定化されたもの）
２０ｎ＋４！中のジメチルシリルジエチルアミン０．５
ｇ（３，８ｍＭ）及びベンゾイル−し−バリン０．４３
ｇ　（１，９４ｍＭ）を周囲温度で５時間、窒素下で撹
拌する０次に加熱せずに真空下で濃縮させる。ベンゾイ
ル−Ｌ−バリンのジメチルシリルエステルの粗残渣を７
０ｍ１の塩化メチレンに加える。０．４６ｇ（１，８１
ｍＭ）のＢＯＰ−ＣＩを加える。これは、懸濁状態にと
どまっている。２分間、わずかな真空を加え、次に反応
媒質の中で４５分間強い窒素流を吹き込む、塩化ジメチ
ルシリルは溶剤の一部と共に運びさられ、こうして温度
は一１５℃にまで低下する。

補足的な量の溶剤を付加することにより（０，０５Ｍの
溶液となるよう）最終的な量を３５ｍ１に調整する、活
性化試薬はこのとき完全に溶解している。

無水塩化亜鉛を０．２５　ｇ　（１，８１ｍＭ）加え、
さらに２分間窒素を吹き込む。最後にＮ−）リメチルシ
リルーし一バリンのメチルエステル０．３６ｇ　（１，
８１ｍＭ＞、エポキシ−１，２シクロペンタン０．３０
４ｇ（３，６２ｍＭ）、メタノール７３μｊ２（１，８
１ｍＭ＞を加え、１６時間周囲温度で窒素下で撹拌する
。

このとき、高性能液体クロマトグラフィーでの収量の決
定のためのテストをして用いられるジペプチドＢｚ−Ｖ
ａｔ−Ｇｌｙ−ＯＭｅ　０．５３ｇ　（１，８１ｍＭ＞
を加える。クエン酸の規定液で３回、次に重炭酸ナトリ
ウムの飽和溶液で３回そして水で１回洗浄する。

有機相は硫酸マグネシウムで乾燥させられ、溶剤は真空
下で追出される。

Ｂｚ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−ＯＭｅの収量及びラセミ化率（
％ＤＬ単位で表わされたもの）は、ＭｅＯＨ５２％−１
１２０４８％の混合物を溶離液とし１社／分の流量で（
２５４ｎｍでの検出）　Ｃｌ８Ｕｌｔｒａｓｈｅｒｅ　
Ａｌｔｅｘカラム上での逆相高性能液体クロマトグラフ
ィーにより粗残渣から決定される。

収量　６４％　　ＤＬ％０ 汁＾ 例１と同様に作業を進めるが、この場合結合時間は２４
時間である。

収量　６４％　ＤＬ％１ 匠１ 例１と同様に作業を進めるが、０．２Ｍの溶液とする。

収量　６８％　ＤＬ％２．５ 肛 例１と同様に作業を進めるが、塩化亜鉛は付加しない。

収量　５０％　ＤＬ％１１．７ 匠ｉ 塩化メチレン２０ｍ１中のジメチルシリルジエチルアミ
ン０．５ｇ（３，８ｍＭ）及びベンゾイルニし一バリン
０．４３　ｇ　（１，９４ｍＭ）を窒素・下で５時間周
囲温度にて撹拌する。次に加熱することなく真空下で濃
縮させる。粗残渣を７０ｍ１のＣＨ２Ｃｌ、＝に入れる
。Ｂｏｐ−ｃｌを０．４６．　（１，８１輪Ｍ）加え、
２分間軽く真空を加え、次に４５分間強い窒素流を吹き
込む、塩化ジメチルシリルは溶剤の一部と共に運び去ら
れ、こうして−１５℃まで温度が低下する。溶剤を付加
することにより最終量を３５＋＊１（０，０５Ｍの溶液
）に調整する。このとき無水塩化亜鉛０．２５ｇ　（１
，８１ｍＭ＞を付加しさらに２分間窒素を吹き込む、最
後にＮ−トリメチルシリル−し−プロリンのメチルエス
テル０．３６　ｇ　（１，８１ｍＭ）、エポキシ−１，
２シクロペンタン０．３０４ｇ（３，６２ｍＭ）、メタ
ノール７３・１０−り社（１゜８１ｍＭ＞を加え、窒素
下で１６時間撹拌する。

次にテスト用ジペプチドＨｚ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−ＯＭｅ
を０．５３　ｇ　（１，８１ｍＭ）加え、クエン酸規定
液で３度、飽和重炭酸ナトリウムで３度、水で１度洗う
、硫酸マグネシウムで乾燥させ、真空下で溶剤を追い出
す。

Ｂｚ　−Ｖａ　ｌ−Ｐｒｏ　−ＯＭｅの収量及びラセミ
化率（ＤＬ％で表わされたもの）は、Ｍｅ０１１４８％
−Ｈ，０５２％の混合物を溶離液として１　ｍｌ１分の
流量で（２５４ｎｍで検出）Ｃ１８旧Ｌｒａｓｈｅｒｅ
＾ｌ　ｔｅｘカラム上での逆相高性能液体クロマトグラ
フィにより粗残渣から決定される。

収量　６８％　ＤＬｏ、２％ 倒予− 塩化メチレン２０＋＋＋１’中のへキサメチルジシラザ
ン１＋ｓ１とベンゾイル−し−バリン０．４３ｇ　（１
，９４ｍＭ）を、窒素下で２時間周囲温度で撹拌する。

このとき、加熱せずに真空下で濃縮（縮合させる）、ベ
ンゾイル−し−バリンのトリメチルシリルエステルの粗
残渣を、３５社の塩化メチレン中に入れる。

連続的に０．３０４ｇ（３，６２ｎ＋Ｍ）のエポキシ−
１，２シクロペンタンと０．４６ｇ　（１，８１ｍＭ）
のＢＯＰ　−ＣＩを添加する。窒素下、周囲温度で２０
分撹拌じた後、溶液中に０．２５ｇ　（１，８１ｍＭ）
の無水塩化亜鉛、次に５分の撹拌後０．３７ｇ　（１，
８１ｍｍ）のＮ−）リメチルシリルーし一ヴアリンのメ
チルエステル （１．８１ｍＭ）のメタノールを導入する．反応は、窒
素上周囲温度で１６時間撹拌される。

高性能液体クロマトグラフィによる処理及び分析は例１
のとおりに行なわれる。

収量　７４％、ＤＬ％０ 比肩ひ１と 無水塩化メチレン２０社中に溶解したベンゾイル−し−
バリン４０輪ｇ（１，８１ｇＭ）に連続的に０．４６−
ｇ（１，８１１１Ｍ＞のＢＯＰ　−ＣＩと０．２５＋＋
＋４（１，８１ｍＭ）のトリエチルアミンを一３０℃で
加える。１５分間この温度で撹拌した後、０．３７ｇ　
（１，８１ｍＭ）のベンゾイル−し−バリンのメチルエ
ステル リエチルアミンを加える。周囲温度まで戻して１５時間
撹拌を続行する．次に、クエン酸規定液で３回、重炭酸
ナトリウムの飽和溶液で３回そして最終的に水で洗う．
有機相は硫酸マグネシウム上で乾燥させられ、溶剤は真
空下で追出される。

収量　６０％、ラセミ化：完全 健Ｌ ＣＨ２Ｃ１！　２　Ｏ　ｄ中のＮ−ｔ−ブチルオキシカ
ルボニルし一アスパラギン酸のβ−ベンジルエステル０
、６３ｇ　（１．９４＋＋＋Ｍ）及び過剰のへキサメチ
ルジシラザンを窒素上周囲温度で２時間撹拌する．加熱
せずに真空下で濃縮（縮合）させ、塩化メチレン３６ｍ
ｌに残渣を入れる．このとき０．３０４ｇ（３．６２ｍ
Ｍ）のエポキシ−１．２シクロペンタン、次に０．４８
ｇ（１．８１ｍＭ）のＢＯＰ　−　ＣＩを加える．窒素
上周囲温度で２０分間撹拌した後、０．２５　ｇ　（１
．８１＋ｍＭ）の塩化亜鉛を導入する。周囲温度での５
分間の撹拌後、０．４６ｇ（１．８１ｍＭ）のＮ−トリ
メチルシリルＬーフェニルアラニン、７３・１０−３ｍ
ｌ（１．８１ｍＭ）のメタノールを加え、窒素上周囲温
度で１６．時間撹拌する。

連続的にクエン酸規定液で３回、重炭酸ナトリウムの飽
和溶液で３回、水で１回洗浄を行ない、硫酸マグネシウ
ム上で乾燥させ、真空下で溶剤を追い出す。

Ｈｏｅ−＾ｓｐ（ＯＢｚｉ’）　　Ｐｈｅ−ＯＭｅの収
量は５０％である．油状物は、そのＲＭＮスペクトル及
びその質量スペクトルで特徴づけられている。

八ｓｐａｒｔｉｍｅの保護除去は最終的に先行技術に従
って行なわれる。

匠１ ２０ｍｌの塩化メチレン中の１ｍｌのへキサメチルジシ
ラザン及び０．４３．のベンゾイル−し−バリン（１　
、９４ｍＭ＞を窒素上周囲温度で２時間撹拌する。次に
加熱せず真空下で濃縮させる．ベンゾイル−し−バリン
のトリメチルシリルエステルの粗残渣を塩化メチレン３
５ｍｌ中に入れる．連続的に０．３０４ｇ（３．８２ｍ
Ｍ）のエポキシ−１，２シクロペンタン及びジフェニル
フォスフイン酸を２％含む市販のＤｐｐ−ＣＩ　０．４
３ｇ（１．８１＋ｓＭ）を加え．る、窒素上周囲温度で
２０分間撹拌した後、溶液中に０．４１　ｇ　（１．８
１．ｍＮ）の乾燥臭化第二銅、次に５分の撹拌後０．３
６ｇ　（１．８１ｍＭ）のＮ−トリメチルシリルし一プ
ロリンのメチルエステル及び０．３０４ｇ（３．６２ｍ
Ｍ）のエポキシ−ｌ。

２シクロペンタンを加える。最終的に、窒素上周囲温度
で１６時間撹拌する。

収量　７０％　ＤＬｌ．８％ 肚 例８と同様に作業を進めるが、臭化第二銅の代りに臭化
亜鉛（１．８１ｇＭ）を用いる。

収量　６７％　ＤＬｏ．７％ 匠１立 例８と同様に作業を進めるが、乾燥ヨウ化第二銅（１　
、８１ｓ＋Ｍ）を用いる。

収量　８２％　ＤＬｏ．９％ 例ユ」− 精製水２Ｏｎ＋１中工タノール２０ｍｌ中３ｇのジヒド
ロ−３．４−ヒドロキシ−３ケト−４ベンゾトリアジン
−１．２．３の溶液に、炭酸セシウム３ｇ　（９．２＋
ｎＭ）の水溶液を徐々に加える。次に真空下で乾燥する
まで濃縮させ、黄色の残渣は共沸エントレインメントに
より乾燥させる。収量９０％。

例１と同様に０．４３　ｇ　（１．９４ｍＭ）のベンゾ
イル−し−ヴアリンと０．４３ｇのＤｐｐＣｌ（１．８
１ｍＭ）を用いて作業を進めるが、塩化亜鉛の添加はジ
ヒドロ−３。

４ヒドロキシ−３ケト−４ベンゾトリアジン−１。

２、３のセシウム塩０．５３　ｇ　（１．８１ｍＭ）の
添加で置き換えられる。窒素下で１５分間、温度を０℃
まで戻しながら、撹拌する．ここで０．３６　ｇ　（１
．８１ｍＭ）のＮ−）リメチルシリルーし一バリンのメ
チルエステル０．３６　ｇ　（１．８１ｍＭ）を添加し
、窒素工大気温で２時間撹拌する。

収量　定量的　ＤＬｏ．２％ 以下余白 手続補正書 昭和６３年７月　７日 特許庁長官　吉　１）文　毅　殿 １、事件の表示 昭和６３年特許願第１０４３８５号 ２、発明の名称 合成ペプチドの製造方法 ３、補正をする者 事件との関係　　　特許出願人 名称　ローヌープラン　シミ ４、代理人 住所　〒１０５東京都港区虎ノ門−丁目８番１０号５、
補正の対象 明細書の「特許請求の範囲」の欄 ６、補正の内容 特許請求の範囲を別紙の通りに補正する。

７、添付書類の目録 特許請求の範囲　　　　　　　　　　１通２、特許請求
の範囲 １、第１の工程において、窒素官能基が保護されている
ペプチド又はアミノ酸のＯ−シリル化された誘導体を調
製し；第２の工程において、０−シリル化されたペプチ
ド又はアミノ酸をリン誘導体により活性化し；そして第
３の工程において、該活性化されたペプチド又はアミノ
酸を、酸性官能基が保護されそしてアミン官能基がＮ−
シリル化されたものであるようなペプチド又はアミノ酸
と縮合せしめることを特徴とする、光学的に純粋な合成
ペプチドの調製方法。

２ｏ　　前記リン誘導体により活性化された合成ペプチ
ドが１より多くのアミノ酸を含んでいることを特徴とす
る請求項１に記載の方法。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、第１の工程において、窒素官能基が保護されている
   ペプチド又はアミノ酸のＯ−シリル化された誘導体を調
   製し；第２の工程において、Ｏ−シリル化されたペプチ
   ド又はアミノ酸をリン誘導体により活性化し；そして第
   ３の工程において、該活性化されたペプチド又はアミノ
   酸を、酸性官能基が保護されそしてアミン官能基がＮ−
   シリル化されたものであるようなペプチド又はアミノ酸
   と縮合せしめることを特徴とする、光学的に純粋な合成
   ペプチドの調製方法。 ２、前記リン誘導体により活性化された合成ペプチドが
   １より多くのアミノ酸を含んでいることを特徴とする、
   請求項１に記載の方法。 ３、前記３つの工程の間塩基性誘導体の無い状態で作業
   を行なうことを特徴とする、請求項１に記載の方法。 ４、前記リン誘導体が以下の誘導体の中から選ばれるこ
   とを特徴とする、請求項１に記載の方法：▲数式、化学
   式、表等があります▼、（ＲＺ）＿２Ｐ−Ｘ、▲数式、
   化学式、表等があります▼、▲数式、化学式、表等があ
   ります▼、▲数式、化学式、表等があります▼、▲数式
   、化学式、表等があります▼（式中、 Ｘは、塩素又は臭素を表わし； Ｒは、ｎが１から４までの数としてアルキル基ＣｎＨ＿
   ２＿ｎ＿＋＿１、フェニル基、又はオキソ−２−オキサ
   ゾリジニル−３基を表わし； Ｚ及びＹは、酸素又は硫黄の原子である）。 ５、前記リン誘導体が、塩化ビフェニルフォスフィニル
   （Ｄｐｐ−Ｃ１）及び塩化Ｎ，Ｎ′−ビスオキソ−２オ
   キサゾリジニル−３フオスフィニル（ＢＯＰＣ１）の中
   から選ばれることを特徴とする、請求項４に記載の方法
   。 ６、前記第２の工程が脂肪族溶剤又は芳香族溶剤の中で
   、不活性ガス流下で行なわれることを特徴とする、請求
   項１に記載の方法。 ７、前記溶剤が塩化メチレン、クロロホルム、１，２−
   ジクロロエタン、クロロベンゼン、アセトニトリル、テ
   トラヒドロフランの中から選ばれることを特徴とする、
   請求項６に記載の方法。 ８、前記第２の工程が−１５℃と３０℃の間の温度で行
   なわれることを特徴とする、請求項１又は６〜７のいず
   れか１項に記載の方法。 ９、前記第２の工程に際してリン誘導体とアミノ酸又は
   ペプチドとのモル比として０．８から０．９５の間の値
   を使用することを特徴とする、請求項１に記載の方法。 １０、前記第２の工程に際してアミノ酸又はペプチドと
   溶剤とのモル比として０．０１〜０．１モル／リットル
   を用いることを特徴とする、請求項１に記載の方法。 １１、前記第２の工程を１，２−エポキシ−アルカン又
   は−シクロアルカンの中から選ばれたエポキシドの存在
   下で行うことを特徴とする、請求項１に記載の方法。 １２、選ばれた溶剤がクロロホルム又は塩化メチレンで
   あることを特徴とする、請求項１１に記載の方法。 １３、前記第３の工程の間に、亜鉛又は銅のハロゲン化
   物の中から選ばれた触媒を加えることを特徴とする、請
   求項１に記載の方法。 １４、前記第３の工程の間に、Ｎ−ヒドロキシサクシニ
   ミド、Ｎ−ヒドロキシノルボルネーン−５ジカルボキシ
   ミド−２，３、ヒドロキシ−１ベンゾトリアゾル又はジ
   ヒドロ−３，４、ヒドロキシ−３ケト−４−ベンゾトリ
   アジン−１，２，３の中から選ばれた添加剤のセシウム
   塩、テトラアルキルアンモニウム塩又はテトラアルキル
   フォスフォニウム塩を添加することを特徴とする、請求
   項１に記載の方法。