JPH01125331A - 腫瘍に対する高い親和性を有するベヒクル - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、悪性腫瘍の診断、位置付は及び観察のための
、放射性標識した組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔ
ＰＡ）を含む生物学的ベヒクルの使用及びこのベヒクル
を使用した、悪性腫瘍のシンチグフクィソディスプレー
法に関するものである。治療的使用法も述べられている
。

悪性組織及びその転移の早期及び確実な発見は、悪性腫
瘍からの回復の予後及び予想における最大の判断基準と
なる。コンピュータ断層撮影法に加え、免疫シンチグラ
フィーは、最近、がんの診断研究において重要な役割を
果してきている。しかし、この、放射性標識した抗体を
使用する最後の方法は、腫瘍特異的性質が知られておら
ず、かつ、全ての腫瘍は異なる表面抗原を有することか
ら、この種の抗体は、種々の組織の限られた腫瘍もしく
は、特別なタイプの腫瘍しか検出できないという、個有
の欠点を有する。

本発明の基幹をなす目標は、腫瘍組織に高い親和性をも
ち、ヒトに許容可能な、かつ広い範囲の悪性腫瘍に対し
、診断的にそして、または、予後的に、かつ、また治療
的に用いることができるベヒクルを発見することである
。この問題の解答として、放射性標識したｔＰＡ又は、
その実質的断片が、悪性腫瘍の診断、位置付け、発見及
び測定に使用でき、さらに、種々の起源の腫瘍を診断で
きるばかりでなく結果として調べられることになる。各
治療に対するそれらの応答速度の連続的モニターもでき
るという結果と合せて、この発見は、驚くべきものであ
る。それゆえ、本発明に従って、より早くかつより感度
が高く、さらに、従来法に比べ、より制限の少ない診断
法が提供される。

免疫学的理由で、本発明のベヒクルが種物異的に用いる
ことができる、例えば、ヒトｔＰＡは、ヒトに用いるこ
とができ、種物異的動物ｔＰＡは、獣医学で用いること
ができるということは、当業者には、明白なことである
。

ヒトのｔＰＡは、単一鎖及び二本鎖型のポリペプチドを
含む。ｔＰＡの分子量の文献値は、その起源に応じて、
６６、０００から７２．０ＯＯＤａの範囲にある。

ｔＰＡ分子のＮ末端部分は、プラスミノーゲン及びプロ
トロンビン中にみられる“コイル”と似た、もしくは、
対応する２つの構造を含んでいる。さらに、この部分は
、フィブリノネクチン中の“フィンガー様”構造と相同
的領域をもつ（バンヤイ（Ｂａｎｙａｉ）　＋　Ｌ　％
等　ＦＢＢＳレターズ、１６３巻。

３７〜４１頁１９８３年；ベニ力（Ｐｅｎｎｉｃａ）　
、　Ｄ　。

等、ネイチ＋−（Ｎａｔｕｒｅ）、　　３０１巻、２１
４〜２２１頁、１９８３年）。ｔＰＡ分子のカルボキシ
末端部分は、他のセリンプロテアーゼとかなりの相同性
を示している（ストラスバーガー（Ｓｔｒａｓｓｂｕｒ
ｇｅｒ）　、　Ｗ、等、ＦＢＢＳレターズ。

１５７巻、２１９〜２２３頁、１９８３年）、、これら
のコイル、フィンガー様構造及び活性領域に加え、ｔＰ
Ａは、上皮成長因子と相同性を示す成長因子ドメインを
含んでいる。従って、ｔＰＡは、各々が他のタンパク質
との相同性を示す、いくつかの機能の異なるドメインか
ら成り立っているように思われる（エリクソン（Ｒｒｉ
ｃｋｓｏｎ）、　　Ｌ、　　Ａ。

等、タリニクス・イン・ヘマトロジ−（ｃ１ｉｎｉｃｓ
ｉｎ　　Ｈａｅｍａｔｏｌｏｇ３１）、　　１４巻、５
１３〜５３０頁。

１９８５年）。

ｔＰＡは、フィブリンに強い親和性をもつことが知られ
ている。フィブリンは、トロンポリシスにおけるプラス
ミンの攻撃の主要な部位であり（ワレン（Ｗａｌｌｅｎ
）、　Ｐ、、ウロキナーゼ及び組織活性化因子によるプ
ラスミノーゲンの活性化、“血栓症とウロキナーゼ（パ
オレッティ（Ｐａｏｌｅｔｔｉ）。

Ｒ，シェリー（Ｓｈｅｒｒｙ）、　　Ｓ、編）、アカテ
′ミックブレス、ロンドン、９１〜１０２頁、１９７７
年）、またある腫瘍のストローマの一成分である（ドボ
ラク（Ｄｒｏｖａｋ）、　Ｈ，Ｆ、等、キャンサー・メ
タスタシス・レヴ：ｘ−（ｃａｎｃｅｒ　　Ｍｅｔａｓ
−ｔａｓｉｓ　　Ｒｅｖｉｅｗ）２巻、４１〜７３頁、
１９８３年）。一方、ストローマの相対的割合及びその
組成は、腫瘍によりかなり異なっている。

組織学的には同様の腫瘍の間でも、プラスミノーゲン活
性は、かなりの異なっているけれども、しばしば、悪性
腫瘍は、対応する正常組織に比べより高いプラスミノー
ゲン活性を含んでいる（ビッグビー（Ｂｉｇｂｅｅ）　
＋　Ｗ＋　Ｌ＋等、ハイオケムエト　バイオロジー・ア
クタ（Ｂｉｏｃｈｉｍｅ　　ｅｔＢｉｏｐｈｙｓ、　Ａ
ｃｔａ）　５４０巻、２８５〜２９４頁。

１９７８年；ブース（Ｂｏｏｔｈ）、　Ｎ＋　　Ａ＋等
、ブランド６１巻、２６７〜２７５頁、１９８３年）。

それゆえ、新しい原理に基づき、オンコロジカルな目的
に使用されてきたオートラジオグラフィー又はシンチグ
ラフィーにより、多数の腫瘍型を検出するための方法に
、放射性標識したｔＰＡを用いることは、ますます予期
できないことであった。

プラスミノーゲン活性化因子は、細胞外タンパク質分解
活性を制御するのに一役かっているという推論がある。

この活性は基底膜を通しての悪性腫瘍の侵入に関係して
いる（ゲリスクー（Ｇｅｌｉｓｔｅｒ＞＋　Ｊ、　　Ｓ
、　　Ｋ、等、Ｂ、　　Ｍ、　　Ｊ、２９３巻。

７２８〜７３１頁、１９８６年）。一方、ｔＰＡではな
く、ウロキナーゼ様活性化因子のみがこの活性をもつと
いう指摘もある（ダノ　（Ｄａｎ：　）、Ｋ。

がんにおけるウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因
子、ＸＩＶアニュアル・ミーティング・インターナショ
ナル・ソサイアティー・フォー・オンコディベロソプメ
ンタル・バイオロジー・アンド・メディシン・ヘルシン
キ、１９８６年、アブストラクト　７４）。

ｔＰＡを悪性腫瘍組織に結合させるのに最終的に決定的
な条件は、また説明されるには至っていないが、本発明
の結果は、驚くべき明白さで、放射性標識したｔＰＡが
、特異的に悪性腫瘍内に蓄積することができることを示
した。

このように、本発明のｔＰＡは、生化学的、及び治療学
／診断及び予後的な、存在する悪性腫瘍や疑わしい腫瘍
の研究のための有用なベヒクル及び試薬である。さらに
、本発明に従って用いられるｔＰＡは、既知の生理学的
に障害のない、もしくは、有効なラジオアイソトープを
用い、既知の方法で標識することができる。特に有効な
ラジオアイソトープは、ヨウ素のものである（例えば＋
３１１　、　　＋２３１）。有効的に１３１１の場合に
用いられる放射活性の線量は、ＩＯＭＢｑと５００　Ｍ
Ｂｑの間であり、より特別な場合には、４０ＭＢＱと２
３０ＭＢｑの間であり、一方１２３Ｉの場合には、ＩＯ
ＭＢｑと１０００ＭＢｑの間であり、より特別な場合に
は、７４と３４０　ＭＢｑの間である。さらに、＋１９
＋１７ｃ又は＋１＋１ｎ又はキレート結合金属イオンア
イソトープも標識に用いることができる。

放射性標識ｔＰＡを、全身的（例えば静脈注射）又は、
局所的に（すなわち、疑わしい腫瘍の近くに、例えば、
ｌ５ｍ５ルートにより）患者に注入後、その身体の一部
もしくは全身のシンチグラフィーに用いることができる
。

患者に投与後、悪性に変質した組織、特にストローマ成
分をもつ組織（例えば固体組織）の上述の診断パラメー
タを測定することができる。また、放射性標識したｔＰ
Ａは、存在する腫瘍の予後及び、治療の前、間又は後の
腫瘍の展開の測定にも用いることができる。

本発明で用いられるｔＰＡは、動物又はヒト由来の細胞
の従来の培養もしくは、従来の遺伝子工学技術すなわち
、ＤＮＡ組換えの従来の方法を用いることにより調製す
ることができる。よく知られているように、後者の方法
には、真核及び原核の両細胞とも適している。

ＤＮＡ組換えにより得たｔＰＡ又はその断片を用いるこ
とが好ましい。例えば、Ｅ　Ｐ　Ａ　１１７０５９゜Ｄ
　Ｅ　０３３１６２９７又はコレン（ｃｏｌｌｅｎ）、
　Ｄ。

（ネイチ＋　−（Ｎａｔｕｒｅ）、　　３０１巻、２１
４〜２２１頁、１９８３年）に従う方法を用いる。

ｔＰＡという語は、遺伝的に操作した微生物又は、対応
する操作をうけるか、又は天然の細胞培養系により生成
する組織型のプラスミノーゲン活性化因子を意味する。

個々の種には、天然の対立遺伝子変異体が存在し、それ
らは、１つ以上の異なるアミノ酸又は、異なるヌクレオ
チドもしくは、ＤＮＡ配列を示すことは、当業者にはよ
く知られていることである。例えば、Ｅ　Ｐ　Ａ　９３
６１９又はＥ　Ｐ　Ａ　１９９５７４に述べられている
ように、従来のＤＮＡ組換え法又は、制御された突然変
異誘発によっても生産されうる、この種の変異又は突然
変異は、単純な、もしくは、多重の置換、欠失、添加、
挿入又は、反転を含む。またそれらには、ｔＰＡに特異
的な“コイル”領域及びセリンプロテアーゼＭＭを含む
が、一方で上述の方法の１つによる修飾をうけたｔＰＡ
誘導体も含まれる。本発明に従がい、本発明に特徴的活
性もしくは親和性、又は、本来のものより強い活性又は
親和性を示すｔＰＡ誘導体も用いることもできる（例え
ばＥＰ　Ａ９３６１９　、Ｅ　Ｐ　Ａ１９９５７４）。

さらに、述べられた目的に対し、分子全体として放射活
性ｔＰＡばかりではなく、悪性組織又は、悪性腫瘍のス
トローマに結合するその一部又は断片、もしくは、ｔＰ
Ａの変異体又は、既知構成物のキメラ分子も使用するこ
とができる。

事実、全く驚くべきことに、その完全なｔＰＡ分子が腫
瘍に結合するばかりでなく、およそ１０ｋＤａの大きさ
をもつ、ＨＰＬＣで単離した断片も、腫瘍組織に強い親
和性をもっことが分った。およそ１０ｋＤａの放射性標
識したｔＰＡの断片でさえ、本来のｔＰＡよりもはるか
に、腫瘍組織に蓄積することが分った。また、この、お
よそ１ＱｋＤａの断片は、明らかに、フィブリン成分を
含まないか、又は、はとんど含まない腫瘍部位に結合す
ることは、驚くべきことである。これに対する証拠は、
例えば、目’Ｉｎ抗フィブリン及び１３’　Ｉ　−ｒｔ
ＰＡによる二重標識で、１３’Ｉ−ｔＰＡが、腫瘍の周
辺部分には結合するが、＋＋Ｉｎ−抗フイブリフイブリ
ン位である、腫瘍の死滅状態のフィブリン含有中心部に
は結合しないことを示すことで得られた。

従って、修飾されたｔＰＡ分子又はその断片は、それら
がタンパク質分解活性をもたないが、腫瘍組織に強い親
和性をもつことから、タンパク質分解活性のあるｔＰＡ
と比較する上で都合がよい。

これら“二次的に生成した”ｔＰＡの使用も本発明の一
部をなす。ｔＰＡの構造は分っているので、タンパク質
工学により、例えば、いくつかのフィンガー、そして、
または、上皮成長因子ドメインをもつか、または、これ
らドメインもしくはそのＮ末端のみを含むｔＰＡ誘導体
を生産することは可能である。

現在、悪性腫瘍の制御されかつ効果的治療における克服
しがたい困難に、熟練者たちは直面している。最近、こ
れも、イムノトキシンとして知られている（例えば、ブ
ジョーン（ＢＪＯｒｎ）＋　Ｍ＋　Ｊ＋キャンサーリサ
ーチ（ｃａｎｃｅｒ　　Ｒｅｓ、）　　４６巻。

３２６２〜３２６７頁、１９８６年）、静細胞物質と組
合せたベヒクルとして用いる、腫瘍に対するモノクロー
ナル抗体が開発されているけれども、治療におけるこれ
らの最近の試みさえ、全ての問題を解決できていない。

残された問題は、その細胞表面に対する結合効率をいか
に望ましいものにするか、中和効果をいかに回避するか
（例えばブジョーン（Ｂｊｏｒｎ）１Ｍ＋Ｊ、上記引用
文中）、多くのタイプの腫瘍、特に、異種細胞集団を含
むものが全体に到達することができるのか、結合したモ
ノクローナル抗体又はイムノトキシンの低い結合親和性
をいかに増加させるか及びそれらの腫瘍細胞に対する特
異性をいかに増加させるかということである。

また、抗体は、表面抗原に選択的に結合し、腫瘍内に存
在する細胞物質又は、腫瘍それ自体の中心に到達できな
いので、これらイムノトキシンが、密度の高い結合した
組織成分をもつ個い腫瘍中で、効果的に働くかどうかは
全く明確でない。これら多くの未解決の問題は、当業者
には明白なところである（例えば、ビテタ（Ｖｉｔｅｔ
ｔａ）、Ｅ　、　Ｓ　、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）
、　　２１９巻、６４４−６５０頁。

１９８３年）。

本出願の発明者は、ｔＰＡもしくは、特に、その断片の
一つの腫瘍に対する驚くべき親和性を認識した事実によ
り、専門家は、腫瘍の治療を目標とする予期せぬ新しい
機会を与えられた。従って、ｔＰＡ又は、その実質的部
分は、本発明の目的に対する、悪性腫瘍の診断、そして
、または、予後研究における使用だけでなく、既知の静
細胞試薬又は細胞死滅化試薬、すなわ−ち、腫瘍細胞に
効果的な合成または天然の試薬（例えば、リジン又は他
の植物トキシン、抗体、ホルモン、翻訳インヒビター又
は、免疫モジュレータ−又はその一部）と結合させたｔ
ＰＡは、この試薬を腫瘍部位に直接運ぶことができるの
で、治療的重要性ももつベヒクルとみなされねばならな
い。

特に、腫瘍に強い親和性をもつｔＰＡ断片で、ＨＰＬＣ
で単離できる、ｔＰＡ分子の１０ｋｌｌａ断片は、適し
ている。この治療的使用を行う目的で、当業者は、例え
ば、トキシンやハプテンを結合したタンパク質を作る多
くのそしてよく確立された方法には慣れ親しんでいる（
ＷＯ８５１０３５０８；バーガ（Ｖａｒｇａ）、　Ｊ、
　Ｍ、、メソッズ・イン・エンザイモロジ−（Ｍｅｔｈ
ｏｃｌｓ　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｊｏｇｙ）、　１１２巻
。

２５９〜２６９頁、１’９８５年；バッカ（Ｂａｃｈａ
）。

Ｐｌ等、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミスト
リー（Ｊ、Ｂｉｏｌ、　　Ｃｈｅｍ、）　　２５８巻、
１５６５〜１５７０頁、１９８３年；ゲンドロフ　（Ｇ
ｅｎｄｌｏｆｆ）。

Ｂ、　Ｈ，等、ジャーナル・オブ・イムノロジカル・メ
ソッズ（Ｊ、　Ｉｍｍｕｒｏｌ、　Ｍｅｔｈｏｄｓ）　
９２巻、１５〜２０頁、１９８６年；ダンカニ’　（Ｄ
ｕｎｃａｎ）　。

Ｒ，Ｊ、　Ｓ、等、アナリティカル・バイオケミストリ
ー（Ａｎａｌ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　）　１３２巻、６
８〜７３頁。

１９８３年；キング（Ｋｉｎｇ　）、　Ｔ、　Ｐ、等、
バイオケミストリー　（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　）
、　２５巻、５７７４−５７７９頁、１９８６年；メイ
ヤーズ（Ｍｙｅｒｓ　）、　ｏ。

Ａ１等、バイオケミカル・ジャーナル（Ｂｉｎｃｈｅｍ
　。

Ｊ、）２２７巻、３４３頁、１９８５年、　ｔｏ　ｎａ
ｍｅｂｕｔ　ａ　ｆｅｗ　）。ｔＰＡ又はその実質的断
片を、腫瘍細胞に対して作用するトキシンと結合させる
操作は、当分野の専門家の知るところである。

また、放射性標識したｔＰＡ又は、その実質的断片も適
している。例えば、＋３１１標識したｔＰＡ又はその実
質的部分は、５００　ＭＢｑ以上の放射線量で治療に用
いることができる。

例えば、ゆっくり成長する固い腫瘍は、従来の治療法が
分裂する細胞に対するものであることから、これらの治
療法にはうまく応答しない、すなわち、例えば、これら
の腫瘍は、結合を受けたｔＰＡ分子又はその一部をヘヒ
クルとして用いた治療に対し、恰好の患部といえる。こ
のような場合における利点は、ｔＰＡが比較的長い時間
腫瘍に結合したままであり（そこに蓄積する）従ってそ
の結合物が、その腫瘍組織を標的として、接続的かつ準
局所的に細胞毒性試薬として作用するということであろ
う。それゆえ、有糸分裂の発生又は再発による腫瘍生育
における増殖又は悪化は、腫瘍部位に存在する治療試薬
により抑制される。

従って、本発明は、がんの診断及び処置に新しい可能性
を切り開いた。

ある研究において、３２才から８２才の（平均５８才）
１１人の男性及び４人の女性患者を、＋３１１標識した
ｔＰＡ用いて研究した。１３′Ｉ標識は、従来法で行っ
た。全ての患者は、組織学的または放射線学的（Ｘ　＆
’ｉコンピュータトモグラフィーを用いた）に確証され
た悪性腫瘍又は転移を有していた。使用した放射活性線
量は、４０〜２３０ＭＢｑ（平均１６５　ＭＢｑ）の範
囲である。甲状腺によるヨウ素の放射性同位元素の取込
みをヨウ化ナトリウム及び過塩素酸の経口投与により（
毎日各々４２０■と８００■、１０日間）ブロックした
後、患者に”’　Ｉ　−ｔ’Ｐ　Ａの静脈注射を行った
。放射活性の分布を、注射後４及び２４時間後、広角ガ
ンマ線カメラ（カメラ先端の結晶径４Ｑｃｍ以上）を用
いて研究し、そして３つの場合において、ガンマ線カメ
ラによる記録を注射後２〜５日間繰り返した。得られた
像のコンピュータ解析は“標的／非標的比”の測定及び
“標的領域における線量取込み率の計算によって行った
。

ｌｆｆ１ｌ　　ｔｐＡを用いた、悪性腫瘍又は転移をも
つ１５名の患者から得られたシンチグラフィーの結果は
、後の実施例で述べられる。放射活性の蓄積の相対的強
度は、主観的評価により“弱”“中”又は“強”に分類
した。１０個の場合において、１３ＩＩ　ｊｐへの蓄積
が見られた。３名の患者においては、投与された線量は
、１００　ＭＢｑ以下であった；その像においてはネガ
ティブな結果であった。１２名の患者には１００　ＭＢ
ｑ以上の線量が与えられた。このグループの場合、病理
学的に変化を受けた組織における放射活性のあるｔＰＡ
の蓄積は、１１名の患者にみうけられた。

４人の患者の場合、放射活性ｔＰＡの大脳濃縮があり、
また、８人の患者においては、その濃縮は大脳外領域に
みうけられた。図１及び２は、典型的結果を示している
。３人の患者は、＋３１　Ｉ−ｔＰＡの大脳及び大脳外
蓄積の両方を示した。５人の患者の場合、”’Ｉ−ｔＰ
Ａの病理学的蓄積は観察されなかった。このグループに
おいては、２つのアデノカルシノーマ、１つのハイバー
ネフロー？、１つの前立腺カルシノーマ及び１つの膀胱
カルシノーマが診断された。

全ての蓄積は、”’Ｉ−ｔＰＡの注射後２４時間で観察
可能となり、また、２つの場合を除いて、４時間後に観
察可能となった。注射後２４時間の標的／非標的比は、
この目的のために使用した像のコンピュータ解析による
測定で１．２：１以下から２．１：１までの範囲であっ
た。研究した患者の３名の場合において、＋３＋１　　
ｔｐＡ注射から５日後にも蓄積が検出された。

＋３１１　ｊｐＡの生体分布を図３に示した。

＋３１１　　ｔｐＡ注射から３分後、問題としている器
官中の最高放射活性の５９％が肝臓および９６％が肺臓
に蓄積された。肝臓においては、その最高放射活性は、
１５分後に到達し、また、肺臓では９分後に到達した。

そのピークに到達した後、肝臓における放射活性の２０
％及び１１１臓における放射活性の１０％が、次の１５
分間に除去された。

２４時間後、肝臓中の放射活性は最高値の２％となり、
また肺臓においては、１％以下になった。

ＨＰＬＣにより研究した血液試料は、１１■及び■と命
名したＩ’ｌ＋　１標識されたｔＰＡの３つの両分を示
した（図４）。マーカータンパク質により測定した各両
分の、およその分子量は、Ｉ＝６００ｋＤａ　　、　　
Ｕ＝８０ｋＤａ　　、　ＩＩｒ　−１０ｋＤａ　　であ
った。血奨の放射活性は、放射活性標識したタンパク質
成分Ｕ　（８０ｋＤａ　＞と同程度に下った。

この成分Ｈの前に、より大きい、おそら（１：１Ｊ−ｔ
ＰＡプラスミノーゲン活性化因子インヒビクー（ＰＡＩ
）複合体を示している複合体１（６００ｋＤａ）が観測
された。すでに述べたように、本発明の目的のためにも
っとも興味ある、最も小さい成分である、約１０ｋＤａ
の成分■は、小さい細胞結合活性しか持たなかった。こ
れは、全血液放射活性のわずか０．３５％を含むのみで
あった。これは、血小板及びリンパ球／卓球中には見ら
れるが、赤血球画分には発見されていない。このことか
ら、次のような結論を導くことができる。

１．１３＋ｒ　　、ＰＡは、迅速にそのキャリヤータン
パク質に結合し、そして、約１０ｋＤａのより小さい成
分に分解される一方、溶出液中にみられる放射活性はそ
の他の成分の放射活性が減少するのと同程度迅速に増加
する（図５）。２．おそらく、悪性組織に蓄積した放射
活性は、全ｔＰＡ分子と比較して、本発明のベヒクルと
して理想的な、”’Ｉ−ｔＰＡの、１０ｋＤａの代謝物
を示している。放射活性標識したｔＰＡの投与後には、
望ましくない副作用は観察されなかった。

次に示す実施例は、本発明を制限することなく、これを
説明することを意図としている。　＋３１　Ｊ−ｔＰＡ
の相対吸収強度（種々の悪性−次及び二次腫瘍における
＋３’Ｉ−ｔＰＡの蓄積）を、シンチグラムにより、弱
（１＋）、中（２＋）及び強（３＋）に分類した。測定
した種々のパラメータに関する個々のデータを例の後の
表Ｉに示した。

例１： ３８才の女性患者；右胸部のがんと両肺への転移的助浸
出、肝臓の大きい転移及び右卵巣の２つの転移を有する
。

例２： ６６才の男性患者；３年前に前立腺がんと診断される。

初期段階はＴ３ＮｘＭＯ及び電光りＩｌ除術及び前立腺
の電気切除が行なわれた。この患者は左鎖骨部の転移と
前立腺の照射を受けた１３ｃｍ大の腫瘍の再発を有して
いた。

例３： ６５才の男性患者；６力月前に検出され、化学療法を受
けた肺の小細胞がんを有していた。化学療法後、シンチ
グラフィーを行っている。この際、この患者には、肺に
おける腫瘍の再発とその縦隔及び脳への転移があった。

例４ニ ７３才の男性患者；ｌ１年前副賢腫の手段をうけている
。８年後、下垂体障害を含む肺転移がみられた。放射線
治療後、下垂体にシンチグラフィーが行なわれた。

例５： ３２才の男性患者；４年前に皮膚の悪性メラノ−マの手
術をうけている。シンチグラフィーの際、いくつかの皮
下転移及び２個所の大脳転移が見つかった。この患者は
インターフェロン及び局所的放射線治療を受けた。

例６： ７０才の男性患者；９力月前、左肺門にアデノカルシノ
ーマが発見され、放射線治療がほどこされた。ＣＴでは
、縦隔、軟骨後及び前気管部の転移リンパ節及び脳の転
移がみつかった。

例７： ８２才の女性患者；１０力月前に膀胱カルシノーマと診
断された。骨盤部に放射線治療が行なわれた。診察の際
にこの患者は、肺と肝臓への転移がみとめられた。

例８： ６９才の男性患者；１３力月前に診断され、その縦隔の
化学療法及び放射線療法が行なわれた、肺の小細胞がん
を有している。ＣＴでは、２つの大脳への転移が認めら
れた。また、この患者は、ソノグラフで確認された肝臓
への転移を有していた。

例９： ３７オの男性患者；２７力月前、神経上皮腫が頭骨から
除去されている。２３力月後、左下顎角から、新しい損
傷が切除された。シンチグラフィーの２力月前、左上首
に再発があった。この患者には化学療法が行なわれた。

例１０： ８１才の男性患者；右肋膜後部の腫瘍及び肋骨滲出を有
する。腫瘍は６×１２ｃｍの大きさである。

悪性線維Ｍｉ織球腫の診断は、生検により確証された。

シンチグラフィー前には治療は行なわれていない。

例１１： ３６オの男性患者；手術後、化学療法により処置をうけ
た胃がんを有する。胃の腫瘍のため、シンチグラフィー
の５ケ月前、砿置的胃切除が行なわれた。シンチグラフ
ィーの際、左鎖骨部に拡大したリンパ節が発見された。

ＣＴでは、この患者は、肝臓、左胸壁及び周辺大動脈リ
ンパ節に転移を有していた。

例　　１２　： ４７の女性患者；２年と１０力月前４ｍｍメラノーマを
右足から切除している。転移リンパ節が布置径部にみら
れる。

２個所の転移損傷が左足にみられ、この部分は照射をう
けた。シンチグラフィーの際、左胸壁中の６×４〔損傷
を含む、いくつかの皮下転移が発見された。この患者に
は化学療法が行なわれた。

例１３： ４８才の男性患者；首の両側に大きなリンパ節転移と食
道の鱗状細胞がんを有する。シンチグラフィー前、リン
パ節転移に放射線療法が行なわれた。検死により、頚部
リンパ節中に活性腫瘍組織がみつかった。

例１４： ６３才の男性患者；８ケ月前、鱗状細胞肺腫瘍の手術を
受けている。手術４力月後ＣＴにより大脳への転移が確
認され、この患者に放射線療法が行なわれた。シンチグ
ラフィーの際、この患者は、左上腕及び胸壁に転移を有
していた。

例１５： ６５才の女性患者；２つの悪性腫瘍；胸部のがん及び直
腸がんを有しており、両方とも４年前に手術をうけてい
る。この患者は肺への転移のため病院に収容された。Ｃ
Ｔにおいて、直腸部に残余腫瘍が検出されていることか
らおそらくこれらは、直腸由来のものであろう。

例　　１６　： 放射活性ｔＰＡの投与 ａ、０．１ｇのｔＰＡを、１１０ＭＢｑの活性をもつ＋
３１　Ｉを用いた従来のヨウ素法により、放射活性標識
しくフレーカ−（Ｆｒａｋｅｒ　）　Ｐ、　Ｊ。

スペック（５ｐｅｃｋ　）、Ｊ、　Ｃ，パイオケム・ハ
イオフィス・レス・コム（Ｂｉｏｃｈｅｍ　＋　Ｂｉｏ
ｐｈｙｓ。

Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍ、）　８０巻、８４９〜８５７頁。

１９７８年）、血液等張水溶液に溶がした。滅菌濾過後
、この放射活性標識とたｔＰＡを悪性腫瘍をもつ患者に
静脈゛注射した（結腸又は胸部４のメラトマ、アデノカ
ルシノーマ又は表面上皮がん）。注射の１．２．４及び
７日後に、ガンマカメラを用い、外部全身シンチグラフ
ィーを行なった。

ｂ、１８５ＭＢＱの活性をもつ１３１■で放射活性標識
を行った１、０ｍｇのｔＰＡを例１６ａと同様に作り、
同様の悪性腫瘍に対し、同様の方法で投与した。全身シ
ンチグラフィーを例１６ａと同様に行った。

例　　１７　： ”’Ｉ−ｔＰＡの生体分布 １９０ＭＢＱの１３’Ｉ−ｔＰＡを、処置された低級星
状細胞腫をもつ、２２才の男性患者に静脈注射した。肝
臓、膵臓及び心臓中の放射活性を動的に測定した。図３
は、肝臓、心臓及び膵臓に対して得られた時間／活性曲
線を示している。

例　　１８　： およそ１０ｋＤａのｔＰＡ断片の同定 タンパク質ｍｇ当り、３〜５ｍＣ１の線量の１３ＩＩ−
標識組換えｔＰＡ　（”Ｉ−ｒ　ｔＰＡ）を、患者に注
射し、その９名の患者の血液試料をテストした。静脈注
射前と、注射の１５．３０．６０．１５０．２４０分及
び２４時間後血液試料を採取し、既知の方法でＥＤＴＡ
試験管中に保存した。

その後、その血漿及び血液細胞を遠心により直ちに除去
した。血小板及びリンパ細胞／単球両分を、ＬＢＩＩＫ
ＯＰＲＢＰＲを用いた既知の方法で分離した。

ＨＰＬＣ排除クロマトグラフィー（血漿のゲル濾過）を
、次に示す条件下で行った。

装　　　置：　　ＬＫＢ　　２１５０　　ＨＰＬＣポン
プ＋Ｌ　Ｋ　Ｂ　　２１５２　　コントローラーＵＶ検
出器：　　ＬＫＢ　　２１５１　　可変波長モニタープ
レカラム：　ウルトロバク　ＴＳＫ　　５ＷＰ（７，５
Ｘ　７５ｍｍ）　ＬＫＢ カ　ラ　ム：　ウルトロパク　Ｔ　Ｓ　Ｋ　　Ｇ　３０
００Ｓｌｌｌ（７，５Ｘ　３００ｍｍ）　　ＬＫＢ フラクション・コしフタ：　　　ＬＫＢ　　　２２１２
　　　ヘリ　ラクＨＰＬＣバフファ　：　　２０ｍｍｏ
Ａ／Ｉｌ　Ｌ−アルギニン、１１ｍｍｏＡ／ｊ！リン酸 ０．０５％アジ化ナトリウム、ｐＨ７，３流　　　速：
　　０．７５ｍｆ！／ｍｉｎ　、１分間画分採集波　　
　　長：　　　２Ｂ０ｎ川 ガンマ　検出器　：　　　ベフクマンモ几１７０ラジ才
フイソトーブデイテクタ　及びコンブガンマモデル １２８２、ＬＫＢワラク（Ｗａｌｌａｃ）試　　　料：
　血漿をＨＰＬＣで１０倍希釈、カラム注入前濾過、 ゲル濾過：　溶出液の２８０ｎｍの吸収を記録しその放
射活性も、ガンマカメラク ーを用いて測定した。

【図面の簡単な説明】

図１０図１は、肺がんの脳への転移における、１３’Ｉ
−ｔＰＡのかなりの蓄積を示す広角ガンマ線カメラによ
り撮影した写真である。 図２０図２は、左上腕部への肺がんの転移における、　
１″’Ｉ−ｔＰＡのかなりの蓄積を示す広角ガンマ線カ
メラにより撮影した写真である。 図３１図３は、男性患者への１３１Ｉ標識ｔＰＡ（１９
０ＭＢｑ）の静脈注射後の、肝臓、心臓及び膵臓におけ
る時間／活性曲線を示している。ａ−肝臓、ｂ＝心臓、
Ｃ＝牌肺臓４１図４は、患者１　（例１）への１３１　
Ｉ−ｔＰＡの注射１５分後の血漿のゲル濾過クロマトグ
ラフィーを示している。 Ｉ−６００ｋＤａ　、　ｎ＝８０ｋＤａ　。 ＩＩＩ＝１０ｋＤａ。 図５９図５は、患者１　（例１）への１３１　Ｉ−ｔＰ
Ａの注射後、種々の時間間隔をおいて採られた血漿試料
のＨＰＬＣ運転結果を示している。 ａ＝１５分後、ｂ−３０分後、Ｃ＝６０分後、ｄ＝１５
０分後、ｅ＝２４０分後、ｆ＝２４時間後。 図面の浄書（内容に変更なし） ｃ　ｐ、　３ｍｉｎ Ｆｉｇ、　３ Ｆｉｇ、５　　′ｆの１ Ｆｉｇ、　５　　ぞ、？）２ 手続補正書（方式）　隻 ６３．１０．２１ 昭和　　年　　月　　日 特許庁長官　　吉　１）文　毅　　殿 １、事件の表示　　　昭和６３年特許願第１６９９９７
号２、発明の名称　　　腫瘍に対する高い親和性を有す
るベヒクル ３、補正をする者 事件との関係　　出願人 ４、代理人

Claims (23)

【特許請求の範囲】
1. （１）活性物質としてｔＰＡもしくはその実質的断片を
   含む、悪性腫瘍を診断用及び予後的に使用するための試
   薬。
2. （２）含有するｔＰＡもしくはその断片が天然のものを
   起源としかつ、真核細胞培養物から単離したものである
   ことを特徴とする、請求項（１）記載の試薬。
3. （３）含有するｔＰＡもしくはその断片がＤＮＡ組換え
   によって変化を受けた原核及び真核細胞に由来すること
   を特徴とする、請求項（１）記載の試薬。
4. （４）含有するｔＰＡ又はその断片が主に、腫瘍結合要
   素を含み、かつタンパク質分解活性を持たないことを特
   徴とする、請求項（１）乃至（３）のいずれか１項に記
   載の試薬。
5. （５）含有するｔＰＡもしくはその断片が、少なくとも
   本来のものと等しい腫瘍組織への特徴的活性もしくは親
   和性を有する、制御された突然変異誘発による変化を受
   けた誘導体であることを特徴とする、請求項（１）乃至
   （４）のいずれか１項に記載の試薬。
6. （６）含有するｔＰＡもしくはその断片が、複対立遺伝
   子もしくは多型に基づく変異物に由来することを特徴と
   する、請求項（１）乃至（５）のいずれか１項に記載の
   試薬。
7. （７）含有するｔＰＡ、その対立遺伝子的変異体、その
   誘導体もしくはその断片が少なくとも１つのフィンガー
   、及び／または上皮成長因子ドメインを有するか、もし
   くは、少なくともそれらのＮ末端部分の１つ、又は、こ
   れらの部分を共に含むことを特徴とする請求項（１）乃
   至（６）のいずれか１項に記載の試薬。
8. （８）存在するｔＰＡ断片が１０ｋＤａのオーダーであ
   ることを特徴とする、請求項（１）乃至（７）いずれか
   １項に記載の試薬。
9. （９）含有するｔＰＡ、その対立遺伝子変異体、その誘
   導体もしくは、その断片が特に、＾１＾３＾１Ｉ、＾９
   ＾９＾ｍＴｃ、＾１＾２＾３Ｉ及び／または、＾１＾１
   ＾１Ｉｎで放射性標識したものであることを特徴とする
   、請求項（１）乃至（８）のいずれか１項に記載の試薬
   。
10. （１０）全身的に投与されることを特徴とする、請求項
    （１）乃至（９）のいずれか１項に記載のｔＰＡ、その
    誘導体、その対立遺伝子変異体もしくはその断片を含む
    試薬。
11. （１１）患部組織に局所的に投与することを特徴とする
    、請求項（１）乃至（９）記載のｔＰＡ、その誘導体、
    その対立遺伝子変異体、もしくは、その断片を含む試薬
    。
12. （１２）悪性腫瘍の診断用及び予後的使用のための、請
    求項（１）乃至（１１）記載の試薬調製に対する、ｔＰ
    Ａ、その対立遺伝子変異体、その誘導体もしくは、その
    断片の使用。
13. （１３）請求項（１）乃至（１１）記載のｔＰＡ、その
    対立遺伝子変異体、その誘導体もしくはその断片を含む
    ことを特徴とする、悪性腫瘍を処理するための試薬。
14. （１４）含有するｔＰＡ、その対立遺伝子変異体、その
    誘導体、もしくはその断片を、天然の、又は、合成した
    静細胞試薬又は細胞死滅化試薬と共に使用することを特
    徴とする、請求項（１３）記載の試薬。
15. （１５）ｔＰＡ、その対立遺伝子変異体、その結合体、
    その誘導体、もしくはその断片が放射性標識されている
    ことを特徴とする、請求項（１３）又は（１４）記載の
    試薬。
16. （１６）放射性活性の線量が５００ＭＢｑ以上であるこ
    とを特徴とする、請求項（１５）記載の試薬。
17. （１７）全身的に投身されることを特徴とする、請求項
    （１３）乃至（１６）のいずれか１項に記載の試薬。
18. （１８）患部組織に局所的に投与されることを特徴とす
    る請求項（１３）乃至（１６）のいずれか１項に記載の
    試薬。
19. （１９）悪性腫瘍の治療を目的とした薬剤調製のための
    、請求項（１３）乃至（１８）のいずれか１項に記載の
    、ｔＰＡ、その対立遺伝子変異体、その誘導体、その結
    合体、もしくはその断片の使用。
20. （２０）（ａ）ｔＰＡ分子、その対立遺伝子変異体、そ
    の誘導体もしくはその断片を単離又は調製する、（ｂ）
    この物質を放射性標識する、 （ｃ）その放射活性線量の範囲を、１０と１０００ＭＢ
    ｑの間となるよう選択する、 （ｄ）このようにして標識した物質を、シンチグラフィ
    ーに適した溶液に転換する、 以上（ａ）乃至（ｄ）を特徴とする、請求項（１）乃至
    （１１）のいずれか１項に記載の、腫瘍の診断用又は予
    後的に使用するための試薬の調製方法。
21. （２１）請求項（２０）中の（ａ）乃至（ｃ）のステッ
    プに従がって得られた物質を、浸剤、又は注射に適した
    溶液に転換することにより作ることができる、腫瘍の診
    断的及び予後的研究のための試薬。
22. （２２）（ａ）ｔＰＡ分子、その対立遺伝子変異体、そ
    の誘導体、もしくはその断片を単離又は調 製する、 （ｂ）この物質を放射性標識する、 （ｃ）この放射活性線量範囲を、５００ＭＢｑ以上にな
    るよう選択する、 （ｄ）望ましい場合は、ステップ（ａ）、又は（ｂ）又
    は（ｃ）で得られた物質を、細胞毒性試薬と結合する、 （ｅ）放射活性標識し、そして、または結合を受けた物
    質を適当な水性溶液に移す、 以上（ａ）乃至（ｅ）を特徴とする、請求項（１３）乃
    至（１８）のいずれか１項に記載の、腫瘍の治療のため
    の試薬の調製方法。
23. （２３）請求項（２２）中のステップ（ａ）乃至（ｄ）
    に従って得た物質を、浸剤又は注射に適した溶液に移す
    ことによって作ることができる、腫瘍の治療のための薬
    学的試薬。