JPH01117886A - 抗ウイルス、抗腫瘍および抗真菌新規化合物およびそれらの使用方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 この発明は、有益な抗腫瘍、抗ウィルスおよび抗真菌活
性を有する新規有機化合物に関する。さらに加えて、特
に、この発明は海洋生物、すなわち海綿動物テオネーラ
ｓｐ、　　（Ｔ　ｈｅｏｎｅｌｌａ　ｓｐ、）由来の抗
腫瘍、抗ウィルスおよび抗真菌新規化合物およびそれら
の使用方法に関する。

〔従来技術〕

人間は種々の腫瘍に関連した疾病に苦しむ。多くの研究
が、腫瘍学および抗腫瘍手段に費やされている。腫瘍は
多種の哺乳動物に一般的なものであり、哺乳動物におけ
る腫瘍の予防、増殖の抑制および退縮は人間にとって重
要なことである。腫瘍という用語は、本来の、もしくは
全体としての宿主の体の組織の体系と調和しない、新し
い組織の増殖物の異常な塊を指す。

腫瘍は、種々の形態の癌および結果としての癌性悪液質
を含む多様な病気および状態で哺乳動物および人間を苦
しめる。癌性悪液質とは、哺乳動物が腫瘍を患うことに
伴う徴候に応じた苦痛を指゛す。これらの徴候は、例え
ば体重の減少によって明白であるように、患った動物の
衰弱した状態を含む。癌の重大性はよく知られており、
例えば、癌は人間にとって、死因として心臓血管疾病の
みに次いで２番目である。

ウィルス病は、人間、植物、昆虫、および動物を苦しめ
る。ウィルス病の予防および抑制には、重要な健康面お
よび経済面の含みがある。

ウィルス病は、通常の風邪、ヘルペスおよび癌を含む人
間の苦痛に寄与し、これらの抑制が重要であることは明
白である。動物のウィルス病を抑制することは、ウィル
ス病を人間に広めることを助長するウィルスのレザバー
もしくはキャリヤーとなる動物の能力の他に、経済的な
理由から重要である。ウィルス性植物病は、果樹、タバ
コ、および種々の野菜の栽培に破壊的な効果をもたらす
ことが知られている。昆虫のウィルス病もまた、人間に
ウィルス病を感染させる昆虫の力の故に関心事である。

真菌の増殖とそれによって引き起こされる哺乳動物およ
び植物の感染症および慢性疾患の予防もまた人間にとっ
て重要である。真菌の存在は、人間に真菌症、例えば肺
カンジダ症および肺プラストミセス症を含む種々の疾病
および感染症の原因となることがある。あるイースト様
の微生物、（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｎｅｏｆｏｒ
ｉａｎｓ）は中枢神経系の重大な感染症を引き起こすこ
とがある。より一般に知られている人間および哺乳動物
の真菌感染症には、皮膚の抵抗性感染の他に、毛髪およ
び爪の部位の真菌感染症である輪癖が含まれる。他の多
くの真菌感染症は、人間および哺乳動物の皮膚領域、粘
膜、腸管、膣周辺および肺に罹患する。

植物もまた、様々な真菌に冒される。真菌感染症によっ
て引き起こされる農業の損害は、毎年数ｌＯ億ドルにの
ぼる。種々の無機および有機の静真菌剤および殺真菌剤
が試みられているが、限られた成功しか得られていない
。真菌は殺すものの植物は殺さず、植物から製造した食
物に毒性の残渣を残さないことは、もちろん重要なこと
である。

農業において、真菌感染症に対抗するために、耐候性の
予防用殺真菌剤を植物に塗布するフォーリイッジψファ
ンジャイサイド（ｆｏｌｉａｇｅｆ’ｕｎｇｉｃｉｄｅ
　）を含む様々な方法が利用されている。

種子処理および土壌処理は、種子にとって安全であり、
土壌および土壌微生物による減成に対して耐性を有する
殺真菌剤を必要とする方法である。

化学療法剤は、植物に浸透して新たな成長を保護し、ま
たは植物体内にすでに発生した感染症を排除する殺真菌
剤である。農業用静真菌剤および殺真菌剤およびそれら
の適用はまた、例えば米国内で公表されている非常に厳
しい要求および規制を満足しなければならない。

多くの研究および資産が、腫瘍学および化学療法を含む
抗腫瘍手段、抗ウイルス手段、および哺乳動物および植
物の真菌感染症との戦いに費やされている。腫瘍、ウィ
ルスおよび真菌の蔓延を阻止することをそれぞれ目的と
する種々の抗腫瘍、抗ウィルスまたは抗真菌剤および方
法が開発されているにもかかわらず、さらなる方法およ
び化学薬剤が必要である。

抗腫瘍、抗ウィルスおよび抗真菌化合物の潜在的な供給
源は海洋植物および動物であり、特に関心があるのは海
綿動物である。海綿動物テオネーラｓｐ、の抽出物から
誘導された有機化合物が、有益な抗腫瘍、抗ウィルスお
よび抗真菌活性を有することか見出だされている。

いくつかの興味ある化合物が、以前に、海綿動物テオネ
ーラｓｐ、から単離されている。

特に、セスキテルペノイド化合物が Ｈ，Ｎａｋａｍｕｒａ　ｓ　Ｊ　、　Ｋｏｂａｙａｓｈ
ｉ、Ｙ　、　ＯｈｉｚｕＩＩｌｉ。

およびＹ　、　　Ｈ１ｒａｔａ、によって報告されてい
る（　Ｔ　ｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　　Ｌ　ｅｔｔｅｒＳ
％　Ｖ　ｏｌ、　２５、Ｎｏ、４７、ｐｐ、　５４０１
−５４０４　（１９ｇ４）　）。この文献は、ネリン（
ｔｈｅｏｎｅｌｌｉｎ）　Ｊ化合物の単離を開示してい
る （ここで、ＸはＮＣ８５ＮＨＣＨＯＳＮＨＣＨ３または
Ｎ　（ＣＨ３）３０Ｈである）。

Ｎ　ａｋａ＋ａｕｒａ等は、テオネリン化合物に関して
は生物学的活性を報告していない。Ｔ、　Ｈｉｇａ　、
　Ｒ。

Ｓ　ａｋａｉおよびＭ、Ｌｕｉによって１９８７年５月
１８日に出願された通し番号０５１．１２７号の係続中
の特許出願に記述されており、抗腫瘍および抗ウイルス
特性を有するミサキノリド（ｍ１ｓａｋｉｎｏｌｉｄｅ
）もまた興味深い。

他の興味深い天然由来の化合物はペデリンである。ペデ
リンは、バエデルス（Ｐ　ａｅｄｅｒｕｓ　）属の昆虫
から単離される。ペデリンは以下に示す構造を有してい
る。

Ｈ ペデリンは、英国特許明細書箱１．０７８．０４９号（
１９８７）および第９３２．８７５号（１９Ｈ）に記述
されているように抗有糸分裂活性を示す。

〔発明が解決しようとする課題〕。

したがって、この発明の目的は、抗腫瘍、抗ウィルスお
よび抗真菌剤として有用な新規化合物とそのような新規
化合物の製造方法を提供することである。

加えて、新規の抗腫瘍、抗ウィルスおよび抗真菌組成物
を用いて腫瘍、ウィルスおよび真菌の増殖、および結果
としての感染症および疾病を阻止する方法を提供するこ
ともこの発明の目的である。

この発明のさらなる目的および利点は、一部はこの明細
書において説明され、一部はこの明細書から明らかとな
り、またはこの発明の実施から学ばれるであろう。この
発明の目的および利点は、請求の範囲において特に指摘
した化合物、製法、方法および組み合わせによって実現
し、得ることができる。

〔課題を解決するための手段〕

この発明の目的を達成するために、ここに具体化し充分
に記述したように、この発明は以下に示す一般式で表わ
される化合物を包含する。

（ここで　ＸＩ　　Ｘ４は水素、ヒドロキシル、低級ア
シル、または低級アルキル基であってそれぞれ同じであ
っても異“なってていてもよく、Ｘ５−Ｘ６は水素また
は低級アルキル基であってそれぞれ同じであっても異な
っていてもよく、Ｙは非置換のまたは低級のアルキル基
のいずれかであり、Ｒ１は水素、ヒドロキシル、低級ア
ルキル、または低級アルコキシ基であり、Ｒ２Ｒ５は水
素、ヒドロキシル、低級アルコキシ、または低級アシロ
キシ基であってぞれぞれ同じであっても異なっていても
よく、Ｑｌ−Ｑ３は水素、ニトロ、アミノ、低級アシル
アミノ、または低級アルキル基であってそれぞれ同じで
あっても異なっていてもよく、Ｚｌは水素１、アルキル
、ヒドロキシル、アルコキシ、アミノ、モノ−またはジ
アルキルアミノ、またはα−アミノ酸残基である） この発明の他の態様において、一般式Ｉ−ｍの二重結合
は部分的にまたは完全に還元されている。

この発明の好ましい態様においては、化合物は実質的に
純粋である。

さらに好ましい態様においては、化合物は以下に示す構
造ＩＶ−Ｖｌを有する。

ここに具体化され、充分に記述されているように、この
発明はまた、活性成分としてこの発明の化合、物の抗腫
瘍、抗ウィルスまたは抗真菌有効量と非毒性の薬理学的
に許容し得る担体または希釈剤を含有する抗腫瘍、抗ウ
ィルスまたは抗真菌組成物を包含する。

ここに具体化し、充分に記述されているように、この発
明はまた、この発明の化合物の製造方法を包含する。こ
の方法は、海綿動物テオネーラ、ｓｐ。

を採集し、海綿動物を適当な有機溶媒系に接触させて抽
出物を得、抽出物を分画し、および分１画した抽出物か
らこの発明の化合物を単離する工・程を含む。

ここに具体化され、充分に記述されているように、この
発明はさらに、腫瘍細胞をこの発明の化合物の抗腫瘍有
効量と接触させることを含む腫瘍の阻止方法を包含する
。

ここに具体化され、充分に記述されているように、この
発明はさらに、ウィルスをこの発明の化合物の抗ウイル
ス有効量と接触させることを含むウィルスの阻止方法を
包含する。

ここに具体化され、充分に記述されているように、この
発明はさらに、真菌をこの発明の化合物の抗真菌有効量
と接触させることを含む真菌の増殖阻止または殺生方法
を包含する。

前述の一般的な記述および以下の詳細な記述は、両方と
も典型的かつ説明的なものであり、請求した発明の限定
を意図するものではないことは理解されるであろう。

以下、この発明の好ましい態様を詳細に論じ、実施例を
以下の実施例の項において説明する。

この発明に従い、ここに具体化され充分に記述されてい
るように、この発明の目的を達成するために新規化合物
が提供される。この発明は以下に示される一数式Ｉ−Ｉ
ＩＩで表わされる化合物を包含する。

（ここで　Ｘｉ　　Ｘ４は水素、ヒドロキシル、低級ア
シル１、または低級アルキル基であってそれぞれ同じで
あっても異なっていてもよく、Ｘ５−Ｘ６は水素または
低級アルキル基であってそれぞれ同じであっても異なっ
ていてもよく、Ｙは非置換のまたは低級のアルキル基の
いずれかであり、Ｒ１は水素、ヒドロキシル、低級アル
キル、または低級アルコキシ基であり、Ｒ２−Ｒ５は水
素、ヒドロキシル、低級アルコキシまたは低級アシロキ
シ基であってそれぞれ同じであっても異なっていてもよ
＜、Ｑｌ−Ｑ３は水素、ニトロ、アミノ、低級アシルア
ミノ、または低級アルキル基であってそれぞれ同じであ
っても異なっていてもよく、Ｚｌは水素、アルキル、ヒ
ドロキシル、アルコ゛キシ、アミノ、モノ−もしくはジ
アルキルアミノ、またはα−アミノ酸残基である） この発明の他の態様においては、一般式１−ｍにおける
二重結合は部分的または完全に還元されている。

この発明の好ましい態様においては、化合物は実質的に
純粋である。

さらに好ましい態様においては、この発明の化合物は以
下に示す一数式ＩＶ−Ｖｌで表わされる。

この発明によって、活性成分としてのこの発明の化合物
の１種以上の抗腫瘍有効量と、非毒性の薬理学的゛に許
容し得る担体または希釈剤と・を含有する抗腫瘍組成物
が提供される。抗腫瘍組成物が使用される条件が変化す
るために有効量は変化することがあるが、活性に必要な
最少投与量は、一般に、１０５個の腫瘍細胞に対してｏ
、ｏｏｔないし１０μ９である。非毒性の薬理学的に許
容し得る担体もしくは希釈剤の有用な例には、エタノー
ル、ジメチルスルホキシドおよびグリセリンが含まれる
が、これらに限定されるものではない。

この発明によって、腫瘍をこの発明の化合物の抗腫瘍有
効量と接触させることを含む、宿主における腫瘍の阻止
方法が提供される。この発明の化合物は、Ｐ１８８マウ
ス白血病細胞、肺カルチノーマＡ−５４９、回腸アデノ
カルチノーマＨＣＴ−８、およびヒト胸部アデノカルチ
ノーマ細胞ＭＤＡ−Ｍ　Ｂ　−２３１のようなヒト肺、
結腸および乳腺腫瘍を含む様々な範囲の腫瘍の阻止に対
して、これらに限定されるものではないが、活性である
。この発明の化合物の腫瘍細胞および腫瘍の阻止に対す
る有効性は、哺乳動物を含む宿主における腫瘍の抑制お
よび癌性悪液質の治療に対するそれらの有用性を示して
いる。

この発明によって、活性成分としてのこの発明の化合物
の抗ウイルス有効量と、非毒性の薬理学的に許容し得□
る担体または希釈剤を含有する抗ウイルス成物が提供さ
れる。抗ウイルス組成物を使用する条件が変化するため
に有効量が変化することがあるが、活性に必要な最少投
与量は、一般に、ウィルスの２５ないし８０プラ一ク形
成単位に対して０．０００２ないし２０μグである。こ
の発明の化合物は、水痘性口内炎（以下ｒＶＳＶＪと記
述する）アデノ、コロナ、レオ、およびインフルエンザ
ウィルス等のＲＮＡ型ウィルス、単純性ヘルペス夏型お
よび■型（以下、それぞれｒＨＳＶ−ＩＪおよびｒＨＳ
Ｖ−ｎＪと記述する）、アデノおよびバボーバウイルス
等のＤＮＡ型ウィルスを含み、これらに限定されるもの
ではない様々な範囲のウィルスの阻害または殺生に対し
て活性である。非毒性の薬理学的に許容し得る担体また
は希釈剤の有用な例には、エタノール、ジメチルスルホ
キシドおよびグリセリンが含まれるが、これらに限定さ
れるものではない。

この発明によって、ウィルスをこの発明の化合物の抗ウ
イルス量と接触させることを包含する、宿主におけるウ
ィルスの阻害方法が提供される。

この発明の化合物のウィルスの阻害に対する有効性は、
ウィルスおよび哺乳動物と植物とを含む宿主におけるウ
ィルス関連疾患の抑制に対するそれらの有用性を示し、
ている。

この発明によっ゛て、活性成分としてのこの発明の化合
物の抗真菌有効量と、非毒性の薬理学的に許容し得る担
体または希釈剤を含有する抗真菌組成物が提供される。

、抗真菌組成物が使用される条件が変化するために有効
量が変化することがあるが、活性に必要な最少投与量は
、一般に、真菌（例えばカンジダ・アルビカンス（Ｃａ
ｎｄｌｄａａｌｂｌｃａｎｓ）　）　１０３／１１Ｉ！
に対して５ないし５０μｇ／ｄである。非毒性の薬理学
的に許容し得る担体または希釈剤の有用な例には、エタ
ノール、ジメチルスルホキシドおよびグリセリンが含ま
れるが、これらに限定されるものではない。

この発明によって、真菌をこの発明の化合物の抗真菌量
と接触させることを含む、宿主における真菌の阻害方法
が提供される。この発明の化合物の真菌の阻害に対する
有効性は、真菌および哺乳動物を含む宿主における真菌
関連疾患の抑制にそれらが有用であることを示している
。さらに、これらの化合物は、農業用殺真菌剤としても
有用であり得る。

この発明によって、この発明の化合物を製造する方法が
提供される。この方法は、海綿動物テオネーラｓｐ、の
試料を採集し、この海綿動物を適当な有機溶媒系に接触
させて抽出物を得、前記抽出物をクロマトグラフィーに
よって分配していくつかの分画を得、および分画した抽
出物からこの発明の化合物を単離する工程を含む。

この発明の好ましい態様においては、適当な有機溶媒系
は、エチルアセテート、メタノール、ヘプタン、ヘキサ
ン、イソオクタン、アセトン、ベンゼン、トルエン、ジ
エチルエーテル、ｔ−ブチルメチルエーテル、塩化メチ
レン、クロロホルム、エタノール、イソプロパツール、
１，２−ジクロロエタン、ジクロロメタン、およびそれ
らの混合物からなる溶媒の群から選ばれる。

現時点では、上に挙げた溶媒がこの発明に有用な溶媒に
対する好ましい選択ではあるが、他の適当な溶媒で置き
換えることも可能である。好ましい溶媒系は、海綿動物
の他の成分からこの発明の化合物を抽出することが可能
でなければならない。

当業者に公知であるように、溶媒の異なった割合および
いかなる組み合わせもこの発明の溶媒系に使用すること
ができる。

この発明による化合物は、様々な分画法およびクロマト
グラフ技法によって単離され、および／または得られた
抽出物から合成される。当業者に公知のあらゆる適当な
分画および単離技法を、この発明の方法に従って利用す
ることができる。好ましい単離技法には種々のクロマト
グラフ技法が含まれ、例えば、当業者に公知の適当な固
定層（例えばポリスチレンＮＳゲル）を用い、適当な溶
媒、例えばヘプタン、メタノール、ジクロロメタン、エ
チルアセテート、ヘキサン、イソオクタン、クロロホル
ム、ジクロロメタン、■、２−ジクロロエタン、ベンゼ
ン、トルエン、イソプロパツール、ｎ−ブタノール、水
、エタノール、ジエチルエーテルおよびそれらの混合物
を用いて溶出するカラムクロマトグラフィーがある。

この発明の化合物を製造するためのこの発明の方法の好
ましい態様を、実施例の項においてより詳細に記述しか
つ説明する。

したがって、この発明の化合物、この発明の化合物の製
造方法およびこの発明の目的を満足する腫瘍、ウィルス
および真菌の増殖を阻害するこの発明の化合物の利用方
法は明らかである。

〔実施例〕

ここで、この発明を実施例によって説明する。

この実施例は、この発明の範囲を限定することを意図す
るものではない。上述の詳細かつ一般的な記述と共に、
この実施例はこの発明のさら、なる理解とこの発明の化
合物の製造方法の概要を与える。

以下の実施例は、記述したこの発明の目的を満足するこ
の発明の化合物、製法および方法の好ましい態様を表わ
す。実施例において、調製方法の示されていない出発物
質および試薬は、化学薬品取り扱い店のような当業者に
公知の供給源からの市販品を利用した。

実施例１−３ 調製 沖縄オンナ沖の水深５０フイートで採集した海綿動物テ
オネーラｓｐ、の試料’１．５に９ｃ湿潤重ｆｆ１）を
メタノール（８））に　２日間浸すことによって抽出し
た。抽出物を他の容器に移した後、物質を新しいメタノ
ール（８））に浸し、同様の方法で抽出した。両方を合
わせた抽出物を濃縮して約３００ａｉ＋の水性懸濁液と
し、その後エチルアセテート（３００ａｕＸ３　）で抽
出した。水相を濃縮して乾燥し、メタノール（５００，
ｗｊ！’）で抽出して褐色の固体１１ＬＦを得た。この
固体の一部（１００ｇ）をポリスチレンゲル（ＮＳゲル
）のカラムにのせ、最初に水で、次いでメタノールで溶
出した。メタノール溶出物（１９，７７ｇ）を、シリカ
ゲル上で、最初にり′ロロホルムーメタノール（３：ｌ
）を用い、次いでメタノールの割合を増加させながら溶
出することによって分離した。２：１ないしｌ：１のク
ロロホルム−メタノールを用いて溶出した分画を合わせ
（総量４．３２ｇ）、クロロホルム−メタノール−水（
１３ニア：８）の上層と下層に分配した。

下層（１，７９９）を、１．２−ジクロロエタンークロ
ロホルムーメタノールー水（２：３　：１０：６、移動
相、上層）を用いた対向流クロマトグラフィーによって
繰り返し分離し、明黄色のガラス状物質、［α］ｏ　　
−＋９９．１°　（ｃ　５．５　、メタノール）として
オンナマイド（ｏｎｎａｍｉｄｅ、　１　）　　４７０
ｓを得た。

オンナマイドＡ（１）は以下のスペクトルデータを示す
。

高分解能Ｆ　Ａ　Ｂ　Ｍ　Ｓ　（ｔａ／ｚ　）　　ｓ　
７９４．４５５７［Ｃ３９Ｈ６４Ｎ５０１２　（Ｍ＋Ｈ
）として計算して７９４．４５５１１ ’ＵＶ（メタノール）：λｗａｘ　　２０２　　（ｅ　
７５００）および２９９　ｒｖ　（Ｈ８００） Ｉ　Ｒ（ＫＢ　ｒ）　　：　　３Ｂ８０ｂｒ、　２９６
５．２９３５．１９５０ｂｒＳ１６５０ｂｒ、　１５１
２ｂｒ、　１４５０ｂｒ、　１１９１．１３２０ｂｒ、
ＨＯ５ｓｈ、　１２８５．１２２６．１１９４．１１７
０．１１３０ｓｈ、　１０９２．１０７１．１０３０．
１００Ｂ、９１０．８８０および７８８ｃＩ！−１’Ｈ
ＮＭＲ（ＣＤ、ＯＤ＞暑　δ　７．１３　ＣＩＨ。

ｄｄＳＪ−１５，０，１１，２Ｈｚ）　、６．５０　（
ＩＨ，ｄｄ。

Ｊ　−１４，８、ｌＯ，７Ｈｚ）　、６．２３　（ＩＨ
，ｄｄ、　Ｊ　−１４，７，１１，３Ｈｚ）　、８．１
９　（ＩＨＳｄｄ、　Ｊ−１４，７，１０，８Ｈｚ）、
８．０７　（ＩＨＳ　ｄ　　、　　Ｊ　　−１５，１シ
）　　、５．９３　（ＩＨ。

ｄｔ、　　Ｊ　　−１５，２、８，９１１ｚ）　　、５
．７９　（ＩＨ，ｄ　　。

Ｊ　−９，２Ｈｚ）　　、５．４８（ＩＨ，ｄ　　、　
　Ｊ　−６，９Ｈｚ）　　、４．８０　（ＩＨＳｄ　、
　Ｊ　−８，９七）　、−４，７９（ＬＨ。

ｂｒ　　ｓ）　　、４．Ｈ３（ＩＨＳ　ｂｒ　　ｓ）　
　、４．３８　　（ＩＨ，ｄｄ。

Ｊ−７，９，５，３Ｈｚ）　　、４．２３　（ＩＨＳ　
ｓ　　）　　、４．１８（ＩＨ，ｄｄ％　Ｊ　−９，７
、６，５Ｈｚ）　　、８．９８　（ＩＨ。

ｄｄ％　Ｊ　　−９，０、８，８Ｈｚ）　　、３．８７
　（ＩＨＳ　ｄｑ。

Ｊ−２，４、６，５Ｈｚ）　　、３．６４　（ＬＨ，ｔ
ａ　　）　　、３．８２（ＩＨＳｄ　ＳＪ＝　９．８Ｈ
ｚ）　、３．５５（３Ｈ，ｓ　）、３．４７　　（ＩＨ
ｌ　ｄｄＳ　Ｊ　　＝　　８．１．　　３．８Ｈｚ）　
　、３．２２（３ＨＳ　ｓ）、Ｌｉ２（２Ｈ，ｍ）、２
．４０（ＬＨ。

ｂｒ　　ｄＳ　Ｊ　　＝１４．３Ｈｚ）　　、２．１２
（ＩＨＳ　ｂｒ　　ｄＳ　Ｊ−１４，４Ｈｚ）　　、２
．２５−２．０５　（３ＨＳ　ｔｐ　　）　　、１．８
９　（ＬＨ。

ａ＋）、１．７５（、ＬＨＳ　ｒＡ　）、１．８３（２
Ｈ，１１）　　、１．６２−１．３７　（５Ｈ，ｔｓ　
　）　　、１．２８　　（ＩＨ，ｍ　　）　　、１．１
フ　（３Ｈ，ｄ　　Ｓ　Ｊ−８，５七）　　、　１．０
０　　（３Ｈ，ｓ）、０．９８　（３Ｈ，ｄ　、　Ｊ　
−８，９砒）、および０．８５（３Ｈ。

Ｓ　） ”ＣＮＭＲ（ＣＤ３０Ｄ）　　：　　　δ　　１７９．
ＯＬ　（Ｓ）、１７４．２７　（ｓ　　）　　、１８８
．２８　（ｓ　　）　　、１５８．６７　（ｓ　　）　
　、１４８．１４　（ｓ　　）　　、１４１．９８　（
ｄ　　）　　、Ｌ４１．１５　（ｄ　　）　　、１４０
．４２　（ｄ　　）　　、１３１．４８　（ｄ　　）　
　、１２９．４８　（ｄ　　）　　、１２４．３７　（
ｄ　　）　　、１１０．１２　（ｔ　　）　　、１０１
．２７　（ｓ　　）　　、８７．５８　（ｔ　　）　　
、　８０．５９　（ｄ　　）　　、　７８．７４　（ｄ
　　）　　、７５．４８　（ｄ　　）　　、　７４．８
８　（ｄ　　）　　、　７３．９９　（ｄ　　）　　、
７１．０３　　（ｄ　　）　　、　　７０．７８　　（
ｄＸ　２　　）　　、　　８１．９３　　（ｑ　）　　
、５５．８２　（ｄ　　）　　、　４８．７８　（ｑ　
　）　　、　４２．９８　（ｄ　　）　　、４２．１７
　（Ｓ　　）　　、　４２．０４　（ｔ　）　　、　３
７．２７　（ｔ　　）　　、３８．８４　（ｔ　　）　
　、　３４．７５　（ｔ　　）　　、　３３．９２　（
ｔ　　）　　、３１．１８　（ｔ　　）　　、　２６．
１２　（ｔ　　）　　、　２８．０５　（ｔ　　）　　
、２３．８７　（ｑ　）　　、　１８．１８　（Ｑ　）
　　、　１４．４８　（Ｑ　）　　、および１２．３９
　（ｃｔ　） オンナマイドＡのメチルエステル（工）アセトン（１Ｉ
Ｊ１１）中においてオンナマイドＡ（１）　　（１８１
１＋９）　、ヨードメタン（Ｌｌｌ）および炭酸カリウ
ム（１０Ｍ！９）を混合し、混合物を還流しながら２時
間加熱した。ろ過および濃縮の後、反応混合物をＴＬＣ
（シリカゲル、３：ｌクロロホルム−メタノール）によ
って分離し、明黄色のガラス状物質としてメチルエステ
ル（２）　　８．８１１（３７％）を得゛た。

ＩＨＮＭＲ（ＣＤ３０Ｄ）：　　δ　７．１９（ＩＨ。

ｄｄ、　Ｊ−１５，０，１１，３シ）　、６．５７　（
ＬＨ，ｄｄ。

Ｊ−１４，８，１１，０Ｈｚ）　、８．２８　（ＬＨＳ
ｄｄ、　Ｊ　−１４，９，１１，４Ｈｚ）　、８．２３
　（ＬＨ，ｄｄ、　Ｊ　＝１５．３．１０．８Ｈｚ）、
８．０５　（ＬＨ，ｄ　ＳＪ　−１５，０七）　、５．
９８　（ＩＨ。

ｄｔ、　Ｊ−１５，１，８，５ジ）　、５．７９（ＩＨ
Ｓｄ　。

Ｊ　−９，３ＦＩｚ）　、５．１９　（ＩＨＳｄ　、　
Ｊ　−６，９Ｈｚ）、４．７９（ＩＨＳｄ　、　　６．
４Ｈｚ）　、４．７９（ＬＨ，ｄ　。

Ｊ　−１，７Ｈｚ）　、４．８３（ＩＨＳｄ　ＳＪ　”
　１．７Ｈｚ）、４．５４　（ＩＨ，ｄｄＳＪ　−８，
９，５，３馳）　、４．２３（ＩＨ。

ｓ　）　、４．１６　（ＩＨ，ｄｄＳＪ　＝　９．８．
１３．５Ｈｚ）、３．９７　（ＬＨ，ｄｄ％Ｊ−９，２
、ｌｓ、５Ｈｚ）　、Ｌ８７（ＬＨ。

ｄｑＳＪ　−２，５，６，８Ｈｚ）　、３．７３　（３
Ｈ，ｓ　）、３．８４　（ＩＨ，ａ＋）、３．６３　（
ＩＨＳｄ　、　Ｊ　−９，９馳）、３．５５　（３Ｈ，
ｓ　）　、３．４８　（ＩＨＳｄｄ、　Ｊ　−８，７，
３，８Ｈｚ）　、３．２５−８．１５　（２１，ｔａ　
）　、　３．２３　（３Ｈ。

ｓ　）　、２．４０（ＩＨＳｂｒ　ｄ、　Ｊ　＝１４．
４１１ｚ）　、２．３１（ＩＨ，ｄｄ、　Ｊ−１４，４
，２，３Ｈｚ）　、２．２５−２．０７（３Ｈ，ｓ）　
　、１．９２（ＩＨＳ　１１　）　　、１．７５（ＩＨ
。

履　　）　　　、　　１．８４　　（２Ｈ，１１）　　
　、　　１．８２−１．３７　　（５Ｈ，ｍ）、１．３
０　（ＩＨＳ　ｍ）、１．１７　（８Ｈ，ｄ　　、Ｊ　
−８，５Ｈｚ）　　、１．００　（３Ｈ，ｓ）、０．９
８　（３ＨＳ　ｄ　　、Ｊ　−８，９Ｈｚ）　　、およ
び０．８５　（３Ｈ，Ｓ　） ”ＣＮＭＲ（ＣＤ３　０Ｄ）　　　二　　　δ　　　１
７４．３３　　（ｓ）　、１７３．７１　（Ｓ　　）　
　、１８８．９９　（Ｓ　　）　　、１５８．８５　（
Ｓ　　）　　、１４８．２３　（ｓ　　）　　、１４３
．１５　（ｄ　　）　　、１４２．０１　（ｄ　　）　
　、１４１．０９　（ｄ　　）　　、１３１．４０　（
ｄ　　）　　、１２９．１５　（ｄ　　）　　、１２２
．９８　（ｄ　　）　　、１１０．０４　（ｔ　　）　
　、１０１．３０　（ｓ　　）　　、８７．６３　（ｔ
　　）　　、　８０．６２　（ｄ　　”）　　、　７８
．７５　（ｄ　　）　　、７５．５８　（ｄ　　）　　
、　７４．９０　（ｄ　　）　　、　７４．０６　（ｄ
　　）　　、７１．０４　（ｄ　　）　　、　７０．８
５　（ｄＸ　２　　）　　、　６１．９１　（ｑ　’）
　　、５３．１８　（ｄ　　）　　、　５２．８３　（
Ｑ　）　　、　４８．７５　（ｑ　）　　、４３．０３
　（ｄ　　）　　、　　４２．２１　（ｓ　　）　　、
　　４．１．８５　（ｔ　　）　　、３７．２７　（ｔ
　　）　　、　　３８．７７　（ｔ　　）　　、　　３
４．７９　（ｔ　）　　、３３．９２　（ｔ　　）　　
、　２９．９２　（ｔ　　）　　、　２８．２９　（ｔ
　　）　　、２６．００　（ｔ　　）　　、　２３．８
２　（Ｑ　　）　　、　１８．１５　（Ｑ　　）　　、
１４．４１　（Ｑ　）　、および１２Ｊ８　（ｑ　）オ
ンナマイドＡのピリミジン誘導体（３）オンナマイドＡ
　（１）　　（１０ＥＩ）、２，４−ペンタンジオン（
０，５ＩＩＩりおよびピリジン（０，５ａｉｙ）を管に
入れて密封し、９５℃で５時間加熱した。過剰の試薬を
真空下で留去することにより、明黄色のガラス状物質と
してピリミジン誘導体（３）ｌｕＩＩＳ（１００％）を
得た。

ＵＶ　（ＭｅＯＨ）：　　λｌ１ａｘ　　２Ｇ２　（ｅ
　　２２８０Ｇ）、２３９　　（１９１００）　、およ
び２９９　ｎｍ　（４１２００）ＩＨＮＭＲ（ｃＩ）３
０Ｄ）；　　δ　７．１７（ＬＨ。

ｄｄ、　Ｊ−１４，９，１１，２Ｈｚ）　、８．５５　
（ＩＨ，ｄｄ。

Ｊ−１４，７，１０，７Ｈｚ）　、６．３９　（ＩＨ，
ｓ　）、６．２８　（ＩＨＳｄｄ、　Ｊ−１５，１，１
１，５Ｈｚ）　、８．２２（ＬＨ。

ｄｄ％Ｊ　−１５，１，１０，６Ｈ２）　、８．０４　
（ＩＨＳｄ　。

Ｊ　−１５，１Ｈｚ）　１，５．９８　（ＩＨ，ｄｔ、
　Ｊ−１４，２，６，９Ｈｚ）　、５．８０　（ＩＨＳ
ｄ　、　Ｊ　−９，３Ｈｚ）、５．２０　（ＩＨ，ｄ　
ＳＪ　−６，８Ｈｚ）　、４．７９　（ＬＨ。

ｂｒ　ｓ）　、４．７８　（ＩＨ，ｄ　ＳＪ　−６，８
Ｈｚ）　、４．８３（ＩＨＳｂｒ　ｓ）　、４．４９　
（ＬＨ，ｄｄ、　Ｊ　＝　８．３．４．３Ｈｚ）　、４
．２２　（ＩＨ，ｓ　）　、４．１８　（ＩＨＳｄｄ。

Ｊ−９，９，８，８七）　、３．９８　（ＬＨ，ｄｄＳ
Ｊ　−９，３，８，６Ｈｚ）　　、３．８７　（ＩＨＳ
　ｄｑ、　　Ｊ　−２，６、８，４１１ｚ）　　、３．
６５　（ＩＨ，ｍ）、３．６４　（Ｉ　Ｈ，ｄ　、　Ｊ
　−９，７Ｈｚ）、３．５５　（３ＨＳ　ｓ　　）　　
、３．４８　（ＩＨＳ　ｄｄ、　　Ｊ　　−８，５，４
，５Ｈｚ）　　、３．４１　（２Ｈ，ｔ　　％　Ｊ　−
８，６Ｈｚ）　　、３．２３（３Ｈ，ｓ　　）　　、２
．４０　（ＩＨ，、ｂｒ　　ｄ、Ｊ−１４，３Ｈｚ）　
　、２．３２　（ＩＨＳ　ｂｒ　　ｄＳ　Ｊ　＝１４．
４Ｈｚ）、２．２６　（８Ｈ。

ｓ　　）　　、２．２５−２．０５　（８Ｈ，ｔａ　　
）　　、１．９４　（ＩＨＳ　ｍ）、１．７８　（ＩＨ
Ｓ　ｍ　　）　　、１．８９　（２ＨＳ　ｓ　　）　　
、１．６０−１．４０　（５Ｈ，■　）　　、１．２８
　（ＩＨ，ｔｓ　　）　　、１．１７（３Ｈ，ｄ　　、
　　Ｊ　−６，８Ｈｚ）　　、１．００（８Ｈ，ｓ　　
）　　、０．９５　（３Ｈ，ｄ　、　Ｊ　−７，０七）
、および０．８５（３Ｈ，ｓ） ”ＣＮＭＲ（ＣＤ３　０Ｄ）：　　　δ　　１７６．６
７　（Ｓ）、１７４．１８　（ｓ　　）　　、１８８．
９９　（ｓＸ　２　　）　　、１６８．５９　（ｓ　　
）　　、１８２．２１　（ｓ　　）　　、１４８．１２
　（ｓ　　）　　、１４２．４１　（ｄ　　）　　、１
４１．４３　（ｄ　　）　　、１４０．６３　（ｄ　　
）　　、１３１．３９　（ｄ　　）　　、１２９．３３
　（ｄ　　）　　、１２３．８９　（ｄ　　）　　、１
１０．２０　（ｄ　　）　　、１１０．０９　（ｔ　　
）　　、１０１．２３　（ｓ　　）　　、　８７．５７
　（ｔ　　）　　、８０．５０　（ｄ　　）　　、　　
７８．７２　（ｄ　　）　　、　　７５．５０　（ｄ　
　）　　、７４．８１　　（ｄ　　）　　、　　７４．
０３　（ｄ　　）　　、　　７１．０２　（ｄＸ　２　
　”）　　、７０．７５　（ｄ　　）　　、　　８１．
９３　（Ｑ　　）　　、　　５４．２５　（ｄ　）　　
、４８．７６　（ｑ　　）　　、　　４２．９２　（ｄ
　）　　、　　４２．１９　（Ｓ　　’）　　、１１．
６２　（ｔ　　）　　、　　３７．２２　　（ｔ　　）
　　、　　３８．７８　　（ｔ　　）　　、３４．７７
　　（ｔ　　）　　、　　３３．８７　　（ｔ　　）　
　、　　３０．４１　　（ｔ　　）　　、２８．９８　
（ｔ　　）　　、　２５．９９　（ｔ　　）　　、　２
３．５９　（Ｑ　　）　　、２３．４３　（ｑＸ　２　
　）　　、　　１８．１５　（ｑ　　）　　、　　１４
．３４　（Ｑ　　）　　、および１２．３６　（Ｑ　） この発明の化合物の抗腫瘍活性 この発明の化合物の抗腫瘍効果を説明するために、以下
に示すアッセイ法を利用した。

Ｐ３８８マウス白血病細胞アッセイ 細胞系統の維持 Ｐ３８８マウス白血病細胞を、１０％ウマ血清、４−Ｍ
グルタミンおよび２０μ９／ｄゲンタマイシン（Ｂ　１
ｏｌｏｇｏｓ　、　Ｉ　ｎｃ、　）を含有するダルベツ
コＭＥＭ培地において増殖させた。細胞は１０％ＣＯ２
中でインキュベートし、　１週間当り２回継代培養した
。

手順 １．２４ウエルプレートの各ウェルまたは管に化合物を
添加し、溶媒を留去して乾燥させる。

２、各ウェルまたは管に細胞２１１Ｊ！（１，２Ｘ１０
５　）を添加し、混合する。

３．１０％ＣＯ２の雰囲気下で、３７℃で４８時間イン
キュベートする。

４、倒立顕微鏡を用いてプレートを観察し、活性を１＋
から４＋まで以下の基準で評価する。

ＮＤ（検出不可能）・・・対照の増殖の９０％をこえる ■＋・・・対照の増殖の７５−９０％ ２＋・・・対照の増殖の５０−７４％ ３＋・・・対照の増殖の２５−４９％ ４＋・・・対照の増殖の２５％未満 細胞の計数は各管ごとに行ない、結果は対照に対するパ
ーセントで報告した。ＩＣ，。は細胞増殖の５０％を阻
害するに必要な化合物の濃度である。

上述のアッセイの結果を第１表にまとめた。

発明の化合物の抗ウィルス活性 第２表に示したこの発明の化合物のＩｎ　ｖｌｔｒｏに
おける抗ウイルス効果を示すために、以下に示すアッセ
イ法を利用した。

Ａ、細胞培養株：マウス肝臓に由来するＮＣＴＣクロー
ン１４６９ Ｂ、細胞培養株の維持 １、トリプシン処理 ａ、培地を無菌的に除去した。

ｂ、細胞シートを、Ｃａ”＋およびｙｌ　ｇ＋十を含有
しないリン酸緩衝生理食塩水ですすいだ。

ｃ、　　１５０＾２フラスコにトリプシン−ＥＤＴＡ混
合物４１１Ｊを添加した。

ｄ、放置時間を１分間以内にして、フラスコを振とうさ
せた。

ｅ、増殖培地１０．ｗｊを添加し、ピペッティングによ
って細胞の塊を壊した。

ｆ、細胞数を数えた。

２、アッセイに使用する細胞の維持のための継代培養 ａ、　　１５０ｃａ２の組織培養フラスコに、増殖培地
４０ｒｌＩ！中のＩＯＸ　１０６個の細胞を植え付けた
。

ｂ、　　１週間当り　２回線代培養した。

Ｃ，ウィルス コロナウィルスと同様に分類されたマウス肝炎ウイスル
ＭＨｖ−Ａ５９株 り、ウィルスアッセイに用いるプレートの調製１、細胞
濃度 ａ、細胞を増殖培地で希釈して１ｍ当り５Ｘ１０うない
し７．５Ｘ　１０５細胞の濃度にした。

ｂ、２４ウエルのトレイに各ウェル当り　１．０ｇを植
え付けた。

Ｅ、ウィルスアッセイ ■、試験する薬物または抽出物を適当な溶媒で希釈した
。

２、１Ｂｍの試験用ウェルに対応する１２ＪＩＩＩＸ７
５１１のガラス管に２０ラムダを添加した。

３、層流フードの下で溶媒を留去した。

４、　　Ｍ　ＨＶ　−Ａ　５９をＣａ”十およびＭ　ｇ
　＋十を含有するダルベツコリン酸緩衝生理食塩水で希
釈して、一般に使用されているロットナンバーに対応す
る所定の適切な希釈液とした。このアッセイでは、２４
時間で３＋ないし４＋　ＣＰ　Ｅが得られるウィルスの
希釈液の滴定を行なった。

５．２４時間以上前に植え付けられた Ｎ　ＣＴ　Ｃ１４１３９細胞を含有するプレートのウェ
ルから培地を除去した。

６、各試験用ウェルに希釈したウィルス２００ラムダを
添加した。対照用ウェルにＰＢＳを添加した。

７、細胞およびウィルスを３７℃で１時間インキュベー
トした。。

８、インキュベーション終了時に上澄を流した。

９、各ガラス管にジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）１
０ラムダを添加した。

ｌＯ０各ガラス管に保存培地１１ｊ！を添加した。

１１、ガラス管の中身を組織培養プレートの対応するウ
ェルに注ぎ込んだ。

１２．感染した細胞を３７℃でインキュベートし、翌日
読み取った。

１３、１２時間の時点で細胞融合の領域は極めて明瞭で
あり、視覚的にも顕微鏡的にも検出することが可能であ
った。

１４、２４時間の時点においては、ＣＰＥは広範囲にわ
たり、染色したプレートにおいては、活性を有する部分
とそうでない部分との差は視験から明らかであった〇 １５、プレートを染色するために培地を廃棄し、各１６
Ｂウエルにメチレンブルー色素２００ラムダを添加した
。

１Ｂ、細胞シート上の色素を３０分以上放置した。

１７、色素を流し、水が透明になるまでタップウォータ
ーでプレートを洗浄した。

１８、　プレートを乾燥させた。

１９、薬物活性の評価 ａ、細胞毒性評価 １００％一完全な細胞の破壊 ７５％一部分的な細胞の破壊 ５０％゛一部分的な細胞の破壊 ２５％一部分的な細胞の破壊 ０％−細胞毒性無し す、抗ウィルス活性の０から＋＋十までの評価。

＋＋十−細胞変性効果および細胞融合の完全な阻害 ＋十一部分的な阻害 十一部分的な阻害 ＋／−一部分的な阻害 ロー防御無し Ｆ、培地 １、ＮＣＴｅ１４６９細胞系のための増殖培地ＮＣＴＣ
１３５培地（ＧＩＢＣＯＣａｔ。

＃　　３２０−１３５０） ウマ血清　１０％ ２０ｈ＋Ｍ　ｌ−グルタミン　２％ 非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ）（１００Ｘ）　　　１％ピ
ルビン酸ナトリウム （１１０Ｂ／　、ｌ’　）（１００Ｘ　）　　　１％ゲ
ンタマイシン １０ｊ！９／’ｌ／　（５０μｇ／１１１を使用）また
は０．５１１Ｉ！／　１００ ５０２２９／Ｍ　（５０μｇ／Ｗｄｌを使用）または０
．１献／　１００ ２、ウィルスアッセイのための保存培地ダルベツコ改変
イーグル培地＠　４５００ｊｌ！９　／　、ｉ’グルコ
ース （Ｇ　Ｉ　　Ｂ　ＣＯＣａｔ、　　＃　　Ｈｅ−１９８
５）ウシ胎児血清（ＦＢＳ）　　　５％ ２００ｍＭ　ｌ−グルタミン　　２％ 非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ）（１００Ｘ）　　　１％ピ
ルビン酸ナトリウム （１１Ｏη／１２）（１００Ｘ）　　　１％ゲンタマイ
シン（５０μｇ／ＩＩＪｌを使用）３、トリプシン Ｇ　Ｉ　ＢＣＯＣａｔ、　　＃　　８１０−５４０５　
　）リブシン−ＥＤＴＡ　（ＩＯＸ） トリプシン（１：　２５０　）　　５．０９およびＥＤ
ＴＡ　２．０９／、ｌ’ Ｃａ”十およびＭｇ＋÷を含有しないダルベツコリン酸
緩衝生理食塩水で１×溶液を調製した。

ｌｔ’当りグルコース　Ｌ、１ｇを添加した。

４、色素 保障されたメチレンブルー （Ｓ　ｉｇｍａ　　Ｎｏ、　　Ｍ　９１４０）５０％エ
タノール：水 メチレンブルー　５９／、１？ Ａ、細胞培養株の維持 ■、　ウィルス ａ、単純ヘルペス１型（Ｈ８Ｖ−１）と水痘性口内炎ウ
ィルスをＣＶ−１細胞系において増殖させた。ＣＶ−ｔ
は、原始のアフリカ・グリーンモンキーに由来する線維
芽細胞様の培養細胞である。

２、ＣＶ−１細胞の増殖 ａ、各１５００２組織培養フラスコに、ＦＢＳ１０％を
含有するＥＭＥＭ　（増殖培地）４０ＩＩＪ中の１０Ｘ
１０６　ＣＶ−１細胞を植え付けた。

ｂ、フラスコに植え付けてから７日後、細胞数は約４０
−５０Ｘ　１０６細胞になっているはずである。

これらの数を基にすると、ＣＶ−１細胞の倍加時間は７
２時間である。

３、トリプシン処理 ａ、培地を無菌−的に除去した。

ｂ、細胞シートを、Ｃａ＋÷およびＭ　ｇ　＋十を含有
しないダルベツコリン酸緩衝生理食塩水またはバック（
Ｐｕｃｋｓ）Ｇ生理食塩水１０ｍで少なくとも２回すす
いだ。

ｃ、　　トリプシン−ＥＤＴＡ混合物４．０１を添加し
た。

ｄ、細胞がフラスコから離れるまで（約５分）、フラス
コを室温で時々振とうさせながらインキュベートした。

ｅ、フラスコを振とうさせた。

ｆ、ＥＭＥＭ増殖培増殖培地１０杏Ｉ！し、ピペッティ
ングによって細胞の塊を崩した。

ｇ、細胞の数を数えた。

Ｂ、ウィルスアッセイのためのプレートの調製１、細胞
濃度 ａ、ＥＭＥＭを用いて細胞を４Ｘ　１０５細胞／ｇに希
釈した。

ｂ６２４ウェルトレイに各ウェル当り　０．５ｍｌ！を
植え付けた。各ウェル当りの細胞濃度は２Ｘ１０５であ
った。

ｃ、　　５％ＣＯ２の下で３７℃でインキュベートした
。

ｄ、植え付けた後のその日から数日間はウェルを使用す
ることが可能である（好ましくは、２．３、または４）
。

Ｃ，ＣＶ−１細胞中のＨＳＶ−１およびｖｓｖのアッセ
イ １、ウィルスによるプレートでのＣＶ−１細胞の感染 ａ、ウェルから培地を除去した。

ｂ、少なくとも２５プラ一ク形成単位（Ｐ　Ｆ　Ｕ）で
ありかつ８０ＰＦＵをこえないウィルスを用いてウェル
を感染させた。

Ｃ０感染した細胞を、３７℃で１．０時間インキュベー
トした。

ｄ、インキュベーション終了時に上澄を流した。

ｅ、メチルセルロース参オーバーレイ培地（ＭＣＯ：フ
ェノールレッドを用いずに４０００センチポアズのメチ
ルセルロース１％を用いる保存培地、ＦＢＳは５％レベ
ルで使用される）　　０．５１１Ｊ！を添加した。

２、薬物の評価 ａ、薬物の評価のための、海綿動物の抽出物または試験
化合物的０．０２ＩＩＩＩ！を有する湿ったろ紙デイス
ク（直径８Ｍ）。

■）室温で２０ないし３０分間溶媒を蒸発させた。

２）ＣＶ−］細胞、ウイ／ＩｚスおよびＭＣＯを含むウ
ェルにディスクを置いた。

ｂ１組織培養プレートを３７℃で４８時間インキュベー
トした。

Ｃ９４８時間後に各ウェルにＮＲＭＣＯＯ，５１１Ｊを
添加した。ＮＲＭＣＯＭは、フェノールレッド番含をせ
ず、１１１Ｊ！当り　０．１ηの中性赤色色素と１５セ
ンチポアズのメチルセルロース２％を含有する保存オー
バーレイ培地である。

ｄ、プレートを３７℃でインキュベートし、後日判読し
た。抗ウィルス活性は、２つのパラメータから観察され
るべきである。その第１はプラーク数の実際の減少であ
り、第２はプラークの直径の縮小である。

３、薬物の活性の評価 ａ、抗ウィルス活性を０から＋＋＋まで評価した。

＋＋＋−プラーク形成を完全に阻害 ＋十一部分的な阻害 十一部分的な阻害 ＋／−一部分的な阻害 ロー保護無し す、細胞毒性 ２４ウ工ル組織培養プレートのウェルの直径は１８ＪＩ
ＩＩである。ディスクは６１ｍである。８℃１以上の細
胞毒性領域は、８ないし１Ｂの偶数のみを使用して等吸
付けた。

〇−視覚的なもしくは顕微鏡的な細胞毒性は無い １Ｂ−完全な細胞の破壊 ８．１０．１２．１４一部分的な細胞毒性この発明の化
合物の抗真菌活性 以下のアッセイ法は、第３表に示したこの発明の化合物
のｔｎ　ｖｔｔｒｏにおける抗真菌有効性を示すために
利用した。

（Ｃａ　）　）をサブローデキストロース寒天上で増殖
させ、単一のコロニーを形成させて、そのうちの一つを
サブローデキストロースブロスに接種した。そのブロス
を２００ｒｐｍで振とうさせながら３７℃で１８時間イ
ンキュベートし、得られた培養液を１０％（容量／容量
）グリセロールと共に一８０℃で凍結し、接種物として
抗カンジダアッセイに使。

用した。

キストロース寒天に接種し、約ｔｏｏｏ細胞／ｇの細胞
密度にした。ｌＯｃ′ｍＸ１Ｏｎのペトリ皿に接種した
寒天ｌ０Ｊｌｊ！を入れてプレートを調製した。これら
のプレートを、アッセイに必要となるまで４℃で保存し
た。

ペーパーディスク（６，３５ｍ）に試験物質を染み込ま
せ、乾燥させた。その後それらを、上に詳述した試験プ
レートの表面上に置いた。プレートを３７℃で一晩イン
キユベートすることで、その後に増殖阻害領域を判読す
ることが可能となり、それらをミリメーターで表示した
領域の直径として表わした。

２、最少阻止濃度（ＭＩＣ） ９６ウエルマイクロタイタープレートを使用して、薬物
の２倍希釈液であるサブローデキストロースブロス５０
μノを調製した。小容量に接種物であるＣ、アルビカン
スを添加して細胞濃度を約１０００細胞／ＭＪ！とじた
。プレートを３７℃で一晩インキエベートシた。その後
、各ウェルに塩化トリフェニルテトラゾリウム（１％重
量／容量）を添加した。

さらに、これを２時間インキュベートすることにより微
生物は深く着色された。ＭＩＣは、増殖を完全に阻止す
る薬物の最も低い濃度である。

オンナマイドＡ　（１）　　　　　　　　　　　０．０
０１メチルエステル（２）　　　　　　　　　　０　、
３ピリミジン誘導体（３）　　　　　　　　０　、００
３第　　　　２　　　　表 抗真菌活性 Ａ　　　２０　　　　０１．Ｓ　　３＋　　ＯＬＳ　　
３＋　　２５　３＋０．００２　　　０　　−０　　−
　０　２＋０．０００２　　　　　　　　　　　　　　
０　　−２０　　　　０１、Ｓ　　３＋　　ＯＬＳ　　
３＋　　２５　３４２　　　　０ＬＳ３＋　　０ＬＳ３
＋　　２５　３＋０．００４　　　０　　２＋　　０　
　１４　　０　３＋２　　　　０Ｌｓ８＋　　０ＬＳ３
＋　　２５　３４０．００４　　　０　　２＋　　Ｏ−
０３＋０．００２　　　０　　−０　　−　　０　３＋
０．０００２　　　　　　　　　　　　　　０　３＋ｏ
、ｏｏｏｔ　　　　　　　　　　　　　　　ｏ　　　−
第　　　　３　　　　表 オンナマイドＡ　（１）　　　　　　　　　　５Ｇメチ
ルエステル（２）５ ピリミジン誘導体（３）　　　　　　　　５０上記のデ
ータは、この発明の化合物の種々の腫瘍細胞、ウィルス
および真菌の阻止に対して測定されたＩｎ　ｖｌｔｒｏ
における活性を報告している。上記の結果は、当業者に
知られるで・あろうように、この発明の化合物が、宿主
における腫瘍、ウィルスおよび真菌とそれらによって引
き起こされる疾病の阻止に有用であることを示している
。

この発明の範囲は、ここに記載された詳細な説明、実施
例、および示唆された用途に限定されるものではなく、
かつこの発明の精神から離れることなく変化させること
が可能である。ここに記載された化合物は、例えば鎮痛
を目的とした適用という具合に、他の有用な適用法を有
する可能性がある。この発明の化合物の治療への適用は
、当業者に現在知られもしくは将来知られることがある
適当な治療方法および技術によって達成することができ
る。さらに、この発明の化合物は、他の有用な化合物の
調製のための出発物質または中間体として使用すること
ができる。したがって、この発明は、係る請求およびそ
れらの同等物の範囲に入るこの発明の修正および変化を
包含することを意図するものである。

出順入代理入弁理土鈴江武彦

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記一般式 I ないしIIIのいずれかの式で表わさ
   れる化合物。 ▲数式、化学式、表等があります▼ I ▲数式、化学式、表等があります▼II ▲数式、化学式、表等があります▼III （ここで、Ｘ＾１−Ｘ＾４は水素、ヒドロキシル、低級
   アシル、または低級アルキル基であって同じであっても
   異なっていてもよく、Ｘ＾５−Ｘ＾６は水素または低級
   アルキル基であって同じであっても異なっていてもよく
   、Ｙは非置換のまたは低級のアルキル基のいずれかであ
   り、Ｒ＾１は水素、ヒドロキシル、低級アルキル、また
   は低級アルコキシ基であり、Ｒ＾２−Ｒ＾５は水素、ヒ
   ドロキシル、低級アルコキシまたは低級アシロキシ基で
   あって同じであっても異なっていてもよく、Ｑ＾１−Ｑ
   ＾３は水素、ニトロ、アミノ、低級アシルアミノ、また
   は低級アルキル基であって同じであっても異なっていて
   もよく、およびＺ＾１は水素、アルキル、ヒドロキシル
   、アルコキシ、アミノ、モノ−もしくはジアルキルアミ
   ノ、またはα−アミノ酸残基である。発明の他の態様に
   おいては、一般式 I ないしIIIの二重結合は部分的にま
   たは完全に還元されている。）
2. （２）前記化合物が実質的に純粋である請求項１に記載
   の化合物。
3. （３）下記一般式IVないしVIのいずれかの式で表わされ
   る請求項１に記載の化合物。 ▲数式、化学式、表等があります▼Ｒ＝ＨIV Ｒ＝ＭｅＶ ▲数式、化学式、表等があります▼VI
4. （４）少なくとも１つの二重結合が還元されている請求
   項１に記載の化合物。
5. （５）活性成分としての抗腫瘍有効量の請求項１に記載
   の化合物および非毒性の薬理学的に許容し得る担体また
   は希釈剤を含有する抗腫瘍組成物。
6. （６）腫瘍を請求項１に記載の化合物の抗腫瘍有効量と
   接触させることを含む宿主における腫瘍を阻止するため
   の方法。
7. （７）腫瘍を請求項３に記載の化合物の抗腫瘍有効量と
   接触させることを含む哺乳動物の宿主における腫瘍を阻
   止するための方法。
8. （８）活性成分としての抗ウィルス有効量の請求項１に
   記載の化合物および非毒性の薬理学的に許容し得る担体
   または希釈剤を含有する抗ウィルス組成物。
9. （９）ウィルスを請求項１に記載の化合物の抗ウィルス
   有効量と接触させることを含むウイスルを阻止するため
   の方法。
10. （１０）ウィルスを請求項３に記載の化合物の抗ウィル
    ス有効量と接触させることを含む宿主におけるウィルス
    を阻止する方法。
11. （１１）ウィルスを請求項１に記載の化合物の抗ウィル
    ス有効量と接触させることを含む哺乳動物の宿主におけ
    るウィルスを阻止するための方法。
12. （１２）活性成分としての抗真菌有効量の請求項１に記
    載の化合物および非毒性の薬理学的に許容し得る担体ま
    たは希釈剤を含有する抗真菌組成物。
13. （１３）真菌を請求項１に記載の化合物の抗真菌有効量
    と接触させることを含む真菌の増殖を阻止するための方
    法。
14. （１４）真菌を請求項３に記載の化合物の抗真菌有効量
    と接触させることを含む宿主における真菌の増殖を阻止
    する方法。
15. （１５）真菌を請求項１に記載の化合物の抗真菌有効量
    と接触させることを含む哺乳動物の宿主における真菌の
    増殖を阻止するための方法。
16. （１６）請求項１に記載の化合物の製造方法であって、 海綿動物￥テオネーラ￥ｓｐ．を採集し、 前記海綿動物を適切な有機溶媒系と接触させ、 海綿動物から溶媒抽出物を得、 抽出物を分画し、および 分画した抽出物から請求項１に記載の化合物を単離する 工程を含む製造方法。
17. （１７）溶媒系が、メタノール、エチルアセテート、ヘ
    プタン、ヘキサン、イソオクタン、アセトン、エタノー
    ル、イソプロパノール、ｎ−プタノール、トルエン、ベ
    ンゼン、ジエチルエーテル、ｔ−ブチルメチルエーテル
    、クロロホルム、１，２−ジクロロエタン、ジクロロメ
    タン、水およびそれらの組合わせからなる群から選ばれ
    る請求項１６に記載の製造方法。
18. （１８）へプタン、ヘキサン、イソオクタン、クロロホ
    ルム、ジクロロメタン、１，２−ジクロロエタン、ベン
    ゼン、トルエン、イソプロパノール、ジエチルエーテル
    、メタノール、エタノール、アセトニトリル、水、ブタ
    ノールおよびそれらの組合わせからなる群より選ばれる
    溶出用混合液を用いる対向流クロマトグラフィーによっ
    て、溶媒抽出物を分画および単離させる請求項１６に記
    載の製造方法。
19. （１９）宿主において、腫瘍の存在によって引き起こさ
    れる癌性悪液質を治療するための治療方法であって、前
    記腫瘍の細胞を請求項１に記載の化合物の抗腫瘍有効量
    と接触させることを含む治療方法。
20. （２０）宿主において、腫瘍の存在によって引き起こさ
    れる癌性悪液質を治療するための治療方法であって、前
    記腫瘍の細胞を請求項３に記載の化合物の抗腫瘍有効量
    と接触させることを含む治療方法。