JP7535591B2 - コロナウイルス感染の処置のためのＣ５ａのインヒビター - Google Patents

Description

本発明は、コロナウイルスでの感染によって引き起こされるか、またはコロナウイルスでの感染と関連するＣ５ａ活性医学的状態のインヒビターであって、医学的状態が好ましくは（ｉ）肺炎、および／または（ｉｉ）発熱である、Ｃ５ａ活性医学的状態のインヒビターに関する。本発明は、また、コロナウイルス感染に罹患している対象において炎症性応答の低下におけるＣ５ａ活性のインヒビターの使用に関する。本発明は、さらに、コロナウイルス感染に罹患している対象において臓器機能、特に肺機能および／または肝機能の改善における使用のためのＣ５ａ活性のインヒビターに関する。

発明の背景
Ｃ５ａ
Ｃ５ａは、補体活性化時にＣ５から切断される。補体活性化産物の中で、Ｃ５ａは、最も強力な炎症性ペプチドの１つであり、広範囲の機能を有する（Guo RF, and Ward PA. 2005. Annu. Rev. Immunol. 23:821-852）。Ｃ５ａは、１１．２ｋＤａの分子量を有する、健常ヒトの血液中に存在する糖タンパク質である。Ｃ５ａのポリペプチド部分は、８．２ｋＤａの分子量を構成する７４アミノ酸を含み、一方、炭水化物部分は約３ｋＤａを構成する。Ｃ５ａは、高親和性Ｃ５ａ受容体（Ｃ５ａＲおよびＣ５Ｌ２）を介してその効果を発揮する（Ward PA. 2009. J. Mol. Med. 87(4):375-378）。Ｃ５ａＲは、７回膜貫通セグメントを有するＧ－タンパク質－共役受容体のロドプシン型ファミリーに属する；Ｃ５Ｌ２は、類似であるが、Ｇ－タンパク質－共役ではない。現在、生物学的応答がほとんどＣ５ａ－Ｃ５Ｌ２相互作用に対して見られないため、Ｃ５ａはＣ５ａ－Ｃ５ａＲ相互作用を主に介してその生物学的機能を発揮すると考えられている。Ｃ５ａＲは、好中球、好酸球、好塩基球、および単球を含む骨髄細胞、および多くの臓器、とりわけ肺および肝臓における非骨髄細胞上に広範に発現され、Ｃ５ａ／Ｃ５ａＲシグナル伝達の重要性を示す。Ｃ５ａは、種々の生物学的機能を有する（Guo and Ward, 2005, 上記）。Ｃ５ａは、好中球に対する強力な化学誘引物質であり、また単球およびマクロファージに対する走化性活性を有する。Ｃ５ａは、好中球において酸化的破壊（Ｏ_２消費）を引き起こし、食作用および粒状酵素の放出を増強する。Ｃ５ａはまた、血管拡張薬であることが見いだされている。Ｃ５ａは、種々の細胞型からのサイトカイン発現の調節に関与し、好中球における接着分子発現を増強することが示されている。Ｃ５ａは、炎症性応答連鎖の上流において機能する炎症性応答に対する強力なインデューサーおよびエンハンサーであるため、疾患背景において過剰に産生されるとき、高度に有害となることが見いだされている。高用量のＣ５ａは、好中球についての非特異的走化性「脱感作」を引き起こし、それにより広範な機能障害を引き起こすことができる（Huber-Lang M et al. 2001. J. Immunol. 166(2):1193-1199）。

Ｃ５ａは、多くの炎症性応答を引き起こすことが報告されている。例えば、Ｃ５ａは、ヒト白血球からの、炎症性サイトカイン、例えばＴＮＦ－α、ＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＩＬ－８、およびマクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）の合成および放出を刺激する（Hopken U et al. 1996. Eur J Immunol 26(5):1103-1109; Riedemann NC et al. 2004. J Immunol 173(2):1355-1359; Strieter RM et al. 1992. Am J Pathol 141(2):397-407）。Ｃ５ａは、肺胞上皮性細胞において、ＴＮＦ－α、マクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ）－２、サイトカイン誘発好中球走化性因子（ＣＩＮＣ）－１、およびＩＬ－１βの生産においてＬＰＳと強い相乗効果を産生する（Riedemann NC et al. 2002. J. Immunol. 168(4):1919-1925; Rittirsch D et al. 2008. Nat Rev Immunol 8(10):776-787）。

Ｃ５ａの遮断はまた、敗血症の実験モデルおよびＫｌｏｓ Ａ． ｅｔ ａｌ（Klos A. et al. 2009. Mol Immunol 46(14):2753-2766)およびＡｌｌｅｇｒｅｔｔｉ Ｍ． ｅｔ ａｌ(Allegretti M et al. 2005. Curr Med Chem 12(2):217-236）に部分的にレビューされている様々な種において炎症、例えば虚血／再潅流障害、腎臓疾患、移植片拒絶反応、マラリア、リウマチ性関節炎、感染性腸疾患、炎症性肺疾患、狼瘡様自己免疫疾患、神経変性疾患などの他の多くのモデルにおいて保護することが証明されている。さらに、最近、Ｃ５ａの遮断がマウスの腫瘍モデルにおいて強い治療利益を示すことを見いだされている（Markiewski MM et al. 2008. Nat Immunol 9(11):1225-1235）。

コロナウイルス感染
過去数十年間に世界中で様々なコロナウイルスが発生し、その中でも特に３種類のウイルスが高い死亡率を有する疾患を引き起こした。重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）、中東呼吸器症候群（ＭＥＲＳ）、および最近のコロナウイルス疾患２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）。これらの流行の原因となったコロナウイルスは、それぞれＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２であった。

重症急性呼吸器症候群コロナウイルス２（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）としても知られる２０１９年新型コロナウイルスによって引き起こされるコロナウイルス疾患２０１９（ＣＯＶＩＤ－１９）の集団発生が２０１９年１２月に中国湖北省武漢市で初めて確認され、そして以来、公衆衛生上の重大な脅威となっている［Chen et al. 2020; medRxiv, 2020: p. 2020.02.16.20023903; Chen et al [2] 2020, The Lancet, 2020. 395(10223): p. 507-513; Yu et al 2020, Microbes and Infection, 2020. 22(2): p. 74-79］。２０２０年３月２３日時点の中国における症例致死率は４．０２％であり、湖北省での致死率４．６６％と湖北省以外での致死率０．８９％の両方を占めている。湖北省以外での致死率が大幅に低いのは、主に早期診断やタイムリーな改善された医療を含む、医療面での改善に起因すると考えられる［Zhao et al, medRxiv, 2020: p. 2020.03.17.20037572］。中国以外の国においても持続的な感染が起きている。ＣＯＶＩＤ－１９の感染が広がり続けると、様々なレベルの医療に対する要求が急増する。したがって、致死率を効果的に下げるために、重症化への一般的な（軽症の）ウイルス性肺炎の発達の予防および重症状態またはＡＲＤＳへの重症肺炎の発達の予防が医療の焦点となるはずである。

ＣＯＶＩＤ－１９は、以前に発生した他の致死性コロナウイルス感染症、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）および中東呼吸器症候群（ＭＥＲＳ）と比較して比較的高い伝達性を有する主な要因である可能性がある、長い非症状潜伏期間の特徴を示すことができる。ＣＯＶＩＤ－１９患者は、典型的に、インフルエンザのような症状、例えば発熱または乾いた咳および息切れを含む下気道疾患の徴候を示す［Chen et al [2] supra; Chang et al JAMA, 2020; Wang et al. AMA, 2020; Xiao et al Journal of Medical Virology, 2020］。米国疾病対策予防センター（ＣＤＣ）の分析によると、症状が出るまでの潜伏期間は、およそウイルス暴露後から２～１４日と推定されている。重症型への疾患の進行について、それは、しばしば、肺、心臓、肝臓および凝固系などを含む複数の臓器の機能に影響を及ぼす［Liu et al medRxiv, 2020: p. 2020.02.10.20021584; Fan et al. medRxiv, 2020: p. 2020.02.26.20026971; Tang et al Journal of Thrombosis and Haemostasis, 2020.］。そのため、典型的に、他のウイルス性肺炎による敗血症と同様に、呼吸不全および多臓器機能障害によって死が引き起こされる［Zhang et al medRxiv, 2020: p. 2020.02.26.20028191］。敗血症およびＡＲＤＳは、発症から２週間において発症することが多く；重症化すると３週間において生命を賭けた戦いになることが多い［Zhou et al The Lancet, 2020］。

蓄積されたデータは、高齢、基礎的な健康状態（例えば、心血管問題）および低下した免疫系が、より重症型の疾患およびより悪い結果の発生の可能性についての重要な危険因子であることを示している［Huang et al The Lancet, 2020. 395(10223): p. 497-506］。ＣＯＶＩＤ－１９と並んで高い死亡率と関連する上位３つの併存疾患は、高血圧、糖尿病および冠動脈性心臓疾患である［Zhou et al supra］。ＣＯＶＩＤ－１９患者、とりわけ上記危険因子または併存疾患を有する患者に対する安全で効果的な処置戦略を開発することが急務となっている。

ＣＯＶＩＤ－１９は人類、とりわけ高齢者にとって深刻な健康上の脅威となっている。ＣＯＶＩＤ－１９は、ウイルス性炎症および免疫介在性傷害のデュアルの作用によって特徴づけることができる。ここに開示される前臨床および臨床の知見に基づき、我々はコロナウイルス感染、特にＣＯＶＩＤ－１９の進行に伴う病原性「補体嵐（complement storm）」現象を提唱している。抗Ｃ５ａ療法による遮断は、動物モデルにおいて有効な治療効果およびＣＯＶＩＤ－１９患者において予備的試験を提供する。抗－Ｃ５ａアプローチは、疾患の進行／悪化する軽症型ならびに重症型を有する患者においてＣＯＶＩＤ－１９と闘うことにおいて生存可能である戦略である。

本発明の根底にある技術的問題
本発明の根底にある問題の一つは、新規なＳＡＲＳ－ＣｏＶ２ウイルスによって引き起こされる肺炎の処置のための治療アプローチの提供であった。

これまで、コロナウイルス、ましてや高い死亡率の株ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２によって引き起こされる肺炎の処置において抗－Ｃ５ａ処置が有効であるか否かは検討されていなかった。

本願の発明者らは、Ｈ７Ｎ９ウイルス誘導性の重度の肺炎の処置における補体阻害の治療的可能性を探るために、ヒトＣ５ａに対する高度に強力な中和ｍＡｂであるＩＦＸ－１を適用した。我々の知る限り、コロナウイルス感染に罹患している対象における肺炎および関連症状の抗－Ｃ５ａ処置が試験されたのは、これが初めてである。

以下の実験セクションに開示されているデータは、過剰な補体活性化が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を含む様々なコロナウイルス型の感染において起こることを実証している。

本発明者らは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染ヒト患者における抗－Ｃ５ａ処置が、ＣＯＶＩＤ－１９の主要症状を実質的に減じた、すなわち発熱の低下、リンパ球数の改善、ＣＲＰ値の低下、および血液酸素化およびＡＬＴ／ＡＳＴ値の正常化によって見られるように、臓器機能、特に肺および肝機能の改善。これらの効果はすべて、抗－Ｃ５ａ処置の適用により速やかに解消されたことが確認された。

さらに、本発明者らは、異なるコロナウイルス株への感染がどのように大規模な補体活性化をもたらすかについての機構的洞察を提供する多くの実験を開示する。

これらの結果は、補体阻害、特にＣ５ａ阻害が、コロナウイルスによる疾患、特にコロナウイルスによる呼吸器症候群の処置のための非常に有望な戦略であることを示唆する。

上記概観は、本発明と関連する全ての利点および本発明によって解決される全ての課題を必ずしも記載しない。

発明の概要
第１の局面において、本発明は、コロナウイルスでの感染によって引き起こされるか、またはコロナウイルスでの感染と関連する医学的状態の処置における使用のためのＣ５ａ活性のインヒビターであって、医学的状態が好ましくは（ｉ）肺炎、および／または（ｉｉ）発熱である、Ｃ５ａ活性のインヒビターに関する。

第２の局面において、本発明は、コロナウイルス感染に罹患している対象において炎症性応答の低下における使用のためのＣ５ａ活性のインヒビターに関する。

第３の局面において、本発明は、コロナウイルス感染に罹患している対象において、臓器機能、特に肺機能および／または肝機能の改善における使用のためのＣ５ａ活性のインヒビターに関する。

発明の詳細な説明
定義
本発明を以下に詳細に説明する前に、本発明が、変化できるとき本願明細書に記載されている特定の方法論、プロトコールおよび試薬に限定されないことを理解されたい。本願明細書において使用される用語が、特定の態様のみを説明する目的のためであり、添付の特許請求の範囲のみによって限定される本発明の範囲を限定することを意図しないことも理解されたい。他に定義されていない限り、本願明細書において使用される全ての専門および科学用語は、本発明が属する当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。

好ましくは、本願明細書において使用される用語は、“A multilingual glossary of biotechnological terms: (IUPAC Recommendations)”, Leuenberger, H.G.W, Nagel, B. and Kolbl, H. eds. (1995), Helvetica Chimica Acta, CH-4010 Basel, Switzerland)に記載されているとおりに定義される。本願明細書および添付の特許請求の範囲を通して、文脈上他の意味に解すべき場合を除き、用語「含む」、および「含み」および「含むこと」などの変形は、記載されている整数もしくは工程または整数もしくは工程の群の包含を意味するが、あらゆる他の整数もしくは工程または整数もしくは工程の群の除外をされないと理解される。

いくつかの文書（例えば：特許、特許出願、科学刊行物、製造業者の説明書、指示書、GenBank受入番号配列寄託など）は、本願明細書の本文を通して引用されている。本願明細書において、本発明が以前の発明の理由でかかる記載に先立つ権利がないという承認として解釈されるべきでない。本願明細書に引用される文書のいくつかは、「出典明示により包含させる」として特徴付けられる。かかる組み込まれた文献の定義または教示と本願明細書に引用される定義または教示間で矛盾がある場合、本願明細書の本文が優先される。

配列：本願明細書において言及される全ての配列は、添付の配列表に記載されており、その全体の内容および記載と共に、本願明細書の一部である。

本発明の文脈において、Ｃ５ａは、特にヒトＣ５ａを指す。ヒトＣ５ａは、以下のアミノ酸配列を有する７４個のアミノ酸ペプチドである：
（配列番号：１）

ヒトＣ５のアミノ酸配列は、受入番号ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｐ０１０３１（ＣＯ５＿ＨＵＭＡＮ）の下に見ることができる。

本願明細書において使用されるとき、「Ｃ５ａ活性のインヒビター」なる用語は、Ｃ５ａの活性を何らかの形で減少させるあらゆる化合物を指す。この活性減少は、Ｃ５ａの濃度を直接的または間接的に低下させることによって、またはＣ５ａの活性を減少させることによって、またはその受容体の１つ以上に対する（例えばＣ５ａＲまたはＣ５Ｌ２に対する）その効果を発揮することからＣ５ａを防止することによって、またはＣ５ａの１つ以上の受容体の濃度または活性を減少させることによって、なし遂げることができる。

本発明の文脈において、「Ｃ５ａ受容体」なる表現は、細胞表面上のあらゆる可能性のあるＣ５ａ結合リガンド、とりわけＣ５ａが該受容体に結合し、反応（例えば受容体の活性化または阻害）を引き起こす可能性があるあらゆる受容体タンパク質を指す。「Ｃ５ａ受容体」なる用語は、特に、２つの受容体Ｃ５ａＲおよびＣ５Ｌ２を含む。Ｃ５ａＲの代替名は、Ｃ５ａＲ１およびＣＤ８８である。Ｃ５Ｌ２の代替名は、Ｃ５ａＲ２である。

本発明の特定の態様は、（例えばＣ５ａ受容体に結合することによって、またはＣ５ａ受容体の発現を遮断することによって）Ｃ５ａ受容体を妨げるＣ５ａのインヒビターを指す。これらの文脈において、「Ｃ５ａ受容体」なる用語は、（ｉ）Ｃ５ａＲまたは（ｉｉ）Ｃ５Ｌ２または（ｉｉｉ）Ｃ５ａＲおよびＣ５Ｌ２の両方を指すことができる。これは、Ｃ５ａのいくつかのインヒビターはＣ５ａ受容体の１つのみ（すなわちＣ５ａＲまたはＣ５Ｌ２のいずれか）を妨げるが、一方、Ｃ５ａの他のインヒビターはＣ５ａ受容体の両方（すなわちＣ５ａＲおよびＣ５Ｌ２の両方）を妨げるということを意味する。

本発明の文脈において、「タンパク質リガンド」なる表現は、別の分子に特異的に結合することができる、分子の総サイズにかかわりなく、ペプチド結合によって連結されるアミノ酸から構成されるあらゆる分子を指す。したがって、「タンパク質リガンド」なる表現は、オリゴペプチド（＜１００アミノ酸）およびポリペプチド（＞１００アミノ酸）を含む。「タンパク質リガンド」なる表現はまた、それらのサイズにかかわりなく、環状ペプチドを含む。「タンパク質リガンド」なる表現は、特に、抗体、抗体の抗原結合フラグメント、抗体様タンパク質、およびペプチド模倣物を含む。

本願明細書において使用されるとき、第１の化合物（例えばタンパク質リガンドまたは核酸アプタマー）は、１ｍＭ以下、好ましくは１００μＭ以下、好ましくは５０μＭ以下、好ましくは３０μＭ以下、好ましくは２０μＭ以下、好ましくは１０μＭ以下、好ましくは５μＭ以下、さらに好ましくは１μＭ以下、さらに好ましくは９００ｎＭ以下、さらに好ましくは８００ｎＭ以下、さらに好ましくは７００ｎＭ以下、さらに好ましくは６００ｎＭ以下、さらに好ましくは５００ｎＭ以下、さらに好ましくは４００ｎＭ以下、さらに好ましくは３００ｎＭ以下、さらに好ましくは２００ｎＭ以下、よりさらに好ましくは１００ｎＭ以下、よりさらに好ましくは９０ｎＭ以下、よりさらに好ましくは８０ｎＭ以下、よりさらに好ましくは７０ｎＭ以下、よりさらに好ましくは６０ｎＭ以下、よりさらに好ましくは５０ｎＭ以下、よりさらに好ましくは４０ｎＭ以下、よりさらに好ましくは３０ｎＭ以下、よりさらに好ましくは２０ｎＭ以下、およびよりさらに好ましくは１０ｎＭ以下の第２の化合物への解離定数Ｋ_ｄを有するとき、第２の化合物（例えば標的タンパク質）に「結合する」と考えられる。

本発明による「結合」なる用語は、好ましくは、特異的結合に関する。「特異的結合」は、化合物（例えばタンパク質リガンドまたは核酸アプタマー）が、別の標的への結合と比較して特異的である標的、例えばエピトープにより強く結合することを意味する。化合物は、第２の標的に対する解離定数よりも低い解離定数（Ｋ_ｄ）を有する第１の標的に結合するとき、第２の標的と比較して第１の標的により強く結合する。好ましくは、化合物が特異的に結合する標的に対する解離定数（Ｋ_ｄ）は、化合物が特異的に結合しない標的に対する解離定数（Ｋ_ｄ）よりも、１０倍以上、好ましくは２０倍以上、さらに好ましくは５０倍以上、よりさらに好ましくは１００倍、２００倍、５００倍または１０００倍以上低い。

本願明細書において使用されるとき、「Ｋ_ｄ」（通常「ｍｏｌ／Ｌ」において測定される、ときどき「Ｍ」として略される）なる用語は、化合物（例えばタンパク質リガンド）と標的分子間の特定の相互作用の解離平衡定数を指すことを意図される。

化合物の結合親和性を決定するための、すなわち解離定数Ｋ_ｄを決定するための方法は、当業者に知られており、例えば当分野で知られている以下の方法から選択することができる：表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）ベースの技術、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）、酵素免疫吸着法アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、フローサイトメトリー、等温滴定熱量計（ＩＴＣ）、分析超遠心分離、放射免疫測定法（ＲＩＡまたはＩＲＭＡ）および増強化学発光（ＥＣＬ）。典型的に、解離定数Ｋ_ｄは、２０℃、２５℃、３０℃、または３７℃で決定される。他に具体的に示されていないとき、本願明細書に記載されるＫ_ｄ値は、ＥＬＩＳＡによって２０℃で決定される。

抗原性決定因子としても知られている「エピトープ」は、免疫系により、具体的には抗体、Ｂ細胞、またはＴ細胞により認識される高分子の一部である。本願明細書において使用されるとき、「エピトープ」は、本願明細書に記載されている化合物（例えば抗体またはその抗原結合フラグメント）に結合することができる高分子の一部である。この文脈において、「結合」なる用語は、好ましくは特異的結合に関する。エピトープは、通常、分子、例えばアミノ酸または糖側鎖の化学的に活性な表面グループからなり、通常、特定の三次元構造的特性、ならびに特定の電荷特性を有する。立体および非立体構造エピトープは、後者ではなく前者への結合は変性溶媒の存在下で喪失されることにおいて区別することができる。

「パラトープ」は、エピトープに結合する抗体の一部である。本発明の文脈において、「パラトープ」は、エピトープに結合する本願明細書に記載されている化合物（例えばタンパク質リガンド）の一部である。

「抗体」なる用語は、一般的に、ジスルフィド結合によって相互連結された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質、またはその抗原結合部分を指す。「抗体」なる用語はまた、抗体の、特に本願明細書に記載されている抗体、例えば原核生物において発現される抗体、非グリコシル化抗体、真核生物（例えばＣＨＯ細胞）において発現される抗体、グリコシル化抗体、および以下に記載されるあらゆる抗原結合抗体フラグメントおよび誘導体の全ての組換え形態を含む。それぞれの重鎖は、重鎖可変領域（本願明細書においてＶＨまたはＶ_Ｈと省略される）および重鎖定常領域で構成される。それぞれの軽鎖は、軽鎖可変領域（本願明細書においてＶＬまたはＶ_Ｌと省略される）および軽鎖定常領域で構成される。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称されるより保存されている領域で散在される相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性の領域にさらに細分化することができる。それぞれのＶＨおよびＶＬは、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲで構成され、アミノ－末端からカルボキシ－末端に以下の順番において配置される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の最初の成分（Ｃ１ｑ）を含む宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。

本願明細書において使用されるとき、抗体の「抗原結合フラグメント」なる用語（または単に「結合部分」）は、抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上のフラグメントを指す。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体のフラグメントによって行うことができることが示されている。抗体の「抗原結合部分」なる用語内に包含される結合フラグメントの例は、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨドメインからなる一価のフラグメントであるＦａｂフラグメント；（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結される２つのＦａｂフラグメントを含む二価のフラグメントであるＦ（ａｂ’）_２フラグメント；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨドメインからなるＦｄフラグメント；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖフラグメント、（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂフラグメント（Ward et al., (1989) Nature 341: 544-546）；（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、および（ｖｉｉ）所望により合成リンカーによって連結されてもよい２つまたはそれ以上の単離されたＣＤＲの組合せを含む。さらに、Ｆｖフラグメントの２つのドメインであるＶＬおよびＶＨが別々の遺伝子によってコードされるが、それらは、組換え方法を使用して、ＶＬおよびＶＨ領域が対になって一価の分子を形成する単一のタンパク質鎖として作ることが可能である合成リンカーによって連結することができる（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる；例えば、Bird et al. (1988) Science 242: 423-426;およびHuston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 5879-5883参照）。かかる一本鎖抗体はまた、抗体の「抗原結合フラグメント」なる用語内に包含されることを意図される。さらなる例は、（ｉ）免疫グロブリンヒンジ領域ポリペプチドに融合される結合ドメインポリペプチド、（ｉｉ）ヒンジ領域に融合される免疫グロブリン重鎖ＣＨ２定常領域、および（ｉｉｉ）ＣＨ２定常領域に融合される免疫グロブリン重鎖ＣＨ３定常領域、を含む結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質である。結合ドメインポリペプチドは、重鎖可変領域または軽鎖可変領域であってよい。結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質は、ＵＳ ２００３／０１１８５９２およびＵＳ ２００３／０１３３９３９にさらに記載されている。これらの抗体フラグメントは、当業者に知られている慣用の技術を使用して得られ、フラグメントは、無傷な抗体と同じ様式において有用性についてスクリーニングされる。「抗原結合フラグメント」のさらなる例は、単一のＣＤＲに由来する、いわゆるマイクロ抗体である。例えば、Heap et al., 2005は、ＨＩＶ－１のｇｐ１２０エンベロープ糖タンパク質に対する抗体の重鎖ＣＤＲ３に由来する１７アミノ酸残基マイクロ抗体を記載している（Heap C.J. et al. (2005) Analysis of a 17-amino acid residue, virus-neutralizing microantibody. J. Gen. Virol. 86:1791-1800）。他の例は、好ましくはコグネイトフレームワーク領域によって、互いに融合される２つまたはそれ以上のＣＤＲ領域を含む小さい抗体模倣物を含む。コグネイトＶ_Ｈ ＦＲ２によって連結されるＶ_Ｈ ＣＤＲ１およびＶ_Ｌ ＣＤＲ３を含むかかる小さい抗体模倣物は、Qiu et al., 2007によって記載されている（Qiu X.-Q. et al. (2007) Small antibody mimetics comprising two complementary-determining regions and a framework region for tumor targeting. Nature biotechnology 25(8):921-929）。

したがって、本願明細書において使用されるとき、「抗体またはその抗原結合フラグメント」なる用語は、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち抗原に免疫特異的に結合する抗原結合部位を含む分子を指す。例えば、標的分子または標的エピトープに特異的に結合するファージディスプレイを含む、技術を介して選択される免疫グロブリン様タンパク質も包含される。本発明の免疫グロブリン分子は、免疫グロブリン分子のあらゆるタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、好ましくはＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂ、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはサブクラスであってよい。

本発明において使用可能な抗体およびその抗原結合フラグメントは、鳥および哺乳動物を含むあらゆる動物起源由来であってよい。好ましくは、抗体またはフラグメントは、ヒト、チンパンジー、齧歯動物（例えばマウス、ラット、モルモット、またはウサギ）、ニワトリ、シチメンチョウ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ラクダ、ウシ、ウマ、ロバ、ネコ、またはイヌ起源からのものである。抗体がヒトまたはマウス起源であることが特に好ましい。本発明における使用のための抗体はまた、１つの種、好ましくはヒトに由来する抗体定常領域が、別の種、例えばマウスに由来する抗原結合部位と組み合わせられているキメラ分子を含む。さらに、本発明の抗体は、非ヒト種に由来する（例えばマウスに由来する）抗体の抗原結合部位が、ヒト起源の定常およびフレームワーク領域と組み合わせられているヒト化分子を含む。

本願明細書に例示されるとき、本発明の抗体は、抗体を発現するハイブリドーマから直接的に得ることができるか、または宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞、またはリンパ球細胞）においてクローニングさせるおよび組換え的に発現させることができる。宿主細胞のさらなる例は、微生物、例えば大腸菌、および真菌、例えば酵母である。あるいは、それらは、トランスジェニック非ヒト動物または植物において組換え的に生産することができる。

「キメラ抗体」なる用語は、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列のそれぞれの１つの部分が特定の種に由来するかまたは特定のクラスに属する抗体において対応する配列と同種であるが、鎖の残りのセグメントが別の種またはクラスにおいて対応する配列と同種である抗体を指す。一般的には、軽鎖および重鎖の両方の可変領域は哺乳動物の１つの種に由来する抗体の可変領域を模倣するが、定常部分は別の種に由来する抗体の配列と同種である。かかるキメラ形態の１つの明確な利点は、例えばヒト細胞調製物に由来する定常領域と組み合わせて、非ヒト宿主生物からの容易に利用できるＢ細胞またはハイブリドーマを使用して、可変領域が現在知られている供給源に便利に由来することができることである。可変領域が調製の容易さの利点を有し、特異性が供給源によって影響されないが、ヒトである定常領域は、非ヒト供給源からの定常領域よりも、抗体が注射されるときヒト対象から免疫応答を引き起こす可能性が低い。しかしながら、定義は、この特定の例に限定されない。

「ヒト化抗体」なる用語は、非ヒト種からの免疫グロブリンに実質的に由来する抗原結合部位を有し、分子の残りの免疫グロブリン構造がヒト免疫グロブリンの構造および／または配列に基づく、分子を指す。抗原結合部位は、定常ドメイン上に融合される完全な可変ドメインまたは可変ドメインにおいて適当なフレームワーク領域上にグラフトされる相補性決定領域（ＣＤＲ）のみのいずれかを含んでよい。抗原結合部位は、野生型であってもよく、または１つ以上のアミノ酸置換によって修飾されてもよく、例えばより密接にヒト免疫グロブリンに似るように修飾されてもよい。ヒト化抗体のいくつかの形態は、全てのＣＤＲ配列（例えばマウス抗体からの全ての６つのＣＤＲを含むヒト化マウス抗体）を保存している。他の形態は、起源抗体に対して変化されている１つ以上のＣＤＲを有する。

抗体をヒト化するための種々の方法は、Almagro & Fransson, 2008, Frontiers in Bioscience, 13:1619-1633（その内容を出典明示によりその全体において本願明細書に包含させる）により説明されるとおり、当業者に知られている。Ａｌｍａｇｒｏ ＆ Ｆｒａｎｓｓｏｎによるレビュー記事は、国際特許出願ＷＯ ２０１１／０６３９８０ Ａ１の国内段階事項であるＵＳ ２０１２／０２３１００８ Ａ１において簡潔に要約される。ＵＳ ２０１２／０２３１００８ Ａ１およびＷＯ ２０１１／０６３９８０ Ａ１の内容を出典明示によりそれら全体において本願明細書に包含させる。

本願明細書において使用されるとき、「ヒト抗体」は、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する可変および定常領域を有する抗体を含む。本発明のヒト抗体は、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでランダムまたは部位特異的突然変異誘発またはインビボで体細胞突然変異によって導入される突然変異）を含んでよい。本発明のヒト抗体は、例えばＫｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ ＆ Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓによる米国特許第５，９３９，５９８号に記載されているように、ヒト免疫グロブリンライブラリーまたは１つ以上のヒト免疫グロブリンに対してトランスジェニック動物から単離され、内因性免疫グロブリンを発現しない、抗体を含む。

本願明細書において使用される「モノクローナル抗体」なる用語は、単一の分子組成物の抗体分子の調製物を指す。モノクローナル抗体は、特定のエピトープに対する単一の結合特異性および親和性を示す。１つの態様において、モノクローナル抗体は、不死化細胞に融合された非ヒト動物、例えばマウスから得られるＢ細胞を含むハイブリドーマにより生産される。

本願明細書において使用されるとき、「組換え抗体」なる用語は、組換え手段によって調製、発現、作成または単離される全ての抗体、例えば、（ａ）免疫グロブリン遺伝子に対してトランスジェニックまたはトランス染色体である動物（例えば、マウス）またはそこから調製されるハイブリドーマから単離される抗体、（ｂ）例えばトランスフェクトーマから、抗体を発現するように形質転換された宿主細胞から単離される抗体、（ｃ）組み換えコンビナトリアル抗体ライブラリーから単離される抗体、および（ｄ）免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを含む他の手段によって調製、発現、作成または単離される抗体を含む。

本願明細書において使用されるとき、「トランスフェクトーマ」なる用語は、抗体を発現する組換え真核宿主細胞、例えばＣＨＯ細胞、ＮＳ／０細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞、植物細胞、または酵母細胞を含む真菌を含む。

本願明細書において使用されるとき、「異種抗体」は、かかる抗体を生産するトランスジェニック生物に関して定義される。この用語は、トランスジェニック生物からならない生物体において見いだされたものに対応し、一般的にトランスジェニック生物以外の種に由来するアミノ酸配列を有する抗体またはコードする核酸配列を指す。

本願明細書において使用されるとき、「ヘテロハイブリッド抗体」は、異なる生物起源の軽鎖および重鎖を有する抗体を指す。例えば、マウス軽鎖を伴うヒト重鎖を有する抗体は、ヘテロハイブリッド抗体である。

したがって、本発明における使用のための適当な「抗体およびその抗原結合フラグメント」は、限定はしないが、ポリクローナル、モノクローナル、一価、二重特異性、ヘテロコンジュゲート、多特異的、組換え、異種、ヘテロハイブリッド、キメラ、ヒト化（特にＣＤＲグラフト化）、脱免疫化、またはヒト抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）_２フラグメント、Ｆａｂ発現ライブラリーによって生産されるフラグメント、Ｆｄ、Ｆｖ、ジスルフィド連結Ｆｖ（ｄｓＦｖ）、一本鎖抗体（例えばｓｃＦｖ）、ダイアボディまたはテトラボディ（Holliger P. et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90(14), 6444-6448）、ナノボディ（単一ドメイン抗体としても知られている）、抗－イディオタイプ（抗－Ｉｄ）抗体（例えば、本願明細書に記載されている抗体に対する抗－Ｉｄ抗体を含む）、および上記のいずれかのエピトープ結合フラグメントを含む。

本願明細書に記載されている抗体は、好ましくは、単離されている。本願明細書において使用される「単離された抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない（例えば、Ｃ５ａに特異的に結合する単離された抗体は、Ｃ５ａ以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）抗体を指すことを意図する。しかしながら、ヒトＣ５ａのエピトープ、アイソフォームまたは変異体に特異的に結合する単離された抗体は、他の関連抗原、例えば他の種からの抗原（例えばＣ５ａ種ホモログ、例えばラットＣ５ａ）に対して交差反応性を有してもよい。さらに、単離された抗体は、他の細胞物質および／または化学物質を実質的に含まなくてもよい。本発明の１つの態様において、「単離された」モノクローナル抗体の組合せは、異なる特異性を有し、明確な組成物において組み合わせられている抗体に関する。

物体に適用されるとき、本願明細書において使用されるとき、「天然」なる用語は、物体が自然界で見つけることができるという事実を指す。例えば、自然界で供給源から単離することができる生物体（ウイルスを含む）において存在する、および研究室においてヒトによって意図的に修飾されていない、ポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列は、天然である。

本願明細書において使用されるとき、「核酸アプタマー」なる用語は、標的分子に結合するように、インビトロ選択またはＳＥＬＥＸ（指数関数的増加によるリガンドの系統的展開）の繰り返し処理を介して操作されている核酸分子を指す（説明のために、参照：Brody E.N. and Gold L. (2000), Aptamers as therapeutic and diagnostic agents. J. Biotechnol. 74(1):5-13）。核酸アプタマーは、ＤＮＡまたはＲＮＡ分子であってよい。アプタマーは、修飾、例えば修飾ヌクレオチド、例えば２’－フッ素－置換ピリミジンを含んでよく、および／または標準Ｄ－リボース単位（またはＤ－デオキシリボース単位）の代わりにＬ－リボース単位（またはＬ－デオキシリボース）を有する１つ以上のヌクレオチドを含んでよい。

本願明細書において使用されるとき、「抗体様タンパク質」なる用語は、標的分子に特異的に結合するように、（例えばループの突然変異誘発により）操作されているタンパク質を指す。一般的に、かかる抗体様タンパク質は、タンパク質スカフォールドに両末端で付着された少なくとも１つの可変ペプチドループを含む。この二重構造の制限は、抗体に匹敵するレベルに抗体様タンパク質の結合親和性を顕著に増加させる。可変ペプチドループの長さは、一般的に、１０から２０アミノ酸からなる。スカフォールドタンパク質は、良い溶解度特性を有するあらゆるタンパク質であってよい。好ましくは、スカフォールドタンパク質は、小さい球状のタンパク質である。抗体様タンパク質は、限定されないが、アフィボディ、アフィリン、アフィマー、アフィチン、アルファボディ、アンチカリン、アビマー、ＤＡＲＰｉｎｓ（設計されたアンキリン反復タンパク質）、ファイノマー、クニッツドメインペプチド、およびモノボディを含む（説明のために、参照：Binz H.K. et al. (2005) Engineering novel binding proteins from nonimmunoglobulin domains. Nat. Biotechnol. 23(10):1257-1268）。抗体様タンパク質は、突然変異体の大型ライブラリーから得ることができ、例えば大型ファージディスプレイライブラリーからパニングすることができ、および、通常の抗体と同様に単離することができる。また、抗体様結合タンパク質は、球状のタンパク質における表面に暴露された残基のコンビナトリアル突然変異誘発により得ることができる。抗体様タンパク質は、ときどき、「ペプチドアプタマー」または「抗体模倣物」として称される。

本願明細書において使用されるとき、「ペプチド模倣物」は、ペプチドを模倣するように設計された小さいタンパク質様鎖である。ペプチド模倣物は、一般的に、分子の特性を変更するために既存のペプチドの修飾から生じる。例えば、それらは、分子の安定性または生物学的活性を変化させるように修飾から生じ得る。これは、既存のペプチドからの薬物様化合物の開発において役割を有することができる。これらの修飾は、天然に起こらないペプチドへの変化を含む（例えば変更された骨格および非天然アミノ酸の取り込み）。

本発明の文脈において、「小分子」なる用語は、２ｋＤａ以下の分子量、好ましくは１ｋＤａ以下の分子量を有する分子を指す。「小分子」なる用語は、特に、オリゴペプチドでもオリゴヌクレオチドでもない分子を指す。

本発明の文脈において、（例えば、「該抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｃ５ａへの結合について（ａ）の下に示される抗体の１つと競合する」なる表現において）、「Ａは、Ｃへの結合についてＢと競合する」なる一般的な表現は、位置Ａに列挙された化合物の結合特性を定義するために使用される。該化合物ＡはＣに結合し、化合物ＢもまたＣに結合するが、化合物Ａおよび化合物Ｂは同時にＣに結合することができない；すなわち、ＡおよびＢはＣ上の同じエピトープに（または少なくとも重複エピトープに）結合する。結合においてかかる競合は、競合ＥＬＩＳＡまたは表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）ベースの技術または結合親和性の決定の文脈において上記他の技術のいずれかによって決定することができる。他に明記しない限り、化合物の競合結合特性は、２つの競合する化合物の等モル濃度を使用して２０℃でＥＬＩＳＡによって決定される。

ＩＦＸ－１（代替名：ＣａＣＰ２９； ＩｎｆｌａＲｘ ＧｍｂＨ、Ｇｅｒｍａｎｙ）は、Ｃ５ａに特異的に結合する抗体である。ＩＦＸ－１のＣＤＲ配列およびＦＲ配列は、ＷＯ ２０１５／１４０３０４ Ａ１（表３）に記載されており、この内容をその全体において出典明示により本願明細書に包含させる。それは、配列番号：３４による可変重鎖配列および配列番号：３５９による可変軽鎖配列を含む。

ＩＮａｂ７０８（ＩｎｆｌａＲｘ ＧｍｂＨ、Ｇｅｒｍａｎｙ）は、Ｃ５ａに特異的に結合する別の抗体である。ＩＮａｂ７０８のＣＤＲ配列およびＦＲ配列はまた、ＷＯ ２０１５／１４０３０４ Ａ１（表３）に記載されており、この内容をその全体において出典明示により包含させる。それは、配列番号：３６による可変重鎖配列および配列番号：３７による可変軽鎖配列を含む。

ＭＥＤＩ－７８１４（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）は、組換えヒト化抗－Ｃ５ａ抗体である。ＭＥＤＩ７８１４との複合体におけるヒトＣ５ａの結晶構造は、４ＵＵ９の下にＲＣＳＢ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄａｔａ Ｂａｎｋ(DOI: 10.2210/pdb4uu9/pdb)で利用できる。

ＡＬＸＮ－１００７（Ａｌｅｘｉｏｎ）は、ヒト化抗－Ｃ５ａ抗体である。

ＮＯＸ－Ｄ２１（Ｎｏｘｘｏｎ）は、配列４０ｋＤａＰＥＧ－アミノヘキシル－ＧＣＧ ＡＵＧ （ｄＵ）ＧＧ ＵＧＧ ＵＧＡ ＡＧＧ ＧＵＵ ＧＵＵ ＧＧＧ （ｄＵ）ＧＵ ＣＧＡ ＣＧＣ Ａ（ｄＣ）Ｇ Ｃ（配列番号：３４）を有するペグ化混合Ｌ－ＲＮＡ／ＤＮＡ－アプタマー（Ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒ ^ＴＭ）である。ＮＯＸ－Ｄ２１は、Ｃ５ａを標的とする（Hyzewicz J, Tanihata J, Kuraoka M, Nitahara-Kasahara Y, Beylier T, Ruegg UT, Vater A, and Takeda S. 2017. Low-Intensity Training and the C5a Complement Antagonist NOX-D21 Rescue the mdx Phenotype through Modulation of Inflammation. Am. J. Pathol., 187(5):1147-1161;印刷物の前に電子的に発行された: March 18, 2017）。

エクリズマブ（代替名：Ｓｏｌｉｒｉｓ ^ＴＭ、５Ｇ１－１； ｈ５Ｇ１．１； Ａｌｅｘｉｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）は、マウス骨髄腫細胞培養によって生産され、標準バイオプロセス技術によって精製される組換えヒト化モノクローナルＩｇＧ２／４κ抗体である。エクリズマブは、ヒトＣ５に特異的に結合する。エクリズマブは、ヒトＩｇＧ２配列およびヒトＩｇＧ４配列からのヒト定常領域およびヒトフレームワーク軽鎖および重鎖可変領域上にグラフトされたマウス相補性決定領域を含む。エクリズマブは、２つの４４８アミノ酸重鎖および２つの２１４アミノ酸軽鎖から構成され、約１４８ｋＤａの分子量を有する。エクリズマブの重鎖および軽鎖は、例えばＷＯ ２０１６／０６１０６６ Ａ１においてそれぞれ配列番号：１および配列番号：３４として、記載されている。エクリズマブの重鎖および軽鎖をコードする核酸は、例えば米国特許第６，３５５，２４５号において、記載されている。

ＡＬＸＮ１２１０（代替名：ＢＮＪ４４１； Ａｌｅｘｉｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）は、抗－Ｃ５抗体である。ＡＬＸＮ１２１０の重鎖および軽鎖は、ＷＯ ２０１６／２０９９５６ Ａ１においてそれぞれ配列番号：１４および１１として記載されている。

ＡＬＸＮ５５００（Ａｌｅｘｉｏｎ）は、ヒト化抗－Ｃ５抗体である。それは、次世代のエクリズマブ候補物である。

ＬＦＧ３１６（代替名：Ｔｅｓｉｄｏｌｕｍａｂ、ＮＯＶ－４； Ｍｏｒｐｈｏｓｙｓ、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）は、抗－Ｃ５抗体である。

Ｃｏｖｅｒｓｉｎ^ＴＭ（代替名：ＥＶ ５７６； ＰＡＳ－ｃｏｖｅｒｓｉｎ； ｒＥＶ ５７６； Ｔｉｓｓｕｅ ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｃｏｖｅｒｓｉｎ^ＴＭ － Ａｋａｒｉ； Ａｋａｒｉ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、Ｅｖｏｌｕｔｅｃ）は、宿主免疫学的応答を引き起こすことなく寄生生物の給餌を手助けする、Ｏｒｎｉｔｈｏｄｒｏｓ ｍｏｕｂａｔａダニからの唾液分子に由来する組換えタンパク質分子（１６．７ｋＤａ）である。ＥＶ５７６タンパク質（すなわちＣｏｖｅｒｓｉｎ）のアミノ酸配列ならびにそのコードヌクレオチド配列は、ＷＯ ２００８／０２９１６７の図２に示されている。Ｃｏｖｅｒｓｉｎ^ＴＭは、Ｃ５に結合する。

ＲＡ１０１４９５（Ｒａ Ｐｈａｒｍａ）は、Ｃ５の大環状合成ペプチドインヒビターである（Ricardo A, Arata M, DeMarco S, Dhamnaskar K, Hammer R, Fridkis-Hareli M, Rajagopal V, Seyb K, Tang G-Q, Tobe S and Treco D. 2015. Preclinical Evaluation of RA101495, a Potent Cyclic Peptide Inhibitor of C5 for the Treatment of Paroxysmal Nocturnal Hemoglobinuria. Blood 126:939）。

Ｚｉｍｕｒａ（登録商標）（代替名：抗－Ｃ５アプタマー； ＡＲＣ－１８７； ＡＲＣ－１９０５； Ａｖａｃｉｎｃａｐｔａｄ ｐｅｇｏｌ ｓｏｄｉｕｍ； ＯｐｈｔｈｏＴｅｃｈ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ａｒｃｈｅｍｉｘ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）は、補体因子Ｃ５を阻害するペグ化ＲＮＡアプタマーである。ＡＲＣ１９０５（すなわちＺｉｍｕｒａ）のヌクレオチド配列は、例えばＷＯ ２００５／０７９３６３ Ａ２において配列番号：６７として、示されており、その構造は、ＷＯ ２００５／０７９３６３ Ａ２の図２２において示されている。

ＡＭＹ－２０１（Ａｍｙｎｄａｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）は、調節および表面認識ドメインに直接的に連結するＨ因子の操作された形態である；したがって、それは、ミニＦＨ分子の一種である。

Ｍｉｒｏｃｏｃｅｐｔ（代替名：ＡＰＴ０７０およびＡＰＴ ０７０Ｃ；発案者：Ａｄｐｒｏｔｅｃｈ；開発者：Ｉｎｆｌａｚｙｍｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）は、組換え細菌において製造され、天然膜結合ミリストイル静電スイッチペプチドに基づく膜標的両親媒性ペプチドで修飾される、ヒト補体受容体１の最初の３つの短いコンセンサスドメインからなる（Souza DG, Esser D, Bradford R, Vieira AT, and Teixeira MM. 2005. APT070 (Mirococept), a membrane-localised complement inhibitor, inhibits inflammatory responses that follow intestinal ischaemia and reperfusion injury. Br J Pharmacol 145(8):1027-1034）。

ＢｉｋａｃｉｏＭａｂ（Ｎｏｖｅｌｍｅｄ）は、ＮＭ００１と称される抗－Ｂｂ因子抗体のＦ（ａｂ）_２フラグメントである。抗体ＮＭ００１は、ＡＴＣＣ受入番号ＰＴＡ－８５４３の下に寄託されたハイブリドーマ細胞系１Ｄ３によって生産される。

Ｌａｍｐａｌｉｚｕｍａｂ（代替名：抗－Ｄ因子Ｆａｂ； ＦＣＦＤ４５１４Ｓ； ＲＧ７４１７； ＴＮＸ－２３４；発案者：Ｔａｎｏｘ、開発者：Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）は、Ｄ因子上のエキソサイトへの結合を介して、Ｄ因子および代替補体経路を阻害するヒト化抗－Ｄ因子Ｆａｂフラグメントである。

ＡＬＮ－ＣＣ５（Ａｌｎｙｌａｍ）は、ヒト、霊長類および齧歯動物Ｃ５を標的とするＲＮＡｉ治療物である。Ｃ５遺伝子を標的とする例示的なｉＲＮＡ組成物は、ＷＯ ２０１６／０４４４１９に記載されている。

Ａｖａｃｏｐａｎ（名前ＣＣＸ１６８； Ｃｈｅｍｏｃｅｎｔｒｙｘによっても知られる）は、式Ｉ：
による構造を有する小分子（ＭＷ＝５８１．６６ｇ／ｍｏｌ）である。

ａｖａｃｏｐａｎのＩＵＰＡＣ／化学名は、（２Ｒ，３Ｓ）－２－［４－（シクロペンチルアミノ）フェニル］－１－（２－フルオロ－６－メチルベンゾイル）－Ｎ－［４－メチル－３－（トリフルオロメチル）フェニル］ピペリジン－３－カルボキサミドである。Ａｖａｃｏｐａｎは、Ｃ５ａＲの選択的インヒビターである。本発明の文脈において、「ａｖａｃｏｐａｎ」なる用語は、式Ｉによる化合物ならびにその生理学的に許容される塩を指す。

本発明を実施するために適当でもあるＡｖａｃｏｐａｎと類似の化合物は、国際特許出願ＷＯ ２０１０／０７５２５７ Ａ１およびＷＯ ２０１１／１６３６４０ Ａ１に記載されており、これらの内容をそれら全体において出典明示により本願明細書に包含させる。したがって、いくつかの態様において、Ｃ５ａ活性のインヒビターは、式ＩＩ
［式中、
Ｃ^１は、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され、ヘテロアリール基は、Ｎ、ＯおよびＳから選択される環員として１－３つのヘテロ原子を有し；該アリールおよびヘテロアリール基は、所望により１から３つのＲ^１置換基で置換されており；
Ｃ^２は、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され、ヘテロアリール基は、Ｎ、ＯおよびＳから選択される環員として１－３つのヘテロ原子を有し；該アリールおよびヘテロアリール基は、所望により１から３つのＲ^２置換基で置換されており；
Ｃ^３は、Ｃ_１－８アルキルまたはヘテロアルキル、Ｃ_３－８シクロアルキル、Ｃ_３－８シクロアルキル－Ｃ_１－４アルキル、アリール、アリール－Ｃ_１－４アルキル、ヘテロアリール、ヘテロアリール－Ｃ_１－４アルキル、ヘテロシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキル－Ｃ_１－４アルキルからなる群から選択され、ヘテロシクロアルキル基または部分は、Ｎ、ＯおよびＳから選択される１－３つのヘテロ原子を有し、ヘテロアリール基は、Ｎ、ＯおよびＳから選択される環員として１－３つのヘテロ原子を有し、それぞれのＣ^３は、所望により１－３つのＲ^３置換基で置換されており；
それぞれのＲ^１は、独立して、ハロゲン、－ＣＮ、－Ｒ^ｃ、－ＣＯ_２Ｒ^ａ、－ＣＯＮＲ^ａＲ^ｂ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ^ａ、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ^ａＲ^ｂ、－ＮＲ^ｂＣ（Ｏ）Ｒ^ａ、－ＮＲ^ｂＣ（Ｏ）２Ｒ^ｃ、－ＮＲ^ａ－Ｃ（Ｏ）ＮＲ^ａＲ^ｂ、－ＮＲ^ａＣ（Ｏ）ＮＲ^ａＲ^ｂ、－ＮＲ^ａＲ^ｂ、－ＯＲ^ａ、および－Ｓ（Ｏ）_２ＮＲ^ａＲ^ｂからなる群から選択され；それぞれのＲ^ａおよびＲ^ｂは、独立して、水素、Ｃ_１－８アルキル、およびＣ_１－８ハロアルキルから選択され、または同じ窒素原子に結合されるとき、Ｎ、ＯまたはＳから選択される環員として０から２つのさらなるヘテロ原子を有する５または６－員環を形成するように窒素原子と結合されてよく、所望により１または２つのオキソで置換されており；それぞれのＲ^ｃは、独立して、Ｃ_１－８アルキルまたはヘテロアルキル、Ｃ_１－８ハロアルキル、Ｃ_３－６シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され、Ｒ^ａ、Ｒ^ｂおよびＲ^ｃの脂肪族および環状部分は、所望により１から３つのハロゲン、ヒドロキシ、メチル、アミノ、アルキルアミノおよびジアルキルアミノ基でさらに置換されており；所望により２つのＲ^１置換基が隣接する原子であるとき、融合５または６－員炭素環式またはヘテロ環式環を形成するように結合され；
それぞれのＲ^２は、独立して、ハロゲン、－ＣＮ、－ＮＯ_２、－Ｒ^ｆ、－ＣＯ_２Ｒ^ｄ、－ＣＯＮＲ^ｄＲ^ｅ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ^ｄ、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ^ｄＲ^ｅ、－ＮＲ^ｅＣ（Ｏ）Ｒ^ｄ、－ＮＲ^ｅＣ（Ｏ）_２Ｒ^ｆ、－ＮＲ^ｄＣ（Ｏ）ＮＲ^ｄＲ^ｅ、－ＮＲ^ｄＣ（Ｏ）ＮＲ^ｄＲ^ｅ、－ＮＲ^ｄＲ^ｅ、－ＯＲ^ｄ、および－Ｓ（Ｏ）_２ＮＲ^ｄＲ^ｅからなる群から選択され；それぞれのＲ^ｄおよびＲ^ｅは、独立して、水素、Ｃ_１－８アルキル、およびＣ_１－８ハロアルキルから選択され、または同じ窒素原子に結合されるとき、Ｎ、ＯまたはＳから選択される環員として０から２つのさらなるヘテロ原子を有する５または６－員環を形成するように窒素原子と結合されてよく、所望により１または２つのオキソで置換されており；それぞれのＲは、独立して、Ｃ_１－８アルキルまたはヘテロアルキル、Ｃ_１－８ハロアルキル、Ｃ_３－６シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され、Ｒ^ｄ、Ｒ^ｅおよびＲ^ｆの脂肪族および環状部分は、所望により１から３つのハロゲン、ヒドロキシ、メチル、アミノ、アルキルアミノおよびジアルキルアミノ基でさらに置換されており、所望により２つのＲ^２基が隣接する原子であるとき、５または６－員環を形成するように結合され；
それぞれのＲ^３は、独立して、ハロゲン、－ＣＮ、－Ｒ^ｉ、－ＣＯ_２Ｒ^ｇ、－ＣＯＮＲ^ｇＲ^ｈ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ^ｇ、－Ｃ（Ｏ）Ｒ^ｉ、－ＯＣ（Ｏ）ＮＲ^ｇＲ^ｈ、－ＮＲ^ｈＣ（Ｏ）Ｒ^ｇ、－ＮＲ^ｈＣＯ_２Ｒ^ｉ、－ＮＲ^ｇＣ（Ｏ）ＮＲ^ｇＲ^ｈ、－ＮＲ^ｇＲ^ｈ、－ＯＲ^ｇ、－ＯＲ^ｊ、－Ｓ（Ｏ）_２ＮＲ^ｇＲ^ｈ、－Ｘ^４－Ｒ^ｊ、－ＮＨ－Ｘ^４－Ｒ^ｊ、－Ｏ－Ｘ^４－Ｒ^ｊ、－Ｘ^４－ＮＲ^ｇＲ^ｈ、－Ｘ^４－ＮＨＲ^ｊ、－Ｘ^４－ＣＯＮＲ^ｇＲ^ｈ、－Ｘ^４－ＮＲ^ｈＣ（Ｏ）Ｒ^ｇ、－Ｘ^４－ＣＯ_２Ｒ^ｇ、－Ｏ－Ｘ^４－ＣＯ_２Ｒ^ｇ、－ＮＨ－Ｘ^４－ＣＯ_２Ｒ^ｇ、－Ｘ^４－ＮＲ^ｈＣＯ_２Ｒ^ｉ、－Ｏ－Ｘ^４－ＮＲ^ｈＣＯ_２Ｒ^ｉ、－ＮＨＲ^ｊおよび－ＮＨＣＨ_２Ｒ^ｊからなる群から選択され、Ｘ^４はＣ_１－４アルキレンであり；それぞれのＲ^ｇおよびＲ^ｈは、独立して、水素、Ｃ_１－８アルキルまたはヘテロアルキル、Ｃ_３－６シクロアルキルおよびＣ_１－８ハロアルキルから選択され、または同じ窒素原子に結合されるとき、Ｎ、ＯまたはＳから選択される環員として０から２つのさらなるヘテロ原子を有する４－、５－または６－員環を形成するように窒素原子と結合されてよく、所望により１または２つのオキソで置換されており；それぞれのＲ^ｉは、独立して、Ｃ_１－８アルキルまたはヘテロアルキル、Ｃ_１－８ハロアルキル、Ｃ_３－６シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリールからなる群から選択され；それぞれのＲ^ｊは、Ｃ_３－６シクロアルキル、イミダゾリル、ピリミジニル、ピロリニル、ピペリジニル、モルホリニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、およびＳ，Ｓ－ジオキソ－テトラヒドロチオピラニルからなる群から選択され、Ｒ^ｇ、Ｒ^ｈ、Ｒ^ｉおよびＲ^ｊの脂肪族および環状部分は、所望により１から３つのハロゲン、メチル、ＣＦ_３、ヒドロキシ、Ｃ_１－４アルコキシ、Ｃ_１－４アルコキシ－Ｃ_１－４アルキル、－Ｃ（Ｏ）Ｏ－Ｃ_１－８アルキル、アミノ、アルキルアミノおよびジアルキルアミノ基でさらに置換されており、所望により２つのＲ^３基が隣接する原子であるとき、５－または６－員環を形成するように結合され；そして
Ｘは、水素またはＣＨ_３である］
を有する化合物およびその薬学的に許容される塩、水和物および回転異性体(rotomer)である。

Ａｖａｃｏｐａｎと類似の化合物は、改善された溶解度プロフィールを有するが、ＷＯ ２０１７／１７６６２０ Ａ２に記載されており、これらの内容をその全体において出典明示により本願明細書に包含させる。したがって、いくつかの他の態様において、Ｃ５ａ活性のインヒビターは、以下の式ＩＩＩ：
［式中、
Ｒ^１は、Ｈ、－Ｏ－ＣＨ_２－Ｏ－Ｐ（Ｏ）ＯＲ^ａＯＲ^ｂ、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_１－６アルキレン－Ｌ^２－Ｘ^１、Ｏ－Ｐ（Ｏ）ＯＲ^ａＯＲ^ｂ、および－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ａ^１－（Ｃ_１－３アルキレン）_ｎ－Ｃ_４－７ヘテロシクリルからなる群から選択され、Ｃ_４－７ヘテロシクリルは、所望により１から６つのＲ^ｃ基で置換されており；
Ａ^１は、Ｃ_６－１０アリール、Ｃ_３－１０シクロアルキル、Ｃ_５－１０ヘテロアリールおよびＣ_５－１０ヘテロシクリルからなる群から選択され、これらのそれぞれは、所望により同じか、または異なっていてよい１から５つのＲ^ｘで置換されており；
ｎ＝０または１；
Ｌ^２は、独立して、結合、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_１－６アルキレン－、および－ＮＲ^ｄ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_１－６アルキレン－からなる群から選択され；
Ｘ^１は、独立して、－ＮＲ^ｅＲ^ｆ、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ^ａＯＲ^ｂ、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）ＯＲ^ａＯＲ^ｂ、および－ＣＯ_２Ｈからなる群から選択され；
Ｒ^２は、Ｈ、－Ｌ^３－Ｃ_１－６アルキレン－Ｌ^４－Ｘ^２、－Ｌ^３－（Ｃ_１－６アルキレン）_ｍ－Ａ^２－Ｘ^２、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ^ａＯＣ（Ｏ）－Ｃ_１－６アルキル、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ^ａＮＲ^ｇＲ^ｈおよび－Ｐ（Ｏ）ＯＲ^ａＯＲ^ｂからなる群から選択され；
Ｌ^３は、独立して、－Ｃ（Ｏ）－Ｏ－、および－Ｃ（Ｏ）－からなる群から選択され；
Ｌ^４は、独立して、結合、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_２－６アルケニレン－、－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_１－６アルキレン－、および－ＮＲ^ｄ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_１－６アルキレン－からなる群から選択され、－ＮＲ^ｄ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_１－６アルキレン－および－Ｏ－Ｃ（Ｏ）－Ｃ_１－６アルキレン－におけるＣ_１－６アルキレンは、所望によりＮＲ^ｅＲ^ｆで置換されており；
Ｘ^２は、独立して、－ＮＲ^ｋＲ^ｌ、－Ｐ（Ｏ）ＯＲ^ａＯＲ^ｂ、－Ｏ－Ｐ（Ｏ）ＯＲ^ａＯＲ^ｂ、および－ＣＯ_２Ｈからなる群から選択され；
ｍ＝０または１；
Ａ^２は、Ｃ_６－１０アリール、Ｃ_３－１０シクロアルキル、Ｃ_５－１０ヘテロアリールおよびＣ_５－１０ヘテロシクリルからなる群から選択され、これらのそれぞれは、所望により同じか、または異なっていてよい１から５つのＲ^ｘで置換されており；
Ｒ^３は、Ｈまたは－Ｌ^５－Ｐ（Ｏ）ＯＲ^ａＯＲ^ｂであり、Ｌ^５は、独立して、結合および－ＣＨ_２－Ｏ－からなる群から選択され；
それぞれのＲ^ｘは、独立して、ハロゲン、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_１－６ヘテロアルキル、ＣＮ、ＮＲ^ｙＲ^ｚ、ＳＲ^ｙおよびＯＲ^ｙからなる群から選択され；
それぞれのＲ^ｃは、独立して、ハロゲン、Ｃ_１－６アルキル、Ｃ_１－６ハロアルキル、Ｃ_１－６ヘテロアルキル、ＣＮ、ＮＲ^ｙＲ^ｚ、ＳＲ^ｙおよびＯＲ^ｙからなる群から選択され；
それぞれのＲ^ａ、Ｒ^ｂ、Ｒ^ｄ、Ｒ^ｅ、Ｒ^ｆ、Ｒ^ｇ、Ｒ^ｋ、Ｒ^ｌ、Ｒ^ｙおよびＲ^ｚは、独立して、ＨおよびＣ_１－６アルキルからなる群から選択され；
それぞれのＲ^ｈは、独立して、ＨおよびＣ_１－６アルキルからなる群から選択され、Ｃ_１－６アルキルは、所望により、独立してＣＯ_２Ｈ、ＮＲ^ｉＲ^ｊ、Ｃ_６－１０アリール、Ｃ_３－１０シクロアルキル、Ｃ_５－１０ヘテロアリールおよびＣ_５－１０ヘテロシクリルから選択される１から５つの置換基で置換されており、それぞれのＲ^ｉおよびＲ^ｊは、独立して、ＨまたはＣ_１－６アルキルであり；
Ｒ^１、Ｒ^２およびＲ^３の２つはＨであり、そしてＲ^１、Ｒ^２およびＲ^３の１つはＨ以外である］
の化合物またはその薬学的に許容される塩である。

ＰＭＸ－５３は、Ｃ５ａＲ（ＣＤ８８）の強力なアンタゴニストである。それは、以下の配列：Ｏｒｎ－２およびＡｒｇ－６間でラクタム橋を有するＡｃ－Ｐｈｅ－環化（Ｏｒｎ－Ｐｒｏ－Ｄ－Ｃｈａ－Ｔｒｐ－Ａｒｇ）を有する、６つのアミノ酸から構成される環状ペプチドである。ＰＭＸ－５３が少なくとも１つのＤ－アミノ酸（すなわちＤ－Ｃｈａ）を含むため、それは、本願の包含される配列表に含まれていない。ＰＭＸ－５３は、bio-techne GmbH (Wiesbaden-Nordenstadt, Germany), Cat. No. 5473によって市販されている。

本発明を実施するために適当でもあるＰＭＸ－５３と類似の化合物は、国際特許出願ＷＯ ９９／００４０６ Ａ１、ＷＯ ０３／０３３５２８ Ａ１、およびＷＯ ２００８／００９０６２ Ａ１に記載されており、これらをそれら全体において出典明示により本願明細書に包含させる。したがって、いくつかの態様において、Ｃ５ａ活性のインヒビターは、式ＩＶ
［式中、
Ａは、Ｈ、アルキル、アリール、ＮＨ_２、ＮＨ－アルキル、Ｎ（アルキル）_２、ＮＨ－アリール、ＮＨ－アシル、ＮＨ－ベンゾイル、ＮＨＳＯ_３、ＮＨＳＯ_２－アルキル、ＮＨＳＯ_２－アリール、ＯＨ、Ｏ－アルキル、またはＯ－アリールであり；
Ｂは、アルキル、アリール、フェニル、ベンジル、ナフチルまたはインドール基、またはＤ－またはＬ－アミノ酸の側鎖であるが、グリシン、Ｄ－フェニルアラニン、Ｌ－ホモフェニルアラニン、Ｌ－トリプトファン、Ｌ－ホモトリプトファン、Ｌ－チロシン、またはＬ－ホモチロシンの側鎖ではなく；
Ｃは、Ｄ－、Ｌ－またはホモ－アミノ酸の側鎖であるが、イソロイシン、フェニルアラニン、またはシクロヘキシルアラニンの側鎖ではなく；
Ｄは、中性Ｄ－アミノ酸の側鎖であるが、グリシンまたはＤ－アラニンの側鎖、大きな平面的(bulky planar)側鎖、または大きな荷電性(bulky charged)側鎖ではなく；
Ｅは、大きな(bulky)置換基であるが、Ｄ－トリプトファン、Ｌ－Ｎ－メチルトリプトファン、Ｌ－ホモフェニルアラニン、Ｌ－２－ナフチル Ｌ－テトラヒドロイソキノリン、Ｌ－シクロヘキシルアラニン、Ｄ－ロイシン、Ｌ－フルオレニルアラニン、またはＬ－ヒスチジンの側鎖ではなく；
Ｆは、Ｌ－アルギニン、Ｌ－ホモアルギニン、Ｌ－シトルリン、またはＬ－カナバニンの側鎖、またはその生物学的等価体(bioisostere)であり；そして
Ｘ^１は、－（ＣＨ_２）_ｎＮＨ－または（ＣＨ_２）_ｎＳ－（ここでｎは１から４の整数である）；－（ＣＨ_２）_２Ｏ－；－（ＣＨ_２）_３Ｏ；－（ＣＨ_２）_３－；－（ＣＨ_２）_４－、－ＣＨ_２－ＣＯＣＨＲＮＨ－：または－ＣＨ_２－ＣＨＣＯＣＨＲＮＨ－（ここでＲは任意の一般的なまたは非一般的なアミノ酸の側鎖である）である］
の環状ペプチドまたはペプチド模倣物化合物である。

この文脈において、「一般的なアミノ酸」なる用語は、標準遺伝子コードにより定義される２０のタンパク質構成アミノ酸を指す。「非一般的なアミノ酸」なる用語は、限定はしないが、Ｄ－アミノ酸、ホモ－アミノ酸、Ｎ－アルキルアミノ酸、デヒドロアミノ酸、フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファン以外の芳香族性アミノ酸、オルト－、メタ－またはパラ－アミノ安息香酸、オルニチン、シトルリン、カナバニン、ノルロイシン、δ－グルタミン酸、アミノ酪酸、Ｌ－フルオレニルアラニン、Ｌ－３－ベンゾチエニルアラニン、およびα，α－二置換アミノ酸を含む。

本発明を実施するために適当なＣ５ａＲ（ＣＤ８８）の特定のアンタゴニストは、ＷＯ ２００８／００９０６２ Ａ１に記載されている、ＰＭＸ９５、ＰＭＸ２１８、ＰＭＸ２００、ＰＭＸ２７３、ＰＭＸ２０５、およびＰＭＸ２０１を含む。

クローン(clone)Ｓ５／１は、Ｃ５ａに対するヒト受容体（ＣＤ８８）を認識するモノクローナル抗体である。クローンＳ５／１は、Ｃ５ａＲのＮ－末端ドメイン（Ｍｅｔ１－Ａｓｎ３１）を含む合成ペプチドに対して生じた。抗体は、その受容体へのＣ５ａの結合を阻害することが示されている。それは、Hycult Biotech (Uden, The Netherlands), Cat. No. HM2094を介して市販されている。

クローン７Ｈ１１０は、Ｃ５ａに対するヒト受容体（ＣＤ８８）を認識するモノクローナルマウス抗体である。それは、Biomol GmbH (Hamburg, Germany); Cat. No. C2439-60Nを介して市販されている。

本願明細書において使用されるとき、「患者」は、本願明細書に記載されている化合物での（すなわち本願明細書に記載されているＣ５ａ活性のインヒビターでの）処置から利益を得ることができるあらゆる哺乳動物または鳥を意味する。好ましくは、「患者」は、実験動物（例えばマウスまたはラット）、家畜動物（例えばモルモット、ウサギ、ニワトリ、シチメンチョウ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ラクダ、ウシ、ウマ、ロバ、ネコ、またはイヌを含む）、またはチンパンジーおよびヒトを含む霊長類からなる群から選択される。「患者」がヒトであることが特に好ましい。

本願明細書において使用されるとき、疾患または障害の「処置する」、「処置すること」または「処置」は、以下のものの１つ以上を達成することを意味する：（ａ）障害の重症度および／または期間を減少させること；（ｂ）処置される障害の症状特性の発現を限定または防止すること；（ｃ）処置される障害の症状特性の悪化を阻害すること；（ｄ）以前に障害を有していた患者において障害の再発を限定または防止すること；および（ｅ）障害に対して以前に症候的であった患者において症状の再発を限定または防止すること。

本願明細書において使用されるとき、疾患または障害の「防止する」、「防止すること」、「防止」、または「予防」は、障害が対象において起こることを防止することを意味する。

「有効量」は、意図される目的をなし遂げるために十分な治療剤の量である。所定の治療剤の有効量は、薬剤の性質、投与経路、治療剤を受ける動物のサイズおよび種、および投与の目的などの要因で変化する。それぞれの個々の場合において有効量は、当分野で確立された方法によって当業者により経験的に決定することができる。

「薬学的に許容される」は、連邦政府または州政府の監督官庁によって承認されているか、または動物、さらに特にヒトにおける使用のための米国薬局方または他の一般的に認識された薬局方に列挙されていることを意味する。

本発明の態様
本発明は、ここにさらに説明される。以下の段落において、本発明の異なる局面は、さらに詳細に定義される。以下に定義されるそれぞれの局面は、明確に反対の指示がない限り、あらゆる他の１つの局面または複数の局面と組み合わせてよい。特に、好ましいまたは有利であると示されているあらゆる特徴は、好ましいまたは有利であると示されているあらゆる他の１つの特徴または複数の特徴と組み合わせてよい。

第１の局面において、本発明は、コロナウイルスでの感染によって引き起こされるか、またはコロナウイルスでの感染と関連する医学的状態の処置における使用のためのＣ５ａ活性のインヒビターであって、医学的状態が好ましくは（ｉ）肺炎、および／または（ｉｉ）発熱である、Ｃ５ａ活性のインヒビターに関する。

第２の局面において、本発明は、コロナウイルス感染に罹患している対象において炎症性応答の低下における使用のためのＣ５ａ活性のインヒビターに関する。

第３の局面において、本発明は、コロナウイルス感染に罹患している対象において、臓器機能、特に肺機能および／または肝機能の改善における使用のためのＣ５ａ活性のインヒビターに関する。

コロナウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を含む群から選択される、請求項１から３のいずれかの使用のためのＣ５ａ活性のインヒビター。

コロナウイルスとは：ヒトに感染する一般的なウイルスの一種で、典型的に上気道感染症（ＵＲＩ）を引き起こす。ヒトのコロナウイルスには７つの異なるタイプが同定されている。ほとんどの人は、一生のうちに少なくとも１種類のコロナウイルスに感染する。ウイルスは、咳およびくしゃみによる空気感染、密接な個人接触、ウイルスに汚染された物体または表面への接触、まれに糞便による汚染によって広がる。ほとんどのコロナウイルスによって引き起こされる病気は、通常短期間で終息し、鼻水、喉の痛み、体調不良、咳、および発熱により特徴付けられる。

重度の症状を引き起こすことが報告されているヒトコロナウイルスの非限定的な例としては、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ（中東呼吸器症候群またはＭＥＲＳを引き起こすベータコロナウイルス）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ（重症急性呼吸器症候群またはＳＡＲＳを引き起こすベータコロナウイルス）、および中国の武漢で始まった２０１９年新型コロナウイルス（２０１９－ｎＣｏＶ）アウトブレイクを含む。

本発明の第１から第３の局面の好ましい態様において、対象がＳＡＲＳ、ＭＥＲＳまたはＣＯＶＩＤ－１９、特にＣＯＶＩＤ－１９に罹患している。

本発明の第１から第３の局面の好ましい態様において、処置が、以下の１つ以上：
－Ｃ反応性タンパク質の低下；
－発熱の低下；
－血液中のリンパ球数の増加；
－ＡＬＴ／ＡＳＴの低下；および／または
－酸素指数の増加（ＰａＯ_２／ＦｉＯ_２）
をもたらす。

Ｃ反応性タンパク質は、通常、健常ヒトにおいて０－５ｍｇ／Ｌの範囲にある。コロナウイルス感染（例えばＣＯＶＩＤ－１９）を有する患者は、約５０ｍｇ／Ｌを有する（Chen et al. The Lancet 2020 oi.org/10.1016/S0140-6736を参照のこと）。したがって、Ｃ反応性タンパク質の低下は、４０ｍｇ／Ｌ未満、好ましくは３０ｍｇ／Ｌ未満、さらに好ましくは１０ｍｇ／Ｌ未満、さらに好ましくは５ｍｇ／Ｌ未満に低減されるとき、達成される。

血液中のリンパ球数は、通常、健常ヒトにおいて１．１から３．２ｘ１０^９／Ｌの範囲である。軽度のコロナウイルス感染（例えばＣＯＶＩＤ－１９）を有する患者は、０．６から１．２ｘ１０^９／Ｌの範囲であり、中央値は０．９ｘ１０^９／Ｌであるが、より重度の（例えばＣＯＶＩＤ－１９）感染は、０．５から０．９ｘ１０^９／Ｌの範囲をもたらし、中央値は０．８ｘ１０^９／Ｌである（Wang et al. JAMA doi:10.1001/jama.2020.1585を参照のこと）。したがって、血液中のリンパ球数の増加は、それぞれの患者においてリンパ球数が、少なくとも２０％、好ましくは少なくとも５０％、さらに好ましくは少なくとも１００％増加されるとき、達成される。絶対的には、本発明の使用のためのＣ５ａインヒビターは、患者のリンパ球数を少なくとも１．０ｘ１０^９／Ｌ、さらに好ましくは少なくとも１．３ｘ１０^９／Ｌに増加させる。

アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）は、通常、健常ヒトにおいて９－５０Ｕ／Ｌの範囲である。軽度のコロナウイルス感染（例えばＣＯＶＩＤ－１９）を有する患者は、１５－３６Ｕ／Ｌの範囲であり、中央値は２３Ｕ／Ｌであるが、より重度の（例えばＣＯＶＩＤ－１９）感染は、１９－５７Ｕ／Ｌの範囲をもたらし、中央値は３５Ｕ／Ｌである（Wang et al. JAMA doi:10.1001/jama.2020.1585を参照のこと）。したがって、ＡＬＴの低下は、それぞれの患者においてＡＬＴが、少なくとも２０％、好ましくは少なくとも５０％、さらに好ましくは少なくとも１００％低下されるとき、達成される。

アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）は、通常、健常ヒトにおいて１５－４０Ｕ／Ｌの範囲である。軽度のコロナウイルス感染（例えばＣＯＶＩＤ－１９）を有する患者は、２１－３８Ｕ／Ｌの範囲であり、中央値は２９Ｕ／Ｌであるが、より重度の（例えばＣＯＶＩＤ－１９）感染は、３０－７０Ｕ／Ｌの範囲をもたらし、中央値は５２Ｕ／Ｌである（Wang et al. JAMA doi:10.1001/jama.2020.1585を参照のこと）。したがって、ＡＳＴの低下は、それぞれの患者においてＡＳＴが、少なくとも２０％、好ましくは少なくとも５０％、さらに好ましくは少なくとも１００％低下されるとき、達成される。

酸素指数ＰａＯ_２／ＦｉＯ_２は、健常ヒトにおいて４００－５００ｍｍＨｇの範囲である。コロナウイルス感染（例えばＣＯＶＩＤ－１９）を有する患者は、１０３－２３４ｍｍＨｇの範囲であり、中央値は１３６ｍｍＨｇである。したがって、酸素指数ＰａＯ_２／ＦｉＯ_２の増加は、それぞれの患者において酸素指数ＰａＯ_２／ＦｉＯ_２が、少なくとも２０％、好ましくは少なくとも５０％、さらに好ましくは少なくとも１００％増加されるとき、達成される。絶対的には、本発明の使用のためのＣ５ａインヒビターは、患者の酸素指数ＰａＯ_２／ＦｉＯ_２を少なくとも２５０ｍｍＨｇ、さらに好ましくは少なくとも３００ｍｍＨｇに増加させる。

本発明の任意の局面のいくつかの態様において、Ｃ５ａ活性のインヒビターは、
－Ｃ５の濃度を低下させる（例えば、Ｃ３転換酵素の形成および／または活性を阻害することにより；Ｃ５転換酵素の形成および／または活性を阻害することにより；Ｃ５遺伝子の転写を阻害することにより；Ｃ５ ｍＲＮＡの翻訳を遮断することにより；Ｃ５ ｍＲＮＡの分解を増加させることにより；Ｃ５タンパク質の分解を増加させることにより；または肝臓からのＣ５の分泌を防止することにより）；
－Ｃ５のＣ５ａおよびＣ５ｂへの開裂を阻害する（例えば、Ｃ５転換酵素を阻害することにより、またはＣ５上の切断部位に結合し、それにより開裂を遮断することにより）；
－Ｃ５ａの濃度を低下させる（例えば、Ｃ５ａタンパク質の分解を増加させることにより）；
－Ｃ５ａおよびＣ５ａ受容体間の結合を阻害する（例えば、Ｃ５ａに結合することにより、またはＣ５ａ受容体に結合することにより）；
－Ｃ５ａ受容体の濃度を低下させる（例えば、Ｃ５ａ受容体遺伝子の転写を阻害することにより；Ｃ５ａ受容体 ｍＲＮＡの翻訳を遮断することにより；Ｃ５ａ受容体 ｍＲＮＡの分解を増加させることにより；Ｃ５ａ受容体タンパク質の分解を増加させることにより）；および／または
－Ｃ５ａ受容体の活性を阻害する。

本発明の任意の局面のいくつかの態様において、Ｃ５ａ活性のインヒビターは、タンパク質リガンド（上記定義のとおりの）；オリゴヌクレオチド；および小分子（上記定義のとおりの）からなる群から選択される。Ｃ５ａ活性のインヒビターとして作用するオリゴヌクレオチドは、例えば核酸分子に結合することにより（それにより転写および／または翻訳を阻害する）またはタンパク質に結合することにより（例えばオリゴヌクレオチドが核酸アプタマーであるとき）、阻害効果をなし遂げることができる。

本発明の任意の局面のいくつかの態様において、Ｃ５ａ活性のインヒビターは、Ｃ５タンパク質、またはＣ５ａタンパク質、またはＣ５ａ受容体タンパク質に特異的に結合するタンパク質リガンドである。さらなる態様において、タンパク質リガンドは、
（ｉ）抗体（例えば抗－Ｃ５抗体、抗－Ｃ５ａ抗体、抗－Ｃ５ａＲ抗体、または抗－Ｃ５Ｌ２抗体）、
（ｉｉ）抗体の抗原結合フラグメント、
（ｉｉｉ）抗体様タンパク質、
（ｉｖ）Ｃ５ａの阻害変異体、
（ｖ）Ｃ５ａ受容体の阻害変異体（例えばデコイ受容体）、
（ｖｉ）補体経路に作用するタンパク質（例えばＣｏｖｅｒｓｉｎ）；および
（ｖｉｉ）ペプチド（例えばＲＡ１０１４９５（Ｒａ Ｐｈａｒｍａ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ））；ＰＭＸ－５３（ｂｉｏ－ｔｅｃｈｎｅ ＧｍｂＨ （Ｗｉｅｓｂａｄｅｎ－Ｎｏｒｄｅｎｓｔａｄｔ、Ｇｅｒｍａｎｙ））
からなる群から選択される。

本発明の任意の局面のいくつかの態様において、Ｃ５ａ活性のインヒビターは、ヒトＣ５ａのアミノ酸配列ＮＤＥＴＣＥＱＲＡ（配列番号：２）およびＳＨＫＤＭＱＬ（配列番号：３）によって形成される立体構造エピトープに特異的に結合する、タンパク質リガンドまたはオリゴヌクレオチド、好ましくはタンパク質リガンドである。配列番号：２および３によるアミノ酸配列によって形成される立体構造への結合は、タンパク質リガンドまたはオリゴヌクレオチドが、配列番号：２によるアミノ酸配列内の少なくとも１つのアミノ酸および配列番号：３によるアミノ酸配列内の少なくとも１つのアミノ酸に結合することを意味する。配列番号：２は、ヒトＣ５ａのアミノ酸３０－３８に対応する。配列番号：３は、ヒトＣ５ａのアミノ酸６６－７２に対応する。

本発明の任意の局面のいくつかの態様において、タンパク質リガンドまたはオリゴヌクレオチド、好ましくはタンパク質リガンドは、ＤＥＴＣＥＱＲ（配列番号：４）によるアミノ酸配列内の少なくとも１つのアミノ酸に結合する。配列番号：４は、ヒトＣ５ａのアミノ酸３１－３７に対応する。

本発明の任意の局面のいくつかの態様において、タンパク質リガンドまたはオリゴヌクレオチド、好ましくはタンパク質リガンドは、ＨＫＤＭＱ（配列番号：５）によるアミノ酸配列内の少なくとも１つのアミノ酸、さらに好ましくはアミノ酸配列ＫＤＭ内の少なくとも１つのアミノ酸に結合する。配列番号：５は、ヒトＣ５ａのアミノ酸６７－７１に対応する；配列ＫＤＭは、ヒトＣ５ａのアミノ酸６８－７０に対応する。

本発明の任意の局面のいくつかの態様において、タンパク質リガンドまたはオリゴヌクレオチド、好ましくはタンパク質リガンドは、アミノ酸配列ＤＥＴＣＥＱＲ（配列番号：４）内の少なくとも１つのアミノ酸およびアミノ酸配列ＨＫＤＭＱ（配列番号：５）内の少なくとも１つのアミノ酸に結合する。

本発明の任意の局面のいくつかの態様において、タンパク質リガンドまたはオリゴヌクレオチド、好ましくはタンパク質リガンドは、アミノ酸配列ＤＥＴＣＥＱＲ（配列番号：４）内の少なくとも１つのアミノ酸およびアミノ酸配列ＫＤＭ内の少なくとも１つのアミノ酸に結合する。

本発明の任意の局面のいくつかの態様において、Ｃ５ａの立体構造エピトープを形成する２つの配列（例えば配列番号：２および３；配列番号：４および５；または配列番号：４および配列ＫＤＭによる配列対）は、本発明の結合部分への結合において参加しない１－５０個の隣接するアミノ酸によって分離される。以下において、本発明の結合部分への結合において参加しないかかるアミノ酸は、「結合しないアミノ酸」と称される。立体構造エピトープを形成する２つの配列は、好ましくは６－４５個の隣接する結合しないアミノ酸、さらに好ましくは１２－４０個の隣接する結合しないアミノ酸、さらに好ましくは１８－３５個の隣接する結合しないアミノ酸、さらに好ましくは２４－３０個の隣接する結合しないアミノ酸、さらに好ましくは２５－２９個の隣接する結合しないアミノ酸、よりさらに好ましくは２６－２８個の隣接する結合しないアミノ酸、およびより好ましくは２７個の隣接する結合しないアミノ酸によって分離される。

本発明の任意の局面のいくつかの態様において、Ｃ５ａの立体構造エピトープに特異的に結合する、タンパク質リガンドまたはオリゴヌクレオチド、好ましくはタンパク質リガンドは、１０ｎＭ以下、好ましくは９ｎＭ以下、さらに好ましくは８ｎＭ以下、さらに好ましくは７ｎＭ以下、さらに好ましくは６ｎＭ以下、さらに好ましくは５ｎＭ以下、さらに好ましくは４ｎＭ以下、さらに好ましくは３ｎＭ以下、さらに好ましくは２ｎＭ以下、およびよりさらに好ましくは１ｎＭ以下のＫ_ｄ値でのヒトＣ５ａへの結合定数を有する。本発明の任意の局面のいくつかの態様において、結合部分およびヒトＣ５ａ間の解離定数Ｋ_ｄは、１ｐＭ（ピコモル）および５ｎＭ（ナノモル）間、さらに好ましくは２ｐＭおよび４ｎＭ間、さらに好ましくは５ｐＭおよび３ｎＭ間、さらに好ましくは１０ｐＭおよび２ｎＭ間、さらに好ましくは５０ｐＭおよび１ｎＭ間、さらに好ましくは１００ｐＭおよび９００ｐＭ間、さらに好ましくは２００ｐＭおよび８００ｐＭ間、さらに好ましくは３００ｐＭおよび７００ｐＭ間、およびよりさらに好ましくは４００ｐＭおよび６００ｐＭ間である。

本発明の任意の局面のいくつかの態様において、Ｃ５ａに特異的に結合する、タンパク質リガンドまたはオリゴヌクレオチド、好ましくはタンパク質リガンドは、１つの分子Ｃ５ａ、特にヒトＣ５ａによって誘導される生物学的効果に対して少なくとも７５％遮断活性、好ましくは少なくとも８０％遮断活性、さらに好ましくは少なくとも８５％遮断活性、さらに好ましくは少なくとも９０％遮断活性、さらに好ましくは少なくとも９５％遮断活性を示す。これらの特定の遮断活性は、結合部分がＣ５ａ、好ましくはヒトＣ５ａに結合する単一のパラトープを含むこれらの態様に言及する。結合部分が２つまたはそれ以上のＣ５ａ特異的パラトープを含む態様において、少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、さらに好ましくは少なくとも８５％などの該遮断活性は、１つの結合部分分子が結合部分に存在するＣ５ａ特異的パラトープの数と等しい多くのＣ５ａ分子と接触されるとき、なし遂げられる。言い換えれば、本願明細書に記載されている結合部分のパラトープおよびＣ５ａが当モル濃度で存在するとき、結合部分は、Ｃ５ａによって誘導される生物学的効果に対して少なくとも７５％遮断活性、好ましくは少なくとも８０％遮断活性、さらに好ましくは少なくとも８５％遮断活性、さらに好ましくは少なくとも９０％遮断活性、およびさらに好ましくは少なくとも９５％遮断活性を示す。遮断される好ましい生物学的効果は、ヒト全血細胞からのＣ５ａ誘導リゾチーム放出である。このＣ５ａ誘導リゾチーム放出およびその遮断を決定するためのアッセイは、例えばＷＯ ２０１１／０６３９８０ Ａ１および対応するＵＳ国内段階出願ＵＳ ２０１２／０２３１００８ Ａ１において記載されている。

本発明の任意の局面のいくつかの態様において、タンパク質リガンドは、抗体またはその抗原結合フラグメントであり、該抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ｉ）配列番号：６に示されている重鎖ＣＤＲ３配列；または
（ｉｉ）配列番号：７に示されている重鎖ＣＤＲ３配列；
を含み、重鎖ＣＤＲ３配列は、所望により、１、２、または３つのアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失、および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含む。

本発明の任意の局面のいくつかの態様において、タンパク質リガンドは、抗体またはその抗原結合フラグメントであり、該抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ｉｉｉ）配列番号：８に示されている軽鎖ＣＤＲ３配列；または
（ｉｖ）配列番号：９に示されている軽鎖ＣＤＲ３配列；
を含み、軽鎖ＣＤＲ３配列は、所望により、１、２、または３つのアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失、および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含む。

本発明の任意の局面のいくつかの態様において、タンパク質リガンドは、抗体またはその抗原結合フラグメントであり、該抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ｉ）配列番号：６に示されている重鎖ＣＤＲ３配列および配列番号：８に示されている軽鎖ＣＤＲ３配列；または
（ｉｉ）配列番号：７に示されている重鎖ＣＤＲ３配列および配列番号：９に示されている軽鎖ＣＤＲ３配列；
を含み、重鎖ＣＤＲ３配列は、所望により、１、２、または３つのアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失、および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含み；および
軽鎖ＣＤＲ３配列は、所望により、１、２、または３つのアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失、および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含む。

本発明の任意の局面のいくつかの態様において、タンパク質リガンドは、抗体またはその抗原結合フラグメントであり、該抗体またはその抗原結合フラグメントは、少なくとも１つの以下の配列：
（ｖ）配列番号：１０による重鎖ＣＤＲ２配列；
（ｖｉ）配列番号：１１による重鎖ＣＤＲ２配列；
（ｖｉｉ）配列番号：１２による軽鎖ＣＤＲ２配列；
（ｖｉｉｉ）配列番号：１３による軽鎖ＣＤＲ２配列；
（ｉｘ）配列番号：１４による重鎖ＣＤＲ１配列；
（ｘ）配列番号：１５による重鎖ＣＤＲ１配列；
（ｘｉ）配列番号：１６による軽鎖ＣＤＲ１配列；または
（ｘｉｉ）配列番号：１７による軽鎖ＣＤＲ１配列；
を含み、重鎖ＣＤＲ２配列は、所望により、１、２、または３つのアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失、および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含み；
軽鎖ＣＤＲ２配列は、所望により、１、２、または３つのアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失、および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含み；
重鎖ＣＤＲ１配列は、所望により、１、２または３つのアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失、および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含み；および
軽鎖ＣＤＲ１配列は、所望により、１、２、または３つのアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失、および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含む。

特定の態様において、配列番号：６、配列番号：７、配列番号：８、配列番号：９、配列番号：１０、配列番号：１１、配列番号：１３、配列番号：１４、配列番号：１５、配列番号：１６、および配列番号：１７によるアミノ酸配列のそれぞれ１つにおいて上記列挙されたこれらの所望の変化の総数、すなわちそれぞれの配列において交換、欠失および付加の総数は、１または２である。

特定の態様において、抗体またはその抗原結合フラグメントにおいて存在する全てのＣＤＲについて合計された交換、欠失および付加の総数は、１から５つの間（例えば１、２、３、４、または５つ）である。

本発明の任意の局面のいくつかの態様において、タンパク質リガンドは、抗体またはその抗原結合フラグメントであり、以下の表１に列挙された重鎖ＣＤＲ３、重鎖ＣＤＲ２、および重鎖ＣＤＲ１配列のセットＡからＨの１つを含み、
それぞれの重鎖ＣＤＲ３配列は、所望により、１、２、または３つのアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失、および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含み；
それぞれの重鎖ＣＤＲ２配列は、所望により、１、２、または３つのアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失、および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含み；および
それぞれの重鎖ＣＤＲ１配列は、所望により、１、２、または３つのアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失、および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含む。
表１：本発明の抗体またはそれらのフラグメントにおける使用のために適当な重鎖ＣＤＲ配列のセット

本発明の任意の局面のいくつかの態様において、タンパク質リガンドは、抗体またはその抗原結合フラグメントであり、表２に列挙された軽鎖ＣＤＲ３、軽鎖ＣＤＲ２、および軽鎖ＣＤＲ１配列の以下のセットＩからＩＶの１つを含み、
それぞれの軽鎖ＣＤＲ３配列は、所望により、１、２、または３つのアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失、および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含み；
それぞれの軽鎖ＣＤＲ２配列は、所望により、１、２、または３つのアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失、および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含み；および
それぞれの軽鎖ＣＤＲ１配列は、所望により、１、２、または３つのアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失、および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含む。
表２：本発明の抗体またはそれらのフラグメントにおける使用のために適当な軽鎖ＣＤＲ配列のセット
抗体ＩＦＸ－１のＣＤＲ２軽鎖配列（配列番号：１２）が抗体ＩＮａｂ７０８のＣＤＲ２軽鎖配列（配列番号：１３）と同一であるため、配列番号：１３を含むセットは、配列番号：１２を含むセットと冗長であるはずである。したがって、表は、軽鎖ＣＤＲ配列の４つのセットのみを列挙する。

本発明の任意の局面のいくつかの態様において、タンパク質リガンドは、抗体またはその抗原結合フラグメントであり、上記表１に列挙された重鎖ＣＤＲセットＡ－Ｈの１つおよび上記表２に列挙された軽鎖ＣＤＲセットＩ－ＩＶの１つ、すなわちセットの以下の組合せの１つ：Ａ－Ｉ、Ａ－ＩＩ、Ａ－ＩＩＩ、Ａ－ＩＶ、Ｂ－Ｉ、Ｂ－ＩＩ、Ｂ－ＩＩＩ、Ｂ－ＩＶ、Ｃ－Ｉ、Ｃ－ＩＩ、Ｃ－ＩＩＩ、Ｃ－ＩＶ、Ｄ－Ｉ、Ｄ－ＩＩ、Ｄ－ＩＩＩ、Ｄ－ＩＶ、Ｅ－Ｉ、Ｅ－ＩＩ、Ｅ－ＩＩＩ、Ｅ－ＩＶ、Ｆ－Ｉ、Ｆ－ＩＩ、Ｆ－ＩＩＩ、Ｆ－ＩＶ、Ｇ－Ｉ、Ｇ－ＩＩ、Ｇ－ＩＩＩ、Ｇ－ＩＶ、Ｈ－Ｉ、Ｈ－ＩＩ、Ｈ－ＩＩＩ、またはＨ－ＩＶ（ここで、組合せＡ－ＩおよびＨ－ＩＶがとりわけ好ましい）を含み、
それぞれの重鎖ＣＤＲ３配列は、所望により、１、２、または３つのアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失、および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含み；
それぞれの重鎖ＣＤＲ２配列は、所望により、１、２、または３つのアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失、および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含み；
それぞれの重鎖ＣＤＲ１配列は、所望により、１、２、または３つのアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含み；
それぞれの軽鎖ＣＤＲ３配列は、所望により、１、２、または３つのアミノ酸交換、特に保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失、および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含み；
それぞれの軽鎖ＣＤＲ２配列は、所望により、１、２、または３つのアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失、および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含み；および
それぞれの軽鎖ＣＤＲ１配列は、所望により、１、２、または３つのアミノ酸交換、好ましくは保存的アミノ酸交換、１、２、または３つのアミノ酸欠失および／または１、２、または３つのアミノ酸付加を含む。

本発明の任意の局面のいくつかの態様において、タンパク質リガンドは、抗体またはその抗原結合フラグメントであり、（ｉ）ＩＦＸ－１のＶＨドメインまたは（ｉｉ）ＩＮａｂ７０８のＶＨドメインを含む、本質的にからなる、またはからなるＶＨドメインを含む。

ＩＦＸ－１およびＩＮａｂ７０８のＶＨドメインを定義するＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、およびＦＲ４配列は、以下の表３に示される。

本発明の任意の局面のいくつかの態様において、タンパク質リガンドは、抗体またはその抗原結合フラグメントであり、（ｉ）ＩＦＸ－１のＶＬドメインまたは（ｉｉ）ＩＮａｂ７０８のＶＬドメインを含む、本質的にからなる、またはからなるＶＬドメインを含む。

ＩＦＸ－１およびＩＮａｂ７０８のＶＬドメインを定義するＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、およびＦＲ４配列は、以下の表３に示される。
表３：抗体ＩＦＸ－１およびＩＮａｂ７０８のＣＤＲおよびＦＲ配列（Ｃｈｏｔｈｉａ分類モード）

いくつかの態様において、本発明における使用のための抗体またはその抗原結合フラグメントは、
（ｉ）配列番号：３４によるアミノ酸配列を有する可変重鎖および配列番号：３５によるアミノ酸配列を有する可変軽鎖配列または軽鎖および重鎖ＣＤＲ１からＣＤＲ３の配列番号：６、８、１０、１２、１４および１６によるアミノ酸配列を含む配列番号：３４および３５と少なくとも９０％、少なくとも９３％または少なくとも９５％アミノ酸配列同一性を有する変異体または上記に規定されるそれらの変異体；
（ｉｉ）配列番号：３６のアミノ酸配列を有する可変重鎖配列および配列番号：３７によるアミノ酸配列を有する可変軽鎖配列または軽鎖および重鎖ＣＤＲ１からＣＤＲ３の配列番号：７、９、１１、１３、１５および１７によるアミノ酸配列を含む配列番号：３６および３７と少なくとも９０％アミノ酸配列同一性を有する変異体または上記に規定されるそれらの変異体
を含む。

上記局面において、ＣＤＲは、上記で概説されているとおり、変異なしまたは最小限、すなわち１、２、または３つのアミノ酸の変異を有し、そしてアミノ酸修飾の大部分はフレームワーク領域においてである。

本発明の任意の局面のいくつかの態様において、Ｃ５ａ活性のインヒビターは、Ｃ５、またはＣ５ａ、またはＣ５ａ受容体に特異的に結合するオリゴヌクレオチドである。さらなる態様において、オリゴヌクレオチドは、核酸アプタマーである。核酸アプタマーは、ＤＮＡ－アプタマー、Ｄ－ＲＮＡアプタマー、およびＬ－ＲＮＡアプタマー（例えば、Ｓｐｉｅｇｅｌｍｅｒｓ^ＴＭ）からなる群から選択されてよい。

本発明の任意の局面のいくつかの態様において、Ｃ５ａ活性のインヒビターは、Ｃ５タンパク質またはＣ５ａ受容体タンパク質の発現を減少させる。さらなる態様において、Ｃ５タンパク質またはＣ５ａ受容体タンパク質の発現を減少させる該Ｃ５ａ活性のインヒビターは、アンチセンスＤＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、およびｍｉＲＮＡからなる群から選択されるオリゴヌクレオチドである。

本発明の任意の局面のいくつかの態様において、Ｃ５ａ受容体は、Ｃ５ａＲおよび／またはＣ５Ｌ２である。本発明の任意の局面の好ましい態様において、Ｃ５ａ受容体は、Ｃ５ａＲ（ＣＤ８８またはＣ５ａＲ１としても知られている）である。

本発明の任意の局面のいくつかの態様において、Ｃ５ａ活性のインヒビターは、
（ａ）ＩＦＸ－１、ＩＮａｂ７０８、ＭＥＤＩ－７８１４、ＡＬＸＮ－１００７、またはＮＯＸ－Ｄ２１、またはそれらの抗原結合フラグメント；
（ｂ）Ｃ５ａへの結合について（ａ）の下に示される抗体の１つと競合する、抗体またはその抗原結合フラグメント；
（ｃ）エクリズマブ、ＡＬＸＮ１２１０、ＡＬＸＮ５５００、またはＬＦＧ３１６、またはそれらの抗原結合フラグメント；
（ｄ）Ｃ５への結合について（ｃ）の下に示される抗体の１つと競合する、抗体またはその抗原結合フラグメント；
（ｅ）ＣｏｖｅｒｓｉｎまたはＲＡ１０１４９５；
（ｆ）Ｃ５への結合について（ｅ）の下に示されるタンパク質またはペプチドの１つと競合する、抗体またはその抗原結合フラグメントまたはタンパク質または大環状ペプチド；
（ｇ）Ｚｉｍｕｒａ；
（ｈ）Ｃ５への結合についてＺｉｍｕｒａと競合する、抗体またはその抗原結合フラグメントまたはアプタマー；
（ｉ）ＡＭＹ－２０１またはＭｉｒｏｃｏｃｅｐｔ；
（ｊ）Ｃ３ｂへの結合について（ｉ）の下に示されるタンパク質の１つと競合する、抗体またはその抗原結合フラグメントまたはタンパク質；
（ｋ）Ｂｉｋａｃｉｏｍａｂ；
（ｌ）Ｆａｃｔｏｒ Ｂへの結合についてＢｉｋａｃｉｏｍａｂと競合する、抗体またはその抗原結合フラグメント；
（ｍ）Ｌａｍｐａｌｉｚｕｍａｂ；
（ｎ）Ｆａｃｔｏｒ Ｄへの結合についてＬａｍｐａｌｉｚｕｍａｂと競合する、抗体またはその抗原結合フラグメント；
（ｏ）ＡＬＮ－ＣＣ５；
（ｐ）Ａｖａｃｏｐａｎまたは式ＩＩまたは式ＩＩＩに記載の化合物またはＰＭＸ－５３または式ＩＶに記載の化合物；
（ｑ）Ｃ５ａＲへの結合についてａｖａｃｏｐａｎまたはＰＭＸ－５３と競合する、抗体またはその抗原結合フラグメント；
（ｒ）クローン Ｓ５／１またはクローン ７Ｈ１１０、またはその抗原結合フラグメント；および
（ｓ）Ｃ５ａＲへの結合について（ｒ）の下に示される抗体の１つと競合する、抗体またはその抗原結合フラグメント
からなる群から選択される。

医薬組成物および投与様式
本発明の任意の局面の実施において、化合物（例えば本願明細書に記載されているＣ５ａ活性のインヒビター）または該化合物を含む医薬組成物は、患者において化合物の十分なレベルを提供する当分野で確立されたあらゆる経路によって、患者に投与されてよい。全身的または局所的に投与することができる。かかる投与は、非経腸的、経粘膜的、例えば、経口、経鼻、経直腸、膣内、舌下、粘膜下的、経皮、または吸入的であってよい。好ましくは、投与は、例えば、静脈内または腹腔内注射を介する、限定はしないが、動脈内、筋肉内、皮内および皮下投与も含む、非経口である。本願明細書に記載されている化合物（例えば本願明細書に記載されているＣ５ａ活性のインヒビター）または該化合物を含む医薬組成物が局所的に投与されるとき、処置される臓器または組織に直接的に注射することができる。

経口投与のために適合される医薬組成物は、カプセルまたは錠剤；粉末または顆粒；溶液、シロップまたは懸濁液（水性または非水性液体中）；食用のフォーム（foam）またはホイップ；またはエマルジョンとして提供されてよい。錠剤または硬ゼラチンカプセルは、ラクトース、デンプンまたはその誘導体、ステアリン酸マグネシウム、サッカリン酸ナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウム、ステアリン酸またはその塩を含んでよい。軟ゼラチンカプセルは、植物油、ワックス、脂肪、半固体、または液体ポリオールなどを含んでよい。溶液およびシロップ剤は、水、ポリオールおよび糖を含んでよい。

経口投与のために意図される活性剤は、胃腸管において活性剤の分解および／または吸収を遅延させる物質（例えば、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルが使用され得る）でコーティングまたはと混合されてよい。したがって、活性剤の持続放出は、数時間にわたってなし遂げられることができ、必要な時、活性剤は、胃内で破壊されることから保護されることができる。経口投与のための医薬組成物は、特定のｐＨまたは酵素条件によって特定の消化器位置で活性剤の放出を容易にするように製剤化されてもよい。

経皮投与のために適合される医薬組成物は、長期間、レシピエントの表皮との密接な接触でとどまることを意図される別々のパッチとして提供されてよい。局所投与のために適合される医薬組成物は、軟膏、クリーム、懸濁液、ローション、粉末、溶液、ペースト、ゲル、スプレー、エアロゾルまたはオイルとして提供されてよい。皮膚、口、眼または他の外部組織への局所投与のために、局所軟膏またはクリームが好ましくは使用される。軟膏において製剤化されるとき、活性成分は、パラフィンまたは水混和性軟膏ベースのいずれかで使用されてよい。あるいは、活性成分は、水中油型ベースまたは油中水型ベースでクリームにおいて製剤化されてもよい。眼への局所投与のために適合される医薬組成物は、点眼薬を含む。これらの組成物において、活性成分は、適当な担体、例えば、水性溶媒において溶解または懸濁させることができる。口において局所投与のために適合される医薬組成物は、ドロップ、トローチおよび口内洗浄液を含む。

経鼻投与のために適合される医薬組成物は、固体担体、例えば粉末（好ましくは２０から５００ミクロンの範囲の粒径を有する）を含んでよい。粉末は、嗅ぎ薬を取る様式において、すなわち、鼻の近くに保持された粉末の容器から鼻を介する迅速な吸入により、投与することができる。あるいは、経鼻投与のために採用される組成物は、液体担体、例えば、鼻腔用スプレーまたは点鼻薬を含んでよい。これらの組成物は、活性成分の水性または油性溶液を含んでよい。吸入による投与のための組成物は、活性成分のあらかじめ決められた用量を提供するように構築することができる、限定はしないが、加圧エアロゾル、噴霧器または吸入器を含む、特別に適合されるデバイスにおいて供給されてよい。医薬組成物はまた、鼻腔を介して肺へ投与されてよい。

経直腸投与のために適合される医薬組成物は、坐薬またはかん腸剤として提供されてよい。膣内投与のために適合される医薬組成物は、ペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、ペースト、フォームまたはスプレー製剤として提供されてよい。

非経口投与のために適合される医薬組成物は、抗酸化剤、バッファー、静菌剤および組成物を意図されるレシピエントの血液と実質的に等張にさせる溶質を含んでよい、水性および非水性滅菌注射可能な溶液または懸濁液を含む。このような組成物において存在してもよい他の成分は、例えば、水、アルコール、ポリオール、グリセリンおよび植物油を含む。非経口投与のために適合される組成物は、単位用量または複数用量の容器、例えば密封アンプルおよびバイアルにおいて提供されてよく、および使用の直前に、注射のための滅菌液体担体、例えば滅菌塩水の付加のみを必要とするフリーズドライされた（凍結乾燥された）状態において保存されてよい。即時注射溶液および懸濁液は、滅菌粉末、顆粒および錠剤から調製されてよい。

好ましい態様において、本願明細書に記載されている化合物（例えば本願明細書に記載されているＣ５ａ活性のインヒビター）は、ヒトへの静脈内投与のために適合される医薬組成物として日常的な処理にしたがって製剤化される。一般的には、静脈内投与のための組成物は、滅菌等張水性バッファーの溶液である。必要なとき、組成物はまた、注射の部位に痛みを和らげるために、可溶化剤および局所麻酔、例えばリドカインを含んでよい。一般的には、成分は、例えば、活性剤の量を示すアンプルまたは小袋(sachette)などの密封容器において凍結乾燥粉末または無水濃縮物として、単位投与形態において別々にまたは互いに混合されてのいずれかで提供される。組成物が注入により投与される場合、滅菌医薬品グレード水または塩水を含む注入ボトルで分配することができる。組成物が注入により投与される場合、投与前に成分を混合することができるように、滅菌塩水のアンプルが提供されてもよい。

他の態様において、例えば、化合物（例えば本願明細書に記載されているＣ５ａ活性のインヒビター）または該化合物を含む医薬組成物は、制御放出システムで送達することができる。例えば、化合物は、静脈内注入、移植可能な浸透圧ポンプ、経皮パッチ、リポソーム、または他の投与様式を使用して、投与されてもよい。１つの態様において、ポンプを使用してもよい（Sefton (1987) CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14: 201; Buchwald et al. (1980) Surgery 88:507; Saudek et al. (1989) N. Eng. J. Med. 321: 574参照）。他の態様において、化合物は、小胞、特にリポソームにおいて送達することができる（Langer (1990) Science 249:1527-1533; Treat et al. (1989) in Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer, Lopez-Berestein and Fidler (eds.), Liss, N.Y., 353-365; WO 91/04014; U.S. 4,704,355参照）。他の態様において、ポリマー物質を使用することができる（Medical Applications of Controlled Release (1974) Langer and Wise (eds.), CRC Press: Boca Raton, Fla.; Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, (1984) Smolen and Ball (eds.), Wiley: N.Y.; Ranger and Peppas (1953) J. Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23: 61参照; Levy et al. (1985) Science 228:190; During et al. (1989) Ann. Neurol. 25: 351; Howard et al. (1989) J. Neurosurg. 71: 105も参照）。

さらに他の態様において、制御放出システムは、治療標的、すなわち、標的細胞、組織または臓器の近接に置くことができ、したがって全身用量の一部のみを必要とする（例えば、Goodson (1984) 115-138 in Medical Applications of Controlled Release, vol. 2参照）。他の制御放出システムは、Langer （1990, Science 249: 1527-1533）によるレビューにおいて説明される。

特定の態様において、処置を必要とする領域に局所的に、本願明細書に記載されている化合物（例えば本願明細書に記載されているＣ５ａ活性のインヒビター）または該化合物を含む医薬組成物を投与することが望ましい可能性がある。このことは、例えば、限定ではなく、手術中の局所注入、例えば、手術後の創傷被覆材と共に、局所適用、注射により、カテーテルの手段により、坐薬の手段により、またはインプラントの手段によりによってなし遂げられてよく、該インプラントは、シラスティック膜などの膜、または繊維を含む、多孔性、非多孔性、またはゼラチン状物質である。

好ましい有効用量の選択は、当業者に知られるいくつかの因子を考慮することに基づいて当業者によって決定される。かかる因子は、医薬組成物の特定の形態、例えばポリペプチドまたはベクター、およびその薬物動態パラメーター、例えばバイオアベイラビリティ、代謝、半減期などを含み、医薬化合物について規制当局の承認を得ることにおいて一般的に使用される通常の開発処理中に確立される。用量を考慮することにおけるさらなる因子は、防止およびまたは処置される状態または疾患または正常個体においてなし遂げられる利益、患者の体重、投与経路、投与が急性または慢性であるか、併用投薬、および投与される医薬品の有効性に影響することがよく知られている他の因子を含む。したがって、正確な用量は、標準臨床技術によって、例えば個々の患者の状態および免疫状態に依存して、開業医の判断およびそれぞれの患者の状況にしたがって決定されるべきである。

本発明のＣ５ａ活性のインヒビター、特にＩＦＸ－１の好ましい投与量は、１日あたり２００ｍｇから５００ｍｇ、好ましくは１日あたり２５０ｍｇから３５０ｍｇ、さらに好ましくは１日あたり３００ｍｇの投与量である。投与量は、好ましくは１日１回で、さらに好ましくはＣ５ａ活性のインヒビター、特にＩＦＸ－１を１日目、２日目、３日目、５日目、７日目、９日目、１１日目、および１３日目に投与する投与レジメンで適用される。

好ましくは、Ｃ５ａ活性のインヒビター、特にＩＦＸ－１は、非経口適用、さらに好ましくは静脈内投与により投与される。

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ２のヌクレオカプシドタンパク質は、ＭＡＳＰ－２に結合する。（Ａ）ＧＦＰ－ＮおよびＧＦＰ－ベクターでトランスフェクトされた２９３Ｔ細胞からの溶解物を、２ｍＭ ＣａＣｌ_２または１ｍＭ ＥＤＴＡの存在下でアガロースビーズにコンジュゲートされたＦｌａｇ－タグ付き全長（ＦＬ）ＭＡＳＰ－２または切断された突然変異体（ＣＵＢ１－ＥＧＦ－ＣＵＢ２およびＣＣＰ１－ＣＣＰ２－ＳＰ）での免疫沈降に付した。免疫ブロット法を、抗－ＧＦＰおよび抗－Ｆｌａｇ抗体で行った。インキュベートされるＩｇＧビーズおよびＦｌａｇビーズを、ネガティブコントロールとして使用した。（Ｂ）Ｆｌａｇ－ＮまたはＦｌａｇ－ベクターでトランスフェクトされた２９３Ｔ細胞からの溶解物を、ヒト血清（ＨＳ）およびマウス血清（ＭＳ）と混合し、そして抗－Ｆｌａｇアガロースビーズでの免疫沈降に付した。吸着物を、抗－Ｆｌａｇおよび抗－ＭＡＳＰ－２抗体でプローブした。精製された組み換えＭＡＳＰ－２をマーカーとして負荷した。（Ｃ）全長ＧＦＰ－Ｎおよびその突然変異体Δ３２１－３２３およびΔ１１６－１２４でトランスフェクトされた２９３Ｔ細胞からの溶解物を、２ｍＭ ＣａＣｌ２の存在下でＭＡＳＰ－２－Ｆｌａｇ－コンジュゲートアガロースビーズでの免疫沈降に付し、そして抗－ＧＦＰおよび抗－Ｆｌａｇ抗体での免疫ブロット法により分析した。（Ｄ）ＧＦＰ－ＭＥＲＳ－ＣｏＶ Ｎおよびその切断された突然変異体Δ１０４－１１２を発現する２９３Ｔ細胞からの溶解物を、２ｍＭ ＣａＣｌ_２の存在下でＭＡＳＰ－２－Ｆｌａｇコンジュゲートアガロースビーズでの免疫沈降に付し、そして上記のとおり分析した。（Ｅ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＨＡ－タグ付き Ｎを発現する２９３Ｔ細胞からの溶解物を、２ｍＭ ＣａＣｌ_２の存在下でＭＡＳＰ－２－Ｆｌａｇ－コンジュゲートアガロースビーズでの免疫沈降に付し、吸着物を、抗－ＨＡおよび抗－Ｆｌａｇ抗体でプローブした。

ヌクレオカプシドタンパク質は、ＭＡＳＰ－２自己活性化およびＣ４開裂を誘導する。（Ａ）ＭＡＳＰ－２－Ｍｙｃを発現する細胞からの溶解物を、精製されたＮまたはＭＢＬと混合し、そして２ｍＭ ＣａＣｌ_２の存在下でＭＡＳＰ－２－Ｆｌａｇ－コンジュゲートアガロースビーズでの免疫沈降に付した。免疫ブロット法を、抗－Ｍｙｃ抗体で行った。（Ｂ）精製されたＭＡＳＰ－２－Ｆｌａｇを、３７℃で１２時間、Ｎ、ＭＢＬ、およびマンナン有／無でインキュベートした。切断されたＭＡＳＰ－２を、抗－Ｆｌａｇ抗体でプローブした。（Ｃ）精製されたＭＡＳＰ－２およびＮタンパク質を、抗－Ｎモノクローナル抗体有／無で、４℃でマンナン－被覆プレートにおいて、プレコンジュゲートＭＢＬとインキュベートした。ＭＡＳＰ－２の結合を、抗－ＭＡＳＰ－２抗体で検出した。対応のない両側スチューデントｔ検定による、＊Ｐ＜０．０５および＊＊Ｐ＜０．０１ ｖｓ． ＨＳＡ。（Ｄ）Ｃ４を、３７℃で１時間、６時間、１２時間、および２４時間、ＭＡＳＰ－２、ＭＢＬ、マンナン、Ｎタンパク質、およびＨＳＡとインキュベートした。Ｃ４および開裂され切断されたＣ４フラグメントを抗－Ｃ４α鎖抗体で検出した。（Ｅ）Ｃ４を、３７℃で１時間、ＭＡＳＰ－２、ＭＢＬ、マンナン、Ｎタンパク質、Ｃ１ＩＮＨ、またはＭＡＳＰ－２モノクローナル抗体とインキュベートした。Ｃ４および切断されたＣ４を、Ｃ４α－鎖抗体で検出した。（Ｆ－Ｈ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＨＣｏＶ－２２９Ｅ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２、およびＭＥＲＳ－ＣｏＶのＮタンパク質の濃度に関してＣ４ｂ沈着。

Ｎタンパク質は、ＬＰＳ誘導性肺炎をインビボで強化する。（Ａ）ＢＡＬＢ／ｃマウス（１０／グループ）を、尾静脈を介して１×１０^９ ＰＦＵ Ａｄ－ＳＡＲＳ Ｎ／Ａｄ－ｎｕｌｌまたは塩水コントロールに感染させ、そしてＬＰＳ（５ｍｇ／ｋｇ）を６日目に尾静脈を介して与えた。抗－ＭＡＳＰ－２抗体（２００μｇ／ｋｇ）またはＣ１ＩＮＨ（４ｍｇ／ｋｇ）を、ＬＰＳ注射の３０分前に尾静脈を介して注射した。マウスの死亡率は、Gehan-Breslow-Wilcoxon試験により、＊Ｐ＜０．０５および＊＊Ｐ＜０．０１と記した。肺のパラフィン切片を、ＨＥ染色により分析した（Ｂ）。マウスを、尾静脈を介して１×１０^８ ＰＦＵ Ａｄ－ＳＡＲＳ Ｎ／Ａｄ－ｎｕｌｌに感染させ、そしてＬＰＳ（５ｍｇ／ｋｇ）を６日目に点鼻によりおよび尾静脈を介して与えた。ＬＰＳ抗原投与６時間後にマウスを殺した。凍結された肺切片を抗－Ｃ４ｂ抗体で染色した（Ｃ）。凍結された肺切片におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ ＮおよびＭＡＳＰ－２複合体形成を、赤色シグナルにより示されるように、ｉｎ ｓｉｔｕ ＰＬＡにより測定した。沈着したＣ３フラグメントを、ＦＩＴＣ－標識抗－Ｃ３ｃ抗体で染色した（緑色）、スケールバー＝５０μｍ（Ｄ）。（Ｅ）マウスを、１×１０^９ ＰＦＵ Ａｄ－ＭＥＲＳ Ｎ／Ａｄ－ｎｕｌｌに前感染させ、そして上記のとおりＬＰＳ、抗体またはＣ１ＩＮＨで処理し、生存マウスを観察した。（Ｆ）Ｍａｓｐ２^－／－およびＭａｓｐ２^＋／＋Ｃ５７ＢＬ／６Ｎマウスを、Ｎ発現アデノウイルスに感染させ、そして上記のとおりＬＰＳを注入し、生存マウスを観察した。

ＣＯＶＩＤ－１９患者における補体活性化（Ａ－Ｅ）死後剖検からのパラホルムアルデヒド固定肺組織を、パラフィン組織切片、および抗－ＭＢＬ、抗－ＭＡＳＰ－２、抗－Ｃ４α鎖、抗Ｃ３またはＣ５ｂ－９での免疫組織化学的染色のために使用した。顕微鏡写真を、１０×対物の下でＯｌｙｍｐｕｓ ＢＸ５２ 顕微鏡により行った。（Ｆ）健常人、軽度または重度のＣＯＶＩＤ－１９患者からの血清Ｃ５ａを、ＥＬＩＳＡにより分析した。

抗－Ｃ５ａ抗体でのＣＯＶＩＤ－１９患者の処置（Ａ）２人の患者の発症、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＲＮＡ検出および入院のタイムライン。（Ｂ）患者＃１（左）および患者＃２（右）における流量、高流経鼻酸素（ＦｉＯ_２）の吸気の画分、経皮的動脈血酸素飽和度（ＳｐＯ_２）および酸素化指数（ＰａＯ_２／ＦｉＯ_２）またはＳｐＯ_２／ＦｉＯ_２。（Ｃ）患者＃１（左）および患者＃２）における体温（ＴＥＭＰ）、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）レベルおよび血中リンパ球数（ＬＹＭ）変化。（Ｄ）患者＃１（左）および患者＃２（右）における肝機能変化。ＡＬＴ：アラニンアミノトランスフェラーゼ ＡＳＴ：アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ；ＴＰ：全タンパク質；ＡＬＢ：アルブミン。

ＳＡＲＳ／ＭＥＲＳ－ＣｏＶまたはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質によって過剰に活性化されたＭＢＬ経路の略図（Ａ）ウイルスは細胞表面に結合し、そしてＳタンパク質はＭＢＬを活性化する。（Ｂ）ウイルスは細胞に侵入し、Ｎタンパク質を含むウイルスタンパク質を発現する。（Ｃ）ウイルス複製および免疫系攻撃による細胞溶解後に、Ｎタンパク質が放出される。（Ｄ）細胞外の可溶性Ｎタンパク質二量体は、ＭＡＳＰ－２と相互作用し、ＭＡＳＰ－２の自己活性化およびＭＢＬへの結合を誘導する。（Ｅ）ＭＡＳＰ－２の促進された活性化は、ＭＢＬ経路の下流にある補体カスケードの過剰活性化を誘導し、そして、分泌または補体を介した細胞毒性による細胞溶解およびＮタンパク質放出を促進し、制御できない組織損傷および炎症を引き起こす可能性がある。

ＭＡＳＰ－２との相互作用に関与するＮタンパク質の重要なモチーフの特定。（Ａ）ＭＡＳＰ－２およびＳＡＲＳ－ＣｏＶのＮタンパク質のドメインおよび突然変異体。（Ｂ）全長ＧＦＰ－Ｎ（１－４２２）およびその切断された突然変異体１－１７６、１７６－２５１、２５２－３６１、および３６２－４２２でトランスフェクトされた２９３Ｔ細胞からの溶解物を、２ｍＭ ＣａＣｌ_２の存在下でＭＡＳＰ－２－Ｆｌａｇ－コンジュゲートアガロースビーズでの免疫沈降に付し、そして抗－ＧＦＰおよび抗－Ｆｌａｇ抗体での免疫ブロット法により分析した。Ｆｌａｇ－ベクター（ｐＣＤＮＡ３－Ｆｌａｇ）でトランスフェクトされた細胞からの溶解物とインキュベートしたＦｌａｇビーズを、ネガティブコントロールとして使用した。（Ｃ）Ｎタンパク質二量化の免疫沈降分析。Ｆｌａｇ－タグ付きＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｎ、ＨＣｏＶ－２２９Ｅ Ｎ、またはＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｎの突然変異体（Δ２８１－３２２、Δ３２１－３２３）を発現する２９３Ｔ細胞からの溶解物を、抗－Ｆｌａｇアガロースビーズとインキュベーションし、そしてＮ－コンジュゲートされたアガロースビーズを平衡させ（ｂａｌａｎｃｅｄ）、対応するＧＦＰ－タグ付きＮタンパク質を発現する２９３Ｔ細胞からの溶解物での免疫沈降に付し、そして抗－ＧＦＰで免疫ブロット法により分析した。（Ｄ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｎ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ Ｎ、ＨＫＵ５－ＣｏＶ Ｎ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ ＮおよびＢａｔ－ＳＡＲＳ様－ＣｏＶ Ｎ配列の比較。二次構造エレメントは、ＥＳＰｒｉｐｔアルゴリズムに基づいて定義されている。線はコイルを示し、そして矢印はβ鎖を示す。

ＳＡＲＳ－ＣｏＶおよびＭＥＲＳ－ＣｏＶのＮタンパク質は、補体レクチン経路のカスケードを促進する。（Ａ）図２Ｄに記載のＣ４開裂率を、デンシトメトリー分析後に、切断されたＣ４／（切断されたＣ４＋残っているＣ４）×１００％の式から計算し、プロットした。データは、３回の試験の平均±Ｓ．Ｄ．として示される。対応のない両側スチューデントｔ検定により、＊Ｐ＜０．０５および＊＊Ｐ＜０．０１。（Ｂ）図２Ｅで述べたＣ４開裂率のデンシトメトリー分析。（Ｃ）Ｃ４を、ＭＡＳＰ－２、ＭＢＬ、マンナン、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ Ｎタンパク質、または突然変異体Ｎタンパク質と、３７℃で１時間または２時間インキュベートした。Ｃ４および開裂されたＣ４フラグメントを、抗Ｃ４α鎖抗体で測定した。（Ｄ）Ｎタンパク質濃度に対する、Ｃａ－Ｍｇ（ＬＰ＋ＡＰ）またはＭｇ－ＥＧＴＡバッファ（ＡＰのみ）で希釈したＣ１ｑ枯渇血清中の活性化Ｃ３沈着量。（Ｅ）Ｎタンパク質濃度に対する活性化Ｃ３沈着量。（Ｆ）Ｎタンパク質濃度に対するＣ５ｂ－９沈着量。（Ｇ）ＳＡＲＳ－ＣｏＶヌクレオカプシドタンパク質の存在下または非存在下での血清中のマウスマクロファージのオプソニン食菌試験。ＨＳＡを、ネガティブコントロールとして使用した。点は、２回の繰り返し実験からの平均値を表す。エラーバー、平均±Ｓ．Ｄ．。対応のない両側スチューデントｔ検定による＊Ｐ＜０．０５および＊＊Ｐ＜０．０１。

ＳＡＲＳ－ＣｏＶヌクレオカプシドタンパク質は、インビボで補体レクチン経路のカスケードを促進する。（Ａ）マウスを、尾静脈を介して１×１０^８ ＰＦＵ Ａｄ－Ｎ／Ａｄ－ｎｕｌｌに３回（１日、２日、３日）感染させ、そしてＬＰＳ（５ｍｇ／ｋｇ）を６日目に点鼻によりおよび尾静脈を介して与えた。ＬＰＳ抗原投与６時間後にマウスを殺した。凍結された肺切片におけるＳＡＲＳ－ＣｏＶ ＮおよびＭＡＳＰ－２複合体形成を、赤色シグナルにより示されるように、ヤギ抗－ＭＡＳＰ－２抗体、マウス抗－Ｎ抗体、および対応する二次試薬を使用するｉｎ ｓｉｔｕ ＰＬＡにより測定した。沈着したＣ３ｃフラグメントを、ＦＩＴＣ－標識抗－Ｃ３ｃ抗体で染色した（緑色）。核（青色）を、ＤＡＰＩで対比染色した。ＬＰＳ＋Ａｄ－ｎｕｌｌは、図３Ｄに示されるＬＰＳ＋Ａｄ－Ｎのネガティブコントロールマウスであった。（Ｂ）マウスＭａｓｐ２遺伝子ノックアウトの図。ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓを介したゲノム操作によりＭａｓｐ２ノックアウトマウスモデル（Ｃ５７ＢＬ／６Ｎ）を作成するために、マウスＭａｓｐ２遺伝子のＥｘｏｎ９からＥｘｏｎ１１を、標的部位として選択した。

２人の患者の胸部コンピュータートモグラフィー。最も重度の重症の平面を示した。患者＃１についてのＣＴスキャンは、抗Ｃ５ａ投与の６日前と比較して、重度の肺炎が異なる肺領域に発生していることが示された。

実施例
アブストラクト：
過剰な免疫応答は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の病因および致死性に寄与するが、そのメカニズムは不明なままである。この試験において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質が、補体活性化のレクチン経路において重要なセリンプロテアーゼであるＭＡＳＰ－２に結合し、構成的補体活性化および炎症性肺傷害の悪化を引き起こすことが明らかになった。Ｎタンパク質－ＭＡＳＰ－２の相互作用をブロックすること、または補体活性化を抑制することのいずれかが、Ｎタンパク質誘発性の補体過剰活性化および肺傷害をインビトロおよびインビボで有意に緩和することができる。補体過剰活性化がＣＯＶＩＤ－１９患者においても観察され、そして、悪化している患者が抗－Ｃ５ａモノクローナル抗体で処置されたとき、有望な抑制効果が観察された。補体抑制は、これらの高病原性ベータ－コロナウイルスによって誘導される肺炎に対する共通の治療アプローチを示す可能性がある。補体活性化のレクチン経路は、高病原性コロナウイルス誘発性肺炎の処置のためのターゲットである。

イントロダクション
２００２年１１月に中国広東省で最初に報告された重度の急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）は、感染力が強く、死に至る呼吸器疾患である（１、２）。重度の急性呼吸器症候群コロナウイルス（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）は、この疾患の新たな病因として同定された。ＳＡＲＳの発生から約１０年後、中東呼吸器症候群コロナウイルス（ＭＥＲＳ－ＣｏＶ）である新たな動物原性感染症コロナウイルスが、中東呼吸器症候群の病因として同定された（３）。最近、新型コロナウイルスのＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２が中国武漢で最初に発見され、中国の他の省、そして世界中に急速に広まった。２０２０年３月１８日現在、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は１８万人以上に感染し、致死率は３．９％である。このウイルスの感染は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ感染と同様の重度の非典型的な肺炎を引き起こした（４）。これらの疾患の病因は積極的に研究されているが、なぜウイルス感染によって高い致死率を伴う呼吸不全に至るのかは、まだ十分に解明されていない（５）。ＳＡＲＳ－ＣｏＶのヌクレオキャプシド（Ｎ）タンパク質は、既知の他のコロナウイルスのＮタンパク質とわずか２０－３０％の相同性を共有する４６ｋＤａのウイルスＲＮＡ結合タンパク質であるが（６）、高度に病原性のコロナウイルスのＮタンパク質は、ＢＬＡＳＴＰによってＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２（９１％）およびＭＥＲＳ－ＣｏＶ（５１％）を含む、非常に類似である（５、７）（８）。Ｎタンパク質は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ感染中に患者の血清サンプル中に最も豊富なウイルス構造タンパク質の一つである（９）。他のウイルスタンパク質ではなく、組換えワクシニアウイルス（１０）またはベネズエラウマ脳炎ウイルスレプリコン粒子（１１）を介するＮタンパク質の前投与が、ＳＡＲＳ－ＣｏＶで抗原投与された高齢のマウスにおいて重度の肺炎を引き起こしたため、Ｎタンパク質がウイルス病因において役割を果たす可能性がある。

補体系は、感染に迅速に応答する免疫監視システムとして機能する。補体系の活性化は、病原体除去、炎症性制御、適応免疫応答をもたらした。しかし、無調節な補体活性化は、高病原性ウイルスによって引き起こされる急性肺疾患の発症に関与している（１２、１３）。補体系は、古典経路（ＣＰ）、レクチン経路（ＬＰ）、または代替経路（ＡＰ）を介して活性化することができる（１４）。ＬＰにおいて、マンナン結合レクチン（ＭＢＬ）（あるいはフィコリン）が、ウイルスの表面またはウイルス感染細胞の表面上のマンナンおよびＮ－アセチルグルコサミン残基の糖鎖アレイに結合し、補体カスケードを直接的に開始することができることが知られている唯一のＭＢＬ関連プロテアーゼであるＭＢＬ関連セリンプロテアーゼ－２（ＭＡＳＰ－２）の活性化を引き起こす（１５、１６）。ＭＢＬは、インビトロで用量依存的、カルシウム依存的、およびマンナン阻害可能な様式においてＳＡＲＳ－ＣｏＶ－感染細胞に結合し、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ上の補体Ｃ４の沈着を増強させる（１７）。ＳＡＲＳ－ＣｏＶスパイク（Ｓ）タンパク質上のＮ連結グリコシル化部位Ｎ３３０は、ＭＢＬとの特異的相互作用に重要である（１８）。活性化された補体Ｃ３およびＣ４フラグメントの高いレベルがＳＡＲＳ患者において見られ、補体経路の活性化を示したが（１９、２０）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－誘導補体活性化のメカニズムは、よくわかっていない。同様の病因がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染においても生じるか否かも不明である。

以前に、我々は、Ｎタンパク質が、ＭＢＬ関連セリンプロテアーゼ－２（ＭＡＳＰ－２）の代替スプライシング産物であるＭＡＰ１９を含む多くの宿主タンパク質と相互作用することを証明した（２２）。したがって、この試験において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎタンパク質とＭＡＳＰ－２との相互作用を集中的に研究し、そして宿主免疫および炎症に対するこれらの相互作用の病理学的効果も解明し、これは現在流行中のＣＯＶＩＤ－１９に対する免疫調節に基づく療法についてのメカニズムサポートを提供する。

結果
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２およびＭＥＲＳ－ＣｏＶのＮタンパク質はＭＡＳＰ－２と相互作用する
ＳＡＲＳ－ＣｏＶのＮタンパク質およびＭＡＳＰ－２間の結合を研究し、そして２つのタンパク質の相互作用するドメインを明確にするために、Ｆｌａｇ－タグ付き全長ＭＡＳＰ－２、Ｎ－末端ＣＵＢ１－ＥＧＦ－ＣＵＢ２領域、またはＣ－末端ＣＣＰ１－ＣＣＰ１－ＳＰ領域（図７Ａ）を発現するヒト２９３Ｔ細胞の溶解物を、抗－Ｆｌａｇ抗体－コンジュゲートされたアガロースビーズを使用して抗－Ｆｌａｇ免疫沈降に付した。免疫沈降物を、次に、２ｍＭ ＣａＣｌ_２または１ｍＭ ＥＤＴＡの存在下で、ＧＦＰ－タグ付きＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｎタンパク質（ＧＦＰ－ＳＡＲＳ Ｎ）または切断された突然変異体を発現する２９３Ｔ細胞溶解物とインキュベートした。吸着物を、免疫ブロット法により抗－Ｆｌａｇまたは抗－ＧＦＰ抗体でプローブした。Ｆｌａｇ－ＭＡＳＰ－２およびＧＦＰ－ＳＡＲＳ Ｎ間の結合が、ＣａＣｌ_２の存在下でのみ観察され（図１Ａ）、ＭＡＳＰ－２－ＭＢＬ結合およびＭＡＳＰ－２自己活性化のためにＣａ^２＋の必要性と一致する。ＭＡＳＰ－２のＣＣＰ１－ＣＣＰ２－ＳＰ領域（図１Ａ）およびＮタンパク質のＮ－末端ドメイン（残基１－１７５）（図７Ａおよび図７Ｂ）は結合に重要であったが、ネガティブコントロールまたは他の切断された領域は結合せず、そしてＧＦＰ－タグ付き全長または切断されたＮタンパク質はマウスＩｇＧコンジュゲートされたビーズと共免疫沈降しなかった（図１Ａおよび図７Ｂ）。

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｎタンパク質を、早ければ症状発症後１日目から患者の血清中に検出することができる（２４）。血清中のＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｎタンパク質結合をシミュレートするために、Ｆｌａｇ－タグ付きＮタンパク質（１ｎｇ／ｍｌ）をヒトまたはマウス血清に加え、そして抗－Ｆｌａｇ抗体コンジュゲートアガロースビーズで沈殿させた。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｎタンパク質は、ヒトおよびマウスの両方の血清から得られたＭＡＳＰ－２と相互作用した（図１Ｂ）。さらなる切断および欠失分析は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｎタンパク質のコイルモチーフ（残基１１５－１３０）に位置するアミノ酸残基１１６－１２４が、ＭＡＳＰ－２との相互作用に不可欠であったことを示した（図１Ｃ）。しかしながら、ＭＡＳＰ－２とＮタンパク質ダイマーを形成しない突然変異体であるＳＡＲＳ－ＣｏＶ ＮΔ３２１－３２３（図７Ｃ）との結合は、大きく影響しなかった（図１Ｃ）。

ＭＡＳＰ２相互作用のためにＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｎタンパク質において重要なモチーフ（残基１１６－１２４）は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎ（１１５－１２３）およびＭＥＲＳ－ＣｏＶ Ｎ（１０４－１１２）における対応するモチーフと高い同一性を共有し（図７Ｄ）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ２およびＭＥＲＳ ＣｏＶのＮタンパク質がまたＭＡＳＰ２と相互作用することを示唆する。予期されるとおり、外因性に発現されるＭＥＲＳ－ＣｏＶ ＮおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎの両方はＭＡＳＰ－２と関連し（図１Ｄおよび１Ｅ）、そしてＭＥＲＳ－ＣｏＶ ＮのΔ１０４－１１２欠失突然変異体は予期される低下した結合を示した（図１Ｄ）。したがって、コロナウイルスのＮタンパク質にわたって共通するモチーフが、ＭＡＳＰ－２結合に重要である。

ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２のＮタンパク質はＭＡＳＰ－２－依存補体活性化を強化する
ＭＡＳＰ－２のＣＣＰ１－ＣＣＰ２－ＳＰドメインは、自己活性化および基質結合活性に関与し、これが次に補体レクチン経路活性化を仲介する（２５）。上記で証明されたＭＡＳＰ－２：ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｎタンパク質結合は、Ｎタンパク質が二量体化のために必要とされるＭＡＳＰ－２活性化および開裂を制御している可能性があることを示唆する。ＭＡＳＰ－２：ＭＡＳＰ－２結合を実証するために、Ｆｌａｇ－タグ付き－ＭＡＳＰ－２－コンジュゲートされたビーズを、Ｎタンパク質およびＭＢＬの存在／非存在下でＭｙｃ－タグ付きＭＡＳＰ－２を発現する２９３Ｔ細胞の溶解物とインキュベートした。ＭＡＳＰ－２－ＦｌａｇへのＭＡＳＰ－２－Ｍｙｃの結合は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｎタンパク質によって、ほぼ等モルの化学量論的に強化された（図２Ａ）。次に、精製されたＭＡＳＰ－２－Ｆｌａｇを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｎタンパク質有または無でマンナンおよびＭＢＬとインキュベートした。ＭＡＳＰ－２自己活性化によって生じる開裂されたＭＡＳＰ－２フラグメント（残基４４５－６８６）の高いレベルは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｎタンパク質の存在下で生成された（図２Ｂ）。

ＭＡＳＰ－２のＭＢＬ結合能力に対するＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｎタンパク質の効果を研究するために、精製されたＭＢＬおよびＭＡＳＰ－２（２６）を、ＭＡＳＰ２活性化を回避するために４℃でマンナン被覆マイクロプレートウェルにおいてインキュベートし、そして、ＭＡＳＰ－２：ＭＢＬ結合の動態を抗－ＭＡＳＰ２抗体を使用して評価した。Ｎタンパク質に対してネガティブコントロールとして使用される結合バッファーにおける高い濃度成分であるヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）と比較して、ＭＢＬへのＭＡＳＰ－２の結合は、比較的低い濃度（１％～０．１％のＭＡＳＰ２）でのＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｎタンパク質およびＣａ^２＋の存在下で有意に増強され、そして増強が抗－Ｎタンパク質抗体によって効果的に逆転した（図２Ｃ）。さらに、Δ１１６－１２４またはΔ３２１－３２３欠失を有するＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｎタンパク質または低い病原性のヒトコロナウイルス２２９Ｅ－ＣｏＶからのＮタンパク質は、全長ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｎタンパク質と比較して、ＭＡＳＰ－２：ＭＢＬ結合についてほとんどあるいは全く影響を与えなかった（図２Ｃ）。これらの結果は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｎタンパク質が強化したＭＡＳＰ－２活性化がＭＡＳＰ－２結合だけでなく、Ｎタンパク質二量化にも依存していることを示した。

ＭＡＳＰ２が、補体成分Ｃ２およびＣ４を開裂し、活性化されると補体系のレクチン経路においてＣ３転換酵素を生成する。次に、ＬＰ補体活性化に対するＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｎタンパク質の効果を、Ｃ４開裂により評価した。精製されたＣ４を、当モルのＮタンパク質の存在／非存在下でＭＡＳＰ－２、マンナン、ＭＢＬとインキュベートし、そしてＣ４開裂は、マンナンおよびＭＢＬの存在下でＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｎタンパク質により有意に強化されることを観察した（図２Ｄおよび図８Ａ）。したがって、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｎタンパク質（Δ１１６－１２４およびΔ３２１－３２３）の突然変異体ならびにＨ２２９Ｅ－ＣｏＶからのＮタンパク質は、ＭＡＳＰ－２－介在Ｃ４加水分解を促進しなかった（図２Ｅおよび図８Ｂ）。注目すべきは、抗－ＭＡＳＰ－２モノクローナル抗体またはＭＡＳＰ－２のインヒビターであるＣ１ＩＮＨ（２７）は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶを強化したＣ４加水分解をブロックし、Ｎタンパク質を強化したＣ４開裂がＭＡＳＰ－２活性化に依存したことを示唆する（図２Ｅおよび図８Ｂ）。さらに、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ Ｎはまた、Ｃ４開裂を強化することを見出した（図８Ｃ）。これらの結果は、Ｎタンパク質がＣ４開裂およびしたがってＭＡＳＰ－２結合および活性化による補体活性化を促進することを示している。

レクチン経路を介する補体活性化に対するＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｎタンパク質の影響を、補体沈着アッセイによりさらに研究した。精製されたＣ４を、示されたＮタンパク質の存在下で固定化されたＭＢＬ ＭＡＳＰ－２複合体とインキュベートした。Ｈ２２９Ｅ－ＣｏＶ Ｎではなく、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ２のＮタンパク質は、用量依存的に、ＭＡＳＰ２の活性に依存するＣ４ｂ沈着を強化した（図２Ｆ、図２Ｇおよび図２Ｈ）。次に、固定されたマンナンを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｎタンパク質の存在／非存在下でＣ１ｑを枯渇させた血清（古典的経路除去するために）（２８）とインキュベートし、そして沈着したＣ３フラグメント（Ｃ３ｂ、ｉＣ３ｂおよびＣ３ｄｇ）を抗活性化Ｃ３抗体により検出した。Ｃ４ｂ沈着と共に、活性化Ｃ３の沈着が、～４０ｎＭまでのＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｎタンパク質レベルの増加と共に明らかに増加し（図８Ｄ）、Ｃ３転換酵素の増強された活性を示唆した。恐らく、表面が高密度のＣ３ｂでコーティングされているとき、血清中の可溶性インヒビター（例えばファクターＨおよびファクターＩ）によるＣ３ｂのさらなる開裂のために（２９、３０）、Ｃ３ｂ沈着は、高い濃度のＮタンパク質の存在下で減少した（図８Ｄおよび８Ｅ）。加えて、ＳＡＲＳ ＣｏＶ Ｎタンパク質は、ＥＧＴＡを含むカルシウムフリーバッファーにおいて活性化Ｃ３沈着についてほとんどあるいは全く影響を与えず、これは、ＳＡＲＳ ＣｏＶ Ｎタンパク質が強化したＣ３活性化が、Ｃ３活性化がＣａ^２＋独立である、代替経路（ＡＰ）ではなくレクチン経路（ＬＰ）を介して起こるということを示唆する（図８Ｅ）。我々は、さらに、Ｃ５ｂ ９複合体の沈着を試験した。増幅された補体カスケードの結果として、複合体の有意に増加した沈着が、患者血清で観察されるのと同様にはるかに低濃度で、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｎタンパク質によって誘導された（図８Ｆ）（２４）。

活性化された補体は、Ｃ３ｂまたはＣ５ｂ介在オプソニン化により、病原体および細胞残屑の効率的な食作用において重要な役割を果たす（３１）。補体依存性食作用を研究するために、大腸菌およびマウス腹膜マクロファージを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｎタンパク質有または無で希釈したＣ１ｑ枯渇血清中で一緒にインキュベートした。結合したＣ３またはＣ３開裂後の生成物であるその大型フラグメントＣ３ｂを、ＦＩＴＣ標識化抗Ｃ３ｃ抗体で染色し、そしてＣ３コンジュゲートされた大腸菌を含むＦＩＴＣ陽性マクロファージを顕微鏡下で計測した。補体活性化と共に、ＭＡＳＰ－２を含む補体成分を含むマウス血清の存在下でマウス腹膜マクロファージによる補体依存性食作用を、ＨＳＡコントロールと比較してＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｎタンパク質によって増強した（図８Ｇ）。これらの見出したことは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｎタンパク質が非古典的経路を介する補体系の活性化およびオプソニン効果を効果的に刺激することを示唆した。

ＳＡＲＳ－ＣｏＶおよびＭＥＲＳ－ＣｏＶ Ｎタンパク質は、ＭＡＳＰ－２関与補体活性化によるＬＰＳ誘発肺炎を悪化させる
補体の持続的な活性化は、制御されていない炎症を引き起こす。炎症に対するＮタンパク質が強化したＭＡＳＰ－２活性化の効果を研究するために、マウスを、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｎ（Ａｄ－ＳＡＲＳ Ｎ）またはその突然変異体を発現するアデノウイルス（１×１０^９ ＰＦＵ）またはアデノウイルスビヒクルのみ（Ａｄ－ｎｕｌｌ）に前感染させた。次に、マウスにＭＢＬ結合モチーフを含むＬＰＳを抗原投与し、ＬＰを活性化し、そして炎症を誘発させた（３２）。アデノウイルスビヒクルに前暴露されたマウス１０匹のうち８匹は５ｍｇ／ｋｇ ＬＰＳを抗原投与されたとき生存したが（図３Ａ）、Ａｄ－ＳＡＲＳ Ｎに前暴露された全１０匹のマウスは同じ投与量でのＬＰＳ投与後１２時間以内に死亡した（図３Ａ）。重度の肺障害および大量の炎症性細胞の浸潤がまた、死亡したマウスにおいて観察された（図３Ｂ）。これまでの知見と一致して、Ｎタンパク質におけるΔ１１６－１２４またはΔ３２１－３２３欠失をそれぞれ有するＡｄ－２２９Ｅ ＮおよびＡｄ－ＳＡＲＳ Ｎの前感染は、マウス死亡率に対する効果を著しく減少させた。重要なことには、抗ＭＡＳＰ－２抗体またはＣ１ＩＮＨをＡｄ－ＳＡＲＳ Ｎ前感染マウスにＬＰＳ投与と同時に投与すると、ＬＰＳによって誘導される死亡率が有意に減少した（図３Ａ）。重度の肺障害および炎症性細胞の大量浸潤がまた、これらのマウスにおいて観察された（図３Ｂ）。これらの結果は集合的に、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｎタンパク質がＭＡＳＰ－２活性化を介してＬＰＳ誘発炎症を大幅に強化し、それによってＬＰ関与補体カスケード応答を開始させることを証明する。

ＬＰＳおよびＮタンパク質によって誘導されるマウスにおいて補体活性化を研究するために、Ａｄ－ＳＡＲＳ Ｎ（１×１０^８ ＰＦＵ）をあらかじめ感染させたマウスにＬＰＳ（５ｍｇ／ｋｇ）を抗原投与した。ＬＰＳ投与後６時間で、マウスを殺し、そしてパラホルムアルデヒドで固定した肺組織を抗－Ｃ４ｂ抗体での免疫組織化学的染色（図３Ｃ）またはＦＩＴＣ－標識抗－Ｃ３ｃ抗体での免疫蛍光分析（図３Ｄ）に付した。肺におけるＣ４ｂおよび活性化Ｃ３沈着は、ＬＰＳおよびＡｄ－ｎｕｌｌで処置したマウスの肺における弱い染色と比較して、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｎタンパク質を発現するマウスにおいて著しく増加した（図３ＣおよびＤ）。

ＭＡＳＰ－２とＮタンパク質とのインビボ結合を、さらに、抗－Ｎ抗体および抗－ＭＡＳＰ－２抗体でｉｎ ｓｉｔｕ近接ライゲーションアッセイ（ＰＬＡ）により評価し（図３Ｄ、図９Ａ）、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ ＮおよびＭＡＳＰ－２が互いに結合した時にのみ検出可能である赤いスポットが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｎを発現するマウスからの肺細胞に豊富に観察されたが、ネガティブコントロール動物において観察されなかった。これらの結果は、マウス肺組織において、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ ＮによるＭＡＳＰ－２のｉｎ ｓｉｔｕ直接結合および活性化を確認した。

同様に、ＬＰＳを抗原投与されたマウスは、Δ１０４－１１２突然変異体（Ａｄ－ＭＥＲＳ ＮΔ１０４－１１２）ではなく、ＭＥＲＳ－ＣｏＶ Ｎタンパク質（Ａｄ－ＭＥＲＳ Ｎ）を発現するアデノウイルスを７日間で前感染させたとき、重度の肺炎を起こし、２４時間以内に１００％死に、これは、Ｃ１ＩＮＨおよび抗－ＭＡＳＰ－２抗体により部分的に救済された（図３Ｅ）。これらの結果は、Ｎタンパク質がＳＡＲＳ－ＣｏＶおよびＭＥＲＳ－ＣｏＶの両方によって使用され、ＭＡＳＰ－２介在レクチン経路を介した補体活性化を促進することを示す。

Ｎタンパク質の病原性を、さらに、ＭＡＳＰ－２プロテアーゼ活性欠損を有するｍａｓｐ２ノックアウトマウスを用いて、同様に研究した（図９ｂ）。マウスにＡｄ－ＳＡＲＳ ＮまたはＡｄ－ＭＥＲＳ Ｎ（１×１０^８ＰＦＵ）を５日間で前感染させ、次にＬＰＳで抗原投与した。野生型マウスと比較して、ｍａｓｐ２ノックアウトマウスはより長く生存し、より高い生存率を有し（図３Ｆ）、これは、ＭＡＳＰ－２欠損のために欠陥のある補体活性化に起因し得る。

補体カスケードは、ＣＯＶＩＤ－１９患者の肺において過剰活性化される
ＳＡＲＳ－ＣｏＶおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２はマウスにおいて軽度の肺障害を引き起こすだけであり、そしてマウス適応ＳＡＲＳ－ＣｏＶを含む生きたＳＡＲＳ－ＣｏＶによる研究は制御により許可されていないため、補体ＬＰ経路の過剰活性化がＣＯＶＩＤ－１９患者において起こるという臨床証拠が得られた。ＣＯＶＩＤ－１９で死亡した患者のパラホルムアルデヒドで固定された肺組織を採取し、ＭＢＬ、ＭＡＳＰ－２、Ｃ４α、Ｃ３およびＣ５ｂ－－－９抗体で免疫組織化学的染色に付した。患者肺組織におけるＭＢＬ、ＭＡＳＰ－２、Ｃ４、Ｃ３およびＣ５ｂ－９は強く陽性染色であり（図４）、これは、補体成分がＩ型およびＩＩ型肺胞上皮細胞ならびに炎症性細胞、一部の過形成肺細胞、および壊死した細胞残屑を含む肺胞腔内の滲出物に沈着していたことを示唆する。さらに、ＣＯＶＩＤ－１９患者、特に重症患者において、血清Ｃ５ａレベルの有意な増加もまた観察された。これらの結果は、補体経路がＣＯＶＩＤ－１９患者の肺において積極的に活性化されていたことを示唆している。

補体標的療法はＣＯＶＩＤ－１９に対して有望な治癒効果を示す
過剰炎症性およびサイトカイン・ストームは、補体経路の無制限の活性化に帰する可能性がある、ＣＯＶＩＤ－１９の重症度および致死率の一因となり得る。したがって、ＭＡＳＰ－２およびその下流のシグナル分子、例えば強力なアナフィラトキシンＣ５ａの下方調節は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２によって誘導される肺炎を制御するための新しいアプローチを提供し得る。

ＣＯＶＩＤ－１９治療における我々の知見およびその可能性および適用に基づき、汗腺膿瘍についての第ＩＩ相臨床試験中であった、配列番号３４の可変重鎖配列および配列番号３５の可変軽鎖配列を含む組み換えＣ５ａ抗体（同じ細胞株から生じたこれらの可変領域を有するＩｇＧ抗体は、互換的にＩＦＸ－１またはＢＤＢ－００１と呼ばれる）は、ＣＯＶＩＤ－１９の処置のための第ＩＩ相臨床試験について国家医療製品管理局（ＮＭＤＡ）により迅速に承認された（２０２０Ｌ０００３）。患者からのインフォームドコンセントを得て霍山病院倫理委員会の承認のもと、「軽度のＣＯＶＩＤ－１９患者における多施設無作為二重盲検プラセボ対照試験」およびオープンラベルの「重度および重症のＣＯＶＩＤ－１９を有する患者における２コホート臨床試験」が、同時に実施された。ＣＯＶＩＤ－１９コホートにおける多くの患者からの大規模なデータセットは、試験が終了した時に別の場所で報告されるが、ここで我々は、オープンラベル試験における抗Ｃ５ａ療法を投与された最初の２人の患者について報告する。

武漢市在住の５４歳男性である患者＃１は、発熱を有する症状の発生後４日目（発病５日目）に東西湖区（Dongxihu）病院に入院した。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染がＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２用のｒＲＴ－ＰＣＲにより確認され、胸部ＣＴスキャンが両側混濁を示した。疾患は、高熱（３８．７℃～３９．８℃）、室内空気にてＳｐＯ_２＜９３％、ＣＴスキャンにて肺炎進行、および重度の肝障害と、発症９日目から病状は悪化していった。プレドニゾン（４日間４０ｍｇ／日）を病気の１０から１３日目に投与したが、状態が悪化したため、病気の１４日目に、患者を重度のＣＯＶＩＤ－１９患者のために緊急に設立された新たな病院である武漢火神山（Wuhan Huoshenshan）医院に移し（図５Ａ）、中程度のＡＲＤＳ（酸素化指数＜１５０）、呼吸速度３０／分および１分間室内空気に暴露したとき７７％への経皮的動脈血酸素飽和度（ＳｐＯ_２）下落を有する重大な状態における重度のケースと考えられた。ＳｐＯ_２＞９５％を目標に高流量経鼻酸素（ＨＦＮＯ）を含む対症療法を提供した（図５Ｂ、左）。彼はまた、抗生物質（モキシフロキサシン）およびヒト血清アルブミンを投与され、プレドニゾンを中止した。抗－Ｃ５ａモノクローナル抗体（ＢＤＢ００１）での処置を、発病１５日目の朝に開始した。抗体を、１、２、３、５、７、９、１１および１３日目に３００ｍｇ／ｄの投与量で２５０ｍｌ塩水中で静脈内に与えた。有害事象は観察されず、臨床状態が翌日に改善し、同じ日の夜に正常体温（図５Ｃ、左）、増加した酸素化指数（ＰａＯ_２／ＦｉＯ_２）（図５Ｂ、左）およびリンパ球細胞数（図５Ｃ、左）、減少したＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）濃度（図５Ｃ、左）、および有意に改善した肝機能（減少したＡＬＴ、ＡＳＴ、および増加した総血清タンパク質および血清アルブミン濃度により示される、図５Ｄ、左）であった。吸気Ｏ_２の割合および高流量経鼻酸素（ＨＦＮＯ）のガス流速は、結局は、最高（８０％、４０Ｌ／分から３０％、２０Ｌ／分）から目標ＳｐＯ_２＞９５％に減少した（図５Ｂ、左）。重大な状態における患者を仮設病院におけるＣＴスキャンに連れていくリスクが高いため（距離および雨天）、抗－Ｃ５ａ投与直前のＣＴスキャンは評価のために利用できなかった。それにもかかわらず、肺炎は、１回目の投与後１０日間と比較して１回目の投与後２０日間にて有意に改善していた（図１０）。

患者＃２は、発熱および咳を有する症状の発症後５日目（病気の６日目）に第６病院に入院した６７歳男性であった。ＣＴスキャンは、左肺の上葉に混濁を示した（図１０）。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の感染もまた、病気の１１日目にｒＲＴ－ＰＣＲにより確認した。抗ウイルス（アルビドール）および抗生物質（モキシフロキサシン）を、他の支持療法と共に投与した。状態は、重度の咳および高熱で８日目まで悪化した（３９．７℃、図５Ｃ、右）。メチルプレドニゾロン（４０ｍｇ／日、病気後８日目から７日間）は、症状の改善はほとんど示さなかった。患者を、１０日目に武漢火神山医院に移し（図５Ａ）、病気は、病気の１１日目にＳｐＯ_２（１４日目に室内空気にて＜９０％）、高熱（１０－－－１３日目に＞３９℃、図５Ｃ、右）および胸部ＣＴにて肺炎によって示されるとおり悪化し続けた（図１０）。患者は、重度の咳、胸部圧迫感および呼吸困難を報告した。ＨＦＮＯを、ＳｐＯ_２＞９５％を維持するために与えなければならなかった。抗－Ｃ５ａを病気１４日目の朝に投与し、患者＃１と同様に続けた。次に、平熱が同じ日に観察された（図５Ｃ、右）。咳、呼吸困難および胸部圧迫感が、次の日（病気の１５日目）により良くなっていることが報告された。有意な減少したＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）レベル、有意に増加した白血球およびリンパ球数もまた、数日に観察された（図５Ｃ、右）。肝機能は徐々に改善された（図５Ｄ、右、１５日目のデータは利用できない）。ＳｐＯ_２＞９５％を維持するために必要な吸気Ｏ_２の流速および割合は、ＳｐＯ_２／ＦｉＯ_２の増加に伴い、徐々に減少した（図５Ｂ、右）。２６日目（１回目の投与後１２日）の胸部ＣＴはまた、低下した肺炎を示した（図５Ｂ）。

これらのデータは、２名の患者が抗Ｃ５ａモノクローナル抗体治療から有意に利益を得たことを示唆した。

議論
過去１７年間、連続的に発生したＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、種の壁を越えて、新たな感染症および社会的パニックをヒトに持ち込んだ。これら全ての高度に病原性のコロナウイルスは、急性肺傷害および急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）を引き起こし、したがって増加した重症度および致死率を引き起こす。ウイルスに感染した患者は、重度の免疫傷害に起因する非典型的な肺炎を発症し得る。「サイトカイン・ストーム」（５）と呼ばれる炎症性サイトカインおよびケモカインの大量放出により特徴付けられた過剰なヒト免疫応答は、最新のＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２を含む高度に病原性のコロナウイルスによって引き起こされる重度の肺炎の主なイニシエーターであると考えられる（４）。免疫病原性がＳＡＲＳまたはＭＥＲＳにおいて部分的に関与されているが、宿主免疫系のウイルス誘導性過活性化に関与するメカニズムが十分に理解されていないままである。

ここで、本発明者らは、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２が、補体カスケードの制御されていない活性化、補体沈着、およびＣ４の増強された開裂に至る、ウイルスのＮタンパク質がＭＢＬの結合および強化、ＭＡＳＰ－２のＣａ^２＋－依存性自己活性化につながる、共通のメカニズムを共有することを開示する（図１－２および６）。ＭＡＳＰ－２へのＮタンパク質の結合が、ＭＡＳＰ－２－介在－レクチン経路活性化の効果を増幅する。Ｎタンパク質突然変異体は、ＭＡＳＰ－２と相互作用しないか、またはＮダイマーを形成せず、そしてＭＡＳＰ－２介在レクチン経路活性化に対してほとんどあるいは全く効果を有さず（図１ＣおよびＤ）、Ｎタンパク質の効果が結合および二量化に依存することを示唆する。

「両刃の剣」として、補体は、病原体に対する先天免疫に重要である。アナフィラトキシン、例えばＣ３ａおよびＣ５ａは、免疫細胞を活性化し、したがって種々のサイトカインの放出を誘導することができる。活性化された補体カスケードは、細胞溶解性の末端補体複合体Ｃ５ｂ－９とＣ３ｂおよびＣ５ｂフラグメントを生成する（３１、３３）。これらのペプチドは、プロスタグランジン（ＰＧ）Ｅ２、トロンボキサンＢ２およびロイコトリエンを含むアラキドン酸代謝産物の合成を誘導し（３２、３４）、これはさらに好中球、単球および好酸球の補充および活性化を誘導し、そして多くの炎症性サイトカインおよびメディエーターの生産を刺激する（３５）。これらのサイトカインは、炎症プロセスを誘発および維持し、そして先天免疫によるウイルスとの闘いを助ける。それにもかかわらず、無制御な補体活性化は常に播種性血管内凝固（ＤＩＣ）、炎症、細胞死、および免疫まひに寄与し、そして最後に多臓器不全および死に至るため、補体関与先天免疫活性化は、微調整されなければならない。コロナウイルスＮタンパク質が補体活性化を強化するという驚くべき知見は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ、ＭＥＲＳ－ＣｏＶおよびＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染により誘導される肺炎の原因への新たな見識を提供する。さらに、我々はまた、Ａｄ－ＳＡＲＳ ＮまたはＡｄ－ＭＥＲＳ Ｎの前感染が、ＬＰＳ誘発肺炎の致死率を明らかに増加させることを見いだした（図３）。それはまた、恐らく、二次細菌感染から放出される大量のＬＰＳによって引き起こされる組織損傷を悪化させる（３７、３８）。

コロナウイルスの病因におけるＮタンパク質介在ＭＡＳＰ－２およびしたがって補体カスケード過剰活性化の関与は、Ｃ５ａ／Ｃ５ａＲ経路の既知のインヒビターの使用に対する、およびしたがってＳＡＲＳ、ＭＥＲＳまたは最新のＣＯＶＩＤ－１９を処置するための新たな方法に対する戦略を提供する。第一に、抗体による血清中のＮタンパク質の中和は、ＬＰＳ／Ａｄ－ＳＡＲＳ ＮまたはＬＰＳ／Ａｄ－ＭＥＲＳ Ｎの抗原投与されたマウスにおいて、効果的に肺傷害を緩和し、そして致死率を低下させた。偶然に一致して、スパイク特異的抗体ではなくＮタンパク質特異的抗体のより高いレベルを産生するＳＡＲＳ患者がより容易に回復する傾向にあり、Ｎ抗体のレベルがＳＡＲＳの結果と相関していることを示唆する（３９）。我々の見出したことによると、同様のメカニズムは、ＭＥＲＳ－ＣｏＶまたはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染において存在し得る。

第二に、Ｍａｓｐ２ノックアウトマウスは、有意に穏やかな症状を示し、そして、疾患のより短い経過は、ＬＰＳ誘発のＮタンパク質をブーストされたマウス肺炎モデルにおいて、この重度の肺炎におけるＭＡＳＰ－２の有害な役割を確認した。したがって、抗－ＭＡＳＰ－２抗体またはＭＡＳＰ－２インヒビターＣ１ＩＮＨの投与は、有望な処置効果を示した（図３）。より高いアフィニティーおよび中和活性を有する改善されたＭＡＳＰ－２抗体、例えばＯＭＳ７２１（４０）（これは血栓性微小血管症に有望な効果を示した）、または注射可能なＣ１ＩＮＨ薬物、例えばＨＡＥＧＡＲＤＡは、効果的な保護を提供する可能性がある。さらなる臨床的な評価は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ ２誘発肺炎処置の処置のために行われる価値がある。

第三に、我々は、Ａｄ－ＳＡＲＳ Ｎ前感染およびＬＰＳプライムされたマウスモデルにおける観察と一致している、死亡した患者の肺組織において補体カスケードの過剰活性化が観察された。高レベルのＣ５ａは、穏やかなＣＯＶＩＤ－１９患者ではなく重度の患者の血清において蓄積された。よって、補体カスケード産物標的化免疫調節が、病原性コロナウイルス関連疾患において炎症コントロールに対して有効であり得ることを理解できる。この経路において、Ｃ５ａは、炎症を引き起こす最も強力な補体タンパク質である。Ｓｔａｉｄｓｏｎ（ＢＤＢ００１）およびｉｎｆｌａＲｘ ＧｍｂＨ（ＩＦＸ－１、同じ操作された細胞株によって生産される）による他の疾患において第２相試験における我々の観察および安全性記録に基づいて、組換え抗－Ｃ５ａ抗体ＢＤＢ００１は、重度のおよび重大なＣＯＶＩＤ－１９患者の処置のための臨床試験についてＮＭＤＡによって承認された。両者とも悪化している状態であった少なくとも最初の２人の患者において、抗－Ｃ５ａ抗体は臨床医の期待値を超える迅速なおよび有望な効果を示した。臨床試験が終了するまで、最終的な有効性が公開されないが、抗－Ｃ５ａ抗体がＣＯＶＩＤ－１９の処置のための新たなアプローチを提供するであろうことを予期させる。

材料および方法
細胞培養およびトランスフェクション
２９３Ｔ細胞株を、Ｐｅｋｉｎｇ Ｕｎｉｏｎ Ｍｅｄｉｃａｌ ＣｏｌｌｅｇｅのＣｅｌｌ Ｒｅｓｏｕｒｃｅ Ｃｅｎｔｅｒから得た。細胞を、１０％熱不活性化ウシ胎児血清（ＦＢＳ）（ＨｙＣｌｏｎｅ）、２ｍＭ Ｌ－グルタミン、１００ ユニット／ｍｌ ペニシリン、および１００μｇ／ｍｌ ストレプトマイシンを補ったダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）において培養した。細胞を、製造業者のプロトコールによってLipofectamine ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用してプラスミドＤＮＡでトランスフェクトした。

ベクターおよびタンパク質のエピトープタグ付け
ＳＡＲＳ－ＣｏＶ（ＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ＃ＡＹ２７４１１９）のＮ遺伝子を、患者血清サンプルのＳＡＲＳ－ＣｏＶ ＲＮＡからＲＴ－ＰＣＲにより増幅し（上流プライマー：５’－ＣＧＧＡＡＴＴＣＣＡＴＡＴＧＴＣＴＧＡＴＡＡＴＧＧＡＣＣＣＣＡＡ－３’；下流プライマー：５’－ＣＧＧＧＡＴＣＣＴＴＡＴＧＣＣＴＧＡＧＴＴＧＡＡＴＣＡＧＣ－３’）、ｐｃＤＮＡ３ベースのＦｌａｇベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、ｐＣＭＶ－Ｍｙｃ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）、ｐＧＥＸ－４Ｔ－２（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈ ｃａｒｅ）、およびｐＥＧＦＰＣ１（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）のＢｇｌＩＩおよびＥｃｏＲＩ部位にクローニングした。ＭＥＲＳ－ＣｏＶのＮ遺伝子を化学的に合成し（Ｈｕａｘｉｎｒｃｏｍｍ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．、Ｌｔｄ）、ＢａｍＨＩおよびＥｃｏＲＩ部位でｐｃＤＮＡ３ベースのＦｌａｇベクターにクローニングした。ＳＡＲＳＣｏＶ－２のＮ遺伝子を化学的に合成し（Ｇｅｎｅｒａｌ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ （Ａｎｈｕｉ） Ｃｏ． Ｌｔｄ）、ＫｐｎＩおよびＸｂａＩ部位でｐｃＤＮＡ３．１－ベースのＨＡベクターにクローニングした。

免疫沈降および免疫ブロット法
細胞溶解物を、１％ Ｎｏｎｉｄｅｔ Ｐ－４０を含む溶解バッファー（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、ｐＨ７．５、１ｍＭ フッ化フェニルメチルスルホニル、１ｍＭ ジチオスレイトール、１０ｍＭ フッ化ナトリウム、１０μｇ／ｍｌ アプロチニン、１０μｇ／ｍｌ ロイペプチン、および１０μｇ／ｍｌ ペプスタチンＡ）中に作製した。可溶性タンパク質を、抗－Ｆｌａｇ Ｍ２ アガロース（Ｓｉｇｍａ）での免疫沈降に付した。次に、吸着物をＳＤＳ－ＰＡＧＥにより分離し、セミドライトランスブロット（Ｂｉｏｒａｄ）によりＩｍｍｏｂｉｌｏｎ－Ｐ移動膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）上に移動させた。膜を、５％ Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｃｋｅｒ（Ｂｉｏｒａｄ）によりブロックした。免疫ブロット分析を、セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）－コンジュゲートされた抗－Ｆｌａｇ（Ｓｉｇｍａ）、抗－β－アクチン（Ｓｉｇｍａ）、抗－緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）、抗－ＭＡＳＰ－２（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ）、抗－Ｃ４α（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ）、ＨＲＰ－コンジュゲートされた抗－Ｍｙｃ（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ）、およびヤギ抗－マウス免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）（Ａｍｅｒｓｈａｍ／Ｐｈａｒｍａｃｉａ）抗体で行った。抗原抗体複合体を化学発光（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈ Ｃａｒｅ）によって可視化した。

ＳＡＲＳ－ＣｏＶおよびＭＥＲＳ－ＣｏＶ Ｎタンパク質の精製
以前に記載されているとおり（１）、ｐＥＴ２２ｂ－ＳＡＲＳ／ＭＥＲＳ－ＣｏＶ Ｎを発現株ＢＬ２１（ＤＥ３）に形質転換した。８時間１ｍＭ ＩＰＴＧで誘導後、細菌を遠心分離により回収し、ｂｕｆｆｅｒ Ａ （２５ｍＭ Ｎａ_２ＨＰＯ_４／ＮａＨ_２ＰＯ_４ （ｐＨ８．０）、１ｍＭ ＥＤＴＡ、および１ｍＭ ＤＴＴ）に再懸濁し、超音波処理した。溶解物中の可溶性Ｎタンパク質を、ＳＰ－セファロース高速流（２５ｍＭ Ｎａ_２ＨＰＯ_４／ＮａＨ_２ＰＯ_４（ｐＨ８．０）、１ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍＭ ＤＴＴ、および０．３５－０．５Ｍ ＮａＣｌ）でのイオン交換クロマトグラフィーで精製し、次にＳｕｐｅｒｄｅｘ ２００ ゲル濾過（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）し、そしてバッファーＡで溶出した。ベクターｐＥＴ２２ｂで形質転換された大腸菌を上記のように溶解し、溶出液を精製されたＮタンパク質に対するネガティブコントロールとして使用した。精製されたＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２ Ｎ－ＨｉｓをＧｅｎｅｒａｌ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ａｎｈｕｉ） Ｃｏ． Ｌｔｄから得た。

ＭＡＳＰ－２の精製および復元
組換えタンパク質発現および復元を記載されているように行った（２、３）。簡潔には、ｐＥＴ２２ｂ－ＭＡＳＰ－２を発現宿主株ＢＬ２１（ＤＥ３）に形質転換した。１ｍＭ ＩＰＴＧでの誘導後、細胞を採取し、超音波処理した。封入体を、６Ｍ ＧｕＨＣｌ、０．１Ｍ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ８．３）、および１００ｍＭ ＤＴＴに室温で可溶化した；次に、可溶化したタンパク質を、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、３ｍＭ 還元グルタチオン（Ｓｉｇｍａ）、１ｍＭ 酸化グルタチオン（Ｓｉｇｍａ）、５ｍＭ ＥＤＴＡ、および０．５Ｍ アルギニンを含むリフォールディングバッファーに希釈した。次に、タンパク質サンプルを４℃に冷却した。復元したタンパク質を、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ、１４０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ７．４に対して４℃で透析し、ＰＥＧ８０００で濃縮し、アリコートし、－７０℃で貯蔵した。高活性ＭＡＳＰ－２を得るために、Ｆｌａｇタグ付きＭＡＳＰ－２を２９３Ｔ細胞で発現させ、抗ＦＬＡＧ磁気ビーズで沈殿させ、Ｆｌａｇペプチド（Ｓｉｇｍａ）で溶出させた。標準コントロールとして精製された原核生物発現ＭＡＳＰ－２を使用して、ＭＡＳＰ－２の濃度を、ＢＣＡキットおよび免疫ブロット分析を使用して評価した。

ＭＡＳＰ－２自己活性化およびＣ４開裂アッセイ
精製されたＭＡＳＰ－２（８ｎＭ）を、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、および２ｍＭ ＣａＣｌ２中、３７℃で、それぞれ５０ｎＭ、３０ｎＭ、１５ｎｇ／ｍｌ、および１０ｎＭの濃度で精製されたＣ４（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）、組換えＭＢＬ（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）、マンナン（Ｓｉｇｍａ）、およびＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｎタンパク質と、インキュベートした。開裂を還元条件下でＳＤＳ－ＰＡＧＥに付し、Ｃ４フラグメントおよびＭＡＳＰ－２を、抗－Ｃ４α鎖抗体（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ）または抗－Ｆｌａｇ抗体（Ｓｉｇｍａ）を用いて免疫ブロット分析により検出した。

補体沈着アッセイ
Ｃ４ｂ沈着アッセイを、ヒトＭＢＬ／ＭＡＳＰ－２アッセイキット（Ｈｙｃｕｌｔ ｂｉｏｔｅｃｈ）を用いて行った（４）。簡潔には、希釈した血清をマンナン被覆プレートで高塩結合バッファーを用いて４℃で一晩インキュベートし、洗浄により除去し、ＭＢＬ－ＭＡＳＰ－２複合体を捕捉した。精製されたＣ４およびＮタンパク質を加えて、１．５時間インキュベートし、沈着したＣ４ｂを標準プロトコールにしたがって検出した。ＬＰおよびＡＰの機能活性を、以前に記載されているようにＥＬＩＳＡにより評価した（５）。Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｂプレートを、１００ｍＭ Ｎａ_２ＣＯ_３／ＮａＨＣＯ_３（ｐＨ９．６）中、ウェル当たり１０μｇ マンナンで、室温で一晩コーティングした。各ステップ後、プレートをＰＢＳＴ（３００μｌ／ウェル）で３回洗浄した。残存する結合部位を、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、および２％ ＨＳＡと室温で２－３時間インキュベーションすることによりブロックした。血清サンプルを、２ｍＭ ＣａＣｌ_２およびＮタンパク質を有するか、または有さない、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０．５ｍＭ ＭｇＣｌ_２、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ－２０、および０．１％ ゼラチンを含む１０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．４）で１：８０希釈した。全てのサンプルおよびバッファーを氷上で調製した。次に、プレートを４℃で１時間および３７℃で１．５時間連続してインキュベートし、その後洗浄した。すべてのインキュベーション量は１００μｌであった。補体結合を、抗体を用いて検出し、その後洗浄した。Ｃ４、活性化Ｃ３、およびＣ５ｂ－９の検出を、それぞれ抗Ｃ４α鎖抗体（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ）、抗活性化Ｃ３抗体（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ）、および抗Ｃ５ｂ－９抗体（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）を用いて実施した。抗体結合を、ＨＲＰ－コンジュゲートされたヒツジ抗マウス抗体またはロバ抗ウサギ抗体（Ｒ＆Ｄ）を用いて検出した。ＨＲＰの酵素活性をＲＴで３０－６０分間のＴＭＢインキュベーションを用いて検出し、反応を２Ｍ Ｈ_２ＳＯ_４で停止させた。ＯＤをマイクロプレートリーダーを用いて４５０ｎｍで測定した。

ＭＡＳＰ－２：ＭＢＬ結合アッセイ
ＭＢＬへのＭＡＳＰ－２の結合をＥＬＩＳＡにより評価した。上記のとおり、Ｎｕｎｃ Ｍａｘｉｓｏｒｂプレートを、１００ｍＭ Ｎａ_２ＣＯ_３／ＮａＨＣＯ_３（ｐＨ９．６）中、ウェル当たり１０μｇ マンナンで、室温で一晩コーティングし、２％ ＨＳＡでブロックした。ＭＢＬタンパク質（１μｇ／ｍｌ）を、１０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．４）、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＣａＣｌ_２、１００μｇ／ｍｌ ＨＳＡ、および０．５％ ＴｒｉｔｏｎＸ－１００と４℃で２時間インキュベーションした。精製されたＭＡＳＰ－２およびＮ（またはコントロール）タンパク質を異なる時間でウェルに加え、それぞれ０．２ｍｇ／ｍｌおよび２００ｎｇ／ｍｌの最終濃度を得た。プレートを４℃での３２時間のインキュベーション後洗浄し、ＭＡＳＰ－２の結合を抗－ＭＡＳＰ－２抗体、次にＨＲＰ－コンジュゲートされたウサギ抗ヤギ抗体で検出した。ＨＲＰの酵素活性をＲＴで３０－６０分間のＴＭＢインキュベーションを用いて検出し、反応を２Ｍ Ｈ_２ＳＯ_４で停止させた。ＯＤをマイクロプレートリーダーを用いて４５０ｎｍで測定した。

オプソニン食菌アッセイ
腹腔から単離されたマウス細胞を洗浄し、３７℃で２時間９６ウェルプレートにおいてＲＰＭＩ １６４０ Ｍｅｄｉａ（１０％ ＦＢＳ）に植菌した。血清を、１×ＰＢＳ、１ｍＭ ＣａＣｌ_２、および２ｍＭ ＭｇＣｌ_２で０．７８１％、１．５６２％、３．１２５％、６．２５％、１２．５％、２５％、５０％および１００％に希釈した。希釈した血清、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ Ｎタンパク質（１００ｎｇ／ｍｌ）および大腸菌（細胞に対する比率は１０：１であった）をそれぞれのウェルに加え、３７℃で３０分間インキュベートした。ｐＥＴ２２ｂ形質転換した大腸菌からの溶出物を、精製されたＮタンパク質のためのネガティブコントロールとして使用して、補体を活性化する可能性のある菌体成分による効果を除外した。反応を停止し、細胞を１０％中性ホルマリンで固定した。補体Ｃ３ｃ沈殿をＦＩＴＣ－Ｃ３ｃ抗体で検出し、染色細胞をカウントした。点は、２つの繰り返しウェルからの平均値を表す。エラーバー、平均±Ｓ．Ｄ． 対応のない両側スチューデントｔ検定による＊Ｐ＜０．０５および＊＊Ｐ＜０．０１。マウス。

ｍａｓｐ ｎｕｌｌマウスの生成およびＬＰＳ抗原投与
ＢＡＬＢ／ｃマウスのグループは、Ｍｉｌｉｔａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓのアカデミーの実験動物センターから提供された。ＭＡＳＰ－２－／－（ＫＯ）マウスおよびネガティブコントロール野生型（ＷＴ）マウスは、Ｃｙａｇｅｎ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃから提供された。全てのマウスを、Ｍｉｌｉｔａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｃｈｉｎａ）のアカデミーの実験動物センターにおいて維持した。マウス（８－１０／グループ）に１×１０^８－９ＰＦＵ Ａｄ－Ｎ／Ａｄ－ｎｕｌｌ（Ｂｅｉｊｉｎｇ ＢＡＣ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）または塩水コントロールを尾静脈を介して３回（１、２、３日）注入し、ＬＰＳ（５ｍｇ／ｋｇ）を５－６日目に尾静脈を介して与えた。抗－ＭＡＳＰ－２モノクローナル抗体（２００μｇ／ｋｇ、ＨＢＴ）、抗－Ｎモノクローナル抗体（２００μｇ／ｋｇ、Ｓｉｎｏ Ｂｉｏｌｇｉｃａｌ）またはＣ１ＩＮＨ（４ｍｇ／ｋｇ、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）を、ＬＰＳ注射の３０分前に、尾静脈を介して注射した。

免疫組織化学
火神山（Huoshenshan）医院において死亡した４人の患者からの死後剖検を、病院倫理委員会および死亡者の家族の承認のもとＤｒ． Ｘｉｕｗｕ Ｂｉａｎにより行われた。詳細な結果は、別の場所で公表される予定である。パラホルムアルデヒド固定肺組織をパラフィン組織切片のために使用し、ＭＢＬ（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ）、ＭＡＳＰ－２（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ）、Ｃ４α鎖（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ）、Ｃ３（Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚ）またはＣ５ｂ－９（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）抗体での免疫組織化学的染色を前記のように行った。

ＣＯＶＩＤ－１９患者におけるＣ５ａの検出
軽度または重度のＣＯＶＩＤ－１９患者からの血清を、病院倫理委員会の承認のもと、回収した。深刻な患者を、発熱または呼吸器感染の疑い、プラス 呼吸速度＞３０息／分、重度の呼吸困難、または室内空気にてＳｐＯ_２＜９０％の１つとして定義した。肺炎を有し、深刻な肺炎の兆候がない患者を、軽度のケースとして定義する。平均５６±１２．１歳および病気の平均２６．３±９．１日数を有する１０人の軽度の患者（男性５人、女性５人）からの血清をアッセイした。健常人からの血清を臨床検査室から回収した。血清Ｃ５ａレベルを二重抗体サンドイッチＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ）により検出した。

Ｃ５ａ抗体治療
ヒトＣ５ａに対するマウス－ヒト（ＩｇＧ４）抗体（Ｂｄｂ－００１ 注射）は、Ｓｔａｉｄｓｏｎ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．Ｌｔｄにより提供され、これはＧｏｏｄ Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌにしたがって製造された。注射は、２０１９年に健常対象において第Ｉ相臨床試験について中国の国家医療製品管理局（ＮＭＤＡ）により承認された。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２コロナウイルス誘導肺炎（ＣＯＶＩＤ－１９）アウトブレイク後、抗体は、２０２０年２月７日にＣＯＶＩＤ－１９の処置のための第２相臨床試験についてＮＭＤＡにより承認された（２０２０Ｌ００００３）。ヒトへの抗体の投与もまた、武漢火神山医院（Ｗｕｈａｎ Ｈｕｏｓｈｅｎｓｈａｎ Ｈｏｓｐｉｔａｌ）の倫理委員会により承認された。２５０ｍｌ 塩水中の３００ｍｇ 抗－Ｃ５ａ抗体を、１、２、３、５、７、９および１１日目にｉ．ｖ．投与した。動脈血ガス（ＡＢＧ）試験、Ｃ反応タンパク質（ＣＲＰ）、血液ルーチン（血液ＲＴ）および肝機能を定期的に決定した。ＳａＯ_２、血圧、心拍を必要に応じてモニターした。

参考文献

Claims (6)

1. コロナウイルスでの感染によって引き起こされるか、またはコロナウイルスでの感染と関連する医学的状態の処置における使用のための、Ｃ５ａ活性のインヒビターを含む組成物であって、医学的状態が（ｉ）肺炎、および／または（ｉｉ）発熱であり、前記Ｃ５ａ活性のインヒビターが、Ｃ５ａに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、軽鎖および重鎖ＣＤＲ１からＣＤＲ３の配列番号：６、８、１０、１２、１４および１６によるアミノ酸配列を含み；そして
   前記コロナウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、
   組成物。
2. コロナウイルス感染に罹患している対象において炎症性応答の低下における使用のための、Ｃ５ａ活性のインヒビターを含む組成物であって、前記Ｃ５ａ活性のインヒビターが、Ｃ５ａに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、軽鎖および重鎖ＣＤＲ１からＣＤＲ３の配列番号：６、８、１０、１２、１４および１６によるアミノ酸配列を含み；そして
   前記コロナウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、
   組成物。
3. コロナウイルス感染に罹患している対象において、肺機能および／または肝機能の改善における使用のための、Ｃ５ａ活性のインヒビターを含む組成物であって、前記Ｃ５ａ活性のインヒビターが、Ｃ５ａに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントであり、前記抗体またはその抗原結合フラグメントが、軽鎖および重鎖ＣＤＲ１からＣＤＲ３の配列番号：６、８、１０、１２、１４および１６によるアミノ酸配列を含み；そして
   前記コロナウイルスが、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２である、
   組成物。
4. 対象がＣＯＶＩＤ－１９に罹患している、請求項１から３のいずれかに記載の組成物。
5. 処置が、以下の１つ以上：
   －Ｃ反応性タンパク質の低下；
   －発熱の低下；
   －血液中のリンパ球数の増加；
   －ＡＬＴ／ＡＳＴの低下；および／または
   －酸素指数の増加（ＰａＯ_２／ＦｉＯ_２）
   をもたらす、請求項１から４のいずれかに記載の組成物。
6. 該Ｃ５ａのインヒビターが、ヒトＣ５ａのアミノ酸配列ＮＤＥＴＣＥＱＲＡ（配列番号：２）およびＳＨＫＤＭＱＬ（配列番号：３）により形成される立体構造エピトープに特異的に結合し、そして
   Ｃ５ａのインヒビターが、配列番号：２によるアミノ酸配列内の少なくとも１つのアミノ酸および配列番号：３によるアミノ酸配列内の少なくとも１つのアミノ酸に結合する、
   請求項１から５のいずれかに記載の組成物。