JP7486783B2 - 酵素含有組成物の製造方法 - Google Patents
酵素含有組成物の製造方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7486783B2 JP7486783B2 JP2020065664A JP2020065664A JP7486783B2 JP 7486783 B2 JP7486783 B2 JP 7486783B2 JP 2020065664 A JP2020065664 A JP 2020065664A JP 2020065664 A JP2020065664 A JP 2020065664A JP 7486783 B2 JP7486783 B2 JP 7486783B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- bifidobacterium
- glnbp
- glucose
- produce
- heat treatment
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims description 102
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims description 102
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims description 58
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 48
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 claims description 149
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 109
- 108020000005 Sucrose phosphorylase Proteins 0.000 claims description 107
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 101
- 101000941023 Bifidobacterium longum subsp. longum (strain ATCC 15707 / DSM 20219 / JCM 1217 / NCTC 11818 / E194b) 1,3-beta-galactosyl-N-acetylhexosamine phosphorylase Proteins 0.000 claims description 97
- 108091000115 phosphomannomutase Proteins 0.000 claims description 90
- 102000009569 Phosphoglucomutase Human genes 0.000 claims description 89
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 88
- 108010052764 Fructose-6-phosphate phosphoketolase Proteins 0.000 claims description 83
- 101150102398 Galt gene Proteins 0.000 claims description 73
- 101150002054 galE gene Proteins 0.000 claims description 71
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 53
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 51
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 49
- HSCJRCZFDFQWRP-UHFFFAOYSA-N Uridindiphosphoglukose Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OP(O)(=O)OP(O)(=O)OCC1C(O)C(O)C(N2C(NC(=O)C=C2)=O)O1 HSCJRCZFDFQWRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 46
- 241000185999 Bifidobacterium longum subsp. longum Species 0.000 claims description 38
- HSCJRCZFDFQWRP-JZMIEXBBSA-N UDP-alpha-D-glucose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](N2C(NC(=O)C=C2)=O)O1 HSCJRCZFDFQWRP-JZMIEXBBSA-N 0.000 claims description 36
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 35
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 35
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 35
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 claims description 32
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 claims description 32
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 claims description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 30
- 241000186012 Bifidobacterium breve Species 0.000 claims description 23
- 102000038379 digestive enzymes Human genes 0.000 claims description 22
- 108091007734 digestive enzymes Proteins 0.000 claims description 22
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 claims description 17
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 claims description 17
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 14
- 108030002356 1,3-beta-galactosyl-N-acetylhexosamine phosphorylases Proteins 0.000 claims description 13
- 102100036291 Galactose-1-phosphate uridylyltransferase Human genes 0.000 claims description 12
- 102100021436 UDP-glucose 4-epimerase Human genes 0.000 claims description 12
- 101710090046 Galactose-1-phosphate uridylyltransferase Proteins 0.000 claims description 11
- 108010075202 UDP-glucose 4-epimerase Proteins 0.000 claims description 11
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 9
- OVRNDRQMDRJTHS-BKJPEWSUSA-N N-acetyl-D-hexosamine Chemical compound CC(=O)NC1C(O)O[C@H](CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-BKJPEWSUSA-N 0.000 claims description 8
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 2
- QCQYVCMYGCHVMR-UHFFFAOYSA-N lacto-N-biose I Natural products CC(=O)NC(C=O)C(C(O)C(O)CO)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O QCQYVCMYGCHVMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 104
- 239000000047 product Substances 0.000 description 75
- HMQPEDMEOBLSQB-UHFFFAOYSA-N UNPD117640 Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HMQPEDMEOBLSQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 72
- HMQPEDMEOBLSQB-RCBHQUQDSA-N beta-D-Galp-(1->3)-alpha-D-GlcpNAc Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HMQPEDMEOBLSQB-RCBHQUQDSA-N 0.000 description 72
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 39
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 38
- 108010081954 galacto-N-biose Proteins 0.000 description 33
- HMQPEDMEOBLSQB-UFLFEMAHSA-N beta-D-Galp-(1->3)-beta-D-GalpNAc Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HMQPEDMEOBLSQB-UFLFEMAHSA-N 0.000 description 32
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 26
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 25
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 22
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 20
- MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N N-acetyl-D-galactosamine Natural products CC(=O)NC(C=O)C(O)C(O)C(O)CO MBLBDJOUHNCFQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 18
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 18
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 18
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 17
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 17
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 16
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 16
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 16
- 241000186016 Bifidobacterium bifidum Species 0.000 description 14
- 229940002008 bifidobacterium bifidum Drugs 0.000 description 14
- OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N N-Acetyl-D-Galactosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-CBQIKETKSA-N 0.000 description 13
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 13
- HXXFSFRBOHSIMQ-VFUOTHLCSA-N alpha-D-glucose 1-phosphate Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](OP(O)(O)=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O HXXFSFRBOHSIMQ-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 12
- 229950010772 glucose-1-phosphate Drugs 0.000 description 12
- HSCJRCZFDFQWRP-ABVWGUQPSA-N UDP-alpha-D-galactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](N2C(NC(=O)C=C2)=O)O1 HSCJRCZFDFQWRP-ABVWGUQPSA-N 0.000 description 10
- 238000009295 crossflow filtration Methods 0.000 description 10
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 10
- 210000001819 pancreatic juice Anatomy 0.000 description 10
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 10
- 108010073178 Glucan 1,4-alpha-Glucosidase Proteins 0.000 description 9
- 102100022624 Glucoamylase Human genes 0.000 description 9
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 9
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 8
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 8
- HXXFSFRBOHSIMQ-FPRJBGLDSA-N alpha-D-galactose 1-phosphate Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](OP(O)(O)=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O HXXFSFRBOHSIMQ-FPRJBGLDSA-N 0.000 description 8
- 230000008859 change Effects 0.000 description 8
- 229910000403 monosodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 8
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 8
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 7
- 102100031126 6-phosphogluconolactonase Human genes 0.000 description 6
- 108010029731 6-phosphogluconolactonase Proteins 0.000 description 6
- 108010018962 Glucosephosphate Dehydrogenase Proteins 0.000 description 6
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 description 6
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 6
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 6
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 6
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 6
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N N-acetyl-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-RTRLPJTCSA-N 0.000 description 5
- RWHOZGRAXYWRNX-VFUOTHLCSA-N alpha-D-glucose 1,6-bisphosphate Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](COP(O)(O)=O)O[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H]1O RWHOZGRAXYWRNX-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 5
- 235000013611 frozen food Nutrition 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 5
- 235000011888 snacks Nutrition 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 241000186015 Bifidobacterium longum subsp. infantis Species 0.000 description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 4
- NBSCHQHZLSJFNQ-GASJEMHNSA-N D-Glucose 6-phosphate Chemical compound OC1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O NBSCHQHZLSJFNQ-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 239000004278 EU approved seasoning Substances 0.000 description 4
- VFRROHXSMXFLSN-UHFFFAOYSA-N Glc6P Natural products OP(=O)(O)OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O VFRROHXSMXFLSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LIPOUNRJVLNBCD-UHFFFAOYSA-N acetyl dihydrogen phosphate Chemical compound CC(=O)OP(O)(O)=O LIPOUNRJVLNBCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 4
- LFYJSSARVMHQJB-QIXNEVBVSA-N bakuchiol Chemical compound CC(C)=CCC[C@@](C)(C=C)\C=C\C1=CC=C(O)C=C1 LFYJSSARVMHQJB-QIXNEVBVSA-N 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 235000011194 food seasoning agent Nutrition 0.000 description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 4
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 4
- 235000014102 seafood Nutrition 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GSXOAOHZAIYLCY-UHFFFAOYSA-N D-F6P Natural products OCC(=O)C(O)C(O)C(O)COP(O)(O)=O GSXOAOHZAIYLCY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 3
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 3
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 3
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 3
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 3
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 3
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 3
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 3
- BGWGXPAPYGQALX-ARQDHWQXSA-N beta-D-fructofuranose 6-phosphate Chemical compound OC[C@@]1(O)O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@@H]1O BGWGXPAPYGQALX-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 3
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 3
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 3
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 3
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 3
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 3
- 235000015203 fruit juice Nutrition 0.000 description 3
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 3
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 3
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 3
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 3
- 235000012149 noodles Nutrition 0.000 description 3
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 3
- 239000006072 paste Substances 0.000 description 3
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 3
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 3
- 150000004804 polysaccharides Chemical class 0.000 description 3
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- -1 α-glucans (e.g. Chemical class 0.000 description 3
- RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 4-aminoantipyrine Chemical compound CN1C(C)=C(N)C(=O)N1C1=CC=CC=C1 RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 2
- 241000186018 Bifidobacterium adolescentis Species 0.000 description 2
- 241000901050 Bifidobacterium animalis subsp. lactis Species 0.000 description 2
- 241001134772 Bifidobacterium pseudocatenulatum Species 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 108010093096 Immobilized Enzymes Proteins 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 244000294411 Mirabilis expansa Species 0.000 description 2
- 235000015429 Mirabilis expansa Nutrition 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 2
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010073135 Phosphorylases Proteins 0.000 description 2
- 102000009097 Phosphorylases Human genes 0.000 description 2
- 101150064547 SP gene Proteins 0.000 description 2
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 2
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 2
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 2
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 2
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 2
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 2
- 235000013536 miso Nutrition 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 2
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 235000015067 sauces Nutrition 0.000 description 2
- 235000013580 sausages Nutrition 0.000 description 2
- 235000014347 soups Nutrition 0.000 description 2
- 235000013322 soy milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 2
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 2
- 235000015099 wheat brans Nutrition 0.000 description 2
- MIDXCONKKJTLDX-UHFFFAOYSA-N 3,5-dimethylcyclopentane-1,2-dione Chemical compound CC1CC(C)C(=O)C1=O MIDXCONKKJTLDX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 5'-adenylphosphoric acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 108010092060 Acetate kinase Proteins 0.000 description 1
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N Adenosine diphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000310 Alpha glucan Polymers 0.000 description 1
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 1
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 1
- 101100445061 Bacillus sp. (strain YaB) ale gene Proteins 0.000 description 1
- 241000933529 Bifidobacterium bifidum JCM 1254 Species 0.000 description 1
- 241000741973 Bifidobacterium breve DSM 20213 = JCM 1192 Species 0.000 description 1
- 241001608472 Bifidobacterium longum Species 0.000 description 1
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 1
- 241001137251 Corvidae Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 235000019733 Fish meal Nutrition 0.000 description 1
- 108010068370 Glutens Proteins 0.000 description 1
- 102000057621 Glycerol kinases Human genes 0.000 description 1
- 108700016170 Glycerol kinases Proteins 0.000 description 1
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 1
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 1
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 1
- 235000013878 L-cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 239000004201 L-cysteine Substances 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 1
- 240000005856 Lyophyllum decastes Species 0.000 description 1
- 235000013194 Lyophyllum decastes Nutrition 0.000 description 1
- YBHQCJILTOVLHD-YVMONPNESA-N Mirin Chemical compound S1C(N)=NC(=O)\C1=C\C1=CC=C(O)C=C1 YBHQCJILTOVLHD-YVMONPNESA-N 0.000 description 1
- 235000019482 Palm oil Nutrition 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 102100030999 Phosphoglucomutase-1 Human genes 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 235000019484 Rapeseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 241000209056 Secale Species 0.000 description 1
- 235000007238 Secale cereale Nutrition 0.000 description 1
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 1
- 240000006394 Sorghum bicolor Species 0.000 description 1
- 235000011684 Sorghum saccharatum Nutrition 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- 235000009430 Thespesia populnea Nutrition 0.000 description 1
- 241000006364 Torula Species 0.000 description 1
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 1
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 235000013334 alcoholic beverage Nutrition 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- FYGDTMLNYKFZSV-DZOUCCHMSA-N alpha-D-Glcp-(1->4)-alpha-D-Glcp-(1->4)-D-Glcp Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O[C@@H]2[C@H](OC(O)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O FYGDTMLNYKFZSV-DZOUCCHMSA-N 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 235000008452 baby food Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 229940009291 bifidobacterium longum Drugs 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 235000015895 biscuits Nutrition 0.000 description 1
- 235000008429 bread Nutrition 0.000 description 1
- 235000012813 breadcrumbs Nutrition 0.000 description 1
- 235000014121 butter Nutrition 0.000 description 1
- 235000012970 cakes Nutrition 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000394 calcium triphosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 235000013574 canned fruits Nutrition 0.000 description 1
- 235000014613 canned/preserved soup Nutrition 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 235000013736 caramel Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014171 carbonated beverage Nutrition 0.000 description 1
- 239000000679 carrageenan Substances 0.000 description 1
- 235000010418 carrageenan Nutrition 0.000 description 1
- 229920001525 carrageenan Polymers 0.000 description 1
- 229940113118 carrageenan Drugs 0.000 description 1
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 1
- 239000007806 chemical reaction intermediate Substances 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 235000015218 chewing gum Nutrition 0.000 description 1
- 229940112822 chewing gum Drugs 0.000 description 1
- 235000019219 chocolate Nutrition 0.000 description 1
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 1
- 235000013353 coffee beverage Nutrition 0.000 description 1
- 238000010411 cooking Methods 0.000 description 1
- 235000014510 cooky Nutrition 0.000 description 1
- 235000012495 crackers Nutrition 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 235000021438 curry Nutrition 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 235000021185 dessert Nutrition 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 235000015071 dressings Nutrition 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000037149 energy metabolism Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000003889 eye drop Substances 0.000 description 1
- 229940012356 eye drops Drugs 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000004467 fishmeal Substances 0.000 description 1
- 235000012041 food component Nutrition 0.000 description 1
- 239000005417 food ingredient Substances 0.000 description 1
- 235000013350 formula milk Nutrition 0.000 description 1
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 1
- 239000000054 fungal extract Substances 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 235000021312 gluten Nutrition 0.000 description 1
- 108010054790 glycerol-3-phosphate oxidase Proteins 0.000 description 1
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 1
- 235000011868 grain product Nutrition 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000004519 grease Substances 0.000 description 1
- 239000007952 growth promoter Substances 0.000 description 1
- 235000020256 human milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000004251 human milk Anatomy 0.000 description 1
- 235000015243 ice cream Nutrition 0.000 description 1
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000008446 instant noodles Nutrition 0.000 description 1
- 235000014109 instant soup Nutrition 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 235000021388 linseed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000000944 linseed oil Substances 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 235000021056 liquid food Nutrition 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 235000013310 margarine Nutrition 0.000 description 1
- 239000003264 margarine Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 description 1
- 235000020124 milk-based beverage Nutrition 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 1
- 239000007923 nasal drop Substances 0.000 description 1
- 229940100662 nasal drops Drugs 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 235000016046 other dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 239000002540 palm oil Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- RFWLACFDYFIVMC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;[oxido(phosphonatooxy)phosphoryl] phosphate Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O RFWLACFDYFIVMC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 235000021110 pickles Nutrition 0.000 description 1
- 235000015108 pies Nutrition 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 235000008476 powdered milk Nutrition 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 235000013324 preserved food Nutrition 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 235000014214 soft drink Nutrition 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 235000013555 soy sauce Nutrition 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 235000013599 spices Nutrition 0.000 description 1
- 235000011496 sports drink Nutrition 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 235000013547 stew Nutrition 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000003760 tallow Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 239000000052 vinegar Substances 0.000 description 1
- 235000021419 vinegar Nutrition 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 description 1
- UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L zinc;1-(5-cyanopyridin-2-yl)-3-[(1s,2s)-2-(6-fluoro-2-hydroxy-3-propanoylphenyl)cyclopropyl]urea;diacetate Chemical compound [Zn+2].CC([O-])=O.CC([O-])=O.CCC(=O)C1=CC=C(F)C([C@H]2[C@H](C2)NC(=O)NC=2N=CC(=CC=2)C#N)=C1O UHVMMEOXYDMDKI-JKYCWFKZSA-L 0.000 description 1
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
前記製造方法は、前記菌体処理物が、分子量が10,000以下の化合物を除去する工程を経たものであることを好ましい態様としている。
前記製造方法は、前記熱処理がN-アセチルヘキソサミンの存在下で行われることを好ましい態様としている。
前記製造方法は、前記熱処理がUMP又はUDP-グルコースの存在下で行われることを好ましい態様としている。
前記製造方法は、前記ビフィドバクテリウム属細菌が2種であり、前記2種のビフィドバクテリウム属細菌の一方が、GLNBPを産生し、SPを産生しないものであり、他方が、SPを産生し、GLNBPを産生しないものであることを好ましい態様としている。
前記製造方法は、GLNBPを産生し、SPを産生しない前記ビフィドバクテリウム属細菌が、ビフィドバクテリウム・ブレーベであり、SPを産生し、GLNBPを産生しない前記ビフィドバクテリウム属細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムであることを好ましい態様としている。
前記製造方法は、前記ビフィドバクテリウム・ブレーベが、ビフィドバクテリウム・ブレーベMCC1320 (NITE BP-1253)であり、前記ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムが、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムNITE BP-02621であることを好ましい態様としている。
前記製造方法は、前記ビフィドバクテリウム属細菌が1種であることを好ましい態様としている。
前記製造方法は、前記1種のビフィドバクテリウム属細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムであり、スクロースを炭素源として培養されたものであることを好ましい態様としている。
前記製造方法は、前記ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムが、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムNITE P-1540、NITE P-1541、又はNITE P-1542であることを好ましい態様としている。
前記製造方法は、前記トリプシンを含む消化酵素がパンクレアチンであることを好ましい態様としている。
前記製造方法は、前記第一の菌体処理物が、分子量が10,000以下の化合物を除去する工程を経たものであり、前記第二の菌体処理物が、分子量が10,000以下の化合
物を除去する工程を経たものであることを好ましい態様としている。
前記製造方法は、前記第一の熱処理がN-アセチルヘキソサミンの存在下で行われることを好ましい態様としている。
前記製造方法は、前記第一の熱処理及び第二の熱処理がUMP又はUDP-グルコースの存在下で行われることを好ましい態様としている。
前記製造方法は、GLNBPを産生し、SPを産生しない前記1種又は2種以上のビフィドバクテリウム属細菌が1種であって、ビフィドバクテリウム・ブレーベであり、SPを産生し、GLNBPを産生しない前記1種又は2種以上のビフィドバクテリウム属細菌が1種であって、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムであることを好ましい態様としている。
前記製造方法は、前記ビフィドバクテリウム・ブレーベが、ビフィドバクテリウム・ブレーベMCC1320 (NITE BP-1253)であり、前記ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムが、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムNITE BP-02621であることを好ましい態様としている。
前記製造方法は、前記トリプシンを含む消化酵素がパンクレアチンであることを好ましい態様としている。
図1に記載したように、ラクト-N-ビオースI(LNB)の合成法が知られている。
スクロース、N-アセチルグルコサミン(GlcNAc)、リン酸、及び、UDP-グルコース及び/又はUDP-ガラクトースを原料として、前記原料に、後述する、本発明の第一の態様に係る製造方法により製造される酵素含有組成物、本発明の第二の態様に係る製造方法により製造される酵素含有組成物、又は本発明の第三の態様に係る酵素含有組成物を作用させることでLNBが生成する。
ス、N-アセチルガラクトサミン(GalNAc)、リン酸、及び、UDP-グルコース及び/又はUDP-ガラクトースを原料として、前記原料に、後述する、本発明の第一の態様に係る製造方法により製造される酵素含有組成物、本発明の第二の態様に係る製造方法により製造される酵素含有組成物、又は本発明の第三の態様に係る酵素含有組成物を作用させることでGNBが生成する。
以上、さらに好ましくは50%以上であり、GalEでは、好ましくは30%以上、より好ましくは35%以上、さらに好ましくは40%以上である。一方で、PGMでは、好ましくは5%以下、より好ましくは2%以下、さらに好ましくは1%以下であり、F6PPKでは、好ましくは5%以下、より好ましくは3%以下、さらに好ましくは2%以下である。
SPの活性は10 mMリン酸二水素ナトリウム、10 mM スクロースの存在下、pH 7.0、30℃の条件で測定し、1分間に1 μmolのグルコース-1-リン酸を生成する活性を1ユニット(U)として、好ましくは0.05 U/mL以上、より好ましくは0.1 U/mL以上、さらに好ましくは0.2 U/mL以上であり、一方で、上限は特に制限されないが、例えば5 U/mL以下であってよい。
GLNBPの活性は10 mMリン酸二水素ナトリウム、10 mM LNBの存在下、pH 7.0、30℃の条件で測定し、1分間に1 μmolのガラクトース-1-リン酸を生成する活性を1 Uとして、好ましくは0.05 U/mL以上、より好ましくは0.1 U/mL以上、さらに好ましくは0.2 U/mL以上であり、一方で、上限は特に制限されないが、例えば5 U/mL以下であってよい。
GalTの活性は5 mM塩化マグネシウム、1 mMガラクトース-1-リン酸、1 mM UDP-グルコースの存在下、pH 7.0、30℃の条件で測定し、1分間に1 μmolのグルコース-1-リン酸を生成する活性を1 Uとして、好ましくは1 U/mL以上、より好ましくは2 U/mL以上、さらに好ましくは5 U/mL以上であり、一方で、上限は特に制限されないが、例えば40
U/mL以下であってよい。
GalEの活性は5 mM塩化マグネシウム、1 mM UDP-ガラクトースの存在下、pH 7.0、30℃の条件で測定し、1分間に1 μmolのUDP-グルコースを生成する活性を1 Uとして、好ましくは0.5 U/mL以上、より好ましくは1 U/mL以上、さらに好ましくは2 U/mL以上であり、一方で、上限は特に制限されないが、例えば20 U/mL以下であってよい。
PGMの活性は1 mMグルコース-1-リン酸の存在下、pH 7.0、30℃の条件で測定し、1分間に1 μmolのグルコース-6-リン酸を生成する活性を1 Uとした。PGMでは、下限は特に制限されないが、例えば0以上であってよく、一方で、好ましくは1 U/mL以下、より好ましくは0.5 U/mL以下、さらに好ましくは0.2 U/mL以下である。
F6PPKの活性は10 mMリン酸二水素ナトリウム、10 mMフルクトース-6-リン酸の存在下、pH 7.0、30℃の条件で測定し、1分間に1 μmolのアセチルリン酸を生成する活性を1
Uとして、下限は特に制限されないが、例えば0以上であってよく、一方で、好ましくは1
U/mL以下、より好ましくは0.5 U/mL以下、さらに好ましくは0.2 U/mL以下である。
したがって、本態様に係る製造方法は、前記菌体処理物が、分子量が10,000以下の化合物を除去する工程を経たものであることを好ましい態様としている。
また、本態様のビフィドバクテリウム属細菌が2種以上である場合のビフィドバクテリウム属細菌の他の態様としては、例えば、後述する、本態様のビフィドバクテリウム属細菌が2種である場合の態様が挙げられる。
また、本態様のビフィドバクテリウム属細菌が2種以上である場合のビフィドバクテリウム属細菌の他の態様としては、例えば、後述する、本態様のビフィドバクテリウム属細菌が2種である場合の好ましいビフィドバクテリウム属細菌を含み、もう1種及びそれ以上のビフィドバクテリウム属細菌を含む態様が挙げられる。当該もう1種及びそれ以上のビフィドバクテリウム属細菌は特に制限されない。
尚、菌体処理物に、必要に応じてSP、GLNBP、GalT及びGalEから成る群から選択される一又はそれ以上を添加することは妨げられない。
培養温度、培養時間等の発酵条件は、通常のビフィドバクテリウム属細菌の培養と同様の条件を採用することができる。例えば、培養温度は30~40℃が好ましく、34~38℃がより好ましい。培養時間は、通常、5~24時間、好ましくは10~16時間が好ましい。
培地に接種する菌体は、予め種培養又は前培養しておいてもよい。種培養又は前培養に用いられる培地には、酵母エキス等の生育促進物質や、L-システイン等の還元剤等を添加してもよい。
そのときグルコースを炭素源として用いないことが好ましい。SPの産生は、スクロースにより誘導されると推定される。すなわち、スクロースを含み、グルコースを含まない培地で培養することが好ましい。また、他の炭素源で細菌を培養して細菌を増殖させた後、炭素源をスクロースに変えて培養することによって、SPを産生させてもよい。
ただし、ビフィドバクテリウム・ビフィダムはSP遺伝子を元来有しないため、スクロースを炭素源として用いてもSPは産生されない。
本態様のビフィドバクテリウム属細菌が2種である場合のGLNBPを産生し、SPを産生しないビフィドバクテリウム・ビフィダムとしては、例えばビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1304 (NITE BP-1252)、ビフィドバクテリウム・ビフィダムJCM1254が挙げられ、好ましくはビフィドバクテリウム・ビフィダムMCC1304 (NITE BP-1252)である。
尚、GLNBPを産生し、SPを産生しない、前記ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・ビフィダム、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティスは、グルコースを含み、スクロースを含まない培地で培養した場合に、GLNBPを産生し、SPを産生しないが、GalT、GalE、PGM及びF6PPKを産生する細菌である。
alE、PGM及びF6PPKを産生するものであり、さらにその16S rRNA遺伝子の塩基配列が、上記寄託菌の16S rRNA遺伝子の塩基配列に対して、好ましくは98%以上、さらに好ましくは99%以上、より好ましくは100%の相同性を有し、且つ、好ましくは上記寄託菌と同一の菌学的性質を有する細菌である。また、ビフィドバクテリウム・ブレーベMCC1320 (NITE BP-1253)には、同細菌を親株とする変異株及び遺伝子組換え株も含まれる。
ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムは、単に、ビフィドバクテリウム・ロンガムと称されることがある。
尚、SPを産生し、GLNBPを産生しない、前記ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス、ビフィドバクテリウム・ブレーベ、ビフィドバクテリウム・アニマリス・サブスピーシーズ・ラクティス、ビフィドバクテリウム・アドルセンティス、ビフィドバクテリウム・シュードカテニュレータムは、スクロースを含み、グルコースを含まない培地で
培養した場合に、SPを産生し、GLNBPを産生しないが、GalT、GalE、PGM及びF6PPKを産生する細菌である。また、このことは、ビフィドバクテリウム・ビフィダムを除くビフィドバクテリウム属細菌でも同様である。
尚、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムNITE BP-02621は、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムBB536と同一である。
本態様のビフィドバクテリウム属細菌が1種である場合の前記1種のビフィドバクテリウム属細菌としては、例えばビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムが挙げられ、例えばビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムNITE P-1540、NITE P-1541、NITE P-1542が挙げられる。
尚、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムNITE P-1540、NITE P-1541、NITE P-1542は、特開2014-187886号公報に記載されているように、スクロースを炭素源として培養することによりGLNBPを高生産し、かつSPを産生するものであり、加えて、GalT、GalE、PGM及びF6PPKを産生する細菌である。
また、本態様に用いるトリプシンを含む消化酵素は、トリプシン単独であってもよい。トリプシンは膵臓由来の酵素である。トリプシンとしては、例えば食用獣由来のトリプシンが挙げられる。食用獣としては、例えばブタ、ウシ、ヒツジ、ヤギが挙げられる。
熱処理時間は、熱処理温度にもよるが、通常10分間以上、好ましくは20分以上、より好ましくは30分以上であり、一方で、通常4時間以下、好ましくは3時間以下、より好ましくは2時間以下である。
熱処理温度が高い場合は、低い場合よりも処理時間は短めでよい。
また、N-アセチルヘキソサミンとしては、本態様に係る製造方法で製造される酵素含有組成物がLNBの合成に用いられる場合にはN-アセチルグルコサミンであることが好ましく、GNBの合成に用いられる場合にはN-アセチルガラクトサミンであることが好ましい。
mM以上、より好ましくは0.4mM以上であり、一方で、通常20mM以下、好ましくは15mM以下、より好ましくは12mM以下である。
1,3-β-ガラクトシル-N-アセチルヘキソサミンホスホリラーゼ(GLNBP)を産生し、スクロースホスホリラーゼ(SP)を産生しない1種又は2種以上の前記ビフィドバクテリウム属細菌の菌体から得た、GLNBP、UDP-グルコース:ガラクトース-1-リン酸ウリジリルトランスフェラーゼ(GalT)、UDP-グルコース-4-エピメラーゼ(GalE)、ホスホグルコムターゼ(PGM)及びフルクトース-6-リン酸ホスホケトラーゼ(F6PPK)を含む第一の菌体処理物を、トリプシンを含む消化酵素の存在下で、10分間以上4時間以下、45℃以上50℃以下で第一の熱処理をして得た処理物と、
SPを産生し、GLNBPを産生しない1種又は2種以上の前記ビフィドバクテリウム属細菌の菌体から得た、SP、GalT、GalE、PGM及びF6PPKを含む第二の菌体処理物を、トリプシンを含む消化酵素の存在下で、10分間以上4時間以下、45℃以上50℃以下で第二の熱処理をして得た処理物とを
混合する工程を含む、酵素含有組成物の製造方法である。
したがって、本態様に係る製造方法は、前記第一の菌体処理物が、分子量が10,000以下の化合物を除去する工程を経たものであることを好ましい態様としている。
また、前記ビフィドバクテリウム属細菌が2種以上である場合のビフィドバクテリウム属細菌の他の態様としては、例えば、後述する、本態様のビフィドバクテリウム属細菌が2種である場合の態様が挙げられる。
また、前記ビフィドバクテリウム属細菌が2種以上である場合のビフィドバクテリウム属細菌の他の態様としては、例えば、後述する、前記ビフィドバクテリウム属細菌が2種である場合の好ましいビフィドバクテリウム属細菌を含み、もう1種及びそれ以上のビフィドバクテリウム属細菌を含む態様が挙げられる。当該もう1種及びそれ以上のビフィドバクテリウム属細菌はSPを産生しないものであれば特に制限されない。
尚、菌体処理物に、必要に応じてGLNBP、GalT及びGalEから成る群から選択される一又はそれ以上を添加することは妨げられない。
時間以下、45℃以上50℃以下で第一の熱処理をすると、GLNBP、GalT及びGalEに比べてPGM及びF6PPKの活性が選択的又は優先的に低下した処理物が得られる。
したがって、本態様に係る製造方法は、前記第二の菌体処理物が、分子量が10,000以下の化合物を除去する工程を経たものであることを好ましい態様としている。
また、前記ビフィドバクテリウム属細菌が2種以上である場合のビフィドバクテリウム属細菌の他の態様としては、例えば、後述する、本態様のビフィドバクテリウム属細菌が2種である場合の態様が挙げられる。
また、前記ビフィドバクテリウム属細菌が2種以上である場合のビフィドバクテリウム属細菌の他の態様としては、例えば、後述する、前記ビフィドバクテリウム属細菌が2種である場合の好ましいビフィドバクテリウム属細菌を含み、もう1種及びそれ以上のビフィドバクテリウム属細菌を含む態様が挙げられる。当該もう1種及びそれ以上のビフィドバクテリウム属細菌はGLNBPを産生しないものであれば特に制限されない。
尚、菌体処理物に、必要に応じてSP、GalT及びGalEから成る群から選択される一又はそれ以上を添加することは妨げられない。
尚、こうして得られた混合物に、必要に応じてSP、GLNBP、GalT及びGalEから成る群から選択される一又はそれ以上を添加することは妨げられない。
前記組成物中の前記各酵素の活性は、菌体に含まれる前記各酵素の活性に対し、SPでは好ましくは60%以上、より好ましくは70%以上、さらに好ましくは80%以上であり、GLNBPでは、好ましくは50%以上、より好ましくは60%以上、さらに好ましくは70%以上であり、GalTでは、好ましくは40%以上、より好ましくは45%以上、さらに好ましくは50%以上であり、GalEでは、好ましくは30%以上、より好ましくは35%以上、さらに好ましくは40%以上である。一方で、PGMでは、好ましくは5%以下、より好ましくは2%以下、さらに好ましくは1%以下であり、F6PPKでは、好ましくは5%以下、より好ましくは3%以下、さらに好ましくは2%以下である。
SPの活性は10 mMリン酸二水素ナトリウム、10 mM スクロースの存在下、pH 7.0、30℃の条件で測定し、1分間に1 μmolのグルコース-1-リン酸を生成する活性を1ユニット(U)として、好ましくは0.05 U/mL以上、より好ましくは0.1 U/mL以上、さらに好ましくは0.2 U/mL以上であり、一方で、上限は特に制限されないが、例えば5 U/mL以下であってよい。
GLNBPの活性は10 mMリン酸二水素ナトリウム、10 mM LNBの存在下、pH 7.0、30℃の条件で測定し、1分間に1 μmolのガラクトース-1-リン酸を生成する活性を1 Uとして、好ましくは0.05 U/mL以上、より好ましくは0.1 U/mL以上、さらに好ましくは0.2 U/mL以上であり、一方で、上限は特に制限されないが、例えば5 U/mL以下であってよい。
GalTの活性は5 mM塩化マグネシウム、1 mMガラクトース-1-リン酸、1 mM UDP-グルコースの存在下、pH 7.0、30℃の条件で測定し、1分間に1 μmolのグルコース-1-リン酸を生成する活性を1 Uとして、好ましくは1 U/mL以上、より好ましくは2 U/mL以上、さらに好ましくは5 U/mL以上であり、一方で、上限は特に制限されないが、例えば40
U/mL以下であってよい。
GalEの活性は5 mM塩化マグネシウム、1 mM UDP-ガラクトースの存在下、pH 7.0、30℃の条件で測定し、1分間に1 μmolのUDP-グルコースを生成する活性を1 Uとして、好ましくは0.5 U/mL以上、より好ましくは1 U/mL以上、さらに好ましくは2 U/mL以上であり、一方で、上限は特に制限されないが、例えば20 U/mL以下であってよい。
PGMの活性は1 mMグルコース-1-リン酸の存在下、pH 7.0、30℃の条件で測定し、1分間に1 μmolのグルコース-6-リン酸を生成する活性を1 Uとした。PGMでは、下限は特に制限されないが、例えば0以上であってよく、一方で、好ましくは1 U/mL以下、より好ましくは0.5 U/mL以下、さらに好ましくは0.2 U/mL以下である。
F6PPKの活性は10 mMリン酸二水素ナトリウム、10 mMフルクトース-6-リン酸の存在下、pH 7.0、30℃の条件で測定し、1分間に1 μmolのアセチルリン酸を生成する活性を1
Uとして、下限は特に制限されないが、例えば0以上であってよく、一方で、好ましくは1
U/mL以下、より好ましくは0.5 U/mL以下、さらに好ましくは0.2 U/mL以下である。
また、本発明の他の態様は、スクロース、N-アセチルガラクトサミン、リン酸、及び、UDP-グルコース及び/又はUDP-ガラクトースに、前記第一の態様若しくは第二の態様に係る製造方法により製造された酵素含有組成物、又は前記第三の態様に係る酵素含有組成物を作用させて、ガラクト-N-ビオースを産生させる、ガラクト-N-ビオース(GNB)の製造方法である。
また、前記第一の態様若しくは第二の態様に係る製造方法により製造された酵素含有組成物、又は前記第三の態様に係る酵素含有組成物は、アクリルアミド等の樹脂、カラギーナン、アルギン酸等の糖類のような担体に固定化されたものであってもよい。固定化した酵素含有組成物を用いる場合は、これらを充填したカラムに原料液を通液してもよい。
いし、精製してもよい。反応液からのLNB及びGNBの単離、精製は、例えば、ゲル濾過、イオン交換等の各種クロマトグラィフィー、限外濾過、結晶化、塩析、溶媒沈殿等の方法によって行うことができる。
医薬組成物の製剤形態は特に限定されず、治療目的に応じて適宜選択でき、具体的には、錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤、坐剤、注射剤、軟膏剤、貼付剤、点眼剤、点鼻剤等を例示できる。製剤化にあたっては製剤担体として通常の薬剤に汎用される賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯味矯臭剤、希釈剤、界面活性剤、注射剤用溶剤等の添加剤を使用できる。
上記のような飲食品組成物としては、液状、ペースト状、固体、粉末等の形態を問わず、錠菓、流動食等のほか、例えば、パン、マカロニ、スパゲッティ、めん類、ケーキミックス、から揚げ粉、パン粉等の小麦粉製品;即席めん、カップめん、レトルト・調理食品、調理缶詰め、電子レンジ食品、即席スープ・シチュー、即席みそ汁・吸い物、スープ缶詰め、フリーズ・ドライ食品、その他の即席食品等の即席食品類; 農産缶詰め、果実缶詰め、ジャム・マーマレード類、漬物、煮豆類、農産乾物類、シリアル(穀物加工品)等の農産加工品; 水産缶詰め、魚肉ハム・ソーセージ、水産練り製品、水産珍味類、つくだ煮類等の水産加工品;畜産缶詰め・ペースト類、畜肉ハム・ソーセージ等の畜産加工品;加工乳、乳飲料、ヨーグルト類、乳酸菌飲料類、チーズ、アイスクリーム類、調製粉乳類、クリーム、その他の乳製品等の乳・乳製品;バター、マーガリン類、植物油等の油脂類;しょうゆ、みそ、ソース類、トマト加工調味料、みりん類、食酢類等の基礎調味料;調理ミックス、カレーの素類、たれ類、ドレッシング類、めんつゆ類、スパイス類、その他の複合調味料等の複合調味料・食品類;素材冷凍食品、半調理冷凍食品、調理済冷凍食品等の冷凍食品;キャラメル、キャンディー、チューインガム、チョコレート、クッキー、ビスケット、ケーキ、パイ、スナック、クラッカー、和菓子、米菓子、豆菓子、デザート菓子、その他の菓子などの菓子類;炭酸飲料、天然果汁、果汁飲料、果汁入り清涼飲料、果肉飲料、果粒入り果実飲料、野菜系飲料、豆乳、豆乳飲料、コーヒー飲料、お茶飲料、粉末飲料、濃縮飲料、スポーツ飲料、栄養飲料、アルコール飲料、その他の嗜好飲料等の嗜好飲料類、ベビーフード、ふりかけ、お茶漬けのり等のその他の市販食品等;育児用調製粉乳;経腸栄養食;機能性食品(特定保健用食品、栄養機能食品)等が挙げられる。
グルコースを含み、スクロースを含まない培地で培養したビフィドバクテリウム・ブレーベMCC1320 (NITE BP-1253)の乾燥菌体と、スクロースを含み、グルコースを含まない培地で培養したビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムNITE BP-02621の乾燥菌体とが、それぞれ、33.3 g/L、16.6 g/L(計50 g/L)となるように混合し、50 mMリン酸緩衝液(pH 7.0)に懸濁した。
次に、粗酵素液中のPGM及びF6PPK活性の抑制を行った。粗酵素液にブタ膵液由来パンクレアチン(Wako Pure Chemicals, Osaka, Japan)を終濃度1 mg/mLとなるように添加した。このとき、GLNBPの安定性を上げるためにN-アセチルグルコサミン(終濃度10 mM)又はN-アセチルガラクトサミン(終濃度10 mM)を添加した。また、GalT及びGalEの安定性を上げるためにUDP-グルコース(終濃度0.5 mM)を添加した。このときの溶液のpHは7.0であった。この溶液を1時間、47℃で熱処理した。本処理後の粗酵素液を遠心し、上清を回収し、水酸化ナトリウムによりpH を7.5に調整し、酵素含有組成物を得た。
GLNBP活性は、50 mM MOPS緩衝液(pH 7.0)、5 U/mLグルコース-6-リン酸デヒドロゲナーゼ(G6PDH)(Wako Pure Chemicals)、5 U/mL PGM (Sigma-Aldrich Japan, Tokyo, Japan)、2 μMグルコース1,6-ビスリン酸、5 mM塩化マグネシウム、0.25 mM ThioNAD+、10 mMリン酸二水素ナトリウム、10 mM LNB、0.25 mM UDP-グルコース、2 U/mL GalTからなる反応液における400 nmの吸光度変化から算出した。
SP活性は、50 mM MOPS緩衝液(pH 7.0)、5 U/mL G6PDH、5 U/mL PGM、2 μMグルコース1,6-ビスリン酸、5 mM塩化マグネシウム、0.25 mM ThioNAD+、10 mMリン酸二水素ナトリウム、10 mMスクロースからなる反応液における400 nmの吸光度変化から算出した。
GalT活性は、50 mM MOPS緩衝液(pH 7.0)、5 U/mL G6PDH、5 U/mL PGM、2 μMグルコース1,6-ビスリン酸、5 mM塩化マグネシウム、0.25 mM ThioNAD+、1mMガラクトース-1-リン酸、1 mM UDP-グルコースからなる反応液における400 nmの吸光度変化から算出した。
GalE活性は、50 mM MOPS緩衝液(pH 7.0)、5 U/mL G6PDH、 5 U/mL PGM、2 μMグルコース1,6-ビスリン酸、5 mM塩化マグネシウム、0.25 mM ThioNAD+、0.5 mMガラクトース-1-リン酸、1 mM UDP-ガラクトース、2 U/mL GalTからなる反応液における400 nmの吸光度変化から算出した。
PGM活性は、50 mM MOPS緩衝液(pH 7.0)、5 U/mL G6PDH、2 μMグルコース1,6-ビスリン酸、5 mM塩化マグネシウム、0.25 mM ThioNAD+、1 mMグルコース-1-リン酸からなる反応液における400 nmの吸光度変化から算出した。
F6PPK活性は、50 mM MOPS緩衝液(pH 7.0)、0.15 mg/mL酢酸キナーゼ、10 U/mLグリセロールキナーゼ(Toyobo, Osaka, Japan)、5 U/mLグリセロール3-リン酸オキシダーゼ(Toyobo)、5 U/mLペルオキシダーゼ(Toyobo)、5 mM塩化マグネシウム、0.1 mMアデノシン二リン酸、1 mMグリセロール、0.5 mM TOPS、0.5 mM 4-アミノアンチピリンからなる反応液における550 nmの吸光度変化から算出した。
トリプシン活性は、1 mM N-α-ベンゾイル-DL-アルギニンp-ニトロアニリド、35 mMリン酸緩衝液(pH 7.0)からなる反応液における410 nmの吸光度変化から算出した。
実施例2で用いた1 mg/mLブタ膵液由来パンクレアチンと同程度のトリプシン活性を示す、0.04 mg/mLウシ膵液由来プロテアーゼ(Sigma-Aldrich Japan)、0.0095 mg/mLブタ膵液由来トリプシン(Wako Pure Chemicals)、又は0.015 mg/mLウシ膵液由来トリプシン(Wako Pure Chemicals)を用い、実施例2と同様の処理をした。
結果を表2に示す。いずれのプロテアーゼを用いた場合も、GLNBP、SP、GalT、GalEの活性がそれぞれ50%, 90%, 40%, 30%以上残存しているのに対し、PGMおよびF6PPKの活性が1%以下に低下した。
実施例2においてN-アセチルグルコサミンを用いて得られた酵素含有組成物を用いてLNB合成を行った。スクロース、N-アセチルグルコサミン、UDP-グルコース、リン酸を、それぞれ600 mM、300 mM、0.5 mM、50 mMとなるように調製し、ろ過滅菌した後、30℃で攪拌しながら反応させた。尚、UDP-グルコースは実施例2で添加したものであ
る。反応液量は25 mLとした。反応液中のスクロース(Suc)、LNB、N-アセチルグルコサミン(GlcNAc)の各濃度は高速液体クロマトグラフィーで測定した。カラムはSCR101C(Shimadzu, Kyoto, Japan)を使用し、85℃、移動相純水、流速1 mL/minの条件で分析した。スクロースは荷電化粒子検出器Corona CAD(ESA Biosciences, Inc., Chelmsford, MA)で検出し、LNBおよびN-アセチルグルコサミンはUV-VIS検出器SPD-10A(Shimadzu)を用い、215 nmの波長で検出した。
スクロース(Suc)、LNB、N-アセチルグルコサミン(GlcNAc)の各濃度の経時変化を図2に示す。21日の反応後、LNB濃度は276 mMに達し、原材料であるN-アセチルグルコサミンに対するモル収率は92%となった。
実施例2においてN-アセチルガラクトサミンを用いて得られた酵素含有組成物を用いて、実施例4のN-アセチルグルコサミンをN-アセチルガラクトサミンに変更してGNB合成を行った。N-アセチルガラクトサミン(GalNAc)はUV-VIS検出器SPD-10A(Shimadzu)を用い、215 nmの波長で検出した。
スクロース(Suc)、LNB、N-アセチルガラクトサミン(GalNAc)の各濃度の経時変化を図3に示す。21日の反応後、GNB濃度は254 mMに達し、原材料であるN-アセチルガラクトサミンに対するモル収率は85%となった。
実施例1で調製した粗酵素液はグリコーゲンを含むと考えられたため、実施例2のブタ膵液由来パンクレアチン処理時にグルコアミラーゼ(Wako Pure Chemicals)を終濃度2 U/mLとなるように添加し処理して得られた酵素含有組成物を用いて、実施例4と同様にLNB合成を行った。
結果を図4に示す。グルコアミラーゼ処理をした場合の方が、しない場合よりもLNBが効率よく合成できることができた。
スクロースを含み、グルコースを含まない培地で培養したビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムNITE P-1540の乾燥菌体が50 g/Lとなるように、50 mMリン酸緩衝液(pH 7.0)に懸濁した。続いて、GLNBPの安定性を上げるためにN-アセチルグルコサミンを用いて実施例2と同様にブタ膵液由来パンクレアチン処理を行い、酵素含有組成物を得た。次に、得られた酵素含有組成物を用いて実施例4と同様にLNB合成を行った。
また、LNB合成の結果を図5に示した。実施例7ではLNBが最大濃度に達するまでの反応時間が、実施例2に比べて大幅に短縮された。
表5に示す条件で粗酵素液を処理して得られた酵素含有組成物を用い、LNB合成を行った。
表5中、「2種」とは、ビフィドバクテリウム・ブレーベMCC1320 (NITE BP-1253)の乾燥菌体とビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムNITE BP-02621の乾燥菌体とを用いた場合を示し、「1種」とは、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムNITE P-1540の乾燥菌体を用いた場合を示している。
例えば、表5中のNo.10は、ビフィドバクテリウム・ブレーベMCC1320 (NITE BP-1253)の乾燥菌体とビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムNITE BP-02621の乾燥菌体とを用い、低分子除去をクロスフローろ過により行い、実施例1のように粗酵素液を調製し、実施例2と同様にブタ膵液由来パンクレアチン処理を行い、実施例6と同じようにグルコアミラーゼ処理を行ったものである。また、LNB合成時の反応系は1.5
mLであり、その結果、LNBの最大濃度は254 mMであることを示したものである。
・グルコアミラーゼ処理をしてもパンクレアチン処理をしない場合、LNB合成に影響を与えなかった(No.4)。
・パンクレアチン処理をした場合には、しなかった場合よりもLNB生産性が向上するが、到達するLNB最大濃度にはばらつきがみられた(No.1-8)。
・パンクレアチン処理とグルコアミラーゼ処理の両者を行うことで安定した高いLNB合成ができた(No.9-10)。
Claims (11)
- 1種又は2種以上のビフィドバクテリウム属細菌の菌体から得た、スクロースホスホリラーゼ(SP)、1,3-β-ガラクトシル-N-アセチルヘキソサミンホスホリラーゼ(GLNBP)、UDP-グルコース:ガラクトース-1-リン酸ウリジリルトランスフェラー
ゼ(GalT)、UDP-グルコース-4-エピメラーゼ(GalE)、ホスホグルコムターゼ(PGM)及びフルクトース-6-リン酸ホスホケトラーゼ(F6PPK)を含む菌体処理物を、トリプシンを含む消化酵素の存在下で、10分間以上4時間以下、45℃以上50℃以下で熱処理する工程を含む、酵素含有組成物の製造方法であって、
前記1種又は2種以上のビフィドバクテリウム属細菌が、
スクロースを炭素源として培養された、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムNITE P-1540を含む、又は、
ビフィドバクテリウム・ブレーベMCC1320 (NITE BP-1253)とビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムNITE BP-02621とを含む、
製造方法。 - 前記菌体処理物が、分子量が10,000以下の化合物を除去する工程を経たものである、請求項1に記載の製造方法。
- 前記熱処理がN-アセチルヘキソサミンの存在下で行われる、請求項1又は2に記載の製造方法。
- 前記熱処理がUMP又はUDP-グルコースの存在下で行われる、請求項3に記載の製造方法。
- 前記トリプシンを含む消化酵素がパンクレアチンである、請求項1~4のいずれか一項に記載の製造方法。
- 1,3-β-ガラクトシル-N-アセチルヘキソサミンホスホリラーゼ(GLNBP)を産
生し、スクロースホスホリラーゼ(SP)を産生しない1種又は2種以上のビフィドバクテリウム属細菌の菌体から得た、GLNBP、UDP-グルコース:ガラクトース-1-リン酸
ウリジリルトランスフェラーゼ(GalT)、UDP-グルコース-4-エピメラーゼ(GalE
)、ホスホグルコムターゼ(PGM)及びフルクトース-6-リン酸ホスホケトラーゼ(F6PPK)を含む第一の菌体処理物を、トリプシンを含む消化酵素の存在下で、10分間以上4時間以下、45℃以上50℃以下で第一の熱処理をして得た処理物と、
SPを産生し、GLNBPを産生しない1種又は2種以上のビフィドバクテリウム属細菌の菌
体から得た、SP、GalT、GalE、PGM及びF6PPKを含む第二の菌体処理物を、トリプシンを含む消化酵素の存在下で、10分間以上4時間以下、45℃以上50℃以下で第二の熱処理をして得た処理物とを
混合する工程を含む、酵素含有組成物の製造方法であって、
前記GLNBPを産生し、SPを産生しない1種又は2種以上のビフィドバクテリウム属細菌
が、ビフィドバクテリウム・ブレーベMCC1320 (NITE BP-1253)を含み、かつ、
前記SPを産生し、GLNBPを産生しない1種又は2種以上のビフィドバクテリウム属細菌
が、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムNITE BP-02621を含
む、
製造方法。 - 前記第一の菌体処理物が、分子量が10,000以下の化合物を除去する工程を経たものであり、
前記第二の菌体処理物が、分子量が10,000以下の化合物を除去する工程を経たものである、
請求項6に記載の製造方法。 - 前記第一の熱処理がN-アセチルヘキソサミンの存在下で行われる、請求項6又は7に記載の製造方法。
- 前記第一の熱処理及び第二の熱処理がUMP又はUDP-グルコースの存在下で行われる、請求項8に記載の製造方法。
- 前記トリプシンを含む消化酵素がパンクレアチンである、請求項6~9のいずれか一項に記載の製造方法。
- スクロースホスホリラーゼ(SP)、1,3-β-ガラクトシル-N-アセチルヘキソサミンホスホリラーゼ(GLNBP)、UDP-グルコース:ガラクトース-1-リン酸ウリジ
リルトランスフェラーゼ(GalT)、及びUDP-グルコース-4-エピメラーゼ(GalE)を含む、ビフィドバクテリウム属細菌の菌体処理物から得られた酵素含有組成物であって、菌体に含まれるSPの活性が90%以上残存し、GLNBPの活性が50%以上残存し、GalTの活
性が40%以上残存し、GalEの活性が30%以上残存し、ホスホグルコムターゼ(PGM)及び
フルクトース-6-リン酸ホスホケトラーゼ(F6PPK)の活性が1%以下に低減された、
組成物。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2020065664A JP7486783B2 (ja) | 2020-04-01 | 2020-04-01 | 酵素含有組成物の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2020065664A JP7486783B2 (ja) | 2020-04-01 | 2020-04-01 | 酵素含有組成物の製造方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2021159014A JP2021159014A (ja) | 2021-10-11 |
JP7486783B2 true JP7486783B2 (ja) | 2024-05-20 |
Family
ID=78001516
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020065664A Active JP7486783B2 (ja) | 2020-04-01 | 2020-04-01 | 酵素含有組成物の製造方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP7486783B2 (ja) |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2013201913A (ja) | 2012-03-27 | 2013-10-07 | Morinaga Milk Ind Co Ltd | ラクト−n−ビオースiの製造方法 |
JP2017000002A (ja) | 2015-06-04 | 2017-01-05 | 国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構 | グリコーゲンホスホリラーゼ製剤の製造方法 |
JP2018154495A (ja) | 2017-03-21 | 2018-10-04 | フジテック株式会社 | ロープ振れ抑制ユニット |
-
2020
- 2020-04-01 JP JP2020065664A patent/JP7486783B2/ja active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2013201913A (ja) | 2012-03-27 | 2013-10-07 | Morinaga Milk Ind Co Ltd | ラクト−n−ビオースiの製造方法 |
JP2017000002A (ja) | 2015-06-04 | 2017-01-05 | 国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構 | グリコーゲンホスホリラーゼ製剤の製造方法 |
JP2018154495A (ja) | 2017-03-21 | 2018-10-04 | フジテック株式会社 | ロープ振れ抑制ユニット |
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
NIHIRA Takanori et al.,Colorimetric Quantification of α-D-Mannose 1-Phosphate,J. Appl. Glycosci.,2013年01月31日,Vol.60,p.137-139 |
POCH Mark and BEZKOROVAINY Anatoly,Bovine Milk κ-Casein Trypsin Digest Is a Growth Enhancer for the Genus Bifidobacterium,J. Agric. Food Chem.,1991年,Vol.39,p.73-77 |
北岡本光ら,ビフィズス菌酵素を利用したオリゴ糖の実用的調製法,応用糖質科学,2012年05月,第2巻、第2号,136~141頁 |
西本完、北岡本光,ヒトミルクオリゴ糖に含まれるビフィズス因子にせまる ビフィズス菌によるラクトーNービオースIの選択的代謝とその製造法,化学と生物,2008年,Vol.46, No.8,P.522-524 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2021159014A (ja) | 2021-10-11 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5792105B2 (ja) | ラクト−n−ビオースiの製造方法 | |
AU2003249081B2 (en) | Use of lactobacillus to produce exopolysaccharides in food and pharmaceutical compositions | |
AU2019243093B2 (en) | Nutritional composition, food/drink composition using nutritional composition, and modified milk powder using nutritional composition | |
KR101750154B1 (ko) | 노화지연 효과가 우수한 쌀 발효액종, 쌀 빵 및 이의 제조방법 | |
KR101805863B1 (ko) | 신바이오틱 발효 산물의 제조 방법 및 이에 의하여 제조된 신바이오틱 발효산물 | |
EP3981255A1 (en) | Nutritional composition | |
Meena et al. | Penicillium enzymes for the food industries | |
JP6762855B2 (ja) | 筋肉の分解抑制剤 | |
Grosu-Tudor et al. | Microbial and nutritional characteristics of fermented wheat bran in traditional Romanian borş production | |
KR101848230B1 (ko) | 락토바실러스 균주의 안정성 증진을 위한 프리바이오틱스 조성물 및 이를 이용한 안정화 증진방법 | |
EP2837292B1 (en) | Synbiotic food composition containing tagatose and probiotic lactic acid bacteria | |
JP7486783B2 (ja) | 酵素含有組成物の製造方法 | |
Buitron et al. | Biotechnological approach for the production of prebiotics and search for new probiotics and their application in the food industry | |
JP5603036B2 (ja) | プロバイオティクス増殖促進剤 | |
JP5800741B2 (ja) | ラクト−n−ビオースiの製造方法 | |
CN113693218B (zh) | 含高含量β-葡聚糖的红薯发酵物及含此物质的增强免疫力的食品组合物 | |
KR102282725B1 (ko) | 노화 및 부패 억제활성을 갖는 웨이셀라 사이베리아 균주 및 이의 용도 | |
JP2017509353A (ja) | デキストランの製造方法 | |
Hernández-Almanza et al. | Microbial production of bioactive pigments, oligosaccharides, and peptides | |
KR100515850B1 (ko) | pBC520 플라스미드 함유 비피도박테리움 브레베LMC520 균주, 이를 이용한 공액이중결합 지방산 및이러한 지방산 함유 발효유의 제조방법, 및 pBC520플라스미드의 용도 | |
JP4971511B2 (ja) | 糖組成物及び飲食品 | |
EP3305895B1 (en) | Beta-galactosidase variant having high transglycosylation activity, and use thereof | |
EP1001033A2 (fr) | Procédé de production de farines lactiques et produits obtenus | |
KR102567791B1 (ko) | 숙취 해소 효능을 갖는 락토바실러스 플란타룸 gfc_b001 균주 및 이를 유효성분으로 포함하는 식품 조성물 | |
EP4257183A1 (en) | Prebiotic composition for butyric acid bacteria |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20200401 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20230324 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20230329 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20230324 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20240213 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20240321 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20240402 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20240426 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7486783 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |