JP7464960B2

JP7464960B2 - Ｏｐｈ活性増強剤

Info

Publication number: JP7464960B2
Application number: JP2017137758A
Authority: JP
Inventors: 雅之八木; 和利篠田
Original assignee: 株式会社アンチエイジングコミュニケーション
Priority date: 2016-07-14
Filing date: 2017-07-14
Publication date: 2024-04-10
Anticipated expiration: 2037-07-14
Also published as: JP2018016624A

Description

本発明は、酸化蛋白質を分解する生体内酵素である酸化蛋白質分解酵素（ｏｘｉｄｉｚｅｄｐｒｏｔｅｉｎｈｙｄｒｏｌａｓｅ：ＯＰＨ）の活性を増強させるＯＰＨ活性増強剤、及び、当該ＯＰＨ活性増強剤を含有する飲食品や医薬品などに関する。

ＯＰＨは、蛋白のＮ末端アシル化アミノ酸を遊離するセリンプロテアーゼの一種で、アシルアミノ酸遊離酵素（ａｃｙｌａｍｉｎｏ－ＡｃｉｄＲｅｌｅａｓｉｎｇＥｎｚｙｍｅ：ＡＡＲＥ）、アシル化ペプチド分解酵素（ａｃｙｌｐｅｐｔｉｄｅｈｙｄｒｏｌａｓｅ：ＡＰＨ）などとも言われている。また、ＯＰＨは、アシル化だけでなく、ホルミル化（Ｆｏｒｍｙｌ）、アセチル化（Ａｃｅｔｙｌ）、ブチル化（Ｂｕｔｙｌ）、プロピル化（Ｐｒｏｐｙｌ）された蛋白質のＮ末端アミノ酸に対しても作用する。

ＯＰＨはブタ肝臓、ラット脳、ヒト血液、角層などの生体組織に広く存在している。ＯＰＨは酸化蛋白質や糖化蛋白質を優先的に分解するとともにプロテアソームと協働して老化蛋白質を分解すること、アルツハイマー病の原因であるアミロイドβ蛋白質を減少させることが報告されている。またＯＰＨがＡＧＥｓ（終末糖化産物）を分解することも確認されている。これらのことから生体中のＯＰＨの活性を増強させることは、老化蛋白質の分解を促進し、老化や疾患を予防・治療できる可能性がある。

国際公開番号ＷＯ２０１１／００４７３３

上記の事情を鑑み、本発明は、ＯＰＨの活性を増強させるＯＰＨ活性増強剤を提供することを課題とする。

上記課題を解決するための手段として、以下の発明などを提供する。すなわち、カキノキ、チコリ、シソ、ルイボス、サラシア、テンヨウケンコウシ、月見草、玄米、タンポポ、バラ、キャンドルブッシュ、モリンガ、アマチャ、オリーブ、ナタマメ、バナバのいずれか一種類以上を含有するＯＰＨ活性増強剤を提供する。

また、クマザサ、カキノキ、テンヨウケンコウシ、バナバの各抽出物を含む混合物を含有するＯＰＨ活性増強剤を提供する。

また、マスリン酸、（＋）カテキン、イソクェルシトリンのいずれか１種類以上を含有するＯＰＨ活性増強剤を提供する。

また、前記いずれか一のＯＰＨ活性増強剤を含有する食品、食品添加物、医薬品、医薬部外品及び化粧品を提供する。

本発明により、酸化蛋白質を分解する生体内酵素であるＯＰＨの活性を増強させるＯＰＨ活性増強剤などを提供することができる。

ＯＰＨ活性増強作用の測定試験１の結果を示す表ＯＰＨ活性増強作用の測定試験２の結果を示す表

以下、本発明の実施例について説明する。なお、本発明は、これらの実施例に何ら限定されるべきものではなく、その要旨を逸脱しない範囲において、種々なる態様で実施し得る。
＜実施形態＞
＜構成＞

本実施例に係るＯＰＨ活性増強剤は、カキノキ、チコリ、シソ、ルイボス、サラシア、テンヨウケンコウシ、月見草、玄米、タンポポ、バラ、キャンドルブッシュ、モリンガ、アマチャ、オリーブ、ナタマメ、バナバの抽出物のいずれか１種類以上を含有するＯＰＨ活性増強剤である。「ＯＰＨ活性増強剤」とは、酸化蛋白質の分解酵素であるＯＰＨの酸化蛋白質分解活性（以下、単にＯＰＨ活性）を増強させる剤を意味する。

本実施形態における植物の抽出物は、植物のどの部位から抽出したものであってもよく、例えば、全草、花、種子、果実、枝、茎、樹皮、根などから抽出したものであってよい。また、抽出物の性状を限定するものではない。以下に、本実施形態における各植物について説明する。

また、前記の各植物を水又は湯により抽出した物は、例えば、カキノキを湯や水で抽出した物は柿の葉茶といった称呼で茶外茶として喫飲されている。なお、茶外茶とは、チャノキ以外の植物の葉、芽、花、樹皮、根などを材料として水又は湯を注ぎ抽出した飲料のことをいう。

「カキノキ（Ｄｉｏｓｐｙｒｏｓｋａｋｉ）」は、カキノキ科カキノキ属の植物である。サンプルとして、カキノキの葉を原料とする茶外茶である柿の葉茶を用いた。

「チコリ（Ｃｉｃｈｏｒｉｕｍｉｎｔｙｂｕｓ）」は、キク科キクニガナ属の植物であり、菊苣とも称される。サンプルとして、乾燥させたチコリの根を原料とする茶外茶であるチコリ茶を用いた。なお、茶外茶とは、チャノキ以外の植物の葉、芽、花、樹皮、根などを材料として水又は湯を注ぎ抽出した飲料のことをいう。

「シソ」は、シソ科シソ属の植物であり、この属には、アオジソ（Ｐｅｒｉｌｌａｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓｖａｒ. ｃｒｉｓｐａｆ. ｖｉｒｉｄｉｓ）、アカジソ（Ｐｅｒｉｌｌａｆｒｕｔｅｓｃｅｎｓｖａｒ. ｃｒｉｓｐａｆ. ｐｕｒｐｕｒｅａ）などがある。サンプルとして、アカジソの葉を原料とする茶外茶であるシソ葉茶を用いた。

「ルイボス（Ａｓｐａｌａｔｈｕｓｌｉｎｅａｒｉｓ）」は、マメ科アスパラトゥス属の植物である。サンプルとして、ルイボスの葉を原料とする茶外茶であるルイボス茶を用いた。

「サラシア」は、ニシキギ科サラシア属の植物であり、この属には、サラシア・オブロンガ（Ｓａｌａｃｉａｏｂｌｏｎｇａ）、サラシア・レティキュラータ（Ｓａｌａｃｉａｒｅｔｉｃｕｌａｔａ）などがある。サンプルとして、サラシア・レティキュラータの根や地下茎を原料とする茶外茶であるサラシア茶を用いた。なお、サラシア・オブロンガはインド産やブラジル産のものが知られており、サラシア・レティキュラータはスリランカ産のものが知られている。いずれのサラシアも基本的な性質は同様であるが、サラシア・レティキュラータの方が、糖尿病予防などについての効能がより高いと言われることがある。

「テンヨウケンコウシ（Ｒｕｂｕｓｓｕａｖｉｓｓｉｍｕｓ）」は、バラ科キイチゴ属の植物である。サンプルとして、テンヨウケンコウシの葉を原料とする茶外茶である甜茶を用いた。

「月見草（Ｏｅｎｏｔｈｅｒａｔｅｔｒａｐｔｅｒａ）」は、アカバナ科マツヨイグサ属の植物である。サンプルとして、月見草の葉と茎を原料とする茶外茶である月見草茶を用いた。

「玄米」は、イネ科イネ属のイネ（Ｏ．ｓａｔｉｖａ．ｓｕｂｓｐ．ｊａｐｏｎｉｃａ）の果実である籾から籾殻を除去したものである。サンプルとして、焙煎した玄米を用いた。なお、番茶に玄米を混ぜたいわゆる玄米茶をサンプルとするものではない。

「タンポポ（Ｔａｒａｘａｃｕｍ）」は、キク科タンポポ属の植物である。サンプルとして、タンポポの花、葉、茎を原料とする茶外茶であるタンポポ茶を用いた。

「ローズヒップ」は、バラ科バラ属のイヌバラ（Ｒｏｓａｃａｎｉｎａ）の果実である。サンプルとしては、ローズヒップを原料とする茶外茶であるローズヒップ茶を用いた。

「キャンドルブッシュ（Ｃａｓｓｉａａｌａｔａ）」は、マメ科カッシア属の植物であり、ゴールデンキャンドルとも呼ばれる。サンプルとしては、キャンドルブッシュの葉や茎を原料とする茶外茶であるキャンドルブッシュ茶を用いた。

「モリンガ（Ｍｏｒｉｎｇａｏｌｅｉｆｅｒａ）」は、ワサビノキ科ワサビノキ属の植物である。サンプルとしては、モリンガの葉や茎を原料とする茶外茶であるモリンガ茶を用いた。

「アマチャ（ＨｙｄｒａｎｇｅａｍａｃｒｏｐｈｙｌｌａＳｅｒ．ｖａｒ．ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ）」は、アジサイ科アジサイ属の植物である。サンプルとしては、アマチャの葉や茎を原料とする茶外茶である甘茶を用いた。

「オリーブ（ｏｌｅａｅｕｒｏｐａｅａ）」は、モクセイ科オリーブ属の植物である。サンプルとしては、オリーブの葉を主原料とする茶外茶であるオリーブリーフ茶を用いた。

「ナタマメ（Ｃａｎａｖａｌｉａｇｌａｄｉａｔｅ）」は、マメ科ナタマメ属の植物である。サンプルとして、ナタマメの種子を主原料とする茶外茶であるナタマメ茶を用いた。

「バナバ（Ｌａｇｅｒｓｔｒｏｅｍｉａｓｐｅｃｉｏｓａ）」は、ミソハギ科サルスベリ属の植物である。サンプルとして、バナバの葉や茎を原料とする茶外茶であるバナバ茶を用いた。

本実施例におけるＯＰＨ活性増強剤は、さらに既知の方法を用いることにより、当該ＯＰＨ活性増強剤を含有する食品、食品添加物、医薬品、医薬部外品、化粧品などとして提供することが可能である。

例えば、医薬品とする場合には、本実施例のＯＰＨ活性増強剤を粉体や粒体としカプセルに充填したり、あるいは、賦形剤、結合剤、崩壊剤などを添加して打錠機等を用いて製造することができる。また、食品とする場合には、各植物を適宜乾燥や破砕等を湯で煮出すことで提供できる。また、医薬品のようにカプセルや錠剤のような形態で提供してもよいし、他の飲料、調味料、菓子等の各種の食品にＯＰＨ活性増強剤を添加した態様で提供することもできる。

また、美容液、クリーム、ローションなどの化粧品とすることもできる。例えば、美容液とする場合には、本実施例のＯＰＨ活性増強剤の他、水、コメヌカ油、ペンチレングリコール、グリセリン、スクワラン、パルミチン酸セチル、ダイマージリノール酸などを主成分とし、ヒアルロン酸Ｎａ、水添ナタネ油アルコール、カルボマー、キサンタンガム、水酸化カリウム、ジメチコン、ポリソルベート－６０、ステアリン酸グリセリル、水添ヒマシ油、フェノキシエタノール、尿素、アルギニン、アルブチン、クエン酸などを添加剤とする。そして、各成分を水溶性原料・油溶性原料に分けて溶解してから、それらを加熱して混合・乳化する。これを冷却しながらエキスなどの添加物を配合し、さらに低温になったところで精油や香料などの揮発性の高いものを添加する。その後、所定の安全性の検査（菌、ｐＨ、温度安定性、粘度等）を行い、瓶などに充填して製品として提供することができる。
≪試験１≫

本試験において、上記各植物の抽出物のＯＰＨ活性の増強作用について測定する。本測定ではＯＰＨとその反応基質であるＮ－ａｃｅｔｙｌ－Ｌ－ａｌａｎｉｎｅｐ－ｎｉｔｒｏ－ａｎｉｌｉｄｅ（ＡＡＰＡ）との反応系に試料溶液を添加し、ＯＰＨの酵素反応への影響を評価した。試料には、前述のカキノキ、チコリ、ルイボス、サラシア、テンヨウケンコウシ、月見草、植物のサンプルを用いた。併せて、イネ科ササ属のクマザサの葉を原料とするクマザサ茶、ミソハギ科サルスベリ属のバナバの葉を原料とするバナバ茶、フトモモ科バンジロウ属のガァバの葉を原料とするガァバ茶、バラ科バラ属のハマナスの花を原料とするメイグイ茶についても測定した。また、植物抽出物を組み合わせた場合のＯＰＨ活性増強作用を確認するために、「クマザサ茶、柿の葉茶、甜茶、バナバ茶」を等量で混合した混合茶についても測定した。

また、バナバなどの含有成分であるマスリン酸（ＭａｓｌｉｎｉｃＡｃｉｄ）（Ｃ_３０Ｈ_４８Ｏ_４）、チャノキなどの含有成分である（＋）カテキン（Ｃ_１５Ｈ_１４Ｏ_６）、柿の葉などの含有成分であるイソクェルシトリン（ｉｓｏｑｕｅｒｃｉｔｉｎ）（Ｃ_２１Ｈ_２０Ｏ_１２）についても測定を行った。
＜測定方法＞

ＯＰＨとしてａｃｙｌａｍｉｎｏ－ａｃｉｄｒｅｌｅａｓｉｎｇｅｎｚｙｍｅ（ＡＡＲＥ）、ＯＰＨの反応基質としてＡＡＰＡ溶液を使用した。測定にはＯＰＨを０．０１Ｕ／ｍＬ、０．００５Ｕ／ｍＬ、０．００１Ｕ／ｍＬに調製して使用した。

９６ウェルマイクロプレートの各ｗｅｌｌにＯＰＨ、ＡＡＰＡ、試料溶液（ジメチルスルホキシドを溶媒）を混合添加し、３７℃に設定したインキュベーター内で４時間反応させた反応液の４０５ｎｍにおける吸光度をマイクロプレートリーダーで測定した。ＯＰＨの酵素活性は１時間当たりの吸光度変化量（反応速度）を求めた。同時にｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（Ｒｅｆ）として試料無添加時の反応速度を求め、下式に従ってＲｅｆの反応速度を１００％とした時の活性増強作用を算出した。ＯＰＨ活性増強作用のネガティブコントロールにはエピガロカテキンガレート（ＥＧＣｇ）を使用した。
（式）ＯＰＨ活性増強作用（％）＝（試料のＯＰＨ反応速度／ＲｅｆのＯＰＨ反応速度）×１００
＜測定結果＞

図１は、測定結果を示す表である。表に示すように、本実施形態に係る、カキノキ、チコリ、シソ、ルイボス、サラシア、テンヨウケンコウシ、月見草の抽出物はいずれもＯＰＨ活性増強作用を有することが分かった。また、混合茶についてもＯＰＨ活性増強作用を有することが分かった。また、マスリン酸、（＋）カテキン、イソクェルシトリンについてもＯＰＨ活性増強作用を有することが分かった。
≪試験２≫

上述の試験１と同様に本実施形態の植物抽出物のＯＰＨ活性の増強作用について測定した。前述の玄米、タンポポ、バラ、キャンドルブッシュ、モリンガ、アマチャ、オリーブ、ナタマメ、バナバを測定対象とし、併せてジャスミン茶、紅茶、メイグイ茶、緑茶についても測定対象とした。

試料として、以下の通り植物抽出液を調整した。まず、秤量した２ｇの各茶葉を４０ｍＬの熱水（８０℃）で１時間抽出し、常温まで冷ましてから市販のお茶パックで濾して上清を回収して抽出液とした。また、抽出液原液だけでなく１０倍希釈液も測定対象に加えた。さらに、希釈して活性化率がアップしそうな試料については１００倍希釈液でも測定した。
＜測定方法＞

ＯＰＨとしてａｃｙｌａｍｉｎｏ－ａｃｉｄｒｅｌｅａｓｉｎｇｅｎｚｙｍｅ（ＡＡＲＥ）（タカラバイオ）を、５０ｍｍｏｌ／Ｌリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）にて０．０２５Ｕ／ｍＬに調製した。また、反応基質としてＡＡＰＡ溶液（ＢＡＣＨＥＭ）を、５０％エタノール液で２５ｍｍｏｌ／Ｌに調製した。また、反応緩衝液として、１２０ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．４）を用いた。また、ポジティブコントロールとして１ｍｇ／ｍＬのルブソシド、ネガティブコントロールとして１ｍｇ／ｍＬのＥＧＣｇ（エピガロカテキンガレート）を用いた。

そして、マイクロプレート１ウェルに、試料１０ｕＬ、０．０２５Ｕ／ｍＬＯＰＨ１０ｕＬ、反応緩衝液２１０ｕＬを入れて、３７℃で６０分間予備加温（プレインキュベーション）した。一旦、室温に戻してから、２５ｍｍｏｌ／ＬＡＡＰＡ溶液（基質液）２０ｕＬを加え、よく混合してＯＰＨ反応を開始した。反応は３７℃の恒温槽で行った。

３０分、あるいは６０分間隔でマイクロプレートを恒温槽から取り出し、マイクロプレートリーダーにて４０５ｎｍの吸光度を測定し、ＯＰＨ反応によって生じるｐＮＡ（パラニトロアニリン）を測定した。

ここで、試料のうちキャンドルブッシュについてのＯＤ（光学密度）が０．５を上回ったので、吸光度が０．５以下に収まるように蒸留水で２倍希釈したものを原液として用いることにした。

そして、ＯＰＨの活性の増強作用は、試験１と同様に１時間当たりの吸光度変化量（反応速度）を求めた。同時にｒｅｆｅｒｅｎｃｅ（Ｒｅｆ）として試料無添加時の反応速度を求め、下式に従ってＲｅｆの反応速度を１００％とした時の活性増強作用を算出した。
（式）ＯＰＨ活性増強作用（％）＝（試料のＯＰＨ反応速度／ＲｅｆのＯＰＨ反応速度）×１００
＜測定結果＞

図２は、測定結果を示す表である。図中の「濃度１」は抽出液原液を試料として用いた場合のＯＰＨ活性増強作用を示している。また、「濃度２」は１０倍希釈液を、「濃度３」は１００倍希釈液を用いた結果を示している。ただし、キャンドルブッシュについては上記の通り「濃度１」において２倍希釈液を、「濃度２」において２０倍希釈液を用いた。また、最大活性増強作用（％）を下線を付した斜字で示した。表に示すように、本実施形態に係る、玄米、タンポポ、バラ、キャンドルブッシュ、モリンガ、アマチャ、オリーブ、ナタマメ、バナバの抽出物はいずれもＯＰＨ活性増強作用を有することが分かった。
＜効果＞

試験１及び試験２の結果として示すように、本実施形態により、カキノキ、チコリ、シソ、ルイボス、サラシア、テンヨウケンコウシ、月見草、玄米、タンポポ、バラ、キャンドルブッシュ、モリンガ、アマチャ、オリーブ、ナタマメ、バナバのいずれか一種類以上を含有するＯＰＨ活性増強剤などを提供することができる。

また、クマザサ、カキノキ、テンヨウケンコウシ、バナバの各抽出物を含む混合物を含有するＯＰＨ活性増強剤などを提供することができる。

また、マスリン酸、（＋）カテキン、イソクェルシトリンのいずれか１種類以上を含有するＯＰＨ活性増強剤などを提供することができる。

Claims

カキノキの葉、チコリの根、シソの葉、ルイボスの葉、サラシアの根、サラシアの地下茎、テンヨウケンコウシの葉、月見草の葉、月見草の茎、玄米、タンポポの花、タンポポの葉、タンポポの茎、バラの果実、キャンドルブッシュの葉、キャンドルブッシュの茎、モリンガの葉、モリンガの茎、アマチャの葉、アマチャの茎、オリーブの葉、ナタマメの種子、バナバの葉、バナバの茎の抽出物のいずれか１種類以上を含有するＯＰＨ活性増強剤。
クマザサの葉、カキノキの葉、テンヨウケンコウシの葉、バナバの葉、バナバの茎の各抽出物を含む混合物を含有するＯＰＨ活性増強剤。
請求項１から２のいずれか一に記載のＯＰＨ活性増強剤を含有するＯＰＨ活性増強用食品。
請求項１から２のいずれか一に記載のＯＰＨ活性増強剤を含有するＯＰＨ活性増強用食品添加物。
請求項１から２のいずれか一に記載のＯＰＨ活性増強剤を含有するＯＰＨ活性増強用医薬品。
請求項１から２のいずれか一に記載のＯＰＨ活性増強剤を含有するＯＰＨ活性増強用医薬部外品。
請求項１から２のいずれか一に記載のＯＰＨ活性増強剤を含有するＯＰＨ活性増強用化粧品。