JP7457880B2 - 新規なＮａｖ１．７モノクローナル抗体 - Google Patents

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Description

本発明は、新規のＮａｖ１．７モノクローナル抗体又はその抗体断片に関する。より詳細には、Ｎａｖ１．７に特異的に結合する抗体若しくはその抗体断片に関する。さらに詳しくは、Ｎａｖ１．７を選択的に阻害するモノクローナル抗体若しくはその抗体断片又はこれを含有する医薬組成物若しくはＮａｖ１．７検出用キットに関する。
Ｎａｖ１．７は遺伝子ＳＣＮ９Ａにコードされている電位依存性ナトリウムイオンチャネルであり、主に末梢神経に発現する（非特許文献１）。Ｎａｖ１．７は、４つのドメインＡ、Ｂ、Ｃ、及びＤ（ドメインＩ～ＩＶとも言及される）を含み、それぞれが６つの膜貫通タンパク質ヘリックス（Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３、Ｓ４、Ｓ５及びＳ６）並びに３つの細胞外（親水性）ループＥ１、Ｅ２及びＥ３（細胞外領域Ｅ１、Ｅ２及びＥ３とも言及される）を含む。
Ｎａｖ１．７ノックアウトマウスにおいて炎症性疼痛が小さくなること（非特許文献２）が知られており、低分子化合物であるＮａｖ１．７阻害剤が先端紅痛症（非特許文献３）、三叉神経痛（非特許文献４）等に効果を示すことが確認されている。
また、痛み（疼痛）や痒み（掻痒）に効果があるＮａｖ１．７モノクローナル抗体が特許文献１～１０等で報告されている。特許文献１～６及び８にはヒトＮａｖ１．７ドメインＣのＥ３細胞外領域に結合する抗体が記載されている。
ＷＯ２０１１／０５１３５０ ＵＳ８７３４７９８ ＵＳ８９８６９５４ ＵＳ９２６６９５３ ＷＯ２０１４／１５９５９５ ＷＯ２０１５／０３２９１６ ＷＯ２０１５／０３５１７３ ＷＯ２０１９／２３０８５６ ＷＯ２０２２／１０９１０２ ＷＯ２０１１／０５１３４９
ＰＮＡＳ（１９９７）９４：１５２７－１５３２ ＰＮＡＳ（２００４）１０１：１２７０６－１２７１１ Ｐａｉｎ（２０１２）１５３（１）：８０－８５ ＴＨＥ ＬＡＮＣＥＴ ＮＥＵＲＯＬＯＧＹ（２０１７）１６（４）：２９１－３００
本発明の目的は、疼痛、掻痒等の治療薬として利用可能な新規のＮａｖ１．７モノクローナル抗体又はその抗体断片を提供することである。
本発明者らは、鋭意研究の結果、下記実施例１に記載の通り、「１４２４－ＱＰＫＹＥＹＳＬ（配列番号１）－１４３１；ｈＣＥ３Ｃペプチド」を抗原として選定し、Ｎａｖ１．７のドメインＣのＥ３細胞外ループＣ末領域に特異的に結合し、Ｎａｖ１．７を選択的に阻害するモノクローナル抗体を見出した。さらに、下記実施例９に記載の通り、本発明のモノクローナル抗体が、疼痛抑制効果を有することを見出した。また、特許文献７にはＮａｖ１．７モノクローナル抗体の掻痒抑制効果が示されており、本発明のモノクローナル抗体も同様に掻痒抑制効果があることが示唆される。
特許文献１～４には、ウサギに免疫された免疫原である、ヒトＮａｖ１．７ドメインＣのループＥ３由来のペプチド（Ｃ３１、Ｃ３２及びＣ３３）が開示されている（ＴＡＢＬＥ １）。そのうち、Ｃ３３は、本発明のモノクローナル抗体又はその抗体断片の免疫原と同じく、ヒトＮａｖ１．７ドメインＣのループＥ３のＣ末由来のペプチドである。しかしながら、特許文献１～４には、Ｃ３３の免疫によって得られた抗体及びその抗体に関する親和性や生物学的データは、一切開示されていない。
特許文献５には、ヒトＮａｖ１．７細胞外ループ３－３（ドメインＣのＥ３細胞外ループ）由来のペプチドを免疫原として得られた３８抗体が開示されている。ただし、そのペプチドの配列は開示されておらず、細胞外ループ３－３の全長であるか、断片であるかは不明である。Ｈ４Ｈ４６８Ｐ、Ｈ４Ｈ４６８Ｂ、Ｈ４Ｈ４７１Ｐ、Ｈ４Ｈ４７１Ｂ及びＨ１Ｍ８５２Ｎのみが、ｉｎ ｖｉｔｒｏで細胞外ループ３－３ペプチド（特許文献５の配列番号６７０（ヒトＮａｖ１．７アミノ酸配列）の１３３３－１３８２残基）との親和性やＮａｖ１．７に対する特異性等の評価をされており、それらのうち、候補抗体と記載されたＨ４Ｈ４６８Ｐ（ＲＥＧＮ１０６４）のみが、ｉｎ ｖｉｖｏで評価されている。しかしながら、特許文献５の［０２１３］及び［０２１４］には、ラットへのＨ４Ｈ４６８Ｐの腹腔内投与は、機械的刺激閾値及び投与後４８時間後の熱侵害受容閾値に影響を与えないと記されており、Ｈ４Ｈ４６８Ｐの疼痛抑制効果は示されていない。
特許文献６には、ｈＮａｖ１．７－ｌｏｏｐＣ３－ｌｌａｍａ Ｆｃ融合体を免疫原として得られた抗体（１０Ｂ６及び１０Ｃ４）が開示されている。ここで、ｈＮａｖ１．７－ｌｏｏｐＣ３は、ｈＮａｖ１．７のドメインＣのＥ３細胞外ループの全長配列であり、ｈＮａｖ１．７－ｌｏｏｐＣ３のＣ末由来のペプチドに対する抗体は一切開示されていない。さらに、１０Ｂ６及び１０Ｃ４は、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける親和性や機能評価はされているが、ｉｎ ｖｉｖｏ評価は一切されていない。
特許文献７には、Ｎａｖ１．７のドメインＩＩ（ドメインＢ）に結合し、疼痛及び掻痒の抑制効果を有する抗体（ＳＶｍａｂ１）が開示されている。
特許文献９及び１０には、Ｎａｖ１．７のドメインＩ（ドメインＡ）に結合する抗体が開示されている。
つまり、特許文献１～７、９及び１０には、ヒトＮａｖ１．７ドメインＣのＥ３細胞外ループＣ末領域に特異的に結合し、疼痛抑制効果を有することが示された抗体は、一切開示されていない。
特許文献８には、実施例１に記載の通り、ヒトＮａｖ１．７ドメインＣのＥ３細胞外ループＣ末のペプチドを用いて免疫原を調製し、ｉｎ ｖｉｖｏで疼痛抑制効果を有する抗体が示されている。なお、特許文献８記載の免疫原は、「１４１８－ＳＶＮＶＤＫＱＰＫＹＥＹＳＬ（特許文献８の配列番号１；本願明細書における配列番号１０３）－１４３１；ｈＣＥ３Ｃペプチド」を抗原として選定して調製しており、本発明のモノクローナル抗体の免疫原とは同一ではない。
すなわち、本発明は、以下に関する。
（１）配列番号７５：Ｘａａ１－Ｙ－Ｎ－Ｍ－Ｈ（ここでＸａａ１はＤ又はＥである）のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号７６：Ｒ－Ｉ－Ｎ－Ｐ－Ｋ－Ｎ－Ｇ－Ｖ－Ｉ－Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｎ－Ｅ－Ｋ－Ｆ－Ｋ－Ｄ（ここでＸａａ１はＮ、Ｌ、Ｑ又はＫであり、Ｘａａ２はＳ、Ｌ又はＹである）のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号７７：Ｓ－Ｙ－Ｘａａ１－Ｇ－Ｇ－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｄ－Ａ－Ｙ（ここでＸａａ１はＹ又はＦであり、Ｘａａ２はＮ、Ｄ、Ｑ又はＫであり、Ｘａａ３はＴ、Ｄ、Ｓ又はＱである）のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号７８：Ｒ－Ｘａａ１－Ｓ－Ｘａａ２－Ｓ－Ｖ－Ｄ－Ｎ－Ｙ－Ｇ－Ｘａａ３－Ｓ－Ｆ－Ｘａａ４－Ｎ（ここでＸａａ１は、Ａ又はＶであり、Ｘａａ２はＥ又はＤであり、Ｘａａ３はＩ又はＦであり、Ｘａａ４はＭ又はＬである）のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
を含むＮａｖ１．７に結合するモノクローナル抗体又はその抗体断片。
（２）配列番号４又は５８のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５、５９～６３のいずれかのアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６、６４～７１のいずれかのアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号８、７２～７４のいずれかのアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
を含む（１）記載のモノクローナル抗体又はその抗体断片。
（３）１）配列番号５８のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６４のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号７２のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
２）配列番号４のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６４のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号７２のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
３）配列番号５８のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６４のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号８のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
４）配列番号４のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６４のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号８のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
５）配列番号５８のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６５のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号７２のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
６）配列番号４のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６４のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号７２のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
７）配列番号５８のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６６のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号７２のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
８）配列番号４のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６６のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号８のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
９）配列番号４のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６６のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号７２のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
１０）配列番号５８のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６６のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号８のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
１１）配列番号４のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６５のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号７２のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
１２）配列番号５８のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６５のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号８のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
１３）配列番号５８のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６６のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号７２のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
１４）配列番号４のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６４のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号８のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
１５）配列番号４のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６５のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号８のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
１６）配列番号５８のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６６のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号８のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
１７）配列番号４のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６６のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号７２のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
１８）配列番号４のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６６のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号７３のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
１９）配列番号５８のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６５のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号７２のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
２０）配列番号４のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６６のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号８のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
２１）配列番号５８のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号７２のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
２２）配列番号５８のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６５のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号８のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
２３）配列番号５８のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６７のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号７２のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
２４）配列番号５８のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号６０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６７のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号７２のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
２５）配列番号５８のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号８のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
２６）配列番号４のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６５のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号７３のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
２７）配列番号４のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号７３のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
２８）配列番号５８のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６７のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号８のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
２９）配列番号４のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号８のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
３０）配列番号４のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６５のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号７２のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
３１）配列番号５８のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号６０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６７のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号８のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
３２）配列番号５８のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６７のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号７３のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
３３）配列番号４のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号６０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６７のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号７２のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
３４）配列番号５８のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６８のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号７２のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
３５）配列番号４のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号７２のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
３６）配列番号４のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号６１のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号７２のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
３７）配列番号４のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号７３のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
３８）配列番号４のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号６２のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号７３のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
３９）配列番号４のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号６３のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号７２のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
４０）配列番号４のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号６１のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号７３のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
４１）配列番号４のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号７０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号７２のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
４２）配列番号４のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号７１のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号８のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
４３）配列番号４のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号７４のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；若しくは
４４）配列番号４のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号５のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号６のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
配列番号８のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
配列番号９のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
配列番号１０のアミノ酸配列において１～２個のアミノ酸が欠失、置換、挿入及び／若しくは付加されていてもよいアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域；
を含む（２）記載のモノクローナル抗体又はその抗体断片。
（４）該モノクローナル抗体が、ヒト化モノクローナル抗体である、（１）～（３）のいずれかに記載のモノクローナル抗体又はその抗体断片。
（５）配列番号２５、３２～５４のいずれかのアミノ酸配列又は
配列番号２５、３２～５４のいずれかのアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域並びに
配列番号２８、５５～５７、７９～１０２のいずれかのアミノ酸配列又は
配列番号２８、５５～５７、７９～１０２のいずれかのアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
を含む、（４）のモノクローナル抗体又はその抗体断片。
（６）１）配列番号３２のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号５５のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
２）配列番号３３のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号５５のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
３）配列番号３２のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２８のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
４）配列番号３３のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２８のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
５）配列番号３４のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号５５のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
６）配列番号３５のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号５５のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
７）配列番号３６のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号５５のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
８）配列番号３７のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２８のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
９）配列番号３７のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号５５のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
１０）配列番号３６のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２８のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
１１）配列番号３８のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号５５のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
１２）配列番号３４のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２８のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
１３）配列番号３９のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号５５のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
１４）配列番号３５のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２８のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
１５）配列番号３８のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２８のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
１６）配列番号３９のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２８のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
１７）配列番号４０のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号５５のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
１８）配列番号４０のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号５６のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
１９）配列番号４１のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号５５のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
２０）配列番号４０のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２８のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
２１）配列番号４２のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号５５のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
２２）配列番号４１のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２８のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
２３）配列番号４３のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号５５のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
２４）配列番号４４のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号５５のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
２５）配列番号４２のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２８のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
２６）配列番号４５のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号５６のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
２７）配列番号４６のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号５６のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
２８）配列番号４３のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２８のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
２９）配列番号４６のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２８のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
３０）配列番号４５のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号５５のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
３１）配列番号４４のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２８のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
３２）配列番号４３のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号５６のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
３３）配列番号４７のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号５５のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
３４）配列番号４８のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号５５のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
３５）配列番号４９のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号５５のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
３６）配列番号５０のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号５５のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
３７）配列番号４９のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号５６のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
３８）配列番号５１のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号５６のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
３９）配列番号５２のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号５５のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
４０）配列番号５０のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号５６のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
４１）配列番号５３のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号５５のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
４２）配列番号５４のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２８のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
４３）配列番号２５のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号５７のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
４４）配列番号２５のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号２８のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
４５）配列番号３３のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号７９のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
４６）配列番号３３のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号８０のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
４７）配列番号３３のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号８８のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
４８）配列番号３３のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号１０１のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
４９）配列番号３３のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号１０２のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
５０）配列番号３３のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号８１のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
５１）配列番号３３のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号８２のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
５２）配列番号３３のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号８３のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
５３）配列番号３３のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号８４のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
５４）配列番号３３のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号８５のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
５５）配列番号３３のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号８６のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
５６）配列番号３３のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号８７のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
５７）配列番号３３のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号８９のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
５８）配列番号３３のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号９０のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
５９）配列番号３３のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号９１のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
６０）配列番号３３のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号９２のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
６１）配列番号３３のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号９３のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
６２）配列番号３３のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号９４のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
６３）配列番号３３のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号９５のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
６４）配列番号３３のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号９６のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
６５）配列番号３３のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号９７のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
６６）配列番号３３のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号９８のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；
６７）配列番号３３のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号９９のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域；若しくは
６８）配列番号３３のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域及び配列番号１００のアミノ酸配列と９５％以上の同一性のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域;
を含む（５）記載のモノクローナル抗体又はその抗体断片。
（７）さらに、
配列番号１１のアミノ酸配列からなる重鎖定常領域及び
配列番号１２のアミノ酸配列からなる軽鎖定常領域
を含む（１）～（６）のいずれかに記載のモノクローナル抗体又はその抗体断片。
（７－１）Ｎａｖ１．７に対する結合活性が２ｎＭ又はそれ未満である、前記（１）～（７）のいずれかに記載のモノクローナル抗体又はその抗体断片。
（７－２）Ｎａｖ１．７に対する結合活性が１ｎＭ又はそれ未満である、前記（７－１）に記載のモノクローナル抗体又はその抗体断片。
（８）（１）～（７）、（７－１）、（７－２）のいずれかに記載のモノクローナル抗体又はその抗体断片を含有する医薬組成物。
（８－１）Ｎａｖ１．７関連疾患の治療剤及び/又は予防剤である、（８）記載の医薬組成物。
（９）Ｎａｖ１．７関連疾患が、疼痛及び／又は掻痒である、（８－１）記載の医薬組成物。
（１０）（５）又は（６）に記載のモノクローナル抗体の重鎖可変領域をコードし、
さらに（７）記載のモノクローナル抗体の重鎖定常領域をコードしていてもよいポリヌクレオチド。
（１１－１）（５）又は（６）に記載のモノクローナル抗体の軽鎖可変領域をコードし、
さらに（７）記載のモノクローナル抗体の軽鎖定常領域をコードしていてもよいポリヌクレオチド。
（１１－２）（１０）及び（１１－１）記載のポリヌクレオチドの組合せ。
（１１－３）（１）、（２）～（７）のいずれかに記載のモノクローナル抗体又はその抗体断片をコードするポリヌクレオチド。
（１２）（１０）及び／又は（１１－１）記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
（１２－１）（１１－３）のポリヌクレオチド又は（１２）の発現ベクターを含む宿主細胞。
（１３）（１）～（７）、（７－１）、（７－２）のいずれかに記載のモノクローナル抗体若しくはその抗体断片を投与することを含む、Ｎａｖ１．７関連疾患の予防又は治療方法。
（１４）Ｎａｖ１．７関連疾患の治療剤及び/又は予防剤を製造するための、（１）～（７）、（７－１）、（７－２）のいずれかに記載のモノクローナル抗体又はその抗体断片。
（１５）Ｎａｖ１．７関連疾患の治療若しくは予防のための、（１）～（７）、（７－１）、（７－２）のいずれかに記載のモノクローナル抗体又はその抗体断片。
（１６）Ｎａｖ１．７関連疾患の治療若しくは予防のための、（１）～（７）、（７－１）、（７－２）のいずれかに記載のモノクローナル抗体又はその抗体断片の使用。
（１７）Ｎａｖ１．７関連疾患が、疼痛及び／又は掻痒である、（１３）記載の予防又は治療方法、（１４）若しくは（１５）記載のモノクローナル抗体又はその抗体断片又は（１６）記載のモノクローナル抗体又はその抗体断片の使用。
（１８）（１）～（７）、（７－１）、（７－２）のいずれかに記載のモノクローナル抗体若しくはその抗体断片を含有するＮａｖ１．７検出用キット。
本発明のモノクローナル抗体又はその抗体断片は、Ｎａｖ１．７に特異的に結合するので、生体試料においてＮａｖ１．７を検出するために使用することができる。さらに、本発明のモノクローナル抗体又はその抗体断片は、Ｎａｖ１．７を選択的に阻害する活性を有するので、本発明のモノクローナル抗体又はその抗体断片を含む医薬組成物は、医薬品、特に、Ｎａｖ１．７関連疾患の治療又は予防のための医薬として非常に有用である。
１５Ｈ１１の重鎖可変領域（配列番号３）及び軽鎖可変領域（配列番号７）のＫａｂａｔ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇの結果を示す。ＨＦＲ１～ＨＦＲ４はそれぞれ重鎖フレームワーク領域１～４を意味し、ＣＤＲ―Ｈ１～ＣＤＲ－Ｈ３はそれぞれ重鎖相補性決定領域１～３を意味する。ＬＦＲ１～ＬＦＲ４はそれぞれ軽鎖フレームワーク領域１～４を意味し、ＣＤＲ―Ｌ１～ＣＤＲ－Ｌ３はそれぞれ軽鎖相補性決定領域１～３を意味する。 ヒト化抗体ｈ１５Ｈ１１の重鎖可変領域（ＩＧＨＶ７－４－１ Ｑ４３Ｒ， Ｇ４４Ｓ， Ｒ９４Ｐ（配列番号２５））及び軽鎖可変領域（ＩＧＫＶ７－３ Ｙ３６Ｆ， Ｖ７８Ｍ（配列番号２８））のＫａｂａｔ ｎｕｍｂｅｒｉｎの結果を示す。ＨＦＲ１～ＨＦＲ４はそれぞれ重鎖フレームワーク領域１～４を意味し、ＣＤＲ―Ｈ１～ＣＤＲ－Ｈ３はそれぞれ重鎖相補性決定領域１～３を意味する。ＬＦＲ１～ＬＦＲ４はそれぞれ軽鎖フレームワーク領域１～４を意味し、ＣＤＲ―Ｌ１～ＣＤＲ－Ｌ３はそれぞれ軽鎖相補性決定領域１～３を意味する。 坐骨神経部分結紮モデルに対する静脈内投与による薬効評価
本明細書において使用される用語は、特に言及する場合を除いて、当該分野で通常用いられる意味で用いられる。
本発明においては、当該分野で公知の抗体作製手法が利用可能である。例えば、Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｉｎ Ｐｒａｃｔｉｃｅ （Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉａｔｉｏｎｓ）に記載された方法等が挙げられる。
また、当該分野で公知の遺伝子操作的手法が利用可能である。例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ， Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｆｏｒｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ （２０１２）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ （２０１２）に記載された方法等が挙げられる。
ヒトＮａｖ１．７は遺伝子ＳＣＮ９Ａにコードされているアミノ酸からなるタンパク質（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｑ１５８５８）である。
本発明のモノクローナル抗体又はその抗体断片は、本明細書に記載のＣＤＲ又は重鎖可変領域／軽鎖可変領域を有するモノクローナル抗体又は該抗体の断片である。該抗体又は抗体断片は、免疫グロブリン分子の任意のクラス（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ若しくはＩｇＡ）又はサブクラス由来であり得、例えば、マウス、ラット、サメ、ウサギ、ブタ、ハムスター、ラクダ、ラマ、ヤギ又はヒトを含む任意の種から取得されてもよい。該抗体又は抗体断片として、好ましくは、ヒト化モノクローナル抗体又はヒト化モノクローナル抗体の抗体断片である。
本発明において「モノクローナル抗体の抗体断片」とは、本発明のモノクローナル抗体の一部であって、当該モノクローナル抗体と同様にＮａｖ１．７に特異的に結合し、Ｎａｖ１．７を選択的に阻害する断片を意味する。
具体的には、ヒトＮａｖ１．７に対して特異的に結合するＦａｂ（ｆｒａｇｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｉｇｅｎ ｂｉｎｄｉｎｇ）、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、一本鎖抗体（ｓｉｎｇｌｅ ｃｈａｉｎ Ｆｖ；以下、ｓｃＦｖと表記する）、ジスルフィド安定化抗体（ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ ｓｔａｂｉｌｉｚｅｄ Ｆｖ； 以下、ｄｓＦｖと表記する）、２量化体Ｖ領域断片（以下、Ｄｉａｂｏｄｙと表記する）、ＣＤＲを含むペプチド等を挙げることができる（エキスパート・オピニオン・オン・テラピューティック・パテンツ、第６巻、第５号、第４４１～４５６頁、１９９６年）。
Ｆａｂは、ＩｇＧのヒンジ領域で２本のＨ鎖を架橋している２つのジスルフィド結合（Ｓ－Ｓ結合）の上部のペプチド部分を酵素パパインで分解して得られる、Ｈ鎖のＮ末端側約半分とＬ鎖全体で構成される、分子量約５万の抗原結合活性を有する抗体断片である。本発明で使用されるＦａｂは、本発明のモノクローナル抗体をパパイン処理して得ることができる。また、本発明のモノクローナル抗体のＦａｂをコードするＤＮＡを細胞用発現ベクターに挿入し、該ベクターを細胞へ導入することにより発現させることによってもＦａｂを製造することができる。
Ｆａｂ’は、Ｆ（ａｂ’）２のヒンジ間のＳ－Ｓ結合を切断した分子量約５万の抗原結合活性を有する抗体断片である。本発明で使用されるＦａｂ’は、本発明のモノクローナル抗体のＦ（ａｂ’）２を還元剤ジチオスレイトール処理して得ることができる。また、本発明のモノクローナル抗体のＦａｂ’をコードするＤＮＡを細胞用発現ベクターに挿入し、該ベクターを大腸菌、酵母又は動物細胞へ導入することにより発現させることによってもＦａｂ’を製造することができる。
Ｆ（ａｂ’）２は、ＩｇＧのヒンジ領域の２個のＳ－Ｓ結合の下部を酵素ペプシンで分解して得られる、２つのＦａｂ’領域がヒンジ部分で結合して構成される、分子量約１０万の抗原結合活性を有する抗体断片である。本発明で使用されるＦ（ａｂ’）２は、本発明のモノクローナル抗体をペプシン処理して得ることができる。また、本発明のモノクローナル抗体のＦ（ａｂ’）２をコードするＤＮＡを細胞用発現ベクターに挿入し、該ベクターを大腸菌、酵母又は動物細胞へ導入することにより発現させることによってもＦ（ａｂ’）２を製造することができる。
ｓｃＦｖは、一本のＶＨと一本のＶＬとを適当なペプチドリンカー（以下、Ｐと表記する）を用いて連結した、ＶＨ－Ｐ－ＶＬ又はＶＬ－Ｐ－ＶＨポリペプチドであり、抗原活性を有する抗体断片である。本発明で使用されるｓｃＦｖに含まれるＶＨ及びＶＬは、本発明のモノクローナル抗体のものであればよい。本発明で使用されるｓｃＦｖは、本発明のモノクローナル抗体のＶＨ及びＶＬをコードするｃＤＮＡを用いて、ｓｃＦｖ発現ベクターを構築し、大腸菌、酵母又は動物細胞へ導入することにより発現させ製造することができる。
ｄｓＦｖは、ＶＨ及びＶＬ中のそれぞれ１アミノ酸残基をシステイン残基に置換したポリペプチドをＳ－Ｓ結合を介して結合させたものをいう。システイン残基に置換するアミノ酸残基はＲｅｉｔｅｒらにより示された方法（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、７、６９７（１９９４））に従って、抗体の立体構造予測に基づいて選択することができる。本発明で使用されるｄｓＦｖに含まれるＶＨ又はＶＬは、本発明のモノクローナル抗体のものであればよい。本発明で使用されるｄｓＦｖは、本発明のモノクローナル抗体のＶＨ及びＶＬをコードするｃＤＮＡを用いて、適当な発現ベクターに挿入してｄｓＦｖ発現ベクターを構築し、該発現ベクターを大腸菌、酵母又は動物細胞へ導入し、発現させることにより製造することができる。
Ｄｉａｂｏｄｙは、抗原結合特異性が同じ又は異なるｓｃＦｖが２量体を形成した抗体断片であり、同じ抗原に対する２価の抗原結合活性又は異なる抗原に対する２種類の特異的な抗原結合活性を有する抗体断片である。例えば、本発明のモノクローナル抗体に特異的に反応する２価のＤｉａｂｏｄｙは、本発明のモノクローナル抗体のＶＨ及びＶＬをコードするｃＤＮＡを用いて、３～１０残基のペプチドリンカーを有するｓｃＦｖをコードするＤＮＡを構築し、該ＤＮＡを細胞用発現ベクターに挿入し、該発現ベクターを大腸菌、酵母又は動物細胞へ導入することによりＤｉａｂｏｄｙを発現させ、製造することができる。
ＣＤＲを含むペプチドは、ＶＨ又はＶＬのＣＤＲの少なくとも１領域以上を含んで構成される。複数のＣＤＲは、直接又は適当なペプチドリンカーを介して結合させることができる。本発明で使用されるＣＤＲを含むペプチドは、本発明のモノクローナル抗体のＶＨ及びＶＬをコードするｃＤＮＡを用いて、ＣＤＲをコードするＤＮＡを構築し、該ＤＮＡを動物細胞用発現ベクターに挿入し、該ベクターを大腸菌、酵母又は動物細胞へ導入することにより発現させることにより、製造することができる。また、ＣＤＲを含むペプチドは、Ｆｍｏｃ法（フルオレニルメチルオキシカルボニル法）、ｔＢｏｃ法（ｔ－ブチルオキシカルボニル法）等の化学合成法によって製造することもできる。
本発明のモノクローナル抗体は、ヒトＮａｖ１．７のアミノ酸配列又はその立体構造を特異的に認識して結合するモノクローナル抗体に放射性同位体、低分子若しくは高分子の薬剤、タンパク質又は本発明のモノクローナル抗体とは異なる抗体医薬等を化学的若しくは遺伝子工学的に結合させた抗体の誘導体を含む。
本発明のモノクローナル抗体又はその抗体断片は、Ｎａｖ１．７に特異的に結合することが特徴である。以下、Ｎａｖ１．７特異的結合能の測定手順の一例を記す。
Ｎａｖ１．７の特異的結合は、２つの分子が特異的に結合するかを測定することにより、結合活性として評価できる。例えば、当該技術分野で周知の方法のほか、実施例５に記載の競合ＥＬＩＳＡ法、表面プラズモン共鳴等が挙げられる。
競合ＥＬＩＳＡ法によるＮａｖ１．７の結合競合阻害活性の阻害率が５０％を示す抗体の有効濃度は、ＩＣ５０として定義される。ＩＣ５０は、しばしば抗体の結合活性を示す指標の一つとして用いられる。本発明のモノクローナル抗体のＩＣ５０値として好ましくは２ｎＭ又はそれ未満であり、より好ましくは１ｎＭ又はそれ未満、特に好ましくは０．６ｎＭ又はそれ未満である。
表面プラズモン共鳴によるＮａｖ１．７の結合活性は、平衡解離定数（ＫＤ）として定義される。例えば、ＫＤが小さいほど、より緊密な結合を表す。本発明のモノクローナル抗体又はその抗体断片のＫＤとして好ましくは約２ｎＭ又はそれ未満であり、より好ましくは約１ｎＭ又はそれ未満である。
例えば、Ｎａｖ１．７に対して２ｎＭ又はそれ未満の結合活性を有する抗体は、ＩＣ５０及び／又はＫＤが２ｎＭ又はそれ未満であるＮａｖ１．７モノクローナル抗体を意味する。
しかし、Ｎａｖ１．７を特異的に結合する単離抗体は、他の種由来のＮａｖ１．７分子のような他の抗原に対する交差反応性を示すことがある。それにもかかわらず、更に、ｈＮａｖ１．７及び１以上の更なる抗原と結合する多重特異的抗体、又はｈＮａｖ１．７の２種の異なる領域（例えば、ドメインＣのＥ１細胞外ループ及びドメインＣのＥ３細胞外ループ）と結合する二重特異的抗体は、ｈＮａｖ１．７と「特異的に結合する」抗体とみなされる。
本発明のモノクローナル抗体又はその抗体断片は、Ｎａｖ１．７を阻害することが特徴である。以下、Ｎａｖ１．７阻害能の測定手順の一例を記す。
Ｎａｖ１．７をコードするＤＮＡをクローニングしたｐｃＤＮＡ３．１（インビトロジェン社製）をＦｒｅｅＳｔｙｌｅ ２９３細胞（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）にトランスフェクションすることによりＮａｖ１．７安定発現細胞を構築する。この細胞を用いて下記に示す方法によりマニュアルパッチクランプを実施することにより、抗体のＮａｖ１．７特異的な阻害を評価することができる。ポリＬ-リジンコートしたガラス片を、３５ｍｍディッシュに並べ、１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ（ＳＩＧＭＡ社製）に懸濁したＮａｖ１．７安定発現細胞を播種する（４×１０４ ｃｅｌｌｓ／ｄｉｓｈ）。播種翌日、ガラス片を測定チャンバーに移してホールセル形成し、―７０ｍＶ固定、１０ｍｓｅｃ矩形波を０．１Ｈｚで与えながら抗体を処置し、抗体処置前と処置後（＞２ｍｉｎ処置）で測定を行う。
本発明のモノクローナル抗体は、本明細書に記載のＣＤＲ又は重鎖可変領域／軽鎖可変領域を用いて当該分野の定法によって作製することができる。
本発明のモノクローナル抗体は、ヒト化モノクローナル抗体も含む。ヒト化抗体はヒト体内における免疫原性（抗原性）が低下しているため、治療目的等でヒトに投与する場合に有用である。「免疫原性が低い」とは、例えば、治療効果を達成するのに十分な時間において、投与された本発明のモノクローナル抗体が生体による免疫応答を誘起しないことを意味する。ヒトにおける免疫原性のレベルは、Ｔ細胞エピトープ予測プログラムで予測することができる。例えば、Ｔ細胞エピトープ予測プログラムとして、Ｅｐｉｂａｓｅ（Ｌｏｎｚａ）、ｉＴｏｐｅ／ＴＣＥＤ（Ａｎｔｉｔｏｐｅ）、ＥｐｉＭａｔｒｉｘ（ＥｐｉＶａｘ）等が用いられる。
ヒト化モノクローナル抗体は、ヒト以外の哺乳動物、例えばマウス抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ; ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｉｔｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎ) をヒト抗体のフレームワーク領域（ＦＲ ; ｆｒａｍｅｗｏｒｋ ｒｅｇｉｏｎ)へ移植したものである。従って、ヒト化モノクローナル抗体のＦＲは、ヒト由来のものである。適当なＦＲは、Ｋａｂａｔ Ｅ．Ａ．らの文献を参照すれば選択できる。この場合のＦＲとしては、ＣＤＲが良好な抗原結合部位を形成するものが選択される。必要に応じ、再構成したヒト化抗体のＣＤＲが適切な抗原結合部位を形成するように抗体の可変領域のＦＲのアミノ酸を置換してもよい（Ｓａｔｏ、Ｋ．ら, Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ． １９９３年、第５３巻、８５１ページ)。置換されるＦＲのアミノ酸の割合は、全ＦＲ領域の０～１５％、好ましくは０～５％である。
なお、本発明のヒト化モノクローナル抗体には、ヒト抗体の定常領域が使用される。好ましいヒト抗体の定常領域としては、重鎖としてはＣγが挙げられ、例えば、Ｃγ１，Ｃγ２，Ｃγ３，Ｃγ４を、軽鎖としてはＣκ、Ｃλを使用することができる。また、抗体又はその産生の安定性を改善するために、ヒト抗体の定常領域を修飾してもよい。ヒト化の際に用いられるヒト抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤ等いかなるアイソタイプのヒト抗体でもよいが、本発明においてはＩｇＧを用いることが好ましく、さらにＩｇＧ１又はＩｇＧ４が好ましい。ＩｇＧ１を選択する場合、重鎖定常領域にエフェクター機能を低減するためのアミノ酸変異を有することが好ましい。好ましいアミノ酸変異としては、Ｋａｂａｔのｎｕｍｂｅｒｉｎｇにおけるアミノ酸残基Ｎ２９７、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｄ２６５、及び／又はＰ３２９において、Ｎ２９７Ｇ／Ａ、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｄ２６５Ａ、及びＰ３２９Ｇなどの変異を挙げることができる。ＩｇＧ１は、これらの変異のいずれか１つ又は複数の組合せを含んでいても良い。
本発明のヒト化モノクローナル抗体は、好ましくは、配列番号１２のアミノ酸配列の軽鎖定常領域及び配列番号１１のアミノ酸配列の重鎖定常領域を有している。ただし、配列番号１１のＣ末端のリジン又はＣ末端の２アミノ酸残基（グリシン‐リジン）は、存在していても、していなくてもよい。
ヒト化モノクローナル抗体は一般的な製造方法により作製することができる（例えば、下記実施例４、ＷＯ９５／１４０４１号公報、ＷＯ９６／０２５７６号公報等参照）。具体的には、まずマウス抗体のＣＤＲとヒト抗体のＦＲを連結するように設計した可変領域をコードするＤＮＡ配列を、末端部にオーバーラップする部分を有するように作製した数個のオリゴヌクレオチドからＰＣＲ法により合成する（ＷＯ９８／１３３８８号公報参照）。得られたＤＮＡを、ヒト抗体の定常領域をコードするＤＮＡと連結し、次いで発現ベクターに組み込む。又は、抗体の可変領域をコードするＤＮＡを、抗体の定常領域のＤＮＡを含む発現ベクターへ組み込んでもよい。本発明で使用される抗体を製造するには、抗体遺伝子を発現制御領域、例えば、エンハンサー／プロモーターの制御のもとで発現するよう発現ベクターに組み込む。次に、この発現ベクターにより宿主細胞を形質転換し、抗体を発現させることができる。
上記の形質転換体の宿主細胞としては、例えば、ＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞等の脊椎動物細胞、原核細胞、酵母等が挙げられる。形質転換体は、当業者に周知の方法に従って培養することができ、該培養により、形質転換体細胞内又は細胞外に本発明のモノクローナル抗体が産生される。該培養に用いられる培地としては、採用した宿主細胞に応じて慣用される各種のものを適宜選択でき、例えば、ＣＯＳ細胞の場合、ＲＰＭＩ－１６４０培地やダルベッコ修正イーグル最小必須培地（ＤＭＥＭ）等の培地に、必要に応じウシ胎児血清（ＦＢＳ）等の血清成分を添加したものを使用できる。該形質転換体の培養の際の培養温度は、細胞内のタンパク質合成能を著しく低下せしめない温度であればいずれでもよいが、好適には３２～４２℃、最も好適には３７℃で培養することが好ましい。また必要に応じて、１～１０％（ｖ／ｖ）の炭酸ガスを含む空気中で培養することができる。
上記により形質転換体の細胞内又は細胞外に生産される本発明のモノクローナル抗体を含む画分は、該タンパク質の物理的性質や化学的性質等を利用した各種公知の分離操作法により、分離・精製することができる。かかる方法としては、具体的には例えば通常のタンパク質沈澱剤による処理、限外濾過、分子ふるいクロマトグラフィー（ゲル濾過）、吸着クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）等の各種クロマトグラフィー、透析法、及びこれらの組み合わせ等を採用できる。該方法により、容易に高収率、高純度で本発明のモノクローナル抗体を製造できる。
本発明のモノクローナル抗体又はその活性断片は、さらに、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、放射性物質、トキシン等の各種分子により修飾されていてもよい。抗体の修飾方法はこの分野で公知の方法を利用することができる。
また本発明のモノクローナル抗体は、そのＮ末端あるいはＣ末端に他のタンパク質を融合してもよい（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， ２００４， １０， １２７４－１２８１）。融合するタンパク質は当業者が適宜選択することができる。
本発明のモノクローナル抗体又はその抗体断片を含有する医薬組成物（本発明の医薬組成物）は、経口的又は非経口的に全身あるいは局所的に投与することができる。非経口的投与としては、例えば、点滴等の静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射、皮下注射、鼻腔内投与、吸入等を選択することができる。
本発明の医薬組成物は、Ｎａｖ１．７関連疾患の治療及び／又は予防のための医薬として非常に有用である。
Ｎａｖ１．７関連疾患とは、疼痛、掻痒、神経原性炎症、咳等が挙げられる。
「疼痛」としては、急性疼痛、慢性疼痛、神経因性疼痛、炎症性疼痛、関節炎、骨関節炎、偏頭痛、群発頭痛症候群、三叉神経痛、疱疹性神経痛、全身性神経痛、神経変性疾患、運動障害、神経内分泌障害、失調症、敗血症、内臓痛、急性痛風、ヘルペス後神経痛、糖尿病性神経障害、座骨神経痛、背痛、頭部若しくは頸部の疼痛、激痛若しくは難治性疼痛、突発痛、手術後の痛み、遺伝性紅痛症、歯痛、鼻炎、がん疼痛、膀胱障害等が挙げられる。
「掻痒」としては、急性掻痒、慢性掻痒、ヒスタミン依存掻痒、ヒスタミン非依存掻痒等が挙げられる。
「神経原性炎症」は、喘息、関節炎、湿疹、頭痛、片頭痛、若しくは乾癬、又は前記の組合せに随伴し得る。
「咳」とは、病理性又は慢性の咳が挙げられる。
本発明の医薬組成物の有効投与量は、一回につき体重１ｋｇあたり０．０１ｍｇから１００ｍｇの範囲から選ばれる。あるいは、患者あたり５～５０００ｍｇ、好ましくは１０～５００ｍｇの投与量を選ぶことができる。しかしながら、本発明のモノクローナル抗体又はその抗体断片を含む医薬組成物はこれらの投与量に制限されるものではない。また、投与期間は、患者の年齢、症状により適宜選択することができる。本発明の医薬組成物は、投与経路次第で医薬的に許容される担体や添加物を共に含むものであってもよい。このような担体及び添加物の例として、水、医薬的に許容される有機溶媒、コラーゲン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、アルギン酸ナトリウム、水溶性デキストラン、ペクチン、メチルセルロース、エチルセルロース、カゼイン、ジグリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、ワセリン、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、マンニトール、ソルビトール、ラクトース、医薬添加物として許容される界面活性剤等が挙げられる。使用される添加物は、剤型に応じて上記の中から適宜あるいは組合せて選択されるが、これらに限定されるものではない。
本発明のモノクローナル抗体又はその抗体断片は、他の有効成分若しくは他の有効成分を含む薬剤と組み合わせて、併用剤として投与されてもよい。他の有効成分は、例えば、オピオイド、ＣＯＸ－２阻害剤、局所麻酔剤、ＮＭＤＡモジュレータ、カンナビノイド受容体アゴニスト、Ｐ２Ｘファミリーモジュレータ、ＶＲ１アンタゴニスト、サブスタンスＰアンタゴニスト、抗てんかん薬（ガバペンチン、プレガバリン、トピラマート等）、三環系抗うつ薬（アミトリプチリン等）、セレコキシブ、サイトカイン阻害剤若しくはアンタゴニスト（ＩＬ－６、ＩＬ－６Ｒ、ＩＬ－１８又はＩＬ－１８Ｒに対するアンタゴニスト等）、Ｎａv１．８阻害剤、Ｎａv１．９阻害剤、ＮＧＦ阻害剤、Ｎａv１．７阻害剤若しくはアンタゴニスト、Ｎａv１．７に特異的な他の抗体、Ｎａv１．７に対するポリペプチド性アンタゴニスト、ｓｉＲＮＡ、アンチセンス分子、低分子量薬剤、タンパク質／ポリペプチド性阻害剤等が挙げられる。
本発明のモノクローナル抗体又はその抗体断片と他の有効成分の併用剤は、１つの製剤中に両成分を配合した配合剤の形態で投与してもよく、また別々の製剤（本発明の医薬組成物と他の有効成分を含む薬剤）にして投与する形態をとってもよい。この別々の製剤にして投与する場合には、同時投与及び時間差による投与が含まれる。また、時間差による投与は、本発明の医薬組成物を先に投与し、他の薬剤を後に投与してもよいし、他の薬剤を先に投与し、本発明の医薬組成物を後に投与してもかまわず、それぞれの投与方法は同じでも異なっていてもよい。
本発明は、本発明のモノクローナル抗体の重鎖可変領域及び／又は軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドを包含する。本発明のモノクローナル抗体の重鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドは、さらに、重鎖定常領域をコードしていてもよい。本発明のモノクローナル抗体の軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチドは、さらに、軽鎖定常領域をコードしていてもよい。また、本発明は、これらのポリヌクレオチドを少なくとも１つ含む発現ベクターを包含する。
該ポリヌクレオチドは、本発明のモノクローナル抗体の重鎖可変領域又は軽鎖可変領域をコードする限り、特に限定されず、複数のデオキシリボ核酸（ＤＮＡ）又はリボ核酸（ＲＮＡ）等のヌクレオチドからなる重合体である。天然以外の塩基を含んでいてもよい。本発明のポリヌクレオチドは、抗体を遺伝子工学的な手法により製造するために使用することができる。また本発明のモノクローナル抗体と同等な機能を有する抗体をスクリーニングするために、プローブとして用いることもできる。即ち本発明のモノクローナル抗体をコードするポリヌクレオチド、又はその一部をプローブとして用い、ハイブリダイゼーション、遺伝子増幅技術（例えばＰＣＲ）等の技術により、該ポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ本発明のモノクローナル抗体と同等の活性を有する抗体をコードするＤＮＡを得ることができる。このようなＤＮＡも本発明のポリヌクレオチドに含まれる。
ハイブリダイゼーション技術（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ ２ｎｄ ｅｄ．， ９．４７－９．５８， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂ． ｐｒｅｓｓ， １９８９）は当業者によく知られた技術である。ハイブリダイゼーションの条件としては、例えば、低ストリンジェントな条件が挙げられる。低ストリンジェントな条件とは、ハイブリダイゼーション後の洗浄において、例えば４２℃、０．１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳの条件であり、好ましくは５０℃、０．１×ＳＳＣ 、０．１％ＳＤＳの条件である。より好ましいハイブリダイゼーションの条件としては、高ストリンジェントな条件が挙げられる。高ストリンジェントな条件とは、例えば６５℃、５×ＳＳＣ及び０．１％ＳＤＳの条件である。これらの条件において、温度を上げる程に高い相同性を有するポリヌクレオチドが効率的に得られることが期待できる。但し、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーに影響する要素としては温度や塩濃度等複数の要素が考えられ、当業者であればこれら要素を適宜選択することで同様のストリンジェンシーを実現することが可能である。
これらハイブリダイゼーション技術や遺伝子増幅技術により得られるポリヌクレオチドがコードする、本発明のモノクローナル抗体と機能的に同等な抗体は、通常、これら抗体とアミノ酸配列において高い相同性を有する。本発明のモノクローナル抗体には、本発明のモノクローナル抗体と機能的に同等であり、かつ該抗体のアミノ酸配列と高い相同性を有する抗体も含まれる。高い相同性とは、アミノ酸レベルにおいて、通常、少なくとも７５％以上の同一性、好ましくは８５％以上の同一性、さらに好ましくは９５％以上の同一性を指す。ポリペプチドの相同性を決定するには、文献（Ｗｉｌｂｕｒ， Ｗ． Ｊ． ａｎｄ Ｌｉｐｍａｎ， Ｄ． Ｊ． Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ（１９８３）８０，７２６－７３０）に記載のアルゴリズムに従えばよい。
本発明のモノクローナル抗体又はその抗体断片は、Ｎａｖ１．７に特異的に結合するため、生体試料においてＮａｖ１．７を検出するために使用することができる。生体試料としては、血液、血漿、血清、尿、臓器、組織、骨髄、リンパ節等が挙げられる。そのため、本発明のモノクローナル抗体を含有するキットはＮａｖ１．７検出用キットとして利用可能である。該キットは、本発明のモノクローナル抗体又はその抗体断片を含み、さらに、標識二次抗体、標識の検出に必要な基質、担体、洗浄バッファー、試料希釈液、酵素基質、反応停止液、精製された標準物質としてのＮａｖ１．７タンパク質、使用説明書等を含んでいてもよい。
本発明のモノクローナル抗体又はその抗体断片は、下記のいずれか、あるいは全ての優れた特徴を有している。
ａ）Ｎａｖ１．７のドメインＣのＥ３細胞外ループＣ末領域に強い結合活性を有する。
ｂ）疼痛抑制に対する強い薬効を有する。
ｃ）ヒト化後のヒトに対する免疫原性が低い。
ｄ）ヒト化後の疼痛抑制に対する薬効の持続時間が長い。
ｅ）他サブタイプである、ｈＮａｖ１．１、ｈＮａｖ１．２、ｈＮａｖ１．３、ｈＮａｖ１．４、ｈＮａｖ１．５、ｈＮａｖ１．６、ｈＮａｖ１．８及びｈＮａｖ１．９のＥ３細胞外ループＣ末領域のエピトープ部位に相当するペプチドに対する選択性が極めて高い。
以下に本発明の実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらにより限定されるものではない。
実施例１：Ｎａｖ１．７抗体の調製
ヒトＮａｖ１．７（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ：Ｑ１５８５８）のドメインＣ、Ｅ３細胞外ループＣ末領域に相当するペプチド（１４２４－ＱＰＫＹＥＹＳＬ（配列番号１）－１４３１；ｈＣＥ３Ｃペプチド）を抗原として選定した。
ｈＣＥ３ＣペプチドのＮ末にＣｙｓ残基を付与したペプチド（ＣＱＰＫＹＥＹＳＬ（配列番号２）；Ｃｙｓ－ｈＣＥ３Ｃ）を合成し（東レ株式会社製）、マレイミド化ｇｉａｎｔ ｋｅｙｈｏｌｅ ｌｉｍｐｅｔｓヘモシアニン（マレイミド化ＫＬＨ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製）に結合させ、免疫原を調製した。このペプチド－ＫＬＨ複合体をフロイント完全アジュバントと共にＡ／Ｊ Ｊｍｓ Ｓｌｃ雌性マウスに免疫した。その後、追加でフロイント不完全アジュバントと共に５回免疫した。
最終免疫の３日後に脾臓を摘出し、脾臓細胞とマウスミエローマ細胞（ｐ３×６３６３－Ａｇ８．、東京腫瘤研究所）をＰＥＧ法で融合し、ヒポキサンチン、アミノプテリン及びチミジンを含む培地で選択した。ヒトＮａｖ１．７結合抗体は、ハイブリドーマの培養上清を用い、免疫原ペプチドに対するＥＬＩＳＡを行うことで同定した。具体的には、抗マウスＩｇＧ抗体固相化プレートにハイブリドーマ培養上清を添加し、ＥＬＩＳＡ用洗浄バッファーで２回洗浄したあとに、ビオチン標識した免疫原ペプチド（Ｃｙｓ―ｈＣＥ３Ｃ）とＳｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ－ＨＲＰ（ＰＩＥＲＣＥ社製）を添加し４℃で一晩反応させた。ＥＬＩＳＡ用洗浄バッファーで２回洗浄し、ＴＭＢ－Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）を添加して発色させた後に、等量の０．５Ｎの硫酸で反応を停止し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。ＥＬＩＳＡにおいて強い結合シグナルを示したハイブリドーマをクローン化し、樹立した。
実施例２：抗体配列の決定
樹立したクローンのハイブリドーマ細胞より、常法に従ってマウスモノクローナル抗体１５Ｈ１１の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列を決定した（表１）。
Figure 0007457880000001

実施例３：抗体配列のアライメント
１５Ｈ１１の重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列について抗体配列解析ソフトウェアａｂＹｓｉｓを用いたＫａｂａｔ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇを実施した（図１）。
実施例４：抗体のヒト化
１５Ｈ１１について、下記の方法でヒト化を実施した。１５Ｈ１１の重鎖及び軽鎖のＶ遺伝子領域配列に類似したヒト生殖系アクセプター配列を配列解析ソフトＡｂＹｓｉｓで検索し、選択した。またＪ鎖領域については、マウス抗体ＤＮＡ配列と相同性の高い配列をＩＭＧＴ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｇｔ．ｏｒｇ／）で複数検索し、ヒトフレームワーク配列とした。このヒトフレームワーク配列に対し、Ｋａｂａｔ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ（Ｗｕ，Ｔ．Ｔ．ａｎｄ Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，Ｊ Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ａｕｇ１；１３２（２）：２１１－５０．（１９７０））によって定義されたマウス抗体重鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３及びマウス抗体軽鎖ＣＤＲ１，ＣＤＲ２，ＣＤＲ３を移植することで表２のヒト化抗体配列（ＣＤＲ ｇｒａｆｔ体）を設計した。なお、ｈ１５Ｈ１１の定常領域には、重鎖にはｈＩｇＧ４Ｐｒｏ（配列番号１１）を、軽鎖にはｈＩｇＫ（配列番号１２）を用いた。ヒト化抗体配列 （ＣＤＲ ｇｒａｆｔ体）を、Ｅｘｐｉ２９３細胞を用いて培養上清中に発現させ、その上清中に存在する抗体について、後述する方法で単位ＩｇＧ量あたりのエピトープペプチドに対する力価（ｒａｔｉｏ）を算出し、表２に示した。
上清中のＩｇＧ量は以下の方法により行った。上清中のＩｇＧ量を評価するために、抗ヒトＩｇＧ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ社製）固相化プレートに、培養上清を添加し室温で３時間反応させたのちに、ＥＬＩＳＡ用洗浄バッファーで２回洗浄し、ＨＲＰ標識抗ヒトＩｇＧ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ社製）を４℃で一晩反応させた。ＥＬＩＳＡ用洗浄バッファーで２回洗浄し、ＴＭＢ－Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）を添加して発色させた後に、等量の０．５Ｎの硫酸で反応を停止し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定してＯＤが１．０となる培養上清の希釈倍率（Ａ）を算出した。
上清中ＩｇＧのエピトープペプチドに対する力価は以下の方法により行った。上清中のＩｇＧのエピトープペプチドに対する力価を評価するために、抗ヒトＩｇＧ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ社製）固相化プレートに、培養上清を添加し室温で３時間反応させたのちに、ＥＬＩＳＡ用洗浄バッファーで２回洗浄し、ビオチン標識したエピトープペプチド（Ｃｙｓ－ＣＥ３Ｃ ｌｏｎｇ：配列番号１３）とＳｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ－ＨＲＰ（ＰＩＥＲＣＥ社製）を添加し４℃で一晩反応させた。ＥＬＩＳＡ用洗浄バッファーで２回洗浄し、ＴＭＢ－Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）を添加して発色させた後に、等量の０．５Ｎの硫酸で反応を停止し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定し、ＯＤが１．０となる培養上清の希釈倍率（Ｂ）を算出した。
単位ＩｇＧ量あたりのエピトープペプチド（Ｃｙｓ－ＣＥ３Ｃ ｌｏｎｇ：配列番号１３）に対する力価（ｒａｔｉｏ）は、（Ｂ）／（Ａ）として算出した。表２の結果から、ヒト化１５Ｈ１１の軽鎖ヒトフレームワーク配列としてはＩＧＫＶ７－３、重鎖ヒトフレームワーク配列としてはＩＧＨＶ７－４－１（Ｒ９４Ｐ）、ＩＧＨＶ１－２（Ｒ９４Ｐ）、ＩＧＨＶ１－１８（Ｒ９４Ｐ）、ＩＧＨＶ１－３（Ｒ９４Ｐ）が適していることが分かった。
Figure 0007457880000002

さらに、ヒト化抗体配列 （ＣＤＲ ｇｒａｆｔ体）のヒトフレームワーク配列に変異を導入（バックミューテーション）することで、マウス抗体である１５Ｈ１１とほぼ同等の親和性になるようにエピトープペプチドに対する親和性の回復を試みた。ＩＧＫＶ７－３及びＩＧＨＶ７－４－１（Ｒ９４Ｐ）を用い、軽鎖について、表３に示す箇所にバックミューテーションを導入した変異体を作製し、実施例５に示す方法でエピトープペプチドに対する親和性を評価したところ、Ｙ３６Ｆ（ＫａｂａｔのｎｕｍｂｅｒｉｎｇによるＬ３６アミノ酸部位がＹからＦに変異導入されたとの意味であり、以下同様である。）が明確な親和性向上を、Ｔ７２Ｓ、Ｔ７４Ｎ、Ｖ７８Ｍが弱い親和性向上傾向を示した。表３において〇は明確な親和性向上を、△は弱い親和性向上を、×は親和性向上が見られないことを意味する。
Figure 0007457880000003
また、マウス抗体である１５Ｈ１１を用いて、軽鎖について、表4に示す箇所にヒト化変異を導入した変異体を作製したところ、Ｆ３６Ｙが明確な親和性低下を、Ｍ８５Ｎが弱い親和性低下傾向を示した。表４において〇は明確な親和性低下を、△は弱い親和性低下を、×は親和性低下が見られないことを意味する。
Figure 0007457880000004
さらに、ＩＧＫＶ７－３及びＩＧＨＶ１－２（Ｒ９４Ｐ）を用い、重鎖について、表５に示す箇所にバックミューテーションを導入した変異体を作製したところ、Ｑ４３Ｒ、Ｇ４４Ｓが明確な親和性向上を示した。表５において〇は明確な親和性向上を、×は親和性向上が見られないことを意味する。
Figure 0007457880000005
上述の結果から、軽鎖についてＹ３６Ｆ、Ｖ７８Ｍ、Ｎ８５Ｍ、Ｔ７２Ｓ、Ｔ７４Ｎを、重鎖についてＱ４３Ｒ、Ｇ４４Ｓ、Ｒ９４Ｐを選択し、それらを組み合わせた変異体を表６のとおり作製し、そのエピトープペプチド（Ｃｙｓ－ＣＥ３Ｃ ｌｏｎｇ：配列番号１３）に対する親和性を評価した。マウス１５Ｈ１１の親和性に対する各変異体の親和性の割合をＦｏｌｄ ｃｈａｎｇｅ （ＦＣ；変異体の親和性（ＩＣ５０）／マウス１５Ｈ１１の親和性（ＩＣ５０））として計算した結果、マウス１５Ｈ１１の親和性に近い親和性を得るために必要な重鎖バックミューテーションとしてＱ４３Ｒ， Ｇ４４Ｓ， Ｒ９４Ｐを、軽鎖バックミューテーションとしてＹ３６Ｆ， Ｖ７８Ｍを同定した。ｈ１５Ｈ１１ （ＩＧＨＶ７－４－１ Ｑ４３Ｒ， Ｇ４４Ｓ， Ｒ９４Ｐ／ＩＧＫＶ７－３ Ｙ３６Ｆ， Ｖ７８Ｍ）、ｈ１５Ｈ１１ （ＩＧＨＶ１－２ Ｑ４３Ｒ， Ｇ４４Ｓ， Ｒ９４Ｐ／ＩＧＫＶ７－３ Ｙ３６Ｆ， Ｖ７８Ｍ）についてｉｎ ｖｉｖｏ薬効評価モデルで評価した結果、双方ともに強力な薬理効果、すなわち疼痛抑制作用を示した。なお、これらの薬理効果はＷＯ２０１９／２３０８５６の実施例７に記載の方法により測定することができる。
Figure 0007457880000006
実施例５：親和性評価
本明細書の実施例４、６及び７で、抗体のエピトープペプチド（Ｃｙｓ－ＣＥ３Ｃ ｌｏｎｇ：配列番号１３）に対する親和性を以下に示す競合ＥＬＩＳＡ法により測定した。
抗ヒトＩｇＧ抗体固相化プレートに、取得したリコンビナントヒト化抗体の希釈液とビオチン標識した免疫原ペプチドとＳｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ－ＨＲＰ（ＰＩＥＲＣＥ社製）を添加し4℃で一晩反応させた。ＥＬＩＳＡ用洗浄バッファーで２回洗浄し、ＴＭＢ－Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）を添加して発色させた後に、等量の０．５Ｎの硫酸で反応を停止し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定し、ODが１．１となるそれぞれのリコンビナントヒト抗体の希釈倍率を算出した。次にその希釈倍率のリコンビナントヒト抗体とビオチン標識した免疫原ペプチドとＳｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ－ＨＲＰ（ＰＩＥＲＣＥ社製）を添加した。これと同時に未標識の免疫原ペプチドの希釈系列を添加し、４℃で一晩反応させた。ＥＬＩＳＡ洗浄液で２回洗浄後、ＴＭＢ－Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎ（サーモフィッシャーサイエンティフィック社製）を添加して発色させた後に、等量の０．５Ｎの硫酸で反応を停止し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。ビオチン標識ペプチドのシグナルを２分の１に減弱する未標識ペプチドの濃度を親和性（ＩＣ５０）とした。
実施例６：ヒト化１5Ｈ１１の結合に重要なアミノ酸の特定
実施例４で作製したヒト化抗体ｈ１５Ｈ１１ （重鎖可変領域：ＩＧＨＶ７－４－１ Ｑ４３Ｒ， Ｇ４４Ｓ， Ｒ９４Ｐ（配列番号２５）／軽鎖可変領域：ＩＧＫＶ７－３ Ｙ３６Ｆ， Ｖ７８Ｍ（配列番号２８））について抗体配列解析ソフトａｂＹｓｉｓを用いてＫａｂａｔのｎｕｍｂｅｒｉｎｇ及びＣＤＲの定義を実施した。この結果を図２に示す。ヒト化１５Ｈ１１の結合に重要なアミノ酸の特定するために、ｈ１５Ｈ１１ （重鎖可変領域：ＩＧＨＶ７－４－１ Ｑ４３Ｒ， Ｇ４４Ｓ， Ｒ９４Ｐ（配列番号２５）／軽鎖可変領域：ＩＧＫＶ７－３ Ｙ３６Ｆ， Ｖ７８Ｍ（配列番号２８））を基本骨格とし、１５Ｈ１１の各ＣＤＲ配列（配列番号４～６、配列番号８～１０、以下、野生型ＣＤＲという。）に点変異を導入した変異体を作製した。その親和性を実施例５に記載した方法で算出し、野生型ＣＤＲの親和性（ＩＣ５０）に対する各ＣＤＲ変異体の親和性（ＩＣ５０）の比（ＣＤＲ変異体のＩＣ５０／野生型ＣＤＲのＩＣ５０）をＦｏｌｄ ｃｈａｎｇｅ （ＦＣ）として算出した。重鎖の結果を表７に、軽鎖の結果を表８に示す。ｎ．ｄ．はｎｏｔ ｄｅｔｅｃｔａｂｌｅを意味する。その結果、重鎖のＭ３４、Ａ１０１及び軽鎖のＱ９０、Ｐ９５、Ｗ９６はそのアミノ酸を他のアミノ酸に置換すると、このペプチドに対する結合活性が検出限界以下となった。このことから、軽鎖のＱ９０、Ｐ９５、Ｗ９６及び重鎖のＭ３４、Ａ１０１は結合に特に重要なアミノ酸であると考えられる。また、重鎖のＮ３３、Ｎ５２、Ｉ５７、Ｆ６３、Ｓ９５、Ｙ９６、Ｇ９８及び、軽鎖のＦ３２、Ｎ３４、Ｑ８９、Ｓ９１、Ｆ９４はそのアミノ酸を他のアミノ酸に置換すると１．５倍以上親和性が低下した。このことから、軽鎖のＦ３２、Ｎ３４、Ｑ８９、Ｓ９１、Ｆ９４、重鎖のＮ３３、Ｎ５２、Ｉ５７、Ｆ６３、Ｓ９５、Ｙ９６、Ｇ９８は、結合に重要なアミノ酸であると考えられる。
Figure 0007457880000007
Figure 0007457880000008
実施例７ 抗体の親和性向上
１５Ｈ１１の親和性向上体を作製する目的で、実施例６において、ＦＣ＞１．５を示し抗体の親和性向上に寄与していると同定されたアミノ酸及び、ＦＣ＜１を示した抗体の親和性向上に寄与する可能性のあるアミノ酸を中心に実施例４のヒト化抗体ｈ１５Ｈ１１ （重鎖可変領域：ＩＧＨＶ７－４－１ Ｑ４３Ｒ， Ｇ４４Ｓ， Ｒ９４Ｐ（配列番号２５）／軽鎖可変領域：ＩＧＫＶ７－３ Ｙ３６Ｆ， Ｖ７８Ｍ（配列番号２８））を野生型抗体（ｈ１５Ｈ１１－ｗｔ）として、いずれかのＣＤＲにアミノ酸変異を有する種々の変異体を作製した。実施例５に記載の方法で、親和性評価を実施し、表９及び表１０に示す４３種の親和性向上体（ｈ１５Ｈ１１－１～４３）を得た。
Figure 0007457880000009
Figure 0007457880000010
表１１及び１２に、表９及び１０に記載の各抗体の各ＣＤＲの配列番号を記載する。
Figure 0007457880000011
Figure 0007457880000012
なお、表９～表１２に記載の抗体の各ＣＤＲ配列はその共通性から以下のようにまとめて表現することができる。
重鎖のＣＤＲ１は、Ｘａａ１－Ｙ－Ｎ－Ｍ－Ｈ（ここでＸａａ１はＤ又はＥである：配列番号７５）の５アミノ酸から構成される。
重鎖のＣＤＲ２は、Ｒ－Ｉ－Ｎ－Ｐ－Ｋ－Ｎ－Ｇ－Ｖ－Ｉ－Ｘａａ１－Ｘａａ２－Ｎ－Ｅ－Ｋ－Ｆ－Ｋ－Ｄ（ここでＸａａ１はＮ、Ｌ、Ｑ又はＫであり、Ｘａａ２はＳ、Ｌ又はＹである：配列番号７６）の１７アミノ酸から構成される。
重鎖のＣＤＲ３は、Ｓ－Ｙ－Ｘａａ１－Ｇ－Ｇ－Ｘａａ２－Ｘａａ３－Ｄ－Ａ－Ｙ（ここでＸａａ１はＹ又はＦであり、Ｘａａ２はＮ、Ｄ、Ｑ又はＫであり、Ｘａａ３はＴ、Ｄ、Ｓ又はＱである：配列番号７７）の１０アミノ酸から構成される。
軽鎖のＣＤＲ１は、Ｒ－Ｘａａ１－Ｓ－Ｘａａ２－Ｓ－Ｖ－Ｄ－Ｎ－Ｙ－Ｇ－Ｘａａ３－Ｓ－Ｆ－Ｘａａ４－Ｎ（ここでＸａａ１は、Ａ又はＶであり、Ｘａａ２はＥ又はＤであり、Ｘａａ３はＩ又はＦであり、Ｘａａ４はＭ又はＬである：配列番号７８）の１５アミノ酸から構成される。
軽鎖のＣＤＲ２は配列番号９の７アミノ酸から構成される。
軽鎖のＣＤＲ３は配列番号１０の９アミノ酸から構成される。
実施例８ 変異体作製
実施例７で作製したｈ１５Ｈ１１－２（重鎖可変領域：ＩＧＨＶ７－４－１ Ｑ４３Ｒ， Ｇ４４Ｓ， Ｎ５８Ｌ， Ｎ１００Ｄ， Ｔ１００ａＤ， Ｒ９４Ｐ（配列番号３３）／軽鎖可変領域：ＩＧＫＶ７－３ Ｅ２７Ｄ， Ｍ３３Ｌ， Ｙ３６Ｆ， Ｖ７８Ｍ（配列番号５５））の軽鎖ヒトフレームワーク配列に種々の変異を導入した変異体（ｈ１５Ｈ１１－４４～５４）を作製した。作製した変異体について、実施例５に記載の方法で、親和性評価を実施した。得られた結果を表１３に示す。
ＩＧＨＶ７－４－１ Ｑ４３Ｒ， Ｇ４４Ｓ， Ｎ５８Ｌ， Ｎ１００Ｄ， Ｔ１００ａＤ， Ｒ９４Ｐ（配列番号３３）で表される重鎖可変領域及び実施例３で作製したＩＧＫＶ４－１（配列番号１８）で表される軽鎖可変領域を有する変異体を作製した。作製した変異体の軽鎖ヒトフレームワーク配列に種々の変異を導入した新たな変異体（ｈ１５Ｈ１１－５５～６７）を作製し、実施例５に記載の方法で、親和性評価を実施した。得られた結果を表１４に示す。
Figure 0007457880000013
Figure 0007457880000014
表１３及び表１４に記載の各抗体の各ＣＤＲの配列番号を示す。ｈ１５Ｈ１１－４４～ｈ１５Ｈ１１－５４、ｈ１５Ｈ１１－５８～ｈ１５Ｈ１１－６７は、配列番号４の重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号５９の重鎖ＣＤＲ２配列及び配列番号６４の重鎖ＣＤＲ３配列並びに配列番号７２の軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号９の軽鎖ＣＤＲ２配列及び配列番号１０の軽鎖ＣＤＲ３配列を有する。ｈ１５Ｈ１１－５５～ｈ１５Ｈ１１－５７は、配列番号４の重鎖ＣＤＲ１配列、配列番号５９の重鎖ＣＤＲ２配列及び配列番号６４の重鎖ＣＤＲ３配列並びに配列番号８の軽鎖ＣＤＲ１配列、配列番号９の軽鎖ＣＤＲ２配列及び配列番号１０の軽鎖ＣＤＲ３配列を有する。表１５にも同様の内容を記す。
Figure 0007457880000015
なお、表１３及び表１４に記載の抗体の重鎖可変領域配列は配列番号３３で表され、各軽鎖可変領域配列はその共通性から以下のようにまとめて表現することができる。
ｈ１５Ｈ１１－４４～ｈ１５Ｈ１１－５３の軽鎖可変領域配列は、配列番号５５（ＩＧＫＶ７－３（Ｅ２７Ｄ， Ｍ３３Ｌ， Ｙ３６Ｆ， Ｖ７８Ｍ））のＫａｂａｔ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇによるＮ８１位のアミノ酸残基がＥ、Ａ、Ｑ、Ｆ、Ｌ、Ｖ、Ｉ、Ｄ、Ｒ又はＧに置換されている配列からなる。
ｈ１５Ｈ１１－５８～ｈ１５Ｈ１１－６５の軽鎖可変領域配列は、配列番号９５（ＩＧＫＶ４－１（Ｅ２７Ｄ， Ｍ３３Ｌ， Ｙ３６Ｆ， Ｌ７８Ｍ））のＫａｂａｔ ｎｕｍｂｅｒｉｎｇによる７６、７７、７９、８３及び８５位の１～５のアミノ酸が変異していてもよい配列と表現される。
実施例９ 薬効評価
（９－１）ラット坐骨神経部分結紮モデル（Ｐａｒｔｉａｌ Ｓｃｉａｔｉｃ Ｎｅｒｖｅ Ｌｉｇａｔｉｏｎモデル）の作製
イソフルラン麻酔下にて、ラットの左側の大腿上部の皮膚を切開し、筋を割いて坐骨神経を露出させた。坐骨神経の約半分をナイロン糸で強く結紮し、筋及び皮膚を縫合した。これを手術側とした。右肢については坐骨神経結紮以外の同様の処置を行い、偽手術側とした。
（９－２）静脈内投与による薬効評価
（９―１）で作成したラットを用いて、手術の約２週間後、フォンフライフィラメントにより機械的アロディニアに対する作用を評価した。金網上に載せたプラスチック製ケージにラットを入れ、馴化後に評価を実施した。抗体の投与前後に、金網側からラットの足底にフォンフライフィラメント（０．４～２６ｇ）を用いて、細いフィラメントから順に押し当て、ラットが逃避行動を示す最小のフィラメントの圧値を疼痛閾値とした。左右の後肢について疼痛閾値を評価した。手術後の疼痛閾値が０．６～２ｇ、かつ偽手術側の疼痛閾値が８～１５ｇの動物を薬効評価に採用した。抗体を生理食塩水にて５、１５、５０ｍｇ／ｋｇになるよう調製し静脈内投与した。投与５時間後、左右後肢の疼痛閾値を評価した。下記の方法により％ｒｅｖｅｒｓａｌ値を算出し、化合物の疼痛抑制効果として比較した。
％ｒｅｖｅｒｓａｌ値＝（手術側投与後の疼痛閾値の対数－手術側投与前の疼痛閾値の対数）／（偽手術側投与前の疼痛閾値の対数－手術側投与前の疼痛閾値の対数）
特許文献８の実施例４に記載のｈ１２Ｈ４と本発明に包含されるｈ１５Ｈ１１－６６の結果を図３に示す。ｈ１５Ｈ１１－６６は、５ｍｇ／ｋｇの静脈内投与により、疼痛に対して有意な薬効を示した。ｈ１５Ｈ１１－６６の５ｍｇ／ｋｇの静脈内投与は、ｈ１２Ｈ４の５０ｍｇ／ｋｇの静脈内投与と同程度の疼痛抑制効果を示した。
本発明のモノクローナル抗体又はその抗体断片は、生体試料においてＮａｖ１．７を検出するために使用することができる。さらに、本発明のモノクローナル抗体又はその抗体断片を含む医薬組成物は、Ｎａｖ１．７関連疾患の治療又は予防のための医薬として非常に有用である。

Claims (7)

  1. ２）配列番号４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
    配列番号５９のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
    配列番号６４のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む重鎖可変領域並びに
    配列番号７２のアミノ酸配列からなるＣＤＲ１、
    配列番号９のアミノ酸配列からなるＣＤＲ２及び
    配列番号１０のアミノ酸配列からなるＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域
    を含む、ヒトＮａｖ１．７に特異的に結合するモノクローナル抗体又はその抗体断片。
  2. 該モノクローナル抗体が、ヒト化モノクローナル抗体である、請求項１記載のモノクローナル抗体又はその抗体断片。
  3. 配列番号３３のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域並びに
    配列番号５５、７９～８９、９３～１０２のいずれかのアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域
    を含む、請求項２記載のモノクローナル抗体又はその抗体断片。
  4. さらに、
    配列番号１１のアミノ酸配列からなる重鎖定常領域及び
    配列番号１２のアミノ酸配列からなる軽鎖定常領域
    を含む請求項３記載のモノクローナル抗体又はその抗体断片。
  5. 請求項３記載のモノクローナル抗体の重鎖可変領域及び
    請求項３記載のモノクローナル抗体の軽鎖可変領域をコードするポリヌクレオチド。
  6. さらに、請求項４記載のモノクローナル抗体の重鎖定常領域及び
    請求項４記載のモノクローナル抗体の軽鎖定常領域をコードする、請求項５記載のポリヌクレオチド。
  7. 請求項５又は６記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクター。
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