JP7431165B2 - 植物および農産物においてフザリウム属感染を制御するための、微生物ベースの生成物 - Google Patents

Description

関連出願の相互参照
本出願は、2018年2月28日出願の米国特許仮出願62/636,273号の優先権を主張するものであり、該仮出願は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。

発明の背景
バナナおよびプランテンは、ムサ属（genus Musa）に属する、多年生の巨大な草本植物である。1000億超のバナナが、ヒトによって毎年消費されており、それらは、世界で最も普及している農産物の1つとなっている。世界でのバナナの生産のおよそ10%は、輸出市場に投入されて、熱帯および亜熱帯地域にとって重要な収入源を生み出している。世界中の多くの農作物と同様に、国際的に取引されるバナナの大多数は、単一作物栽培である。商業用のバナナ植物のほとんどは、天然から収集され、栽培植物化され、そして栄養繁殖によって維持されたものであった、これは、遺伝的に互いにほぼ同一である植物から構成されるプランテーションをもたらした。

栽培品種の1つであるキャベンディッシュ（Cavendish）は、現在世界で輸出されるバナナの大半を占める。他の農業上の単一作物栽培とは異なっているのだが、キャベンディッシュは、その優れた味や、耐寒性や、貯蔵期間のために、世界での卓越した地位を獲得したわけではなかった。そうではなく、キャベンディッシュは、一般にパナマ病として知られる真菌の伝染への、その耐性のために、世界で優勢となったのであり、パナマ病は、1950年代におけるバナナ産業を崩壊させ、そして以前の単一作物栽培を、1965年までに商業上消滅させた。数十年後である現在、同じ真菌の新規な株 - フザリウム・オキシスポラム分化型キューベンセ（Fusarium oxysporum f. sp. cubense） - の伝染がキャベンディッシュ作物に進行しつつあり、かつ世界中に急速に拡大しつつある。

フザリウム属（Fusarium）は、無性胞子によって繁殖する、土壌病原体である。それは、植物の根系に伝染し、そして植物の中に、その維管束系を通じて吸い上げられる。この真菌はさらに、バナナ植物の木部内にコロニーを発達させ、したがって栄養分および水の内部の流れを妨害する。この妨害は、ウィルト（wilt）（すなわち「フザリウムウィルト（Fusarium wilt）」）、および最終的には死をもたらす。

キャベンディッシュバナナにおいてフザリウムウィルトを引き起こすフザリウム属の株は、パナマ病を引き起こしたかつてのバージョンとともに、すべての既知の殺真菌剤に対して抵抗性であり、かつ、それが土壌伝播性であるために、現在、バナナ栽培者には、汚染された圃場を焼き払い、そして何らかの他の作物を植えること以外の選択肢は、ほとんど残されていない。フザリウム属の伝染の再発という悲惨な結末の潜在性、および以前の処置または制御の方法（耐性であるらしき栽培品種へと栽培を転換することを含む）の失敗を考慮すると、バナナ産業が生き残るためには、新規なアプローチが探求される必要がある。

食物および消耗品を生産する持続可能な方法への、世界的な必要性に対処するために、細菌、酵母、および真菌類などの微生物は、それらの副生成物とともに、農業および園芸や、畜産や、林業や、ならびに土壌、水、および他の天然資源の復旧を含む、多くの場面において、ますます有用となっている。たとえば、農家は、生きている微生物、これらの微生物に由来するバイオ生成物、およびそれらの組み合わせなどの生物学的な作用物質を、バイオ防除剤およびバイオ肥料として使用することを、好意的に受け入れている。

改善されており、非毒性であり、かつ環境に優しい方法であって、低コストで作物の生産を増大させるおよび保護する方法の、継続的な必要性が存在する。特に、たとえばバナナプランテーションにおいて、それらが使用される環境を損なうことも、それらに曝露される人々の健康を損なうことも無い、フザリウム属と戦うための生成物の必要性が存在する。

本発明は微生物を提供し、加えて、バイオサーファクタントなどの、それらの増殖時の副生成物も提供する。本発明はまた、これらの微生物およびそれらの副生成物を用いる方法を提供し、加えて、それらを生産するための方法およびシステムをも提供する。有利なことに、本発明である微生物ベースの生成物および方法は、環境に優しく、非毒性であり、かつ費用対効果が高い。

1つの態様において、本発明は、非病原性微生物および／もしくはその増殖時副生成物を含む殺真菌性組成物ならびに／または接種原を提供する。殺真菌性組成物の微生物および／または増殖時副生成物を培養する方法も提供される。

好ましい態様において、本発明は、殺真菌性組成物およびそれらの使用方法を提供する。具体的には、本発明は、フザリウム属病原体による感染の処置および／または防止を提供し、たとえば該病原体は、たとえばバナナ作物に感染する、フザリウム・オキシスポラム（Fusarium oxysporum）などである。

1つの態様において、1つもしくは複数の酵母株および／またはそれらの増殖時副生成物を含む殺真菌性組成物が提供される。好ましい態様において、1つまたは複数の酵母株は、ピキア属（Pichia）クレードの酵母から選択される。いっそうより好ましくは、酵母株は、ピキア・オキシデンタリス（Pichia occidentalis）、およびピキア・アノマラ（Pichia anomala）（ウィッカーハモマイセス・アノマルス（Wickerhamomyces anomalus）としても知られる）から選択される。

本願の殺真菌性組成物の微生物は、小スケールから大スケールにわたる培養プロセスによって得られ得る。これらの培養プロセスは、液内培養／液内発酵、固相発酵（SSF）、およびそれらの組み合わせを含むが、それらに限定されるものではない。

殺真菌性組成物は、発酵培地、および／または精製された、もしくは精製されていない増殖時副生成物を含み得、ここで該副生成物は、バイオサーファクタント、キラートキシン、酵素、および／または他の代謝物などである。微生物は、生きているものであり得、または不活性であり得る。

組成物は、好ましくは、土壌、種子、植物全体、または植物の一部（根、塊茎、茎、花、葉、および維管束系を含むが、それらに限定されるものではない）への適用のために、製剤化される。ある態様において、組成物は、たとえば、濃縮された液体、ダスト、顆粒、微粒、ペレット、水和性粉末、フロアブル粉末、乳剤、マイクロカプセル、油、またはエアロゾルとして製剤化される。好ましい態様において、組成物は、土壌処理剤として適切であるように製剤化される。

組成物の効果を改善または安定させるために、組成物は、適切なアジュバントと混和され、そしてその後はそのままでまたは必要であれば希釈した後に、使用され得る。好ましい態様において、組成物は、液体として製剤化されるか、または水および他の成分と混合されて液体の生成物を形成し得る乾燥粉末もしくは乾燥顆粒として製剤化される。1つの態様において、組成物は、有益な微生物の増殖を増大させるための、および殺真菌性の増殖時副生成物の産生を増大させるための、タンパク質ならびに他の栄養素の供給源をさらに含み得、これはたとえば、炭素、窒素、ビタミン、微量栄養素、およびアミノ酸などである。

組成物は、単独で、または抗真菌効果を効率よく増大させるための他の化合物との組み合わせとしてのいずれかで、使用され得る。たとえば、いくつかの態様において、組成物は、1つもしくは複数の殺真菌性微生物および／または微生物の増殖時副生成物と併用可能な、市販のならびに／または自家製の除草剤、肥料、防除剤、忌避剤、および／もしくは土壌改良剤などの、追加の成分を含み得る。1つの態様において、組成物は、バイオサーファクタント組成物をさらに含み得、かつ／またはバイオサーファクタント組成物とともに使用され得る。

1つの態様において、組成物は、Scott’s Miracle-Gro（登録商標）などの市販の肥料、もしくは植物の栄養素（たとえば窒素 - リン - カリウム（NPK）、および微量栄養素）の別の供給源と混合され得、ならびに／またはそれらとともに適用され得る。厳密な材料およびそれらの量は、本願の開示の恩恵にあずかる農学者および／または微生物学者によって決定され得る。

1つの態様において、方法は、植物および／またはその周辺環境において、フザリウム属菌を制御するために提供され、ここで1つもしくは複数の非病原性微生物、および／またはそれらの増殖時副生成物は、植物および／またはその周辺環境に接触する。

方法は、1つもしくは複数の微生物および／またはそれらの増殖時副生成物を含む本発明の殺真菌性組成物を、植物および／またはその周辺環境に接触させることを含み得る。好ましくは、1つもしくは複数の微生物および／またはそれらの増殖時副生成物は、殺真菌作用を発揮することができる。1つの態様において、1つまたは複数の殺真菌性微生物は、ピキア属酵母、たとえば、P. オキシデンタリスおよびP. アノマラ（ウィッカーハモマイセス・アノマルスとしても知られる）ならびにそれらの変異体から選択される。

有利なことに、本願の方法は、フザリウム属菌からの感染または環境ストレッサーからの悪影響に起因して抵抗力の健全性を失っている植物において、健全性を、生育を、および／または収量を増大させるためにさえ、使用され得る。さらに、本願の方法は、フザリウム属感染によって引き起こされる植物の損傷および／または植物の死に起因する、植物の損失および／または作物の損失の量を減少させるために、使用され得る。いっそうさらに、本願の方法は、植物毒性無しに植物組織内でまたは植物組織上で真菌感染を制御するために使用され得る。

好ましい態様において、本願の方法は、フザリウム属菌を制御するために使用され得る。1つの態様において、本願の方法は、フザリウム・オキシスポラム、および／またはフザリウム・オキシスポラム種キューベンセ（Fusarium oxysporum spp. cubense）を制御するために使用され得る。したがって、方法は、たとえばバナナ植物においてパナマ病および／もしくはフザリウムウィルトを処置ならびに／または防止するために、使用され得る。追加の態様において、方法は、フザリウム属菌を制御するために使用され得、これはたとえば、F. アベナセウム（F. avenaceum）、F. ブビゲウム（F. bubigeum）、F. クルモラム（F. culmorum）、F. グラミネアラム（F. graminearum）、F. ラングセティアエ（F. langsethiae）、F. オキシスポラム、F. プロリフェラタム（F. proliferatum）、F. スポロトリキオイデス（F. sporotrichioides）、F. ポアエ（F. poae）、F. ロゼウム（F. reseum）、F. ソラニ（F. solani）、F. トリシンクタム（F. tricinctum）、F. バーティシリオイデス（F. verticillioides）、F. ビルグリフォルメ（F. virguliforme）、F. キシラリオイデス（F. xylariodides）、および植物に感染し得る任意の他のフザリウム属菌などである。

方法は、1つもしくは複数の殺真菌性微生物の増殖を増大させるために、および／または殺真菌性の増殖時副生成物の産生を増大させるために、栄養素を適用することを含み得る。そのような栄養素は、たとえば、炭素の、窒素の、カリウムの、リンの、マグネシウムの、タンパク質の、微量栄養素の、ビタミンの、および／またはアミノ酸の、供給源を含み得る。

ある態様において、殺真菌性組成物を植物の一部と接触させる。特定の態様において、組成物を植物の1つまたは複数の根と接触させる。組成物は、たとえば、根に噴霧するもしくは注ぐことによって根に対して直接的に適用され得、および／または、たとえば、植物の根が生育している土壌（すなわち根圏）へと組成物を投与することによって間接的に適用され得る。組成物は、植え付けの前もしくは植え付けの際に植物の種子に適用され得るか、または植物の他の任意の一部および／もしくはその周辺環境に適用され得る。

ある態様において、たとえば、土壌中にフザリウム属菌が増殖しすぎて殺真菌性組成物によって完全に制御しきれない場合、および／またはフザリウム属菌が植物内部へその維管束系を通じて上がって増殖している場合、方法は、殺真菌性組成物をバイオサーファクタント組成物とともに適用することをさらに含み得る。

本発明によるバイオサーファクタントは、たとえば、低分子量の糖脂質、セロビオース脂質、リポペプチド、フラボ脂質（flavolipid）、リン脂質、ならびに高分子量の重合体、これはリポタンパク質、リポ多糖 - タンパク質複合体、および／または多糖 - タンパク質 - 脂肪酸複合体などであるが、これらを含む。

1つの態様において、バイオサーファクタントは、たとえば、ラムノ脂質（RLP）、ソホロ脂質（SLP）、トレハロース脂質、またはマンノシルエリスリトール脂質（MEL）などの、糖脂質を含む。1つの態様において、バイオサーファクタントは、たとえば、サーファクチン、イツリン、フェンギシン、アルスロファクチン（athrofactin）、ビスコシン、および／またはリケニシンなどの、リポペプチドを含む。

有利なことに、バイオサーファクタントは、殺真菌性組成物の抗真菌能力を拡充し得る。さらに、バイオサーファクタント分子の両親媒性のため、それらは、植物の維管束系を上がって進むことができ、植物の地上部分に感染している真菌に到達する。

1つの態様において、方法は、殺真菌性組成物が適用された後のいずれかの時点において、バイオサーファクタント処理組成物を、植物および／またはその周辺環境に適用することを含む。いくつかの態様において、バイオサーファクタント組成物中で使用されるバイオサーファクタントのタイプによっては、バイオサーファクタントは、殺真菌性組成物の微生物を死滅させる可能性がある；しかしながら、バイオサーファクタントを土壌に適用することによって、バイオサーファクタントは、殺真菌性組成物がすでに成し遂げた殺真菌活性を拡充し得る。さらに、バイオサーファクタント組成物は、感染された植物の維管束系の中へと入ることができ、植物を上がって進み、たとえば、木部、師部、幹、枝、茎、および茎葉（foliage）に存在する真菌を、制御する。

1つの態様において、方法は、殺真菌性組成物の、土壌への適用および／もしくは植物の根への適用の後、またはそれと同時のいずれかにおいて、バイオサーファクタント処理剤を、植物の根以外の一部に対して直接的に適用することを含む。バイオサーファクタント組成物は、植物の内部に、たとえば植物の維管束系（たとえば木部および師部）の中に、直接的に適用され得る。そのような直接的な適用は、たとえばシリンジを用いて、バイオサーファクタント処理剤を、たとえば、植物の幹、枝、茎、および／または茎葉の中に、注入することを含み得る。有利なことに、方法のこの態様は、殺真菌性の土壌処理組成物中に存在する微生物の生存を可能にする、これは、バイオサーファクタント処理剤は、それらの微生物が存在する土壌には適用されないためである。

いくつかの態様において、バイオサーファクタント処理組成物は、殺真菌性組成物を土壌に適用すること無しに、植物および／またはその環境に適用される。いくつかの態様において、殺真菌性組成物は、バイオサーファクタント処理剤の適用無しに、土壌に適用される。

いくつかの態様において、方法は、収穫前、収穫中、または収穫後のいずれかの農産物（たとえば、茎葉、果実、および野菜）において成立するフザリウム属感染を制御するために使用され得る。本発明の組成物、たとえば、殺真菌性組成物および／またはバイオサーファクタント組成物を、農産物に適用することによって、方法は、成立した感染を含む感染に起因する農産物のさらなる損失を減少させ得る。

いくつかの態様において、方法は、植物がそこで生育する土壌における、病原性のまたは有害な微生物の総数を減少させ、それにより、有益な微生物の再定着を可能にするために、使用され得る。ある態様において、方法は、本発明の組成物を用いてマイクロバイオーム（ニッチ）を除去する段階、それに続いて、有益な微生物の増殖を促進するための強化剤を適用する段階、および／または根圏に、1つまたは複数の有益な微生物を直接的に接種する段階を含む。1つの態様において、有益な微生物は、ピキア・アノマラ、ピキア・オキシデンタリス、トリコデルマ・ハルジアナム（Trichoderma harzianum）、および／またはバチルス・アミロリケファシエンス（Bacillus amyloliquefaciens）である。

有利なことに、本発明は、大量の無機化合物を環境中に放出すること無しに使用され得る。加えて、組成物および方法は、生物分解性であり、かつ毒物学上安全である成分を利用する。したがって本発明は、「環境を損なわない（green）」防除剤として使用され得る。

さらに本発明は、遠隔地において、たとえばバナナ農園において、生産および使用され得る。これは、活性のある代謝物を有する新鮮な発酵培地（たとえばブロス）；細胞および発酵培地の混合物；高密度の細胞を有する組成物；ならびに微生物ベースの生成物の、すみやかな、効率のよい送達を可能にする。
[本発明1001]
1つもしくは複数のピキア属種（Pichia spp.）の酵母および／またはその1つもしくは複数の増殖時副生成物を含む殺真菌性組成物であって、該1つもしくは複数のピキア属種が、P. オキシデンタリス（P. occidentalis）およびP. アノマラ（P. anomala）ならびにそれらの変異体から選択される、前記殺真菌性組成物。
[本発明1002]
ピキア属種酵母が、P. オキシデンタリスのおよび／またはP. アノマラの変異体であり、該変異体が、該ピキア属種酵母の株、遺伝的バリアント、またはサブタイプである、本発明1001の組成物。
[本発明1003]
土壌処理剤として製剤化された、本発明1001の組成物。
[本発明1004]
乾燥粉末または乾燥顆粒として製剤化された、任意で水に溶解され得る、本発明1003の組成物。
[本発明1005]
濃縮された液体として製剤化された、本発明1001の組成物。
[本発明1006]
ピキア属種酵母の増殖を増大させるためのおよび殺真菌性の微生物増殖時副生成物の産生を増大させるための栄養素をさらに含む、本発明1001の組成物。
[本発明1007]
増殖培地をさらに含み、前記1つもしくは複数のピキア属種酵母が該増殖培地中で産生された、本発明1001の組成物。
[本発明1008]
1つもしくは複数のピキア属種の酵母および／またはその1つもしくは複数の増殖時副生成物を含む殺真菌性組成物を植物および／またはその周辺環境に適用する段階を含む、植物において真菌感染を制御および／または防止する方法。
[本発明1009]
1つもしくは複数のピキア属種の酵母が、ピキア・オキシデンタリス（Pichia occidentalis）、その変異体、ピキア・アノマラ（Pichia anomala）、その変異体、またはそれらの任意の組み合わせから選択される、本発明1008の方法。
[本発明1010]
殺真菌性組成物を適用する段階が、該殺真菌性組成物を植物の根に直接的に接触させることを含む、本発明1008の方法。
[本発明1011]
殺真菌性組成物を適用する段階が、該殺真菌性組成物を、植物が生育する土壌に適用することを含む、本発明1008の方法。
[本発明1012]
殺真菌性組成物を適用する段階が、該組成物を植物の根、幹、茎、および／または維管束系の中に注入することを含む、本発明1008の方法。
[本発明1013]
殺真菌性組成物が、灌水システムを用いて植物および／またはその周辺環境に適用される、本発明1008の方法。
[本発明1014]
殺真菌性組成物が、窒素、リン、カリウム、タンパク質、炭素、および微量栄養素から選択される1つまたは複数の植物栄養素の供給源とともに、植物および／またはその周辺環境に適用される、本発明1008の方法。
[本発明1015]
殺真菌性組成物が適用される植物が、真菌病原体からの感染または環境ストレッサーからの悪影響に起因して抵抗力の健全性を失っている、本発明1008の方法。
[本発明1016]
1つもしくは複数の増殖時副生成物が、バイオサーファクタント、酵素、および／またはキラートキシンを含む、本発明1008の方法。
[本発明1017]
植物が、フザリウム属（Fusarium）菌に感染する作物植物である、本発明1008の方法。
[本発明1018]
植物が、フザリウムウィルト（Fusarium wilt）またはパナマ病によって影響を受けるムサ属種（Musa spp.）の植物である、本発明1017の方法。
[本発明1019]
植物が、コフィア属種（Coffea spp.）の植物である、本発明1017の方法。
[本発明1020]
植物が、F. アベナセウム（F. avenaceum）、F. ブビゲウム（F. bubigeum）、F. クルモラム（F. culmorum）、F. グラミネアラム（F. graminearum）、F. ラングセティアエ（F. langsethiae）、F. オキシスポラム（F. oxysporum）、F. プロリフェラタム（F. proliferatum）、F. スポロトリキオイデス（F. sporotrichioides）、F. ポアエ（F. poae）、F. ロゼウム（F. reseum）、F. ソラニ（F. solani）、F. トリシンクタム（F. tricinctum）、F. バーティシリオイデス（F. verticillioides）、F. ビルグリフォルメ（F. virguliforme）、およびF. キシラリオイデス（F. xylariodides）のうちの1つまたは複数に感染する、本発明1017の方法。
[本発明1021]
1つまたは複数の糖脂質および／もしくはリポペプチドを含むバイオサーファクタント組成物を、植物および／またはその環境に適用する段階をさらに含む、本発明1008の方法。
[本発明1022]
前記組成物がソホロ脂質を含む、本発明1021の方法。
[本発明1023]
バイオサーファクタント組成物が殺真菌性組成物の酵母に接触しないような様式において、バイオサーファクタント組成物の適用が実施される、本発明1021の方法。
[本発明1024]
バイオサーファクタント組成物が、シリンジを用いて植物の維管束系の中に注入される、本発明1023の方法。
[本発明1025]
バイオサーファクタント組成物が、植物が生育する土壌に適用される、本発明1021の方法。
[本発明1026]
ソホロ脂質バイオサーファクタントを含むバイオサーファクタント組成物を植物および／またはその周辺環境に適用する段階を含む、植物においてフザリウム属感染を制御する方法。
[本発明1027]
バイオサーファクタント組成物が、シリンジを用いて植物の中に注入される、本発明1026の方法。
[本発明1028]
バイオサーファクタント組成物が、植物が生育する土壌に適用される、本発明1026の方法。
[本発明1029]
本発明1001～1006のいずれかの殺真菌性組成物を、植物および／またはその周辺環境に適用する段階、ならびに
ソホロ脂質バイオサーファクタントを含むバイオサーファクタント組成物を、植物および／またはその周辺環境に適用する段階
を含む、植物においてフザリウム属感染を制御する方法。
[本発明1030]
本発明1001～1006のいずれかの殺真菌性組成物を、農産物および／もしくはその周辺環境に適用する段階、ならびに／または
ソホロ脂質バイオサーファクタントを含むバイオサーファクタント組成物を、農産物および／もしくはその周辺環境に適用する段階
を含む、農産物においてフザリウム属感染を制御および／または防止する方法。
[本発明1031]
殺真菌性組成物および／またはバイオサーファクタント組成物が、収穫前に農産物に適用される、本発明1030の方法。
[本発明1032]
殺真菌性組成物および／またはバイオサーファクタント組成物が、収穫後に農産物に適用される、本発明1030の方法。
[本発明1033]
農産物が、茎葉（foliage）、果実、または野菜である、本発明1030の方法。
[本発明1034]
農産物が、トウモロコシの雌穂である、本発明1030の方法。

図1は、ソホロ脂質（SLP）による、プレート上のフザリウム・オキシスポラムの阻害を示す。 図2は、ピキア・アノマラによる、プレート上のF. オキシスポラムの阻害を示す。 図3は、顕微鏡下でのF. オキシスポラム培養物（未処理の対照）を示す。菌糸に富んでいた。 図4A～4Bは、1% SLPを用いて処理されたF. オキシスポラム培養物を示す。初期の培養物は（4A）に示される。菌糸は3日以内に破壊された（4B）。 図4Aの説明を参照のこと。 図5A～5Cは、顕微鏡下での、P. アノマラを用いて処理された、1日後のF. オキシスポラム培養物を示す。P. アノマラの細胞は、F. オキシスポラムの菌糸に結合した（5A～5B）。細胞は、死滅した菌糸のように、透明に透過し始めていた（5C）。 図5Aの説明を参照のこと。 図5Aの説明を参照のこと。 図6A～6Bは、P. アノマラを用いて処理された、3日目の処理後のF. オキシスポラム培養物を示す。F. オキシスポラム菌糸は、破壊されて、および／または死滅しているように見受けられた。 図7A～7Bは、P. アノマラを用いて処理された、7日後のF. オキシスポラム培養物を示す。F. オキシスポラム菌糸のほとんどは、死滅し、かつ破壊されたように見受けられた。 図8A～8Bは、P. アノマラを用いて初期に処理された、3日目の処理後のF. オキシスポラム培養物を示す。類似の効果は、通常の、非変異型のP. アノマラと同様に観察され、該効果は、F. オキシスポラム菌糸の破壊を含む。 図9A～9Bは、P. オキシデンタリスを用いて処理された、処理の1日後のF. オキシスポラム培養物を示す。酵母細胞は、すでにF. オキシスポラム菌糸に活発に結合しており、かつ、それらを直接的に死滅させるとともに、それらの増殖を阻害していた。いくらかの菌糸は、細胞外活性によって薄くなっていた。 図10A～10Bは、P. オキシデンタリスを用いて処理された、3日目の処理後の培養物を示す。残留物の菌糸のみが残っており、P. オキシデンタリス細胞が、以前菌糸であった場所において、菌糸の構造をちょうど再現するように増殖していた。処理後のP. オキシデンタリスの培養物は、純粋であるか、またはほぼ純粋であった。 図10Aの説明を参照のこと。 図11は、P. オキシデンタリスを用いて処理された培養物を有する、寒天プレートを示す。F. オキシスポラムは、2日後および／または3日後には一切検出されなかった。 図12A～12Cは、図11の寒天プレートの3つの反復を示す。3日後、3つのプレートのそれぞれ（A、B、およびC）は同じ結果を示した（F. オキシスポラムは未検出であった）。

発明の詳細な説明
本発明は、微生物を提供し、加えて、バイオサーファクタントなどの、それらの増殖時の副生成物も提供する。本発明はまた、これらの微生物およびそれらの副生成物を用いる方法を提供し、加えて、それらを生産するための方法およびシステムをも提供する。有利なことに、本発明である微生物ベースの生成物および方法は、環境に優しく、非毒性であり、かつ費用対効果が高い。

好ましい態様において、本発明は、殺真菌性組成物およびそれらの使用方法を提供する。具体的には、本発明は、フザリウム属病原体による感染の処置および／または防止を提供し、たとえば該病原体は、たとえばバナナ作物に感染する、フザリウム・オキシスポラムなどである。

1つの態様において、1つもしくは複数の酵母株および／またはそれらの増殖時副生成物を含む殺真菌性組成物が提供される。好ましい態様において、1つまたは複数の酵母株は、ピキア属クレードの酵母から選択される。いっそうより好ましくは、酵母株は、ピキア・オキシデンタリス、およびピキア・アノマラ（ウィッカーハモマイセス・アノマルスとしても知られる）から選択される。

殺真菌性組成物は、発酵培地、ならびに／または精製された、もしくは精製されていない増殖時副生成物を含み得、ここで該副生成物は、バイオサーファクタント、キラートキシン、酵素、および／または他の代謝物などである。微生物は、生きているものであり得、または不活性であり得る。

組成物は、好ましくは、土壌、種子、植物全体、または植物の一部への適用のために、製剤化される。好ましい態様において、組成物は、土壌処理剤として、および／または根の処理剤として、製剤化される。

植物においてフザリウム属感染を処置および／または防止するための方法という、ある態様において、殺真菌性組成物を植物の一部と接触させる。特定の態様において、組成物を植物の1つまたは複数の根と接触させる。

ある態様において、方法は、殺真菌性組成物をバイオサーファクタント組成物とともに適用することをさらに含み得る。

いくつかの態様において、バイオサーファクタント処理組成物は、殺真菌性組成物を土壌に適用すること無しに、植物および／またはその環境に適用される。いくつかの態様において、殺真菌性組成物は、バイオサーファクタント処理剤の適用無しに、土壌に適用される。

抜粋された定義
本明細書において使用される場合、「微生物ベースの組成物」への言及は、微生物または他の細胞培養物の増殖の結果として産生された成分を含む、組成物を意味する。したがって、微生物ベースの組成物は、微生物それ自体、および／または微生物の増殖時の副生成物を含み得る。微生物は、生長能力のある（vegetative）状態、胞子の形、菌糸体の形、繁殖体の任意の他の形、またはこれらの混合物であり得る。微生物は、浮遊性であってよく、もしくはバイオフィルムの形であってもよい、または両方の混合物であってもよい。増殖時の副生成物は、たとえば、代謝物、細胞膜の成分、発現されたタンパク質、および／または細胞の他の成分であり得る。微生物は、インタクトなものであってよく、または溶解されてもよい。いくつかの態様において、微生物は、そこでそれらが増殖した培地とともに、微生物ベースの組成物中に存在する。細胞は、たとえば、1ミリリットルの組成物あたり1 x 10⁴の、1 x 10⁵の、1 x 10⁶の、1 x 10⁷の、1 x 10⁸の、1 x 10⁹の、1 x 10¹⁰の、1 x 10¹¹の、1 x 10¹²の、もしくは1 x 10¹³の、またはより大きいCFUという濃度で、存在し得る。

本発明は、「微生物ベースの生成物」をさらに提供し、これは、所望の結果を獲得するための実践において適用される生成物である。微生物ベースの生成物は、単に、微生物の培養プロセスから採取される、微生物ベースの組成物であり得るか、または、上清などの、その個々の成分であり得る。あるいは、微生物ベースの生成物は、追加された、さらなる成分を含み得る。これらの追加の成分は、たとえば、安定剤や、緩衝剤や、水、塩溶液、もしくは任意の他の適した担体などの、適した担体や、微生物のさらなる増殖を維持するために追加される栄養素や、無栄養価の増殖エンハンサーや、ならびに／またはそれが適用される環境において、微生物および／もしくは組成物を追跡することを容易にする作用物質を、含み得る。微生物ベースの生成物はまた、微生物ベースの組成物の混合物を含み得る。微生物ベースの生成物はまた、何らかの様式において加工されている、微生物ベースの組成物の、1つまたは複数の成分を含み得、該様式は、濾過、遠心分離、溶解、乾燥、精製等といったものであるが、それらに限定されるものではない。

本明細書において使用される場合、「バイオフィルム」とは、微生物の混成の集合体であり、ここで細胞は、互いに接着している。いくつかの態様において、バイオフィルムは、表面に接着し得る。バイオフィルム中の細胞は、同じ生物の浮遊性の細胞、これは、液体培地中で浮遊または移動できる単細胞であるが、該浮遊性の細胞とは、生理学的に異なる。

本明細書において使用される場合、「単離された」または「精製された」核酸分子、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、タンパク質、もしくは小分子などの有機化合物は、天然においてはそれが結合している細胞中の物質などの、他の化合物から、実質的に離れている。精製された、または単離されたポリヌクレオチド（リボ核酸（RNA）もしくはデオキシリボ核酸（DNA））は、その天然の状態においてはそれと隣接する遺伝子または配列から、離れている。精製された、または単離されたポリペプチドは、その天然の状態においてはそれと隣接するアミノ酸または配列から、離れている。「単離された」微生物株とは、それが天然において存在する環境から移動された株を意味する。したがって、単離された株は、たとえば、生物学的に純粋な培養物として、または担体をともなった、胞子（もしくは株の他の形）として、存在し得る。

本明細書において使用される場合、「生物学的に純粋な培養物」は、天然においてはそれが結合している物質から、単離されているものである。好ましい態様において、培養物は、すべての他の生細胞から、単離されている。さらに好ましい態様において、生物学的に純粋な培養物は、それが天然において存在するような状態の同じ微生物の培養物と比較して、有益な特徴を有する。有益な特徴は、たとえば、それらの増殖時の1つまたは複数の副生成物の、増大した産生であり得る。

ある態様において、精製された化合物は、重量で少なくとも60%（乾燥重量）が、関心対象の化合物である。好ましくは、調製物は、重量で、少なくとも75%、より好ましくは少なくとも90%、および最も好ましくは少なくとも99%が、関心対象の化合物である。たとえば、精製された化合物は、重量で、少なくとも90%、91%、92%、93%、94%、95%、98%、99%、または100%（w/w）が所望の化合物であるものである。純度は、任意の適切な標準的方法によって、たとえば、カラムクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィー、または高速液体クロマトグラフィー（HPLC）分析によって、測定される。

「代謝物」とは、代謝によって産生される任意の物質（たとえば増殖時副生成物）、または特定の代謝プロセスに関与するのに必須な物質を指す。代謝物は、出発物質（たとえばグルコース）であるか、代謝における中間体（たとえばアセチルCoA）であるか、または代謝の最終生成物（たとえばn-ブタノール）である、有機化合物であり得る。代謝物の例は、生体高分子、酵素、「キラートキシン」、酸、溶媒、アルコール、タンパク質、ビタミン、ミネラル、微量元素、アミノ酸、炭水化物、およびバイオサーファクタントを含むが、それらに限定されるものではない。

本明細書において提供される範囲は、範囲内のすべての値の略記として理解される。たとえば、1～20という範囲は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20とともに、たとえば、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、および1.9などの、前述の整数の間にあるすべての小数の値からなる群からの、任意の数を、数の任意の組み合わせを、または任意の部分範囲を含むことが、理解される。部分範囲に関して、範囲のいずれかの末端から拡張する「入れ子の部分範囲」が、具体的に意図される。たとえば、1～50という例示的な範囲の、入れ子の部分範囲は、一方の方向において、1～10、1～20、1～30、および1～40を含み得、または他方の方向において、50～40、50～30、50～20、および50～10を含み得る。

本明細書において使用される場合、「非病原性」とは、生物に病気を引き起こすことができないことを意味する。

本明細書において使用される場合、「防止」とは、特定の状態の、もしくは特定の存在の、開始もしくは進行を、回避する、遅らせる、未然に防ぐ、または最小限にすることを意味する。防止とは、絶対的な、または完全な防止を含み得るが、それらを必要とするものではなく、状態または存在は依然として進行し得るが、後になって、防止のための対策が無い場合と比べて、防止されていることを意味する。防止は、状態もしくは存在の開始の重大性を減少させること、および／または、状態もしくは存在がより重大な状態もしくは存在へと進行することを阻害することを、含み得る。

本明細書において使用される場合、「減少」とは、少なくとも1%、5%、10%、25%、50%、75%、または100%の負の変化を指し、かつ「増加」との語は、少なくとも1%、5%、10%、25%、50%、75%、または100%の正の変化を指す。

本明細書において使用される場合、「界面活性剤」とは、2つの液体の間の、または液体と固体との間の、表面張力（または界面張力）を低下させる化合物を指す。界面活性剤は、たとえば、洗剤、湿潤剤、乳化剤、起泡剤、および分散剤として作用する。「バイオサーファクタント」とは、生きている生物によって産生される界面活性剤である。

本明細書において使用される場合、「農業」とは、食物、繊維、バイオ燃料、医薬、化粧品、サプリメント、観賞物としての目的のために、および他の使用のために、植物、藻類、および／または真菌類を栽培および育種することを意味する。農業からの産物は、そのような使用のために収穫される、果実、野菜、種子、キノコ、油、塊茎、茎葉、および花を含み得るが、それらに限定されるものではない。

本明細書において使用される場合、「増大させる」とは、改善すること、または増加することを意味する。たとえば、植物の健全性を増大させるとは、植物の生育するおよび発達する能力を改善することを意味し、該能力は、有害生物および／または病気を撃退する、植物の能力、ならびに干ばつおよび／または水分過剰を生き延びる、植物の能力を含む。植物の生育を増大させるとは、植物のサイズおよび／もしくは量を増加させること、または植物の、望ましいサイズおよび／もしくは量に到達する能力を改善することを意味する。収量を増大させるとは、たとえば、植物1つあたりの果実の数を増加させること、果実のサイズを増加させること、および／または果実の質（たとえば味、食感）を改善することによって、植物によって作物として産生される最終産物を改善することを意味する。

本明細書において使用される場合、「有害生物」とは、ヒト以外の任意の生物であって、ヒトに対して、またはヒトの関連物（たとえば、農業、園芸、畜産、水産養殖）に対して、破壊的である、有害である、および／または不利益である、生物である。有害生物は、感染、伝染、および／または病気を、引き起こし得、および／または媒介し得る。有害生物は、たとえば植物に対して、植物の一部を摂取することによって、直接的な害を引き起こし得る。有害生物は、単細胞生物または多細胞生物であり得、これらは、ウイルス、真菌類、細菌、寄生生物、節足動物、および／または線形動物を含むが、それらに限定されるものではない。

本明細書において使用される場合、有害生物の、またはそれによる感染の「制御」との語は、有害生物を死滅させる作用、有害生物を無力化させる作用、有害生物を移動不能にする作用、もしくは有害生物の総数を減少させる作用に、またはそうでなければ、有害生物を、実質的に害を引き起こすことができない状態にする作用に及ぶ。たとえば、「防除性」との語は、有害生物を制御することができることを意味し、かつ「殺真菌性」とは、真菌類の有害生物を制御することができることを意味する。ある物質の「防除有効量」および／または「殺真菌有効量」とは、防除作用／殺真菌作用を発揮することができる量である。

本明細書において使用される場合、「処置」とは、異常もしくは不調の、度合い、徴候、もしくは症状を、任意の程度まで、根絶する、減少させる、好転させる、回復させる、または防止することを意味し、かつ、異常または不調の完全な治癒を含むが、それらを必要とするものではない。処置とは、不調を、治癒させる、改善する、または部分的に好転させることであり得る。いくつかの態様において、処置は、感染、伝染、または他の病気を引き起こす有害生物を制御することを含み得る。

本明細書において使用される場合、「土壌改良剤」または「土壌調整剤」とは、土壌の物理的な特性を増大させるために、土壌の中に添加される、任意の化合物、任意の材料、または化合物もしくは材料の任意の組み合わせである。土壌改良剤は、有機物および無機物を含み得、かつ、たとえば、肥料、防除剤、および／または除草剤をさらに含み得る。栄養分に富んだ、水はけのよい土壌は、植物の生育および健全性に必須であり、かつしたがって、土壌改良剤は、土壌の栄養分および水分の含量を変化させることによって、植物の生育および健全性を増大させるために、使用され得る。土壌改良剤はまた、土壌の、多くの異なる性質を改善するために使用され得、それは、土壌の構造を改善すること（たとえば圧縮の防止）；栄養分の、濃度および貯蔵能力を改善すること；乾燥した土壌において水の保持力を改善すること；ならびに水はけの悪い土壌において水はけを改善することを含むが、それらに限定されるものではない。

本明細書において使用される場合、「環境ストレッサー」とは、特定の環境において、生きている生物に対して負の影響を有する、無生物的な、または非生物的な条件を指す。環境ストレッサーは、その正常な変動の範囲を超えて、環境に影響を与えることになるものであり、集団としてのパフォーマンスに、または個々の生物の生理機能に、有意な様式で、負の影響を及ぼす。環境ストレッサーの例は、干ばつ、極端な温度、洪水、強風、自然災害、土壌のpH変化、高放射、土壌の圧縮、および他のものを含むが、それらに限定されるものではない。

単数の要素または複数の要素に関して「含む（comprising）」、「有する（having）」、「含む（including）」、または「含む（containing）」などの語を用いる、本発明の任意の局面または態様の、本明細書における説明は、別途記述されるかまたは文脈と明らかに矛盾しない限り、その特定の、単数の要素もしくは複数の要素「からなる」、「から本質的になる」、または「を実質的に含む」本発明の類似の局面または態様のサポートを提供することが、意図される。

具体的に記述されるかまたは文脈から明らかでない限り、本明細書において使用される場合、「または」との語は、包括的であると理解される。具体的に記述されるかまたは文脈から明らかでない限り、本明細書において使用される場合、「1つの（a）」、「および」、および「その（the）」との語は、単数であるか、または複数であると理解される。

具体的に記述されるかまたは文脈から明らかでない限り、本明細書において使用される場合、「約」との語は、当技術分野における通常の許容性の範囲内、たとえば、平均の標準偏差2以内として理解される。約とは、記述される値の、10%以内、9%以内、8%以内、7%以内、6%以内、5%以内、4%以内、3%以内、2%以内、1%以内、0.5%以内、0.1%以内、0.05%以内、または0.01%以内として理解され得る。

本明細書における、可変部分の任意の定義における化学基のリストの列挙は、任意の単一の基としての可変部分の定義を、またはリストに挙げられた基の任意の組み合わせとしての可変部分の定義を含む。本明細書における、可変部分または局面についての態様の列挙は、任意の単一の態様としてのその態様を、または任意の他の態様とのもしくはその部分との任意の組み合わせとしてのその態様を含む。

本明細書において参照または引用される、すべての参考文献は、本明細書の明示的な教示と相反しない範囲において、すべての図および表を含むその全体が、参照により本明細書に組み入れられる。

殺真菌性組成物
1つの態様において、殺真菌性組成物が提供され、これは、1つもしくは複数の酵母株、および／またはそれらの増殖時副生成物を含む。好ましい態様において、1つまたは複数の酵母株は、ピキア属クレードの酵母から選択される。いっそうより好ましくは、酵母株は、ピキア・オキシデンタリス、およびピキア・アノマラ（ウィッカーハモマイセス・アノマルスとしても知られる）から選択される。

組成物中の微生物および他の成分の、種類ならびに割合は、たとえば、処置される植物、植物が生育する土壌のタイプ、処置時の植物の健全性、および他の因子に照らして、変更され得る。

本願の殺真菌性組成物の微生物は、小スケールから大スケールにわたる培養プロセスによって得られ得る。これらの培養プロセスは、液内培養／液内発酵、固相発酵（SSF）、およびそれらの組み合わせを含むが、それらに限定されるものではない。

殺真菌性組成物は、生きている、および／もしくは不活性な培養物を含む、発酵培地の残りや、バイオサーファクタント、キラートキシン、酵素、および／もしくは他の代謝物などの、精製された、もしくは精製されていない、微生物の増殖時副生成物や、ならびに／または任意の残存栄養素を含み得る。

組成物は、たとえば、少なくとも、重量で1%、5%、10%、25%、50%、75%、または100%が、増殖培地であってよい。組成物中のバイオマスの量は、重量で、たとえば、それらの間のすべてのパーセンテージを含めて、0%～100%、10%～75%、または25%～50%のいずれかであってよい。

発酵の生成物は、抽出もしくは精製されて、または抽出も精製も無しに、直接的に使用され得る。望ましい場合、抽出および精製は、標準的な抽出方法および／もしくは精製方法を用いて、または文献に記載される技術を用いて、容易に達成され得る。

殺真菌性組成物中の微生物は、活性型であってもよく、もしくは不活性型であってもよい、または生長能力のある細胞の形、および／もしくは生殖繁殖体の任意の他の形であってよい。

1つの態様において、微生物の異なる株を別々に増殖させ、そしてその後、合わせて混合して、殺真菌性組成物を生産する。

組成物は、好ましくは、土壌、種子、植物全体、または植物の一部（根、塊茎、茎、花、葉、および維管束系を含むが、それらに限定されるものではない）への適用のために、製剤化される。ある態様において、組成物は、たとえば、濃縮された液体、ダスト、顆粒、微粒、ペレット、水和性粉末、フロアブル粉末、乳剤、マイクロカプセル、油、またはエアロゾルとして製剤化される。好ましい態様において、組成物は、土壌処理剤として製剤化される。

組成物の効果を改善または安定させるために、組成物は、適切なアジュバントと混和され、そしてその後はそのままでまたは必要であれば希釈した後に、使用され得る。好ましい態様において、組成物は、液体として製剤化されるか、または水および他の成分と混合されて液体の生成物を形成し得る乾燥粉末もしくは乾燥顆粒として製剤化される。1つの態様において、組成物は、有益な微生物の増殖を増大させるための、および殺真菌性の増殖時副生成物の産生を増大させるための、タンパク質ならびに他の栄養素の供給源をさらに含み得、これはたとえば、炭素、窒素、ビタミン、微量栄養素、およびアミノ酸などである。

組成物は、単独で、または植物の健全性を、生育を、および／もしくは収量を効率よく増大させるための他の化合物との組み合わせとしてのいずれかで、使用され得る。たとえば、いくつかの態様において、組成物は、除草剤、肥料、防除剤、および／または土壌改良剤などの、追加の成分を含み得る。1つの態様において、組成物は、Scott’s Miracle-Gro（登録商標）などの市販の肥料と、もしくは栄養素（たとえば窒素 - リン - カリウム（NPK）という多量栄養素）の別の供給源と、混合され得、ならびに／またはそれらとともに、適用され得る。含められ得る他の追加の成分は、多量栄養素であり、ならびに／または、マグネシウム、リン酸塩、窒素、カリウム、セレン、カルシウム、硫黄、鉄、銅、および亜鉛などの微量栄養素であり、ならびに／または、ケルプ抽出物、フルボ酸、フマル酸、キチン（もしくはキチン誘導体）、フミン酸塩、および／もしくはフミン酸などのプレバイオティクスである。厳密な材料およびそれらの量は、特定の作物または植物に合わせて、それらの必要性に基づいて変更され得、かつ栽培者または農学者によって、決定され得る。

組成物はまた、他の作物管理システムとの組み合わせとして使用され得る。1つの態様において、組成物は、任意で、天然のならびに／もしくは化学的な、防除剤および／もしくは忌避剤を含み得るか、または、これらとともに適用され得、これらはたとえば、アゾキシストロビン、イプコナゾール、メタラキシル、トリフロキシストロビン、クロチアニジン（clothiandin）、VOTiVO、チアメトキサム、シアントラニリプロール（cyantaniliprole）、フルジオキソニル、チオキサザフェン、糖脂質、リポペプチド、ディート、シトロネラ、精油、鉱油、ニンニク抽出物、トウガラシ抽出物、脂肪酸、ならびに／または、適用される微生物の組み合わせと併用可能な任意の、公知の市販のおよび／もしくは自家製の防除剤などである。

さらなる成分が、微生物ベースの組成物に添加され得、これはたとえば、緩衝剤、担体、同じ設備または異なる設備で生産された、他の微生物ベースの組成物、粘度調整剤、保存料、追跡剤、殺生物剤、他の微生物、界面活性剤、乳化剤、潤滑剤、溶解性調整剤、pH調整剤、保存料、安定剤、および紫外光耐性剤である。

微生物の増殖
本発明は、微生物の培養のための、ならびに微生物代謝物および／または微生物の増殖時の他の副生成物の生産のための方法を利用する。本発明は望ましいスケールでの、微生物の培養、および微生物代謝物の生産に適した培養プロセスを、さらに利用する。これらの培養プロセスは、液内培養／液内発酵、固相発酵（SSF）、ならびにそれらの改変物、それらの混成物、および／またはそれらの組み合わせを含むが、それらに限定されるものではない。

本明細書において使用される場合、「発酵」とは、制御された条件下での、細胞の培養または増殖を指す。増殖は、好気的または嫌気的であり得る。好ましい態様において、微生物を、SSFおよび／またはその改変版を用いて増殖させる。

1つの態様において、本発明は、バイオマス（たとえば生存力のある細胞材料）、細胞外代謝物（たとえば、小分子および排出されるタンパク質）、残存栄養素、ならびに／または細胞内の成分（たとえば、酵素および他のタンパク質）の生産のための、材料および方法を提供する。

本発明によって使用される微生物増殖用の容器は、産業用途のための、任意の発酵槽または培養リアクターであり得る。1つの態様において、容器は、分散型の、微生物増殖設備の一部である。1つの態様において、増殖容器は、遠隔地、たとえば多雨林またはバナナ農園において稼働させることができる、持ち運び可能な発酵システムの一部である。

pH、酸素、気圧、温度、湿度、微生物の密度、および／または代謝物濃度などの、培養プロセスにおける重要な因子を測定するために、容器は、機能制御手段／センサーを有してよく、または機能制御手段／センサーと連結されていてもよい。

さらなる態様において、容器はまた、容器内の微生物の増殖（たとえば、細胞数および増殖期の測定）をモニター可能であり得る。あるいは、試料が容器から毎日採取され得、そして希釈プレーティング技術などの当技術分野において公知の技術によって、計数され得る。希釈プレーティングは、試料中の生物の数を推測するために使用される、単純な技術である。該技術はまた、異なる環境または処理をそれによって比較することができる、指標を提供し得る。

1つの態様において、方法は、培養物に窒素源を補充することを含む。窒素源は、たとえば、硝酸カリウム、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、リン酸アンモニウム、アンモニア、尿素、および／または塩化アンモニウムであり得る。これらの窒素源は、独立して使用されてもよく、または2つ以上の組み合わせとして使用されてもよい。

方法は、増殖中の培養物への酸素供給を提供し得る。1つの態様は、低レベルの酸素を含む空気を取り除き、そして酸素が含まれる空気を導入するために、空気のゆるやかな動きを利用する。液内発酵の場合は、酸素が含まれる空気は、機構、これは液体の機械的撹拌のためのインペラー、および酸素を液体中に溶解させるための、気体の泡を液体へと供給するエアスパージャーを含むが、このような機構を介して毎日補充される、外気であり得る。

方法は、培養物に炭素源を補充することをさらに含み得る。炭素源は、典型的には、グルコース、スクロース、ラクトース、フルクトース、トレハロース、マンノース、マンニトール、および／またはマルトースなどの炭水化物；酢酸、フマル酸、クエン酸、プロピオン酸、リンゴ酸、マロン酸、および／またはピルビン酸などの有機酸；エタノール、プロパノール、ブタノール、ペンタノール、ヘキサノール、イソブタノール、および／またはグリセロールなどのアルコール；ダイズ油、キャノーラ油、米ぬか油、オリーブ油、トウモロコシ油、ゴマ油、および／または亜麻仁油などの脂肪ならびに油；等である。これらの炭素源は、独立して使用されてもよく、または2つ以上の組み合わせとして使用されてもよい。

1つの態様において、微生物のための増殖因子および微量栄養素が、培地中に含まれる。これは、それらが必要とするビタミンすべてを産生することができない微生物を増殖させる場合に、特に好ましい。鉄、亜鉛、銅、マンガン、モリブデン、および／またはコバルトなどの微量元素を含む、無機栄養素もまた、培地に含まれ得る。さらに、ビタミン、必須アミノ酸、および微量元素の供給源は、たとえば、トウモロコシ粉（corn flour）などの、粉（flour）もしくは粗びき粉（meal）の形で、または、酵母抽出物、ジャガイモ抽出物、ビーフ抽出物、ダイズ抽出物、バナナピール抽出物等といった抽出物の形で、または精製された形で、含まれ得る。たとえば、タンパク質の生合成に有用なものなどの、アミノ酸もまた含まれ得る。

1つの態様において、無機塩もまた含まれ得る。使用に適した無機塩は、リン酸二水素カリウム、リン酸水素二カリウム、リン酸水素二ナトリウム、硫酸マグネシウム、塩化マグネシウム、硫酸鉄、塩化鉄、硫酸マンガン、塩化マンガン、硫酸亜鉛、塩化鉛、硫酸銅、塩化カルシウム、塩化ナトリウム、炭酸カルシウム、および／または炭酸ナトリウムであり得る。これらの無機塩は、独立して使用されてもよく、または2つ以上の組み合わせとして使用されてもよい。

いくつかの態様において、培養のための方法は、培養プロセスの前に、および／または培養プロセス中に、追加の酸および／または抗微生物剤を培地に添加することを、さらに含み得る。抗微生物剤または抗生物質は、コンタミネーションから培養物を保護するために使用される。加えて、液内培養中にガスが産生される場合に、泡の形成および／または蓄積を防止するために、消泡剤もまた添加されてよい。

1つの態様において、微生物は、固体または半固体の基材において増殖し得、これはたとえば、トウモロコシ、コムギ、ダイズ、ヒヨコマメ、マメ類（beans）、オートミール、パスタ、コメであるか、および／または、これらもしくは他の類似の物質の任意のものの、粉もしくは粗びき粉などである。

発酵のpHは、関心対象の微生物に適したものであるべきである。炭酸塩およびリン酸塩などの、緩衝剤およびpH調整剤が、pHを好ましい値の近くに安定させるために使用され得る。金属イオンが高濃度で存在する場合、培地におけるキレート剤の使用が必要であり得る。

微生物は、浮遊型として、またはバイオフィルムとして、増殖し得る。バイオフィルムの場合においては、容器はその中に、微生物がその上でバイオフィルム状態で増殖することができる基材を有し得る。システムはまた、たとえば、バイオフィルムの増殖特性を促進する、および／または改善する刺激（剪断ストレスなど）を適用するための容量を有し得る。

1つの態様において、微生物の培養のための方法は、約5～約100℃で、好ましくは15～60℃で、より好ましくは、25～50℃で実施される。さらなる態様において、培養は、一定の温度で連続的に実施され得る。別の態様において、培養は、温度変化を受け得る。

1つの態様において、方法および培養プロセスにおいて使用される装置は、滅菌される。リアクター／容器などの培養装置は、滅菌用ユニット、たとえばオートクレーブから分離され得るが、一方でそれに連結もされ得る。培養装置はまた、接種を開始する前にその場で滅菌する、滅菌用ユニットを有し得る。空気は、当技術分野において公知の方法によって滅菌され得る。たとえば、外気は、容器中に導入される前に、少なくとも1つのフィルターを通過し得る。他の態様において、培地は、低温殺菌されてよく、または任意で、まったく加熱されることがなくてもよく、ここで、低い水分活性および低いpHの使用が、望ましくない細菌の増殖を制御するために活用され得る。

1つの態様において、本発明は、本発明の微生物株を、増殖、および代謝物産生に適した条件下で培養する段階；ならびに、任意で、代謝物を精製する段階によって、たとえば、バイオサーファクタント、酵素、タンパク質、エタノール、乳酸、ベータグルカン、ペプチド、代謝中間体、多価不飽和脂肪酸、および脂質などの微生物代謝物を生産するための方法を、さらに提供する。方法によって生産される代謝物の含量は、たとえば、少なくとも20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、または90%であり得る。

液内発酵の場合においては、バイオマスの含量は、たとえば、5 g/l～180 g/l、またはそれより多いか、または10 g/l～150 g/lである。

細胞の濃度は、たとえば、1グラムの最終生成物あたり、1 x 10⁹個の、1 x 10¹⁰個の、1 x 10¹¹個の、1 x 10¹²個の、もしくは1 x 10¹³個の細胞または胞子であり得る。

関心対象の微生物によって産生される、微生物の増殖時副生成物は、微生物内に保持されてもよく、または増殖培地中に分泌されてもよい。培地は、微生物の増殖時副生成物の活性を安定させる化合物を含んでよい。

微生物の培養のための、ならびに微生物副生成物の生産のための方法および装置は、バッチで、準連続的なプロセスで、または連続的なプロセスで、実施され得る。

1つの態様において、微生物培養組成物のすべてが、培養の完了時に（たとえば、所望の細胞密度を、または特定の代謝物の所望の濃度を達成する時など）、取り出される。このバッチ手順においては、完全に新しいバッチが、最初のバッチから採取されて、開始される。

別の態様においては、発酵生成物の一部分のみが、常に取り出される。この態様において、生存力のある細胞、胞子、分生子、菌糸、および／または菌糸体を有するバイオマスが、新しい培養バッチのための接種原として、容器内に残される。取り出される組成物は、無細胞培地であり得、または細胞、胞子、もしくは他の生殖繁殖体、および／もしくはそれらの組み合わせを含み得る。この様式において、準連続的なシステムが作製される。

有利なことに、方法は、複雑な装置を必要とせず、高エネルギー消費も必要としない。関心対象の微生物は、現場で小スケールまたは大スケールで培養され得、そして利用され得、それらの培地と混合され続けることすら可能である。

有利なことに、微生物ベースの生成物は、遠隔地において生産され得る。微生物の増殖設備は、たとえば、太陽光、風力、および／または水力発電の電力を利用することにより、外部からの電力供給を受けずに稼働し得る。

本発明によって増殖される微生物株
本発明のシステムおよび方法によって増殖される微生物は、たとえば、細菌、酵母、および／または真菌類であり得る。これらの微生物は、天然の微生物であってよく、または遺伝的に改変された微生物であってもよい。たとえば、微生物は、特定の特徴を示す特定の遺伝子を用いて、形質転換されてよい。微生物はまた、望ましい株の変異体であってもよい。本明細書において使用される場合、「変異体」とは、基準となる微生物の、株、遺伝的バリアント、またはサブタイプを意味し、ここで変異体は、基準となる微生物と比べて、1つまたは複数の遺伝的な変化（たとえば、点変異、ミスセンス変異、ナンセンス変異、欠失、重複、フレームシフト変異、またはリピート伸長）を有する。変異体を作製するための手順は、微生物学の技術分野において周知である。たとえば、UV変異導入およびニトロソグアニジンが、この目的に向けて広く使用される。

1つの態様において、微生物は、酵母または真菌である。本願発明による使用のために適した酵母のおよび真菌の種は、オーレオバシディウム属（Aureobasidium）（たとえばA. プルランス（A. pullulans））、ブラケスレア属（Blakeslea）、カンジダ属（Candida）（たとえば、C. アピコーラ（C. apicola）、C. ボンビコーラ（C. bombicola））、エントモフトラ属（Entomophthora）、サッカロマイセス属（Saccharomyces）（たとえば、S. ブラウディ・セクエラ（S. boulardii sequela）、S. セレビシエ（S. cerevisiae）、S. トルラ（S. torula））、イサチェンキア属（Issatchenkia）、モルティエレラ属（Mortierella）、マイコリザ属（Mycorrhiza）、ペニシリウム属（Penicillium）、ファイコマイセス属（Phycomyces）、シュードザイマ属（Pseudozyma）（たとえばP. アフィディス（P. aphidis））、スターメレラ属（Starmerella）（たとえばS. ボンビコーラ（S. bombicola））、および／またはトリコデルマ属（たとえば、T. リーセイ（T. reesei）、T. ハルジアナム、T. ハマツム（T. hamatum）、T. ビリデ（T. viride））を含む。

ある態様において、微生物は、「キラー酵母」として知られる任意の酵母であり、該酵母は、該株自身はそれに抵抗性である毒性タンパク質または糖タンパク質のその分泌によって、特徴付けされる。これらは、たとえば、カンジダ属（たとえばC. ノダエンシス（C. nodaensis））、クリプトコッカス属（Cryptococcus）、デバリオマイセス属（Debaryomyces）（たとえばD. ハンセニイ（D. hansenii））、ハンセニアスポラ属（Hanseniaspora）、（たとえばH. ウバラム（H. uvarum））、ハンセヌラ属（Hansenula）、クルイベロマイセス属（Kluyveromyces）（たとえばK. ファフィイ（K. phaffii））、ピキア属（たとえば、P. アノマラ、P. グイリエルモンディ（P. guielliermondii）、P. オキシデンタリス、P. クドリアブゼビイ（P. kudriavzevii））、サッカロマイセス属（たとえばS. セレビシエ）、トルロプシス属（Torulopsis）、ウスチラゴ属（Ustilago）（たとえばU. メイディス（U. maydis））、ウィッカーハモマイセス属（Wickerhamomyces）（たとえばW. アノマルス）、ウィリオプシス属（Williopsis）（たとえばW.ムラキイ（W. mrakii））、ザイゴサッカロマイセス属（Zygosaccharomyces）（たとえばZ. バイリイ（Z. bailii））、および他のものを含み得る。

特定の態様において、微生物株は、ピキア・オキシデンタリス（およびその変異体）、ピキア・アノマラ（およびその変異体）、ならびにそれらの組み合わせから選択される、ピキア属酵母である。ピキア・オキシデンタリス（イサチェンキア・オキシデンタリス（Issatchenki occidentalis）としても知られる）は、果実に、および食品の自然発酵に、しばしば関連する。ピキア・アノマラ（ウィッカーハモマイセス・アノマルスとしても知られる）は、多様な、溶媒（たとえば酢酸エチル）、酵素（たとえばフィターゼ）、キラートキシン（たとえばエキソ-β-1,3-グルカナーゼ）とともに、糖脂質バイオサーファクタントの、強力な生産者である。

1つの態様において、微生物は、胞子を産生する、トリコデルマ属種（Trichoderma spp.）の真菌である。特定の態様において、微生物は、トリコデルマ・ハルジアナムまたはその変異体である。

1つの態様において、微生物は、グラム陽性細菌およびグラム陰性細菌を含む、細菌である。細菌は、たとえば、バチルス属（Bacillus）（たとえば、B. サブティリス（B. subtilis）、B. リケニフォルミス（B. licheniformis）、B. フィルムス（B. firmus）、B. ラテロスポルス（B. laterosporus）、B. メガテリウム（B. megaterium）、B. アミロリケファシエンス（B. amyloliquifaciens））、クロストリジウム属（Clostridium）（C. ブチリカム（C. butyricum）、C. チロブチリカム（C. tyrobutyricum）、C. アセトブチリカム（C. acetobutyricum）、クロストリジウムNIPER 7（Clostridium NIPER 7）、およびC. ベイジェリンキ（C. beijerinckii））、アゾトバクター属（A. ビネランジイ（A. vinelandii）、A. クロオコッカム（A. chroococcum））、シュードモナス属（Pseudomonas）（P. クロロラフィス亜種オーレオファシエンス（Kluyver）（P. chlororaphis subsp. aureofaciens (Kluyver)）、P. アエルギノーサ（P. aeruginosa））、アグロバクテリウム・ラジオバクター（Agrobacterium radiobacter）、アゾスピリラム・ブラシリエンシス（Azospirillumbrasiliensis）、リゾビウム属（Rhizobium）、スフィンゴモナス・パウシモビリス（Sphingomonas paucimobilis）、ラルストニア・ユートロファ（Ralslonia eulropha）、ならびに／またはロドスピリラム・ラブラム（Rhodospirillum rubrum）であり得る。

1つの態様において、微生物は、バチルス属の種であり、たとえば、B. サブティリスの株もしくはその変異体、またはB. アミロリケファシエンスの株（たとえばB. アミロリケファシエンス亜種ローカス（B. amyloliquefaciens subsp. locus））もしくはその変異体である。

1つの態様において、本願の微生物ベースの組成物中の微生物は、互いに相乗的に作用して、フザリウム属菌を制御し、かつ植物の健全性を、生育を、および／または収量を増大させる。

微生物ベースの生成物の調製
本発明の微生物ベースの生成物の1つ（たとえば土壌処理組成物）は、単に、微生物、および／または微生物によって産生された微生物代謝物、および／または任意の残存栄養素を含む、発酵培地である。発酵の生成物は、抽出も精製も無しに、直接的に使用され得る。望ましい場合、抽出および精製は、標準的な抽出方法および／もしくは精製方法を用いて、または文献に記載される技術を用いて、容易に達成され得る。

微生物ベースの生成物中の微生物は、活性型であってもよく、もしくは不活性型であってもよい、または生長能力のある細胞の形、生殖胞子の形、分生子の形、菌糸体の形、菌糸の形、もしくは微生物繁殖体の任意の他の形であってよい。微生物ベースの生成物はまた、微生物の、これらの任意の形の組み合わせを含み得る。

1つの態様において、微生物の異なる株を別々に増殖させ、そしてその後、合わせて混合して、微生物ベースの生成物を生産する。微生物は、任意で、混合の前に、そこでそれらが増殖する培地と混和され得、そして乾燥され得る。

微生物ベースの生成物は、さらなる安定化、保存、および保管無しに、使用され得る。有利なことに、これらの微生物ベースの生成物の直接の使用は、微生物を高生存率で保ち、外来物質および望ましくない微生物によるコンタミネーションの可能性を減少させ、かつ微生物増殖時の副生成物の活性を維持する。

微生物ベースの組成物が増殖容器から採取されると、採取された生成物がコンテナの中に収められる時に、またはそうでなければ採取された生成物が使用のために輸送される時に、さらなる成分が添加され得る。添加物は、たとえば、緩衝剤、担体、同じ設備または異なる設備で生産された、他の微生物ベースの組成物、粘度調整剤、キレート剤、付着剤、保存料、微生物増殖のための栄養素（たとえばプレバイオティクス）、界面活性剤、乳化剤、潤滑剤、溶解性調整剤、追跡剤、溶媒、殺生物剤、抗生物質、pH調整剤、安定剤、紫外光耐性剤、脂肪酸（またはそれらの塩もしくは誘導体）、他の微生物、およびそのような調製物のために慣例的に使用される、他の適切な添加剤であり得る。

1つの態様において、組成物は、有機酸およびアミノ酸、またはそれらの塩を含む緩衝剤を、さらに含んでよい。適切な緩衝剤は、クエン酸塩、グルコン酸塩、酒石酸塩、リンゴ酸塩、酢酸塩、乳酸塩、シュウ酸塩、アスパラギン酸塩、マロン酸塩、グルコヘプトン酸塩、ピルビン酸塩、ガラクタル酸、グルカル酸塩、タルトロン酸塩、グルタミン酸塩、グリシン、リジン、グルタミン、メチオニン、システイン、アルギニン、およびそれらの混合物を含む。リン酸および亜リン酸、またはそれらの塩もまた、使用され得る。合成の緩衝剤は、使用されるのに適切であるが、上に列挙した、有機酸およびアミノ酸、またはそれらの塩などの、天然の緩衝剤の使用が好ましい。

微生物ベースの生成物のpHは、関心対象の微生物だけでなく、処置される植物にとっても適切であるべきである。好ましい態様において、最終的な微生物ベースの組成物のpHは、5.5～7.5の範囲にわたる。

さらなる態様において、pH調整剤は、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、炭酸カリウムもしくは重炭酸カリウム、塩酸、硝酸、硫酸、または混合物を含む。

1つの態様において、プレバイオティクスが、微生物ベースの生成物に添加され得、該プレバイオティクスは、たとえば、ケルプ抽出物、フルボ酸、フミン酸塩、および／またはフミン酸を含む。

1つの態様において、重炭酸ナトリウムまたは炭酸ナトリウム、硫酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、リン酸二水素ナトリウムなどの追加の成分が、調合物に含まれ得る。

1つの態様において、グルコースおよびグリセリンが、保管および輸送の間に浸透圧調節物質としての役割を果たすために、微生物ベースの生成物に添加され得る。1つの態様において、モラセスが含まれ得る。

任意で、組成物は、使用の前に保管され得る。保管期間は、好ましくは短い。したがって、保管期間は、60日未満、45日未満、30日未満、20日未満、15日未満、10日未満、7日未満、5日未満、3日未満、2日未満、1日未満、または12時間未満であり得る。好ましい態様において、生細胞が生成物中に存在する場合、生成物は、たとえば、20℃未満、15℃未満、10℃未満、または5℃未満などの、低温で保管される。

しかしながら、微生物ベースの組成物は、さらなる安定化、保存、および保管無しに、使用され得る。有利なことに、これらの微生物ベースの組成物の直接の使用は、微生物を高生存率で保ち、外来物質および望ましくない微生物によるコンタミネーションの可能性を減少させ、かつ微生物の増殖時副生成物の活性を維持する。

他の態様において、組成物（微生物、増殖培地、または微生物および培地）は、たとえば、使用用途、意図される適用方法、発酵容器のサイズ、および微生物の増殖設備から使用する場所への、任意の輸送方式を考慮して、適切なサイズのコンテナ中に収められ得る。したがって、微生物ベースの組成物がその中に収められるコンテナは、たとえば、1パイント～1,000ガロン、またはそれより大きいものであり得る。ある態様において、コンテナは、1ガロン、2ガロン、5ガロン、25ガロン、またはそれより大きい。

植物の真菌感染を処置する方法
1つの態様において、方法は、植物および／もしくは植物の周辺環境内で、または植物および／もしくは植物の周辺環境上で、フザリウム属菌を制御するために提供され、ここで1つもしくは複数の非病原性微生物、および／またはそれらの増殖時副生成物は、植物および／または周辺環境に接触する。ある態様において、フザリウム属感染は、植物内および／もしくは周辺環境内で、もしくは植物上および／もしくは周辺環境上で成立する、またはすでにそこに存在している。有利なことに、組成物は、植物毒性を引き起こすこと無しに、非休眠状態の植物組織に適用され得る。

方法は、1つもしくは複数の微生物、および／またはそれらの増殖時副生成物を含む、本発明の殺真菌性組成物を、植物および／またはその周辺環境に接触させることを含み得る。好ましくは、1つもしくは複数の微生物、および／またはそれらの増殖時副生成物は、殺真菌作用を発揮することができる。1つの態様において、1つまたは複数の殺真菌性微生物は、ピキア属酵母、たとえば、P. オキシデンタリスおよびP. アノマラ（ウィッカーハモマイセス・アノマルスとしても知られる）ならびにそれらの変異体から選択される。

1つの態様において、微生物は、トリコデルマ・ハルジアナム、およびバチルス・アミロリケファシエンスからさらに選択される。

有利なことに、本願の方法は、フザリウム属菌からの感染または環境ストレッサーからの悪影響に起因して抵抗力の健全性を失っている植物において、健全性を、生育を、および／または収量を増大させるためにさえ、使用され得る。さらに、本願の方法は、フザリウム属感染によって引き起こされる植物の損傷および／または植物の死に起因する植物の損失および／または作物の損失の量を減少させるために、使用され得る。いっそうさらに、本願の方法は、植物毒性無しに植物組織内でまたは植物組織上で真菌の感染を制御するために使用され得る。

1つの態様において、方法は、フザリウム属菌による感染に対して感受性である任意の植物種を処置するために、使用され得る。特定の態様において、方法は、バナナまたはプランテンなどのムサ属からの植物を処置するために、使用され得る。ある態様において、処置を受ける植物は、健全である、すなわち、病気の悪影響を受けていない。他の態様において、植物は、成立した、または存在している植物の病気によって、影響を受ける。病気は、好ましくは、真菌類による病気である。

好ましい態様において、本願の方法は、フザリウム属菌を制御するために使用され得、これはたとえば、F. アベナセウム、F. ブビゲウム、F. クルモラム、F. グラミネアラム、F. ラングセティアエ、F. オキシスポラム、F. プロリフェラタム、F. スポロトリキオイデス、F. ポアエ、F. ロゼウム（F. reseum）、F. ソラニ、F. トリシンクタム、F. バーティシリオイデス、F. ビルグリフォルメ、F. キシラリオイデス（F. xylariodides）、および植物に感染し得る任意の他のフザリウム属菌などである。

特定の好ましい態様において、本願の方法は、フザリウム・オキシスポラム、および／またはフザリウム・オキシスポラム分化型キューベンセを制御するために使用され得る。

ある態様において、方法は、フザリウム属種（Fusarium spp.）の菌の菌糸を制御するために有効である。ある態様において、方法は、フザリウム属種の菌の胞子を制御するために有効である。

本願の方法はまた、たとえば、フザリウム属によって引き起こされる、ウィルト、ブライト（blight）、ロット（rot）、およびディケイ（decay）などの、植物の異常および／もしくは病気を防止するために、ならびに／または処置するために、使用され得る。フザリウム・オキシスポラムは、「パナマ病」の原因であるとともに、さまざまな草本植物に広く影響を及ぼす、他のタイプのフザリウムウィルトの原因でもあり、該草本植物は、以下を含む：ムサ属、トマト、タバコ、マメ科植物、ウリ科植物、およびサツマイモ。

フザリウム・キシラリオイデス（Fusarium xylariodides）は、コーヒーウィルト病（Coffee wilt disease）（CWD）を引き起こすことが知られており、これは、たとえば、C. リベリカ（C. liberica）、C. カネフォラ（C. canephora）、およびC. アラビカ（C. arabica）を含め、コフィア属種（Coffea spp.）において、とりわけ、葉の脱離、枝の黒変、および根の腐敗を引き起こす。

フザリウム・グラミネアラム（Fusarium graminearum）、フザリウム・アベナセウム（Fusarium avenaceum）、フザリウム・クルモラム（Fusarium culmorum）、フザリウム・スポロトリキオイデス（Fusarium sporotrichioides）、およびフザリウム・ポアエ（Fusarium poae）はすべて、フザリウムヘッドブライト（Fusarium Head Blight）（フザリウムイヤーブライト（Fusarium Ear Blight）としても知られる）を引き起こすことが知られており、これは、コムギ、オオムギ、エンバク、ライムギ、およびライコムギなどの穀物植物（cereals）に影響を及ぼす、一般的な病気である。

フザリウム・ソラニ（Fusarium solani）は、宿主植物の根にロットを引き起こし、かつ、たとえば、ダイズ、アボカド、柑橘類、ラン、パッションフルーツ、マメ類（peas）、ペッパー、ジャガイモ、およびカボチャ（squash）を含む、多様な植物ならびに作物に感染することが知られている。フザリウム・バーティシリオイデス（Fusarium verticillioides）は、トウモロコシに感染し、シードリングディケイ（seedling decay）、ストークロット（stalk rot）、およびイヤーロット（ear rot）を引き起こすことが知られている。フザリウム・プロリフェラタム（Fusarium proliferatum）は、たとえば、ニンニク、アスパラガス、およびランにおいて、ロットを引き起こすことが知られている。フザリウム・ロゼウム（Fusarium roseum）、およびフザリウム・トリシンクタム（Fusarium tricinctum）は、ベントグラス、ブルーグラス、およびフェスクなどの芝草において、ブライトを引き起こすことが知られている。

方法は、1つもしくは複数の殺真菌性微生物の増殖を増大させるために、および／または殺真菌性の増殖時副生成物の生産を増大させるために、栄養素を適用することを含み得る。そのような栄養素は、たとえば、炭素の、窒素の、カリウムの、リンの、マグネシウムの、タンパク質の、微量栄養素の、ビタミンの、および／またはアミノ酸の、供給源を含み得る。

本明細書において使用される場合、組成物もしくは生成物を「適用する」、または環境を「処理する」とは、組成物または生成物が、標的または場所に対して効果を有し得るように、組成物または生成物を、標的または場所に接触させることを指す。効果は、たとえば、微生物の増殖に、および／または代謝物の、酵素の、バイオサーファクタントの、もしくは他の増殖時副生成物の作用に、起因し得る。

適用は、微生物ベースの生成物を、植物に、植物の一部に、および／または植物の周辺環境（たとえば土壌）に、直接的に接触させることを、さらに含み得る。微生物生成物は、種子処理剤として適用され得るか、または土壌表面に、もしくは植物の表面もしくは植物の一部の表面に（たとえば、根の、塊茎の、茎の、花の、葉の、果実の、もしくは花の表面に）、適用され得る。それは、液体として、または乾燥粉末、ダスト、顆粒、微粒、ペレット、水和性粉末、フロアブル粉末、乳剤、マイクロカプセル、油、ゲル、ペースト、もしくはエアロゾルとして、噴霧され得る。

その効果を改善する、または安定させるために、組成物は、適切なアジュバントと混和され得、そしてその後、そのまま使用され得、または必要であれば希釈後に、使用され得る。好ましい態様において、組成物は、乾燥粉末として製剤化され、これは、水および他の成分と混合されて液体の生成物を形成し得る。1つの態様において、組成物は、乾燥した生成物の保管および輸送の間に最適な浸透圧であることを確実にするため、浸透圧調節物質に加えてグルコースを含み得る。1つの態様において、浸透圧調節物質は、グリセリンであり得る。

ある態様において、殺真菌性組成物は、植物の一部と接触する。特定の態様において、組成物は、植物の、1つまたは複数の根と接触する。組成物は、たとえば、根へと噴霧する、もしくは注ぐことによって、根に対して直接的に適用され得、および／または、たとえば、植物の根が生育している土壌（すなわち根圏）へと組成物を投与することによって、間接的に適用され得る。組成物は、植え付けの前に、もしくは植え付けの際に、植物の種子に適用され得、または植物の他の任意の一部に、および／もしくはその周辺環境に、適用され得る。

1つの態様において、組成物は、たとえばシリンジを用いて、植物の中に注入される。植物の、内部の直接的な処理が望ましい場合、組成物は、たとえば、植物の根、幹、茎および／または維管束系の中に、注入され得る。

大スケールの場面において方法が使用される1つの態様において、方法は、灌水システム、これは、水、肥料、または他の液体組成物を、作物、果樹園、または圃場に供給するために使用されるものであるが、この灌水システムに連結されたタンクの中に殺真菌性組成物を投与することを含み得る。したがって、植物、および／または植物周辺の土壌は、たとえば、土壌への注入、土壌の浸漬を介して、またはセンターピボット灌水システムを用いて、または種子をまく溝（seed furrow）に向けた噴霧で、または散水装置もしくは点滴灌水装置で、殺真菌性組成物によって処理され得る。有利なことに、方法は、数百エーカーのプランテーション、作物、果樹園、または圃場を一度に処理するために適している。

家庭の庭または温室など、より小さいスケールの場面において方法が使用される1つの態様において、方法は、水、ならびに任意で他の防除剤および栄養素の供給源がそこに入っている、手持ち式の芝生および庭用の噴霧器のタンクの中に、殺真菌性組成物を注ぐ段階、ならびに植物および／またはその周辺環境に、該混合物を噴霧する段階を含み得る。

植物および／またはそれらの環境は、植物を栽培するプロセスの間の任意の時点で、処理され得る。たとえば、殺真菌性組成物は、土壌へと、種子がそこへまかれる前に、それと同時に、またはその後に、適用され得る。それはまた、植物の発達および生育の間、これは、植物が開花する時、結実する時、ならびに葉の脱離の間および／または葉の脱離の後を含むが、その後の任意の時点においても、適用され得る。

ある態様において、本明細書において提供される殺真菌性組成物は、機械的に混入させること無しに、土壌の表面に適用される。土壌への適用の有益な効果は、降雨、散水装置、洪水、または点滴灌水によって活性化され得、そして続いて、たとえば、植物の根に送達されて、根のマイクロバイオームに影響を与える、または、微生物生成物が適用される作物または植物の維管束系の中への微生物生成物の取り込みを促進する。例示的な態様において、本明細書において提供される殺真菌性組成物は、センターピボット灌水システムを介して、または種子をまく溝に向けた噴霧で、効率よく適用され得る。

1つの態様において、方法は、有益な分子の、根細胞の外層を通過する浸透力を増大させるために、使用され得る。

ある態様において、たとえば、土壌中にフザリウム属菌が増殖しすぎて殺真菌性組成物によって完全に制御しきれない場合、および／またはフザリウム属菌が植物内部へその維管束系を通じて上がって増殖している場合、方法は、殺真菌性組成物をバイオサーファクタント組成物とともに適用することをさらに含み得る。

バイオサーファクタントは、微生物によって産生される、界面活性を有する物質の、多岐にわたる構造のグループである。バイオサーファクタントは、両親媒性物質である。それらは、2つの部分からなる：極性（親水性）モエティ、および非極性（疎水性）基。それらの両親媒性の構造のため、バイオサーファクタントは、疎水性の、水に不溶性の物質の表面積を増加させ、そしてそのような物質の、水でのバイオアベイラビリティを増加させる。加えて、バイオサーファクタントは、界面に蓄積し、したがって界面張力を減少させ、そして溶液において、凝集したミセル構造の形成をもたらす。バイオサーファクタントの、生体膜に孔を形成する、および生体膜を不安定化させる能力は、たとえば、抗細菌剤および抗真菌剤としての、それらの使用を可能にする。

さらに、バイオサーファクタントは、さまざまな表面への望ましくない微生物の付着を阻害し得、バイオフィルムの形成を防止し得、かつ強力な乳化性および解乳化性を有し得る。いっそうさらに、バイオサーファクタントはまた、土壌において、湿潤性を改善するために、ならびに肥料の、栄養分の、および水の、均等な溶解ならびに／または分布を達成するために、使用され得る。

有利なことに、バイオサーファクタントは、生物分解性であり、かつ、更新可能な基材において、選択される生物を用いて、本発明によって効率よく生産され得る。バイオサーファクタント産生生物のほとんどは、増殖培地中の炭化水素源（たとえば、油、糖、グリセロール等）の存在に応答して、バイオサーファクタントを産生する。鉄の濃度など、培地の他の成分もまた、バイオサーファクタントの産生に、有意に影響を及ぼし得る。

微生物バイオサーファクタントは、細菌、真菌類、および酵母などの、さまざまな微生物によって産生される。例示的なバイオサーファクタント産生微生物は、スターメレラ属種（Starmerella spp.）（たとえばS. ボンビコーラ）、シュードモナス属種（Pseudomonas spp.）（たとえば、P. アエルギノーサ、P. プチダ（P. putida）、P. フルオレセンス（P. florescens）、P. フラギ（P. fragi）、P. シリンガエ（P. syringae））；フラボバクテリウム属種（Flavobacterium spp.）；バチルス属種（Bacillus spp.）（たとえば、B. サブティリス、B. アミロリケファシエンス、B. プミルス（B. pumillus）、B. セレウス（B. cereus）、B. リケニフォルミス）；ウィッカーハモマイセス属種（Wickerhamomyces spp.）（たとえばW. アノマルス）、カンジダ属種（Candida spp.）（たとえば、C. アルビカンス（C. albicans）、C. ルゴサ（C. rugosa）、C. トロピカリス（C. tropicalis）、C. リポリティカ（C. lipolytica）、C. トルロプシス（C. torulopsis））；サッカロマイセス属（たとえばS. セレビシエ）；シュードザイマ属種（Pseudozyma spp.）（たとえばP. アフィディス）；ロドコッカス属種（Rhodococcus spp.）（たとえばR. エリスロポリス（R. erythropolis））；アルスロバクター属種（Arthrobacter spp.）；カンピロバクター属種（Campylobacter spp.）；コリネバクテリウム属種（Cornybacterium spp.）；とともに、他のものを含む。

本発明によるバイオサーファクタントは、たとえば、低分子量の糖脂質、セロビオース脂質、リポペプチド、フラボ脂質、リン脂質、ならびに高分子量の重合体、これはリポタンパク質、リポ多糖 - タンパク質複合体、および／または多糖 - タンパク質 - 脂肪酸複合体などであるが、これらを含む。

脂肪酸の炭化水素鎖は、バイオサーファクタント分子で広く見られる親油性モエティとして作用し、一方で親水性の部分は、中性脂質のエステル基もしくはアルコール基によって、脂肪酸もしくはアミノ酸（もしくはペプチド）のカルボキシレート基によって、フラボ脂質の場合には有機酸によって、または、糖脂質の場合には炭水化物によって、形成される。

1つの態様において、本願の組成物によるバイオサーファクタントは、たとえば、ラムノ脂質（RLP）、ソホロ脂質（SLP）、トレハロース脂質、またはマンノシルエリスリトール脂質（MEL）などの、糖脂質および／または糖脂質様バイオサーファクタントを含む。1つの態様において、バイオサーファクタントは、たとえば、サーファクチン、イツリン、フェンギシン、アルスロファクチン（athrofactin）、ビスコシン、および／またはリケニシンなどの、リポペプチドおよび／またはリポペプチド様バイオサーファクタントを含む。ある態様において、バイオサーファクタントは、カルジオリピン、またはセロビオース脂質である。

ある態様において、バイオサーファクタント組成物は、複数のタイプのバイオサーファクタントを含む。いくつかの態様において、バイオサーファクタント組成物の総濃度は、約0.001～約5.0%、または約0.005%～約1.0%、または約0.01%～約0.1%、または約0.05%である。

1つの態様において、バイオサーファクタント組成物は、1つまたは複数の糖脂質バイオサーファクタントを含む。好ましい態様において、バイオサーファクタント組成物は、0.001%～10%の、0.01%～5%の、0.05%～2%の、および／または0.1%～1%の濃度で、ソホロ脂質（SLP）を含む。1つの態様において、バイオサーファクタントは、精製された形である。

有利なことに、バイオサーファクタントは、殺真菌性組成物の抗真菌能力を拡充し得る。さらに、たとえば、バイオサーファクタント分子の両親媒性のため、それらは、植物の維管束系を上がって進むことができ、植物の地上部分に感染している真菌に到達する。バイオサーファクタント組成物は、単一の処理として、または決まった時間間隔の、複数回の連続処理として、連続的に適用され得る。

1つの態様において、方法は、殺真菌性組成物が適用された後のいずれかの時点において、バイオサーファクタント処理組成物を、植物および／またはその周辺環境に適用することを含む。いくつかの態様において、バイオサーファクタント組成物中で使用されるバイオサーファクタントのタイプによっては、バイオサーファクタントは、殺真菌性組成物の微生物を死滅させる可能性がある；しかしながら、バイオサーファクタントを土壌に適用することによって、バイオサーファクタントは、殺真菌性組成物がすでに成し遂げた殺真菌活性を、拡充し得る。さらに、バイオサーファクタント組成物は、感染された植物の維管束系の中に入ることができ、植物を上がって進み、たとえば、木部、師部、幹、枝、茎、および茎葉に存在する真菌を制御する。

1つの態様において、バイオサーファクタント処理剤は、それが、殺真菌性組成物の酵母に接触しないような様式において、適用される。たとえば、1つの態様において、バイオサーファクタント組成物は、植物の根以外の一部に対して直接的に適用される。バイオサーファクタント組成物は、植物の内部に、たとえば植物の維管束系（木部および師部）の中に、直接的に適用され得る。この態様による直接的な適用は、バイオサーファクタント処理剤を、たとえば植物の幹、枝、茎、および／または茎葉の中に、たとえばシリンジを用いて注入することを、含み得る。樹木ならびに大きい植物の、幹および／または茎に関しては、シリンジを挿入するために、幹または茎に小さい穴をあける必要性が生じ得る。

有利なことに、方法のこの態様は、殺真菌性の土壌処理組成物中に存在する微生物の生存を可能にする、これは、バイオサーファクタント処理剤は、それらの微生物が存在する土壌には適用されないためである。さらに、植物の循環系の中に処理剤を直接注入することは、組成物が植物全体に速やかに拡散し、その一方で必要とされる組成物の量を最小限にすることを、可能にする。

いくつかの態様において、バイオサーファクタント処理組成物は、殺真菌性組成物を土壌に適用すること無しに、植物および／またはその環境に適用される。いくつかの態様において、殺真菌性組成物は、バイオサーファクタント処理剤の適用無しに、土壌に適用される。

真菌の感染を処置および／または防止することに加えて、本発明は、たとえば、ムサ属の作物とともに、フザリウム属菌の病気に対して感受性である、および／またはフザリウム属菌の病気によって悪影響を受ける、任意の他の植物または作物植物の、健全性を、生育を、および収量を増大させるために、使用され得る。

ある態様において、本発明による方法および組成物は、フザリウム属によって引き起こされる、植物への損傷を、未処理の環境において生育する植物と比較して、約5%、約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、もしくは約90%、またはより多く減少させる。

ある態様において、本発明による方法および組成物は、作物の収量において、未処理の作物と比較して、約5%の、約10%の、約20%の、約30%の、約40%の、約50%の、約60%の、約70%の、約80%の、もしくは約90%の、またはより多い増加をもたらす。

1つの態様において、本発明の方法は、植物内のもしくは植物上のフザリウム属の量、または植物の周辺環境におけるフザリウム属の量において、未処理の環境において生育する植物と比較して、約5%の、約10%の、約20%の、約30%の、約40%の、約50%の、約60%の、約70%の、約80%の、もしくは約90%の、またはより多い減少をもたらす。

1つの態様において、本発明の方法は、植物のおよび／または植物の果実の量において、未処理の環境において生育する植物と比較して、約5%の、約10%の、約20%の、約30%の、約40%の、約50%の、約60%の、約70%の、約80%の、もしくは約90%の、またはより多い増加をもたらす。

本発明はまた、「ニッチ除去」剤として使用され得る。1つの態様において、殺真菌性組成物、および／またはバイオサーファクタント組成物は、植物が生育する土壌中に存在する微生物の、既存のバランスを崩壊させるために、使用され得る。

ある態様において、植物が生育する土壌のマイクロバイオームは、たとえばフザリウム属種の菌などの、有害な微生物を含む。土壌のマイクロバイオームの全体を除去することによって、または土壌のマイクロバイオームの総数を減少させることによって、本願の方法は、根圏への、1つまたは複数の有益な微生物の再定着を提供し、これは、ある態様において、定着もしくは再定着しようとする可能性のある、任意の有害な種を、撃退および／または駆逐し得る。

したがって、いくつかの態様において、方法は、本発明の組成物を用いて土壌のマイクロバイオームを除去する段階、それに続いて、有益な微生物の増殖を促進するための強化剤を適用する段階、および／または根圏に、1つもしくは複数の有益な微生物を直接的に接種する段階を含む。

1つの態様において、有益な微生物は、たとえば、ピキア・アノマラ、ピキア・オキシデンタリス、トリコデルマ・ハルジアナム、バチルス・アミロリケファシエンス、アゾトバクター・ビネランジイ（Azotobacter vinelandii）、フラテウリア・アウランティア（Frateuria aurantia）、および／または土壌のマイクロバイオームに対して有益であることが知られている他のものである。

本発明はまた、任意のタイプの土壌、たとえば、粘土質の、砂質の、シルト質の、泥炭質の、チョーク質の、ローム質の土壌、および／またはそれらの組み合わせにおける、さまざまな性質を改善するためにも使用され得る。さらに、方法および組成物は、乾燥した土壌の、水はけの悪い土壌の、多孔質の土壌の、やせた土壌の、圧縮された土壌の、および／またはそれらの組み合わせの性質を改善するために、使用され得る。

1つの態様において、方法は、水はけの悪い土壌における排水および／または水の分布を改善するために、使用され得る。1つの態様において、方法は、乾燥した土壌における水の保持力を改善するために、使用され得る。1つの態様において、方法は、多孔質の土壌および／またはやせた土壌における栄養分の保持力を改善するために、使用され得る。

1つの態様において、方法は、病原真菌それ自体を制御する。1つの態様において、方法は、植物の抵抗力の健全性を増大させ、感染を撃退する能力を増加させることによって、作用する。

さらに別の態様において、方法は、病原真菌の媒介者または保因者の役割を果たし得る任意の有害生物を制御し、該有害生物は、たとえば、植物に着地し、かつ病原体と接触する、ハエ、アブラムシ、アリ、甲虫、コナジラミ等といった虫である。したがって、本願の方法は、これらの保因者となる有害生物を制御することによって、すなわち死滅させることによって、植物病原真菌の拡大を防止し得る。

方法は、単独で、または、植物の抵抗性の、健全性の、生育の、および／もしくは収量の、効率のよい増大のための他の化合物の適用、ならびに植物病原性の有害生物に対しての効率のよい処置および防止のための他の化合物の適用との組み合わせとしてのいずれかで、使用され得る。たとえば、市販のならびに／または天然の、肥料、抗生物質、防除剤、除草剤、および／もしくは土壌改良剤が、本発明の組成物とともに適用され得る。1つの態様において、方法は、脂肪酸組成物を、本願の組成物とともに適用することを含み、該脂肪酸組成物は、たとえば、置換されていないかまたは置換されている、飽和脂肪酸もしくは不飽和脂肪酸、および／またはそれらの塩もしくはそれらの誘導体を含む。

ある態様において、微生物ベースの生成物は、たとえば薬物化合物の植物中または有害生物中への浸透力を増大させることによって、他の化合物の有効性を増大させるために、使用され得る。微生物ベースの生成物はまた、他の処理、たとえば抗真菌処理を拡充するために、使用され得る。

標的植物
本発明は、植物において病気を引き起こす真菌感染の防止および／または処置において、有用であり得る。好ましい態様において、真菌感染は、フザリウム属菌によって引き起こされる。

本明細書において使用される場合、「植物」との語は、木本植物、観賞用植物または装飾用植物、作物または穀物植物（cereal）、果実植物または野菜植物、花または樹木、大型藻類または微細藻類、植物性プランクトンおよび光合成藻類（たとえば緑藻類、クラミドモナス・レインハーディ（Chlamydomonas reinhardtii））の、任意の種を含むが、それらに限定されるものではない。「植物」とはまた、単細胞植物（たとえば微細藻類）を含み、かつ、主として群体へと分化している複数の植物細胞（たとえばボルボックス）、または植物の発達の任意の段階において存在する、構造もしくは組織を含む。そのような構造／組織は、果実、種子、シュート、茎、葉、根、花弁等を含むが、それらに限定されるものではない。植物は、たとえば庭において、単独で存在し得、またはたとえば、果樹園、作物、もしくは牧草地の一部として、多くの植物のうちの1つであり得る。

本発明の生成物および方法の適用から恩恵を受け得る植物のタイプは、以下を含むが、それらに限定されるものではない：条播作物（row crop）（たとえば、トウモロコシ、ダイズ、ソルガム、ラッカセイ、ジャガイモ等）、圃場作物（field crop）（たとえば、アルファルファ、コムギ、穀物植物（grains）等）、樹木作物（たとえば、クルミ、アーモンド、ペカン、ヘーゼルナッツ、ピスタチオ等）、柑橘類作物（たとえば、オレンジ、レモン、グレープフルーツ等）、果実作物（たとえば、リンゴ、ナシ、イチゴ、ブルーベリー、ブラックベリー等）、芝作物（たとえばソッド）、観賞用作物（たとえば、花、つる性植物等）、野菜（たとえばトマト、ニンジン等）、ブドウ作物（たとえばブドウ等）、林業（たとえば、マツ、トウヒ、ユーカリプタス、ポプラ等）、管理された牧草地（放牧動物を維持するために使用される植物の、任意の混合）、および他のもの。

好ましい態様において、作物植物は、バナナ植物、および／またはムサ属に由来する植物である。本明細書において使用される場合、「バナナ」との語は、概して、一般にバナナと称されるタイプの果実をつける、ムサ属に属する植物を指す。

本発明の使用に適するバナナのタイプは、ベビー（baby）、マンザノ（manzano）、ブーロ（burro）、プランテン、レッド（red）、アップル バナナ（apple banana）、キャベンディッシュ、レディ フィンガー（lady finger）、ピサン（pisang）、ウィリアムス（williams）、および調理用を含むが、それらに限定されるものではない。本発明による、ムサ属植物の追加の例は、M. アクミナータ（M. acuminata）（AA、AAA、およびAAAA群）；ムサ x パラディシアカ（Musa x paradisiaca）（AAAB、AAB、AABB、AB、ABB、およびABBB群）；ムサ・バルビシアーナ（Musa balbisiana）（BBおよびBBB群）；シンガン（Chingan）、ラカタン（Lacatan）、レディ フィンガー、シュガー（Sugar）、ピサン ジャリ ブアヤ（Pisang jari buaya）、セニョリータ（Senorita）、シンウォボギ（Sinwobogi）、キャベンディッシュ、ドワーフ キャベンディッシュ（Dwarf Cavendish）、グランド ナイン（Grand Nain）、レッド ダッカ（Red Dacca）、ドワーフ レッド（Dwarf Red）、グロス ミッチェル（Gros Michel）、イースト アフリカン ハイランズ（East African Highlands）、ボドレス アルタフォート（Bodles Altafort）、ゴールデン ビューティー（Golden Beauty）、アタン（Atan）、ゴールドフィンガー イホレナ（Goldfinger Iholena）、マクエノ（Maqueno）、ポポウル（Popoulu）、マイソール（Mysore）、ピサン ラジャ（Pisang Raja）、ポム（Pome）、プラタ アナ（Prata-ana）、ラツンダン（Latundan）（シルク（silk）、アップル バナナ）、ピサン サリブ（Pisang Seribu）、プル（Plu）、カラマゴル（Kalamagol）、ピサン・アワク（Pisang Awak）、ネイ プーバン（Ney Poovan）、ブルー ジャワ（Blue Java）、ブルゴエ（Bluggoe）、シルバー ブルゴエ（Silver Bluggoe）、ペリピタ（Pelipita）、サバ（Saba）、カルバダ（Carbada）、ベネデッタ（Benedetta）、ティパロット（Tiparot）、ならびにクルアイ レプ チャング クト（Kluai Lep Chang Kut）バナナを含み；ならびに、たとえば、フレンチ プランテン（French plantain）、グリーン フレンチ バナナ（Green French banana）、ホーン プランテン（Horn plantain）、ネンドラン バナナ（Nendran banana）、ピンク フレンチ バナナ（Pink French banana）、およびタイガー バナナ（Tiger banana）を含むプランテンを含むが、それらに限定されるものではない。

特定の好ましい態様において、植物は、キャベンディッシュバナナ（ムサ・アクミナータ（Musa acuminata）、AAA群）である。

本発明がそれに対して有用である植物の、他の例は、穀物植物（cereals）およびイネ科植物（たとえば、コムギ、オオムギ、ライムギ、エンバク、イネ、トウモロコシ（maize）、ソルガム、トウモロコシ（corn）、芝）、ビート（たとえば、テンサイまたは飼料ビート）；果実（たとえば、ブドウ、イチゴ、ラズベリー、ブラックベリー、仁果、核果、ソフトフルーツ（soft fruit）、リンゴ、ナシ、プラム、モモ、アーモンド、チェリー、またはベリー）；マメ科作物（たとえば、マメ類（beans）、レンズマメ、マメ類（peas）、またはダイズ）；油料作物（たとえば、オイルシードレイプ（oilseed rape）、マスタード、ポピー、オリーブ、ヒマワリ、ココナッツ、トウゴマ、カカオ、またはラッカセイ）；ウリ科植物（たとえば、カボチャ（pumpkin）、キュウリ、カボチャ（squash）、またはメロン）；繊維植物（たとえば、ワタ、フラックス、ヘンプ、またはジュート）；柑橘類の果実（たとえば、オレンジ、レモン、グレープフルーツ、またはタンンジェリン）；野菜（たとえば、ホウレンソウ、レタス、アスパラガス、キャベツ、ニンジン、タマネギ、トマト、ジャガイモ、またはピーマン）；ラウラセアエ科（Lauraceae）（たとえば、アボカド、シナモマム属（Cinnamonium）、またはクスノキ（camphor））；ならびにまた、タバコ、ナッツ、ハーブ、スパイス、薬用植物、コーヒー、ナス、サトウキビ、チャ、ペッパー、ブドウ類、ホップ、ラテックス植物、切花、および観賞用植物を含むが、それらに限定されるものではない。

本発明の生成物および方法から恩恵を受け得るさらなる植物は、ビリディプランタエ上科（superfamily Viridiplantae）に属するすべての植物、特に単子葉植物および双子葉植物を含み、これらは、飼料もしくはマメ科飼草（forage legumes）、観賞用植物、食用作物、樹木、または灌木であって、とりわけ、以下から選択されるものを含む：アセル属種（Acer spp.）、アクティニディア属種（Actinidia spp.）、アベルモスクス属種（Abelmoschus spp.）、アガベ・シサラナ（Agave sisalana）、アグロパイロン属種（Agropyron spp.）、アグロスティス・ストロニフェラ（Agrostis stolonifera）、アリウム属種（Allium spp.）、アマランサス属種（Amaranthus spp.）、アンモフィラ・アレナリア（Ammophila arenaria）、アナナス・コモスス（Ananas comosus）、アンノナ属種（Annona spp.）、アピウム・グラベオレンス（Apium graveolens）、アラキス属種（Arachis spp）、アルトカルプス属種（Artocarpus spp.）、アスパラガス・オフィシナリス（Asparagus officinalis）、アベナ属種（Avena spp.）（たとえば、A. サティバ（A. sativa）、A. ファツア（A. fatua）、A. ビザンティナ（A. byzantina）、A. ファツア変種サティバ（A. fatua var. sativa）、A. ハイブリダ（A. hybrida））、アベロア・カランボラ（Averrhoa carambola）、バンブサ属種（Bambusa sp.）、ベニンカサ・ヒスピダ（Benincasa hispida）、ベルソレティア・エクセルサ（Bertholletia excelsea）、ベータ・ブルガリス（Beta vulgaris）、ブラシカ属種（Brassica spp.）（たとえば、B. ナパス（B. napus）、B. ラパ亜種（B. rapa ssp.）［キャノーラ（canola）、オイルシードレイプ、ターニップレイプ（turnip rape）］）、カダバ・ファリノサ（Cadaba farinosa）、カメリア・シネンシス（Camellia sinensis）、カンナ・インディカ（Canna indica）、カンナビス・サティバ（Cannabis sativa）、カプシカム属種（Capsicum spp.）、カレックス・エラータ（Carex elata）、カリカ・パパヤ（Carica papaya）、カリッサ・マクロカルパ（Carissa macrocarpa）、カリア属種（Carya spp.）、カルサムス・ティンクトリウス（Carthamus tinctorius）、カスタネア属種（Castanea spp.）、セイバ・ペンタンドラ（Ceiba pentandra）、シコリウム・エンディビア（Cichorium endivia）、シナモマム属種（Cinnamomum spp.）、シトルラス・ラナタス（Citrullus lanatus）、シトラス属種（Citrus spp.）、ココス属種（Cocos spp.）、コフィア属種、コロカシア・エスクレンタ（Colocasia esculenta）、コーラ属種（Cola spp.）、コルコラス属種（Corchorus sp.）、コリアンドラム・サティバム（Coriandrum sativum）、コリラス属種（Corylus spp.）、クラタエガス属種（Crataegus spp.）、クロクス・サティブス（Crocus sativus）、ククルビタ属種（Cucurbita spp.）、ククミス属種（Cucumis spp.）、サイナラ属種（Cynara spp.）、ダウカス・カロタ（Daucus carota）、デスモディウム属種（Desmodium spp.）、ディモカルパス・ロンガン（Dimocarpus longan）、ディオスコレア属種（Dioscorea spp.）、ディオスパイロス属種（Diospyros spp.）、エキノクロア属種（Echinochloa spp.）、エラエイス属（Elaeis）（たとえば、E. グイネエンシス（E. guineensis）、E. オレイフェラ（E. oleifera））、エレウシン・コラカナ（Eleusine coracana）、エラグロスティス・テフ（Eragrostis tef）、エリアンサス属種（Erianthus sp.）、エリオボトリア・ジャポニカ（Eriobotrya japonica）、ユーカリプタス属種（Eucalyptus sp.）、エウゲニア・ウニフロラ（Eugenia uniflora）、ファゴパイラム属種（Fagopyrum spp.）、ファガス属種（Fagus spp.）、フェスツカ・アルンディナセア（Festuca arundinacea）、フィカス・カリカ（Ficus carica）、フォルツネラ属種（Fortunella spp.）、フラガリア属種（Fragaria spp.）、ギンコ・ビロバ（Ginkgo biloba）、グリシン属種（Glycine spp.）（たとえば、G. マックス（G. max）、ソジャ・ヒスピダ（Soja hispida）、またはソジャ・マックス（Soja max））、ゴシピウム・ヒルスタム（Gossypium hirsutum）、ヘリアンサス属種（Helianthus spp.）（たとえばH. アンヌス（H. annuus））、ヘメロカリス・フルバ（Hemerocallis fulva）、ハイビスカス属種（Hibiscus spp.）、ホルデウム属種（Hordeum spp.）（たとえばH. ブルガレ（H. vulgare））、イポメア・バタタス（Ipomoea batatas）、ジュグランス属種（Juglans spp.）、ラクツカ・サティバ（Lactuca sativa）、ラシラス属種（Lathyrus spp.）、レンス・クリナリス（Lens culinaris）、リナム・ウシタティシマム（Linum usitatissimum）、ライチ・キネンシス（Litchi chinensis）、ロータス属種（Lotus spp.）、ルファ・アクタンガラ（Luffa acutangula）、ルピナス属種（Lupinus spp.）、ルズラ・シルバティカ（Luzula sylvatica）、リコペルシコン属種（Lycopersicon spp.）（たとえば、L. エスクレンタム（L. esculentum）、L. リコペルシカム（L. lycopersicum）、L. パイリフォルメ（L. pyriforme））、マクロタイロマ属種（Macrotyloma spp.）、マラス属種（Malus spp.）、マルピギア・エマルギナタ（Malpighia emarginata）、マンメア・アメリカーナ（Mammea americana）、マンギフェラ・インディカ（Mangifera indica）、マニホット属種（Manihot spp.）、マニルカラ・ザポタ（Manilkara zapota）、メディカゴ・サティバ（Medicago sativa）、メリロタス属種（Melilotus spp.）、メンサ属種（Mentha spp.）、ミスカンサス・シネンシス（Miscanthus sinensis）、モモルディカ属種（Momordica spp.）、モラス・ニグラ（Morus nigra）、ムサ属種（Musa spp.）、ニコチアナ属種（Nicotiana spp.）、オレア属種（Olea spp.）、オプンティア属種（Opuntia spp.）、オルニソパス属種（Ornithopus spp.）、オリザ属種（Oryza spp.）（たとえば、O. サティバ（O. sativa）、O. ラティフォリア（O. latifolia））、パニカム・ミリアセウム（Panicum miliaceum）、パニカム・ビルガタム（Panicum virgatum）、パシフロラ・エデュリス（Passiflora edulis）、パスティナカ・サティバ（Pastinaca sativa）、ペニセタム属種（Pennisetum sp.）、ペルセア属種（Persea spp.）、ペトロセリウム・クリスパム（Petroselinum crispum）、ファラリス・アルンディナセア（Phalaris arundinacea）、ファセオラス属種（Phaseolus spp.）、フレウム・プラテンセ（Phleum pratense）、フォエニクス属種（Phoenix spp.）、フラグマイテス・オーストラリス（Phragmites australis）、ファイサリス属種（Physalis spp.）、パイナス属種（Pinus spp.）、ピスタシア・ベラ（Pistacia vera）、ピサム属種（Pisum spp.）、ポア属種（Poa spp.）、ポプラス属種（Populus spp.）、プロソピス属種（Prosopis spp.）、プラナス属種（Prunus spp.）、プシディウム属種（Psidium spp.）、プニカ・グラナタム（Punica granatum）、パイラス・コムニス（Pyrus communis）、クエルカス属種（Quercus spp.）、ラファナス・サティブス（Raphanus sativus）、レウム・ラババラム（Rheum rhabarbarum）、リベス属種（Ribes spp.）、リシヌス・コムニス（Ricinus communis）、ルバス属種（Rubus spp.）、サッカラム属種（Saccharum spp.）、サリックス属種（Salix sp.）、サンバカス属種（Sambucus spp.）、セカレ・セレアレ（Secale cereale）、セサマム属種（Sesamum spp.）、シナピス属種（Sinapis sp.）、ソラナム属種（Solanum spp.）（たとえば、S. ツベロサム（S. tuberosum）、S. インテグリフォリウム（S. integrifolium）、またはS. リコペルシカム（S. lycopersicum））、ソルガム・バイカラー（Sorghum bicolor）、スピナシア属種（Spinacia spp.）、シジギウム属種（Syzygium spp.）、タゲテス属種（Tagetes spp.）、タマリンダス・インディカ（Tamarindus indica）、テオブロマ・カカオ（Theobroma cacao）、トリフォリウム属種（Trifolium spp.）、トリプサカム・ダクチロイデス（Tripsacum dactyloides）、トリティコセカレ・リンパウイ（Triticosecale rimpaui）、トリティカム属種（Triticum spp.）（たとえば、T. アエスティバム（T. aestivum）、T. デュラム（T. durum）、T. ツルギダム（T. turgidum）、T. ハイベルナム（T. hybernum）、T. マチャ（T. macha）、T. サティバム（T. sativum）、T. モノコカム（T. monococcum）、またはT. ブルガレ（T. vulgare））、トロパエオラム・マイナス（Tropaeolum minus）、トロパエオラム・マジュス（Tropaeolum majus）、バクシニウム属種（Vaccinium spp.）、ビシア属種（Vicia spp.）、ビグナ属種（Vigna spp.）、ビオラ・オドラタ（Viola odorata）、ビティス属種（Vitis spp.）、ゼア・マイス（Zea mays）、ジザニア・パルストリス（Zizania palustris）、ジジフス属種（Ziziphus spp.）。

対象となる植物のさらなる例は、トウモロコシ（ゼア・マイス）、ブラシカ属種（Brassica sp.）（たとえば、B. ナパス、B. ラパ、B. ジュンセア（B. juncea））、特に、種子油の供給源として有用な、それらブラシカ属種（Brassica species）、アルファルファ（メディカゴ・サティバ）、イネ（オリザ・サティバ（Oryza sativa））、ライムギ（セカレ・セレアレ）、ソルガム（ソルガム・バイカラー、ソルガム・ブルガレ（Sorghum vulgare））、ミレット（たとえばパール ミレット（pearl millet）（ペニセタム・グラウカム（Pennisetum glaucum））、プロソ ミレット（proso millet）（パニカム・ミリアセウム）、フォックステイル ミレット（foxtail millet）（セタリア・イタリカ（Setaria italica））、フィンガー ミレット（finger millet）（エレウシン・コラカナ））、ヒマワリ（ヘリアンサス・アンヌス（Helianthus annuus））、ベニバナ（カルサムス・ティンクトリウス）、コムギ（トリティカム・アエスティバム（Triticum aestivum））、ダイズ（グリシン・マックス（Glycine max））、タバコ（ニコチアナ・タバカム（Nicotiana tabacum））、ジャガイモ（ソラナム・ツベロサム（Solanum tuberosum））、ラッカセイ（アラキス・ハイポガエア（Arachis hypogaea））、ワタ（ゴシピウム・バルバデンセ（Gossypium barbadense）、ゴシピウム・ヒルスタム）、サツマイモ（イポメア・バタタス（Ipomoea batatus））、キャッサバ（マニホット・エスクレンタ（Manihot esculenta））、コーヒー（コフィア属種）、ココナッツ（ココス・ヌシフェラ（Cocos nucifera））、パイナップル（アナナス・コモスス）、柑橘類樹木（シトラス属種）、カカオ（テオブロマ・カカオ）、チャ（カメリア・シネンシス）、アボカド（ペルセア・アメリカーナ（Persea americana））、イチジク（フィカス・カリカ（Ficus casica））、グアバ（プシディウム・グアジャバ（Psidium guajava））、マンゴー（マンギフェラ・インディカ）、オリーブ（オレア・エウロパエア（Olea europaea））、パパイヤ（カリカ・パパヤ）、カシュー（アナカルディウム・オキシデンタレ（Anacardium occidentale））、マカダミア（マカダミア・インテグリフォリア（Macadamia integrifolia））、アーモンド（プラナス・アミグダラス（Prunus amygdalus））、テンサイ（ベータ・ブルガリス）、サトウキビ（サッカラム属種）、エンバク、オオムギ、野菜、観賞用植物、および針葉樹を含むが、それらに限定されるものではない。

野菜は、トマト（リコペルシコン・エスクレンタム（Lycopersicon esculentum））、レタス（たとえばラクツカ・サティバ）、インゲンマメ（ファセオラス・ブルガリス（Phaseolus vulgaris））、ライマメ（ファセオラス・リメンシス（Phaseolus limensis））、マメ類（peas）（ラシラス属種）、ならびにククミス属（genus Cucumis）のメンバーを含み、ククミス属のメンバーは、キュウリ（C. サティブス（C. sativus））、カンタロープ（C. カンタルペンシス（C. cantalupensis））、およびマスクメロン（C. メロ（C. melo））などである。観賞用植物は、アザレア（ロードデンドロン属種（Rhododendron spp.））、アジサイ（マクロフィリア・ハイドランゲア（Macrophylla hydrangea））、ハイビスカス（ヒビスカス・ロサ-シネンシス（Hibiscus rosasanensis））、バラ（ロサ属種（Rosa spp.））、チューリップ（チュリパ属種（Tulipa spp.））、スイセン（ナルシサス属種（Narcissus spp.））、ペチュニア（ペチュニア・ハイブリダ（Petunia hybrida））、カーネーション（ダイアンサス・カリオフィラス（Dianthus caryophyllus））、ポインセチア（ユーフォルビア・プルケリマ（Euphorbia pulcherrima））、およびクリサンセマムを含む。態様を実践する際に使用され得る針葉樹は、たとえば、ロブロリー パイン（loblolly pine）（パイナス・タエダ（Pinus taeda））、スラッシュ パイン（slash pine）（パイナス・エリオッティ（Pinus elliotii））、ポンデローサ パイン（ponderosa pine）（パイナス・ポンデローサ（Pinus ponderosa））、ロッジポール パイン（lodgepole pine）（パイナス・コントルタ（Pinus contorta））、およびモントレー パイン（Monterey pine）（パイナス・ラジアータ（Pinus radiata））などのマツ類；ダグラス ファー（Douglas-fir）（シュードツガ・メンジエシイ（Pseudotsuga menziesii））；ウエスタン ヘムロック（Western hemlock）（ツガ・カナデンシス（Tsuga canadensis））；シトカ スプルース（Sitka spruce）（ピセア・グラウカ（Picea glauca））；レッドウッド（redwood）（セコイア・センペルビレンス（Sequoia sempervirens））；シルバー ファー（silver fir）（アビエス・アマビリス（Abies amabilis））およびバルサム ファー（balsam fir）（アビエス・バルサメア（Abies balsamea））などのトゥルーファー類（true firs）；ならびにウエスタン レッド シダー（Western red cedar）（ツジャ・プリカタ（Thuja plicata））およびアラスカ イエロー シダー（Alaska yellow-cedar）（カマエキパリス・ノトカテンシス（Chamaecyparis nootkatensis））などのシダー類を含む。本態様の植物は、トウモロコシおよびダイズ植物など、作物植物（たとえば、トウモロコシ、アルファルファ、ヒマワリ、アブラナ類、ダイズ、ワタ、ベニバナ、ラッカセイ、ソルガム、コムギ、ミレット、タバコ等）を含む。

芝草は、以下を含むが、それらに限定されるものではない：アニュアル ブルーグラス（annual bluegrass）（ポア・アニュア（Poa annua））；アニュアルライグラス（annual ryegrass）（ロリウム・マルチフロラム（Lolium multiflorum））；カナダ ブルーグラス（Canada bluegrass）（ポア・コンプレッサ（Poa compressa））；チューイング フェスク（Chewings fescue）（フェスツカ・ルブラ（Festuca rubra））；コロニアル ベントグラス（colonial bentgrass）（アグロスティス・テニュイス（Agrostis tenuis））；クリーピング ベントグラス（creeping bentgrass）（アグロスティス・パラストリス（Agrostis palustris））；クレステッド ウィートグラス（crested wheatgrass）（アグロパイロン・デザートラム（Agropyron desertorum））；フェアウェイ ウィートグラス（fairway wheatgrass）（アグロパイロン・クリスタタム（Agropyron cristatum））；ハード フェスク（hard fescue）（（フェスツカ・ロンギフォリア）（Festuca longifolia））；ケンタッキー ブルーグラス（Kentucky bluegrass）（ポア・プラテンシス（Poa pratensis））；オーチャード グラス（orchardgrass）（ダクティリス・グロメラタ（Dactylis glomerate））；ペレニアル ライグラス（perennial ryegrass）（ロリウム・ペレネ（Lolium perenne））；レッド フェスク（red fescue）（フェスツカ・ルブラ（Festuca rubra））；レッド トップ（redtop）（アグロスティス・アルバ（Agrostis alba））；ラフ ブルーグラス（rough bluegrass）（ポア・トリビアリス（Poa trivialis））；シープ フェスク（sheep fescue）（フェスツカ・オビナ（Festuca ovine））；スムース ブロムグラス（smooth bromegrass）（ブロムス・イネルミス（Bromus inermis））；トール フェスク（tall fescue）（フェスツカ・アルンディナセア）；チモシー（timothy）（フレウム・プラテンセ（Phleum pretense））；ベルベット ベントグラス（velvet bentgrass）（アグロスティス・カニナ（Agrostis canine））；ウィーピング アルカリグラス（weeping alkaligrass）（プシネリア・ディスタンス（Puccinellia distans））；ウエスタン ウィートグラス（western wheatgrass）（アグロパイロン・スミスイ（Agropyron smithii））；バミューダ グラス（Bermuda grass）（サイノドン属種（Cynodon spp.））；セントオーガスチン グラス（St. Augustine grass）（ステノタフラム・セクンダタム（Stenotaphrum secundatum））；ゾイシア グラス（zoysia grass）（ゾイシア属種（Zoysia spp.））；バヒア グラス（Bahia grass）（パスパラム・ノタタム（Paspalum notatum））；カーペット グラス（carpet grass）（アクソノパス・アフィニス（Axonopus affinis））；センチピード グラス（centipede grass）（エレモクロア・オフィウロイデス（Eremochloa ophiuroides））；キクユ グラス（kikuyu grass）（ペニセタム・クランデスティナム（Pennisetum clandesinum））；シーショア パスパラム（seashore paspalum）（パスパラム・バギナタム（Paspalum vaginatum））；ブルー グラマ（blue gramma）（ボウテロウア・グラシリス（Bouteloua gracilis））；バッファロー グラス（buffalo grass）（ブクロエ・ダクチロイデス（Buchloe dactyloids））；サイドオーツ グラマ（sideoats gramma）（ボウテロウア・カルティペンデュラ（Bouteloua curtipendula））。

対象となる追加の植物は、対象となる種子を提供する穀物植物（grain plants）、油糧種子植物、およびマメ科植物を含む。対象となる種子は、トウモロコシ、コムギ、オオムギ、イネ、ソルガム、ライムギ、ミレット等といった、穀物植物（grain）の種子を含む。油糧種子植物は、ワタ、ダイズ、ベニバナ、ヒマワリ、アブラナ類、トウモロコシ、アルファルファ、パーム、ココナッツ、フラックス、トウゴマ、オリーブ等を含む。マメ科植物は、マメ類（beans）およびマメ類（peas）を含む。マメ類（beans）は、グアー、ローカストビーン、フェヌグリーク、ダイズ、ガーデンビーン（garden bean）、カウピー、リョクトウ、ライマメ、ソラマメ、レンズマメ、ヒヨコマメ等を含む。カンナビス属（Cannabis）（たとえばサティバ（sativa）、インディカ（indica）、およびルデラリス（ruderalis））、ならびに産業用ヘンプもまた、想定される。

植物全体、および植物の一部が、本発明によって処理され得る。この文脈において、植物は、望ましい、および望ましくない、野生植物または作物植物（天然の作物植物を含む）などの、すべての植物および植物集団を意味するものとして、理解される。作物植物は、従来の育種および最適化の方法によって、またはバイオテクノロジーおよび組み換えの方法によって、またはこれらの方法の組み合わせによって、得られ得る植物であり得、これは、トランスジェニック植物、および植物品種を含む。

植物の一部は、空中の一部および地中の一部をすべて意味するものとして、ならびにシュート、葉、花、および根などの植物の器官をすべて意味するものとして、理解され、その例には、葉、針、茎（stalk）、茎（stem）、花、子実体、果実、および種子が、そして根、塊茎、および根茎がまた、挙げられ得る。植物の一部はまた、作物材料、ならびに栄養繁殖材料および有性繁殖材料、たとえば挿し穂（cutting）、塊茎、根茎、挿し穂（slip）、および種子を含む。さらに、植物の一部は、休眠状態、および／または非休眠状態であり得、ここで非休眠状態の組織は、生育している栄養繁殖体および果実を含む。有利なことに、本発明の組成物は、植物毒性無しに、非休眠状態の組織に適用され得る。

1つの態様において、本発明は、農産物（たとえば、茎葉、果実、および野菜の、収穫前ならびに収穫後の両方）におけるフザリウム属感染の制御のために、特に有用である。感染は、たとえば、生育の間に、収穫の間に、保管の間に、梱包の間に、および輸送の間に、農産物において成立した状態となり得る。

農産物の収穫後の損傷を制御する例の1つは、収穫されたトウモロコシのフザリウム属感染（たとえば、F. バーティシリオイデスによって引き起こされる、フザリウムイヤーロット（Fusarium Ear Rot））に関連する。フザリウムイヤーロットは、虫による傷を通じて、または他の、ヒトもしくは環境による損傷を通じて、トウモロコシの雌穂に侵入し得、個々の穀粒を、および時には、消費される雌穂全体を、茶色にしてしまう。さらに、フザリウム属のいくつかの種によって産生されるマイコトキシンは、数種の哺乳類に対して毒性であり得、トウモロコシを食用不適にする。

農産物、たとえばトウモロコシを、本発明による組成物を用いて処理することによって、感染を制御することができ、輸送および加工の間の、他の植物および／または農産物への感染のさらなる拡大を防止することができる。成立した感染の根絶が農産物において達成されるこれらの場合において、それに続く感染からの農産物のさらなる保護が、追加の殺真菌性化合物を、または他の保護用化合物、たとえば、ワックスもしくは仕上げ剤を、同時にまたは続いて農産物に適用することによって、達成され得る。

微生物ベースの生成物の、現地での生産
本発明のある態様において、微生物の増殖設備は、関心対象の、新鮮な、高密度の微生物、および／または微生物の増殖時副生成物を、所望のスケールで生産する。微生物の増殖設備は、適用の場所に、またはその近くに設置され得る。設備は、高密度の微生物ベースの組成物を、バッチ培養、準連続的な培養、または連続的な培養において生産する。

本発明の微生物の増殖設備は、微生物ベースの生成物が使用される場所（たとえばバナナ農園）に設置され得る。たとえば、微生物の増殖設備は、使用の場所から300マイル未満、250マイル未満、200マイル未満、150マイル未満、100マイル未満、75マイル未満、50マイル未満、25マイル未満、15マイル未満、10マイル未満、5マイル未満、3マイル未満、または1マイル未満であり得る。

微生物ベースの生成物は、従来の微生物の生産における、微生物の安定化、保存、保管、および輸送のプロセスを用いること無しに、現地で生産され得るので、より高密度の微生物が生産され得、それにより、現場での適用において使用するために、より少量の微生物ベースの生成物しか必要としない、またはこれは、所望の効力を達成することが必要な場所での、より高密度の微生物の適用を可能にする。これは、バイオリアクターのスケールダウン（たとえばより小さい発酵容器や、より少量の、出発材料、栄養素、およびpH制御剤の供給）を可能にし、該スケールダウンは、システムを効率的にして、そして細胞を安定させる必要性、またはそれらの培養培地から細胞を分離する必要性を、排除し得る。微生物ベースの生成物の、現地での生産はまた、生成物中に増殖培地を含有させることを容易にする。培地は、現地での使用に特に適切な、発酵中に産生された作用物質を含み得る。

現地で生産された、微生物の高密度で活発な培養物は、しばらくの間サプライチェーンに留め置かれていたものよりも、圃場において有効である。本発明の微生物ベースの生成物は、細胞が、発酵増殖培地中に存在する代謝物および栄養素から分離されている従来の生成物と比較して、特に有益である。輸送時間の減少は、微生物および／またはそれらの代謝物の新鮮なバッチを、現地の需要が必要とする時に、かつ現地の需要が必要とする量を、生産することおよび送達することを、可能にする。

本発明の微生物の増殖設備は、微生物それら自体を、微生物代謝物を、および／または微生物がその中で増殖する培地の他の成分を含む、新鮮な、微生物ベースの組成物を生産する。望ましい場合、組成物は、高密度の、生長能力のある細胞もしくは繁殖体、または生長能力のある細胞および繁殖体の混合物を、有し得る。

1つの態様において、微生物の増殖設備は、微生物ベースの生成物が使用される場所（たとえばバナナ農園）に設置されるか、またはその近く、たとえば、300マイル以内、200マイル以内、もしくは100マイル以内にさえ、設置される。別の態様において、微生物の増殖設備は、適用の場所と場所との間の輸送を、それらが遠隔の、往来が困難な地域（たとえば多雨林）にあってさえも容易にするために、持ち運び可能である。

有利なことに、これは、組成物を、特定の場所での使用のために適合させることを可能にする。微生物ベースの組成物の調合および作用強度は、適用時の、現地での特定の条件に応じて変更され得、該条件は、たとえば、どのような土壌タイプが、どのような植物が、および／またはどのような作物が、処理されるのか；組成物が適用される時の、季節、気候、および／または時季は、何であるか；ならびに適用のどのような形式および／または割合が利用されるのか、などである。

有利なことに、分散型の、微生物の増殖設備は、遠方の産業的規模の製造者、該製造者の生成物の品質は、たとえば、生存力のある、細胞数の多い生成物、ならびに該細胞がもともとそこで増殖する、関連する培地および代謝物の、適時の送達および適用を阻害する、上流での加工の遅れ、サプライチェーンのボトルネック、不適切な保管、および他の不測の事態のために悪影響を受けるが、このような製造者に依存することの現行の問題点への解決法を提供する。

さらに、組成物を現地で生産することによって、調合および作用強度は、特定の場所および適用時に存在する条件に合わせて、リアルタイムで調整され得る。これは、中心的な地域であらかじめ作られ、かつ、たとえば、所与の場所にとって最適ではない可能性のある、固定された比、および調合を有する組成物に勝る利点を、提供する。

微生物の増殖設備は、その能力によって、製造の汎用性を提供するものであり、該能力は、到達先の地理との相乗効果を改善するために、微生物ベースの生成物を条件どおりに作ることができるというものである。有利なことに、好ましい態様において、本発明のシステムは、現地の天然の微生物、およびそれらの代謝副生成物の力を活用する。

個々の容器についての培養時間は、たとえば、1～7日であってよく、またはより長くてもよい。培養生成物は、いくつかの異なる様式のうちの任意の様式で、採取され得る。

発酵の、たとえば24時間以内の、現地での産生および送達は、純粋で、高い細胞密度の組成物をもたらし、そして輸送コストを実質的に低下させる。より有効かつ強力な微生物接種原の開発における、急速な進展の見込みを考慮すると、需要家は、微生物ベースの生成物を速やかに送達するこの能力から、大いに恩恵を受ける。

本発明の、およびその多くの利点のより深い理解は、例証として提供される、以下の実施例から得られ得る。以下の実施例は、本発明のいくつかの方法、適用、態様、および変形の、例証である。それらは、本発明を限定するものとしてみなされるべきではない。多数の変更および改変が、本発明に関してなされ得る。

実施例1 - ピキア属種（Pichia spp.）の固相発酵
バイオマスの産生のために、コメをベースとする培地が使用される。およそ200グラムのコメが、600 mlのGUY培地（グルコース、尿素、および酵母抽出物、pH 5.71）または250 mlの濃縮GY培地（グルコースおよび酵母抽出物、pH 5.69）ならびに水と混合される。培地は、ステンレススチールの皿に、約1～2インチの厚さの層として広げられ、そして滅菌される。

滅菌に続いて、皿に種菌が接種される。任意で、追加の栄養素が、微生物の増殖を増大させるために含められ得、該栄養素は、たとえば、塩、ならびに／またはモラセス、デンプン、グルコース、およびスクロースなどの炭素供給源を含む。

種菌はその後、基材の表面へと、噴霧されるか、またはピペットで移され、そしてトレイは、25～35℃の間で、密閉されたリアクターにおいてインキュベートされる。外気が、温度を安定させるために、リアクターへと送られる。2～5日間のインキュベーションで、1グラムにつき1 x 10⁸～1 x 10¹²細胞のピキア属が産生され得る。

酵母、ならびにその任意の増殖時副生成物（たとえば、酵素、溶媒、および／またはバイオサーファクタント）は、洗い落とされ、そして液体の形で、任意でさらなる精製をともなって、利用されるか、または酵母および基材は、ホモジナイズされ、そして、任意で乾燥されるかの、いずれかであり得る。

実施例2 - ピキア属種の液内発酵
発酵の温度およびpHは厳密ではないが、一般的に温度は、約25℃と約37℃未満との間、好ましくは約25～約30℃の間とすべきである。pHレベルは、約3.0～約5.0の間、好ましくは約3.5～約4.5の間の範囲とすべきである。発酵中のpHの安定化は必須ではないが、それが3.0を下回る場合には、pHを3.5～4.0に上げることが推奨される。

必要であれば、発酵中のpHの制御または維持は、手動の技術を用いて、または当技術分野において一般的である、塩基を追加するための自動pH制御装置などを用いる自動技術を用いて、達成され得る。pHの制御のために使用される好ましい塩基は、NaOHおよびKOHを含むが、それらに限定されるものではない。

NYDB（水1リットルにつき、ニュートリエントブロス10 g、酵母抽出物8 g、デキストロース20 g）、PDB（ジャガイモデキストロースブロス）、ME（麦芽抽出物）などの複合培地、およびグルコース、スクロース、ソルビトール、モラセス等といったさまざまな炭素源が補充された、化学的に定義された培地の両方が、発酵によってピキア属を産生するために、使用され得る。

しかしながら、必要であれば、以下に列挙する3つの主要な成分のみを用いることによって、培地のコストをさらに減少させ得る。

典型的な増殖時間は、48時間～72時間であり、かつCFU濃度は、6億～10億細胞／mlである。

そのままの培養物は、多くの適用にとっての最終生成物である。しかしながら、必要であれば、酵母細胞は、遠心分離、濾過、または沈殿によって、採取され得る。結果として得られる酵母ペースト（湿潤バイオマス）は、保管中の有効期間を延長するために、塩、グリセロール、ラクトース、トレハロース、スクロース、アミノ酸を添加することによって、保存され得る。

実施例3 - フザリウム・オキシスポラムの増殖阻害の試行
いくつかの処理が、ATCCから得られたフザリウム・オキシスポラムの増殖を阻害する能力について試験された。処理は、ピキア・アノマラ、ピキア・アノマラ変異体株（UV光のもとで30分、そしてさらに選択）、1% SLP処理、およびピキア・オキシデンタリスを含んでいた。

最初に、F. オキシスポラムは、寒天プレート上で増殖させ、そして1滴の処理剤を用いて処理されて、阻害のゾーンが観察された。図1～2は、それぞれ、SLP、およびP. アノマラについての阻害のゾーンを示す。

次に、試験生物は、フラスコ内の2日齢のF. オキシスポラムの液体培養物に添加された。フラスコ#1は、フザリウム属のみが入った対照フラスコであった。図3。フラスコ#2は、P. アノマラの接種原を1つ含んでいた、そして変化は、次の7日間にわたり記録された。フラスコ#3においては、P. アノマラが、3日間、毎日添加され（10%接種原）、そして結果は記録された。フラスコ#4においては、10% SLPが、原理証明のために添加された。フラスコ#5においては、1% SLPが添加され、そして結果は3日後に観察された。

フラスコ#6においては、P. オキシデンタリスが、3日間、毎日添加され（10%接種原）、そして結果は記録された。フラスコ#7においては、変異体P. アノマラが、3日間、毎日添加され（10%接種原）、そして結果は記録された。

顕微鏡スライドは、接種後毎日、培養物から調製された。フラスコ内での処理の3日後、試料はまた、寒天プレート上にプレーティングされ、フザリウム属の増殖が観察された。

結果
トリコデルマ属、P. アノマラ、SLP、変異体P. アノマラ、およびP. オキシデンタリスを含む、すべての処理は、F. オキシスポラムに対して阻害効果を有していた。トリコデルマ属は、F. オキシスポラムと、資源に関して競合し、そしてしたがって、その将来的な増殖を減速させたが、F. オキシスポラムそれ自体に対しては、直接的な効果は有していなかった。

SLPでの処理
10% SLPを用いて処理された培養物の色はほぼ白になり、そしてF. オキシスポラムの菌糸は、SLPによって破壊された。1% SLPを用いた3回の処理は、菌糸の破壊を引き起こした、図4A～4B、しかし、胞子に対する強力な効果は有さなかった。それは、P. アノマラよりもわずかに優れて作用した。

P. アノマラでの処理
P. アノマラは、F. オキシスポラム菌糸の細胞壁を破壊する物質を分泌するように見受けられた。それは、菌糸に対して強い阻害効果を有していた。図5～7。変異体P. アノマラは、類似の効果を示したが、いくぶん、より急速かつより強力であった。図8A～8B。

P. オキシデンタリスでの処理
P. オキシデンタリスは、フザリウム属に対して、菌糸および胞子の両方において、最も強い死滅効果を示した、それは、顕微鏡下、かつ寒天プレート上で、調べられた。それは、2つの異なるタイプの阻害分子を分泌しているように見受けられた：その1つは、フザリウム属の細胞壁を破壊し、そしてもう1つは、胞子からの、新しい菌糸の形成および発達を阻害した（図9～12）。

Claims (6)

1. ピキア属種（Pichia sp.）の酵母および／またはその増殖時副生成物を含む殺真菌性組成物を植物が生育する土壌に適用する段階を含む、ムサ属種（Musa sp.）またはコフィア属種（Coffea sp.）植物においてフザリウム属種（Fusarium spp.）感染を制御および／または防止する方法であって、
   該ピキア属種の酵母が、ピキア・オキシデンタリスおよびピキア・アノマラより選択され、
   ピキア・オキシデンタリスとピキア・アノマラとの組み合わせが適用される、該方法。
2. 前記殺真菌性組成物が、灌水システムを用いて前記土壌に適用される、請求項1に記載の方法。
3. 前記植物が、フザリウムウィルト（Fusarium wilt）またはパナマ病によって影響を受ける、請求項1に記載の方法。
4. 前記植物が、F. アベナセウム（F. avenaceum）、F. ブビゲウム（F. bubigeum）、F. クルモラム（F. culmorum）、F. グラミネアラム（F. graminearum）、F. ラングセティアエ（F. langsethiae）、F. オキシスポラム（F. oxysporum）、F. プロリフェラタム（F. proliferatum）、F. スポロトリキオイデス（F. sporotrichioides）、F. ポアエ（F. poae）、F. ロゼウム（F. reseum）、F. ソラニ（F. solani）、F. トリシンクタム（F. tricinctum）、F. バーティシリオイデス（F. verticillioides）、F. ビルグリフォルメ（F. virguliforme）、およびF. キシラリオイデス（F. xylariodides）のうちの1つまたは複数に感染する、請求項1に記載の方法。
5. ソホロ脂質（SLP)を含むバイオサーファクタント組成物を、シリンジを用いて前記植物の維管束系の中に注入する段階をさらに含む、請求項1に記載の方法。
6. 前記殺真菌性組成物および/またはソホロ脂質を含むバイオサーファクタント組成物を、前記植物から収穫された農産物に適用する段階をさらに含む、請求項1に記載の方法。

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