JP7399465B2 - アルツハイマー病の危険性と関連するａｐｏｅプロモーターの一塩基多型およびその使用 - Google Patents
アルツハイマー病の危険性と関連するａｐｏｅプロモーターの一塩基多型およびその使用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7399465B2 JP7399465B2 JP2019536313A JP2019536313A JP7399465B2 JP 7399465 B2 JP7399465 B2 JP 7399465B2 JP 2019536313 A JP2019536313 A JP 2019536313A JP 2019536313 A JP2019536313 A JP 2019536313A JP 7399465 B2 JP7399465 B2 JP 7399465B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- apoe
- alzheimer
- disease
- brain
- genetic variation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 101150037123 APOE gene Proteins 0.000 title claims description 136
- 102100029470 Apolipoprotein E Human genes 0.000 title claims description 125
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 title claims description 112
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 title description 14
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 title description 14
- 102220006148 rs405509 Human genes 0.000 claims description 61
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 claims description 50
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 48
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 claims description 40
- 230000007614 genetic variation Effects 0.000 claims description 31
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 30
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims description 29
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 23
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 claims description 21
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 claims description 21
- 230000000971 hippocampal effect Effects 0.000 claims description 20
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 19
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 19
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 19
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 19
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 claims description 12
- 208000024806 Brain atrophy Diseases 0.000 claims description 10
- 210000001769 parahippocampal gyrus Anatomy 0.000 claims description 10
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 8
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 8
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 claims description 7
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 claims description 7
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 4
- 230000003557 neuropsychological effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000007082 Aβ accumulation Effects 0.000 claims description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 3
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 claims description 3
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 claims description 3
- 230000029087 digestion Effects 0.000 claims description 3
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 claims description 3
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 claims description 3
- 239000013643 reference control Substances 0.000 claims description 3
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 claims description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 claims description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 2
- 101150066038 E4 gene Proteins 0.000 claims 1
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 claims 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 claims 1
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 23
- 208000010877 cognitive disease Diseases 0.000 description 23
- 208000027061 mild cognitive impairment Diseases 0.000 description 20
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 18
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 14
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 13
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 11
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 11
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 9
- 238000011161 development Methods 0.000 description 9
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 9
- 238000002600 positron emission tomography Methods 0.000 description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 8
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 8
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 8
- 238000002610 neuroimaging Methods 0.000 description 8
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 8
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 7
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 7
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 description 7
- 102000054766 genetic haplotypes Human genes 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- ZQAQXZBSGZUUNL-BJUDXGSMSA-N 2-[4-(methylamino)phenyl]-1,3-benzothiazol-6-ol Chemical compound C1=CC(N[11CH3])=CC=C1C1=NC2=CC=C(O)C=C2S1 ZQAQXZBSGZUUNL-BJUDXGSMSA-N 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 5
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 5
- 238000013399 early diagnosis Methods 0.000 description 5
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 5
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 5
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 5
- 102000013455 Amyloid beta-Peptides Human genes 0.000 description 4
- 108010090849 Amyloid beta-Peptides Proteins 0.000 description 4
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 4
- 210000001353 entorhinal cortex Anatomy 0.000 description 4
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 4
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 4
- 230000001936 parietal effect Effects 0.000 description 4
- 238000003571 reporter gene assay Methods 0.000 description 4
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 4
- 210000004885 white matter Anatomy 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 3
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 3
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 3
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 3
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 3
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 210000004884 grey matter Anatomy 0.000 description 3
- 210000001320 hippocampus Anatomy 0.000 description 3
- 238000007477 logistic regression Methods 0.000 description 3
- 238000010855 neuropsychological testing Methods 0.000 description 3
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 208000037259 Amyloid Plaque Diseases 0.000 description 2
- 101100297347 Caenorhabditis elegans pgl-3 gene Proteins 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 2
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000006931 brain damage Effects 0.000 description 2
- 231100000874 brain damage Toxicity 0.000 description 2
- 208000029028 brain injury Diseases 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 230000003930 cognitive ability Effects 0.000 description 2
- 230000006999 cognitive decline Effects 0.000 description 2
- 230000003920 cognitive function Effects 0.000 description 2
- 230000003931 cognitive performance Effects 0.000 description 2
- 238000012631 diagnostic technique Methods 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- NCWZOASIUQVOFA-FWZJPQCDSA-N florbetaben ((18)F) Chemical compound C1=CC(NC)=CC=C1\C=C\C1=CC=C(OCCOCCOCC[18F])C=C1 NCWZOASIUQVOFA-FWZJPQCDSA-N 0.000 description 2
- 238000009499 grossing Methods 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 2
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 102200017290 rs429358 Human genes 0.000 description 2
- 102200017284 rs7412 Human genes 0.000 description 2
- 102000013498 tau Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010026424 tau Proteins Proteins 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- KDELTXNPUXUBMU-UHFFFAOYSA-N 2-[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl-(carboxymethyl)amino]acetic acid boric acid Chemical compound OB(O)O.OB(O)O.OB(O)O.OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KDELTXNPUXUBMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 208000022099 Alzheimer disease 2 Diseases 0.000 description 1
- 208000000340 Alzheimer disease type 1 Diseases 0.000 description 1
- 208000000044 Amnesia Diseases 0.000 description 1
- 101710137189 Amyloid-beta A4 protein Proteins 0.000 description 1
- 101710151993 Amyloid-beta precursor protein Proteins 0.000 description 1
- 102100022704 Amyloid-beta precursor protein Human genes 0.000 description 1
- 238000012935 Averaging Methods 0.000 description 1
- 208000014644 Brain disease Diseases 0.000 description 1
- 208000028698 Cognitive impairment Diseases 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 206010011878 Deafness Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000007530 Essential hypertension Diseases 0.000 description 1
- 108090000331 Firefly luciferases Proteins 0.000 description 1
- 108091092584 GDNA Proteins 0.000 description 1
- 206010071602 Genetic polymorphism Diseases 0.000 description 1
- 206010019196 Head injury Diseases 0.000 description 1
- 125000002059 L-arginyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])N([H])C(=N[H])N([H])[H] 0.000 description 1
- 125000000415 L-cysteinyl group Chemical group O=C([*])[C@@](N([H])[H])([H])C([H])([H])S[H] 0.000 description 1
- 208000026139 Memory disease Diseases 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 1
- 238000012879 PET imaging Methods 0.000 description 1
- ZYFVNVRFVHJEIU-UHFFFAOYSA-N PicoGreen Chemical compound CN(C)CCCN(CCCN(C)C)C1=CC(=CC2=[N+](C3=CC=CC=C3S2)C)C2=CC=CC=C2N1C1=CC=CC=C1 ZYFVNVRFVHJEIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 102100022033 Presenilin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010036933 Presenilin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100022036 Presenilin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010036908 Presenilin-2 Proteins 0.000 description 1
- 208000028017 Psychotic disease Diseases 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 241000220317 Rosa Species 0.000 description 1
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 210000003484 anatomy Anatomy 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 210000003198 cerebellar cortex Anatomy 0.000 description 1
- 238000000546 chi-square test Methods 0.000 description 1
- 208000030251 communication disease Diseases 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000007591 cortical connectivity Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000025688 early-onset autosomal dominant Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 1
- 238000005290 field theory Methods 0.000 description 1
- 210000005153 frontal cortex Anatomy 0.000 description 1
- 210000004326 gyrus cinguli Anatomy 0.000 description 1
- 230000010370 hearing loss Effects 0.000 description 1
- 231100000888 hearing loss Toxicity 0.000 description 1
- 208000016354 hearing loss disease Diseases 0.000 description 1
- 230000005965 immune activity Effects 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000003670 luciferase enzyme activity assay Methods 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 230000005415 magnetization Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000006984 memory degeneration Effects 0.000 description 1
- 230000006386 memory function Effects 0.000 description 1
- 206010027175 memory impairment Diseases 0.000 description 1
- 208000023060 memory loss Diseases 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 1
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 1
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 1
- 230000002981 neuropathic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- JTJMJGYZQZDUJJ-UHFFFAOYSA-N phencyclidine Chemical compound C1CCCCN1C1(C=2C=CC=CC=2)CCCCC1 JTJMJGYZQZDUJJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 210000002442 prefrontal cortex Anatomy 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 description 1
- 238000012502 risk assessment Methods 0.000 description 1
- 230000011218 segmentation Effects 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 210000003625 skull Anatomy 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000000528 statistical test Methods 0.000 description 1
- 208000023516 stroke disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002739 subcortical effect Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6813—Hybridisation assays
- C12Q1/6827—Hybridisation assays for detection of mutation or polymorphism
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61B—DIAGNOSIS; SURGERY; IDENTIFICATION
- A61B5/00—Measuring for diagnostic purposes; Identification of persons
- A61B5/0033—Features or image-related aspects of imaging apparatus classified in A61B5/00, e.g. for MRI, optical tomography or impedance tomography apparatus; arrangements of imaging apparatus in a room
- A61B5/004—Features or image-related aspects of imaging apparatus classified in A61B5/00, e.g. for MRI, optical tomography or impedance tomography apparatus; arrangements of imaging apparatus in a room adapted for image acquisition of a particular organ or body part
- A61B5/0042—Features or image-related aspects of imaging apparatus classified in A61B5/00, e.g. for MRI, optical tomography or impedance tomography apparatus; arrangements of imaging apparatus in a room adapted for image acquisition of a particular organ or body part for the brain
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
- G01N33/6896—Neurological disorders, e.g. Alzheimer's disease
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/28—Neurological disorders
- G01N2800/2814—Dementia; Cognitive disorders
- G01N2800/2821—Alzheimer
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Radiology & Medical Imaging (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Surgery (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明は、アルツハイマー病を早期診断するための、およびアルツハイマー病の危険性を予測するための、一塩基多型に関する。さらに本発明は、一塩基多型を使用して、アルツハイマー病を早期診断するための、およびアルツハイマー病の危険性を予測するための方法に関する。本発明は、アルツハイマー型認知症に特異的な脳損傷を調べＭＲＩに基づく脳地図を作成するという課題を実施することによって得られた結果に基づき、これは、韓国のＭｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ， ＩＣＴ ａｎｄ Ｆｕｔｕｒｅ ＰｌａｎｎｉｎｇのＢｒａｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｓｏｕｒｃｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔプロジェクトの支援を受けている。
アルツハイマー病は、認知低下および脳の老人斑を特徴とする進行性神経変性疾患である。アルツハイマー病は高齢者の認知症の最も一般的な原因であり、認知症の６０％～８０％を占める（ＢａｒｎｅｓおよびＹａｆｆｅ、２０１１）。６５歳以上の高齢者の約１３％および８５歳以上の高齢者の約４５％がアルツハイマー病患者であると推定される。アルツハイマー病（ＡＤ）は、記憶喪失および他の認知障害だけでなく脳の構造変化も引き起こす複雑な神経変性疾患である（Ｂａｌｌａｒｄら、２０１１；Ｆｏｒｅｒｏら、２００６）。ＡＤ患者は、脳の後部帯状皮質（ＰＣＣ）、内側前頭前皮質および海馬におけるアミロイド斑の増大、ならびに海馬体積の低下を示す。さらに、患者は、ベータアミロイドレベルの低下ならびにＣＳＦ中のタウおよびｐ－タウのレベルの増大を示す（Ｊａｃｋ、２０１２；Ｔｒｏｊａｎｏｗｓｋｉら、２０１０）。
アルツハイマー型認知症の治療剤は開発中であるが、注目すべき治療剤は現在まで存在していない。したがって、アルツハイマー型認知症の早期診断および早期予測に関する必要性は高い。アルツハイマー型認知症の診断技術としては、神経心理学的検査、ＭＲＩ脳イメージング検査、専門家の意見による臨床診断、脳脊髄液およびフロルベタベンに基づくアミロイドＰＥＴによる病理検査などが挙げられる。臨床診断は、認知症または軽度認知機能障害の発症を診断することができるが、それらを他の脳疾患と区別することが困難である場合があり得る。臨床診断は、症状が発生した後でしか診断が可能でないことから、早期診断の目的には適切ではない。脳脊髄液検査は、定量分析、例えばベータアミロイドタンパク質およびタウタンパク質の分析を介して実施され、したがって、これは、認知症に対する信頼できる診断尺度である。しかし、侵襲的な脳脊髄液採取の理由から、対象はこの検査に非常に抵抗する。アミロイドＰＥＴによる病理検査は信頼できるが、費用がかかる。ＭＲＩ脳イメージングの場合は、認知症と関連する脳損傷、例えば、大脳皮質の萎縮および海馬の萎縮を調べるための、および早期診断のための技術が開発中であるが、診断が早い時点で行われないということが現在知られている。さらに、血液を介する認知症の診断技術の開発が活発に進行中である。しかし、実験のための集団の規模および正確性に対する制限があり、したがって、信頼性の検証が臨床的使用について必要とされる。
遺伝因子では、アミロイド前駆体タンパク質、プレセニリン－１およびプレセニリン－２が、家族歴が理由の早発性のアルツハイマー病についての主な因子である（Ｂｌｅｎｎｏｗら、２００６；ＨａｒｄｙおよびＳｅｌｋｏｅ、２００２）。ＡＰＯＥでは、ｅ４アレルが遅発性の孤発性アルツハイマー病の最も強い危険因子である（Ｂｕ、２００９；Ｃｏｒｄｅｒら、１９９３；ＨｕａｎｇおよびＭｕｃｋｅ、２０１２）。ＡＰＯＥ遺伝子は、世界的観点から見ると、それぞれ８．４％、７７．９％、および１３．７％の頻度で、３つの多型、ｅ２、ｅ３、およびｅ４を有する（Ｆａｒｒｅｒら、１９９７）。アルツハイマー病におけるｅ４の頻度は約４０％に劇的に増加する（Ｆａｒｒｅｒら、１９９７）。ＡＰＯＥは第１９染色体の長腕（１９ｑ１３．２）に位置する。ＡＰＯＥは３つのアレル、すなわち、ｅ２、ｅ３、およびｅ４を有し、これらは、アミノ酸位置１１２（Ｃｙｓ／Ａｒｇ）および１５８（Ａｒｇ／Ｃｙｓ）の変化により形成され、３つのアレルの組み合わせにより、６つの遺伝子型（Ｅ２／Ｅ２、Ｅ２／Ｅ３、Ｅ３／Ｅ３、Ｅ２／Ｅ４、Ｅ３／Ｅ４、Ｅ４／Ｅ４）多型が存在する。これらの中で、ＡＰＯＥ ｅ４は、ＡＤ患者の５０％以上で通常見出される。しかし、ＡＰＯＥ ｅ４は認知的に正常な対照の１５％未満でしか見出されない（Ｗａｒｄら、２０１２）。以前の研究によって、ＡＰＯＥ ｅ４がＡＤの発症時期を５～１５年短くし得ることが報告された（Ｃｏｒｄｅｒら、１９９３；Ｇｏｍｅｚ－Ｔｏｒｔｏｓａら、２００７）。さらに、認知低下に対するＡＰＯＥ ｅ４の影響が報告された。しかし、いくつかの研究によって、ＡＰＯＥ ｅ４は認知能力を低下させることが報告され、その一方で、他の研究によって、ＡＰＯＥ ｅ４は認知能力の低下に影響を与えないことが報告され、さらに他の研究の結果によって、ＡＰＯＥ ｅ４は認知能力をゆっくりと低下させることが示唆された（ＡｎｓｔｅｙおよびＣｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ、２０００；Ｂｅａｕｄｒｅａｕら、２０１３；Ｃａｓｅｌｌｉら、２００９；Ｃｒａｆｔら、１９９８；Ｄｅａｒｙら、２００２；Ｊｏｒｍら、２００７；Ｋｌｅｉｍａｎら、２００６；Ｍａｙｅｕｘら、２００１；Ｖａｎ Ｇｅｒｖｅｎら、２０１２）。議論を要するそのような結果にもかかわらず、ＡＰＯＥ ｅ４ホモ接合体を有する健常個体は海馬体積の低下を示し、一方で、健常な高齢者群において、ＡＰＯＥ ｅ４ヘテロ接合体を有する健常個体は、ｅ４を保有しない対象と違いを示さなかった（Ｃｒｉｖｅｌｌｏら、２０１０；Ｆａｒｌｏｗら、２００４；Ｌｅｍａｉｔｒｅら、２００５）。さらに、ＡＰＯＥ ｅ４は、健常な高齢者において、軽度認知機能障害のアルツハイマー病への転換に関与することが示された（Ｗａｎｇら、２０１１）。ｅ４アレルの危険性は、人種群の間で変動することが報告されている（Ｂｒａｉｎｅｒｄ、２０１３；Ｆａｒｒｅｒら、１９９７；Ｈｅｕｎら、２０１０；ＨｓｉｕｎｇおよびＳａｄｏｖｎｉｃｋ、２００７；Ｈｓｉｕｎｇら、２００４；Ｒｏｓｅ、２００５）。しかし、ＡＰＯＥ ｅ４に基づいて予測が行われる場合でさえも、認知症に対する遺伝的影響の程度の２０％以内でしか説明することができない。したがって、アルツハイマー病に対するｅ４媒介性の危険性および可能な誘導因子は、依然として不明なままである。その一方で、韓国特許第１０－１３３５０２１号は、アルツハイマー病または軽度認知機能障害を有する患者とＡＰＯＥ ｒｓ４０５５０９のＴ／Ｇヘテロ接合性との間の関連を記載している。
したがって、本発明者らはＡＰＯＥ Ｅ４の遺伝的変異を研究しただけでなく、認知症に対するＡＰＯＥ Ｅ４の危険性に影響を及ぼし得る、ＡＰＯＥ遺伝子周辺の遺伝的変異も研究した。さらに、ＡＰＯＥ Ｅ４／Ｅ４ホモ接合体の場合では、本発明者らは、認知症に対する危険性の人種差が存在することを確認し、その原因を解析することを目的とした。その結果、驚くべきことに本発明者らは、ＡＰＯＥプロモーターに位置する一塩基多型が、ＡＰＯＥ Ｅ４／Ｅ４ホモ接合体の認知症に対する危険性の人種差を説明するだけでなく、大脳皮質厚がアレルに応じて変動することを確認した。さらに、本発明者らは、大脳皮質厚および海馬体積を解析することによって、脳構造に対するＡＰＯＥ多型の影響を確認した。
本発明の一目的は、アルツハイマー病および／またはアルツハイマー病に起因する認知症に対する危険性を予測するための一塩基多型（ＳＮＰ）遺伝的変異を提供することである。
本発明の別の目的は、一塩基多型（ＳＮＰ）遺伝的変異を検出することによってアルツハイマー病および／またはアルツハイマー病に起因する認知症に対する危険性を予測するための方法を提供することである。
本発明は、アルツハイマー病および／またはアルツハイマーに起因する認知症に対する危険性を予測するのに使用することができる一塩基多型（ＳＮＰ）を提供する。より具体的には、ＳＮＰは、ヒトゲノム地図のＧＲＣｈ３８．ｐ７バージョンに基づくと、第１９染色体上の４４９０５５７９に位置するｒｓ４０５５０９であり、そのアレルはＴおよびＧである。このＳＮＰは、マイナーアレル頻度（ＭＡＦ）の人種差を示した。
本発明の一態様では、本発明は、対象から単離された試料、例えば、細胞、組織、血液または体液からゲノムＤＮＡを単離および精製し、ＡＰＯＥプロモーターのｒｓ４０５５０９一塩基多型およびＡＰＯＥ遺伝子型を解析および特定することによって、認知症に対する危険性を予測する。
本発明の別の態様では、ＡＰＯＥイプシロン遺伝的変異（ｒｓ４２９３５８およびｒｓ７４１２）ならびにｒｓ４０５５０９遺伝的変異を使用するアルツハイマー型認知症の予測についての情報を提供するための方法が提供される。
本発明のさらに別の態様では、対象から単離された核酸を含む試料において軽度認知機能障害またはアルツハイマー病を示す遺伝的変異を検出することによって、軽度認知機能障害またはアルツハイマー病（ＡＤ）の診断をするかまたは危険性を予測するための方法であって、（ａ）ＡＰＯＥ Ｅ４アレルをコードする遺伝子から選択される遺伝子またはそれらの遺伝子産物中の遺伝的変異の有無を検出することができる試薬と試料を接触させる工程と、（ｂ）ＡＰＯＥプロモーターのｒｓ４０５５０９ Ｔアレルをコードする遺伝子またはそれらの遺伝子産物から選択される遺伝的変異の有無を検出することができる試薬と試料を接触させる工程とを含み、ＡＰＯＥ Ｅ４／Ｅ４およびｒｓ４０５５０９ Ｔ／Ｔ遺伝的変異の存在が、対象が軽度認知機能障害もしくはアルツハイマー病を有する患者であること、または軽度認知機能障害もしくはアルツハイマー病の高い危険性を有することを示す方法が提供される。ここで、危険性を予測するための方法は、対象から単離された核酸を増幅することによって実施されてもよく、核酸はゲノムＤＮＡまたはＲＮＡであってもよい。
本発明のさらになお別の態様では、方法は、対象の大脳皮質厚について、画像、例えば、磁気共鳴（ＭＲ）脳画像を得る工程をさらに含み、大脳皮質厚の萎縮は、対象が軽度認知機能障害もしくはアルツハイマー病を有する患者であること、または軽度認知機能障害もしくはアルツハイマー病の高い危険性を有することを示し得る。
本発明のさらになお別の態様では、方法は、神経心理学的検査、脳脊髄液（ＣＳＦ）検査、およびアミロイドＰＥＴ検査からなる検査の１つ以上を実施する工程をさらに含んでもよい。
本発明の一態様では、遺伝的変異の有無を検出する方法は、対象から単離された試料から得られた一本鎖形態の核酸が相補的プライマーセットと複合体を形成するように供され、次いで、複合体において遺伝的変異の有無が解析される方法である。複合体中の遺伝的変異の有無は、ポリメラーゼ連鎖反応、ヌクレアーゼ消化、ハイブリダイゼーション、サザンブロッティング、制限酵素断片多型分析、シークエンシング、プライマー伸長法もしくは一本鎖高次構造多型分析を使用して、またはそれらの組み合わせを使用して解析されてもよい。
本発明のさらになお別の態様では、軽度認知機能障害またはアルツハイマー病を診断または予測するためのキットが提供され、キットは、ＡＰＯＥ Ｅ４アレルをコードする遺伝子から選択される遺伝子またはそれらの遺伝子産物中の遺伝的変異の有無を検出することができ、キットは、ＡＰＯＥプロモーターのｒｓ４０５５０９ Ｔアレルをコードする遺伝子またはそれらの遺伝子産物をさらに含んでもよい。したがって、本発明の一態様では、キットは、ＡＰＯＥの一塩基多型ＡＰＯＥ Ｅ４およびＡＰＯＥプロモーターの一塩基多型ｒｓ４０５５０９ Ｔ／Ｔ、Ｔ／Ｇ、およびＧＧに相補的なプライマーセット、ならびに反応酵素を含むキットであってもよい。
本発明において遺伝子産物は、遺伝子の発現によって生じる産物であり、ＲＮＡ、例えば、ｔＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ｍｉＲＮＡおよびｓｉＲＮＡ、ポリペプチドならびにタンパク質を含むと理解される。
本発明の別の態様では、キットは、遺伝的変異を解析するための解析方法、核酸を増幅するための方法、または参照対照を含むキットであってもよい。
本発明のさらに別の態様では、ＡＰＯＥ Ｅ４アレルをコードする遺伝子から選択される遺伝子またはそれらの遺伝子産物中の遺伝的変異の有無を検出することができる相補的プライマーセットが提供され、ｒｓ４０５５０９ Ｔアレルをコードする遺伝子またはそれらの遺伝子産物が一緒に提供されてもよい。したがって、本発明の一態様では、プライマーセットは、ＡＰＯＥの一塩基多型ＡＰＯＥ Ｅ４ならびにＡＰＯＥプロモーターの一塩基多型ｒｓ４０５５０９ Ｔ／Ｔ、Ｔ／Ｇ、およびＧＧに相補的なプライマーセットであってもよい。
本発明の別の態様では、プライマーセットは、標識、例えば、放射性同位体、フルオロフォアまたは化学誘導体が結合しているプライマーセットであってもよい。
本発明によれば、孤発性アルツハイマー型認知症についての予測的遺伝的変異として、ＡＰＯＥ遺伝子型、特にＡＰＯＥ Ｅ４／Ｅ４に加えて、遺伝的変異ｒｓ４０５５０９を調べることによって、アルツハイマー型認知症の危険性をより正確に診断することができる。
本発明において、本発明者らは、大規模な研究を通して、異なる人種群の間でＡＰＯＥ ｅ４媒介性ＡＤに対する感受性を解析した。その結果、ｅ４ホモ接合体は、コーカサス人およびアフリカ人系統と比較して、東アジア人においてアルツハイマー病にかかりやすかった。さらに、本発明者らは、神経病理学的にアルツハイマー病と診断された患者および対照に対する関連研究によって、そのような人種差を確認した。少数の以前の研究によって、様々な集団における異なるＡＰＯＥ ｅ４アレル分布が報告されている（Ｆａｒｒｅｒら、１９９７；Ｓｉｎｇｈら、２００６）。ｅ４アレルの頻度はアフリカ、ヨーロッパおよびアジアの順番に高く、これは、アルツハイマー病に対するｅ４の危険性の順番と逆である。
ＡＰＯＥ ｅ４プロモーターが嗅内皮質、海馬傍回皮質および楔前部の皮質厚の減少を促進することが報告されている（Ｄｏｎｉｘら、２０１０；Ｆｏｌｅｙら、２０１６；Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、２０１１）。認知的に正常な対象における別の研究によって、ｅ４を有する個体も皮質厚の減少があることが示唆された（Ｆｏｕｑｕｅｔら、２０１４）。さらに、ｅ４アレルを有する個体は、記憶機能に重要な役割を果たす海馬における重度の萎縮、および記憶障害を示した（Ａｌｅｘｏｐｏｕｌｏｓら、２０１１）。本発明では、本発明者らは、東アジア人とコーカサス人の両方において、ＡＰＯＥ ｅ３ホモ接合体と比較して、ＡＰＯＥ ｅ４ホモ接合体が、嗅内皮質、海馬傍回皮質および楔前部領域における皮質厚の激しい減少ならびに海馬の萎縮と関連することを発見し、この結果は以前の研究と矛盾がなかった（Ｄｏｎｉｘら、２０１０；Ｆｏｌｅｙら、２０１６；Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、２０１１）。驚くべきことに、ｅ４／４対象で観察されたこれらの皮質および海馬の萎縮は、コーカサス人よりも東アジア人で重度であることが確認された。本発明は、ＡＰＯＥ ｅ４／４を有する東アジア人は、コーカサス人と比較して、アルツハイマー病ならびに脳における皮質厚の減少および海馬の萎縮に対する危険性が高いことを示唆する。
本発明者らは、集団間のｅ４／４媒介性ＡＤに対する危険性の違いは、遺伝的背景、特に、ＡＰＯＥ遺伝子周辺の多型の人種差のためであると仮定した。ＡＰＯＥ ｅ４はアルツハイマー病と関連する唯一のＡＰＯＥ多型ではない。ＡＰＯＥプロモーターおよびイントロン領域内の多型が、ＡＤの発症に対するＡＰＯＥ ｅ４の影響を調節することが報告されている（Ｂｅｒｔｒａｍら、２００７；Ｌａｍｂｅｒｔら、２００２；Ｌａｍｂｅｒｔら、１９９８ｂ；Ｌｅｓｃａｉら、２０１１）。プロモーター中の２つのＳＮＰ（ｒｓ４４９６４７およびｒｓ４０５５０９）ならびにイントロン中の１つのＳＮＰ（ｒｓ４４０４４６）は、アルツハイマー病に対するＡＰＯＥイプシロン変異の影響を調節することが評価された。－４９１ＡＡおよび２１９ＴＴ遺伝子型がＡＰＯＥイプシロン遺伝子型とは無関係にＡＤの危険性を増大させることが報告されている（Ｌａｍｂｅｒｔら、２００２；Ｌａｍｂｅｒｔら、１９９８ａ；Ｌａｍｂｅｒｔら、１９９８ｂ；Ｌｉｍｏｎ－Ｓｚｔｅｎｃｅｌら、２０１６；Ｗａｎｇら、２０００）。さらに、ｒｓ４０５５０９が、認知能力への影響においてＡＰＯＥ ｅ４と相乗作用を有することが報告されている（Ｍａら、２０１６）。本発明者らは、これらのＳＮＰが、異なる人種集団において異なるアレル頻度を示すことを解析した。本発明者らは、これらのＳＮＰの中のｒｓ４０５５０９の場合、韓国人および日本人を含めた東アジア人が、コーカサス人およびアフリカ人系統と比較して、全集団とｅ４ホモ接合体保有群の両方において、高頻度のｒｓ４０５５０９－Ｔ（これはリスクアレルである）を保有することを確認した。このことは、ｅ４ホモ接合体が、他の人種群と比較して、東アジア人においてアルツハイマー病の高い危険性を有することを支持する。同様に、コーカサス人は、アフリカ人系統と比較してｒｓ４０５５０９－Ｔに対して高いアレル頻度を有すること、およびコーカサス人は、アフリカ人系統と比較して高いｅ４／４ホモ接合体オッズ比も有することが確認された。
いくつかの神経イメージング研究によって、脳萎縮に対するＡＰＯＥ ｅ４ホモ接合体の影響が報告されているが、ＡＰＯＥプロモーター多型の影響は、まだはっきりとは解明されていない。以前の研究によって、中国人集団の非認知症関連の老化過程において、ヒトの脳に対するＡＰＯＥプロモーター領域中のｒｓ４０５５０９多型の影響が報告されている。ＡＰＯＥ ｅ４とともにｒｓ４０５５０９－ＴＴを有する個体が、ｒｓ４０５５０９ Ｇ－アレルを有する個体と比較して、年齢依存的に皮質厚の萎縮を示すことが発見された（Ｃｈｅｎら、２０１５ａ）。本発明者らは、ｒｓ４０５５０９－ＴＴ遺伝子型を有する個体が、ｅ４ホモ接合体の中で、Ｇ－アレルを有する個体と比較して、アルツハイマー病と非常に関連しており、皮質厚および海馬体積の激しい萎縮を引き起こすことを発見した。特に、このパターンの皮質厚の減少は、内側側頭皮質（嗅内および海馬傍回領域）ならびに楔前部で観察され、海馬傍回領域の萎縮は以前の研究（Ｃｈｅｎら、２０１５ａ）と類似している。本発明者らは、ＡＰＯＥ ｅ４ホモ接合体およびｒｓ４０５５０９－ＴＴを有する個体で、嗅内皮質、海馬傍回皮質および楔前部領域における皮質厚の激しい減少ならびに海馬の萎縮を確認した。本発明では、本発明者らは、アルツハイマー病およびｅ４／４媒介性脳萎縮の危険性の人種差は、ｒｓ４０５５０９多型の人種多様性のためであることを確認した。
さらに、本発明者らは、ｒｓ４０５５０９－ＴＴが、ヒトの脳および血清においてＡＰＯＥの発現低下を誘導することを実証した。ｒｓ４０５５０９ ＴまたはＧアレルにおけるアレル置換を使用するレポーター遺伝子アッセイにおいて、本発明者らは、プロモーター中にｒｓ４０５５０９－Ｔアレルを有するＡＰＯＥ遺伝子はあまり発現していないことを実証し、これは、ｒｓ４０５５０９－Ｔを含有する危険性はＡＰＯＥタンパク質の減少のためであることを示唆する。
上記のように、本発明者らは、東アジア人におけるＡＰＯＥ ｅ４ホモ接合体は、コーカサス人およびアフリカ人系統よりもアルツハイマー病にかかりやすいことを確認した。人種群の間のＡＰＯＥプロモーター多型の異なるアレル頻度は、ＡＰＯＥ ｅ４を有する個体に対して、アルツハイマー病の発症を差別的に起こしやすくするであろう。ＡＰＯＥタンパク質レベルの調節とのｒｓ４０５５０９の関連性を考慮すると、ｒｓ４０５５０９－ＴＴを有するｅ４ ＡＰＯＥ個体におけるＡＰＯＥレベルの低下が、アルツハイマー病の危険性の増大を誘導することが示唆される。
以下に、本発明を例により記載する。以下の例は例示目的のみであり、本発明の範囲はそれらに限定されない。
材料および方法
（１）試料およびデータ
本発明では、完全長ゲノム情報、ＭＲＩ脳画像情報および臨床診断情報を利用した。認知症コホートにおける２，０７５人の研究対象（主にＣｈｏｓｕｎ大学病院および他の協力病院から；正常対象の平均年齢：７３．４５±５．３０（平均±ＳＤ）、アルツハイマー病患者の平均年齢：７１．６５±５．６５（平均±ＳＤ）、正常対象の女性の割合：６２．４％、アルツハイマー病患者の女性の割合：６１．５％）については、完全長ゲノムの情報は血液を使用して獲得し、脳画像情報は各研究対象のＭＲＩスキャン（３Ｔ ＭＲＩ、Ｓｋｙｒａ、Ｓｉｅｍｅｎｓ）によって獲得した。各研究対象は、認知症の診断に必要である神経心理学的検査（Ｋ－ＭＭＳＥおよびＳｅｏｕｌ Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ Ｂａｔｔｅｒｙ（ＳＮＳＢ））を受けた。その結果、正常、軽度認知機能障害または認知症の診断は、認知症クリニックの専門医によって行われた。診断結果によって、１，１４５人の対象が正常であり、９３０人の対象が認知症の患者であることが示された。さらに、韓国、光州広域市のＮａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｄｅｍｅｎｔｉａ（ＮＲＣＤ）のデータベースを使用した。本発明のすべての実験および研究のプロトコールは、Ｃｈｏｓｕｎ大学病院の役員会によって承認された。すべての志願者および患者の親族は、実験に参加する前に準備された同意書を提出した。東アジア人の対象は、２，３０９人の認知的に正常な個体および１，８８６人のＡＤ患者からなっていた。コーカサス人のゲノムは、Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｎｅｕｒｏｉｍａｇｉｎｇ Ｉｎｉｔｉａｔｉｖｅ（ＡＤＮＩ；ｈｔｔｐ：／／ａｄｎｉ．ｌｏｎｉ．ｕｓｃ．ｅｄｕ／）データベースから獲得し、コーカサス人の脳画像もＡＤＮＩデータベースから得た。コーカサス人は、５１５人の正常対象および３２０人のＡＤ患者からなっていた。
（１）試料およびデータ
本発明では、完全長ゲノム情報、ＭＲＩ脳画像情報および臨床診断情報を利用した。認知症コホートにおける２，０７５人の研究対象（主にＣｈｏｓｕｎ大学病院および他の協力病院から；正常対象の平均年齢：７３．４５±５．３０（平均±ＳＤ）、アルツハイマー病患者の平均年齢：７１．６５±５．６５（平均±ＳＤ）、正常対象の女性の割合：６２．４％、アルツハイマー病患者の女性の割合：６１．５％）については、完全長ゲノムの情報は血液を使用して獲得し、脳画像情報は各研究対象のＭＲＩスキャン（３Ｔ ＭＲＩ、Ｓｋｙｒａ、Ｓｉｅｍｅｎｓ）によって獲得した。各研究対象は、認知症の診断に必要である神経心理学的検査（Ｋ－ＭＭＳＥおよびＳｅｏｕｌ Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ Ｂａｔｔｅｒｙ（ＳＮＳＢ））を受けた。その結果、正常、軽度認知機能障害または認知症の診断は、認知症クリニックの専門医によって行われた。診断結果によって、１，１４５人の対象が正常であり、９３０人の対象が認知症の患者であることが示された。さらに、韓国、光州広域市のＮａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｄｅｍｅｎｔｉａ（ＮＲＣＤ）のデータベースを使用した。本発明のすべての実験および研究のプロトコールは、Ｃｈｏｓｕｎ大学病院の役員会によって承認された。すべての志願者および患者の親族は、実験に参加する前に準備された同意書を提出した。東アジア人の対象は、２，３０９人の認知的に正常な個体および１，８８６人のＡＤ患者からなっていた。コーカサス人のゲノムは、Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｎｅｕｒｏｉｍａｇｉｎｇ Ｉｎｉｔｉａｔｉｖｅ（ＡＤＮＩ；ｈｔｔｐ：／／ａｄｎｉ．ｌｏｎｉ．ｕｓｃ．ｅｄｕ／）データベースから獲得し、コーカサス人の脳画像もＡＤＮＩデータベースから得た。コーカサス人は、５１５人の正常対象および３２０人のＡＤ患者からなっていた。
ＡＤの臨床診断は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ ａｎｄ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ ａｎｄ Ｓｔｒｏｋｅ／Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ（ＮＩＮＣＤＳ－ＡＤＲＤＡ）のＡＤ評価基準に従って行った（ＭｃＫｈａｎｎら、１９８４ｂ）。軽度認知機能障害（ＭＣＩ）は、現在同意されている基準に従って診断した（Ｗｉｎｂｌａｄら、２００４）。認知的に正常な群は、神経学的疾患がない、認知機能の障害がない、または日常生活において問題がない群である。脳ＭＲＩ上で、局所性病変、頭部外傷歴または知能に影響を及ぼす可能性がある精神病を有する対象は、除外した。軽度の医学的異常（例えば、本態性高血圧、重度の合併症を伴わない糖尿病、または軽度の難聴）を有する対象は含めた。
ｒｓ４０５５０９の危険性（オッズ比）に使用したコーカサス人のゲノムについては、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ａｇｉｎｇ－Ｌａｔｅ Ｏｎｓｅｔ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ（ＮＩＡ－ＬＯＡＤ）、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｌｌ Ｒｅｐｏｓｉｔｏｒｙ ｆｏｒ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ（ＮＣＲＡＤ）、およびＡｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｎｅｕｒｏｉｍａｇｉｎｇ Ｉｎｉｔｉａｔｉｖｅ（ＡＤＮＩ）からのデータセットを使用した。２つのデータセットまたは３つのデータセットを組み合わせ、解析した。Ｅ４／Ｅ４遺伝子型を有する個体のＡＰＯＥプロモーターの一塩基（single nucleotide）を使用した。ＮＩＡ－ＬＯＡＤ、ＮＣＲＡＤおよびＡＤＮＩを組み合わせ、解析する場合は、Ｅ４／Ｅ４遺伝子型を有する個体は全体で３９５人であり、その中で、３３０人はアルツハイマー型認知症の患者であり、６５人は正常対象であった。
（２）脳アミロイドイメージング
１８Ｆ－フロルベタベンＰＥＴイメージングを、従来の方法（Ｏｓａｍａ Ｓａｂｒｉ、２０１５、ＣｌｉｎＴｒａｎｓ１ Ｉｍａｇｉｎｇ、Ｂａｒｔｈｅｌ、２０１１、Ｌａｎｃｅｔ＿ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ）に従って実施した。アミロイドの病状を、脳アミロイド－βプラーク量（ＢＡＰＬ）スコアによって決定した。４つの脳領域（前頭皮質、後部帯状、外側側頭皮質、および頭頂葉皮質）のフロルベタベン（１８Ｆ）ＰＥＴ画像を、設定領域皮質のトレーサー取り込み（ＲＣＴＵ）スコアリングシステム（１＝取り込みなし、２＝微量の取り込み、３＝著しい取り込み）に従って評価した。次に、前頭皮質、後部皮質、外側側頭皮質、および頭頂葉皮質に対するＲＣＴＵスコアを、各ＰＥＴスキャンについて、シングルプリセット３段階スコアリングシステムにおける脳アミロイド－βプラーク量（ＢＡＰＬ）スコア（１＝アミロイド量なし、２＝微量のアミロイド量、および３＝有意なアミロイド量）によってまとめた。ピッツバーグ化合物Ｂ（ＰｉＢ）を使用して陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）で、インビボのアミロイドイメージングを実施した。脳内の関心領域（ＲＯＩ）へのＰｉＢ沈着を、ＦｒｅｅＳｕｒｆｅｒバージョン５．１ソフトウェア（Ｍａｒｔｉｎｏｓ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｉｍａｇｉｎｇ）を使用して測定し、部分体積効果について補正した標準化された取り込み値の比（ＳＵＶＲ）を、各関心領域について計算した。前頭皮質、後部皮質、外側側頭皮質、および頭頂葉皮質領域の平均大脳皮質ＳＵＶＲを、ＦｒｅｅＳｕｒｆｅｒによって計算した。参照のための領域として小脳皮質を使用した。ＰｉＢ陽性は１．４２のＳＵＶＲと定義し、これは、ＰｉＢ陽性について以前に定義された０．１８の平均大脳皮質結合能に対応する。１８Ｆ－フロルベタピルと１１Ｃ－ＰｉＢの両方に対するコーカサス人のアミロイドＰＥＴデータは、ＡＤＮＩデータベース（ｈｔｔｐ：／／ａｄｎｉ．ｌｏｎｉ．ｕｓｃ．ｅｄｕ）から得た。
１８Ｆ－フロルベタベンＰＥＴイメージングを、従来の方法（Ｏｓａｍａ Ｓａｂｒｉ、２０１５、ＣｌｉｎＴｒａｎｓ１ Ｉｍａｇｉｎｇ、Ｂａｒｔｈｅｌ、２０１１、Ｌａｎｃｅｔ＿ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ）に従って実施した。アミロイドの病状を、脳アミロイド－βプラーク量（ＢＡＰＬ）スコアによって決定した。４つの脳領域（前頭皮質、後部帯状、外側側頭皮質、および頭頂葉皮質）のフロルベタベン（１８Ｆ）ＰＥＴ画像を、設定領域皮質のトレーサー取り込み（ＲＣＴＵ）スコアリングシステム（１＝取り込みなし、２＝微量の取り込み、３＝著しい取り込み）に従って評価した。次に、前頭皮質、後部皮質、外側側頭皮質、および頭頂葉皮質に対するＲＣＴＵスコアを、各ＰＥＴスキャンについて、シングルプリセット３段階スコアリングシステムにおける脳アミロイド－βプラーク量（ＢＡＰＬ）スコア（１＝アミロイド量なし、２＝微量のアミロイド量、および３＝有意なアミロイド量）によってまとめた。ピッツバーグ化合物Ｂ（ＰｉＢ）を使用して陽電子放出断層撮影法（ＰＥＴ）で、インビボのアミロイドイメージングを実施した。脳内の関心領域（ＲＯＩ）へのＰｉＢ沈着を、ＦｒｅｅＳｕｒｆｅｒバージョン５．１ソフトウェア（Ｍａｒｔｉｎｏｓ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｉｍａｇｉｎｇ）を使用して測定し、部分体積効果について補正した標準化された取り込み値の比（ＳＵＶＲ）を、各関心領域について計算した。前頭皮質、後部皮質、外側側頭皮質、および頭頂葉皮質領域の平均大脳皮質ＳＵＶＲを、ＦｒｅｅＳｕｒｆｅｒによって計算した。参照のための領域として小脳皮質を使用した。ＰｉＢ陽性は１．４２のＳＵＶＲと定義し、これは、ＰｉＢ陽性について以前に定義された０．１８の平均大脳皮質結合能に対応する。１８Ｆ－フロルベタピルと１１Ｃ－ＰｉＢの両方に対するコーカサス人のアミロイドＰＥＴデータは、ＡＤＮＩデータベース（ｈｔｔｐ：／／ａｄｎｉ．ｌｏｎｉ．ｕｓｃ．ｅｄｕ）から得た。
（３）データ生成および解析
ＳＮＰジェノタイピング
ゲノムＤＮＡを、ＥＤＴＡチューブ中に採取した全血液細胞から単離した末梢血白血球から抽出した。血液試料を１５００×ｇで１０分間遠心分離して血漿を除去し、血中白血球をＤＮＡ抽出に使用した。韓国人に最適化されたＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ ゲノムワイドジェノタイピングアレイ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ（登録商標）Ａｘｉｏｍ ＫＯＲＶ１．０）を使用して、試料をジェノタイピングした。ＫＯＲＶ１．０は、Ｋｏｒｅａ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ ＨｅａｌｔｈのＧｅｎｏｍｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｃｅｎｔｅｒによって設計され、Ｋｏｒｅａｎ Ｃｈｉｐ Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍから得た。さらに、ＴａｑｍａｎまたはＳＮＰ ｔｙｐｅ（Ｆｌｕｉｄｉｇｍ）方法によるジェノタイピング解析を実施して、チップベースＳＮＰジェノタイピングの正確性を評価した。ＡＤＮＩのジェノタイピングデータは、ＡＤＮＩデータベース（ｈｔｔｐ：／／ａｄｎｉ．ｌｏｎｉ．ｕｓｃ．ｅｄｕ）から得た。
ＳＮＰジェノタイピング
ゲノムＤＮＡを、ＥＤＴＡチューブ中に採取した全血液細胞から単離した末梢血白血球から抽出した。血液試料を１５００×ｇで１０分間遠心分離して血漿を除去し、血中白血球をＤＮＡ抽出に使用した。韓国人に最適化されたＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ ゲノムワイドジェノタイピングアレイ（Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ（登録商標）Ａｘｉｏｍ ＫＯＲＶ１．０）を使用して、試料をジェノタイピングした。ＫＯＲＶ１．０は、Ｋｏｒｅａ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ ＨｅａｌｔｈのＧｅｎｏｍｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｃｅｎｔｅｒによって設計され、Ｋｏｒｅａｎ Ｃｈｉｐ Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍから得た。さらに、ＴａｑｍａｎまたはＳＮＰ ｔｙｐｅ（Ｆｌｕｉｄｉｇｍ）方法によるジェノタイピング解析を実施して、チップベースＳＮＰジェノタイピングの正確性を評価した。ＡＤＮＩのジェノタイピングデータは、ＡＤＮＩデータベース（ｈｔｔｐ：／／ａｄｎｉ．ｌｏｎｉ．ｕｓｃ．ｅｄｕ）から得た。
ゲノムワイドなデータインピュテーション
ＮＲＣＤからの研究データセットは６，４１３個体からなっていた。ＡＤＮＩからのデータセットは、ＡＤＮＩ－１データセット由来の８１８個体、ＡＤＮＩ－ＧＯ／２データセット由来の４３２個体、およびＡＤＮＩ－ＷＧＳデータセット由来の８１８個体からなっていた。試料の品質管理は、＜９５％の個体コールレート、性別ミスマッチ、ヘテロ接合性（平均から±３ＳＤ）、重複性または双生児、＜９５％のコールレートを有するＳＮＰ、＜１０－６のＨＷＥＰ値を有するＳＮＰ、および＜１％のＭＡＦを含んでいた。ＨＲＣリファレンスパネル バージョン１．１を使用して、各データセットを別々にインピュテーションした。ＮＲＣＤからのＨＲＣインピュテーションは、参照集団として東アジア人を選択することによって、プレフェーズ研究のハプロタイプとともに実施した。ＡＤＮＩデータセットについては、インピュテーションは、参照集団として、ＨＲＣインピュテーションサーバー中のヨーロッパ人を選択することによって、プレフェーズ研究のハプロタイプとともに、別々に実施した。インピュテーション後に、低品質でインピュテーションされたＳＮＰ（info＜０．５）をさらなる研究から除外した（ＭｃＣａｒｔｈｙら、２０１６；Ｎａｇｙら、２０１７；Ｓｕｒａｋｋａら、２０１６）。
ＮＲＣＤからの研究データセットは６，４１３個体からなっていた。ＡＤＮＩからのデータセットは、ＡＤＮＩ－１データセット由来の８１８個体、ＡＤＮＩ－ＧＯ／２データセット由来の４３２個体、およびＡＤＮＩ－ＷＧＳデータセット由来の８１８個体からなっていた。試料の品質管理は、＜９５％の個体コールレート、性別ミスマッチ、ヘテロ接合性（平均から±３ＳＤ）、重複性または双生児、＜９５％のコールレートを有するＳＮＰ、＜１０－６のＨＷＥＰ値を有するＳＮＰ、および＜１％のＭＡＦを含んでいた。ＨＲＣリファレンスパネル バージョン１．１を使用して、各データセットを別々にインピュテーションした。ＮＲＣＤからのＨＲＣインピュテーションは、参照集団として東アジア人を選択することによって、プレフェーズ研究のハプロタイプとともに実施した。ＡＤＮＩデータセットについては、インピュテーションは、参照集団として、ＨＲＣインピュテーションサーバー中のヨーロッパ人を選択することによって、プレフェーズ研究のハプロタイプとともに、別々に実施した。インピュテーション後に、低品質でインピュテーションされたＳＮＰ（info＜０．５）をさらなる研究から除外した（ＭｃＣａｒｔｈｙら、２０１６；Ｎａｇｙら、２０１７；Ｓｕｒａｋｋａら、２０１６）。
（４）イメージングプロトコール
韓国人対象からのＭＲ画像の獲得
２，４４３人の韓国人対象について、１．５ＴのＭＲスキャナー（Ｍａｇｎｅｔｏｍ Ａｖａｎｔｏ、Ｓｉｅｍｅｎｓ）（ＴＲ＝１８００ｍｓ；ＴＥ＝３．４３ｍｓ；ＴＩ＝１１００ｍｓ；１５フリップ角；ＦｏＶ＝２２４×２２４；マトリックス＝２５６×２５６；スライス数＝１７６）を用いて、脳全体の、０．９ｍｍ付近のアキシャル磁化準備型高速グラディエントエコー（magnetization prepared rapid gradient-echo）（ＭＰＲＡＧＥ）画像を獲得した。３ＴのＭＲスキャナー（Ｓｋｙｒａ、Ｓｉｅｍｅｎｓ）（ＴＲ＝２３００ｍｓ；ＴＥ＝２．１４３ｍｓ；ＴＩ＝９００ｍｓ；９フリップ角；ＦｏＶ＝２５６×２５６；マトリックス＝３２０×３２０；スライス数＝１７８．体積）を用いて、０．８ｍｍ付近のサジタルＭＰＲＡＧＥ体積を獲得した。すべての画像は、韓国、光州広域市、Ｃｈｏｓｕｎ大学病院にあるＭＲスキャナーを用いて獲得した。
韓国人対象からのＭＲ画像の獲得
２，４４３人の韓国人対象について、１．５ＴのＭＲスキャナー（Ｍａｇｎｅｔｏｍ Ａｖａｎｔｏ、Ｓｉｅｍｅｎｓ）（ＴＲ＝１８００ｍｓ；ＴＥ＝３．４３ｍｓ；ＴＩ＝１１００ｍｓ；１５フリップ角；ＦｏＶ＝２２４×２２４；マトリックス＝２５６×２５６；スライス数＝１７６）を用いて、脳全体の、０．９ｍｍ付近のアキシャル磁化準備型高速グラディエントエコー（magnetization prepared rapid gradient-echo）（ＭＰＲＡＧＥ）画像を獲得した。３ＴのＭＲスキャナー（Ｓｋｙｒａ、Ｓｉｅｍｅｎｓ）（ＴＲ＝２３００ｍｓ；ＴＥ＝２．１４３ｍｓ；ＴＩ＝９００ｍｓ；９フリップ角；ＦｏＶ＝２５６×２５６；マトリックス＝３２０×３２０；スライス数＝１７８．体積）を用いて、０．８ｍｍ付近のサジタルＭＰＲＡＧＥ体積を獲得した。すべての画像は、韓国、光州広域市、Ｃｈｏｓｕｎ大学病院にあるＭＲスキャナーを用いて獲得した。
ＡＤＮＩからのＭＲ画像
認知的に正常な４６３人の対象、軽度認知機能障害を有する７９６人の対象、および３１０人のＡＤ患者由来のベースラインの１．５Ｔおよび３ＴのＭＲ画像を、ＡＤＮＩデータベース（ＡＤＮＩ、ｈｔｔｐ：／／ａｄｎｉ．ｌｏｎｉ．ｕｓｃ．ｅｄｕ／）からダウンロードした。対象に関するすべてのＭＲ画像は、標準的なＡＤＮＩ ＭＰＲＡＧＥプロトコールに従って、１．５Ｔまたは３ＴのＧＥ、Ｐｈｉｌｉｐｓ、およびＳｉｅｍｅｎｓの機器を用いて獲得した。１．５Ｔスキャナーについては、ＭＰＲＡＧＥプロトコールに対する公称パラメーターは、以下の通りである：サジタル面、マルチコイルフェーズドアレイコヘッドコイルに対してＴＲ＝２３００～２４００ｍｓ（バードケージまたはボリュームヘッドコイルに対してＴＲ＝３０００ｍｓ）、最小フルＴＥ、ＴＩ＝１０００ｍｓ、フリップ角８°、ＦＯＶ＝２４０×２４０ｍｍ、１９２×１９２インプレーンマトリックスおよび１．２ｍｍスライス厚。３Ｔスキャナーについては、ＭＰＲＡＧＥプロトコールに対する公称パラメーターは、以下の通りである：サジタル面、ＴＲ＝２３００または３０００ｍｓ、最小フルＴＥ、Ｔ１＝８５３～９００ｍｓ、フリップ角８°～９°、ＦＯＶ＝２５６～２６０×２４０ｍｍ、２５６×２５６インプレーンマトリックスおよび１．２ｍｍスライス厚（Ｊａｃｋら、２００８）。ＡＤ対象は、ＭＭＳＥについて２０～２６のスコア（Ｂｕｒｎｓら、１９９８）およびＣＤＲ＝０．５または１（Ｍｏｒｒｉｓ、１９９３）に基づいて含めた。さらに、選択されたＡＤ群は、可能性の高い（probable）ＡＤに対する基準であるＮＩＮＣＤＳ／ＡＡＲＤＡ基準を満たしていた。健常対照については、ＣＤＲが０であり、認知症を有していない個体を含めた（Ｗｏｌｚら、２０１１）。
認知的に正常な４６３人の対象、軽度認知機能障害を有する７９６人の対象、および３１０人のＡＤ患者由来のベースラインの１．５Ｔおよび３ＴのＭＲ画像を、ＡＤＮＩデータベース（ＡＤＮＩ、ｈｔｔｐ：／／ａｄｎｉ．ｌｏｎｉ．ｕｓｃ．ｅｄｕ／）からダウンロードした。対象に関するすべてのＭＲ画像は、標準的なＡＤＮＩ ＭＰＲＡＧＥプロトコールに従って、１．５Ｔまたは３ＴのＧＥ、Ｐｈｉｌｉｐｓ、およびＳｉｅｍｅｎｓの機器を用いて獲得した。１．５Ｔスキャナーについては、ＭＰＲＡＧＥプロトコールに対する公称パラメーターは、以下の通りである：サジタル面、マルチコイルフェーズドアレイコヘッドコイルに対してＴＲ＝２３００～２４００ｍｓ（バードケージまたはボリュームヘッドコイルに対してＴＲ＝３０００ｍｓ）、最小フルＴＥ、ＴＩ＝１０００ｍｓ、フリップ角８°、ＦＯＶ＝２４０×２４０ｍｍ、１９２×１９２インプレーンマトリックスおよび１．２ｍｍスライス厚。３Ｔスキャナーについては、ＭＰＲＡＧＥプロトコールに対する公称パラメーターは、以下の通りである：サジタル面、ＴＲ＝２３００または３０００ｍｓ、最小フルＴＥ、Ｔ１＝８５３～９００ｍｓ、フリップ角８°～９°、ＦＯＶ＝２５６～２６０×２４０ｍｍ、２５６×２５６インプレーンマトリックスおよび１．２ｍｍスライス厚（Ｊａｃｋら、２００８）。ＡＤ対象は、ＭＭＳＥについて２０～２６のスコア（Ｂｕｒｎｓら、１９９８）およびＣＤＲ＝０．５または１（Ｍｏｒｒｉｓ、１９９３）に基づいて含めた。さらに、選択されたＡＤ群は、可能性の高い（probable）ＡＤに対する基準であるＮＩＮＣＤＳ／ＡＡＲＤＡ基準を満たしていた。健常対照については、ＣＤＲが０であり、認知症を有していない個体を含めた（Ｗｏｌｚら、２０１１）。
（５）画像データの処理および解析
ＭＲ画像データ処理
画像処理は、脳構造解析（Ｄａｌｅら、１９９９；ＦｉｓｃｈｌおよびＤａｌｅ、２０００；Ｆｉｓｃｈｌら、２００４）に使用されるパブリックドメインソフトウェアのＦｒｅｅＳｕｒｆｅｒソフトウェア（ＦｒｅｅＳｕｒｆｅｒ ５．３．０）（ＦｒｅｅＳｕｒｆｅｒ、ｈｔｔｐ：／／ｓｕｒｆｅｒ．ｎｍｒ．ｍｇｈ．ｈａｒｖａｒｄ．ｅｄｕ／）を用いて実施した。ＦｒｅｅＳｕｒｆｅｒ処理のための自動化パイプラインでＤＩＣＯＭフォーマットのＭＲ画像を使用して、脳皮質表面の３次元モデルを構築した（Ｄａｌｅら、１９９９；ＤａｌｅおよびＳｅｒｅｎｏ、１９９３；Ｆｉｓｃｈｌら、１９９９ａ）。処理において、画像の強度を正規化し、正規化した画像から頭蓋骨を除去した。次に、連結コンポーネントアルゴリズムを用いて皮質下セグメンテーション処理を開始し、発見された如何なる穴も、両方の大脳皮質半球について白質の単一充填体積を表すように充填した。さらに、テッセレーションおよび表面平滑化を用いて、如何なるメトリック歪みも減少させた。次に、精密化プロセスを実施して灰白質／白質の境界を作成し、次いで、最初の表面モデル構築を実施した。次に、表面を外側に変形させて、軟膜表面を形成した。最初に、灰白質／白質の表面上の各ポイントから軟膜表面までの最短距離を計算し、軟膜表面上のポイントから灰白質／白質までの最短距離を計算し、これによって、脳皮質の厚さの測定値を得た。次に、特定のポイントにおけるこれら２つの値の平均から最終的な皮質厚を得た。皮質厚は、三角グリッドを用いて、皮質外套内の任意のポイントまたは頂点を表す別の位置から約１ｍｍ離れた、各半球の１６３，８４２個の頂点について測定した。皮質の折りたたみパターンは、０ｍｍ、５ｍｍ、１０ｍｍ、１５ｍｍ、２０ｍｍおよび２５ｍｍの半値全幅ガウシアンカーネルを用いて地図を平滑化し、非剛体高次元球状平均化方法（ｎｏｎ－ｒｉｇｉｄ ｈｉｇｈ－ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ ｓｐｈｅｒｉｃａｌ ａｖｅｒａｇｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ）を用いて対象について平均を得ることによって、調整した。調整した地図は、対象の間のｍｍ以下の違いさえ検出することができ、ボクセル解像度によって制限されない。さらに、ＦｒｅｅＳｕｒｆｅｒを使用する自動化体積測定方法（Ｄａｌｅら、１９９９；ＦｉｓｃｈｌおよびＤａｌｅ、２０００；Ｆｉｓｃｈｌら、１９９９ｂ）によって、皮下体積を獲得した。
ＭＲ画像データ処理
画像処理は、脳構造解析（Ｄａｌｅら、１９９９；ＦｉｓｃｈｌおよびＤａｌｅ、２０００；Ｆｉｓｃｈｌら、２００４）に使用されるパブリックドメインソフトウェアのＦｒｅｅＳｕｒｆｅｒソフトウェア（ＦｒｅｅＳｕｒｆｅｒ ５．３．０）（ＦｒｅｅＳｕｒｆｅｒ、ｈｔｔｐ：／／ｓｕｒｆｅｒ．ｎｍｒ．ｍｇｈ．ｈａｒｖａｒｄ．ｅｄｕ／）を用いて実施した。ＦｒｅｅＳｕｒｆｅｒ処理のための自動化パイプラインでＤＩＣＯＭフォーマットのＭＲ画像を使用して、脳皮質表面の３次元モデルを構築した（Ｄａｌｅら、１９９９；ＤａｌｅおよびＳｅｒｅｎｏ、１９９３；Ｆｉｓｃｈｌら、１９９９ａ）。処理において、画像の強度を正規化し、正規化した画像から頭蓋骨を除去した。次に、連結コンポーネントアルゴリズムを用いて皮質下セグメンテーション処理を開始し、発見された如何なる穴も、両方の大脳皮質半球について白質の単一充填体積を表すように充填した。さらに、テッセレーションおよび表面平滑化を用いて、如何なるメトリック歪みも減少させた。次に、精密化プロセスを実施して灰白質／白質の境界を作成し、次いで、最初の表面モデル構築を実施した。次に、表面を外側に変形させて、軟膜表面を形成した。最初に、灰白質／白質の表面上の各ポイントから軟膜表面までの最短距離を計算し、軟膜表面上のポイントから灰白質／白質までの最短距離を計算し、これによって、脳皮質の厚さの測定値を得た。次に、特定のポイントにおけるこれら２つの値の平均から最終的な皮質厚を得た。皮質厚は、三角グリッドを用いて、皮質外套内の任意のポイントまたは頂点を表す別の位置から約１ｍｍ離れた、各半球の１６３，８４２個の頂点について測定した。皮質の折りたたみパターンは、０ｍｍ、５ｍｍ、１０ｍｍ、１５ｍｍ、２０ｍｍおよび２５ｍｍの半値全幅ガウシアンカーネルを用いて地図を平滑化し、非剛体高次元球状平均化方法（ｎｏｎ－ｒｉｇｉｄ ｈｉｇｈ－ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ ｓｐｈｅｒｉｃａｌ ａｖｅｒａｇｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ）を用いて対象について平均を得ることによって、調整した。調整した地図は、対象の間のｍｍ以下の違いさえ検出することができ、ボクセル解像度によって制限されない。さらに、ＦｒｅｅＳｕｒｆｅｒを使用する自動化体積測定方法（Ｄａｌｅら、１９９９；ＦｉｓｃｈｌおよびＤａｌｅ、２０００；Ｆｉｓｃｈｌら、１９９９ｂ）によって、皮下体積を獲得した。
（６）画像の統計解析
異なるＡＰＯＥアレルを有する群の間の皮質厚の違いを、ＭＡＴＬＡＢ用のＳｕｒｆｓｔａｔ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍａｔｈ．ｍｃｇｉｌｌ．ｃａ／ｋｅｉｔｈ／ｓｕｒｆｓｔａｔ／）ツールボックス（Ｒ２０１２ａ、Ｔｈｅ Ｍａｔｈｗｏｒｋｓ、Ｎａｔｉｃｋ、ＭＡ、ＵＳＡ）を使用して統計的に解析した。本発明者らは、軟膜表面上の各々の非マスクポイントを統計的に試験した。固定因子としてＡＰＯＥアレル（ｅ４／４対ｅ３／３）を、ならびに共変量として性別、年齢、教育レベルおよび場の強度を使用して、一般線形モデル（ＧＬＭ）を用いて、皮質厚のポイントごとの違いを特定した（Ｆａｎら、２０１０）。ｒｓ４０５５０９アレルの違いを評価するために、Ｔ／Ｔ－Ｅ４／４およびＧ／Ｔ－ｅ４／４＋Ｇ／Ｇ－ｅ４／４のハプロタイプを有する対象を、ｅ３／３を有する対象とは別に比較した。ｒｓ４０５５０９のＧＬＭでは、本発明者らは、固定因子としてＡＰＯＥアレル（ｒｓ４０５５０９－ｅ４／４ハプロタイプ対ｅ３／３）を、ならびに共変量として性別、年齢、教育レベルおよび場の強度を使用して、皮質厚のポイントごとの違いを特定した（Ｃｈｅｎら、２０１５ｂ）。すべての皮質厚解析では、複数のポイントごとの皮質厚の比較のためのランダム場理論（ＲＦＴ）に基づく補正を、クラスターレベルで適用し、ｐ＜０．０５の偽発見率（ＦＤＲ）補正値を通過したクラスターを有意とみなした（ＴａｙｌｏｒおよびＡｄｌｅｒ、２００３）（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍａｔｈ．ｍｃｇｉｌｌ．ｃａ／ｋｅｉｔｈ／ｓｕｒｆｓｔａｔ／）。さらに、Ｒプログラム（Ｒバージョン３．３．１）を使用して、ＡＰＯＥアレルを保有する群について、海馬体積および解剖学的な関心領域を統計的に比較した。固定因子としてＡＰＯＥアレル（ｅ４／４対ｅ３／３、ｒｓ４０５５０９－ｅ４／４ハプロタイプ対ｅ３／３）を、ならびに共変量として性別、年齢、教育レベル、診断および頭蓋内体積（ＩＣＶ）を使用して、共分散解析（ＡＮＣＯＶＡ）を用いて、海馬体積の違いを評価した（Ｈｉｃｋｉｅら、２００５；Ｚｉｅｒｈｕｔら、２０１３）。次に、共変量として年齢、性別、教育レベルおよび診断を使用して、異なる群（ｅ４／４対ｅ３／３、ｒｓ４０５５０９－ｅ４／４ハプロタイプ対ｅ３／３）の間の関心領域（ＲＯＩ）の違いを比較した。解析では、有意性レベルはｐ＜０．０５で考慮し、ＦＤＲ補正がｐ＜０．０５のレベルであった場合、結果を有意とみなした（Ｓｔｒｉｃｋｅｒら、２０１３；Ｙｅら、２０１６）。
異なるＡＰＯＥアレルを有する群の間の皮質厚の違いを、ＭＡＴＬＡＢ用のＳｕｒｆｓｔａｔ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍａｔｈ．ｍｃｇｉｌｌ．ｃａ／ｋｅｉｔｈ／ｓｕｒｆｓｔａｔ／）ツールボックス（Ｒ２０１２ａ、Ｔｈｅ Ｍａｔｈｗｏｒｋｓ、Ｎａｔｉｃｋ、ＭＡ、ＵＳＡ）を使用して統計的に解析した。本発明者らは、軟膜表面上の各々の非マスクポイントを統計的に試験した。固定因子としてＡＰＯＥアレル（ｅ４／４対ｅ３／３）を、ならびに共変量として性別、年齢、教育レベルおよび場の強度を使用して、一般線形モデル（ＧＬＭ）を用いて、皮質厚のポイントごとの違いを特定した（Ｆａｎら、２０１０）。ｒｓ４０５５０９アレルの違いを評価するために、Ｔ／Ｔ－Ｅ４／４およびＧ／Ｔ－ｅ４／４＋Ｇ／Ｇ－ｅ４／４のハプロタイプを有する対象を、ｅ３／３を有する対象とは別に比較した。ｒｓ４０５５０９のＧＬＭでは、本発明者らは、固定因子としてＡＰＯＥアレル（ｒｓ４０５５０９－ｅ４／４ハプロタイプ対ｅ３／３）を、ならびに共変量として性別、年齢、教育レベルおよび場の強度を使用して、皮質厚のポイントごとの違いを特定した（Ｃｈｅｎら、２０１５ｂ）。すべての皮質厚解析では、複数のポイントごとの皮質厚の比較のためのランダム場理論（ＲＦＴ）に基づく補正を、クラスターレベルで適用し、ｐ＜０．０５の偽発見率（ＦＤＲ）補正値を通過したクラスターを有意とみなした（ＴａｙｌｏｒおよびＡｄｌｅｒ、２００３）（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍａｔｈ．ｍｃｇｉｌｌ．ｃａ／ｋｅｉｔｈ／ｓｕｒｆｓｔａｔ／）。さらに、Ｒプログラム（Ｒバージョン３．３．１）を使用して、ＡＰＯＥアレルを保有する群について、海馬体積および解剖学的な関心領域を統計的に比較した。固定因子としてＡＰＯＥアレル（ｅ４／４対ｅ３／３、ｒｓ４０５５０９－ｅ４／４ハプロタイプ対ｅ３／３）を、ならびに共変量として性別、年齢、教育レベル、診断および頭蓋内体積（ＩＣＶ）を使用して、共分散解析（ＡＮＣＯＶＡ）を用いて、海馬体積の違いを評価した（Ｈｉｃｋｉｅら、２００５；Ｚｉｅｒｈｕｔら、２０１３）。次に、共変量として年齢、性別、教育レベルおよび診断を使用して、異なる群（ｅ４／４対ｅ３／３、ｒｓ４０５５０９－ｅ４／４ハプロタイプ対ｅ３／３）の間の関心領域（ＲＯＩ）の違いを比較した。解析では、有意性レベルはｐ＜０．０５で考慮し、ＦＤＲ補正がｐ＜０．０５のレベルであった場合、結果を有意とみなした（Ｓｔｒｉｃｋｅｒら、２０１３；Ｙｅら、２０１６）。
（７）統計解析
対照およびＡＤ群の対象の割合をカイ二乗検定によって比較した。調整した（性別および年齢）解析と未調整の解析の両方について、９５％信頼区間でロジスティック回帰分析を使用して、事象に対するオッズ比を計算した（Ｂａｓａｒｉａら、２０１０）。ＳＰＳＳ（バージョン２３．０）とＲプログラム（バージョン３．３）の両方を使用して、すべての統計的検定を実施した。
対照およびＡＤ群の対象の割合をカイ二乗検定によって比較した。調整した（性別および年齢）解析と未調整の解析の両方について、９５％信頼区間でロジスティック回帰分析を使用して、事象に対するオッズ比を計算した（Ｂａｓａｒｉａら、２０１０）。ＳＰＳＳ（バージョン２３．０）とＲプログラム（バージョン３．３）の両方を使用して、すべての統計的検定を実施した。
（８）ヒト血液試料からのＡＰＯＥ遺伝子の発現
ウエスタンブロッティング
最初に、血清を全血（ＮＲＣＤから得た）から回収した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥおよびウエスタンブロッティングは、若干の変更を加えて、製造者の指示書に従い実施した（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）。０．１％Ｔｗｅｅｎ２０を加えたＰＢＳ中の５％脱脂粉乳で膜を１時間ブロッキングし、続いて、一次抗体とともに室温で１時間インキュベートした。一次抗体は、以下のように希釈し、使用した：１：１，０００ウサギ抗ＡＰＯＥ（Ｄ７１９Ｎ；Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）；１：１，０００ウサギ抗トランスフェリン（ａｂ１０９５０３；Ａｂｃａｍ）。西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）コンジュゲート二次抗体は１：５，０００で使用した。免疫活性はＥＺ－Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｌｕｍｉ Ｐｌｕｓ（ＤｏＧｅｎ）で測定した。
ウエスタンブロッティング
最初に、血清を全血（ＮＲＣＤから得た）から回収した。ＳＤＳ－ＰＡＧＥおよびウエスタンブロッティングは、若干の変更を加えて、製造者の指示書に従い実施した（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）。０．１％Ｔｗｅｅｎ２０を加えたＰＢＳ中の５％脱脂粉乳で膜を１時間ブロッキングし、続いて、一次抗体とともに室温で１時間インキュベートした。一次抗体は、以下のように希釈し、使用した：１：１，０００ウサギ抗ＡＰＯＥ（Ｄ７１９Ｎ；Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ）；１：１，０００ウサギ抗トランスフェリン（ａｂ１０９５０３；Ａｂｃａｍ）。西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）コンジュゲート二次抗体は１：５，０００で使用した。免疫活性はＥＺ－Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｌｕｍｉ Ｐｌｕｓ（ＤｏＧｅｎ）で測定した。
（９）レポーター遺伝子アッセイ
ＡＰＯＥ遺伝子（位置１，９８３～＋９３５）プロモーター領域を、正常対象およびＡＤ患者から得た血液細胞由来のゲノムＤＮＡから、以下のプライマーを使用して増幅した：フォワード、５’－ＧＧＧＧＴＡＣＣＧＡＡＡＧＣＡＧＣＧＧＡＴＣＣＴＴＧＡＴ３’（配列番号１）；リバース、５’－ＣＣＣＣＴＣＧＡＧＣＴＴＣＣＴＧＣＣＴＧＴＧＡＴＴＧＧＣ３’（配列番号２）。増幅したＤＮＡをＫｐｎＩおよびＸｈｏＩで切断し、ｐＧＬ３．ベーシックベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ）中にライゲーションした。以下のプライマーを使用して、ｒｓ４０５５０９（２１９Ｇ／Ｔ）のＰＣＲベースの部位特異的変異誘発を使用するＧ→ＴおよびＴ→Ｇアレル置換を実施した：Ｔ→Ｇフォワード、５’－ＧＡＧＧＡＧＧＧＴＧＴＣＴＧＧＡＴＴＡＣＴＧＧＧＣＧＡＧ－３’（配列番号３）；リバース、５’－ＣＴＣＧＣＣＣＡＧＴＡＡＴＣＣＡＧＡＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣ３’（配列番号４）；Ｇ→Ｔフォワード、５’－ＧＡＧＧＡＧＧＧＴＧＴＣＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＧＧＣＧＡＧＧ－３’（配列番号５）；リバース、５’－ＣＣＴＣＧＣＣＣＡＧＴＡＡＴＡＣＡＧＡＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣ－３’（配列番号６）。アッセイは、ＰｆｕＵｌｔｒａ Ｈｉｇｈ－Ｆｉｄｅｌｉｔｙ ＤＮＡポリメラーゼ（Ａｇｉｌｅｎｔ）を使用して実施した。
ＡＰＯＥ遺伝子（位置１，９８３～＋９３５）プロモーター領域を、正常対象およびＡＤ患者から得た血液細胞由来のゲノムＤＮＡから、以下のプライマーを使用して増幅した：フォワード、５’－ＧＧＧＧＴＡＣＣＧＡＡＡＧＣＡＧＣＧＧＡＴＣＣＴＴＧＡＴ３’（配列番号１）；リバース、５’－ＣＣＣＣＴＣＧＡＧＣＴＴＣＣＴＧＣＣＴＧＴＧＡＴＴＧＧＣ３’（配列番号２）。増幅したＤＮＡをＫｐｎＩおよびＸｈｏＩで切断し、ｐＧＬ３．ベーシックベクター（Ｐｒｏｍｅｇａ）中にライゲーションした。以下のプライマーを使用して、ｒｓ４０５５０９（２１９Ｇ／Ｔ）のＰＣＲベースの部位特異的変異誘発を使用するＧ→ＴおよびＴ→Ｇアレル置換を実施した：Ｔ→Ｇフォワード、５’－ＧＡＧＧＡＧＧＧＴＧＴＣＴＧＧＡＴＴＡＣＴＧＧＧＣＧＡＧ－３’（配列番号３）；リバース、５’－ＣＴＣＧＣＣＣＡＧＴＡＡＴＣＣＡＧＡＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣ３’（配列番号４）；Ｇ→Ｔフォワード、５’－ＧＡＧＧＡＧＧＧＴＧＴＣＴＧＴＡＴＴＡＣＴＧＧＧＣＧＡＧＧ－３’（配列番号５）；リバース、５’－ＣＣＴＣＧＣＣＣＡＧＴＡＡＴＡＣＡＧＡＣＡＣＣＣＴＣＣＴＣ－３’（配列番号６）。アッセイは、ＰｆｕＵｌｔｒａ Ｈｉｇｈ－Ｆｉｄｅｌｉｔｙ ＤＮＡポリメラーゼ（Ａｇｉｌｅｎｔ）を使用して実施した。
（１０）ルシフェラーゼアッセイ
ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を１２ウェルプレート中で培養した。２４時間後に、ＴｒａｎｓＦｅｃｔｉｎ（商標名）脂質試薬を使用して、０．２５μｇのホタルルシフェラーゼレポーター遺伝子を有する０．２５μｇのｐＧＬ３（Ｐｒｏｍｅｇａ）と０．２５μｇのｐＣＭＶ－β－ガラクトシダーゼ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）とを、この細胞に２４時間かけてコトランスフェクトした。トランスフェクトした細胞をレポーター溶解バッファー（Ｐｒｏｍｅｇａ）で溶解した。ルシフェラーゼ活性およびβ－ガラクトシダーゼ活性を、それぞれ、ＧｌｏＭａｘ（商標名）ルミノメーター（Ｐｒｏｍｅｇａ）およびＥｐｏｃｈマイクロプレート分光光度計（ＢｉｏＴｅｋ）を使用して定量化した。ルシフェラーゼ活性をβ－ガラクトシダーゼ活性に対して正規化した。結果は３つの独立した実験を表す。
ＨＥＫ２９３Ｔ細胞を１２ウェルプレート中で培養した。２４時間後に、ＴｒａｎｓＦｅｃｔｉｎ（商標名）脂質試薬を使用して、０．２５μｇのホタルルシフェラーゼレポーター遺伝子を有する０．２５μｇのｐＧＬ３（Ｐｒｏｍｅｇａ）と０．２５μｇのｐＣＭＶ－β－ガラクトシダーゼ（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ）とを、この細胞に２４時間かけてコトランスフェクトした。トランスフェクトした細胞をレポーター溶解バッファー（Ｐｒｏｍｅｇａ）で溶解した。ルシフェラーゼ活性およびβ－ガラクトシダーゼ活性を、それぞれ、ＧｌｏＭａｘ（商標名）ルミノメーター（Ｐｒｏｍｅｇａ）およびＥｐｏｃｈマイクロプレート分光光度計（ＢｉｏＴｅｋ）を使用して定量化した。ルシフェラーゼ活性をβ－ガラクトシダーゼ活性に対して正規化した。結果は３つの独立した実験を表す。
（１１）完全長ゲノム情報
完全長ゲノム情報は以下のように得た：正常対象、アルツハイマー型軽度認知機能障害を有する患者、およびアルツハイマー型認知症の患者と診断された対象の血液から単離したバフィーコートを使用して、ＱＩＡＧＥＮ ＤＮＡミニキットを用いて、ｇＤＮＡを抽出し、次いで、これを定量化した。定量化は、ＮＤ－１０００分光光度計ならびにＱｕａｎｔ－ｉＴ ＰｉｃｏＧｒｅｅｎ ｄｓＤＮＡ試薬およびキットを使用して実施した。次に、アガロース１．０％トリス－ホウ酸－ＥＤＴＡ（ＴＢＥ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）ゲルで電気泳動を実施することによってＤＮＡの品質を検査し、次いで、ＤＮＡ品質管理を通過した試料について、マイクロアレイベースのジェノタイピングを実施した。ＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘのＡｘｉｏｍ Ｋｏｒｅａｎチップを製造者の指示書に従って使用して、各遺伝子型に関する情報を得た。マイクロアレイ化されていないＳＮＰについて、インピュテーション方法によってジェノタイピングを実施した。完全長ゲノムインピュテーションのためにＰｌｉｎｋ、ＥＩＧＥＮＳＴＲＡＴ、Ｓｈａｐｅｉｔ、ｉｍｐｕｔｅ２、ＧＴＯＯＬ、ＥＡＧＬＥＴＯＯＬ、およびｍｉｎｉｍａｃ３プログラムを使用し、リファレンスパネルとして、１０００ゲノム（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｖａｒｉａｔｉｏｎ／ｔｏｏｌｓ／１０００ｇｅｎｏｍｅｓ／）およびＭｉｃｈｉｇａｎインピュテーションサーバー（ｈｔｔｐｓ：／／ｉｍｐｕｔａｔｉｏｎｓｅｒｖｅｒ．ｓｐｈ．ｕｍｉｃｈ．ｅｄｕ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ）を使用して、インピュテーションを実施した。
完全長ゲノム情報は以下のように得た：正常対象、アルツハイマー型軽度認知機能障害を有する患者、およびアルツハイマー型認知症の患者と診断された対象の血液から単離したバフィーコートを使用して、ＱＩＡＧＥＮ ＤＮＡミニキットを用いて、ｇＤＮＡを抽出し、次いで、これを定量化した。定量化は、ＮＤ－１０００分光光度計ならびにＱｕａｎｔ－ｉＴ ＰｉｃｏＧｒｅｅｎ ｄｓＤＮＡ試薬およびキットを使用して実施した。次に、アガロース１．０％トリス－ホウ酸－ＥＤＴＡ（ＴＢＥ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）ゲルで電気泳動を実施することによってＤＮＡの品質を検査し、次いで、ＤＮＡ品質管理を通過した試料について、マイクロアレイベースのジェノタイピングを実施した。ＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘのＡｘｉｏｍ Ｋｏｒｅａｎチップを製造者の指示書に従って使用して、各遺伝子型に関する情報を得た。マイクロアレイ化されていないＳＮＰについて、インピュテーション方法によってジェノタイピングを実施した。完全長ゲノムインピュテーションのためにＰｌｉｎｋ、ＥＩＧＥＮＳＴＲＡＴ、Ｓｈａｐｅｉｔ、ｉｍｐｕｔｅ２、ＧＴＯＯＬ、ＥＡＧＬＥＴＯＯＬ、およびｍｉｎｉｍａｃ３プログラムを使用し、リファレンスパネルとして、１０００ゲノム（ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｖａｒｉａｔｉｏｎ／ｔｏｏｌｓ／１０００ｇｅｎｏｍｅｓ／）およびＭｉｃｈｉｇａｎインピュテーションサーバー（ｈｔｔｐｓ：／／ｉｍｐｕｔａｔｉｏｎｓｅｒｖｅｒ．ｓｐｈ．ｕｍｉｃｈ．ｅｄｕ／ｉｎｄｅｘ．ｈｔｍｌ）を使用して、インピュテーションを実施した。
結果
ＡＰＯＥ ｅ４／４とアルツハイマー病の関連
アルツハイマー病との関連性の点から、本発明者らは、東アジア人、コーカサス人、およびアフリカ人系統という異なる人種群においてＡＰＯＥ変異の危険性を解析した。対照およびアルツハイマー病と臨床的に診断された患者を含むすべての人種群において、対照とアルツハイマー病患者群との間で、ＡＰＯＥ遺伝子型の分布およびアレル頻度の大きな違いが示された。これらの結果は、対照よりも、アルツハイマー病群のｅ４を有する対象で顕著であった。ＡＰＯＥ ｅ４はアルツハイマー病の重要な危険因子であるが、ｅ４媒介性の危険性の人種差は確認されていなかった。アルツハイマー病の可能性が高いと臨床的に診断された患者、および正常対照を使用した解析において、東アジア人であるｅ４／４対象は、コーカサス人と比較して非常に高いオッズ比を示した（東アジア人およびコーカサス人について、それぞれ、オッズ比：ｅ４／４＝３３．４０および１５．８６）（表１）。表１では、オッズ比は、ｅ３／３を参照してロジスティック回帰によって解析した。
ＡＰＯＥ ｅ４／４とアルツハイマー病の関連
アルツハイマー病との関連性の点から、本発明者らは、東アジア人、コーカサス人、およびアフリカ人系統という異なる人種群においてＡＰＯＥ変異の危険性を解析した。対照およびアルツハイマー病と臨床的に診断された患者を含むすべての人種群において、対照とアルツハイマー病患者群との間で、ＡＰＯＥ遺伝子型の分布およびアレル頻度の大きな違いが示された。これらの結果は、対照よりも、アルツハイマー病群のｅ４を有する対象で顕著であった。ＡＰＯＥ ｅ４はアルツハイマー病の重要な危険因子であるが、ｅ４媒介性の危険性の人種差は確認されていなかった。アルツハイマー病の可能性が高いと臨床的に診断された患者、および正常対照を使用した解析において、東アジア人であるｅ４／４対象は、コーカサス人と比較して非常に高いオッズ比を示した（東アジア人およびコーカサス人について、それぞれ、オッズ比：ｅ４／４＝３３．４０および１５．８６）（表１）。表１では、オッズ比は、ｅ３／３を参照してロジスティック回帰によって解析した。
ｅ４／４媒介性の危険性が人種群に依存的であること、およびこの危険性が東アジア人およびコーカサス人の順番で高かったことは非常に驚くべき結果であった。本発明の結果は、ＡＰＯＥ遺伝子型とアルツハイマー病との関連性を解析した以前の研究と矛盾がなかった（表１）。以下の表２は、臨床診断に基づくアルツハイマー病群および対照群の対象を示す。
アルツハイマー病のｅ４／４媒介性の発症における人種差を特定するために、本発明者らは、韓国人およびコーカサス人からの神経病理学的診断データセットを使用して、それらの間の関連を解析した（表３）。
両方の人種群において、アミロイド陰性群よりもアミロイド陽性群で多くのｅ４保因者が特定された（表４）。
ＡＰＯＥ遺伝子型とアミロイド蓄積との関連に関する研究では、韓国人のｅ４／４対象は、コーカサス人と比較して著しく高いオッズ比を示し（韓国人およびコーカサス人について、それぞれ、ｅ４／４に対するオッズ比＝１２５．１および２０．９２）、これは、臨床的に診断された対象からの結果と矛盾がなかった（表１および５）。これらの結果は、東アジア人のｅ４ホモ接合体は、他の人種群よりもアルツハイマー病にかかりやすいことを示唆する。
ＡＰＯＥ遺伝子周辺の多型のスクリーニング
東アジア人、コーカサス人、およびアフリカ人系統の順番である、人種的に異なるｅ４／４の危険性は、ＡＰＯＥ周辺の遺伝子多型のためであることが推定された。原因となるメカニズムを調べるために、本発明者らは、異なる人種群の間のアレル頻度と関連する、ＡＰＯＥ周辺の遺伝子の４０ｋｂ領域内のＳＮＰをスクリーニングした（図１Ａ）。４０ｋｂにわたる６３０個のインピュテーションされたＳＮＰのうち、基準、すなわち、例えば東アジア人、コーカサス人、およびアフリカ人系統の順番またはその逆の順番のアレル頻度などの基準に従って、７２個のＳＮＰを選択した。続いて、本発明者らは、ＡＰＯＥの調整なしで、アルツハイマー病との有意な関連性およびマイナーアレル頻度に従って、ＳＮＰを取り出した。その結果、３つのＳＮＰ、ｒｓ４４９６４７、ｒｓ４０５５０９、およびｒｓ４４０４４６が得られた。これらの多型は、ＡＰＯＥプロモーターおよびイントロン領域に位置した（図１Ｂ）。これらは、東アジア人、コーカサス人、およびアフリカ人系統の間で、アレル（ｒｓ４４９６４７－Ａ、ｒｓ４０５５０９－Ｔ、およびｒｓ４４０４４６－Ｇ）頻度の大きな違いを示した（図１Ｃ）。これらの中で、ｒｓ４０５５０９は、人種群の間で著しい違いを示した（１０００個のゲノムデータベースに基づいて、東アジア人、コーカサス人、およびアフリカ人系統について、それぞれ、Ｔ－アレル頻度＝０．６７、０．４８、および０．２４）。特に、東アジア人由来のｅ４ホモ接合体は、９０．４％のＴＴ－遺伝子型を有していたが、コーカサス人およびアフリカ人由来のｅ４ホモ接合体は、それぞれ６４．２％および２１．３％のＴＴ－遺伝子型を有しており、これは、ｒｓ４０５５０９のアレル頻度の違いが、異なる人種群の間のｅ４／４に関して、ＡＤ発症に対する感受性の違いをもたらし得ることを示す。ｒｓ４４９６４７およびｒｓ４４０４４６は、異なる人種群の間で異なるアレル頻度を示したが、ｅ４／４におけるそれらの頻度は、人種群の間で大きく違わなかった。
東アジア人、コーカサス人、およびアフリカ人系統の順番である、人種的に異なるｅ４／４の危険性は、ＡＰＯＥ周辺の遺伝子多型のためであることが推定された。原因となるメカニズムを調べるために、本発明者らは、異なる人種群の間のアレル頻度と関連する、ＡＰＯＥ周辺の遺伝子の４０ｋｂ領域内のＳＮＰをスクリーニングした（図１Ａ）。４０ｋｂにわたる６３０個のインピュテーションされたＳＮＰのうち、基準、すなわち、例えば東アジア人、コーカサス人、およびアフリカ人系統の順番またはその逆の順番のアレル頻度などの基準に従って、７２個のＳＮＰを選択した。続いて、本発明者らは、ＡＰＯＥの調整なしで、アルツハイマー病との有意な関連性およびマイナーアレル頻度に従って、ＳＮＰを取り出した。その結果、３つのＳＮＰ、ｒｓ４４９６４７、ｒｓ４０５５０９、およびｒｓ４４０４４６が得られた。これらの多型は、ＡＰＯＥプロモーターおよびイントロン領域に位置した（図１Ｂ）。これらは、東アジア人、コーカサス人、およびアフリカ人系統の間で、アレル（ｒｓ４４９６４７－Ａ、ｒｓ４０５５０９－Ｔ、およびｒｓ４４０４４６－Ｇ）頻度の大きな違いを示した（図１Ｃ）。これらの中で、ｒｓ４０５５０９は、人種群の間で著しい違いを示した（１０００個のゲノムデータベースに基づいて、東アジア人、コーカサス人、およびアフリカ人系統について、それぞれ、Ｔ－アレル頻度＝０．６７、０．４８、および０．２４）。特に、東アジア人由来のｅ４ホモ接合体は、９０．４％のＴＴ－遺伝子型を有していたが、コーカサス人およびアフリカ人由来のｅ４ホモ接合体は、それぞれ６４．２％および２１．３％のＴＴ－遺伝子型を有しており、これは、ｒｓ４０５５０９のアレル頻度の違いが、異なる人種群の間のｅ４／４に関して、ＡＤ発症に対する感受性の違いをもたらし得ることを示す。ｒｓ４４９６４７およびｒｓ４４０４４６は、異なる人種群の間で異なるアレル頻度を示したが、ｅ４／４におけるそれらの頻度は、人種群の間で大きく違わなかった。
ｒｓ４０５５０９とアルツハイマー病との関連
ｅ３／４およびｅ４／４においてｒｓ４０５５０９のＴＴ遺伝子型がアルツハイマー病の高い危険性を与えるかどうかを調べるために、本発明者らは、ｅ３／４およびｅ４／４対象においてｒｓ４０５５０９の関連性を試験した。予想通り、ｒｓ４０５５０９－ＴＴは、ＮＲＣＤデータセット（東アジア人）由来の３／４とｅ４／４対象群の両方において著しく高いオッズ比を示し（表６）、これは、ｅ４／４の危険性の人種差を示唆する。東アジア人において高いｒｓ４０５５０９－ＴＴ頻度を有するＥ４ホモ接合体は、コーカサス人およびアフリカ人系統よりも、アルツハイマー病に対して高い感受性を示した。
ｅ３／４およびｅ４／４においてｒｓ４０５５０９のＴＴ遺伝子型がアルツハイマー病の高い危険性を与えるかどうかを調べるために、本発明者らは、ｅ３／４およびｅ４／４対象においてｒｓ４０５５０９の関連性を試験した。予想通り、ｒｓ４０５５０９－ＴＴは、ＮＲＣＤデータセット（東アジア人）由来の３／４とｅ４／４対象群の両方において著しく高いオッズ比を示し（表６）、これは、ｅ４／４の危険性の人種差を示唆する。東アジア人において高いｒｓ４０５５０９－ＴＴ頻度を有するＥ４ホモ接合体は、コーカサス人およびアフリカ人系統よりも、アルツハイマー病に対して高い感受性を示した。
さらに、ｅ３／４およびｅ４／４媒介性アルツハイマー病の危険性に対するｒｓ４０５５０９の影響を確認するために、本発明者らは、他のｒｓ４０５５０９遺伝子型背景、すなわち、ｒｓ４０５５０９－ＴＴ、ＧＴ、およびＧＧにおいて、ｅ３／４およびｅ４／４の関連性を解析した（表７）。その結果、ｅ３／４およびｅ４／４対象は、ＮＲＣＤとＡＤＮＩデータセットの両方において、ｒｓ４０５５０９－Ｇアレル背景よりもｒｓ４０５５０９－ＴＴ遺伝子型に対して高いオッズ比を示した。
ＡＰＯＥ ｅ４／４と脳萎縮との関連
ＡＰＯＥ ｅ４／４によって媒介される脳萎縮において人種差が示されるかどうかを確認するために、本発明者らは、東アジア人およびコーカサス人に対して、ｅ４／４とｅ３／３対象との間で、一般線形モデルによって、ポイントごとの皮質厚解析を実施した。東アジア人とコーカサス人の両方で、ｅ４／４対象は、ｅ３／３よりも薄い皮質領域を示した（図２Ａ、２Ｂ、および２Ｃ）。ｅ４／４依存的収縮が生じた領域は、嗅内皮質－海馬傍回－紡錘状回（entorhinal-parahippocampal-fusiform）、楔前部、および下頭頂小葉であった（Ｐ＜０．０５）。驚くべきことに、これらの領域の皮質厚の減少は、コーカサス人と比較して、東アジア人で強く示された。共分散解析（ＡＮＣＯＶＡ）を実施して、ｅ４／４誘導性皮質萎縮の人種差を測定した。皮質萎縮が生じた領域の相対的平均皮質厚を、ｅ３／３を参照して、ｅ４／４対象について計算した。東アジア人とコーカサス人の両方で、嗅内皮質および海馬傍回皮質を含む内側側頭皮質、ならびに楔前部内の平均皮質厚に関して、ｅ４／４とｅ３／３の間で大きな違いが示された（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１）。さらに、東アジア人は、ｅ４／４／とｅ３／４の間でコーカサス人よりも大きな違いを示した（図２Ｂおよび２Ｃ）。東アジア人とコーカサス人の間の、ｅ４／４における相対的皮質収縮の直接比較（ｅ３／３に対して正規化）も、有意な結果を示した（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１）。さらに、本発明者らは、東アジア人およびコーカサス人において、ｅ４／４とｅ３／３対象の間で海馬体積を解析した。東アジア人とコーカサス人の両方で、海馬の萎縮は、ｅ３／３よりもｅ４／４で著しく示され、ｅ３／３と比較した場合のｅ４／４誘導性の海馬萎縮率は、コーカサス人よりも東アジア人で高かった（＊＊Ｐ＜０．０１）（図２Ｄ）。これらの結果は、東アジア人は、皮質厚の減少および海馬の収縮を含めたＡＰＯＥ ｅ４／４媒介性脳萎縮に、よりかかりやすいことを示唆する。ｅ４／４ホモ接合体における脳萎縮に対するｒｓ４０５５０９の影響を調べるために、本発明者らは、コーカサス人対象において、ｅ３／３を参照して、ｅ４／４ならびにｒｓ４０５５０９のそれぞれの遺伝子型の組み合わせ（ｅ４／４－ＴＴ、ｅ４／４－ＧＴ、およびｅ４／４－ＧＧ）に依存した皮質厚の減少を解析した（図２Ｅ、２Ｆおよび２Ｇ）。ｒｓ４０５５０９－ＴＴを有するｅ４／４対象は、内側側頭皮質（嗅内皮質および海馬傍回皮質）ならびに楔前部内で著しいクラスターを示した（Ｐ＜０．０５）。これに反して、ｒｓ４０５５０９－Ｇアレルを有するｅ４／４対象は、そのようなクラスターを示さなかった。ＡＣＮＯＶＡを用いた定量的比較解析により、ｒ４０５５０９－ＴＴ遺伝子型を有するｅ４／４対象は、ｅ３／３対象と比較して、内側側頭皮質（Ｆ＝８．３８、Ｐ＜０．０１）および楔前部（Ｆ＝１０．７０７、Ｐ＜０．０１）内で著しい萎縮を示すことが示されたが、ｒｓ４０５５０９－ＧＧを有するｅ４／４対象は、皮質領域内で如何なる有意性も示さなかった（図２Ｆおよび２Ｇ）。本発明者らは、コーカサス人におけるｒｓ４０５５０９－ＴＴおよびｒｓ４０５５０９－ＧＧを有するｅ４／４対象において、海馬の萎縮も試験した。ｒｓ４０５５０９－ＴＴを有するｅ４／４対象の海馬の収縮は、ｅ３／３対象よりも強く示されたが、ｒｓ４０５５０９－ＧＧを有するｅ４／４対象の収縮は顕著でなかった（図２Ｈ）。これらの神経イメージングの結果は、ｒｓ４０５５０９におけるＴＴ遺伝子型が、ｅ４／４対象において、アルツハイマー病の危険性に影響を及ぼすだけでなく脳収縮にも関連することを支持する。表８は、神経イメージング解析に参加した対象を示す。
ＡＰＯＥ ｅ４／４によって媒介される脳萎縮において人種差が示されるかどうかを確認するために、本発明者らは、東アジア人およびコーカサス人に対して、ｅ４／４とｅ３／３対象との間で、一般線形モデルによって、ポイントごとの皮質厚解析を実施した。東アジア人とコーカサス人の両方で、ｅ４／４対象は、ｅ３／３よりも薄い皮質領域を示した（図２Ａ、２Ｂ、および２Ｃ）。ｅ４／４依存的収縮が生じた領域は、嗅内皮質－海馬傍回－紡錘状回（entorhinal-parahippocampal-fusiform）、楔前部、および下頭頂小葉であった（Ｐ＜０．０５）。驚くべきことに、これらの領域の皮質厚の減少は、コーカサス人と比較して、東アジア人で強く示された。共分散解析（ＡＮＣＯＶＡ）を実施して、ｅ４／４誘導性皮質萎縮の人種差を測定した。皮質萎縮が生じた領域の相対的平均皮質厚を、ｅ３／３を参照して、ｅ４／４対象について計算した。東アジア人とコーカサス人の両方で、嗅内皮質および海馬傍回皮質を含む内側側頭皮質、ならびに楔前部内の平均皮質厚に関して、ｅ４／４とｅ３／３の間で大きな違いが示された（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１）。さらに、東アジア人は、ｅ４／４／とｅ３／４の間でコーカサス人よりも大きな違いを示した（図２Ｂおよび２Ｃ）。東アジア人とコーカサス人の間の、ｅ４／４における相対的皮質収縮の直接比較（ｅ３／３に対して正規化）も、有意な結果を示した（＊Ｐ＜０．０５、＊＊Ｐ＜０．０１）。さらに、本発明者らは、東アジア人およびコーカサス人において、ｅ４／４とｅ３／３対象の間で海馬体積を解析した。東アジア人とコーカサス人の両方で、海馬の萎縮は、ｅ３／３よりもｅ４／４で著しく示され、ｅ３／３と比較した場合のｅ４／４誘導性の海馬萎縮率は、コーカサス人よりも東アジア人で高かった（＊＊Ｐ＜０．０１）（図２Ｄ）。これらの結果は、東アジア人は、皮質厚の減少および海馬の収縮を含めたＡＰＯＥ ｅ４／４媒介性脳萎縮に、よりかかりやすいことを示唆する。ｅ４／４ホモ接合体における脳萎縮に対するｒｓ４０５５０９の影響を調べるために、本発明者らは、コーカサス人対象において、ｅ３／３を参照して、ｅ４／４ならびにｒｓ４０５５０９のそれぞれの遺伝子型の組み合わせ（ｅ４／４－ＴＴ、ｅ４／４－ＧＴ、およびｅ４／４－ＧＧ）に依存した皮質厚の減少を解析した（図２Ｅ、２Ｆおよび２Ｇ）。ｒｓ４０５５０９－ＴＴを有するｅ４／４対象は、内側側頭皮質（嗅内皮質および海馬傍回皮質）ならびに楔前部内で著しいクラスターを示した（Ｐ＜０．０５）。これに反して、ｒｓ４０５５０９－Ｇアレルを有するｅ４／４対象は、そのようなクラスターを示さなかった。ＡＣＮＯＶＡを用いた定量的比較解析により、ｒ４０５５０９－ＴＴ遺伝子型を有するｅ４／４対象は、ｅ３／３対象と比較して、内側側頭皮質（Ｆ＝８．３８、Ｐ＜０．０１）および楔前部（Ｆ＝１０．７０７、Ｐ＜０．０１）内で著しい萎縮を示すことが示されたが、ｒｓ４０５５０９－ＧＧを有するｅ４／４対象は、皮質領域内で如何なる有意性も示さなかった（図２Ｆおよび２Ｇ）。本発明者らは、コーカサス人におけるｒｓ４０５５０９－ＴＴおよびｒｓ４０５５０９－ＧＧを有するｅ４／４対象において、海馬の萎縮も試験した。ｒｓ４０５５０９－ＴＴを有するｅ４／４対象の海馬の収縮は、ｅ３／３対象よりも強く示されたが、ｒｓ４０５５０９－ＧＧを有するｅ４／４対象の収縮は顕著でなかった（図２Ｈ）。これらの神経イメージングの結果は、ｒｓ４０５５０９におけるＴＴ遺伝子型が、ｅ４／４対象において、アルツハイマー病の危険性に影響を及ぼすだけでなく脳収縮にも関連することを支持する。表８は、神経イメージング解析に参加した対象を示す。
ＡＰＯＥの発現
本発明によれば、ｒｓ４０５５０９は、ｅ４ホモ接合体において、アルツハイマー病の発症および脳収縮と関連する。したがって、本発明者らは、ｒｓ４０５５０９とＡＰＯＥの調節との生物学的関連性を解析した。ｒｓ４０５５０９遺伝子型がＡＰＯＥタンパク質の発現を調節するかどうかを調べるために、本発明者らは、ｅ３／３対象のｒｓ４０５５０９－ＴＴ、ＧＴ、およびＧＧ遺伝子型のヒト血清に対してウエスタンブロッティングを実施した（図３Ａ）。ｒｓ４０５５０９－ＴＴを有する対象のＡＰＯＥタンパク質のレベルは、ｒｓ４０５５０９－ＧＧおよびＧＴを有する対象のレベルと比較して、驚くべきレベルまで低下した（図３Ａ）。これらの結果は以前の研究と矛盾がなく、これは、ＡＰＯＥのレベルの低下がアルツハイマー病の危険性の増大と関連することを示唆する。さらに、ＡＰＯＥの転写活性に対するｒｓ４０５５０９の影響を、レポーター遺伝子アッセイによって確認した。このアッセイは、ｒｓ４０５５０９－Ｔアレルを有するＡＤ患者およびｒｓ４０５５０９－Ｇを有する認知的に正常な個体に由来するＡＰＯＥプロモーター断片を使用して実施した。各プロモーター領域のｒｓ４０５５０９アレルを別のアレルに変更し、次いで、ルシフェラーゼベースのレポーター遺伝子アッセイを実施した（図３Ｃおよび３Ｄ）。ｒｓ４０５５０９位置におけるＴからＧへの一塩基多型は、ＡＰＯＥプロモーター活性の驚くべき増大をもたらした（対照と比較して１６０％）が、ＧからＴへの置換は、プロモーター活性の劇的な低下をもたらした（対照と比較して６６％）。これは、ｒｓ４０５５０９－Ｔアレルが、Ｇアレルと比較してＡＰＯＥの転写を低下させることを示唆する。これらの結果は、ｒｓ４０５５０９が、ＡＰＯＥタンパク質のレベルを調節することによってｅ４／４の影響を調節することを示唆する。
本発明によれば、ｒｓ４０５５０９は、ｅ４ホモ接合体において、アルツハイマー病の発症および脳収縮と関連する。したがって、本発明者らは、ｒｓ４０５５０９とＡＰＯＥの調節との生物学的関連性を解析した。ｒｓ４０５５０９遺伝子型がＡＰＯＥタンパク質の発現を調節するかどうかを調べるために、本発明者らは、ｅ３／３対象のｒｓ４０５５０９－ＴＴ、ＧＴ、およびＧＧ遺伝子型のヒト血清に対してウエスタンブロッティングを実施した（図３Ａ）。ｒｓ４０５５０９－ＴＴを有する対象のＡＰＯＥタンパク質のレベルは、ｒｓ４０５５０９－ＧＧおよびＧＴを有する対象のレベルと比較して、驚くべきレベルまで低下した（図３Ａ）。これらの結果は以前の研究と矛盾がなく、これは、ＡＰＯＥのレベルの低下がアルツハイマー病の危険性の増大と関連することを示唆する。さらに、ＡＰＯＥの転写活性に対するｒｓ４０５５０９の影響を、レポーター遺伝子アッセイによって確認した。このアッセイは、ｒｓ４０５５０９－Ｔアレルを有するＡＤ患者およびｒｓ４０５５０９－Ｇを有する認知的に正常な個体に由来するＡＰＯＥプロモーター断片を使用して実施した。各プロモーター領域のｒｓ４０５５０９アレルを別のアレルに変更し、次いで、ルシフェラーゼベースのレポーター遺伝子アッセイを実施した（図３Ｃおよび３Ｄ）。ｒｓ４０５５０９位置におけるＴからＧへの一塩基多型は、ＡＰＯＥプロモーター活性の驚くべき増大をもたらした（対照と比較して１６０％）が、ＧからＴへの置換は、プロモーター活性の劇的な低下をもたらした（対照と比較して６６％）。これは、ｒｓ４０５５０９－Ｔアレルが、Ｇアレルと比較してＡＰＯＥの転写を低下させることを示唆する。これらの結果は、ｒｓ４０５５０９が、ＡＰＯＥタンパク質のレベルを調節することによってｅ４／４の影響を調節することを示唆する。
本発明は、血液または生物試料から採取したゲノムＤＮＡにおいて、ＡＰＯＥ遺伝子型およびＡＰＯＥプロモーター中のｒｓ４０５５０９の遺伝的変異を解析することにより、認知症の危険性に対するより正確な予測を可能にする方法を提供する。本発明は、複雑な臨床的および病理学的情報、例えばＭＲＩ脳画像、神経心理学的検査、脳脊髄液（ＣＳＦ）検査、およびアミロイドＰＥＴ検査とともに、認知症に関するビッグデータに基づいて、将来の診断技術に寄与することができる。
以下に、出願当初の特許請求の範囲に記載された発明を付記する。
［１］ 対象から単離された核酸を含む試料において軽度認知機能障害またはアルツハイマー病（ＡＤ）を示す遺伝的変異を検出することによって、軽度認知機能障害またはアルツハイマー病の診断をするかまたは危険性を予測するための方法であって、
（ａ）ＡＰＯＥ Ｅ４アレルをコードする遺伝子から選択される遺伝子またはそれらの遺伝子産物中の遺伝的変異の有無を検出することができる試薬と前記試料を接触させる工程と、
（ｂ）ＡＰＯＥプロモーターのｒｓ４０５５０９ Ｔアレルをコードする遺伝子またはそれらの遺伝子産物から選択される遺伝的変異の有無を検出することができる試薬と前記試料を接触させる工程と
を含み、
ＡＰＯＥ Ｅ４／Ｅ４およびｒｓ４０５５０９ Ｔ／Ｔ遺伝的変異の存在が、前記対象が軽度認知機能障害もしくはアルツハイマー病を有する患者であること、または軽度認知機能障害もしくはアルツハイマー病の危険性を有することを示す、方法。
［２］ ＡＰＯＥ Ｅ４／Ｅ４およびｒｓ４０５５０９ Ｔ／Ｔ遺伝的変異の有無を検出する方法が、前記対象から単離された前記試料から一本鎖形態の核酸を得、前記核酸を相補的プライマーセットと複合体を形成させ、次いで、前記複合体中の前記遺伝的変異の有無を解析することを含む、［１］に記載の方法。
［３］ 前記複合体中の前記ＡＰＯＥ Ｅ４／Ｅ４およびｒｓ４０５５０９ Ｔ／Ｔ遺伝的変異の有無を解析することが、ポリメラーゼ連鎖反応、ヌクレアーゼ消化、ハイブリダイゼーション、サザンブロッティング、制限酵素断片多型分析、シークエンシング、プライマー伸長法もしくは一本鎖高次構造多型分析を使用して、またはそれらの組み合わせを使用して解析を実施することを含む、［２］に記載の方法。
［４］ 前記対象から単離された前記試料から得られた前記核酸を増幅する、［１］に記載の方法。
［５］ 前記対象から単離された前記試料から得られた前記核酸がゲノムＤＮＡである、［１］に記載の方法。
［６］ 前記対象から単離された前記試料から得られた前記核酸がＲＮＡである、［１］に記載の方法。
［７］ 前記対象の大脳皮質厚の画像を得る工程
をさらに含み、
前記大脳皮質厚の萎縮が、前記対象が軽度認知機能障害もしくはアルツハイマー病を有する患者であること、または軽度認知機能障害もしくはアルツハイマー病の危険性を有することを示す、［１］に記載の方法。
［８］ 大脳皮質厚の前記画像がＭＲ脳画像である、［７］に記載の方法。
［９］ 神経心理学的検査、脳脊髄液（ＣＳＦ）検査、およびアミロイドＰＥＴ検査からなる検査の１つ以上を実施する工程
をさらに含む、［１］、［７］および［８］の何れか１に記載の方法。
［１０］ 軽度認知機能障害またはアルツハイマー病を診断または予測するためのキットであって、ＡＰＯＥ Ｅ４／Ｅ４遺伝的変異の有無を、ＡＰＯＥ Ｅ４アレルをコードする遺伝子から選択される遺伝子またはそれらの遺伝子産物において検出し、ＡＰＯＥプロモーターのｒｓ４０５５０９ Ｔアレルをコードする遺伝子またはそれらの遺伝子産物から選択されるｒｓ４０５５０９ Ｔ／Ｔ遺伝的変異の有無をさらに検出する、キット。
［１１］ 前記ＡＰＯＥ Ｅ４アレルおよび前記ＡＰＯＥプロモーターの前記ｒｓ４０５５０９ Ｔアレルに相補的なプライマーセット、ならびに
反応酵素
を含む、［１０］に記載のキット。
［１２］ 前記遺伝的変異を解析するための解析方法が含まれる、［１０］に記載のキット。
［１３］ 核酸を増幅するための方法が含まれる、［１０］に記載のキット。
［１４］ 参照対照が含まれる、［１０］に記載のキット。
以下に、出願当初の特許請求の範囲に記載された発明を付記する。
［１］ 対象から単離された核酸を含む試料において軽度認知機能障害またはアルツハイマー病（ＡＤ）を示す遺伝的変異を検出することによって、軽度認知機能障害またはアルツハイマー病の診断をするかまたは危険性を予測するための方法であって、
（ａ）ＡＰＯＥ Ｅ４アレルをコードする遺伝子から選択される遺伝子またはそれらの遺伝子産物中の遺伝的変異の有無を検出することができる試薬と前記試料を接触させる工程と、
（ｂ）ＡＰＯＥプロモーターのｒｓ４０５５０９ Ｔアレルをコードする遺伝子またはそれらの遺伝子産物から選択される遺伝的変異の有無を検出することができる試薬と前記試料を接触させる工程と
を含み、
ＡＰＯＥ Ｅ４／Ｅ４およびｒｓ４０５５０９ Ｔ／Ｔ遺伝的変異の存在が、前記対象が軽度認知機能障害もしくはアルツハイマー病を有する患者であること、または軽度認知機能障害もしくはアルツハイマー病の危険性を有することを示す、方法。
［２］ ＡＰＯＥ Ｅ４／Ｅ４およびｒｓ４０５５０９ Ｔ／Ｔ遺伝的変異の有無を検出する方法が、前記対象から単離された前記試料から一本鎖形態の核酸を得、前記核酸を相補的プライマーセットと複合体を形成させ、次いで、前記複合体中の前記遺伝的変異の有無を解析することを含む、［１］に記載の方法。
［３］ 前記複合体中の前記ＡＰＯＥ Ｅ４／Ｅ４およびｒｓ４０５５０９ Ｔ／Ｔ遺伝的変異の有無を解析することが、ポリメラーゼ連鎖反応、ヌクレアーゼ消化、ハイブリダイゼーション、サザンブロッティング、制限酵素断片多型分析、シークエンシング、プライマー伸長法もしくは一本鎖高次構造多型分析を使用して、またはそれらの組み合わせを使用して解析を実施することを含む、［２］に記載の方法。
［４］ 前記対象から単離された前記試料から得られた前記核酸を増幅する、［１］に記載の方法。
［５］ 前記対象から単離された前記試料から得られた前記核酸がゲノムＤＮＡである、［１］に記載の方法。
［６］ 前記対象から単離された前記試料から得られた前記核酸がＲＮＡである、［１］に記載の方法。
［７］ 前記対象の大脳皮質厚の画像を得る工程
をさらに含み、
前記大脳皮質厚の萎縮が、前記対象が軽度認知機能障害もしくはアルツハイマー病を有する患者であること、または軽度認知機能障害もしくはアルツハイマー病の危険性を有することを示す、［１］に記載の方法。
［８］ 大脳皮質厚の前記画像がＭＲ脳画像である、［７］に記載の方法。
［９］ 神経心理学的検査、脳脊髄液（ＣＳＦ）検査、およびアミロイドＰＥＴ検査からなる検査の１つ以上を実施する工程
をさらに含む、［１］、［７］および［８］の何れか１に記載の方法。
［１０］ 軽度認知機能障害またはアルツハイマー病を診断または予測するためのキットであって、ＡＰＯＥ Ｅ４／Ｅ４遺伝的変異の有無を、ＡＰＯＥ Ｅ４アレルをコードする遺伝子から選択される遺伝子またはそれらの遺伝子産物において検出し、ＡＰＯＥプロモーターのｒｓ４０５５０９ Ｔアレルをコードする遺伝子またはそれらの遺伝子産物から選択されるｒｓ４０５５０９ Ｔ／Ｔ遺伝的変異の有無をさらに検出する、キット。
［１１］ 前記ＡＰＯＥ Ｅ４アレルおよび前記ＡＰＯＥプロモーターの前記ｒｓ４０５５０９ Ｔアレルに相補的なプライマーセット、ならびに
反応酵素
を含む、［１０］に記載のキット。
［１２］ 前記遺伝的変異を解析するための解析方法が含まれる、［１０］に記載のキット。
［１３］ 核酸を増幅するための方法が含まれる、［１０］に記載のキット。
［１４］ 参照対照が含まれる、［１０］に記載のキット。
Claims (14)
- アジア人の対象から単離された核酸を含む試料において、脳内のアミロイド蓄積、海馬の萎縮、並びに、楔前部領域、内側嗅内領域および海馬傍回領域における脳萎縮を伴うアルツハイマー病（ＡＤ）を示す遺伝的変異を検出するための方法であって、
（ａ）ＡＰＯＥ遺伝子中、またはＡＰＯＥ遺伝子の遺伝子産物中の、ＡＰＯＥ Ｅ４／Ｅ４遺伝的変異の有無を検出することができる試薬と前記試料を接触させる工程と、
（ｂ）ＡＰＯＥプロモーターのｒｓ４０５５０９ Ｔアレルの有無を検出することができる試薬と前記試料を接触させる工程とを含み、
ＡＰＯＥ Ｅ４／Ｅ４およびｒｓ４０５５０９ Ｔ／Ｔ遺伝的変異の存在が、前記対象がアルツハイマー病を有する患者であること、またはアルツハイマー病の増加した危険性を有することを示す、方法。 - ＡＰＯＥ Ｅ４／Ｅ４およびｒｓ４０５５０９ Ｔ／Ｔ遺伝的変異の有無を検出する方法が、前記対象から単離された前記試料から一本鎖形態の核酸を得、前記核酸を相補的プライマーセットと複合体を形成させ、次いで、前記複合体中の前記遺伝的変異の有無を解析することを含む、請求項１に記載の方法。
- 前記複合体中の前記ＡＰＯＥ Ｅ４／Ｅ４およびｒｓ４０５５０９ Ｔ／Ｔ遺伝的変異の有無を解析することが、ポリメラーゼ連鎖反応、ヌクレアーゼ消化、ハイブリダイゼーション、サザンブロッティング、制限酵素断片多型分析、シークエンシング、プライマー伸長法もしくは一本鎖高次構造多型分析を使用して、またはそれらの組み合わせを使用して解析を実施することを含む、請求項２に記載の方法。
- 前記対象から単離された前記試料から得られた前記核酸を増幅する、請求項１に記載の方法。
- 前記対象から単離された前記試料から得られた前記核酸がゲノムＤＮＡである、請求項１に記載の方法。
- 前記対象から単離された前記試料から得られた前記核酸がＲＮＡである、請求項１に記載の方法。
- 前記対象の大脳皮質厚の画像を得る工程
をさらに含み、
前記大脳皮質厚の萎縮が、前記対象がアルツハイマー病を有する患者であること、またはアルツハイマー病の危険性を有することを示す、請求項１に記載の方法。 - 大脳皮質厚の前記画像がＭＲ脳画像である、請求項７に記載の方法。
- 神経心理学的検査、脳脊髄液（ＣＳＦ）検査、およびアミロイドＰＥＴ検査からなる検査の１つ以上を実施する工程
をさらに含む、請求項１、７および８の何れか１項に記載の方法。 - アジア人の、脳内のアミロイド蓄積、海馬の萎縮、並びに、楔前部領域、内側嗅内領域および海馬傍回領域における脳萎縮を伴うアルツハイマー病を診断または予測するためのキットであって、ＡＰＯＥ Ｅ４／Ｅ４遺伝的変異の有無を、ＡＰＯＥ遺伝子、またはＡＰＯＥ遺伝子の遺伝子産物において検出し、ＡＰＯＥプロモーターにおけるｒｓ４０５５０９ Ｔ／Ｔ遺伝的変異の有無をさらに検出することを特徴とする、キット。
- 前記ＡＰＯＥ Ｅ４遺伝子および前記ＡＰＯＥプロモーターのｒｓ４０５５０９ Ｔアレルに相補的なプライマーセット、ならびに
反応酵素
を含む、請求項１０に記載のキット。 - 前記遺伝的変異を解析するための解析方法が含まれる、請求項１０に記載のキット。
- 核酸を増幅するための方法が含まれる、請求項１０に記載のキット。
- 参照対照が含まれる、請求項１０に記載のキット。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2021178702A JP2022033735A (ja) | 2017-05-15 | 2021-11-01 | アルツハイマー病の危険性と関連するａｐｏｅプロモーターの一塩基多型およびその使用 |
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR10-2017-0060225 | 2017-05-15 | ||
| KR20170060225 | 2017-05-15 | ||
| KRPCT/KR2017/005137 | 2017-05-17 | ||
| PCT/KR2017/005137 WO2018212371A1 (ko) | 2017-05-17 | 2017-05-17 | 알츠하이머병 위험도와 관련된 apoe 프로모터 단일염기변이 및 이것의 용도 |
| PCT/KR2018/000649 WO2018212427A1 (ko) | 2017-05-15 | 2018-01-15 | 알츠하이머병 위험도와 관련된 apoe 프로모터 단일염기변이 및 이것의 용도 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2021178702A Division JP2022033735A (ja) | 2017-05-15 | 2021-11-01 | アルツハイマー病の危険性と関連するａｐｏｅプロモーターの一塩基多型およびその使用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2020510411A JP2020510411A (ja) | 2020-04-09 |
| JP7399465B2 true JP7399465B2 (ja) | 2023-12-18 |
Family
ID=64273920
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2019536313A Active JP7399465B2 (ja) | 2017-05-15 | 2018-01-15 | アルツハイマー病の危険性と関連するａｐｏｅプロモーターの一塩基多型およびその使用 |
| JP2021178702A Pending JP2022033735A (ja) | 2017-05-15 | 2021-11-01 | アルツハイマー病の危険性と関連するａｐｏｅプロモーターの一塩基多型およびその使用 |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2021178702A Pending JP2022033735A (ja) | 2017-05-15 | 2021-11-01 | アルツハイマー病の危険性と関連するａｐｏｅプロモーターの一塩基多型およびその使用 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20200370101A1 (ja) |
| EP (1) | EP3626830A4 (ja) |
| JP (2) | JP7399465B2 (ja) |
| CN (1) | CN110249061A (ja) |
| WO (1) | WO2018212427A1 (ja) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2021037027A1 (en) * | 2019-08-29 | 2021-03-04 | The Hong Kong University Of Science And Technology | Genetic variants for diagnosis of alzheimer's disease |
| CN112980954B (zh) * | 2021-03-03 | 2022-02-25 | 首都医科大学宣武医院 | 一种预测神经退行性疾病风险的试剂盒及其用途 |
| CN113943790A (zh) * | 2021-10-25 | 2022-01-18 | 北京华夏时代基因科技发展有限公司 | 一种检测ApoE单核苷酸多态性的方法 |
| CN114736963B (zh) * | 2022-05-25 | 2023-03-24 | 首都医科大学宣武医院 | 一种用于预测阿尔茨海默病发病风险的物质的组合、试剂盒及应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005323565A (ja) | 2004-05-17 | 2005-11-24 | Nippon Flour Mills Co Ltd | 標的ｄｎａ配列において一塩基変異多型の存在を検出する方法及びキット |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2001273675A1 (en) * | 2000-07-03 | 2002-01-14 | University Of South Florida | Methods and assays for diagnosing alzheimer's disease |
| AU2002235924A1 (en) * | 2001-11-09 | 2003-06-10 | University Of Zurich | Cyp46 genotype determination for risk and treatment evaluation of alzheimer's disease |
| JP3980630B2 (ja) * | 2005-03-04 | 2007-09-26 | 財団法人名古屋産業科学研究所 | アポトーシスに陥る傾向を判定する方法及びその利用 |
| CN101809443B (zh) * | 2007-07-31 | 2013-11-27 | 艾克塞拉公司 | 基因组测试和生酮化合物用于治疗降低的认知功能的用途 |
| US20120122703A1 (en) * | 2009-07-03 | 2012-05-17 | University College Cardiff Consultants Limited | Diagnosis and treatment of alzheimer's disease |
| WO2011085115A2 (en) * | 2010-01-08 | 2011-07-14 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Assessing humans for a risk of developing late onset alzheimer's disease |
| CN106011243A (zh) * | 2011-11-10 | 2016-10-12 | 霍夫曼-拉罗奇有限公司 | 用于治疗、诊断和监测阿尔茨海默病的方法 |
-
2018
- 2018-01-15 JP JP2019536313A patent/JP7399465B2/ja active Active
- 2018-01-15 WO PCT/KR2018/000649 patent/WO2018212427A1/ko unknown
- 2018-01-15 CN CN201880009624.6A patent/CN110249061A/zh active Pending
- 2018-01-15 EP EP18801295.9A patent/EP3626830A4/en not_active Withdrawn
- 2018-01-15 US US15/932,345 patent/US20200370101A1/en not_active Abandoned
-
2021
- 2021-11-01 JP JP2021178702A patent/JP2022033735A/ja active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005323565A (ja) | 2004-05-17 | 2005-11-24 | Nippon Flour Mills Co Ltd | 標的ｄｎａ配列において一塩基変異多型の存在を検出する方法及びキット |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＆ Ｔｈｅｒａｐｙ，ｖｏｌ．８（２０１６），ＤＯＩ：１０．１１８６／ｓ１３１９５－０１６－０１８７－９ |
| Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．２３（９），ｐ．１４１５－１４２５（２０１６） |
| 日本老年医学会雑誌，２０１２年，ｖｏｌ．４９，ｐ．４２５－４３０ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2018212427A1 (ko) | 2018-11-22 |
| US20200370101A1 (en) | 2020-11-26 |
| CN110249061A (zh) | 2019-09-17 |
| EP3626830A4 (en) | 2021-01-27 |
| JP2022033735A (ja) | 2022-03-02 |
| EP3626830A1 (en) | 2020-03-25 |
| JP2020510411A (ja) | 2020-04-09 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7399465B2 (ja) | アルツハイマー病の危険性と関連するａｐｏｅプロモーターの一塩基多型およびその使用 | |
| Le Guennec et al. | 17q21. 31 duplication causes prominent tau-related dementia with increased MAPT expression | |
| Ringman et al. | Diffusion tensor imaging in preclinical and presymptomatic carriers of familial Alzheimer's disease mutations | |
| Tan et al. | Associations of Alzheimer’s disease risk variants with gene expression, amyloidosis, tauopathy, and neurodegeneration | |
| Johansson et al. | Variants of CYP46A1 may interact with age and APOE to influence CSF Aβ42 levels in Alzheimer’s disease | |
| Nho et al. | Integration of bioinformatics and imaging informatics for identifying rare PSEN1 variants in Alzheimer’s disease | |
| Cherbuin et al. | Total and regional gray matter volume is not related to APOE* E4 status in a community sample of middle-aged individuals | |
| Chen et al. | The interaction of APOE genotype by age in amnestic mild cognitive impairment: a voxel-based morphometric study | |
| Eisenberger et al. | A C-terminal nonsense mutation links PTPRQ with autosomal-dominant hearing loss, DFNA73 | |
| Weinstock-Guttman et al. | The rs2030324 SNP of brain-derived neurotrophic factor (BDNF) is associated with visual cognitive processing in multiple sclerosis | |
| Manzano-Crespo et al. | Lower serum expression of miR-181c-5p is associated with increased plasma levels of amyloid-beta 1–40 and cerebral vulnerability in normal aging | |
| Burggren et al. | Hippocampal thinning linked to longer TOMM40 poly-T variant lengths in the absence of the APOE ε4 variant | |
| Waggoner et al. | NSD1 analysis for Sotos syndrome: insights and perspectives from the clinical laboratory | |
| KR101933847B1 (ko) | 알츠하이머병 위험도와 관련된 apoe 프로모터 단일염기변이 및 이것의 용도 | |
| Ye et al. | Predictors of conversion to α-synucleinopathy diseases in idiopathic rapid eye movement sleep behavior disorder | |
| Ramanan et al. | Variants in PPP2R2B and IGF2BP3 are associated with higher tau deposition | |
| Basso et al. | Apolipoprotein E epsilon4 is associated with atrophy of the amygdala in Alzheimer's disease | |
| Sommerer et al. | Entorhinal cortex epigenome-wide association study highlights four novel loci showing differential methylation in Alzheimer’s disease | |
| Chang et al. | Structural covariance network as an endophenotype in Alzheimer’s disease-susceptible single-nucleotide polymorphisms and the correlations with cognitive outcomes | |
| Liu et al. | The interactive effects of age and PICALM rs541458 polymorphism on cognitive performance, brain structure, and function in non-demented elderly | |
| Lin et al. | Mutational analysis in familial Alzheimer’s disease of Han Chinese in Taiwan with a predominant mutation PSEN1 p. Met146Ile | |
| Abdel-Hamid et al. | Phenotypic and mutational spectrum of thirty-five patients with Sjögren–Larsson syndrome: identification of eleven novel ALDH3A2 mutations and founder effects | |
| Bai et al. | Multiple genetic imaging study of the association between cholesterol metabolism and brain functional alterations in individuals with risk factors for Alzheimer's disease | |
| Javadikooshesh et al. | Pelizaeus-Merzbacher-like disease 1 caused by a novel mutation in GJC2 gene: a case report | |
| Zhu et al. | Familial cerebral cavernous angiomas: clinical and genetic features in a Chinese family with a frame-shift mutation in the CCM1 gene (krit1) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190830 |
|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20190830 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200203 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20200901 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20201127 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20210302 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210527 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20210706 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20211101 |
|
| C60 | Trial request (containing other claim documents, opposition documents) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C60 Effective date: 20211101 |
|
| A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20211110 |
|
| C21 | Notice of transfer of a case for reconsideration by examiners before appeal proceedings |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C21 Effective date: 20211116 |
|
| A912 | Re-examination (zenchi) completed and case transferred to appeal board |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A912 Effective date: 20220107 |
|
| C211 | Notice of termination of reconsideration by examiners before appeal proceedings |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C211 Effective date: 20220118 |
|
| C22 | Notice of designation (change) of administrative judge |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C22 Effective date: 20221101 |
|
| C13 | Notice of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: C13 Effective date: 20221213 |
|
| RD02 | Notification of acceptance of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7422 Effective date: 20230215 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230302 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230831 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20231129 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7399465 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |