JP7385585B2 - 薬剤adme研究のための高密度3d肝細胞スフェロイドプラットフォーム - Google Patents
薬剤adme研究のための高密度3d肝細胞スフェロイドプラットフォーム Download PDFInfo
- Publication number
- JP7385585B2 JP7385585B2 JP2020548969A JP2020548969A JP7385585B2 JP 7385585 B2 JP7385585 B2 JP 7385585B2 JP 2020548969 A JP2020548969 A JP 2020548969A JP 2020548969 A JP2020548969 A JP 2020548969A JP 7385585 B2 JP7385585 B2 JP 7385585B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- clearance
- candidate compounds
- hepatocytes
- low
- spheroid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 title claims description 147
- 239000003814 drug Substances 0.000 title description 30
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title description 26
- 230000035502 ADME Effects 0.000 title description 13
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 225
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 78
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 68
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 claims description 42
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 41
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 39
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 30
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 24
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 15
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 claims description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 11
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 11
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 10
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 9
- 230000007704 transition Effects 0.000 claims description 9
- 102000004328 Cytochrome P-450 CYP3A Human genes 0.000 claims description 8
- 108010081668 Cytochrome P-450 CYP3A Proteins 0.000 claims description 8
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 7
- 230000003915 cell function Effects 0.000 claims description 6
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 claims description 6
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000005070 sampling Methods 0.000 claims description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 89
- 238000000034 method Methods 0.000 description 82
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 22
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 20
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 15
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 15
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 14
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 14
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 14
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 12
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 11
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 10
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 9
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 9
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 8
- 229940000406 drug candidate Drugs 0.000 description 8
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 8
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 8
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 7
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- 238000013461 design Methods 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 5
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 5
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 5
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 5
- 210000004738 parenchymal cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 5
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 4
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 4
- 239000004037 angiogenesis inhibitor Substances 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- -1 but not limited to Chemical class 0.000 description 4
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 4
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 4
- 238000007876 drug discovery Methods 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 4
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 4
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZRVUJXDFFKFLMG-UHFFFAOYSA-N Meloxicam Chemical compound OC=1C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)N(C)C=1C(=O)NC1=NC=C(C)S1 ZRVUJXDFFKFLMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FTALBRSUTCGOEG-UHFFFAOYSA-N Riluzole Chemical compound C1=C(OC(F)(F)F)C=C2SC(N)=NC2=C1 FTALBRSUTCGOEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JLRGJRBPOGGCBT-UHFFFAOYSA-N Tolbutamide Chemical compound CCCCNC(=O)NS(=O)(=O)C1=CC=C(C)C=C1 JLRGJRBPOGGCBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960004538 alprazolam Drugs 0.000 description 3
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 3
- AAOVKJBEBIDNHE-UHFFFAOYSA-N diazepam Chemical compound N=1CC(=O)N(C)C2=CC=C(Cl)C=C2C=1C1=CC=CC=C1 AAOVKJBEBIDNHE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960003529 diazepam Drugs 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 238000012252 genetic analysis Methods 0.000 description 3
- WIGIZIANZCJQQY-RUCARUNLSA-N glimepiride Chemical compound O=C1C(CC)=C(C)CN1C(=O)NCCC1=CC=C(S(=O)(=O)NC(=O)N[C@@H]2CC[C@@H](C)CC2)C=C1 WIGIZIANZCJQQY-RUCARUNLSA-N 0.000 description 3
- 229960004346 glimepiride Drugs 0.000 description 3
- 238000010874 in vitro model Methods 0.000 description 3
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 3
- 210000001853 liver microsome Anatomy 0.000 description 3
- 229960001929 meloxicam Drugs 0.000 description 3
- OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N prednisolone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 OIGNJSKKLXVSLS-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 3
- 229960005205 prednisolone Drugs 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 239000011241 protective layer Substances 0.000 description 3
- 229960004181 riluzole Drugs 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 229960005371 tolbutamide Drugs 0.000 description 3
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 3
- BCEHBSKCWLPMDN-MGPLVRAMSA-N voriconazole Chemical compound C1([C@H](C)[C@](O)(CN2N=CN=C2)C=2C(=CC(F)=CC=2)F)=NC=NC=C1F BCEHBSKCWLPMDN-MGPLVRAMSA-N 0.000 description 3
- 229960004740 voriconazole Drugs 0.000 description 3
- 229960005080 warfarin Drugs 0.000 description 3
- PJVWKTKQMONHTI-UHFFFAOYSA-N warfarin Chemical compound OC=1C2=CC=CC=C2OC(=O)C=1C(CC(=O)C)C1=CC=CC=C1 PJVWKTKQMONHTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 17β-estradiol Chemical compound OC1=CC=C2[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 VOXZDWNPVJITMN-ZBRFXRBCSA-N 0.000 description 2
- 239000005541 ACE inhibitor Substances 0.000 description 2
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 2
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 2
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 2
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 206010013710 Drug interaction Diseases 0.000 description 2
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 2
- 229940123457 Free radical scavenger Drugs 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 102000029797 Prion Human genes 0.000 description 2
- 108091000054 Prion Proteins 0.000 description 2
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 2
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000002491 angiogenic effect Effects 0.000 description 2
- 229940044094 angiotensin-converting-enzyme inhibitor Drugs 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 2
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 description 2
- 230000000118 anti-neoplastic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000702 anti-platelet effect Effects 0.000 description 2
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 2
- 239000003080 antimitotic agent Substances 0.000 description 2
- 239000004019 antithrombin Substances 0.000 description 2
- 239000003613 bile acid Substances 0.000 description 2
- 210000000013 bile duct Anatomy 0.000 description 2
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 231100000357 carcinogen Toxicity 0.000 description 2
- 239000003183 carcinogenic agent Substances 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 2
- 239000002359 drug metabolite Substances 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 229960005309 estradiol Drugs 0.000 description 2
- 229930182833 estradiol Natural products 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000010224 hepatic metabolism Effects 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 2
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000007154 intracellular accumulation Effects 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 238000001294 liquid chromatography-tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 229940094443 oxytocics prostaglandins Drugs 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 2
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 2
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 2
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000759 toxicological effect Toxicity 0.000 description 2
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 2
- 230000002227 vasoactive effect Effects 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 2
- 239000002676 xenobiotic agent Substances 0.000 description 2
- 230000002034 xenobiotic effect Effects 0.000 description 2
- AFABGHUZZDYHJO-UHFFFAOYSA-N 2-Methylpentane Chemical compound CCCC(C)C AFABGHUZZDYHJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SGUAFYQXFOLMHL-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxy-5-{1-hydroxy-2-[(4-phenylbutan-2-yl)amino]ethyl}benzamide Chemical compound C=1C=C(O)C(C(N)=O)=CC=1C(O)CNC(C)CCC1=CC=CC=C1 SGUAFYQXFOLMHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010085895 Laminin Proteins 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000001336 alkenes Chemical class 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 210000000741 bile canaliculi Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000023402 cell communication Effects 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000004205 dimethyl polysiloxane Substances 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 238000012912 drug discovery process Methods 0.000 description 1
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- XJRPTMORGOIMMI-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-amino-4-(trifluoromethyl)-1,3-thiazole-5-carboxylate Chemical compound CCOC(=O)C=1SC(N)=NC=1C(F)(F)F XJRPTMORGOIMMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000005558 fluorometry Methods 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004024 hepatic stellate cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000002570 interstitial cell Anatomy 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000001865 kupffer cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960001632 labetalol Drugs 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000007056 liver toxicity Effects 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N methyl pentane Natural products CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 210000003668 pericyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229920000435 poly(dimethylsiloxane) Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000570 polyether Polymers 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000007794 visualization technique Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
- G01N33/5044—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics involving specific cell types
- G01N33/5067—Liver cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
- C12M23/02—Form or structure of the vessel
- C12M23/12—Well or multiwell plates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
- C12M23/22—Transparent or translucent parts
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M23/00—Constructional details, e.g. recesses, hinges
- C12M23/24—Gas permeable parts
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
- G01N2333/902—Oxidoreductases (1.)
- G01N2333/90245—Oxidoreductases (1.) acting on paired donors with incorporation of molecular oxygen (1.14)
- G01N2333/90248—Oxidoreductases (1.) acting on paired donors with incorporation of molecular oxygen (1.14) with NADH or NADPH as one of the donors, and incorporation of one atom of oxygen 1.14.13
- G01N2333/90251—Oxidoreductases (1.) acting on paired donors with incorporation of molecular oxygen (1.14) with NADH or NADPH as one of the donors, and incorporation of one atom of oxygen 1.14.13 with a definite EC number (1.14.13.-)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/52—Predicting or monitoring the response to treatment, e.g. for selection of therapy based on assay results in personalised medicine; Prognosis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Clinical Laboratory Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
本明細書中で使用される場合、単数形「ある(a、an)」及び「上記(the)」は、そうでないことが文脈によって明示されていない限り、複数の指示物を含む。従って例えば、ある「構造形成された底面(structured bottom surface)」に関する言及は、そうでないことが文脈によって明示されていない限り、2つ以上のこのような「構造形成された底面」を有する例を含む。
方法、システム、組成物、及びキットの様々な態様を本明細書に記載した。このような方法、システム、組成物、及びキットのいくつかの選択された例の概要を以下に提供する。
肝細胞を細胞培養用物品中で培養してスフェロイドを形成するステップであって、ここで上記細胞培養用物品はチャンバを備え、上記チャンバは、マイクロキャビティのアレイを備え、各上記マイクロキャビティは、肝細胞スフェロイドを形成するために、3Dスフェロイド形態で成長するように肝細胞に制約を与えるような構造を有し、上記チャンバの各上記マイクロキャビティは:
上部アパーチャ;及び底面を備える液体非透過性底部であって、上記底部の少なくとも一部分は、上記底面内又は上記底面上に低接着性又は非接着性材料を含む、液体非透過性底部
を備える、ステップ;
3D肝細胞スフェロイドを上記1つ以上の低クリアランス候補化合物と接触させるステップ;並びに
上記1つ以上の候補化合物の生体外固有クリアランスを測定するステップ
を含む、アッセイ法である。
初代ヒト肝細胞(PHH)高密度(HD)スフェロイド培養
スフェロイドインサートの予備湿潤:ピペットエイドを低分散速度とした。5mLピペットを使用し、チップを側壁に対して底部に位置決めして、2mLのウィリアムE培地+(WEM+)培地(FBS非含有)を、およそ700マイクロウェル/ウェルインサートを有する6ウェルスフェロイドインサートに加えた。200μlのピペットチップを用いて、マイクロウェル内に閉じ込められたいずれの気泡を吹き飛ばした。顕微鏡下でプレートを検査して、全ての気泡が除去されたことを確認した。
3D PHH高密度スフェロイド薬剤クリアランスアッセイ
WME+培地での培地の半量の交換:ピペットエイドを低分散速度とした。5mLピペットを用いて、1mLの古い培地を各インサートからゆっくりと取り出した。1000μLピペットチップをインサート側壁の上部に対して位置決めし、1mLの予熱したWME+培地を、この培地が側壁を流れ落ちるようにして、ゆっくりと加えた。培地の半量の交換の度に5~10分間待機して、培地の半量の交換を更に3回繰り返した。PHHを顕微鏡下で、スフェロイドの形成に関して検査した。
データ分析及びクリアランスの計算
除去率定数(kel)の計算:当該技術分野において公知であるように、特定のインキュベーション時点における質量分光分析ピーク面積比を、ゼロ時点におけるもので除算することによって、培養物中に残存する候補化合物の百分率を計算した。残存する候補化合物の百分率の自然対数を時間に対してプロットし、傾きからの絶対値としてkelを計算した。
結果
図6A~Iに示すように、本開示の方法及び実験器具は、ワルファリン(図6A)、メロキシカム(図6B)、トルブタミド(図6C)、ジアゼパム(図6D)、グリメピリド(図6E)、アルプラゾラム(図6F)、プレドニゾロン(図6G)、リルゾール(図6H)、及びボリコナゾール(図6I)といった古典的な低クリアランス化合物を測定できた。更に、表2に示すように、3Dスフェロイド培養を微小パターン形成設計と組み合わせた本開示の方法は、9個の低クリアランス化合物の生体外固有クリアランスデータを生成したが、上記データは、実際の2倍以内が44%、及び実際の3倍以内が67%という生体内肝クリアランスの予測の精度を有していた。対照的に、2D単層を利用した方法は、同じ9個の低クリアランス化合物に関して、実際の2倍以内が33%、及び実際の3倍以内が44%という生体内クリアランスの予測の精度を有する生体外固有クリアランスデータしか生成しなかった。よって、低クリアランス薬剤候補の生体内クリアランス又は半減期を高い信頼性で予測できない、大半の現行の生体外肝臓モデルとは異なり、本開示のデータは、本発明の方法により、他の用途の中でもとりわけ、低クリアランス化合物の正確な生体外固有クリアランスデータの調査及び生成、従って特に上述のような低クリアランス化合物を用いた場合の生体内クリアランスのより正確な予測が可能となることを実証している。対照的に、浮遊フォーマットで成長させたPHHでは、ワルファリン(図8A)、メロキシカム(図8B)、トルブタミド(図8C)、ジアゼパム(図8D)、グリメピリド(図8E)、アルプラゾラム(図8F)、プレドニゾロン(図8G)、リルゾール(図8H)、及びボリコナゾール(図8I)といった古典的な低クリアランス化合物を測定できなかった。
1つ以上の低クリアランス候補化合物と肝細胞との相互作用を評価するためのアッセイ法であって、上記アッセイ法は:
肝細胞を細胞培養用物品中で培養してスフェロイドを形成するステップであって、ここで上記細胞培養用物品はチャンバを備え、上記チャンバは、マイクロキャビティのアレイを備え、各上記マイクロキャビティは、肝細胞スフェロイドを形成するために、3Dスフェロイド形態で成長するように肝細胞に制約を与えるような構造を有し、上記チャンバの各上記マイクロキャビティは:
上部アパーチャ;及び底面を備える液体非透過性底部であって、上記底部の少なくとも一部分は、上記底面内又は上記底面上に低接着性又は非接着性材料を含む、液体非透過性底部
を備える、ステップ;
3D肝細胞スフェロイドを上記1つ以上の低クリアランス候補化合物と接触させるステップ;並びに
上記1つ以上の候補化合物の生体外固有クリアランスを測定するステップ
を含む、アッセイ法。
上記培養は長期間培養である、実施形態1に記載のアッセイ法。
上記長期間培養は、少なくとも約12時間、少なくとも約24時間、少なくとも約48時間、少なくとも約72時間、少なくとも約96時間、少なくとも約7日、少なくとも約14日、少なくとも約21日、又は少なくとも約28日にわたる、実施形態2に記載のアッセイ法。
上記底面を備える上記液体非透過性底部は、ガス透過性である、実施形態1に記載のアッセイ法。
上記底面は凹状の底面を備える、実施形態1に記載のアッセイ法。
上記底部の少なくとも一部分は透明である、実施形態1に記載のアッセイ法。
上記凹面は、半球面、側壁から上記底面への30~約60°のテーパを有する円錐面、又はこれらの組み合わせを含む、実施形態5に記載のアッセイ法。
上記チャンバの各上記マイクロキャビティは更に側壁を備える、実施形態1に記載のアッセイ法。
上記側壁の表面は、垂直な円筒、上記チャンバの上部から底面に向かって直径が減少する垂直な円錐の一部分、上記凹状の底面に向かう円錐状移行部分を有する垂直な四角形シャフト、又はこれらの組み合わせを備える、実施形態8に記載のアッセイ法。
上記細胞培養用物品は1~約2,000個の上記チャンバを備え、各上記チャンバは他のいずれの上記チャンバから物理的に隔てられている、実施形態1に記載のアッセイ法。
上記1つ以上の低クリアランス候補化合物の上記生体外固有クリアランスは、上記1つ以上の低クリアランス候補化合物の消失によって測定される、実施形態1に記載のアッセイ法。
上記1つ以上の低クリアランス候補化合物の上記生体外固有クリアランスは、上記1つ以上の低クリアランス候補化合物からの代謝産物の形成によって測定される、実施形態1に記載のアッセイ法。
測定された上記1つ以上の低クリアランス候補化合物の上記生体外固有クリアランスを利用して、上記1つ以上の低クリアランス候補化合物の生体内半減期を予測する、実施形態1に記載のアッセイ法。
上記1つ以上の低クリアランス候補化合物の上記生体外固有クリアランスを利用して、上記1つ以上の低クリアランス候補化合物の生体内クリアランスを予測する、実施形態1に記載のアッセイ法。
上記1つ以上の低クリアランス候補化合物の代謝産物を分析するステップを更に含み、上記代謝産物は、上記1つ以上の低クリアランス候補化合物を用いた上記3Dスフェロイド肝細胞のインキュベーション中に生成される、実施形態1に記載のアッセイ法。
上記1つ以上の候補化合物の上記代謝産物を分析する上記ステップは、上記1つ以上の低クリアランス候補化合物を用いた上記3Dスフェロイド肝細胞のインキュベーション中に生成された上記1つ以上の候補化合物の上記代謝産物の同定を含む、実施形態15に記載のアッセイ法。
上記1つ以上の候補化合物の上記代謝産物を分析する上記ステップは、上記1つ以上の低クリアランス候補化合物を用いた上記3Dスフェロイド肝細胞のインキュベーション中に生成された上記1つ以上の候補化合物の上記代謝産物の定量化を含む、実施形態15に記載のアッセイ法。
上記3Dスフェロイド肝細胞に対する上記1つ以上の低クリアランス候補化合物の分子的、生化学的、又は遺伝的影響を分析するステップを更に含む、実施形態1に記載のアッセイ法。
上記3Dスフェロイド肝細胞に対する上記1つ以上の低クリアランス候補化合物の上記分子的、生化学的、又は遺伝的影響を分析する上記ステップは、上記1つ以上の低クリアランス候補化合物を用いた上記3Dスフェロイド肝細胞のインキュベーション中に、上記3Dスフェロイド肝細胞によって産生されたDNA、RNA、及び/又はタンパク質を測定するステップを含む、実施形態18に記載のアッセイ法。
上記肝細胞は初代ヒト肝細胞を含む、実施形態1に記載のアッセイ法。
上記肝細胞は肝細胞株を含む、実施形態1に記載のアッセイ法。
複数の候補化合物を同時に評価するステップを更に含む、実施形態1に記載のアッセイ法。
上記3Dスフェロイド肝細胞は、少なくとも3週間にわたって機能的に安定している、実施形態1に記載のアッセイ法。
上記3Dスフェロイド肝細胞の機能的安定性は、代謝活性、細胞機能、遺伝子発現、又はこれらの組み合わせを測定することによって決定される、実施形態23に記載のアッセイ法。
上記機能的安定性は、CYP3A4活性によって測定される、実施形態24に記載のアッセイ法。
25 3D肝細胞スフェロイド
101 ウェル
105 中心軸
106 液体非透過性底面、底面
110 ウェルのアレイ、空間
112 マイクロキャビティのアレイ
113 側壁
114 移行ゾーン
115、420 マイクロキャビティ
116 液体非透過性底面、凹状弓形底面、最下点、底部
118 上部アパーチャ
119 底面、丸底、底部
121 側壁
130 保護層
201 関心対象の細胞
203 成長
205 低クリアランス候補化合物
418 上部アパーチャ
419 底面
421 側壁
Claims (10)
- 1つ以上の低クリアランス候補化合物と肝細胞との相互作用を評価するためのアッセイ法であって、前記アッセイ法は:
a)肝細胞を、1つ以上のチャンバを備える細胞培養用物品中で培養して、前記チャンバ内の培地中に複数の3Dスフェロイド肝細胞を形成するステップであって、ここで、
前記チャンバは、その底部に複数のマイクロキャビティのアレイを備え、各マイクロキャビティは、側壁;上部アパーチャ;及び少なくとも一部分が低接着性又は非接着性材料からなる凹状表面を備える液体非透過性底部を備え、各マイクロキャビティ内で肝細胞が3Dスフェロイド形態で成長するように制約を与える構造を有する、ステップ;
b)前記チャンバ内の培地中の複数の3Dスフェロイド肝細胞を前記1つ以上の低クリアランス候補化合物と接触させるステップであって、該接触は、
前記複数の3Dスフェロイド肝細胞を含む前記チャンバに、前記低クリアランス候補化合物を添加した後、インキュベーションすることを含み;並びに
c)前記1つ以上の低クリアランス候補化合物の生体外固有クリアランスを測定するステップであって、該測定は、
インキュベーション開始時および少なくとも1回、所定時間経過時に、前記1つ以上の低クリアランス候補化合物の添加された前記チャンバから培地をサンプリングし、各サンプル中の前記1つ以上の低クリアランス候補化合物の量を測定すること、および
前記サンプル中の前記1つ以上の低クリアランス候補化合物の測定量に基づいて、前記1つ以上の低クリアランス候補化合物の生体外固有クリアランスを計算すること
を含む、アッセイ法。 - 前記凹状表面を備える前記液体非透過性底部は、ガス透過性であるか;
前記側壁は不透明であるか;
前記底部の少なくとも一部分は透明であるか;又は
これらの組み合わせ
である、請求項1に記載のアッセイ法。 - 前記凹面は、半球面、側壁から前記底面への30~60°のテーパを有する円錐面、又はこれらの組み合わせを含む、請求項1又は2に記載のアッセイ法。
- 前記側壁の表面は、垂直な円筒、前記チャンバの上部から底面に向かって直径が減少する垂直な円錐の一部分、前記凹状の底面に向かう円錐状移行部分を有する垂直な四角形シャフト、又はこれらの組み合わせを備える、請求項1~3のいずれか1項に記載のアッセイ法。
- 前記細胞培養用物品は1~2,000個の前記チャンバを備え、各前記チャンバは他のいずれの前記チャンバから物理的に隔てられている、請求項1~4のいずれか1項に記載のアッセイ法。
- 前記1つ以上の低クリアランス候補化物の前記生体外固有クリアランスは、前記1つ以上の低クリアランス候補化合物の消失によって測定されるか;
前記1つ以上の低クリアランス候補化合物の前記生体外固有クリアランスは、前記1つ以上の低クリアランス候補化合物からの代謝産物の形成によって測定される、請求項1~5のいずれか1項に記載のアッセイ法。 - 測定された前記1つ以上の低クリアランス候補化合物の前記生体外固有クリアランスを利用して、前記1つ以上の低クリアランス候補化合物の生体内半減期を予測するか;
前記1つ以上の低クリアランス候補化合物の前記生体外固有クリアランスを利用して、前記1つ以上の低クリアランス候補化合物の生体内クリアランスを予測する、請求項1~5のいずれか1項に記載のアッセイ法。 - 前記チャンバは、25~1000個のマイクロキャビティのアレイを含む、請求項1~7のいずれか1項に記載のアッセイ法。
- 複数の低クリアランス候補化合物を同時に評価するステップを更に含む、請求項1~8のいずれか1項に記載のアッセイ法。
- 前記肝細胞は、初代ヒト肝細胞又は肝細胞株を含むか;
前記3Dスフェロイド肝細胞は、少なくとも3週間にわたって機能的に安定しているか;
前記3Dスフェロイド肝細胞の機能的安定性は、代謝活性、細胞機能、遺伝子発現、若しくはこれらの組み合わせを測定することによって決定されるか;
前記機能的安定性は、CYP3A4活性によって測定されるか;又は
これらの組み合わせ
である、請求項1~9のいずれか1項に記載のアッセイ法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201862642447P | 2018-03-13 | 2018-03-13 | |
US62/642,447 | 2018-03-13 | ||
PCT/US2019/021771 WO2019178039A1 (en) | 2018-03-13 | 2019-03-12 | High density 3d hepatocyte spheroid platform for drug adme studies |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2021518110A JP2021518110A (ja) | 2021-08-02 |
JP7385585B2 true JP7385585B2 (ja) | 2023-11-22 |
Family
ID=66102753
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2020548969A Active JP7385585B2 (ja) | 2018-03-13 | 2019-03-12 | 薬剤adme研究のための高密度3d肝細胞スフェロイドプラットフォーム |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20210018492A1 (ja) |
EP (1) | EP3765848A1 (ja) |
JP (1) | JP7385585B2 (ja) |
CN (1) | CN111868524A (ja) |
WO (1) | WO2019178039A1 (ja) |
Families Citing this family (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US9790465B2 (en) | 2013-04-30 | 2017-10-17 | Corning Incorporated | Spheroid cell culture well article and methods thereof |
SG11201703493SA (en) | 2014-10-29 | 2017-05-30 | Corning Inc | Cell culture insert |
JP6930914B2 (ja) | 2014-10-29 | 2021-09-01 | コーニング インコーポレイテッド | 灌流バイオリアクタ・プラットフォーム |
US11857970B2 (en) | 2017-07-14 | 2024-01-02 | Corning Incorporated | Cell culture vessel |
JP7245222B2 (ja) | 2017-07-14 | 2023-03-23 | コーニング インコーポレイテッド | 手動又は自動で培地を交換するための3d細胞培養容器 |
WO2019014610A1 (en) | 2017-07-14 | 2019-01-17 | Corning Incorporated | CELL CULTURE CONTAINER FOR 3D CULTURE AND METHODS OF CULTURING 3D CELLS |
CN111065729B (zh) | 2017-07-14 | 2024-04-26 | 康宁股份有限公司 | 细胞培养容器 |
JP7171695B2 (ja) | 2018-07-13 | 2022-11-15 | コーニング インコーポレイテッド | 液体培地送達面を含む側壁を有するマイクロキャビティ皿 |
WO2020013845A1 (en) | 2018-07-13 | 2020-01-16 | Corning Incorporated | Cell culture vessels with stabilizer devices |
CN111065725B (zh) | 2018-07-13 | 2024-03-29 | 康宁股份有限公司 | 包括具有互联的壁的微板的流体装置 |
CN116783276A (zh) * | 2020-12-28 | 2023-09-19 | 分子装置(奥地利)有限公司 | 用于细胞培养的微孔板孔 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2008545410A (ja) | 2005-05-24 | 2008-12-18 | ザ レジェンツ オブ ザ ユニヴァースティ オブ カリフォルニア | 微小規模のマイクロパターン化インビトロ操作・作製組織 |
JP2016520307A (ja) | 2013-04-30 | 2016-07-14 | コーニング インコーポレイテッド | スフェロイド細胞培養ウェル製品およびその方法 |
WO2017083727A1 (en) | 2015-11-11 | 2017-05-18 | Colorado State University Research Foundation | Compositions and methods for increasing hepatocyte functional lifetime in vitro |
JP2017536817A (ja) | 2014-10-29 | 2017-12-14 | コーニング インコーポレイテッド | 細胞培養インサート |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
AU749410B2 (en) * | 1997-04-30 | 2002-06-27 | Regents Of The University Of Minnesota | In vivo use of recombinagenic oligonucleobases to correct genetic lesions in hepatocytes |
WO2002026942A2 (en) * | 2000-09-25 | 2002-04-04 | Walter Reed Army Institute Of Research | Human liver cell line |
AU2013303012B2 (en) * | 2012-08-15 | 2017-04-27 | Neostem Oncology, Llc | Rapid method production high purity cancer stem cells and population of high purity cancer stem cells |
-
2019
- 2019-03-12 US US16/980,189 patent/US20210018492A1/en active Pending
- 2019-03-12 JP JP2020548969A patent/JP7385585B2/ja active Active
- 2019-03-12 WO PCT/US2019/021771 patent/WO2019178039A1/en unknown
- 2019-03-12 EP EP19717017.8A patent/EP3765848A1/en active Pending
- 2019-03-12 CN CN201980019191.7A patent/CN111868524A/zh active Pending
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2008545410A (ja) | 2005-05-24 | 2008-12-18 | ザ レジェンツ オブ ザ ユニヴァースティ オブ カリフォルニア | 微小規模のマイクロパターン化インビトロ操作・作製組織 |
JP2016520307A (ja) | 2013-04-30 | 2016-07-14 | コーニング インコーポレイテッド | スフェロイド細胞培養ウェル製品およびその方法 |
JP2017536817A (ja) | 2014-10-29 | 2017-12-14 | コーニング インコーポレイテッド | 細胞培養インサート |
WO2017083727A1 (en) | 2015-11-11 | 2017-05-18 | Colorado State University Research Foundation | Compositions and methods for increasing hepatocyte functional lifetime in vitro |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
Matthew G Baron et al.,PloS One,2017年01月03日,Vol. 12, No. 1:e0168837,p. 1-13 |
Takako Ohkura et al.,Drug Metab. Pharmacokinet.,2014年,Vol. 29, No. 5,p. 373-378 |
Yaowen Liu et al.,Polymers,2017年06月10日,Vol. 9, No. 215,p. 1-14 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP3765848A1 (en) | 2021-01-20 |
WO2019178039A1 (en) | 2019-09-19 |
CN111868524A (zh) | 2020-10-30 |
US20210018492A1 (en) | 2021-01-21 |
JP2021518110A (ja) | 2021-08-02 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7385585B2 (ja) | 薬剤adme研究のための高密度3d肝細胞スフェロイドプラットフォーム | |
US11976263B2 (en) | Cell culture insert | |
CA2788575C (en) | Hanging drop devices, systems and/or methods | |
JP5438319B2 (ja) | 方法 | |
US20160281061A1 (en) | Tissue array for cell spheroids and methods of use | |
Chao et al. | SpheroidChip: patterned agarose microwell compartments harboring HepG2 spheroids are compatible with genotoxicity testing | |
US11390836B2 (en) | Chip platforms for microarray 3D bioprinting | |
WO2009095666A1 (en) | Microtrench and tumour proliferation assay | |
US20190242881A1 (en) | 3D Cell Viability Assay | |
WO2014143998A1 (en) | Systems and methods for culturing epithelial cells | |
Kroll et al. | Quantifying the probing and selection of microenvironmental pores by motile immune cells | |
Strube et al. | Gravity‐enforced microtissue engineering | |
Boos | Microfluidic co-culture platforms for advanced embryotoxicity testing in vitro | |
KR20220155172A (ko) | 세포 침습 비율을 이용한 세포이동 측정방법 | |
Mittal | Micropatterned cell arrays for detecting DNA damage |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20220309 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20221024 |
|
A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20230118 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20230125 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20230425 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20230626 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230724 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20231011 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20231110 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7385585 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |