JP7376331B2

JP7376331B2 - 分岐脂肪酸の代謝制御方法

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Publication number: JP7376331B2
Application number: JP2019212465A
Authority: JP
Inventors: 弘樹雉鳥; 啓文伊澤
Original assignee: Kao Corp
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Priority date: 2019-11-25
Filing date: 2019-11-25
Publication date: 2023-11-08
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Description

本発明は、分岐脂肪酸の代謝制御方法に関する。
本発明は、例えば生物学、生化学、生理科学、消費者使用製品の分野において、分岐脂肪酸の代謝を制御する方法に関する。

例えば消費者使用製品の分野では、近年、消費者の生活環境への関心の高まりから、身の回りの不快臭の低減又は除去が望まれている。下着、タオル及びハンカチ等の人の皮膚と直接接触するような繊維製品、又は皮脂を含んだ汗や角質などを吸収若しくはこれらが付着する可能性のある繊維製品は、特有の臭いを生ずることがある。

これまでに、不快臭の原因物質を生成する原因菌（微生物）の細胞内で起こる、不快臭の原因物質への代謝反応を制御することで、臭いの生成を抑制する方法が検討されてきた。
例えば、特許文献１には、皮脂汚れ成分が生乾き臭原因物質の１種である４－メチル－３－ヘキセン酸への変換されるのを抑制する剤として、特定の構造を有するケトン化合物が開示されている。
また、特許文献２には、β－グルコニダーゼの活性を阻害し、尿臭の生成を抑制する剤として、特定の構造を有する大環状ケトン化合物が開示されている。
さらに、安息香酸などの特定の構造を有する有機カルボン酸を使用し、微生物を殺菌することで臭いの生成を抑制する技術も知られている。

また、微生物制御方法の一つとして、微生物バイオフィルムの生成抑制に関して、特許文献３には、炭素数８～１４の直鎖又は分岐鎖のアルキル基又はアルケニル基を有する特定のアルコール又はそのＥＯ付加物を、特定濃度で微生物と接触させる、バイオフィルムの生成抑制方法が記載されている。

特開２０１２－１２７０１２号公報国際公開第２００９／０３７８６１号特開２００９－０７８９８７号

例えば、消費者使用製品における課題は次の通りである。種々の微生物が分岐脂肪酸を基質とする代謝により不快臭の原因物質を生成することが知られている。そのような微生物を殺菌して不快臭を抑制することは可能であるが、環境や身体などに存在する有用菌も殺菌してしまうおそれがある。すなわち、環境との共存や健常な肌の維持の観点から、とりわけ微生物を殺菌することなく、不快臭生成の抑制の検討が必要な場合がある。

そこで本発明は、微生物内での分岐脂肪酸の代謝を制御する方法、そして分岐脂肪酸の代謝による生成物の生成量を制御する、分岐脂肪酸の代謝制御方法を提供することを課題とする。
例えば、消費者使用製品の分野において、本発明は、不快臭の原因となる微生物を殺菌することなく、微生物が分岐脂肪酸を基質とする代謝により不快臭の原因物質を生成することを制御できる、分岐脂肪酸の代謝制御方法を提供する。

本発明は、微生物に、（ａ）下記一般式（１）で表される化合物から選ばれる１種以上の化合物〔以下、（ａ）成分という〕と（ｂ）脂肪酸合成酵素の阻害剤〔以下、（ｂ）成分という〕を接触させて、当該微生物の分岐脂肪酸の代謝を制御する、分岐脂肪酸の代謝制御方法に関する。
ＲＯ－（Ｃ_２Ｈ_４Ｏ）_ｎ－Ｈ（１）
〔式中、Ｒは、炭素数９以上１６以下の直鎖脂肪族炭化水素基であり、ｎは０又は１である。〕

また、本発明は、（ａ）前記一般式（１）で表される化合物から選ばれる１種以上の化合物及び（ｂ）脂肪酸合成酵素の阻害剤を含有する、微生物における分岐脂肪酸の代謝制御剤に関する。

本発明の分岐脂肪酸の代謝制御方法又は代謝制御剤によれば、分岐脂肪酸の微生物内での代謝の程度を制御することができる。とりわけ、分岐脂肪酸の微生物内でのβ酸化の程度、又は分岐脂肪酸の微生物内への取り込みの程度を制御することができる。

必ずしも限定されるものではないが、分岐脂肪酸の代謝制御方法又は代謝制御剤による、分岐脂肪酸の代謝制御の機構について、本発明者は、以下の様に考えている。
分岐脂肪酸は、微生物の細胞膜を通過する工程と、細胞膜内に取り込まれた分岐脂肪酸がβ酸化により代謝され代謝生成物を生成する工程とを経て代謝されると考えられる。（ａ）成分である前記一般式（１）で表される化合物は、対応する脂肪酸よりも速く微生物内に取り込まれることが考えられる。取り込まれた前記一般式（１）で表される化合物は、菌体内でアルコールデヒドロゲナーゼによる酸化、次いでアシルCoAシンセターゼによる修飾を受け、前記一般式（１）に対応する脂肪酸-CoAへ変換される。生成した脂肪酸-CoAが、脂肪酸の代謝・合成酵素の転写調節タンパクであるＦａｄＲへ作用し、菌体外に存在する分岐脂肪酸の微生物内への取り込み、そして代謝を抑制していると考えている。一般式（１）で表される化合物の微生物内への取り込みと代謝の制御により、分岐脂肪酸の代謝が制御されることは、従来、当業界では知られていなかった。しかしながら、ＦａｄＲが活性化されると、脂肪酸伸長酵素が活性化される為に、微生物内で長鎖脂肪酸が生成し、長鎖脂肪酸の量が増加する。生成した長鎖脂肪酸は、ＦａｄＲの不活化因子となるため、ＦａｄＲが不活化し、菌体外脂肪酸の取込・代謝を開始してしまう。本発明の（ｂ）成分である、脂肪酸合成酵素の阻害剤が、脂肪酸合成酵素の反応を阻害し、ＦａｄＲの不活化を防ぐため、本発明の（ａ）成分の効果が高まる。微生物の代謝を制御する方法として、例えば微生物の数を減少させて、分岐脂肪酸の代謝を低下させる方法が一般的に考えられる。しかしながら、本発明のように、微生物の数を実質維持しつつ、微生物内の分岐脂肪酸の代謝の度合いを調整できる方法は知られていなかった。
また、分岐の脂肪族アルコールのように直鎖の炭化水素基を持たない化合物は、直鎖の炭化水素基を持つ前記一般式（１）で表される化合物、例えば直鎖の脂肪族アルコールよりも、菌体内での酸化工程から脂肪酸-CoAの生成工程が起こりにくく、分岐脂肪酸の微生物内への取り込みや代謝を十分に制御できないものと推定している。

＜（ａ）成分＞
本発明の方法で用いる（ａ）成分は、下記一般式（１）で表される化合物から選ばれる１種以上の化合物である。
ＲＯ－（Ｃ_２Ｈ_４Ｏ）_ｎ－Ｈ（１）
〔式中、Ｒは、炭素数９以上１６以下の直鎖脂肪族炭化水素基であり、ｎは０又は１である。〕

（ａ）成分は市販のものを用いてもよい。あるいは、アルコールやエーテルを製造する通常の方法で（ａ）成分を合成することもできる。（ａ）成分は２種以上を用いてもよい。

一般式（１）中、Ｒは、炭素数９以上１６以下の直鎖脂肪族炭化水素基であり、分岐脂肪酸の代謝をより制御する観点、とりわけ分岐脂肪酸の代謝を抑制する観点から、好ましくは炭素数１０以上であり、より好ましくは炭素数１１以上であり、更に好ましくは炭素数１２以上であり、そして同じ観点から、好ましくは炭素数１５以下であり、より好ましくは炭素数１４以下である。直鎖脂肪族炭化水素基は、直鎖アルキル基が好ましく、直鎖第１級アルキル基が好ましい。
一般式（１）中、分岐脂肪酸の代謝をより制御する観点、とりわけ分岐脂肪酸の代謝を抑制する観点から、ｎは０が好ましい。

（ａ）成分の質量当たりの分岐脂肪酸の代謝制御効果、とりわけ分岐脂肪酸の代謝を抑制する観点から、前記（ａ）成分中の、Ｒが炭素数１２又は１３である化合物の割合は、好ましくは３０質量％以上であり、より好ましくは５０質量％以上であり、更に好ましくは６０質量％以上であり、より更に好ましくは７０質量％以上であり、より更に好ましくは８０質量％以上であり、より更に好ましくは９０質量％以上であり、より更に好ましくは９５質量％以上であり、より更に好ましくは９７質量％以上であり、そして、１００質量％以下であり、１００質量％であってよい。

（ａ）成分の質量当たりの分岐脂肪酸の代謝制御効果、とりわけ分岐脂肪酸の代謝を抑制する観点から、前記（ａ）成分中の、Ｒが炭素数９以上１６以下の直鎖飽和脂肪族炭化水素基である化合物の含有量は、好ましくは５０質量％以上であり、更に好ましくは６０質量％以上であり、より更に好ましくは７０質量％以上であり、より更に好ましくは８０質量％以上であり、より更に好ましくは９０質量％以上であり、より更に好ましくは９５質量％以上であり、より更に好ましくは９７質量％以上であり、そして、１００質量％以下であり、１００質量％であってよい。

前記Ｒは、分岐脂肪酸の代謝を制御する観点、とりわけ分岐脂肪酸の代謝を抑制する観点から、炭素数１２又は１３の直鎖飽和脂肪族炭化水素基から選ばれる１種以上の基が好ましい。
（ａ）成分の質量当たりの分岐脂肪酸の代謝制御効果、とりわけ分岐脂肪酸の代謝を抑制する観点から、前記（ａ）成分中の、Ｒが炭素数１２又は１３の直鎖飽和脂肪族炭化水素基である化合物の含有割合は、好ましくは５０質量％以上であり、更に好ましくは６０質量％以上であり、より更に好ましくは７０質量％以上であり、より更に好ましくは８０質量％以上であり、より更に好ましくは９０質量％以上であり、より更に好ましくは９５質量％以上であり、より更に好ましくは９７質量％以上であり、そして、１００質量％以下であり、１００質量％であってよい。

前記一般式（１）において、ｎが０である（ａ）成分の具体的な化合物の例としては、１－ノニルアルコール、１－デカノール、１－ウンデカノール、１－ドデカノール、１－トリデカノール、１－テトラデカノール、１－ペンタデカノール及び１－ヘキサデカノールから選ばれる１種以上の化合物が挙げられる。分岐脂肪酸の代謝を制御する観点、とりわけ分岐脂肪酸の代謝を抑制する観点から、（ａ）成分は、好ましくは１－デカノール、１－ウンデカノール、１－ドデカノール、１－トリデカノール、１－テトラデカノール及び１－ペンタデカノールから選ばれる１種以上の化合物であり、より好ましくは１－ドデカノール、１－トリデカノール及び１－テトラデカノールから選ばれる１種以上の化合物であり、（ａ）成分は、更に好ましくは１－ドデカノール及び１－トリデカノールから選ばれる１種以上の化合物である。また、より低い量で分岐脂肪酸の代謝を制御する観点、とりわけ分岐脂肪酸の代謝を抑制する観点から、（ａ）成分は、好ましくは１－ドデカノール及び１－トリデカノールから選ばれる１種以上の化合物であり、より好ましくは１－ドデカノールである。

前記一般式（１）において、ｎが１である（ａ）成分の具体例としては、エチレングリコールモノ－１－ドデシルエーテル、エチレングリコールモノ－１－トリデシルエーテル及びエチレングリコールモノ－１－テトラデシルエーテルから選ばれる１種以上の化合物が挙げられる。分岐脂肪酸の代謝を制御する観点、とりわけ分岐脂肪酸の代謝を抑制する観点から、前記一般式（１）において、ｎが１である（ａ）成分は、好ましくはエチレングリコールモノ－１－ドデシルエーテル及びエチレングリコールモノ－１－トリデシルエーテルから選ばれる１種以上の化合物であり、より好ましくはエチレングリコールモノ－１－ドデシルエーテルである。

＜（ｂ）成分＞
（ｂ）成分は脂肪酸合成酵素の阻害剤である。微生物の細胞内の脂肪酸は、脂肪酸合成酵素により生体内で合成される場合がある。脂肪酸合成酵素には一般的に、細胞質に存在するタイプ１（ＦＡＳ－Ｉ）と、ミトコンドリアに存在するタイプ２（ＦＡＳ－II）が知られている。様々な化合物が脂肪酸合成酵素を阻害することが分かっており、本発明での使用に関し好適である。脂肪酸合成酵素の阻害剤を選択することは当業者の技術範囲内である。脂肪酸合成酵素を阻害する化合物は、精製脂肪酸合成酵素を用いてその化合物の脂肪酸合成酵素活性阻害能力を試験することで同定できる。例えば,Dilsら（1975年）Meth.Enzymol.35巻、p.74～83、に記載の方法で同定できる。脂肪酸合成酵素の阻害剤は、例えば国際特許出願公開WO94/02108号に例示されている。

（ｂ）成分として、好ましい化合物は、下記（ｂ１）成分、（ｂ２）成分、（ｂ３）成分及び（ｂ４）成分から選ばれる１種以上の化合物が挙げられる。
（ｂ１）成分：ジフェニルエーテル基を有する化合物
（ｂ２）成分：チオラクトマイシン又はチオラクトマイシン誘導体
（ｂ３）成分：セルレニン又はセルレニン誘導体
（ｂ４）成分：α－メチレン－γ－ブチロラクトン又はα－メチレン－γ－ブチロラクトン誘導体
より低い量で分岐脂肪酸の代謝抑制効果が得やすい観点から、（ｂ１）成分が好ましい。

〔（ｂ１）成分〕
（ｂ１）成分は、ジフェニルエーテル基を有する化合物である。脂肪酸合成酵素の阻害効果がより高い観点から、好ましい（ｂ１）成分は、フェニル基の水素原子の少なくとも一つ以上が、水酸基を有する化合物であり、より好ましくは、フェニル基の水素原子の二つ以上が、水酸基及びクロロ基を有する化合物であることが好ましい。より具体的な（ｂ１）成分としては、４－４’－ジクロロ－２－ヒドロキシジフェニルエーテル（ジクロサン）及び２，４，４’－トリクロロ－２’－ヒドロキシジフェニルエーテル（トリクロサン）から選ばれる１種以上の化合物であることが好ましい。

〔（ｂ２）成分〕
（ｂ２）成分は、チオラクトマイシン又はチオラクトマイシン誘導体である。チオラクトマイシン誘導体はチオラクトマイシンと構造的に関連しており、そして少なくとも測定可能量の脂肪酸合成酵素の阻害活性を保持している化合物を意味する。チオラクトマイシン又はチオラクトマイシン誘導体の非限定的な例としては、Ｗａｎｇら（１９８４年）ＴｅｔｒａｈｄｒｏｎＬｅｔｔ．２５巻、５２４３～５２４６ページ、Ｏｉｓｈｉら（１９８２年）Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ３５巻、３９１～３９５ページおよびＫｒｅｍｅｒら（２０００年）、Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．２７５巻、１６８５７～１６８６４ページに記載されている。

〔（ｂ３）成分〕
（ｂ３）成分は、セルレニン又はセルレニン誘導体である。構造的には［２Ｒ，３Ｓ］－２，３－エポキシ－４－オキソ－７，１０－ｔｒａｎｓ，ｔｒａｎｓ－ドデカン酸アミドとして特徴づけられる。セルレニン誘導体は、セルレニンと構造的に関連しており、そして少なくとも測定可能量の脂肪酸合成酵素の阻害活性を保持している化合物を意味する。セルレニンおよびセルレニン誘導体の例としては、Ｍｏｒｉｓａｋｉら（１９９２年）Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．４０巻、２９４５～２９５３ページ、Ｓｈｉｍａｚａｗａら（１９９２年）Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．４０巻、２９５４～２９５７ページ、および米国特許第５５３９１３２号に記載のものが挙げられる。
アルコール
〔（ｂ４）成分〕
（ｂ４）成分は、α－メチレン－γ－ブチロラクトン又はα－メチレン－γ－ブチロラクトン誘導体である。α－メチレン－γ－ブチロラクトン誘導体は、それぞれのα－メチレン－γ－ブチロラクトンと構造的に関連しており、そして少なくとも測定可能量の脂肪酸合成酵素の阻害活性を有している化合物を意味する。α－メチレン－γ－ブチロラクトン誘導体は、例えば、米国特許第５９８１５７５号に記載のものが挙げられる。

（ｂ）成分は、前記（ｂ１）成分、及び（ｂ３）成分から選ばれる１種以上の化合物が好ましく、前記（ｂ１）成分から選ばれる１種以上の化合物がより好ましい。（ｂ）成分は、より具体的には、４－４’－ジクロロ－２－ヒドロキシジフェニルエーテル（ジクロサン）、２，４，４’－トリクロロ－２’－ヒドロキシジフェニルエーテル（トリクロサン）及びセルレニンから選ばれる１種以上の化合物であることが好ましい。

＜微生物＞
本発明の対象とする微生物は分岐脂肪酸の代謝能を有する微生物であり、それらは環境中に存在する一般的な微生物に見出すことができる。例えば、嫌気性細菌、好気性細菌及び酵母から選ばれる１種以上の微生物が挙げられる。

本発明は、環境中に存在する一般的な微生物に対して用いることができる。微生物としては、例えば、グラム陰性細菌、グラム陽性細菌及び酵母から選ばれる１種以上の微生物が挙げられる。

グラム陰性菌として、モラクセラ（Moraxella）属細菌、アシネトバクター（Acinetobacter）属細菌、シェードモナス（Pseudomonas）属細菌、スフィンゴモナス（Sphingomonas）属細菌、ラルストニア（Ralstonia）属細菌、キュープリアビダス（Cupriavidus）属細菌、サイクロバクター（Psychorobacter）属細菌、セラチア（Serratia）属細菌、エシェリキア（Escherichia）属細菌、ブルクホルデリア（Burkholderia）属細菌、が挙げられる。

モラクセラ（Moraxella）属細菌としては、例えばモラクセラ・エスピー（Moraxella sp．）、モラクセラ・オスロエンシス（Moraxella osloensis）が挙げられる。アシネトバクター（Acinetobacter）属細菌として、アシネトバクター・レイディオレジステンス（Acinetobacter radioresistens）、アシネトバクター・ジュニイ（Acinetobacter junii）、アシネトバクター・カルコアセティカス（Acinetobacter calcoaceticus）が挙げられる。シェードモナス（Pseudomonas）属細菌としては、シュードモナス・アルカリゲネス（Pseudomonas alcaligenes）が挙げられる。スフィンゴモナス（Sphingomonas）属細菌としては、スフィンゴモナス・ヤノイクヤエ（Sphingomonas yanoikuyae）が挙げられる。ラルストニア（Ralstonia）属細菌としては、ラルストニア・エスピー（Ralstonia sp.）が挙げられる。キュープリアビダス（Cupriavidus）属細菌としては、キュープリアビダス・オキサラティカス（Cupriavidus oxalaticus）が挙げられる。

サイクロバクター（Psychorobacter）属細菌としては、サイクロバクター・パシフィセンシス（Psychrobacter pacificensis）、サイクロバクター・グラシンコラ（Psychrobacter glacincola）が挙げられる。セラチア（Serratia）属細菌としては、セラチア・マルセセンス（Serratia marcescens）が挙げられる。エシェリキア（Escherichia）属細菌としては、エシェリキア・コーライ（Escherichia coli）が挙げられる。ブルクホルデリア（Burkholderia）属細菌としては、ブルクホルデリア・セパシア（Burkholderia cepacia）が挙げられる。

グラム陽性菌として、バチルス（Bacillus）属細菌、スタフィロコッカス（Staphylococcus）属細菌、マイクロコッカス（Micrococcus）属細菌、コリネバクテリウム（Corynebacterium）属細菌が挙げられる。

バチルス（Bacillus）属細菌としては、バチルス・セレウス（Bacillus cereus）、バチルス・サブティリス（Bacillus subtilis）が挙げられる。スタフィロコッカス（Staphylococcus）属細菌としては、スタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus）が挙げられる。マイクロコッカス（Micrococcus）属細菌としては、マイクロコッカス・ルテウス（Micrococcus luteus）、マイクロコッカス・ライレ（Micrococcus lylae）、マイクロコッカス・アロエベラ（Micrococcus aloeverae）が挙げられる。コリネバクテリウム（Corynebacterium）属細菌としては、コリネバクテリウム・キセロシス（Corynebacterium xerosis）が挙げられる。

酵母として、サッカロマイセス（Saccaromyces）属酵母、及びロドトルラ（Rhodotorula）属酵母等が挙げられる。

サッカロマイセス（Saccaromyces）属酵母としては、サッカロマイセス・セレビジエ（Saccaromyces cerevisiae）が挙げられる。ロドトルラ（Rhodotorula）属酵母としては、ロドトルラ・ムシラギノーサ（Rhodotorula mucilaginosa）、ロドトルラ・スルーフィエ（Rhodotorula slooffiae）が挙げられる。

＜分岐脂肪酸＞
本発明の分岐脂肪酸の代謝制御方法は、微生物の代謝系において、脂肪酸合成系の代謝に適用することができる。例えば、本発明の分岐脂肪酸の代謝制御方法は、微生物による分岐脂肪酸のβ酸化を抑制する方法であってよい。生体内でのβ酸化は、脂肪酸代謝において脂肪酸を酸化して脂肪酸アシルＣｏＡを生成し、アセチルＣｏＡを取り出す代謝経路であり、脂肪酸代謝の３つのステージ（β酸化、クエン酸回路、電子伝達系）の最初の段階に該当する。

分岐脂肪酸としては、例えば、炭素数９以上２１以下の分岐脂肪酸が挙げられる。本発明の効果がより得られる観点から、分岐脂肪酸の炭素数は、好ましくは１１以上であり、より好ましくは１３以上であり、更に好ましくは１５以上であり、より更に好ましくは１７以上であり、そして同じ観点から、より好ましくは１９以下である。また、本発明の効果がより得られる観点から、分岐脂肪酸は、好ましくは炭素数１１以上２１以下の飽和又は不飽和の分岐脂肪酸であり、より好ましくは炭素数１３以上１９以下の飽和又は不飽和の分岐脂肪酸であり、より更に好ましくは炭素数１５以上１９以下の飽和又は不飽和の分岐脂肪酸である。

分岐脂肪酸としては、例えば、１０－メチル脂肪酸、イソ脂肪酸及びアンテイソ脂肪酸から選ばれる１種以上の分岐脂肪酸が挙げられる。
また、分岐脂肪酸としては、分岐鎖としてメチル基を１つ以上有する分岐脂肪酸が挙げられる。

１０－メチル脂肪酸としては、総炭素数が１５以上１８以下の１０－メチル脂肪酸が挙げられる。具体的には、１０－メチルペンタデカン酸、１０－メチルヘキサデカン酸、１－メチルヘプタデカン酸、１０－メチルオクタデカン酸が挙げられる。

イソ脂肪酸とは、脂肪酸のω端の１つ前、すなわちω－１の炭素にメチルの枝別れがついた脂肪酸として知られている。イソ脂肪酸としては、総炭素数１０以上２４以下の炭素数を有するイソ脂肪酸が挙げられる。本発明の代謝制御方法でより制御されやすい観点で、総炭素数１２以上１８以下の炭素数を有するイソ脂肪酸が挙げられる。

アンテイソ脂肪酸は、末端メチル基から数えて３番目の炭素にメチル基が置換したアンテイソ型の分岐脂肪酸として知られている。アンテイソ脂肪酸としては、総炭素数９以上２３以下の炭素数を有するアンテイソ脂肪酸が挙げられる。本発明の代謝制御方法でより制御されやすい観点で、総炭素数１３以上２１以下の炭素数を有するアンテイソ脂肪酸が挙げられる。

アンテイソ脂肪酸としては、より具体的には、６－メチルオクタン酸、８－メチルデカン酸、１２－メチルテトラデカン酸、１４－メチルヘキサデカン酸、１６－メチルオクタデカン酸、１４－メチルヘキサデセン酸、１６－メチルオクタデセン酸及びこれらの塩から選ばれる１種以上の分岐脂肪酸が挙げられる。

分岐脂肪酸は塩であってよく、塩としては、アルカリ金属塩、例えばカリウム塩、ナトリウム塩、アルカリ土類金属塩、例えばマグネシウム塩、カルシウム塩から選ばれる１種以上の塩が挙げられる。

＜分岐脂肪酸の代謝制御方法＞
分岐脂肪酸の代謝とは、微生物内において、別の化合物に変換される工程を意味する。代謝には、分岐脂肪酸が微生物に取り込まれる工程や、取り込まれた分岐脂肪酸が、例えばβ酸化により代謝され、各種化合物を生成する工程も含まれる。例えば、炭素数１７のアンテイソ脂肪酸が微生物内に取り込まれ、代謝されると、系中の分岐脂肪酸の量は低減して、別の化合物に変換される。炭素数１７のアンテイソ脂肪酸が微生物内で代謝されると、例えば、４－メチル－３－ヘキセン酸（以下、４Ｍ３Ｈともいう）、４－メチルヘキサン酸（以下、４ＭＨともいう）、２－メチル酪酸（以下、２ＭＢＡともいう）などが代謝物として生成される。４Ｍ３Ｈには、下記に示すようにシス体、トランス体が存在するが、本発明においては、そのいずれの構造の化合物も包含する。４Ｍ３Ｈ、４ＭＨ及び２ＭＢＡは、いずれも不快臭の原因物質として知られている。

また、炭素数１５のイソ脂肪酸が微生物内で代謝されると、例えばイソ吉草酸などが代謝物として生成される。

次に、本発明の代謝制御方法について説明する。
本発明の代謝制御方法は、微生物に、（ａ）成分及び（ｂ）成分を接触させて、当該微生物の分岐脂肪酸の代謝を制御するものである。

微生物と（ａ）成分及び（ｂ）成分の接触時間は、微生物の代謝を制御する程度によって適宜決めることができる。微生物の代謝の制御をより大きくする観点から、接触時間は、好ましくは１分以上であり、より好ましくは５分以上であり、更に好ましくは１０分以上であり、より更に好ましくは３０分以上であり、より更に好ましくは１時間以上であり、そして、好ましくは７２時間以下であり、より好ましくは４８時間以下であり、更に好ましくは２４時間以下である。本発明では、（ａ）成分及び（ｂ）成分の一方を微生物に接触させた後、（ａ）成分及び（ｂ）成分の他方を微生物に接触させてもよいが、（ａ）成分及び（ｂ）成分が共存する状態で前記範囲の接触時間となることが好ましい。

本発明の代謝制御方法では、微生物、（ａ）成分、（ｂ）成分及び水を接触させることが好ましい。すなわち、本発明の分岐脂肪酸の代謝制御方法は、（ａ）成分と（ｂ）成分と水と微生物が接触する方法に適用することができる。それぞれが接触する順番は制限されない。微生物、（ａ）成分、（ｂ）成分及び水を接触させる方法としては、例えば、
（Ｉ）（ａ）成分、（ｂ）成分及び水を含む組成物と、微生物とを接触させる方法、
（II）水及び微生物を含む混合物と、（ａ）成分及び（ｂ）成分を含む混合物とを接触させる方法、
（III）（ａ）成分と（ｂ）成分と微生物が存在する部位に水を接触させる方法、
（IV）水及び微生物を含む混合物と、（ａ）成分と（ｂ）成分を別々又は同時に接触させる方法、
（Ｖ）（ａ）成分及び水を含む組成物と、微生物と（ｂ）成分とを別々又は同時に接触させる方法、
（VI）（ｂ）成分及び水を含む組成物と、微生物と（ａ）成分とを別々又は同時に接触させる方法、
などが挙げられる。

前記（Ｉ）の方法の例としては、例えば（ａ）成分と（ｂ）成分と水を含む組成物を微生物に対して噴霧又は塗布する方法、（ａ）成分と（ｂ）成分と水を含む組成物に微生物を浸漬する方法が挙げられる。組成物を噴霧する方法としては、例えばスプレイヤー等の噴霧器を用いて噴霧する方法が挙げられる。組成物を塗布する方法としては、塗布に用いる用具、例えば、（ａ）成分と（ｂ）成分と水を含む組成物を含ませた木綿繊維や化繊繊維で構成されたシート状の用具やロールオンタイプの道具と、微生物を接触させて、微生物に（ａ）成分と（ｂ）成分と水を含む組成物を塗布する方法が挙げられる。

微生物、（ａ）成分、（ｂ）成分及び水を接触させることで、（ａ）成分と（ｂ）成分と水と微生物とが混在する状態になっていてもよい。（ａ）成分と（ｂ）成分と水と微生物とが混在する状態は、（ａ）成分と（ｂ）成分と水と微生物を含む液体の状態であってもよく、また、そのような液体が固体の表面に存在する状態であってもよい。固体は、繊維製品、硬質物品などの物品や、皮膚、毛髪などの身体の部位などであってもよい。繊維製品の素材としては特に制限はなく、ウール、シルク、木綿等の天然素材、ポリエステル、ポリアミド等の化学繊維、及びこれらの組合せのいずれであってもよい。本発明において、繊維製品の素材は木綿であることが好ましい。繊維製品は未使用であっても、一度以上使用した使用済のものでもよい。繊維製品は、湿気ないし水分を含んだものでもよいし、乾燥を十分に行ったものであってもよい。硬質表面としては、ガラス、金属、プラスチック、陶器であってもよい。

前記の（II）、（III）に記載の方法を固体の表面で行う場合に、（ａ）成分と（ｂ）成分を固体上に存在させる方法としては、例えば、（ａ）成分及び（ｂ）成分の効果を阻害しない範囲で、（ａ）成分、（ｂ）成分以外の任意の成分と共に固体の表面に存在させても良い。具体的には、有機溶剤、（ａ）成分以外の界面活性剤が挙げられる。有機溶剤としては、水酸基を有する有機溶剤、例えば炭素数１以上７以下の１価以上６価以下のアルコールが挙げられる。界面活性剤としては、例えば、アニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、ノニオン界面活性剤〔但し、（ａ）成分を除く。〕及び両性界面活性剤から選ばれる１種以上の界面活性剤が挙げられる。

本発明の代謝制御方法は、分岐脂肪酸の存在下で（ａ）成分と（ｂ）成分とを微生物に接触させることが好ましい。分岐脂肪酸は微生物が代謝可能なものが好ましい。分岐脂肪酸としては、例えば、前記の炭素数９以上２１以下の分岐脂肪酸が挙げられる。この分岐脂肪酸も、アンテイソ型の分岐脂肪酸及びイソ型の分岐脂肪酸から選ばれる１種以上の脂肪酸が好ましい。
分岐脂肪酸の存在下で（ａ）成分及び（ｂ）成分を微生物に接触させる代謝制御方法の例として、例えば、
（Ｘ１）分岐脂肪酸と（ａ）成分と（ｂ）成分とが共存する箇所に、微生物を接触させる方法、
（Ｘ２）（ａ）成分と（ｂ）成分と微生物が共存する箇所に、分岐脂肪酸を接触させる方法、
（Ｘ３）分岐脂肪酸と微生物が共存する箇所に、（ａ）成分と（ｂ）成分とを接触させる方法
などが挙げられる。分岐脂肪酸の代謝をより制御する観点、とりわけ分岐脂肪酸の代謝をより抑制する観点から、好ましくは前記の（Ｘ１）及び（Ｘ２）から選ばれる１種以上の方法であり、より好ましくは、（Ｘ１）の方法である。

本発明の代謝制御方法は、微生物による分岐脂肪酸の代謝を抑制する方法であることが好ましい。更に、本発明の代謝制御方法は、（ａ）成分と（ｂ）成分と微生物が接触した場合と（ａ）成分と（ｂ）成分と微生物が接触しない場合において微生物の生菌数の変化が少なく微生物が代謝する分岐脂肪酸の量を抑制する方法であることが好ましい。本発明では、微生物の生菌数が、（ａ）成分と（ｂ）成分の接触前後で実質的に維持されていることが好ましい。本発明において、微生物の生菌数が「実質的に維持されている」とは、例えば、（ａ）成分と（ｂ）成分と微生物が接触しない場合の微生物の生菌数の対数値（１）と、（ａ）成分と（ｂ）成分と微生物が接触した場合の微生物の生菌数の対数値（２）との差である、対数値（１）－対数値（２）が－１以上２未満であることであってよい。前記の対数値の差は、一般的に殺菌活性値ないし静菌活性値と呼ばれることもあり、殺菌性を有する又は抗菌性を有するとは、各々殺菌性試験又は抗菌性試験において、例えば、ＪＩＳＬ１９０２：２０１５において、殺菌活性値又は静菌活性値が２．２以上であると定義されている。本発明においては、（ａ）成分及び（ｂ）成分による過度の殺菌が行われないことが好ましいことから、例えば、殺菌活性値ないし静菌活性値が－１以上２未満、好ましくは－０．５以上１未満、より好ましくは０以上０．８以下、更に好ましくは０以上０．７以下である場合を、微生物の生菌数が「実質的に維持されている」としてよい。

本発明の分岐脂肪酸の代謝制御方法の一例として、微生物に、（ａ）成分、（ｂ）成分、炭素数９以上２１以下の分岐脂肪酸及び有機溶媒を含有する処理液を接触させて、当該微生物の分岐脂肪酸の代謝を制御する、分岐脂肪酸の代謝制御方法が挙げられる。
前記微生物は、モラクセラ（Moraxella）属細菌、マイクロコッカス（Micrococcus）属細菌、エシェリキア（Escherichia）属細菌、スタフィロコッカス（Staphylococcus）属細菌、コリネバクテリウム（Corynebacterium）属細菌及びロドトルラ（Rhodotorula）属酵母から選ばれる１種以上の微生物が好ましい。
（ａ）成分は、前記一般式（１）において、ｎが０である化合物が好ましい。
（ｂ）成分は、下記（ｂ１）成分、（ｂ２）成分、（ｂ３）成分及び（ｂ４）成分から選ばれる１種以上の化合物、更に下記（ｂ１）成分、及び（ｂ３）成分から選ばれる１種以上の化合物、更に下記（ｂ１）成分から選ばれる１種以上の化合物、更に４－４’－ジクロロ－２－ヒドロキシジフェニルエーテル（ジクロサン）、２，４，４’－トリクロロ－２’－ヒドロキシジフェニルエーテル（トリクロサン）及びセルレニンから選ばれる１種以上の化合物が好ましい。
（ｂ１）成分：ジフェニルエーテル基を有する化合物
（ｂ２）成分：チオラクトマイシン又はチオラクトマイシン誘導体
（ｂ３）成分：セルレニン又はセルレニン誘導体
（ｂ４）成分：α－メチレン－γ－ブチロラクトン又はα－メチレン－γ－ブチロラクトン誘導体
前記処理液は、（ａ）成分の含有量が１０ｐｐｍ以上１０質量％以下が好ましい。
前記処理液は、（ｂ）成分の含有量が０．０１ｐｐｍ以上１０ｐｐｍ以下が好ましい。
前記処理液は、前記分岐脂肪酸の含有量が１ｐｐｍ以上１質量％以下が好ましい。
前記処理液は、有機溶媒が残部であることが好ましい。有機溶媒はメタノールが好ましい。
前記処理液の接触時間は、１分以上６４時間以下が好ましい。前記の（ａ）成分と微生物が接触している間、本発明の効果を得ることができる。本発明を適用する技術分野に合わせて、接触時間を適宜変えることができる。
前記処理液の接触温度は、１℃以上４５℃以下が好ましく、本発明の効果が得られやすい観点から、好ましくは５℃以上であり、より好ましくは１０℃以上であり、そして同じ観点から、好ましくは４０℃以下であり、より好ましくは３５℃以下である。
前記微生物と水とを含む混合物に、前記処理液を接触させてもよい。

本発明は、（ａ）成分及び（ｂ）成分を含有する、微生物における分岐脂肪酸の代謝制御剤を提供する。本発明の代謝制御剤は、微生物における分岐脂肪酸の代謝制御の有効成分として（ａ）成分及び（ｂ）成分を含有するものである。本発明の代謝制御剤には、本発明の分岐脂肪酸の代謝制御方法で述べた事項を適宜適用することができる。例えば、（ａ）成分、（ｂ）成分の具体例及び好ましい態様なども、本発明の分岐脂肪酸の代謝制御方法と同じである。

本発明の分岐脂肪酸の代謝制御剤は、（ａ）成分及び（ｂ）成分からなる剤であってもよい。また、本発明の分岐脂肪酸の代謝制御剤は、（ａ）成分、（ｂ）成分以外の任意の成分〔以後、（ｃ）成分と称する。〕と併用しても良い。（ｃ）成分としては、（ｃ１）溶剤、（ｃ２）（ａ）成分以外の界面活性剤が挙げられる。（ｃ１）溶剤としては、水及び有機溶剤から選ばれる１種以上の化合物が挙げられる。水としては、イオン交換水、蒸留水、水道水、カルシウムやマグネシウム等の硬度成分を含む水であってもよい。有機溶剤としては、本発明の分岐脂肪酸の代謝制御効果をより高める観点から、水酸基を有する有機溶剤であることが好ましい。水酸基を有する有機溶剤としては、炭素数１以上７以下の１価以上６価以下のアルコールが挙げられる。具体例としては、炭素数１以上７以下の１価のアルコール、例えばメタノール、エタノール、イソプロパノールが挙げられる。また、炭素数２以上７以下の２価のアルコール、例えばエチレングリコール、プロピレングリコール、へキシレングリコールが挙げられる。また、炭素数３以上７以下の３価のアルコール、例えばグリセリン、１，２，３－プロパントリオールが挙げられる。炭素数５以上７以下の４価以上６価以下のアルコール、例えばペンタエリスリトール、糖アルコールが挙げられる。また、（ｃ２）の界面活性剤としては、アニオン界面活性剤、ノニオン界面活性剤、両性界面活性剤及びカチオン界面活性剤から選ばれる１種以上の界面活性剤が挙げられる。

試験例、比較試験例に用いた化合物を以下に示す。
［代謝制御剤］
＜（ａ）成分＞
Ｃ１２ＯＨ：１－ドデカノール

＜（ｂ）成分＞
・ダイクロサン
・トリクロサン
・セルレニン

＜（ｂ’）成分：（ｂ）成分の比較化合物＞
・ＣＣＣＰ：カルボニルシアニド－ｍ－クロロフェニルヒドラゾン
ＣＣＣＰは、脱共役剤として知られており、脂肪酸合成酵素は阻害しない化合物である。

＜分岐脂肪酸＞
１４－メチルヘキサデカン酸：ＳＩＧＭＡ－ＡＬＤＲＩＣＨ製

＜試験例及び比較試験例＞
モラクセラ（Moraxella）属細菌による１４－メチルヘキサデカン酸の代謝抑制及び代謝生成物の抑制について、以下の方法で試験を行った。結果を表１～４に示した。

（１）１４－メチルヘキサデカン酸の代謝抑制
ＳＣＤ－ＬＰ寒天培地（日本製薬）にＭｏｒａｘｅｌｌａｏｓｌｏｅｎｓｉｓ（衣類分離株）を３７℃で２４時間前培養し、イオン交換水で１／２０に希釈したＮＢ液体培地（Ｄｉｆｃｏ）を用いて１０^６（ＣＦＵ／ｍｌ）となるよう菌懸濁液を調製した。
滅菌した木綿平織布３ｃｍ×３ｃｍに対して、１４－メチルヘキサデカン酸（ＳＩＧＭＡ－ＡＬＤＲＩＣＨ）を溶解させたメタノール溶液を滴下し布へ付着させた。１４－メチルヘキサデカン酸の付着量は、木綿平織布１枚当たり１０μｇ（１００μｇ／布ｇ）となるように設定した。さらに、（ａ）成分を溶解させたメタノール溶液、次いで（ｂ）成分又は（ｂ’）成分を溶解させたメタノール溶液を１４－メチルヘキサデカン酸が付着している布に滴下し、その後１時間乾燥させた。前記メタノール溶液は、（ａ）成分又は（ｂ）成分の量が表に記載の通りとなるように滴下した。この布を滅菌済Ｎｏ３スクリュー管（マルエム）に入れ、前記の菌懸濁液１００μｌを植菌して、３７℃条件下で２１時間培養を行った。

培養後のスクリュー管に、メタノール３ｍｌを添加し３０分間超音波照射下で抽出を行った（２０℃）。抽出液をトリメチルシリルジアゾメタン・ヘキサン溶液（富士フイルム和光純薬）と９：１（体積比）で混合し、室温暗所条件下で一晩放置させた。その後にＧＣを用いて布上に残留している１４－メチルヘキサデカン酸の定量を行った。ＧＣによる定量条件を下記に示す。
・ＧＣ：Ａｇｉｌｅｎｔ６８９０Ｎ
・ＧＣカラム：ＡｇｉｌｅｎｔＤＢ－１３０ｍ×２５０μｍ×０．２５μｍ
・昇温条件：５０℃（３分ホールド）－（１０℃／分）－３００℃（５分ホールド）
・サンプル注入量：１μｌ
・スプリット比：１：１２
・検出器：ＦＩＤ

代謝制御剤を添加した布における培養後の１４－メチルヘキサデカン酸の残存量を定量し、代謝制御剤を添加しない場合（対照）の１４－メチルヘキサデカン酸の残存量に対する比を算出して、代謝抑制率（％）とした。数値が高い方が、代謝をより抑制していることを表す。なお、代謝抑制率は下記式で求めた。
代謝抑制率（％）＝〔１－（１００－Ａ）／（１００－Ｂ）〕×１００
Ａ：基準、試験例、又は比較試験例の１４－メチルヘキサデカン酸の残存量（μｇ／布ｇ）
Ｂ：対照の１４－メチルヘキサデカン酸の残存量（μｇ／布ｇ）
対照は、（ａ）成分、（ｂ）成分又は（ｂ’）成分を添加しない例であり、基準１－１、基準２－１、基準３－１、基準４－１が該当する（以下同様）。これらの対照では、代謝抑制率は０％となる。

（２）代謝生成物の抑制
上記（１）と同じ方法で準備した布を培養後、メタノール３ｍｌを添加して３０分間超音波照射下で抽出を行った（２０℃）。抽出液をフナコシ社のＡＤＡＭ試薬（１０００ｐｐｍメタノール溶液）と１：１（体積比）で混合し、室温暗所条件下で一晩放置させた。その後にＨＰＬＣを用い、１４－メチルヘキサデカン酸の代謝生成物として４－メチル－３－ヘキセン酸の定量を行った。定量条件を下記に示す。
代謝生成物の定量条件
ＬＣ：ＨＩＴＡＣＨＩＥＬＩＴＥＬａＣｈｒｏｍ
カラム：ＺｏｒｂａｘＣ８４．６×２５０ｍｍ
溶離液：アセトニトリル６１％（ｖ／ｖ）、水３９％（ｖ／ｖ）
カラム温度：４０℃
サンプル注入量：１０μL
流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ
検出：ＦＬＤＥｘ．３６５ｎｍ、Ｅｍ．４１２ｎｍ

代謝制御剤を添加した布における培養後の４－メチル－３－ヘキセン酸の生成量を定量し、代謝制御剤を添加しない場合（対照）の４－メチル－３－ヘキセン酸の生成量に対する比を算出して、代謝生成物抑制率（％）とした。数値が高い方が、代謝をより抑制していることを表す。なお、代謝生成物抑制率は下記式で求めた。対照である基準１－１、基準２－１、基準３－１、基準４－１では、代謝生成物抑制率は０％となる。
代謝生成物抑制率（％）＝１００×〔（Ｄ－Ｃ）／Ｄ〕
Ｃ：基準、試験例、又は比較試験例の代謝生成物の生成量（μｇ／布ｇ）
Ｄ：対照の代謝生成物の生成量（μｇ／布ｇ）

（３）生菌数の測定
上記（１）と同じ方法で準備した布を培養後、９ｍＬのＬＰ希釈液（日本製薬社製）を加えて１０分間超音波下で菌の抽出を行った。抽出液をＳＣＤ－ＬＰ寒天培地（日本製薬）にて混釈後、３７℃にて培養を１日間行った。それぞれの布について得られたコロニー数を計測し、その常用対数値を生菌数として測定した。代謝制御剤を添加しない場合の微生物の生菌数の対数値（１）と代謝制御剤を添加した場合の微生物の生菌数の対数値（２）との差である、対数値（１）－対数値（２）が－１以上２未満であることが代謝制御剤の接触の有無で生菌数に変化がなく、微生物の生菌数が維持されていることを意味する。また、値が０により近いほど、微生物の生菌数がより維持されていることを意味する。

試験例１～３の結果を表１～表３に示す。また、（ｂ）成分の代わりに脱共役剤である（ｂ’）成分であるカルボニルシアニド－ｍ－クロロフェニルヒドラゾンを用いた比較試験例の結果を表４に示す。

上記表中、例えば、表１において、基準１－１は、対象物の一例として用いた繊維製品上に、所定量の分岐脂肪酸と微生物が共存するが、代謝制御剤であるＣ１２ＯＨとダイクロサンを用いておらず、代謝抑制率と代謝生成物抑制率はいずれも０％となる。
表１において、基準１－２は、ダイクロサンを共存させるが、Ｃ１２ＯＨの共存はない場合の値を記載している。比較試験例１－１は、ダイクロサンは共存しないが、Ｃ１２ＯＨが共存した場合の値を記載している。試験例１－１は、ダイクロサンとＣ１２ＯＨのいずれも共存する場合の値を記載している。ここで、分岐脂肪酸の代謝抑制率を見てみると、基準１－２（（ｂ）成分のみ）と比較試験例１－１（（ａ）成分のみ）の値を合計すると、７％＋３３％で４０％になるが、実施例である試験例１－１（（ａ）成分と（ｂ）成分）は６１％であり、前記合計の４０％よりも高く、ダイクロサンとＣ１２ＯＨの相乗効果により、より高い値となっている。試験例１－１の代謝生成物抑制率も、同様に相乗的な向上が確認できる。実施例である試験例１－２、試験例１－３も同様であり、代謝抑制率と代謝生成物抑制率の相乗的な向上が確認できる。
表２～３の実施例である各試験例についても、同様に、代謝抑制率と代謝生成物抑制率の相乗的な向上が確認できる。

Claims

微生物に、（ａ）下記一般式（１）で表される化合物から選ばれる１種以上の化合物〔以下、（ａ）成分という〕と（ｂ）脂肪酸合成酵素の阻害剤〔以下、（ｂ）成分という〕を接触させて、当該微生物の分岐脂肪酸の代謝を抑制する、分岐脂肪酸の代謝抑制方法。
ＲＯ－（Ｃ_２Ｈ_４Ｏ）_ｎ－Ｈ（１）
〔式中、Ｒは、炭素数９以上１６以下の直鎖脂肪族炭化水素基であり、ｎは０又は１である。〕
（ａ）成分と微生物が接触しない場合の微生物の生菌数の対数値（１）と、（ａ）成分と微生物が接触した場合の微生物の生菌数の対数値（２）との差である、対数値（１）－対数値（２）が－１以上２未満である、請求項１に記載の分岐脂肪酸の代謝抑制方法。
分岐脂肪酸の存在下で（ａ）成分と（ｂ）成分とを微生物に接触させる、請求項１又は２に記載の分岐脂肪酸の代謝抑制方法。
前記微生物の分岐脂肪酸の代謝がβ酸化である、請求項１～３の何れかに記載の分岐脂肪酸の代謝抑制方法。
（ａ）下記一般式（１）で表される化合物から選ばれる１種以上の化合物及び（ｂ）脂肪酸合成酵素の阻害剤を含有する、微生物における分岐脂肪酸の代謝抑制剤。
ＲＯ－（Ｃ_２Ｈ_４Ｏ）_ｎ－Ｈ（１）
〔式中、Ｒは、炭素数９以上１６以下の直鎖脂肪族炭化水素基であり、ｎは０又は１である。〕
前記微生物の分岐脂肪酸の代謝がβ酸化である、請求項５に記載の分岐脂肪酸の代謝抑制剤。