JP7326453B2 - スルホン化２（７）－アミノアクリドンおよび１－アミノピレン色素ならびに特に炭水化物分析のための、蛍光タグとしてのそれらの使用 - Google Patents
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Description
本発明は、炭水化物分析のための新規の効率的かつ有利なタグ、特に、還元的アミノ化とそれに続く、クロマトグラフィーによる分離または動電分離、および蛍光検出を用いた親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ－ＦＬＲ、蛍光検出（ＲＰＬＣ－ＦＬＲ）を用いた逆相液体クロマトグラフィー、レーザー誘起蛍光検出を用いたキャピラリー（ゲル）電気泳動（それぞれＣＥ－ＬＩＦ、ＣＧＥ－ＬＩＦ）または他の分離に基づく糖分析方法による蛍光検出を含む方法における、炭水化物分析のための新規の効率的かつ有利なタグをもたらす蛍光色素化合物に関する。クロマトグラフィーによる方法は、高速または超高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣまたはＵＨＰＬＣ）として操作でき、分離に基づくすべての方法は、蛍光検出に代えてまたはそれに加えてのいずれかで、質量分析に連結できる。特徴として、色素－炭水化物コンジュゲートの蛍光極大は、公知の色素タグの蛍光極大と比べて赤色に大きくシフトする（以下で考察する）。
「炭水化物」という用語は、本明細書で使用される場合、キシロース アラビノース、グルコース、ガラクトース、マンノース、フルクトース、フコース、Ｎ－アセチルグルコースアミン、シアル酸などの単糖；ラクトース、スクロース、マルトース、セロビオースなどの（ホモまたはヘテロ）二糖；グリカン（例えば、Ｎ－およびＯ－グリカン）、ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）、フラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）、ミルクオリゴ糖（ＭＯＳ）またはさらには糖脂質の糖部分などの（ホモまたはヘテロ）オリゴ糖；ならびにアミロース、アミロペクチン、セルロース、グリコーゲン、グリコサミノグリカンまたはキチンなどの多糖類に関する全体語である。オリゴ糖および多糖は、直鎖状または（多）分枝状のいずれであってもよい。
複合糖質は、炭水化物（グリコン）が非炭水化物部分（アグリコン）に結合した化合物である。典型的には、アグリコンは、タンパク質（糖タンパク質）または脂質（糖脂質）のいずれかである。より一般的な意味では、複合糖質とは、タンパク質、ペプチド、脂質またはさらには糖類などの任意の他の化学実体に共有結合した炭水化物を意味する。
複合糖質は、性質が構造的および機能的に最も多様な分子を表す。複合糖質の複雑さは、比較的単純な糖脂質から並外れて複雑な複数回グリコシル化されたタンパク質の範囲に及ぶ。炭水化物部分は、一般に、Ｎ－アセチルグルコサミン、Ｎ－アセチルガラクトサミン、マンノース、ガラクトース、フコース、グルコースおよびシアル酸を含むごくわずかな単糖で構成されるが、それらの構造多様性は、タンパク質またはＤＮＡの構造多様性よりもはるかに大きいと考えられる。この多様性の理由は、アノマーの存在および単糖が分枝し、異なる（グリコシド）結合を構築する能力である。したがって、比較的短鎖長のオリゴ糖は、多数の構造異性体を有し得る。さらに、テンプレートとしてＲＮＡに基づくタンパク質生合成とは異なり、ゲノムからグライコーム（定義については次段落を参照されたい）への情報の流れは、複雑で、もはやテンプレート駆動型のプロセスではない。グリカン生合成におけるタンパク質の同時翻訳修飾および翻訳後修飾は、酵素反応によってもたらされる。これは、グリカン（以下のスキーム１に示される）の複雑さおよび構造多様性の劇的な増加につながる。実際問題として、グリカンという用語は、複合糖質の炭水化物部分を指す。グリカン、オリゴ糖および多糖という用語は、同義であり、「中程度から多数のグリコシド結合した単糖からなる化合物」（ＩＵＰＡＣ定義）を意味する。
特定の条件下で細胞が生成する複合糖質の完全なセットを意味するグライコームの構造特徴を説明し、その機能、ならびにＤＮＡおよびタンパク質「機序」とのその「カウンタープレイ」を理解するために、高速、頑強かつ高分解能の生化学分析技術が利用できなくてはならない。
多くの分析技術が、炭水化物を分析するために利用されている。多種多様なオリゴ糖を含有する複合試料は、クロマトグラフィー技術または動電技術によって分離できる。一般的なクロマトグラフィーのモードとしては、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、親水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＬＩＣ）、逆相液体クロマトグラフィー（ＲＰＬＣ）および逆相イオン対クロマトグラフィー（ＲＰＩＰＣ）、ならびに多孔質黒鉛化炭素クロマトグラフィー（ＰＧＣ）が挙げられる。質量分析（ＭＳ）および核磁気共鳴（ＮＭＲ）により、複合オリゴ糖のデノボ構造特徴決定が可能になる。いくつかの技術の組合せ、例えば、ＬＣ－ＮＭＲ、ＬＣ－ＭＳまたはＣＥ－ＭＳが、多くの場合、適用される。特定のグリカンの構造が決定されるとすぐ、その特徴的な性質、例えば、保持時間または泳動時間が作表される。未知の試料について得られたデータを作表されたパラメーターと比較することによって、未知の試料の迅速なスクリーニングおよび評価を実施できる。
動電分離技術は、電場の影響下での荷電粒子の運動に基づき、種々の電気泳動技術を含む。糖分析のための最も重要な動電分離方法は、キャピラリーゾーン電気泳動（ＣＺＥ）およびキャピラリーゲル電気泳動（ＣＧＥ）である。これらの技術は、高分解能、高速分離を同時にもたらし、定量化を可能にする。
レーザー誘起蛍光検出（ｘＣＧＥ－ＬＩＦ）を用いた多重キャピラリーゲル電気泳動は、糖分析のためのとりわけ強力なツールであることが示されている（例えば、Ｒ．Ｈｅｎｎｉｇ、Ｕ．Ｒｅｉｃｈｌ、Ｅ．Ｒａｐｐ、Ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｊ． ２０１１、２８、３３１）。１つの利点は、分離の並列化に起因した非常に高いスループットの分析の可能性を提示する多重キャピラリーアレイ設定を利用することが可能であることである。ｘＣＧＥ－ＬＩＦを使用する別の理由は、ＬＩＦ検出に起因した非常に高い感度である（Ｒ．Ｈｅｎｎｉｇ、Ｄｉｐｌｏｍａ Ｔｈｅｓｉｓ、Ｏｔｔｏ－ｖｏｎ－Ｇｕｅｒｉｃｋｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔａｔ、Ｍａｇｄｅｂｕｒｇ、２０１０）。
キャピラリー電気泳動（ＣＥ）は、動電分離方法のファミリーであり、ＩＵＰＡＣにより「水性または非水性いずれかのバックグラウンド電解液中の荷電種（分析物）の電気泳動移動度の差にのみ基づくキャピラリーで実施される分離技術である」と定義される（Ｍ．－Ｌ．Ｒｉｅｋｋｏｌａ、Ｊ．Ａ．Ｊｏｎｓｓｏｎ、Ｒ．Ｍ．Ｓｍｉｔｈ、Ｐｕｒｅ Ａｐｐｌ．Ｃｈｅｍ．２００４、７６、４４３～４５１も参照されたい）。言い換えると、ＣＥは、非常に薄いキャピラリー内での電気泳動によるイオンの分離を言う。
ＣＧＥは、ＩＵＰＡＣにより「キャピラリーが架橋ゲルで満たされた特別な場合のキャピラリー篩分け電気泳動」として定義される（Ｍ．－Ｌ．Ｒｉｅｋｋｏｌａら、上記も参照されたい）。
化合物の電気泳動移動度は質量対電荷比に依存し、ＣＧＥを用いる場合、ゲルの篩分け効果に起因して、化合物の電気泳動移動度は分子形状にさらに依存する。
一般に、天然炭水化物は、シアル酸、グルクロン酸またはスルホン化もしくはリン酸化単糖単位などの荷電残基を含有するものを除き、大部分が電気的中性であるため、それらの質量対電荷比によって分離できない。
一般に、天然炭水化物は、シアル酸、グルクロン酸またはスルホン化もしくはリン酸化単糖単位などの荷電残基を含有するものを除き、大部分が電気的中性であるため、それらの質量対電荷比によって分離できない。
さらに、天然炭水化物は、蛍光を示さない。したがって、クロマトグラフィーによる分離または動電分離および蛍光検出を介した分析のためには、分析前にオリゴ糖を標識する必要がある（図１）。適切な励起および発光波長（および（動電分離に必要な）追加の電荷）をもたらすこと以外に、色素は、炭水化物へのカップリングに適していなくてはならない（例えば、Ｎ．Ｖ．Ｓｈｉｌｏｖａ、Ｎ．Ｖ．Ｂｏｖｉｎ、Ｒｕｓｓ．Ｊ．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２００３、２９（４）、３３９～３５５を参照されたい。
炭水化物を蛍光色素で標識するための最も一般的で簡単な方法は、還元的アミノ化である。２段階の手順により、炭水化物の還元末端（アセタールまたはアルデヒド基）と第一級アミンとの間に共有結合が生じる。第一級アミンは、フルオロフォアの構造に組み込まれるか、または蛍光色素と連結したリンカーに結合される。
図１は、分離に基づくグリカンの分析の主ステップを示している。グリカンの分析手順は、５つのステップ：試料の調製、グリカンの放出、標識、試料の精製、蛍光検出を用いたクロマトグラフィーによる分離または動電分離、およびデータ評価に分けることができる。以下、技術水準に従うグリカンの標識および標識生成物の検出が、より詳細に記載される。以下のスキーム２は、炭水化物の還元的アミノ化の基本的な反応機序を示している（例えば、Ｎ．Ｖｏｌｐｉ、Ｃａｐｉｌｌａｒｙ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｏｆ ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｓ． Ｆｒｏｍ ｍｏｎｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｔｏ ｃｏｍｐｌｅｘ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、２０１１、１～５１頁を参照されたい）。
還元的アミノ化の最初のステップは、アミン窒素の孤立電子対がその開鎖形態の炭水化物残基（１ｂ）の求電子アルデヒド炭素原子を攻撃する求核付加反応を含む。中間体２から酸触媒により水を排除すると、イミン（３ａ）が得られる。イミン形成は可逆的であるため、イミンは、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、トリアセトキシボロヒドリド、２－ピコリニルボランまたは関連試薬（スキーム２の還元剤）などの水酸化物源による不可逆的酸触媒還元を介して第二級アミン（４）に変換される必要がある。イミニウムイオン３ｂのみが還元される必要があり、一方、炭水化物Ｒ２ＣＨＯ（１ｂ）は、還元に対して非反応性のままでなければならない（それらは、蛍光タグを表すアミンＲ３ＮＨ２とのみ反応する）ため、ボランの性質が重要である。
スキーム２に示される反応順序は、アルデヒドとは反応しない（またはアルデヒドを非常にゆっくり還元する）が、酸性条件下ではイミニウムイオン（３ｂ）を容易に還元する、特別な還元剤（ボラン）の利用可能性および十分な反応性に基づく。酢酸（ｐＫａ＝４．７６）、マロン酸（ｐＫ１
ａ＝２．８３）またはクエン酸（ｐＫ１
ａ＝３．１３）などの弱酸または中程度の強酸が、不可逆的で迅速な還元を達成するためにｐＨ＝３～６でしばしば使用される（Ｋ．Ｒ．Ａｎｕｍｕｌａ、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２００６、３５０、１～２３）。したがって、適用されるアミン（Ｒ３ＮＨ２）は、弱塩基である必要がある（スキーム２において非プロトン化アミンのみがアルデヒド１ｂと反応できるため）。タンパク質では、リジンの脂肪族アミノ基、ヒスチジンの求核窒素原子およびアルギニン残基は、ｐＨ＝３～６でプロトン化され、スキーム２による炭水化物とは反応しない。したがって、３～５のかなり低ｐＫａ値（これらは、共役酸についての値である）の芳香族アミンのみが必要とされ、これは、天然グリカンの還元的アミノ化ための分析試薬として幅広く使用されている。還元的アミノ化、コンジュゲートのクロマトグラフィーによる分離または動電分離、および蛍光による高感度検出を介したグリカンの標識に適用可能な３種の市販の芳香族アミンが以下に示される。
３－アミノピレン－１，６，８－トリスルホン酸（ＡＰＴＳ）は、現在、炭水化物の標識に最も幅広く使用されている試薬である。３つの強酸残基（スルホン酸基）がｐＨ＞２（非常に幅広いｐＨ範囲）で３つの負電荷を導入する。ＡＮＴＳもまた、３つの負電荷を有するが、その吸収極大は過剰に青色シフトされ、したがって、商用の４８８ｎｍレーザーに適合しない。
精製（タンパク質、過剰の電解物、過剰の色素、標識試薬などを除去するため、以下の「実施例」の節の実施例２およびその参考文献にも記載される）後、標識試料は、それぞれクロマトグラフィー用カラム、動電キャピラリーに注入され、分離が実施される。異なる性質（疎水性、質量／電荷、形状など）に起因して、異なる炭水化物は、それぞれそれらの特徴的な保持時間、泳動時間に従って検出器に到達する。
標識炭水化物が蛍光検出器に到達すると、蛍光マーカーが励起され、発光シグナルが検出される。
今日、標識グリカンの「現実の」高スループット分析は、典型的には、市販の多重ＣＧＥシステムで実施される。これらのｘＣＧＥ－ＬＩＦ機器は、荷電分析物（例えば、ＡＰＴＳ標識グリカン）の分離のための多重キャピラリーゲル電気泳動ユニット、レーザーおよび蛍光検出器を含有する。
今日、標識グリカンの「現実の」高スループット分析は、典型的には、市販の多重ＣＧＥシステムで実施される。これらのｘＣＧＥ－ＬＩＦ機器は、荷電分析物（例えば、ＡＰＴＳ標識グリカン）の分離のための多重キャピラリーゲル電気泳動ユニット、レーザーおよび蛍光検出器を含有する。
ＡＰＴＳ以外の他の色素（例えば、ＡＮＴＳおよび５－アミノフルオレセイン）およびそれらの誘導体が、炭水化物のための蛍光タグとして使用され得る。例えば、アクリドン色素は、ＷＯ２００２／０９９４２４Ａ３およびＷＯ２００９／１１２７９１Ａ１に記載されており、これは、７－アミノアクリドン－２－スルホンアミドではない。ＷＯ２０１２／０２７７１７Ａ１は、官能基置換された１，６，８－トリスルホンアミド－３－アミノピレン（ＡＰＴＳ誘導体）、分析物－反応性基、切断可能アンカーおよび多孔質固相を含む系を記載している。ＷＯ２０１０／１１６１４２Ａ２は、各種のフルオロフォアおよび蛍光センサー化合物を記載しており、これは、アミノピレン系色素も包含する。しかしながら、これらの色素のいずれも、特に炭水化物とのコンジュゲートとして、ＡＰＴＳと比較して優れたスペクトル特性および電気泳動特性を有することは示されておらず、提案もされていない。
従来技術の蛍光色素の欠点を鑑み、本発明の主な目的は、ＡＰＴＳと比較して、さらにより高い電気泳動移動度および／またはより高い輝度もしくは他の好都合な分光学的特性などの改善された性質を有する新規蛍光色素を提供することであった。これらの性質は、蛍光検出による動電分離に基づく炭水化物分析のための蛍光タグからの要求が高く、したがって、ここで、優れた性能をもたらすと考えられる。
この目的は、請求項１から１４に記載の複数の負荷電基を有する新規蛍光アクリドンおよびピレン色素、ならびに例えば請求項１８に記載の本開示の新規蛍光色素の使用を提供することによって達成された。本発明のさらなる態様およびより特定の実施形態は、さらなる請求項の主題である。
そのイオン化（脱プロトン化）形態において、本発明の新規蛍光色素は、複数の負荷電残基およびフルオロフォアに結合した、例えばアルゴンイオンレーザーにより励起可能である芳香族アミノまたはヒドラジン基を特徴とする。重要なことに、新規色素およびその炭水化物コンジュゲートは、ＡＰＴＳ標識類似体の極大から大きくシフトした極大を有する光を発する。複数の正味負電荷は、リン酸化誘導体においてとりわけ高く（例えば、－６）、ＡＰＴＳ－複合糖質と比較して、より高い色素－複合糖質の電気泳動移動度をもたらす。
本発明の新規蛍光色素の構造は、以下の一般式Ａ～Ｂ：
［式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、互いに独立しており、
Ｈ、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、直鎖状もしくは分枝状Ｃ３～Ｃ１２、好ましくはＣ３～Ｃ６アルキルもしくはペルフルオロアルキル基、ホスホニル化アルキル基（ＣＨ２）ｍＰ（Ｏ）（ＯＨ）２（式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状もしくは分枝状アルキル鎖を有する）、（ＣＨ２）ｎＣＯＯＨ（式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５）、または（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ６（式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５、Ｒ６は、アルキル、特に、Ｃ１～Ｃ６アルキル、ＣＨ２ＣＮ、ベンジル、フルオレン－９－イル、ポリハロゲノアルキル、ポリハロゲノフェニル、例えば、テトラもしくはペンタフルオロフェニル、ペンタクロロフェニル、２－および４－ニトロフェニル、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリルもしくは他の潜在的に求核反応性の脱離基であってもよい）、スルホン酸アルキル（（ＣＨ２）ｎＳＯ３Ｈ）もしくは硫酸アルキル（（ＣＨ２）ｎＯＳＯ３Ｈ）（式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５、いずれの（ＣＨ２）ｎ中のアルキル鎖も直鎖状もしくは分枝状であってもよい）；
ヒドロキシアルキル基（ＣＨ２）ｍＯＨもしくはチオアルキル基（ＣＨ２）ｍＳＨ（式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状もしくは分枝状アルキル鎖を有する）、リン酸化ヒドロキシアルキル基（ＣＨ２）ｍＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２（式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状もしくは分枝状アルキル鎖を有する）を表してもよく；Ｒ１またはＲ２基のうちの一方は、カーボネートまたはカルバメート誘導体（ＣＨ２）ｍＯＣＯＯＲ７または（ＣＨ２）ｍＮＨＣＯＯＲ７（式中、ｍ＝１～１２、Ｒ７＝メチル、エチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ベンジル、フルオレン－９－イル、ＣＨ２ＣＮ、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリル、フェニル、置換フェニル基、例えば、２－または４－ニトロフェニル、ペンタクロロフェニル、ペンタフルオロフェニル、２，３，５，６－テトラフルオロ－フェニル、２－ピリジル、４－ピリジル、ピリミド－４－イル）；
（ＣＨ２）ｍＮＲａＲｂ（式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有し；Ｒａ、Ｒｂは、互いに独立しており、水素および／またはＣ１～Ｃ４アルキル基を表す）、ヒドロキシアルキル基（ＣＨ２）ｍＯＨ（式中、ｍ＝２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）、リン酸化ヒドロキシアルキル基（ＣＨ２）ｍＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２（式中、ｍ＝２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）；
アルキルアジド（ＣＨ２）ｍＮ３（式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）であってもよく；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、末端アルキルオキシアミノ基（ＣＨ２）ｍＯＮＨ２（式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有し、これは、１つまたは複数のアルキルアミノ（ＣＨ２）ｍＮＨまたはアルキルアミド（ＣＨ２）ｍＣＯＮＨ基を、ｍ＝０～１２のすべての可能な組合せで含み得る）；
（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨＲ８（式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５；Ｒ８＝Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、（ＣＨ２）ｍＮ３または（ＣＨ２）ｍ－Ｎ－マレイミド、（ＣＨ２）ｍ－ＮＨ－ＣＯＣＨ２Ｘ（Ｘ＝ＢｒまたはＩ）、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、（ＣＨ２）ｎ、（ＣＨ２）ｍおよびＲ６中に直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）；
第一級アミノ基を含有してもよく；
さらに、残基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５のうちの１つは、ＣＨ２－Ｃ６Ｈ４－ＮＨ２、ＣＯＣ６Ｈ４－ＮＨ２、ＣＯＮＨＣ６Ｈ４－ＮＨ２またはＣＳＮＨＣ６Ｈ４－ＮＨ２（Ｃ６Ｈ４は、１，２－、１，３－または１，４－フェニレンである）、ＣＯＣ５Ｈ３Ｎ－ＮＨ２またはＣＨ２－Ｃ５Ｈ３Ｎ－ＮＨ２（Ｃ５Ｈ３Ｎは、ピリジン－２，４－ジイル、ピリジン－２，５－ジイル、ピリジン－２，６－ジイルまたはピリジン－３，５－ジイルである）を表してもよく；
さらに、Ｒ ２ －－－Ｒ ３ （Ｒ ４ －－－Ｒ ５ ）は、４、５、６または７員環を形成してもよく、または、環の炭素原子の１つに結合した、第一級アミノ基ＮＨ ２ 、第二級アミノ基ＮＨＲ ａ （式中、Ｒ ａ ＝Ｃ １ ～Ｃ ６ アルキル）、ヒドロキシル基ＯＨ若しくはリン酸化ヒドロキシル基－ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ） ２ を有する若しくは有さない４、５、６もしくは７員環を形成してもよく；
場合により、Ｒ２－－－Ｒ３（Ｒ４－－－Ｒ５）は、４、５、６または７員複素環（この複素環にはＯ、ＮまたはＳなどのさらに１～３個のヘテロ原子が含まれる）を形成してもよく；
さらに、Ｒ１は、非置換フェニル基、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ２、ＮＨＲａ、ＮＲａＲｂ、ＲａＯ、ＲａＳ（式中、ＲａおよびＲｂは、互いに独立しており、直鎖状または分枝炭素鎖を有するＣ１～Ｃ６アルキル基であってもよい）の組から選択される１つまたはいくつかの電子供与体置換基を有するフェニル基、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＨ＝ＣＨＣＮ、ＣＨ＝Ｃ（ＣＮ）２、ＳＯ２Ｒａ、ＣＯＲａ、ＣＯＯＲａ、ＣＨ＝ＣＨＣＯＲａ、ＣＨ＝ＣＨＣＯＯＲａ、ＣＯＮＨＲａ、ＳＯ２ＮＲａＲｂ、ＣＯＮＲａＲｂ（式中、ＲａおよびＲｂは、互いに独立しており、Ｈまたは直鎖状もしくは分枝状炭素鎖を有するＣ１～Ｃ６アルキル基であってもよい）の組から選択される１つまたはいくつかの電子受容体を有するフェニル基を表してもよく；
またはＲ１は、複素芳香族基を表してもよく；
ただし、上記式Ａのすべての化合物において、塩基性条件下、すなわち７＜ｐＨ＜１４で、少なくとも２つ、好ましくは少なくとも３、４、５または６つの負荷電基が存在し、これらの負荷電基は、以下：ＳＨ、ＣＯＯＨ、スルホン酸残基ＳＯ３Ｈ、第一リン酸基ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、第二リン酸基ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒａ（Ｒａ＝Ｃ１～Ｃ４アルキルまたは置換Ｃ１～Ｃ４アルキル）、第一ホスホン酸基Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、第二ホスホン酸基Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒａ（式中、Ｒａ＝Ｃ１～Ｃ４アルキルまたは置換Ｃ１～Ｃ４アルキル）から選択されるイオン化可能基の少なくとも部分的に脱プロトン化された残基を表す］
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、互いに独立しており、
Ｈ、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、直鎖状もしくは分枝状Ｃ３～Ｃ１２、好ましくはＣ３～Ｃ６アルキルもしくはペルフルオロアルキル基、ホスホニル化アルキル基（ＣＨ２）ｍＰ（Ｏ）（ＯＨ）２（式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状もしくは分枝状アルキル鎖を有する）、（ＣＨ２）ｎＣＯＯＨ（式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５）、または（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ６（式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５、Ｒ６は、アルキル、特に、Ｃ１～Ｃ６アルキル、ＣＨ２ＣＮ、ベンジル、フルオレン－９－イル、ポリハロゲノアルキル、ポリハロゲノフェニル、例えば、テトラもしくはペンタフルオロフェニル、ペンタクロロフェニル、２－および４－ニトロフェニル、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリルもしくは他の潜在的に求核反応性の脱離基であってもよい）、スルホン酸アルキル（（ＣＨ２）ｎＳＯ３Ｈ）もしくは硫酸アルキル（（ＣＨ２）ｎＯＳＯ３Ｈ）（式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５、いずれの（ＣＨ２）ｎ中のアルキル鎖も直鎖状もしくは分枝状であってもよい）；
ヒドロキシアルキル基（ＣＨ２）ｍＯＨもしくはチオアルキル基（ＣＨ２）ｍＳＨ（式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状もしくは分枝状アルキル鎖を有する）、リン酸化ヒドロキシアルキル基（ＣＨ２）ｍＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２（式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状もしくは分枝状アルキル鎖を有する）を表してもよく；Ｒ１またはＲ２基のうちの一方は、カーボネートまたはカルバメート誘導体（ＣＨ２）ｍＯＣＯＯＲ７または（ＣＨ２）ｍＮＨＣＯＯＲ７（式中、ｍ＝１～１２、Ｒ７＝メチル、エチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ベンジル、フルオレン－９－イル、ＣＨ２ＣＮ、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリル、フェニル、置換フェニル基、例えば、２－または４－ニトロフェニル、ペンタクロロフェニル、ペンタフルオロフェニル、２，３，５，６－テトラフルオロ－フェニル、２－ピリジル、４－ピリジル、ピリミド－４－イル）；
（ＣＨ２）ｍＮＲａＲｂ（式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有し；Ｒａ、Ｒｂは、互いに独立しており、水素および／またはＣ１～Ｃ４アルキル基を表す）、ヒドロキシアルキル基（ＣＨ２）ｍＯＨ（式中、ｍ＝２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）、リン酸化ヒドロキシアルキル基（ＣＨ２）ｍＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２（式中、ｍ＝２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）；
アルキルアジド（ＣＨ２）ｍＮ３（式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）であってもよく；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、末端アルキルオキシアミノ基（ＣＨ２）ｍＯＮＨ２（式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有し、これは、１つまたは複数のアルキルアミノ（ＣＨ２）ｍＮＨまたはアルキルアミド（ＣＨ２）ｍＣＯＮＨ基を、ｍ＝０～１２のすべての可能な組合せで含み得る）；
（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨＲ８（式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５；Ｒ８＝Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、（ＣＨ２）ｍＮ３または（ＣＨ２）ｍ－Ｎ－マレイミド、（ＣＨ２）ｍ－ＮＨ－ＣＯＣＨ２Ｘ（Ｘ＝ＢｒまたはＩ）、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、（ＣＨ２）ｎ、（ＣＨ２）ｍおよびＲ６中に直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）；
第一級アミノ基を含有してもよく；
さらに、残基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５のうちの１つは、ＣＨ２－Ｃ６Ｈ４－ＮＨ２、ＣＯＣ６Ｈ４－ＮＨ２、ＣＯＮＨＣ６Ｈ４－ＮＨ２またはＣＳＮＨＣ６Ｈ４－ＮＨ２（Ｃ６Ｈ４は、１，２－、１，３－または１，４－フェニレンである）、ＣＯＣ５Ｈ３Ｎ－ＮＨ２またはＣＨ２－Ｃ５Ｈ３Ｎ－ＮＨ２（Ｃ５Ｈ３Ｎは、ピリジン－２，４－ジイル、ピリジン－２，５－ジイル、ピリジン－２，６－ジイルまたはピリジン－３，５－ジイルである）を表してもよく；
さらに、Ｒ ２ －－－Ｒ ３ （Ｒ ４ －－－Ｒ ５ ）は、４、５、６または７員環を形成してもよく、または、環の炭素原子の１つに結合した、第一級アミノ基ＮＨ ２ 、第二級アミノ基ＮＨＲ ａ （式中、Ｒ ａ ＝Ｃ １ ～Ｃ ６ アルキル）、ヒドロキシル基ＯＨ若しくはリン酸化ヒドロキシル基－ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ） ２ を有する若しくは有さない４、５、６もしくは７員環を形成してもよく；
場合により、Ｒ２－－－Ｒ３（Ｒ４－－－Ｒ５）は、４、５、６または７員複素環（この複素環にはＯ、ＮまたはＳなどのさらに１～３個のヘテロ原子が含まれる）を形成してもよく；
さらに、Ｒ１は、非置換フェニル基、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ２、ＮＨＲａ、ＮＲａＲｂ、ＲａＯ、ＲａＳ（式中、ＲａおよびＲｂは、互いに独立しており、直鎖状または分枝炭素鎖を有するＣ１～Ｃ６アルキル基であってもよい）の組から選択される１つまたはいくつかの電子供与体置換基を有するフェニル基、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＨ＝ＣＨＣＮ、ＣＨ＝Ｃ（ＣＮ）２、ＳＯ２Ｒａ、ＣＯＲａ、ＣＯＯＲａ、ＣＨ＝ＣＨＣＯＲａ、ＣＨ＝ＣＨＣＯＯＲａ、ＣＯＮＨＲａ、ＳＯ２ＮＲａＲｂ、ＣＯＮＲａＲｂ（式中、ＲａおよびＲｂは、互いに独立しており、Ｈまたは直鎖状もしくは分枝状炭素鎖を有するＣ１～Ｃ６アルキル基であってもよい）の組から選択される１つまたはいくつかの電子受容体を有するフェニル基を表してもよく；
またはＲ１は、複素芳香族基を表してもよく；
ただし、上記式Ａのすべての化合物において、塩基性条件下、すなわち７＜ｐＨ＜１４で、少なくとも２つ、好ましくは少なくとも３、４、５または６つの負荷電基が存在し、これらの負荷電基は、以下：ＳＨ、ＣＯＯＨ、スルホン酸残基ＳＯ３Ｈ、第一リン酸基ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、第二リン酸基ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒａ（Ｒａ＝Ｃ１～Ｃ４アルキルまたは置換Ｃ１～Ｃ４アルキル）、第一ホスホン酸基Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、第二ホスホン酸基Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒａ（式中、Ｒａ＝Ｃ１～Ｃ４アルキルまたは置換Ｃ１～Ｃ４アルキル）から選択されるイオン化可能基の少なくとも部分的に脱プロトン化された残基を表す］
［式中、
Ｒ１および／またはＲ２は、互いに独立しており、
Ｈ、重水素、アルキルもしくは重水素置換アルキル（アルキル基の１個、いくつかもしくはすべてのＨ原子は重水素で交換されていてもよい）、特に、１～１２個のＣ原子、好ましくは１～６個のＣ原子を有するアルキルもしくは重水素置換アルキル、例えば、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、直鎖状もしくは分枝状Ｃ３～Ｃ１２アルキルもしくはペルフルオロアルキル基、または置換Ｃ２～Ｃ１２アルキル基；特に、（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ３（式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５、Ｒ３は、Ｈ、アルキル、特にＣ１～Ｃ６、ＣＨ２ＣＮ、ベンジル、２－および４－ニトロフェニル、フルオレン－９－イル、ポリハロゲノアルキル、ポリハロゲノ－フェニル、例えば、テトラもしくはペンタフルオロフェニル、ペンタクロロフェニル、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリルまたは他の潜在的に求核反応性の脱離基であってもよく、（ＣＨ２）ｎのアルキル鎖は直鎖状または分枝状であってもよい）を表してもよく；
Ｒ １ －－－Ｒ ２ は、４、５、６または７員非芳香族炭素環を形成してもよく、この炭素環は、環の炭素原子の１つに結合したさらなる第一級アミノ基ＮＨ ２ 、第二級アミノ基ＮＨＲ ａ （式中、Ｒ ａ ＝Ｃ １ ～Ｃ ６ アルキル）、またはヒドロキシル基ＯＨを有する；場合により、Ｒ１－－－Ｒ２は、４、５、６または７員非芳香族複素環（この複素環にはＯ、ＮまたはＳなどのさらなるヘテロ原子が含まれる）を形成してもよく；
ヒドロキシアルキル基（ＣＨ２）ｍＯＨ（式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）；Ｒ１またはＲ２基のうちの一方は、カーボネートまたはカルバメート誘導体（ＣＨ２）ｍＯＣＯＯＲ４または（ＣＨ２）ｍＮＨＣＯＯＲ４（式中、ｍ＝１～１２、Ｒ４＝メチル、エチル、２－クロロエチル、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリル、フェニル基または置換フェニル基、例えば、２－および４－ニトロフェニル、ペンタクロロフェニル、ペンタフルオロフェニル、２，３，５，６－テトラフルオロ－フェニル、２－ピリジルまたは４－ピリジルである）；
（ＣＨ２）ｍＮＲａＲｂ（式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有し；Ｒａ、Ｒｂは、互いに独立しており、Ｈまたは置換されていてもよいＣ１～Ｃ４アルキル基であってもよい）であってもよく、特にＲ１またはＲ２基のうちの一方は、アルキルアジド基（ＣＨ２）ｍＮ３（式中、ｍ＝２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）であってもよく；
Ｒ１またはＲ２のうちの一方は、（ＣＨ２）ｎＳＯ２ＮＲ５ＮＨ２（式中、ｎ＝１～１２であり、置換基Ｒ５は、Ｈ、アルキル、ヒドロキシアルキルまたはペルフルオロアルキル基Ｃ１～Ｃ１２によって表されることができる）であってもよく；
Ｒ１またはＲ２基のうちの一方は、アリールヒドラジンＡｒ－ＮＲ６ＮＨ２（式中、Ａｒは式Ｂの全ピレン残基であり、Ｒ６＝Ｈまたはアルキル）を形成する第一級アミノ基であってもよく；
Ｒ１またはＲ２基のうちの一方は、アリールヒドラジンＡｒ－ＮＲ６ＮＨ２（式中、Ａｒは式Ｂの全ピレン残基であり、Ｒ６＝Ｈまたはアルキル）を形成する第一級アミノ基であってもよく；
Ｒ１またはＲ２基のうちの一方は、アリールヒドロキシルアミンＡｒ－ＮＲ７ＯＨ（式中、Ａｒは式Ｂの全ピレン残基であり、Ｒ７＝Ｈまたはアルキル）を形成するヒドロキシ基であってもよく；
Ｒ１またはＲ２基のうちの一方は、アルキルオキシアミノ基（ＣＨ２）ｎＯＮＨ２（式中、ｎ＝１～１２）であってもよく；
Ｒ１またはＲ２基のうちの一方は、（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ８（式中、ｎ＝１～５、直鎖状または分枝状アルキル鎖（ＣＨ２）ｎを有し、Ｒ８は、Ｈ、直鎖状または分枝状Ｃ１～Ｃ６アルキル、ＣＨ２ＣＮ、２－および４－ニトロフェニル、２，３，５，６－テトラフルオロフェニル、ペンタクロロフェニル、ペンタフルオロフェニル、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾ－トリアゾリルから選択される）であってもよく；
さらに、Ｒ１もしくはＲ２のうちの一方は、（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨＲ９（式中、ｎ＝１～５、Ｒ９＝Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、（ＣＨ２）ｍＮ３、（ＣＨ２）ｍ－Ｎ－マレイミド、（ＣＨ２）ｍ－ＮＨＣＯＣＨ２Ｘ（Ｘ＝ＢｒまたはＩ）、ｍ＝２～６、（ＣＨ２）ｎおよびＲ９中に直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）であってもよい）であってもよく；またはＲ１もしくはＲ２のうちの一方は、ＣＨ２－Ｃ６Ｈ４－ＮＨ２、ＣＯＣ６Ｈ４－ＮＨ２、ＣＯＮＨＣ６Ｈ４－ＮＨ２もしくはＣＳＮＨＣ６Ｈ４－ＮＨ２（Ｃ６Ｈ４は、１，２－、１，３－もしくは１，４－フェニレンである）、ＣＯＣ５Ｈ３Ｎ－ＮＨ２もしくはＣＨ２－Ｃ５Ｈ３Ｎ－ＮＨ２（Ｃ５Ｈ３Ｎは、ピリジン－２，４－ジイル、ピリジン－２，５－ジイル、ピリジン－２，６－ジイルもしくはピリジン－３，５－ジイルである）を表してもよく；またはＲ１もしくはＲ２のうちの一方は、アルキルアジド（ＣＨ）Ｎ３もしくはアルキン、特にプロパルギルであってもよく；
リンカーＬ（色素コアと基Ｘを連結し、色素のスペクトル特性を調節する）は、少なくとも１個の炭素原子を含み、任意の出現において、Ｃ１～Ｃ１２の範囲の長さの直鎖状または分枝状の、アルキル、ヘテロアルキル、特にアルキルオキシ、例えば、ＣＨ２ＯＣＨ２、ＣＨ２ＣＨ２Ｏ ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２、アルキルアミノまたはジアルキルアミノ、特にジエタノールアミンまたはＮ－メチル（アルキル）モノエタノールアミン部分、例えば、Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－およびＮ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－）２、ジフルオロメチル（ＣＦ２）、アルケンまたはアルキン部分を、任意の組合せで含んでもよく；
リンカーＬはまた、カルボニル（ＣＨ２ＣＯ、ＣＦ２ＣＯ）部分も含んでもよく；
Ｘは、特に、ヒドロキシアルキル（ＣＨ２）ｎＯＨ、チオアルキル（（ＣＨ２）ｎＳＨ）、カルボキシアルキル（（ＣＨ２）ｎＣＯ２Ｈ）、スルホン酸アルキル（（ＣＨ２）ｎＳＯ３Ｈ）、硫酸アルキル（（ＣＨ２）ｎＯＳＯ３Ｈ）、リン酸アルキル（（ＣＨ２）ｎＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２）もしくはホスホン酸アルキル（（ＣＨ２）ｎＰ（Ｏ）（ＯＨ）２）（式中、ｎは、０～１２または１～１２の範囲の整数である）、またはその類似体を含む群から選択される部分からなるまたはそれらを含む可溶性および／またはイオン化可能アニオン提供部分を示し、ＣＨ２基の１つまたは複数がＣＦ２によって交換されており、
さらに、アニオン提供部分は、非芳香族Ｏ、ＮおよびＳ含有複素環、例えば、ピペラジン、ピペコリンによって結合されていてもよく、または代替的に基Ｘのうちの１つは、基Ｒ１およびＲ２に関して上で列挙した部分のうちの任意のものを、また基Ｌに関して列挙した任意の種類の結合と共に、他の置換基とは独立して有していてもよく、
ただし、式Ｂによって表されるすべての化合物において、塩基性条件下、すなわち７＜ｐＨ＜１４で、式Ｂの残基Ｘに３または６つの負荷電基が存在し、これらの負荷電基は、以下：ＳＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、ＯＳＯ３Ｈ、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒａ（式中、Ｒａ＝Ｃ１～Ｃ４アルキルまたは置換Ｃ１～Ｃ４アルキル）、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒａ（式中、Ｒａ＝Ｃ１～Ｃ４アルキルまたは置換Ｃ１～Ｃ４アルキル）から選択されるイオン化可能基の少なくとも部分的に脱プロトン化された残基を表す］
の化合物またはその塩からなる群から選択される。
Ｒ１および／またはＲ２は、互いに独立しており、
Ｈ、重水素、アルキルもしくは重水素置換アルキル（アルキル基の１個、いくつかもしくはすべてのＨ原子は重水素で交換されていてもよい）、特に、１～１２個のＣ原子、好ましくは１～６個のＣ原子を有するアルキルもしくは重水素置換アルキル、例えば、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、直鎖状もしくは分枝状Ｃ３～Ｃ１２アルキルもしくはペルフルオロアルキル基、または置換Ｃ２～Ｃ１２アルキル基；特に、（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ３（式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５、Ｒ３は、Ｈ、アルキル、特にＣ１～Ｃ６、ＣＨ２ＣＮ、ベンジル、２－および４－ニトロフェニル、フルオレン－９－イル、ポリハロゲノアルキル、ポリハロゲノ－フェニル、例えば、テトラもしくはペンタフルオロフェニル、ペンタクロロフェニル、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリルまたは他の潜在的に求核反応性の脱離基であってもよく、（ＣＨ２）ｎのアルキル鎖は直鎖状または分枝状であってもよい）を表してもよく；
Ｒ １ －－－Ｒ ２ は、４、５、６または７員非芳香族炭素環を形成してもよく、この炭素環は、環の炭素原子の１つに結合したさらなる第一級アミノ基ＮＨ ２ 、第二級アミノ基ＮＨＲ ａ （式中、Ｒ ａ ＝Ｃ １ ～Ｃ ６ アルキル）、またはヒドロキシル基ＯＨを有する；場合により、Ｒ１－－－Ｒ２は、４、５、６または７員非芳香族複素環（この複素環にはＯ、ＮまたはＳなどのさらなるヘテロ原子が含まれる）を形成してもよく；
ヒドロキシアルキル基（ＣＨ２）ｍＯＨ（式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）；Ｒ１またはＲ２基のうちの一方は、カーボネートまたはカルバメート誘導体（ＣＨ２）ｍＯＣＯＯＲ４または（ＣＨ２）ｍＮＨＣＯＯＲ４（式中、ｍ＝１～１２、Ｒ４＝メチル、エチル、２－クロロエチル、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリル、フェニル基または置換フェニル基、例えば、２－および４－ニトロフェニル、ペンタクロロフェニル、ペンタフルオロフェニル、２，３，５，６－テトラフルオロ－フェニル、２－ピリジルまたは４－ピリジルである）；
（ＣＨ２）ｍＮＲａＲｂ（式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有し；Ｒａ、Ｒｂは、互いに独立しており、Ｈまたは置換されていてもよいＣ１～Ｃ４アルキル基であってもよい）であってもよく、特にＲ１またはＲ２基のうちの一方は、アルキルアジド基（ＣＨ２）ｍＮ３（式中、ｍ＝２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）であってもよく；
Ｒ１またはＲ２のうちの一方は、（ＣＨ２）ｎＳＯ２ＮＲ５ＮＨ２（式中、ｎ＝１～１２であり、置換基Ｒ５は、Ｈ、アルキル、ヒドロキシアルキルまたはペルフルオロアルキル基Ｃ１～Ｃ１２によって表されることができる）であってもよく；
Ｒ１またはＲ２基のうちの一方は、アリールヒドラジンＡｒ－ＮＲ６ＮＨ２（式中、Ａｒは式Ｂの全ピレン残基であり、Ｒ６＝Ｈまたはアルキル）を形成する第一級アミノ基であってもよく；
Ｒ１またはＲ２基のうちの一方は、アリールヒドラジンＡｒ－ＮＲ６ＮＨ２（式中、Ａｒは式Ｂの全ピレン残基であり、Ｒ６＝Ｈまたはアルキル）を形成する第一級アミノ基であってもよく；
Ｒ１またはＲ２基のうちの一方は、アリールヒドロキシルアミンＡｒ－ＮＲ７ＯＨ（式中、Ａｒは式Ｂの全ピレン残基であり、Ｒ７＝Ｈまたはアルキル）を形成するヒドロキシ基であってもよく；
Ｒ１またはＲ２基のうちの一方は、アルキルオキシアミノ基（ＣＨ２）ｎＯＮＨ２（式中、ｎ＝１～１２）であってもよく；
Ｒ１またはＲ２基のうちの一方は、（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ８（式中、ｎ＝１～５、直鎖状または分枝状アルキル鎖（ＣＨ２）ｎを有し、Ｒ８は、Ｈ、直鎖状または分枝状Ｃ１～Ｃ６アルキル、ＣＨ２ＣＮ、２－および４－ニトロフェニル、２，３，５，６－テトラフルオロフェニル、ペンタクロロフェニル、ペンタフルオロフェニル、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾ－トリアゾリルから選択される）であってもよく；
さらに、Ｒ１もしくはＲ２のうちの一方は、（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨＲ９（式中、ｎ＝１～５、Ｒ９＝Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、（ＣＨ２）ｍＮ３、（ＣＨ２）ｍ－Ｎ－マレイミド、（ＣＨ２）ｍ－ＮＨＣＯＣＨ２Ｘ（Ｘ＝ＢｒまたはＩ）、ｍ＝２～６、（ＣＨ２）ｎおよびＲ９中に直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）であってもよい）であってもよく；またはＲ１もしくはＲ２のうちの一方は、ＣＨ２－Ｃ６Ｈ４－ＮＨ２、ＣＯＣ６Ｈ４－ＮＨ２、ＣＯＮＨＣ６Ｈ４－ＮＨ２もしくはＣＳＮＨＣ６Ｈ４－ＮＨ２（Ｃ６Ｈ４は、１，２－、１，３－もしくは１，４－フェニレンである）、ＣＯＣ５Ｈ３Ｎ－ＮＨ２もしくはＣＨ２－Ｃ５Ｈ３Ｎ－ＮＨ２（Ｃ５Ｈ３Ｎは、ピリジン－２，４－ジイル、ピリジン－２，５－ジイル、ピリジン－２，６－ジイルもしくはピリジン－３，５－ジイルである）を表してもよく；またはＲ１もしくはＲ２のうちの一方は、アルキルアジド（ＣＨ）Ｎ３もしくはアルキン、特にプロパルギルであってもよく；
リンカーＬ（色素コアと基Ｘを連結し、色素のスペクトル特性を調節する）は、少なくとも１個の炭素原子を含み、任意の出現において、Ｃ１～Ｃ１２の範囲の長さの直鎖状または分枝状の、アルキル、ヘテロアルキル、特にアルキルオキシ、例えば、ＣＨ２ＯＣＨ２、ＣＨ２ＣＨ２Ｏ ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２、アルキルアミノまたはジアルキルアミノ、特にジエタノールアミンまたはＮ－メチル（アルキル）モノエタノールアミン部分、例えば、Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－およびＮ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－）２、ジフルオロメチル（ＣＦ２）、アルケンまたはアルキン部分を、任意の組合せで含んでもよく；
リンカーＬはまた、カルボニル（ＣＨ２ＣＯ、ＣＦ２ＣＯ）部分も含んでもよく；
Ｘは、特に、ヒドロキシアルキル（ＣＨ２）ｎＯＨ、チオアルキル（（ＣＨ２）ｎＳＨ）、カルボキシアルキル（（ＣＨ２）ｎＣＯ２Ｈ）、スルホン酸アルキル（（ＣＨ２）ｎＳＯ３Ｈ）、硫酸アルキル（（ＣＨ２）ｎＯＳＯ３Ｈ）、リン酸アルキル（（ＣＨ２）ｎＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２）もしくはホスホン酸アルキル（（ＣＨ２）ｎＰ（Ｏ）（ＯＨ）２）（式中、ｎは、０～１２または１～１２の範囲の整数である）、またはその類似体を含む群から選択される部分からなるまたはそれらを含む可溶性および／またはイオン化可能アニオン提供部分を示し、ＣＨ２基の１つまたは複数がＣＦ２によって交換されており、
さらに、アニオン提供部分は、非芳香族Ｏ、ＮおよびＳ含有複素環、例えば、ピペラジン、ピペコリンによって結合されていてもよく、または代替的に基Ｘのうちの１つは、基Ｒ１およびＲ２に関して上で列挙した部分のうちの任意のものを、また基Ｌに関して列挙した任意の種類の結合と共に、他の置換基とは独立して有していてもよく、
ただし、式Ｂによって表されるすべての化合物において、塩基性条件下、すなわち７＜ｐＨ＜１４で、式Ｂの残基Ｘに３または６つの負荷電基が存在し、これらの負荷電基は、以下：ＳＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、ＯＳＯ３Ｈ、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒａ（式中、Ｒａ＝Ｃ１～Ｃ４アルキルまたは置換Ｃ１～Ｃ４アルキル）、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒａ（式中、Ｒａ＝Ｃ１～Ｃ４アルキルまたは置換Ｃ１～Ｃ４アルキル）から選択されるイオン化可能基の少なくとも部分的に脱プロトン化された残基を表す］
の化合物またはその塩からなる群から選択される。
式ＡおよびＢの化合物は、塩の形態で存在し得、塩の形態で適用されてもよく、該塩の形態は、すべての可能な種類のカチオン、好ましくはＮａ＋、Ｋ＋、Ｌｉ＋、ＮＨ４
＋、有機アンモニウム（例えば、トリアルキルアンモニウム）または有機ホスホニウムカチオンを含む。
より特定の実施形態では、本発明による蛍光色素塩は、負荷電酸基、特に、スルホン酸基および／またはリン酸基、ならびに無機または有機カチオンから選択される対イオン、好ましくは、アルカリ金属カチオン、アンモニウムカチオンまたは有機アンモニウムもしくはホスホニウム化合物のカチオン（例えば、トリアルキルアンモニウムカチオン）を含み得、ならびに／または正荷電基もしくは式Ａ～Ｄの色素の窒素部Ｎ（Ｒ１）Ｒ２に形成された電荷移動錯体、および特に強鉱酸、有機酸もしくはルイス酸のアニオンから選択される対イオンを含み得る。
「置換された」という用語は、本明細書で使用される場合、一般に、１つまたは複数の置換基、特に、直鎖状または分枝状アルキル、特にＣ１～Ｃ４アルキル、例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル；イソアルキル、例えば、イソプロピル、イソブチル（２－メチルプロピル）；第二級アルキル基、例えば、ｓｅｃ－ブチル（ブタ－２－イル）；ｔｅｒｔ－アルキル基、例えば、ｔｅｒｔ－ブチル（２－メチルプロピル）を含む群から選択される置換基の存在を指す。さらに、「置換された」という用語は、ここで、水素原子の代わりに少なくとも１つの重水素、フルオロ、クロロもしくはブロモ置換基を有するアルキル基、またはメトキシ、エトキシ、２－（アルキルオキシ）エチルオキシ基（ＡｌｋＯＣＨ２ＣＨ２Ｏ）、およびより一般的な場合には、ａｒｔ Ａｌｋ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＯＣＨ２ＣＨ２－（Ａｌｋ＝ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、Ｃ３Ｈ７、Ｃ４Ｈ１０、ｎ＝１～２３）のオリゴ（エチレングリコール）残基を指し得る。
「アルキル」という用語は、一般に、直鎖状または分枝状アルキル、より具体的には、Ｃ１～Ｃ２０アルキル、Ｃ１～Ｃ１２アルキルまたはＣ１～Ｃ６アルキル、例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル；イソアルキル、例えば、イソプロピル、イソブチル（２－メチルプロピル）；第二級アルキル基、例えば、ｓｅｃ－ブチル（ブタ－２－イル）；ｔｅｒｔ－アルキル基、例えば、ｔｅｒｔ－ブチル（２－メチルプロピル）などを含む群から選択される任意のアルキル基を指し得る。
「芳香族複素環式基」または「複素芳香族基」という用語は、本明細書で使用される場合、一般に、５～１０個の環原子を有し、少なくとも１個の環原子は、Ｓ、ＯおよびＮから選択される非置換または置換環式芳香族基（残基）を指し；基は、環原子のうちの任意のものを介して分子の残部に結合している。限定されない表例は、フリル、チエニル、ピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピロリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、キノリニルおよびイソキノリニルである。
上記の一般構造式Ａの化合物はアクリドン色素であり、上記式Ｂの化合物はピレン色素である。
より具体的には、ＩＵＰＡＣ規則に従うと、以下のスキーム４の基本構造式に示される通り、式Ａの化合物は、７－アミノアクリドン－２－スルホンアミドであり、一方、式Ｂの化合物は、３、６、８位に官能基置換されたスルホニル基を有する１－アミノピレン色素、すなわち、（官能基置換された）１，６，８－トリスルホニル－３－アミノピレンである。
より具体的には、ＩＵＰＡＣ規則に従うと、以下のスキーム４の基本構造式に示される通り、式Ａの化合物は、７－アミノアクリドン－２－スルホンアミドであり、一方、式Ｂの化合物は、３、６、８位に官能基置換されたスルホニル基を有する１－アミノピレン色素、すなわち、（官能基置換された）１，６，８－トリスルホニル－３－アミノピレンである。
本発明の新規蛍光色素は、以下のいくつかの好都合な特性を示す：
・ ｐＨ約２～５における効率的かつ清潔な還元的アミノ化または炭水化物との直接縮合のためのｐＫｂ＝１１～８（ｐＫａ＝３～６）を有する芳香族アミノ（ＡｒＮＨ２）、ヒドラジン（ＮＲＮＨ２）、ヒドラジド（ＣＯＮＲＮＨ２）、ヒドロキシルアミン（ＲＮＨＯＨ）またはアルコキシアミノ基（ＲＯＮＨ２）；好ましくは、芳香族アミノ基は、第一級アミノ基であるが、第二級アミノ基であってもよい；構造についてはスキーム４を参照
・ コンジュゲート中の大きな正味電荷 － ｐＨ＝７～１０において－３～－６の範囲
・ 広範囲のｐＨにおける水性媒体への非常に良好な溶解性；高輝度（これは、蛍光量子収率および消光の全体的な結果である）
・ ボラン系試薬によるｐＨ＝３～６における還元に対する色素コアの例外的な安定性
・ スペクトルの完全一致および高い蛍光量子収率でアルゴンイオンレーザー（４８８および５１４ｎｍで発光）により励起される能力
・ およそ５２０ｎｍにおける最小発光
・ 色素は、９９％までの精製が可能である。
・ ｐＨ約２～５における効率的かつ清潔な還元的アミノ化または炭水化物との直接縮合のためのｐＫｂ＝１１～８（ｐＫａ＝３～６）を有する芳香族アミノ（ＡｒＮＨ２）、ヒドラジン（ＮＲＮＨ２）、ヒドラジド（ＣＯＮＲＮＨ２）、ヒドロキシルアミン（ＲＮＨＯＨ）またはアルコキシアミノ基（ＲＯＮＨ２）；好ましくは、芳香族アミノ基は、第一級アミノ基であるが、第二級アミノ基であってもよい；構造についてはスキーム４を参照
・ コンジュゲート中の大きな正味電荷 － ｐＨ＝７～１０において－３～－６の範囲
・ 広範囲のｐＨにおける水性媒体への非常に良好な溶解性；高輝度（これは、蛍光量子収率および消光の全体的な結果である）
・ ボラン系試薬によるｐＨ＝３～６における還元に対する色素コアの例外的な安定性
・ スペクトルの完全一致および高い蛍光量子収率でアルゴンイオンレーザー（４８８および５１４ｎｍで発光）により励起される能力
・ およそ５２０ｎｍにおける最小発光
・ 色素は、９９％までの精製が可能である。
本発明の新規蛍光タグは、非常に長い泳動時間の「重」グリカンの検出さえ可能にする。これらの長い泳動時間およびピーク広幅化に起因して、そのような「重」グリカンは、とりわけ蛍光タグとしてＡＰＴＳが使用される場合、動電検出することが非常に困難である。
以下において、本発明のより特定の実施形態が記載される。
上記式Ａにおいて、ＮＲ１および／またはＮ（Ｒ２）Ｒ３は、カルボニル－または求核反応性基を含む。好ましくは、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、Ｈ、直鎖状または分枝状アルキル、ヒドロキシアルキルまたはペルフルオロアルキル基によって表される。置換基Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、好ましくは、可溶性および／またはアニオン提供基、特に、ヒドロキシアルキル（（ＣＨ２）ｎＯＨ）、チオアルキル（（ＣＨ２）ｎＳＨ）、カルボキシアルキル（（ＣＨ２）ｎＣＯ２Ｈ）、スルホン酸アルキル（（ＣＨ２）ｎＳＯ３Ｈ）、硫酸アルキル（（ＣＨ２）ｎＯＳＯ３Ｈ）、リン酸アルキル（（ＣＨ２）ｎＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２）またはホスホン酸アルキル（（ＣＨ２）ｎＰ（Ｏ）（ＯＨ）２）（ｎは、１～１２の範囲の整数である）を含む。
上記式Ａにおいて、ＮＲ１および／またはＮ（Ｒ２）Ｒ３は、カルボニル－または求核反応性基を含む。好ましくは、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、Ｈ、直鎖状または分枝状アルキル、ヒドロキシアルキルまたはペルフルオロアルキル基によって表される。置換基Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、好ましくは、可溶性および／またはアニオン提供基、特に、ヒドロキシアルキル（（ＣＨ２）ｎＯＨ）、チオアルキル（（ＣＨ２）ｎＳＨ）、カルボキシアルキル（（ＣＨ２）ｎＣＯ２Ｈ）、スルホン酸アルキル（（ＣＨ２）ｎＳＯ３Ｈ）、硫酸アルキル（（ＣＨ２）ｎＯＳＯ３Ｈ）、リン酸アルキル（（ＣＨ２）ｎＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２）またはホスホン酸アルキル（（ＣＨ２）ｎＰ（Ｏ）（ＯＨ）２）（ｎは、１～１２の範囲の整数である）を含む。
あるいは、置換基Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５は、求核反応性基として、カルボン酸残基（ＣＨ２）ｎＣＯＯＨ（ｎ＝１～１２）およびその反応性エステル（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ６によって表されてもよい。Ｒ６は、Ｈ、アルキル、（ｔｅｒｔ－ブチルを含む）、ベンジル、フルオレン－９－イル、ポリハロゲノアルキル、ＣＨ２ＣＮ、ポリハロゲノフェニル（例えば、テトラ－またはペンタフルオロフェニル、ペンタクロロフェニル）、２－および４－ニトロフェニル、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリルまたは他の潜在的に求核反応性の脱離基であってもよい。アルキル鎖（または主鎖）（ＣＨ２）ｎは、直鎖状であっても分枝状であってもよい。
さらに、式Ａのアリールアミノ基（ＮＲ１およびＮＲ２Ｒ３）は、（ポリ）メチレン、カルボニル、窒素または硫黄含有直鎖状または分枝状リンカー、特に、（ＣＨ２）ｍＣＯＮ（Ｒ７）、ＣＯ（ＣＨ２）ｍＮ（Ｒ７）、ＣＯ（ＣＨ２）ｍＳ（ＣＨ２）ｎ、（ＣＨ２）ｍＳ（ＣＨ２）ｎＣＯ、ＣＯ（ＣＨ２）ｍＳＯ２（ＣＨ２）ｎ、（ＣＨ２）ｍＳＯ２（ＣＨ２）ｎＣＯ、それらの組合せを介して分析物－反応性基に連結していてもよく、または窒素含有非芳香族複素環（例えば、ピペラジン、ピペコリン、オキサゾリン）の一部として結合していてもよく；ｍおよびｎは、０～１２または１～１２の範囲の整数である。置換基Ｒ７は、上記のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５に関して列挙した官能基のうちの任意のものによって表されてもよい。
式Ａの置換基Ｒ１、Ｒ２およびＲ３はまた、第一級アミノ基によって表されてもよく、したがって、カルボニル反応性アリールヒドラジンを含み、（Ｒ２＝Ｈ、Ｒ１もしくはＲ３＝ＮＨ２、またはＲ１＝ＮＨ２、Ｒ２、Ｒ３＝アルキル、ペルフルオロアルキルもしくはアルキル）、これは、Ｒ４およびＲ５についての可能な候補として列挙されている、可溶性および／またはアニオン提供部分、特に：ヒドロキシアルキル（ＣＨ２）ｎＯＨ、チオアルキル（（ＣＨ２）ｎＳＨ）、カルボキシアルキル（（ＣＨ２）ｎＣＯ２Ｈ）、スルホン酸アルキル（（ＣＨ２）ｎＳＯ３Ｈ）、硫酸アルキル（（ＣＨ２）ｎＯＳＯ３Ｈ）、リン酸アルキル（（ＣＨ２）ｎＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２）またはホスホン酸アルキル（（ＣＨ２）ｎＰ（Ｏ）（ＯＨ）２）（式中、ｎは、０～１２または１～１２の範囲の整数である）とコンジュゲートされておりまたはそれにより置換されている。あるいは、ヒドラジン誘導体は、スルホニルヒドラジド（Ｒ４＝ＮＨ２であり、一方、Ｒ５は、アルキル、ペルフルオロアルキルまたは上述の種類の可溶性および／またはアニオン提供基で装飾されたアルキル基である）によって表されてもよい。
あるいは、式Ａのアリールアミノ基（ＮＲ１および／またはＮＲ２Ｒ３）は、アシルヒドラジンまたはアルキルヒドラジン部分にリンカーを介して間接的に連結していてもよく、したがって、それぞれヒドラジド（ＺＣＯＮＨＮＨ２）またはヒドラジン（ＺＮＨＮＨ２）を含む。ここで、Ｚは、式Ａの色素残基を示し、これは、アリールアミノ基およびリンカーを含む。特に、Ｒ１およびＲ２は、（ＣＨ２）ｍＣＯＮ（Ｒ７）、ＣＯ（ＣＨ２）ｍＮ（Ｒ７）、ＣＯ（ＣＨ２）ｍＳ（ＣＨ２）ｎ、（ＣＨ２）ｍＳ（ＣＨ２）ｎＣＯ、ＣＯ（ＣＨ２）ｍＳＯ２（ＣＨ２）ｎ、（ＣＨ２）ｍＳＯ２（ＣＨ２）ｎＣＯおよびその組合せによって表されてもよく；ｍおよびｎは、０～１２の範囲の整数である。置換基Ｒ７は、官能基Ｒ１～Ｒ５の候補として上で列挙されるＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５の官能基のうちの任意のもの、特に、ヒドロキシアルキル（ＣＨ２）ｎＯＨ、チオアルキル（（ＣＨ２）ｎＳＨ）、カルボキシアルキル（（ＣＨ２）ｎＣＯ２Ｈ）、スルホン酸アルキル（（ＣＨ２）ｎＳＯ３Ｈ）、硫酸アルキル（（ＣＨ２）ｎＯＳＯ３Ｈ）、リン酸アルキル（（ＣＨ２）ｎＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２）またはホスホン酸アルキル（（ＣＨ２）ｎＰ（Ｏ）（ＯＨ）２）（ｎは、０～１２または１～１２の範囲の整数である）によって表されてもよい。リンカーはまた、非芳香族Ｏ、ＮおよびＳ含有複素環（例えば、ピペラジン、ピペコリン）によって表されてもよい。
さらに、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、ＣＨ２－Ｃ６Ｈ４－ＮＨ２、ＣＯＣ６Ｈ４－ＮＨ２、ＣＯＮＨＣ６Ｈ４－ＮＨ２またはＣＳＮＨＣ６Ｈ４－ＮＨ２（Ｃ６Ｈ４は、１，２－、１，３－もしくは１，４－フェニレン、ＣＯＣ５Ｈ３Ｎ－ＮＨ２またはＣＨ２－Ｃ５Ｈ３Ｎ－ＮＨ２であり、Ｃ５Ｈ３Ｎは、ピリジン－２，４－ジイル、ピリジン－２，５－ジイル、ピリジン－２，６－ジイル、ピリジン－３，５－ジイルである）によって表されてもよい。
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５の可変の位置における分析物－反応性基は、直接またはヒドラジン誘導体（ｎ＝１～１２）に関して列挙したカルボニル、アミド、窒素、酸素もしくは硫黄含有リンカーを介して間接的に連結した、芳香族もしくは複素環式アミン、カルボン酸、カルボン酸のエステル（例えば、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジルもしくは別のアミノ反応性エステル）によって表されてもよく；またはアルキルアジド（ＣＨ２）ｎＮ３、アルキン（プロパルギル）、アミノ－オキシアルキル（ＣＨ２）ｎＯＮＨ２、マレイミド（求核反応性二重結合を有するＣ４Ｈ３ＮＯ２）もしくはハロゲノケトン官能基（ＣＯＣＨ２Ｘ；Ｘ＝Ｃｌ、ＢｒおよびＩ）、ならびにハロゲノアミド基（ＮＲＣＯＣＨ２Ｘ、Ｒ＝Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｘ＝Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）によって表される。
本発明の一部のより好ましい実施形態によると、上記式Ａの置換基Ｒ１は、以下の通り定義される：
式ＡのＲ１は、水素、低級アルキル基（Ｃ１～Ｃ４）、非置換フェニル基、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ２、ＮＨＲａ、ＮＲａＲｂ、ＲａＯ、ＲａＳ、ＯＰ（Ｏ）（ＯＲａ）（ＯＲｂ）（ＲａおよびＲｂは、互いに独立しており、直鎖状または分枝状鎖を有するＣ１～Ｃ１２、好ましくはＣ１～Ｃ６アルキル基であってもよい）の組から選択される１つまたはいくつかの電子供与体置換基を有するフェニル基、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＨ＝ＣＨＣＮ、ＣＨ＝Ｃ（ＣＮ）２、ＳＯ２Ｒａ、ＳＯ３Ｒａ、ＣＯＲａ、ＣＯＯＲａ、ＣＨ＝ＣＨＣＯＲａ、ＣＨ＝ＣＨＣＯＯＲａ、ＣＯＮＨＲａ、ＳＯ２ＮＲａＲｂ、ＣＯＮＲａＲｂ、Ｐ（Ｏ）（ＯＲａ）（ＯＲｂ）（式中、ＲａおよびＲｂは、互いに独立しており、Ｈまたは直鎖状もしくは分枝状炭素鎖を有するＣ１～Ｃ６アルキル基であってもよい）の組から選択される１つまたはいくつかの電子受容体を有するフェニル基を表し；
あるいは、Ｒ１は、芳香族複素環式基、特に、２－ピリジル、３－ピリジル、４－ピリジル、２－チエニル、３－チエニル、ピリミジン－４－イル、ピリミジン－２－イル、ピリミジン－５－イルまたは芳香族複素環から誘導される他の電子受容体基、例えば、４－ピリジル－Ｎ－オキシド、Ｎ－アルキルピリジニウム塩またはベタイン、特に、Ｎ－（ω－スルホアルキル）－４－ピリジニウム、Ｎ－（ω－スルホアルキル）－２－ピリジニウム、Ｎ－（１－ヒドロキシ－４，４，５，５－テトラフルオロ－シクロペンタ－１－エン－３－オン－２－イル）－４－ピリジニウム、Ｎ－（１－ヒドロキシ－４，４，５，５－テトラフルオロシクロペンタ－１－エン－３－オン－２－イル）－２－ピリジニウムを表してもよい。
式ＡのＲ１は、水素、低級アルキル基（Ｃ１～Ｃ４）、非置換フェニル基、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ２、ＮＨＲａ、ＮＲａＲｂ、ＲａＯ、ＲａＳ、ＯＰ（Ｏ）（ＯＲａ）（ＯＲｂ）（ＲａおよびＲｂは、互いに独立しており、直鎖状または分枝状鎖を有するＣ１～Ｃ１２、好ましくはＣ１～Ｃ６アルキル基であってもよい）の組から選択される１つまたはいくつかの電子供与体置換基を有するフェニル基、ＮＯ２、ＣＮ、ＣＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＨ＝ＣＨＣＮ、ＣＨ＝Ｃ（ＣＮ）２、ＳＯ２Ｒａ、ＳＯ３Ｒａ、ＣＯＲａ、ＣＯＯＲａ、ＣＨ＝ＣＨＣＯＲａ、ＣＨ＝ＣＨＣＯＯＲａ、ＣＯＮＨＲａ、ＳＯ２ＮＲａＲｂ、ＣＯＮＲａＲｂ、Ｐ（Ｏ）（ＯＲａ）（ＯＲｂ）（式中、ＲａおよびＲｂは、互いに独立しており、Ｈまたは直鎖状もしくは分枝状炭素鎖を有するＣ１～Ｃ６アルキル基であってもよい）の組から選択される１つまたはいくつかの電子受容体を有するフェニル基を表し；
あるいは、Ｒ１は、芳香族複素環式基、特に、２－ピリジル、３－ピリジル、４－ピリジル、２－チエニル、３－チエニル、ピリミジン－４－イル、ピリミジン－２－イル、ピリミジン－５－イルまたは芳香族複素環から誘導される他の電子受容体基、例えば、４－ピリジル－Ｎ－オキシド、Ｎ－アルキルピリジニウム塩またはベタイン、特に、Ｎ－（ω－スルホアルキル）－４－ピリジニウム、Ｎ－（ω－スルホアルキル）－２－ピリジニウム、Ｎ－（１－ヒドロキシ－４，４，５，５－テトラフルオロ－シクロペンタ－１－エン－３－オン－２－イル）－４－ピリジニウム、Ｎ－（１－ヒドロキシ－４，４，５，５－テトラフルオロシクロペンタ－１－エン－３－オン－２－イル）－２－ピリジニウムを表してもよい。
特に、Ｒ１は、７－アミノアクリドン－２－スルホンアミド主鎖を有する２－ピリジル、３－ピリジルまたは４－ピリジル前駆体およびアルキル化剤（例えば、ハロゲン化アルキル、スルホン酸アルキル、アルキルトリフレート、１，３－プロパンスルトン、１，４－ブタンスルトン）または求電子剤（例えば、ペルフルオロシクロペンテン）から誘導される正荷電複素環式基を表してもよい。
以下の式のうちの１つを有する上記の構造式Ａの化合物がとりわけ好ましい。
式Ｂにおいて、Ｌは、色素コアと可溶性および／またはイオン化可能部分を連結し、スペクトル特性を調節する２価リンカーである。
典型的には、その存在の結果、ＡＰＴＳ色素タグ（断片Ｌは存在せず、ＸはＯＨである）と比較して、４８８ｎｍ市販レーザーとのより良好な一致を伴い、大きく深蛍光シフトおよび深色シフトする。
典型的には、その存在の結果、ＡＰＴＳ色素タグ（断片Ｌは存在せず、ＸはＯＨである）と比較して、４８８ｎｍ市販レーザーとのより良好な一致を伴い、大きく深蛍光シフトおよび深色シフトする。
式ＢのリンカーＬは、少なくとも１個の炭素原子を含むまたはそれからなり、任意の出現において、Ｃ１～Ｃ１２の範囲の長さの直鎖状または分枝状の、アルキル、ヘテロアルキル（例えば、アルキルオキシ：ＣＨ２ＯＣＨ２、ＣＨ２ＣＨ２Ｏ ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２）、ジフルオロメチル（ＣＦ２）、アルケンまたはアルキン部分を、任意の組合せで表してもよい。リンカーはまた、カルボニル（ＣＨ２ＣＯ、ＣＦ２ＣＯ）およびスルホンアミドは、Ｌがアルキルアミノまたはジアルキルアミノ基、特に、ジエタノールアミンまたはＮ－メチル（アルキル）モノエタノールアミン部分（すなわち、Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－およびＮ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ－）２）である場合も含み得、これは、可溶性および／またはイオン化可能部分Ｘへのさらなる接続を可能にする。本発明のある特定の実施形態は、式（ＣＨ２）３ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２およびＮ（ＣＨ３）（ＣＨ２）２ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２による部分ＬおよびＸの組合せを表す。したがって、この種類のスルホンアミドは、一般式ＳＯ２ＮＲ３Ｒ４（Ｒ３およびＲ４は、互いに独立しており、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１２の範囲の長さの直鎖状または分枝状であり、また末端ＯＨ基を有する、アルキル、ヘテロアルキル（例えば、アルキルオキシ：ＣＨ２ＯＣＨ２、ＣＨ２ＣＨ２Ｏ、ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２）、ジフルオロメチル（ＣＦ２）の任意の組合せによって表されてもよい）を有する。
式ＢのＮ（Ｒ１）Ｒ２は、好ましくは、カルボニルまたは求核反応性基を含む。置換基Ｒ１およびＲ２は、互いに独立しており、いずれも水素によって表されてもよい。これらのうちの１つは、直鎖状または分枝状アルキル（ペルフルオロアルキル）基Ｃ１～Ｃ１２であってもよい。同時に、Ｒ１およびＲ２のうちの一方は、カルボン酸残基（ＣＨ２）ｎＣＯＯＨおよびその通常のまたは反応性エステル（ＣＨ２）ｎＣＯＲ３（式中、ｎは、１～１２の範囲の整数である）によって表されてもよい。残基Ｒ３は、Ｈ、アルキル、（ｔｅｒｔ－ブチルを含む）、ベンジル、フルオレン－９－イル、ポリハロゲノアルキル、ＣＨ２ＣＮ、ポリハロゲノフェニル（例えば、テトラ－またはペンタフルオロフェニル、ペンタクロロフェニル）、２－および４－ニトロフェニル、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリルまたは他の潜在的に求核反応性の脱離基である。アルキル鎖（または主鎖）（ＣＨ２）ｎは、直鎖状であっても分枝状であってもよい。特に、式は、Ｚ－ＮＲ１（ＣＨ２）ｎＣＯＲ４として示され得、ここで、Ｚは、基ＬおよびＸも含む式Ｂの分子の残部である。
さらに、求核反応性基ＣＯＲ５は、（ポリ）メチレン、オキシメチレン（ＣＨ２ＯＣＨ２、ＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ２、ＰＥＧ）カルボニル、カーボネート、カルバメート、ウレタン、窒素または硫黄含有リンカー（スペーサー）（分枝状または直鎖状）、特に（ＣＨ２）ｍＣＯＮ（Ｒ６）、ＣＯＮＨ（ＣＨ２）ｎ、（ＣＨ２）ｍＯＣＯＮＨ（ＣＨ２）ｎ、ＣＯ（ＣＨ２）ｎ、ＣＯ（Ｏ）ＮＲ６、（ＣＨ２）ｍＳＯ２ｍＮ（Ｒ６）、ＣＯ（ＣＨ２）ｍＳ（ＣＨ２）ｎ、（ＣＨ２）ｍＳ（ＣＨ２）ｎＣＯ、ＣＯ（ＣＨ２）ｍＳＯ２（ＣＨ２）ｎ、（ＣＨ２）ｍＳＯ２ＮＲ６およびそれらの組合せ（式中、ｍおよびｎは、０～１２の範囲の整数であり、Ｒ６＝アルキル）を介してアリールアミノ基Ｎ（Ｒ１）Ｒ２に連結されていてもよい。反応性基Ｒ５は、非芳香族Ｏ、ＮおよびＳ含有複素環（例えば、ピペラジン、ピペコリン、オキサゾリン）によって結合されてもよい。置換基Ｒ６は、Ｈ、アルキル、ヒドロキシアルキルまたはペルフルオロアルキル基Ｃ１～Ｃ１２によって表されてもよい。
式Ｂの置換基Ｒ１およびＲ２のうちの一方は、第一級アミノ基によって表されてもよく、したがって、カルボニル反応性アリールヒドラジン（Ｒ１＝ＮＨ２、Ｒ２＝アルキル、ペルフルオロアルキル）を含み、またはアリールヒドロキシルアミン（ＡｒＮＨＯＨ）を形成するヒドロキシ基を含む。あるいは、式Ｂのアルキルヒドラジンまたはヒドロキシルアミン反応性部分は、反応性基Ｒ４に関して上で列挙したリンカーを介してアリールアミノ基Ｎ（Ｒ１）Ｒ２に連結していてもよい。スルホニルヒドラジドは、Ｒ１またはＲ２＝（ＣＨ２）ｎＳＯ２ＮＲ６ＮＨ２（式中、ｎ＝１～１２）であり、置換基Ｒ６が、Ｈ、アルキル、ヒドロキシアルキルまたはペルフルオロアルキル基Ｃ１～Ｃ１２によって表されてもよい特別な場合を構成する。スルホニルアミド（スルホンアミド、スルファミド）基はまた、反応性基Ｒ４、Ｒ３およびＲ５の場合に関して上で列挙した多様なリンカーを介して結合していてもよい。
さらに、Ｒ１およびＲ２は、ＣＨ２－Ｃ６Ｈ４－ＮＨ２、ＣＯＣ６Ｈ４－ＮＨ２、ＣＯＮＨＣ６Ｈ４－ＮＨ２またはＣＳＮＨＣ６Ｈ４－ＮＨ２（Ｃ６Ｈ４は、１，２－、１，３－もしくは１，４－フェニレンである）、ＣＯＣ５Ｈ３Ｎ－ＮＨ２またはＣＨ２－Ｃ５Ｈ３Ｎ－ＮＨ２（Ｃ５Ｈ３Ｎは、ピリジン－２，４－ジイル、ピリジン－２，５－ジイル、ピリジン－２，６－ジイル、ピリジン－３，５－ジイルである）によって表されてもよい。
置換基Ｒ１およびＲ２はまた、直接またはカルボニル、アミド、ヒドラジン誘導体に関して列挙した窒素もしくは硫黄含有リンカーを介してのいずれかで連結したアルキルアジド（ＣＨ２）ｎＮ３、（ｎ＝１～１２）アルキン（プロパルギル）、マレイミド（求核反応性二重結合を有するＣ４Ｈ３ＮＯ２）またはハロゲノ－ケトン官能基（ＣＯＣＨ２Ｘ；Ｘ＝Ｃｌ、ＢｒおよびＩ）によって表されてもよい。
式Ｂの基Ｘは、可溶性および／またはイオン化可能アニオン提供部分、特に、向上した電気泳動移動度をもたらすものを示す。基Ｘは、ヒドロキシアルキル（ＣＨ２）ｎＯＨ、チオアルキル（（ＣＨ２）ｎＳＨ）、カルボキシアルキル（（ＣＨ２）ｎＣＯ２Ｈ）、スルホン酸アルキル（（ＣＨ２）ｎＳＯ３Ｈ）、硫酸アルキル（（ＣＨ２）ｎＯＳＯ３Ｈ）、リン酸アルキル（（ＣＨ２）ｎＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２）またはホスホン酸アルキル（（ＣＨ２）ｎＰ（Ｏ）（ＯＨ）２）（ｎは、０～１２の範囲の整数である）を含み得る。あるいは、ＣＨ２基は、ＣＦ２によって交換されていてもよい。アニオン提供部分はまた、非芳香族Ｏ、ＮおよびＳ含有複素環（例えば、ピペラジン、ピペコリン）によって結合されてもよい。あるいは、基Ｘのうちの１つは、基Ｒ１およびＲ２に関して列挙したカルボニルまたは求核反応性部分を、また基Ｌに関して列挙した任意の種類の結合と共に、他の置換基とは独立して有してもよい。
既に上述の通り、式Ｂの化合物は、塩の形態で存在し得、塩の形態で適用されてもよく、該塩の形態は、すべての可能な種類のカチオン、好ましくはＮａ＋、Ｌｉ＋、Ｋ＋、ＮＨ４
＋および有機アンモニウムまたは有機ホスホニウムカチオンを含む。
本発明の特定の一実施形態によると、アニオン提供基Ｘは、式Ｂの各出現において、１または複数の部位で（および上記Ｌに関して定義した通りの各種類の結合について）それぞれのリンカー基Ｌに結合した１～４つの基ＳＯ３Ｈを表してもよい。
本発明の別の特定の実施形態によると、上記構造式Ｂの化合物は、式Ｃ
［式中、
Ｒ１および／またはＲ２は、互いに独立しており、
Ｈ、重水素、アルキルまたは重水素置換アルキル（アルキル基の１個、いくつかまたはすべてのＨ原子は重水素原子で交換されていてもよい）、特に、１～１２個のＣ原子、好ましくは１～６個のＣ原子を有するアルキルまたは重水素アルキル、例えば、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、直鎖状または分枝状Ｃ３～Ｃ１２、好ましくはＣ３～Ｃ６アルキル基または置換Ｃ２～Ｃ１２、好ましくはＣ２～Ｃ６アルキル基；特に、（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ３（式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５、Ｒ３は、Ｈ、ＣＨ２ＣＮ、２－および４－ニトロフェニル、２，３，５，６－テトラフルオロフェニル、ペンタクロロフェニル、ペンタフルオロフェニル、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリルであってもよく、（ＣＨ２）ｎのアルキル鎖は、直鎖状または分枝状であってもよい）を表してもよく；
Ｒ １ －－－Ｒ ２ は、４、５、６または７員非芳香族炭素環を形成してもよく、この炭素環は、環の炭素原子の１つに結合したさらなる第一級アミノ基ＮＨ ２ 、第二級アミノ基ＮＨＲ ａ （式中、Ｒ ａ ＝Ｃ １ ～Ｃ ６ アルキル）、またはヒドロキシル基ＯＨを有する；場合により、Ｒ１－－－Ｒ２は、４、５、６または７員非芳香族複素環（この複素環にはＯ、ＮまたはＳなどのさらなるヘテロ原子が含まれる）を形成してもよく；
ヒドロキシアルキル基（ＣＨ２）ｍＯＨ（式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）；Ｒ１またはＲ２基のうちの一方は、カーボネートまたはカルバメート誘導体（Ｒ１またはＲ２基のうちの一方は、（ＣＨ２）ｍＯＣＯＯＲ４または（ＣＨ２）ｍＮＨＣＯＯＲ４（式中、ｍ＝１～１２、Ｒ４＝メチル、エチル、２－クロロエチル、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、フェニル基または置換フェニル基、例えば、２－および４－ニトロフェニル、ペンタクロロフェニル、ペンタフルオロフェニル、２，３，５，６－テトラフルオロ－フェニル、２－ピリジルまたは４－ピリジル）である）；
（ＣＨ２）ｍＮＲａＲｂ（式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６；直鎖状または分枝状アルキル鎖を有し；Ｒａ、Ｒｂは、互いに独立しており、Ｈまたは置換されていてもよいＣ１～Ｃ４アルキル基であってもよい）であってもよく、特にＲ１またはＲ２基のうちの一方は、アルキルアジド基（ＣＨ２）ｍＮ３（式中、ｍ＝２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）であってもよく；
Ｒ１またはＲ２基のうちの一方は、（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ５（式中、ｎ＝１～５、直鎖状または分枝状アルキル鎖（ＣＨ２）ｎを有し、Ｒ３は、Ｈ、直鎖状または分枝状Ｃ１～Ｃ６アルキル、ＣＨ２ＣＮ、４－ニトロフェニル、２，３，５，６－テトラフルオロフェニル、ペンタクロロフェニル、ペンタフルオロフェニル、Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリルから選択される）であってもよく；
さらに、Ｒ１もしくはＲ２のうちの一方は、（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨＲ６（式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５、Ｒ６＝Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、（ＣＨ２）ｍＮ３、（ＣＨ２）ｍ－Ｎ－マレイミド、（ＣＨ２）ｍ－ＮＨＣＯＣＨ２Ｘ（式中、Ｘ＝ＢｒもしくはＩ）、ｍ＝２～６、（ＣＨ２）ｎおよびＲ６中に直鎖状もしくは分枝状アルキル鎖を有する）であってもよく；またはＲ１もしくはＲ２のうちの一方は、ＣＨ２－Ｃ６Ｈ４－ＮＨ２、ＣＯＣ６Ｈ４－ＮＨ２、ＣＯＮＨＣ６Ｈ４－ＮＨ２もしくはＣＳＮＨＣ６Ｈ４－ＮＨ２（Ｃ６Ｈ４は、１，２－、１，３－もしくは１，４－フェニレンである）、ＣＯＣ５Ｈ３Ｎ－ＮＨ２もしくはＣＨ２－Ｃ５Ｈ３Ｎ－ＮＨ２（Ｃ５Ｈ３Ｎは、ピリジン－２，４－ジイル、ピリジン－２，５－ジイル、ピリジン－２，６－ジイルもしくはピリジン－３，５－ジイルである）を表してもよく；
式ＣのＳＯ２断片と残基Ｘとの間の（ＣＨ２）ｎ－ＣＨ２リンカー（式中、ｎ＝１～５）は、２～６個の炭素原子を有する直鎖、分枝状または環式基を表してもよく；
Ｘ＝ＳＨ、ＣＯＯＨ、ＯＳＯ３Ｈ、ＳＯ３Ｈ、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒａ（式中、Ｒａ＝置換されていてもよいＣ１～Ｃ４アルキル）、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒａ（式中、Ｒａ＝置換されていてもよいＣ１～Ｃ４アルキル）であり；
ただし、式Ｃによって表されるすべての化合物において、塩基性条件下、すなわち７＜ｐＨ＜１４で、式Ｃの残基Ｘに３または６つの負荷電基が存在し、これらの負荷電基は、以下：ＳＨ、ＣＯＯＨ、ＯＳＯ３Ｈ、ＳＯ３Ｈ、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒａ（式中、Ｒａ＝Ｃ１～Ｃ４アルキルまたは置換Ｃ１～Ｃ４アルキル）、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒａ（式中、Ｒａ＝Ｃ１～Ｃ４アルキルまたは置換Ｃ１～Ｃ４アルキル）から選択されるイオン化可能基の少なくとも部分的に脱プロトン化された残基を表す］
に示される通りのアルキルスルホニル誘導体である。
Ｒ１および／またはＲ２は、互いに独立しており、
Ｈ、重水素、アルキルまたは重水素置換アルキル（アルキル基の１個、いくつかまたはすべてのＨ原子は重水素原子で交換されていてもよい）、特に、１～１２個のＣ原子、好ましくは１～６個のＣ原子を有するアルキルまたは重水素アルキル、例えば、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、直鎖状または分枝状Ｃ３～Ｃ１２、好ましくはＣ３～Ｃ６アルキル基または置換Ｃ２～Ｃ１２、好ましくはＣ２～Ｃ６アルキル基；特に、（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ３（式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５、Ｒ３は、Ｈ、ＣＨ２ＣＮ、２－および４－ニトロフェニル、２，３，５，６－テトラフルオロフェニル、ペンタクロロフェニル、ペンタフルオロフェニル、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリルであってもよく、（ＣＨ２）ｎのアルキル鎖は、直鎖状または分枝状であってもよい）を表してもよく；
Ｒ １ －－－Ｒ ２ は、４、５、６または７員非芳香族炭素環を形成してもよく、この炭素環は、環の炭素原子の１つに結合したさらなる第一級アミノ基ＮＨ ２ 、第二級アミノ基ＮＨＲ ａ （式中、Ｒ ａ ＝Ｃ １ ～Ｃ ６ アルキル）、またはヒドロキシル基ＯＨを有する；場合により、Ｒ１－－－Ｒ２は、４、５、６または７員非芳香族複素環（この複素環にはＯ、ＮまたはＳなどのさらなるヘテロ原子が含まれる）を形成してもよく；
ヒドロキシアルキル基（ＣＨ２）ｍＯＨ（式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）；Ｒ１またはＲ２基のうちの一方は、カーボネートまたはカルバメート誘導体（Ｒ１またはＲ２基のうちの一方は、（ＣＨ２）ｍＯＣＯＯＲ４または（ＣＨ２）ｍＮＨＣＯＯＲ４（式中、ｍ＝１～１２、Ｒ４＝メチル、エチル、２－クロロエチル、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、フェニル基または置換フェニル基、例えば、２－および４－ニトロフェニル、ペンタクロロフェニル、ペンタフルオロフェニル、２，３，５，６－テトラフルオロ－フェニル、２－ピリジルまたは４－ピリジル）である）；
（ＣＨ２）ｍＮＲａＲｂ（式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６；直鎖状または分枝状アルキル鎖を有し；Ｒａ、Ｒｂは、互いに独立しており、Ｈまたは置換されていてもよいＣ１～Ｃ４アルキル基であってもよい）であってもよく、特にＲ１またはＲ２基のうちの一方は、アルキルアジド基（ＣＨ２）ｍＮ３（式中、ｍ＝２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）であってもよく；
Ｒ１またはＲ２基のうちの一方は、（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ５（式中、ｎ＝１～５、直鎖状または分枝状アルキル鎖（ＣＨ２）ｎを有し、Ｒ３は、Ｈ、直鎖状または分枝状Ｃ１～Ｃ６アルキル、ＣＨ２ＣＮ、４－ニトロフェニル、２，３，５，６－テトラフルオロフェニル、ペンタクロロフェニル、ペンタフルオロフェニル、Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリルから選択される）であってもよく；
さらに、Ｒ１もしくはＲ２のうちの一方は、（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨＲ６（式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５、Ｒ６＝Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、（ＣＨ２）ｍＮ３、（ＣＨ２）ｍ－Ｎ－マレイミド、（ＣＨ２）ｍ－ＮＨＣＯＣＨ２Ｘ（式中、Ｘ＝ＢｒもしくはＩ）、ｍ＝２～６、（ＣＨ２）ｎおよびＲ６中に直鎖状もしくは分枝状アルキル鎖を有する）であってもよく；またはＲ１もしくはＲ２のうちの一方は、ＣＨ２－Ｃ６Ｈ４－ＮＨ２、ＣＯＣ６Ｈ４－ＮＨ２、ＣＯＮＨＣ６Ｈ４－ＮＨ２もしくはＣＳＮＨＣ６Ｈ４－ＮＨ２（Ｃ６Ｈ４は、１，２－、１，３－もしくは１，４－フェニレンである）、ＣＯＣ５Ｈ３Ｎ－ＮＨ２もしくはＣＨ２－Ｃ５Ｈ３Ｎ－ＮＨ２（Ｃ５Ｈ３Ｎは、ピリジン－２，４－ジイル、ピリジン－２，５－ジイル、ピリジン－２，６－ジイルもしくはピリジン－３，５－ジイルである）を表してもよく；
式ＣのＳＯ２断片と残基Ｘとの間の（ＣＨ２）ｎ－ＣＨ２リンカー（式中、ｎ＝１～５）は、２～６個の炭素原子を有する直鎖、分枝状または環式基を表してもよく；
Ｘ＝ＳＨ、ＣＯＯＨ、ＯＳＯ３Ｈ、ＳＯ３Ｈ、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒａ（式中、Ｒａ＝置換されていてもよいＣ１～Ｃ４アルキル）、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒａ（式中、Ｒａ＝置換されていてもよいＣ１～Ｃ４アルキル）であり；
ただし、式Ｃによって表されるすべての化合物において、塩基性条件下、すなわち７＜ｐＨ＜１４で、式Ｃの残基Ｘに３または６つの負荷電基が存在し、これらの負荷電基は、以下：ＳＨ、ＣＯＯＨ、ＯＳＯ３Ｈ、ＳＯ３Ｈ、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒａ（式中、Ｒａ＝Ｃ１～Ｃ４アルキルまたは置換Ｃ１～Ｃ４アルキル）、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒａ（式中、Ｒａ＝Ｃ１～Ｃ４アルキルまたは置換Ｃ１～Ｃ４アルキル）から選択されるイオン化可能基の少なくとも部分的に脱プロトン化された残基を表す］
に示される通りのアルキルスルホニル誘導体である。
本発明のより特定の実施形態によると、本発明の蛍光色素は、式Ｃ（式中、Ｘは、各出現において、ＳＯ３Ｈであり、ｎは、１～１２、好ましくは１～６である）またはその塩によって表される。
本発明の別の特定の実施形態によると、上記構造式Ｂの化合物は、式Ｄ
［式中、
Ｒ１および／またはＲ２は、互いに独立しており、Ｈ、重水素、アルキルまたは重水素置換アルキル（アルキル基の１個、いくつかまたはすべてのＨ原子は、重水素原子によって交換されていてもよい）、特に、１～１２個のＣ原子、好ましくは１～６個のＣ原子を有するアルキルまたは重水素－アルキル、例えば、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５または直鎖状もしくは分枝状の置換されていてもよいＣ３～Ｃ１２、好ましくはＣ３～Ｃ６アルキル基；特に、（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ４（式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５、Ｒ４は、Ｈ、ＣＨ２ＣＮ、２－および４－ニトロフェニル、２，３，５，６－テトラフルオロフェニル、ペンタクロロフェニル、ペンタフルオロフェニル、Ｎ－スクシンイミジル、Ｎ－スルホスクシンイミジルであってもよく、（ＣＨ２）ｎ中のアルキル鎖は、直鎖状または分枝状であってもよい）を表してもよく；
Ｒ １ －－－Ｒ ２ は、４、５、６または７員非芳香族炭素環を形成してもよく、この炭素環は、環の炭素原子の１つに結合したさらなる第一級アミノ基ＮＨ ２ 、第二級アミノ基ＮＨＲ ａ （式中、Ｒ ａ ＝置換されていてもよいＣ １ ～Ｃ ６ アルキル）、またはヒドロキシル基ＯＨを有する；または場合により、Ｒ１－－－Ｒ２は、４、５、６もしくは７員非芳香族複素環（この複素環にはＯ、ＮもしくはＳなどのヘテロ原子が含まれる）を形成してもよく；
Ｒ１および／またはＲ２は、
ヒドロキシアルキル基（ＣＨ２）ｍＯＨ（式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状または分枝状の置換されていてもよいアルキル鎖を有する）をさらに表してもよく；Ｒ１またはＲ２基のうちの一方は、カーボネートまたはカルバメート誘導体（ＣＨ２）ｍＯＣＯＯＲ５または（ＣＨ２）ｍＮＨＣＯＯＲ５（式中、ｍ＝１～１２、Ｒ５＝メチル、エチル、２－クロロエチル、ＣＨ２ＣＮ、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリル、フェニル基または置換フェニル基、例えば、２－および４－ニトロフェニル、ペンタクロロフェニル、ペンタフルオロ－フェニル、２，３，５，６－テトラフルオロフェニル、２－ピリジル、４－ピリジル）；
（ＣＨ２）ｍＮＲａＲｂ（式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有し；Ｒａ、Ｒｂは、互いに独立しており、水素および／または置換されていてもよいＣ１～Ｃ４アルキル基を表す）；
（ＣＨ２）ｍＮ３（式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）；
－（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ４（式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５、直鎖状または分枝状アルキル鎖（ＣＨ２）ｎを有し、Ｒ４は、Ｈ、直鎖状または分枝状Ｃ１～Ｃ６アルキル、ＣＨ２ＣＮ、２－および４－ニトロフェニル、２，３，５，６－テトラフルオロフェニル、ペンタクロロフェニル、ペンタフルオロフェニル、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリルから選択される）；
（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨＲ５（式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５、Ｒ５＝Ｈ、置換または非置換Ｃ１～Ｃ６アルキル、（ＣＨ２）ｍＮ３、（ＣＨ２）ｍ－Ｎ－マレイミド、（ＣＨ２）ｍ－ＮＨＣＯＣＨ２Ｙ（式中、Ｙ＝Ｂｒ、Ｉ）、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、（ＣＨ２）ｎおよびＲ５中に直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）であってもよく；
さらに、Ｒ１またはＲ２は、ＣＨ２－Ｃ６Ｈ４－ＮＨ２、ＣＯＣ６Ｈ４－ＮＨ２、ＣＯＮＨＣ６Ｈ４－ＮＨ２またはＣＳＮＨＣ６Ｈ４－ＮＨ２（Ｃ６Ｈ４は、１，２－、１，３－または１，４－フェニレンである）、ＣＯＣ５Ｈ３Ｎ－ＮＨ２またはＣＨ２－Ｃ５Ｈ３Ｎ－ＮＨ２（Ｃ５Ｈ３Ｎは、ピリジン－２，４－ジイル、ピリジン－２，５－ジイル、ピリジン－２，６－ジイルまたはピリジン－３，５－ジイルである）を表してもよく；
Ｒ３＝Ｈ、（ＣＨ２）ｑＣＨ２Ｘ、Ｃ２Ｈ５、直鎖状または分枝状Ｃ３～Ｃ６アルキル基、ＣｍＨ２ｍＯＲ（式中、ｍ＝２～６、直鎖状または分枝状アルカン－ジイル鎖ＣｍＨ２ｍを有する）、Ｒ３＝Ｈ、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、Ｃ３Ｈ７、ＣＨ３（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｋＣＨ２ＣＨ２（式中、ｋ＝１～１２）であり；一方、（ＣＨ２）ｑＣＨ２リンカーは、２～６個の炭素原子を有する直鎖、分枝状または環式基を表してもよく；
式Ｄにおいて、スルホンアミド断片ＳＯ２Ｎと残基Ｘとの間の（ＣＨ２）ｎ－ＣＨ２リンカー（式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５）は、２～６個の炭素原子を有する直鎖、分枝状または環式基を表してもよく；
Ｘ＝ＳＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、ＯＳＯ３Ｈ、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒａ（式中、Ｒａ＝置換または非置換Ｃ１～Ｃ４アルキル）、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒａ（式中、Ｒａ＝置換または非置換Ｃ１～Ｃ４アルキルである）であり；
ただし、式Ｄによって表されるすべての化合物において、塩基性条件下、すなわち７＜ｐＨ＜１４で、式Ｃの残基Ｘに３、６、９または１２個の負荷電基が存在し、これらの負荷電基は、以下：ＳＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、ＯＳＯ３Ｈ、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒａ（式中、Ｒａ＝Ｃ１～Ｃ４アルキルまたは置換Ｃ１～Ｃ４アルキル）、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒａ（式中、Ｒａ＝Ｃ１～Ｃ４アルキルまたは置換Ｃ１～Ｃ４アルキル）から選択されるイオン化可能基の少なくとも部分的に脱プロトン化された残基を表す］
に示される通りのスルファミド誘導体である。
Ｒ１および／またはＲ２は、互いに独立しており、Ｈ、重水素、アルキルまたは重水素置換アルキル（アルキル基の１個、いくつかまたはすべてのＨ原子は、重水素原子によって交換されていてもよい）、特に、１～１２個のＣ原子、好ましくは１～６個のＣ原子を有するアルキルまたは重水素－アルキル、例えば、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５または直鎖状もしくは分枝状の置換されていてもよいＣ３～Ｃ１２、好ましくはＣ３～Ｃ６アルキル基；特に、（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ４（式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５、Ｒ４は、Ｈ、ＣＨ２ＣＮ、２－および４－ニトロフェニル、２，３，５，６－テトラフルオロフェニル、ペンタクロロフェニル、ペンタフルオロフェニル、Ｎ－スクシンイミジル、Ｎ－スルホスクシンイミジルであってもよく、（ＣＨ２）ｎ中のアルキル鎖は、直鎖状または分枝状であってもよい）を表してもよく；
Ｒ １ －－－Ｒ ２ は、４、５、６または７員非芳香族炭素環を形成してもよく、この炭素環は、環の炭素原子の１つに結合したさらなる第一級アミノ基ＮＨ ２ 、第二級アミノ基ＮＨＲ ａ （式中、Ｒ ａ ＝置換されていてもよいＣ １ ～Ｃ ６ アルキル）、またはヒドロキシル基ＯＨを有する；または場合により、Ｒ１－－－Ｒ２は、４、５、６もしくは７員非芳香族複素環（この複素環にはＯ、ＮもしくはＳなどのヘテロ原子が含まれる）を形成してもよく；
Ｒ１および／またはＲ２は、
ヒドロキシアルキル基（ＣＨ２）ｍＯＨ（式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状または分枝状の置換されていてもよいアルキル鎖を有する）をさらに表してもよく；Ｒ１またはＲ２基のうちの一方は、カーボネートまたはカルバメート誘導体（ＣＨ２）ｍＯＣＯＯＲ５または（ＣＨ２）ｍＮＨＣＯＯＲ５（式中、ｍ＝１～１２、Ｒ５＝メチル、エチル、２－クロロエチル、ＣＨ２ＣＮ、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリル、フェニル基または置換フェニル基、例えば、２－および４－ニトロフェニル、ペンタクロロフェニル、ペンタフルオロ－フェニル、２，３，５，６－テトラフルオロフェニル、２－ピリジル、４－ピリジル）；
（ＣＨ２）ｍＮＲａＲｂ（式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有し；Ｒａ、Ｒｂは、互いに独立しており、水素および／または置換されていてもよいＣ１～Ｃ４アルキル基を表す）；
（ＣＨ２）ｍＮ３（式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）；
－（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ４（式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５、直鎖状または分枝状アルキル鎖（ＣＨ２）ｎを有し、Ｒ４は、Ｈ、直鎖状または分枝状Ｃ１～Ｃ６アルキル、ＣＨ２ＣＮ、２－および４－ニトロフェニル、２，３，５，６－テトラフルオロフェニル、ペンタクロロフェニル、ペンタフルオロフェニル、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリルから選択される）；
（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨＲ５（式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５、Ｒ５＝Ｈ、置換または非置換Ｃ１～Ｃ６アルキル、（ＣＨ２）ｍＮ３、（ＣＨ２）ｍ－Ｎ－マレイミド、（ＣＨ２）ｍ－ＮＨＣＯＣＨ２Ｙ（式中、Ｙ＝Ｂｒ、Ｉ）、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、（ＣＨ２）ｎおよびＲ５中に直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）であってもよく；
さらに、Ｒ１またはＲ２は、ＣＨ２－Ｃ６Ｈ４－ＮＨ２、ＣＯＣ６Ｈ４－ＮＨ２、ＣＯＮＨＣ６Ｈ４－ＮＨ２またはＣＳＮＨＣ６Ｈ４－ＮＨ２（Ｃ６Ｈ４は、１，２－、１，３－または１，４－フェニレンである）、ＣＯＣ５Ｈ３Ｎ－ＮＨ２またはＣＨ２－Ｃ５Ｈ３Ｎ－ＮＨ２（Ｃ５Ｈ３Ｎは、ピリジン－２，４－ジイル、ピリジン－２，５－ジイル、ピリジン－２，６－ジイルまたはピリジン－３，５－ジイルである）を表してもよく；
Ｒ３＝Ｈ、（ＣＨ２）ｑＣＨ２Ｘ、Ｃ２Ｈ５、直鎖状または分枝状Ｃ３～Ｃ６アルキル基、ＣｍＨ２ｍＯＲ（式中、ｍ＝２～６、直鎖状または分枝状アルカン－ジイル鎖ＣｍＨ２ｍを有する）、Ｒ３＝Ｈ、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、Ｃ３Ｈ７、ＣＨ３（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｋＣＨ２ＣＨ２（式中、ｋ＝１～１２）であり；一方、（ＣＨ２）ｑＣＨ２リンカーは、２～６個の炭素原子を有する直鎖、分枝状または環式基を表してもよく；
式Ｄにおいて、スルホンアミド断片ＳＯ２Ｎと残基Ｘとの間の（ＣＨ２）ｎ－ＣＨ２リンカー（式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５）は、２～６個の炭素原子を有する直鎖、分枝状または環式基を表してもよく；
Ｘ＝ＳＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、ＯＳＯ３Ｈ、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒａ（式中、Ｒａ＝置換または非置換Ｃ１～Ｃ４アルキル）、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒａ（式中、Ｒａ＝置換または非置換Ｃ１～Ｃ４アルキルである）であり；
ただし、式Ｄによって表されるすべての化合物において、塩基性条件下、すなわち７＜ｐＨ＜１４で、式Ｃの残基Ｘに３、６、９または１２個の負荷電基が存在し、これらの負荷電基は、以下：ＳＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、ＯＳＯ３Ｈ、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒａ（式中、Ｒａ＝Ｃ１～Ｃ４アルキルまたは置換Ｃ１～Ｃ４アルキル）、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒａ（式中、Ｒａ＝Ｃ１～Ｃ４アルキルまたは置換Ｃ１～Ｃ４アルキル）から選択されるイオン化可能基の少なくとも部分的に脱プロトン化された残基を表す］
に示される通りのスルファミド誘導体である。
本発明の好ましい実施形態によると、上記式Ｂ、ＣおよびＤの置換基Ｒ１およびＲ２は、以下の通り定義される：
式ＢのＲ１および／またはＲ２は、Ｈ、重水素、アルキルまたは重水素置換アルキル（アルキル基の１個、いくつかまたはすべてのＨ原子は、重水素原子によって交換されていてもよい）、特に、１～１２個のＣ原子、好ましくは１～６個のＣ原子を有するアルキルまたは重水素アルキル、例えば、メチル、エチル、プロピルなど、４，６－ジハロ－１，３，５－トリアジニル（Ｃ３Ｎ３Ｘ２）（ハロゲンＸは、好ましくは、塩素である）、２－、３－もしくは４－アミノベンゾイル（ＣＯＣ６Ｈ４ＮＨ２）、２－、３－もしくは４－アミノフェニルウレイル（ＮＣＯＮＨＣ６Ｈ４ＮＨ２）、２－、３－もしくは４－アミノフェニルチオウレイル（ＮＣＳＮＨＣ６Ｈ４ＮＨ２）、または一般式（ＣＨ２）ｍ１ＣＯＯＲ３、（ＣＨ２）ｍ１ＯＣＯＯＲ３（ＣＨ２）ｎ１ＣＯＯＲ３もしくは（ＣＯ）ｍ１（ＣＨ２）ｍ２（ＣＯ）ｎ１（ＮＨ）ｎ２（ＣＯ）ｎ３（ＣＨ２）ｎ４ＣＯＯＲ３の結合カルボン酸残基およびその反応性エステル（式中、整数ｍ１、ｍ２およびｎ１、ｎ２、ｎ３、ｎ４は、独立して、それぞれ１～１２および０～１２の範囲であり、鎖（ＣＨ２）ｍ／ｎは、直鎖状、分枝状、飽和、不飽和、部分もしくは完全重水素化であるおよび／またはＮ、ＯもしくはＳを含有する炭素環もしくは複素環に含まれ、Ｒ３は、Ｈ、Ｄまたは求核反応性脱離基であり、好ましくは、これらに限定されないが、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリル、シアノメチル、ポリハロゲノアルキル、ポリハロゲノフェニル、例えば、テトラ－またはペンタフルオロフェニル、２－または４－ニトロフェニルを含む）を表す。
式ＢのＲ１および／またはＲ２は、Ｈ、重水素、アルキルまたは重水素置換アルキル（アルキル基の１個、いくつかまたはすべてのＨ原子は、重水素原子によって交換されていてもよい）、特に、１～１２個のＣ原子、好ましくは１～６個のＣ原子を有するアルキルまたは重水素アルキル、例えば、メチル、エチル、プロピルなど、４，６－ジハロ－１，３，５－トリアジニル（Ｃ３Ｎ３Ｘ２）（ハロゲンＸは、好ましくは、塩素である）、２－、３－もしくは４－アミノベンゾイル（ＣＯＣ６Ｈ４ＮＨ２）、２－、３－もしくは４－アミノフェニルウレイル（ＮＣＯＮＨＣ６Ｈ４ＮＨ２）、２－、３－もしくは４－アミノフェニルチオウレイル（ＮＣＳＮＨＣ６Ｈ４ＮＨ２）、または一般式（ＣＨ２）ｍ１ＣＯＯＲ３、（ＣＨ２）ｍ１ＯＣＯＯＲ３（ＣＨ２）ｎ１ＣＯＯＲ３もしくは（ＣＯ）ｍ１（ＣＨ２）ｍ２（ＣＯ）ｎ１（ＮＨ）ｎ２（ＣＯ）ｎ３（ＣＨ２）ｎ４ＣＯＯＲ３の結合カルボン酸残基およびその反応性エステル（式中、整数ｍ１、ｍ２およびｎ１、ｎ２、ｎ３、ｎ４は、独立して、それぞれ１～１２および０～１２の範囲であり、鎖（ＣＨ２）ｍ／ｎは、直鎖状、分枝状、飽和、不飽和、部分もしくは完全重水素化であるおよび／またはＮ、ＯもしくはＳを含有する炭素環もしくは複素環に含まれ、Ｒ３は、Ｈ、Ｄまたは求核反応性脱離基であり、好ましくは、これらに限定されないが、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリル、シアノメチル、ポリハロゲノアルキル、ポリハロゲノフェニル、例えば、テトラ－またはペンタフルオロフェニル、２－または４－ニトロフェニルを含む）を表す。
式ＣおよびＤの化合物は、塩の形態で存在し得、塩の形態で適用されてもよく、該塩の形態は、すべての可能な種類のカチオン、特に式Ｂに関して上述の通り、好ましくは、Ｎａ＋、Ｌｉ＋、Ｋ＋、ＮＨ４
＋および有機アンモニウムまたは有機ホスホニウムカチオンを含む。
上記一般構造式Ｂ、ＣおよびＤのとりわけ好ましい化合物は、以下の式
のうちの１つを有する。
本発明の好ましい一実施形態は、上記式Ａ～ＢまたはＡ～Ｄの化合物に関し、負電荷は、いくつかの第一リン酸基、特に、二重Ｏ－リン酸化７－アミノアクリドン－２－スルホンアミド（２つのリン酸基）、三重Ｏ－リン酸化１，６，８－トリス［（ω－ヒドロキシアルキル）スルホニル］－ピレン－３－アミン（３つのリン酸基）および１，６，８－トリス［Ｎ－（ω－ヒドロキシアルキル）スルホニルアミド］ピレン－３－アミンによってもたらされる。これらの化合物は、ＡＰＴＳと比較して優れた輝度、および大幅により良好な電気泳動移動度を有する。
本発明の好ましい一実施形態は、上記式Ａ～ＢまたはＡ～Ｄの化合物に関し、負電荷は、いくつかの第一リン酸基、特に、二重Ｏ－リン酸化７－アミノアクリドン－２－スルホンアミド（２つのリン酸基）、三重Ｏ－リン酸化１，６，８－トリス［（ω－ヒドロキシアルキル）スルホニル］－ピレン－３－アミン（３つのリン酸基）および１，６，８－トリス［Ｎ－（ω－ヒドロキシアルキル）スルホニルアミド］ピレン－３－アミンによってもたらされる。これらの化合物は、ＡＰＴＳと比較して優れた輝度、および大幅により良好な電気泳動移動度を有する。
本発明の新規化合物は、小さな分子サイズを有し、好ましい実施形態では、劇的に増加した高い正味負電荷（ｚ）がもたらされる（例えば、少なくとも、リン酸化アクリドンについてｚ＝－４およびリン酸化ピレン色素についてｚ＝－６）。これらの２つの要件は、それぞれ、低い流体力学半径および低い質量対電荷比（ｍ／ｚ）と等価である。結果として、高速および良好な分析的分解能における高速分離が、これらの化合物および対応する標識炭水化物に関する動電測定において達成され得る。
負電荷は、塩基性またはさらに中性媒体中で脱プロトン化され得る酸性基によってもたらされる。第一ホスホン酸アルキル（Ｒ－ＯＰＯ３Ｈ２）は、第１および第２の酸性プロトンについてそれぞれ１～２および６～７の範囲のｐＫａ値を有するため、リン酸基はこの目的のために好ましい。その結果、単一のリン酸基は、塩基性条件下で緩衝溶液に２つの負電荷を導入し得る（例えば、ｐＨ８では、Ｒ－ＯＰＯ３
２－が存在する）。－４の負電荷を達成するためには、２つのリン酸基の結合が必須であるなどである。しかしながら、特に、上記式Ａ～Ｂにおいて定義される通りの基Ｘから選択される他の酸性基もまた、好適である。
一般に、上記式Ａ～Ｂの化合物は、アミノ酸、ペプチド、一次および二次抗体、単一ドメイン抗体、ドセタキセル、アビジン、ストレプトアビジンおよびそれらの変形を含むタンパク質、アプタマー、ヌクレオチド、核酸、毒素、脂質、２－デオキシ－２－アミノグルコースおよび他の２－デオキシ－２－アミノアミノピラノシド、グリカン、グルカンを含む炭水化物、ビオチンならびに他の低分子、すなわち、１５００Ｄａ未満の分子質量を有する分子、例えば、ジャスプラキノリドおよびその変形のための蛍光標識として使用するのに好適かつ有利である。
化合物７－Ｒ（Ｒ＝Ｈ、Ｍｅ）、１３ａ、１３ｂ、１６および１８（以下のスキーム５）は、遊離ヒドロキシル基を有し、一般式Ｂのリン酸化ピレン色素を得るための前駆体として好適である。特に、化合物７－Ｒ（Ｒ＝Ｈ、Ｍｅ）は、直接リン酸化し（リン酸トリメチル中のＰＯＣｌ３）、色素８－Ｒ（Ｒ＝Ｈ、Ｍｅ）を得た。同様に、色素１３ａ、ｂおよび１８は、リン酸トリメチル中のＰＯＣｌ３を使用してリン酸化した。したがって、前駆体色素１３ａおよび１３ｂの両方は、（反応混合物の塩基性後処理後に）化合物１５をもたらした。化合物１６は、生体共役反応の反応中心として使用され得る遊離カルボキシル基を有する。したがって、化合物１６は、アミノ酸、ペプチド、一次および二次抗体、単一ドメイン抗体、ドセタキセル、アビジン、ストレプトアビジンおよびそれらの変形を含むタンパク質、アプタマー、修飾ヌクレオチド、アミノ基を含有する修飾核酸、毒素、脂質、２－デオキシ－２－アミノグルコースおよび他の２－デオキシ－２－アミノアミノピラノシドを含む炭水化物、修飾ビオチン（例えば、ビオシチン）ならびに他の低分子、すなわち、１５００Ｄａ未満の分子質量を有する分子（例えば、ジャスプラキノリドおよびその変形）のための蛍光標識を表す。
その結果、本発明の密接に関連する態様は、広範囲の分析物へのコンジュゲーションのための蛍光試薬としての構造式Ａ～Ｂの化合物の使用であって、コンジュゲーションが、任意の化学実体、ペプチド、タンパク質、炭水化物、核酸、毒素および脂質とカップリングした化学実体または物質、例えば、アミン、カルボン酸、アルデヒド、アルコール、芳香族化合物、複素環、色素、アミノ酸、アミノ酸残基との少なくとも１つの共有化学結合または少なくとも１つの分子錯体の形成を含む、使用に関する。
特許請求される化合物は、標的分子の蛍光標識および検出のための方法に好適であり、それに使用され得る。典型的には、そのような方法は、上記式Ａ～Ｄのいずれか１つによる化合物を、アミノ酸、ペプチド、一次および二次抗体、単一ドメイン抗体、ドセタキセル、アビジン、ストレプトアビジンおよびそれらの変形を含むタンパク質、アプタマー、（修飾）ヌクレオチド、（修飾）核酸、毒素、脂質、２－デオキシ－２－アミノグルコースおよび他の２－デオキシ－２－アミノアミノピラノシド、グリカン、グルカンを含む炭水化物、（修飾）ビオチン（例えば、ビオシチン）、ならびに他の低分子、すなわち、１５００Ｄａ未満の分子質量を有する分子（例えば、ジャスプラキノリドおよびその変形）を含む群から選択される標的分子と反応させることを含む。標識の後に、クロマトグラフィー技術および／または動電技術による標識蛍光誘導体の分離、検出、定量および／または単離が続く。
さらに、本発明はまた、上記式Ａ～ＢまたはＡ～Ｄによる蛍光色素を含む炭水化物－色素コンジュゲートを包含する。
より具体的には、前記コンジュゲート、特に炭水化物コンジュゲート中の色素は、以下のスキーム６に示される通りの式６－Ｈ、６－Ｍｅ、８－Ｈ、１５または１９および２０の化合物から選択される。
より具体的には、前記コンジュゲート、特に炭水化物コンジュゲート中の色素は、以下のスキーム６に示される通りの式６－Ｈ、６－Ｍｅ、８－Ｈ、１５または１９および２０の化合物から選択される。
上記式Ａ～ＢまたはＡ～Ｄの化合物は、還元糖、すなわち、グリカンを含む遊離形態またはた保護形態のアルデヒド基を有するモノマー、オリゴマーまたはポリマー炭水化物、例えば、セミアセタールの還元的アミノ化（スキーム２および６に示される通り）における使用に好適かつ有利である。
その結果、本発明の密接に関連する態様は、この使用、ならびに還元糖の還元的アミノ化のための方法であって、上記式Ａ～Ｄの化合物を、グリカンを含む遊離形態またはセミアセタールとしての、アルデヒド基を有するモノマー、オリゴマーまたはポリマー炭水化物と、還元的アミノ化を行うのに十分な時間、反応させるステップ、ならびに標識蛍光誘導体のクロマトグラフィーによる分離または動電分離に続いて、場合により、蛍光検出および／または質量分析による検出を含む光学分光による分析物の検出を含む、方法に関する。色素－コンジュゲート構造の例は、スキーム６に示される。
式Ａ～Ｄの化合物およびこれを含む炭水化物－色素コンジュゲートは、好ましい吸収／発光特性（表２を参照されたい）および電気泳動移動度を伴い、高い正味負電荷を特徴とする色素の組を構成する。
本発明の新規蛍光色素の一般合成
新しいスルホン化２（７）－アミノアクリドンおよび１－アミノピレン色素の合成経路が以下のスキーム７～１０に示される。
新しいスルホン化２（７）－アミノアクリドンおよび１－アミノピレン色素の合成経路が以下のスキーム７～１０に示される。
スキーム７は、二重Ｏ－リン酸化７－アミノアクリドン－２－［Ｎ，Ｎ’－ビス－（２－ヒドロキシエチル）］－スルホンアミド６－Ｈおよび６－Ｍｅの調製を示す。Ｋ２ＣＯ３および触媒量のＣｕ（ＮＯ２）２の存在下（１８５℃、２～４時間）での２－クロロ－５－ニトロ安息香酸とアニリン間の公知の反応により、ＷＯ２００７／０４９０５７およびＵＳ２０１２／００１５３７３に記載の手順に従い、４－ニトロ－Ｎ－フェニルアントラニル酸（スキーム５には示されていない）が得られた。４－ニトロ－Ｎ－フェニルアントラニル酸を、２－ニトロアクリジン－９（１０Ｈ）－オン（１－Ｈ）に環化させた（ＰＯＣｌ３、還流、３時間）。さらなる合成の実験詳細は、実施例のための節において示される。
三重Ｏ－リン酸化１，６，８－トリス［［Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）－Ｎ－メチル］スルホニルアミド］ピレン－３－アミン８－Ｒへの合成経路が、スキーム８に示される。詳細な実験手順は、実施例の節に示される。
三重Ｏ－リン酸化１，６，８－トリス［（３－ヒドロキシプロピル）スルホニル］－ピレン－３－アミン１５への合成経路が、スキーム９に示される。詳細な実験手順は、実施例の節に示される。
演繹的に、ピレン誘導体７－Ｒ／８－Ｒおよび１５は、７－アミノアクリドン－２－［Ｎ，Ｎ－ビス－（２－ヒドロキシエチル）］スルホンアミド６－Ｈおよび６－Ｍｅよりも良好な光物理学的性質が見込まれた。特に、より高いモル吸光係数およびより高い蛍光量子収率（より高い「輝度」）が予想され得た。例えば、ピレン色素１５を調製するために、安価で市販されている出発材料である１－アミノピレン（１０）を、構成単位として使用した（スキーム９）。ＡＰＴＳもまた、１－アミノピレン（１０）から開始し、報告された方法（Ｓｈａｒｒｅｔｔら、Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００９、７、１４６１～１４７０）を使用して、本発明者らによって合成された。１－アミノピレン（１０）は、電子供与体残基および反応部として働くアミノ基を有する。化合物１０は、３３６ｎｍでの吸収極大および４４５ｎｍでの発光極大を有する（ＭｅＯＨ中）ため、吸収スペクトルを赤色にシフトすることが必要である。深色シフトおよび深蛍光シフトは、電子受容体基のピレンフルオロフォアへの導入と、それに続く、アミノ基の単回または二重アルキル化によって実現され得る。後修飾は、グリカンの還元的アミノ化の過程で起こり、第一級アミノ基をより電子供与性の高い第二または第三級アミンに変換する。ハメット定数（表１を参照）の大きさおよび符号によって、置換基の電子効果が説明され得、それらの相対強度が比較され得る。
アミノ基がＣ－１に結合していると仮定すると、置換基は、Ｃ－３、Ｃ－６およびＣ－８に（求電子置換反応の過程で）導入され得る。ピレン系の「活性な」６および８位（ベンゼン環のパラ位に対応する）、ならびにＣ－３（ベンゼン環のメタ位に対応する）への受容体基の導入は、赤色シフトバンドを有する供与体－受容体色素の形成につながる。この赤色シフトは、電子供与性アミノ基と、３、６および８位の電子求引性基との間の「プッシュ－プル」電子効果に起因する。価値のある前駆体基は、例えば、ＡＰＴＳ中のスルホン酸残基（スルホンアミドに変換可能；スキーム８を参照されたい）および化合物１４のチオエーテルであり、これは、スルホンに酸化され、はるかにより強力な電子求引性残基になり得る（スキーム９）。アルキルスルホン（化合物１３ｂ、１５、１６および１８によって表される）は、表１のハメットσ－定数の最高値を有し、これは、それらが、スルホンアミド（化合物７－Ｈ、７－Ｍｅ、８－Ｈ、８－Ｍｅ）よりも強力な受容体であることを示している。色素設計においてスルホンアミドおよびアルキルスルホンを選択する別の理由は、それらが、第一リン酸基または他のイオン化可能基に結合するのに必要なヒドロキシル残基と組み合わせられ得ることである。
任意の基を１－アミノピレンスキャフォールドに導入し始める前に（最初の反応は、常に芳香族求電子置換であると考えられる）、一部の場合には、１－アミノピレン１０のアミノ基を保護する必要があった（スキーム９）。本発明者らは、無水トリフルオロ酢酸によるアセチル化（実に新しい選択肢）を使用し、アセチル化アミン１１を得た。この場合、トリフルオロアセチル基は、酸安定であるが、穏やかな塩基性条件下で容易に切断され得るため、アセチル基（これは、例えば、Ｌｉら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９９４、１１６、９８９０～９８９３によって使用された）よりも良い選択である。トリフルオロアセチル化によるアミノ基の保護の後、化合物１１の３、６および８位での求電子置換は、トリブロモアミノピレン（１２）をもたらした。芳香族臭素残基は、多数の他の官能基に容易に変換され得るため、このトリブロミドは非常に重要な中間体を表した。例えば、チオエーテル基の導入のための簡便な合成方法が、Ｍｉｓｐｅｌａｅｒｅ－Ｃａｎｖｉｖｅｔら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ２００５、６１、５２５３～５２５９によって公開され、これは、チオールと臭化アリールのＰｄ触媒クロスカップリングを報告した。非保護３－メルカプト－１－プロパノールは、トリオール１４を得るために直接使用され得ることが見出された。１４のトリスルホニル誘導体１３ａへの簡単な酸化は、触媒として酢酸中の濃過酸化水素およびタングステン酸ナトリウムを使用して実施した（比較：Ｘｕら、Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ２０１０、１５、７６６～７７９）。化合物１３ａは、水性Ｎａ２ＣＯ３による処理によってメタノール中で脱保護して、遊離アミン１３ｂを得、次にこれを化合物１５にリン酸化した。
リン酸トリメチル中のＰＯＣｌ３を使用する非保護アミノ基による芳香族アミンの直接リン酸化（スキーム８の７－Ｒから８－Ｒ、およびスキーム９の１３ｂから１５）に続いて、水性Ｅｔ３Ｎ＊Ｈ２ＣＯ３緩衝液による処理が可能であることが判明した。芳香族アミノ基もまたリン酸化を受けるが、非常に不十分な電子密度に起因して、これらのアミノ基は、水溶液中（わずかに酸性または塩基性条件下）でリン酸残基を容易に失う。
これとは対照的に、色素８－Ｒ（Ｒ＝Ｈ、ＣＨ３）および１５の第一リン酸基は、ｐＨ＝３（還元的アミノ化）およびｐＨ＝８（電気泳動）において加水分解安定である。
トリスルホン１３ａのアミノ基を、炭酸ナトリウムのメタノール水溶液中での穏やかな加熱によって脱保護し、アミノスルホン１３ｂを、良好な収率で単離した。Ｂｏｒｃｈ反応（Ｂｏｒｃｈら、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９６９、９１、３９９６～３９９７）の過程におけるアミノスルホン１３ｂのグリオキシル酸一水和物による還元的アミノ化により、ピレン色素５００Ｐ（１６）が３８％の収率でもたらされた。反応は、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、グリオキシル酸一水和物および濃水性ＨＣｌを化合物１３ｂに数日間かけて少しずつ添加することによって実施した。中程度の収率は、３つの電子求引アルキルスルホニル基によって誘導体化されたアミノ基の低い反応性によって説明されると考えられた。化合物１６は、多様な反応中心であるカルボキシル基を有する蛍光色素を表す。１６のアミノ基は、カルボキシメチル化されており、この種類の誘導体化（アルキル基よりも効率的でない供与体による）がどのような深色シフトおよび深蛍光シフトを誘発するかを知るのは興味深いことであった。Ｎ－メチル化ピレン色素１８もまた、調製した。メチル基は、カルボキシメチル基よりも強力な電子供与体であり、この点で、化合物１８は、おそらく化合物１６よりも優れた炭水化物の還元的アミノ化の生成物のモデルを表す。
アルキルスルホニル置換（特に、スルホアルキルスルホニル置換）１－アミノピレン色素２３ａおよびその相同体２３ｂの合成は、スキーム１１に示される通り、対応する二官能性シントンのスルホン酸基（ＳＯ３Ｈ）の保護を必要としない。とりわけ、一部の有用なスルホアルキル置換シントン、例えば、ナトリウム３－メルカプト－１－プロパンスルホネートまたはナトリウム２－メルカプトエタンスルホネートが市販されていることを考慮すると、これは、その「リン酸化対部分」である色素１５の調製のためのプロセス（スキーム９を参照されたい）と比較して、全プロセスを大幅に簡略化する。反応は、チオエーテル官能基を介して色素コアに連結した３つのイオン化可能基を有する高水溶性色素をもたらす。チオエーテルのスルホンへの酸化は、チオエーテル含有中間体２１ａ、ｂ、およびさらには十分確立されたベンチマーク色素であるＡＰＴＳ（構造についてはスキーム１１および１２、ならびにスペクトル特性については表２を参照されたい）と比べて大きな深色シフトおよび深蛍光シフトをもたらす。色素のアミノ部での保護基の切断は、炭水化物反応性化合物につながり、これは、一般式Ｃの場合を表す。全合成シーケンスは、上記スキーム１１に示される。
新しい色素のスペクトル特性
表２の構造特徴およびスペクトルデータは、二重リン酸化アミノアクリドン６－Ｈおよび６－Ｍｅ、三重リン酸化ピレン色素８－Ｈ、８－Ｍｅおよび１５が、上で定義した蛍光タグの基準を満たすことを示す。さらに、それらが、グリカンの還元的アミノ化に使用され得るか、およびそれらのコンジュゲートの発光が、ＡＰＴＳで標識されたグリカン（構造およびスペクトルデータについては、スキーム９～１２および表２を参照されたい）の発光に干渉しないかを明らかにする必要があった。例えば、化合物６－Ｒ（Ｒ＝Ｈ、Ｍｅ）は、それぞれ、１３４および１３８に等しいｍ／ｚ比を有する（ＡＰＴＳはｍ／ｚ＝１５１を有する）。それらは、いくつかの吸収極大を有し、橙色光を発光する（４８５ｎｍおよび５８５ｎｍでの２つの発光極大、ならびにおよそ１：２の相対強度を有する；図２Ａを参照されたい）。４８８ｎｍでのその吸収は比較的低いが、赤色シフトした発光は、特筆すべき特徴であり、およそ１６０ｎｍのストークスシフトを伴う。化合物６－Ｒに関する蛍光量子収率の絶対値は、５～６％である。したがって、その比較的低い輝度にも関わらず、黄色－橙色発光アクリドン色素６－Ｒは潜在的に、より明るい黄色－緑色発光アミノピレン色素８－Ｒおよび１５と少なくとも同じくらい有用である。両方の種類の色素は、その比較的低い正味電荷（－３）を有するＡＰＴＳおよびＡＰＴＳ標識で装飾された「重」炭水化物の低い移動度によって提示される制限に起因して未だ検出することができない「重」および「外来」グリカンを含むグリカンの標識に使用され得る新しいタグを表す。実際、４つの負電荷の存在および極度に低いｍ／ｚ比に起因して、ここで導入されるリン酸化色素は、コンジュゲートのより良好な電気泳動移動度をもたらすことができ、その泳動時間を低減し、したがって、嵩高で大きな炭水化物を明らかにし、強調する。
表２に列挙されるすべてのピレン色素は、非常に蛍光性である。非リン酸化ピレン７－Ｒ（Ｒ＝Ｈ、Ｍｅ）、１３ｂ、１６および１８は、高い精度で吸光係数を推定することを可能にする。最長波長バンドの吸光係数は、１８０００～２３０００の範囲であり、一方、極大の位置は、４６５～５０７ｎｍで変動する。したがって、蛍光は、４８８ｎｍで発光するアルゴンイオンレーザーによって容易に誘発され得る。発光極大は、５３５～５６３ｎｍの範囲であることが見出され、蛍光量子収率は、常に高い（７１～９７％）。したがって、スルホン化１－アミノピレン（一般式Ｂ～Ｄ）は、２－スルホンアミド－７－アミノアクリドン（式Ａ）よりもはるかに明るい色素を表す。輝度は、吸光係数（４８８ｎｍでの）と蛍光量子収率の積に比例する。本発明者らは、アクリドン色素について、この値がおよそ１５００×０．０６＝９０であり、ピレンについて、２００００×０．９＝１８０００であると仮定できる。この概算推定は、トリスルホン化１－アミノピレンが、２－スルホンアミド－７－アミノアクリドンよりもおよそ２００倍明るい色素であることを意味する。この性質により、本発明の１－アミノピレン色素（式Ｂ～Ｄ）は、２－スルホンアミド－７－アミノアクリドン（式Ａ）およびＡＰＴＳよりも優れたタグになる。ＡＰＴＳコンジュゲートについて、極大（４５７ｎｍ）での吸光係数が１９０００であり（スキーム３）、４８８ｎｍでの吸収が典型的にはおよそ４５７ｎｍでの吸収極大の３５％であると仮定すると、６０００の相対輝度（同じ蛍光量子収率を仮定）を得る。したがって、本発明の色素は、４８８ｎｍレーザーによる励起下（グリカンとのコンジュゲート中）でＡＰＴＳよりもおよそ３倍明るい。本発明のピレン色素、特に、化合物８－Ｈ、１５および２３ａ、ｂは、ＡＰＴＳによって提示されるその比較的低い正味電荷（－３）および低い輝度の制限に起因して未だ検出することができない「重」および「外来」グリカンを含むグリカンの標識に使用され得る新しいタグを表す。やはり非常に重要なことに、これらのアミノピレン色素（すなわち、８－Ｈ、１３ｂ、１５、２３ａ、ｂ）のいずれも、中性（ＰＢＳ緩衝液、ｐＨ＝７．４）から塩基性（ＴＥＡＢ緩衝液、ｐＨ＝８．０～８．５）媒体への切り替え時、蛍光量子収率の有意な変化を示さなかった。
発光バンドを赤色スペクトル領域にシフトするために、Ｎ－メチル化誘導体８－Ｍｅを調製した。この色素は、Ｎ－メチルアミノ基を有し、したがって、グリカンおよび親色素８－Ｈから形成された還元的アミノ化の生成物と非常に類似した（スキーム２の化合物６と比較して）フルオロフォアを表す。吸収極大は、赤色にシフトしている（＋３７ｎｍ；８－Ｈ→８－Ｍｅ）が、発光極大は、「たった」１９ｎｍの深蛍光シフトを受けた（表２を参照されたい）。したがって、ストロークスシフトは、７９ｎｍから６１ｎｍに低下した。
芳香族蛍光色素の系列において深色シフトおよび深蛍光シフトを増加させるための別のツールが存在するが、ただし、それらは、それらの間にいわゆる「プッシュ－プル」電子相互作用（直接極性コンジュゲーション）を有する電子供与体および電子受容体基を有する。１－アミノピレン色素の場合、供与体基は固定される（その電子供与特性は強化され得ない）が、３、６および８位の電子吸引基は変動し得る。例えば、化合物１４のチオエーテル（スキーム９）は、対応するスルホンに酸化され、化合物７－Ｒ、８－Ｒおよび９－Ｒのスルホンアミド（スキーム８）よりも強力な電子吸引残基を獲得し得る。実際、アルキルスルホン基（Ｒ－ＳＯ２、化合物１３ｂ、１５、１６、１８および２３ａ、ｂに存在する；スキーム８、９および１１を参照されたい）は、表１に見られる通り、ハメットσ－定数の最高値を有し、これは、それらが、スルホンアミド部分（化合物７－Ｈ、７－Ｍｅ、８－Ｈ、８－Ｍｅ；スキーム８および９を参照されたい）よりもさらに強力な受容体であることを示している。しかしながら、化合物８－Ｈおよび１５を調製し、水溶液中でそのスペクトル特性（表２）を比較した後、予想通り、深色シフトは１２ｎｍであるが、発光極大の位置およびバンド形状は同じであることが決定された（図２Ｂに見られる通り）。このことについての最も単純な説明は、単一アミノ基（供与体として）が「その限界にあり」、それらがいかに強力であっても、３つの非常に強力な受容体基で装飾されたπ－系により高い電子密度をもたらすことが可能ではないという仮定に基づく。幸運なことに、窒素原子の還元的アルキル化（スキーム２を参照されたい）の際に、さらなる深色シフトおよび深蛍光シフトが起こり（上で議論した化合物８－Ｈおよび８－Ｍｅについてスペクトルデータを比較）、化合物１５はグリカンとの明るいコンジュゲートをもたらした。
本発明のさらなる態様は、式Ｃの蛍光ピレン色素（Ｘは、各出現において、ＳＯ３Ｈであり、ｎは１～１２、好ましくは１～６である）を合成するための一般的で単純な方法であって、アリールハロゲンと事前合成されたチオアルキルおよび非保護スルホン酸官能基を有する二官能性試薬との交換反応と、それに続いて、場合によりチオエーテルのスルホンへの酸化を含む、方法に関する。したがって、合成は、スルホン酸基（ＳＯ３Ｈ）が、アルキルスルホニル（アルカンスルホニル）リンカーＳＯ２（ＣＨ２）ｎを介して芳香族色素コアに連結しているスルホアルキルスルホニル置換色素を生じる。
より具体的には、そのような方法は、少なくとも以下のステップを含む：１適切な保護基による）１－アミノピレンの保護；２）スキーム９に示される通りのハロゲン化、通常臭素化；３）スキーム１１に示される通りの、通常パラジウムまたは銅の塩または錯体により触媒される、トリハロゲノ置換ピレン誘導体の、チオールおよびスルホン酸（スルホネート）官能基を有する二官能性試薬とのクロスカップリング反応；４）チオエーテルのスルホンへの酸化；５）アミノ基の脱保護。
本発明の密接に関連する態様は、一般式ＢおよびＣを有する、水中での４７７～５１０ｎｍの吸収極大、０または－６までおよびそれよりも大きい正味電荷、５３５～５６０ｎｍの発光極大の蛍光アミノピレン色素、特に、化合物７－Ｒ、１３ａ、１３ｂ、１５、１６、１８、２３ａおよび２３ｂを合成するための方法であって、アリールハロゲンの置換チオアルキル官能基への交換反応と、それに続く、スルホンへの酸化および場合により、ヒドロキシル部におけるリン酸化を含む、方法に関する。
本発明は、一般式ＡおよびＤを有する、－４、－６およびそれよりも大きい正味電荷のリン酸化蛍光アミノピレンまたはアミノアクリドン色素、特に化合物６－Ｒおよび８－Ｒを合成するための方法であって、アミノアルコールのスルファミド化と、それに続く、ヒドロキシル部におけるリン酸化を含む、方法にさらに関する。
本発明は、下記の態様も包含する。
態様１
複数のイオン化可能基および／または負荷電基を有する蛍光色素であって、以下の一般式ＡおよびＢ：
［式中、
Ｒ １ 、Ｒ ２ 、Ｒ ３ 、Ｒ ４ 、Ｒ ５ は、互いに独立しており、
Ｈ、ＣＨ ３ 、Ｃ ２ Ｈ ５ 、直鎖状もしくは分枝状Ｃ ３ ～Ｃ １２ 、好ましくはＣ ３ ～Ｃ ６ アルキルもしくはペルフルオロアルキル基、ホスホニル化アルキル基（ＣＨ ２ ） ｍ Ｐ（Ｏ）（ＯＨ） ２ （式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状もしくは分枝状アルキル鎖を有する）、（ＣＨ ２ ） ｎ ＣＯＯＨ（式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５）、または（ＣＨ ２ ） ｎ ＣＯＯＲ ６ （式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５、Ｒ ６ は、アルキル、特に、Ｃ １ ～Ｃ ６ アルキル、ＣＨ ２ ＣＮ、ベンジル、フルオレン－９－イル、ポリハロゲノアルキル、ポリハロゲノフェニル、例えば、テトラもしくはペンタフルオロフェニル、ペンタクロロフェニル、２－および４－ニトロフェニル、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリルもしくは他の潜在的に求核反応性の脱離基であってもよい）、スルホン酸アルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ ＳＯ ３ Ｈ）もしくは硫酸アルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ ＯＳＯ ３ Ｈ）（式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５、いずれの（ＣＨ ２ ） ｎ 中のアルキル鎖も直鎖状もしくは分枝状であってもよい）；
ヒドロキシアルキル基（ＣＨ ２ ） ｍ ＯＨもしくはチオアルキル基（ＣＨ ２ ） ｍ ＳＨ（式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状もしくは分枝状アルキル鎖を有する）、リン酸化ヒドロキシアルキル基（ＣＨ ２ ） ｍ ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ） ２ （式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状もしくは分枝状アルキル鎖を有する）を表してもよく；Ｒ １ またはＲ ２ 基のうちの一方は、カーボネートまたはカルバメート誘導体（ＣＨ ２ ） ｍ ＯＣＯＯＲ ７ または（ＣＨ ２ ） ｍ ＮＨＣＯＯＲ ７ （式中、ｍ＝１～１２、Ｒ ７ ＝メチル、エチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ベンジル、フルオレン－９－イル、ＣＨ ２ ＣＮ、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリル、フェニル、置換フェニル基、例えば、２－または４－ニトロフェニル、ペンタクロロフェニル、ペンタフルオロフェニル、２，３，５，６－テトラフルオロ－フェニル、２－ピリジル、４－ピリジル、ピリミド－４－イル）；
（ＣＨ ２ ） ｍ ＮＲ ａ Ｒ ｂ （式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有し；Ｒ ａ 、Ｒ ｂ は、互いに独立しており、水素および／またはＣ １ ～Ｃ ４ アルキル基を表す）、ヒドロキシアルキル基（ＣＨ ２ ） ｍ ＯＨ（式中、ｍ＝２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）、リン酸化ヒドロキシアルキル基（ＣＨ ２ ） ｍ ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ） ２ （式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）；
アルキルアジド（ＣＨ ２ ） ｍ Ｎ ３ （式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）であってもよく；
Ｒ １ 、Ｒ ２ 、Ｒ ３ 、Ｒ ４ 、Ｒ ５ は、末端アルキルオキシアミノ基（ＣＨ ２ ） ｍ ＯＮＨ ２ （式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有し、これは、１つまたは複数のアルキルアミノ（ＣＨ ２ ） ｍ ＮＨまたはアルキルアミド（ＣＨ ２ ） ｍ ＣＯＮＨ基を、ｍ＝０～１２のすべての可能な組合せで含み得る）；
（ＣＨ ２ ） ｎ ＣＯＮＨＲ ８ （式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５；Ｒ ８ ＝Ｈ、Ｃ １ ～Ｃ ６ アルキル、（ＣＨ ２ ） ｍ Ｎ ３ または（ＣＨ ２ ） ｍ －Ｎ－マレイミド、（ＣＨ ２ ） ｍ －ＮＨ－ＣＯＣＨ ２ Ｘ（式中、Ｘ＝ＢｒまたはＩ）、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６であり、（ＣＨ ２ ）ｎ、（ＣＨ ２ ） ｍ およびＲ ８ 中に直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）；
好ましくは、Ｒ １ 、Ｒ ２ またはＲ ３ として、アリールヒドラジンを形成する第一級アミノ基；
好ましくは、Ｒ ２ またはＲ ３ として、アリールヒドロキシルアミンを形成するヒドロキシ基；
アルキルオキシアミノ基（ＣＨ ２ ） ｎ ＯＮＨ ２ （式中、ｎ＝１～１２）を含有してもよく；
さらに、残基Ｒ １ 、Ｒ ２ 、Ｒ ３ 、Ｒ ４ 、Ｒ ５ のうちの１つは、ＣＨ ２ －Ｃ ６ Ｈ ４ －ＮＨ ２ 、ＣＯＣ ６ Ｈ ４ －ＮＨ ２ 、ＣＯＮＨＣ ６ Ｈ ４ －ＮＨ ２ またはＣＳＮＨＣ ６ Ｈ ４ －ＮＨ ２ （Ｃ ６ Ｈ ４ は、１，２－、１，３－または１，４－フェニレンである）、ＣＯＣ ５ Ｈ ３ Ｎ－ＮＨ ２ またはＣＨ ２ －Ｃ ５ Ｈ ３ Ｎ－ＮＨ ２ （Ｃ ５ Ｈ ３ Ｎは、ピリジン－２，４－ジイル、ピリジン－２，５－ジイル、ピリジン－２，６－ジイルまたはピリジン－３，５－ジイルである）を表してもよく；
さらに、Ｒ ２ －－－Ｒ ３ （Ｒ ４ －－－Ｒ ５ ）は、４、５、６または７員環を形成してもよく、または、環の炭素原子の１つに結合した、第一級アミノ基ＮＨ ２ 、第二級アミノ基ＮＨＲ ａ （式中、Ｒ ａ ＝Ｃ １ ～Ｃ ６ アルキル）、ヒドロキシル基ＯＨ若しくはリン酸化ヒドロキシル基－ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ） ２ を有する若しくは有さない４、５、６もしくは７員環を形成してもよく；
場合により、Ｒ ２ －－－Ｒ ３ （Ｒ ４ －－－Ｒ ５ ）は、４、５、６または７員複素環（この複素環にはＯ、ＮまたはＳなどのさらに１～３個のヘテロ原子が含まれる）を形成してもよく；
さらに、Ｒ １ は、非置換フェニル基、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ ２ 、ＮＨＲ ａ 、ＮＲ ａ Ｒ ｂ 、Ｒ ａ Ｏ、Ｒ ａ Ｓ（式中、Ｒ ａ およびＲ ｂ は、互いに独立しており、直鎖状または分枝炭素鎖を有するＣ １ ～Ｃ ６ アルキル基であってもよい）の組から選択される１つまたはいくつかの電子供与体置換基を有するフェニル基、ＮＯ ２ 、ＣＮ、ＣＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＨ＝ＣＨＣＮ、ＣＨ＝Ｃ（ＣＮ） ２ 、ＳＯ ２ Ｒ ａ 、ＣＯＲ ａ 、ＣＯＯＲ ａ 、ＣＨ＝ＣＨＣＯＲ ａ 、ＣＨ＝ＣＨＣＯＯＲ ａ 、ＣＯＮＨＲ ａ 、ＳＯ ２ ＮＲ ａ Ｒ ｂ 、ＣＯＮＲ ａ Ｒ ｂ （式中、Ｒ ａ およびＲ ｂ は、互いに独立しており、Ｈまたは直鎖状もしくは分枝状炭素鎖を有するＣ １ ～Ｃ ６ アルキル基であってもよい）の組から選択される１つまたはいくつかの電子受容体を有するフェニル基を表してもよく；
またはＲ １ は、複素芳香族基を表してもよく；
ただし、上記式Ａのすべての化合物において、塩基性条件下、すなわち７＜ｐＨ＜１４で、少なくとも２つ、好ましくは少なくとも３、４、５または６つの負荷電基が存在し、これらの負荷電基は、以下：ＳＨ、ＣＯＯＨ、スルホン酸残基ＳＯ ３ Ｈ、第一リン酸基ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ） ２ 、第二リン酸基ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒ ａ （式中、Ｒ ａ ＝Ｃ １ ～Ｃ ４ アルキルまたは置換Ｃ １ ～Ｃ ４ アルキル）、第一ホスホン酸基Ｐ（Ｏ）（ＯＨ） ２ 、第二ホスホン酸基Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒ ａ （式中、Ｒ ａ ＝Ｃ～Ｃ ４ アルキルまたは置換Ｃ １ ～Ｃ ４ アルキル）から選択されるイオン化可能基の少なくとも部分的に脱プロトン化された残基を表す］
［式中、
Ｒ １ および／またはＲ ２ は、互いに独立しており、
Ｈ、重水素、アルキルもしくは重水素置換アルキル（アルキル基の１個、いくつかもしくはすべてのＨ原子は重水素原子で交換されることができる）、特に、１～１２個のＣ原子、好ましくは１～６個のＣ原子を有するアルキルもしくは重水素置換アルキル、例えば、ＣＨ ３ 、Ｃ ２ Ｈ ５ 、直鎖状もしくは分枝状Ｃ ３ ～Ｃ １２ アルキルもしくはペルフルオロアルキル基、または置換Ｃ ２ ～Ｃ １２ アルキル基；特に、（ＣＨ ２ ） ｎ ＣＯＯＲ ３ （式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５、Ｒ ３ は、Ｈ、アルキル、特にＣ １ ～Ｃ ６ アルキル、ＣＨ ２ ＣＮ、ベンジル、フルオレン－９－イル、ポリハロゲノアルキル、ポリハロゲノ－フェニル、例えば、テトラもしくはペンタフルオロフェニル、ペンタクロロフェニル、２－および４－ニトロフェニル、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリルまたは他の潜在的に求核反応性の脱離基であってもよく、（ＣＨ ２ ） ｎ のアルキル鎖は直鎖状または分枝状であってもよい）を表してもよく；
Ｒ １ －－－Ｒ ２ は、４、５、６または７員非芳香族炭素環を形成してもよく、この炭素環は、環の炭素原子の１つに結合したさらなる第一級アミノ基ＮＨ ２ 、第二級アミノ基ＮＨＲ ａ （式中、Ｒ ａ ＝Ｃ １ ～Ｃ ６ アルキル）、またはヒドロキシル基ＯＨを有する；場合により、Ｒ １ －－－Ｒ ２ は、４、５、６または７員非芳香族複素環（この複素環にはＯ、ＮまたはＳなどのさらなるヘテロ原子が含まれる）を形成してもよく；
ヒドロキシアルキル基（ＣＨ ２ ） ｍ ＯＨ（式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）；
Ｒ １ またはＲ ２ 基のうちの一方は、カーボネートまたはカルバメート誘導体（ＣＨ ２ ） ｍ ＯＣＯＯＲ ４ または（ＣＨ ２ ） ｍ ＮＨＣＯＯＲ ４ （式中、ｍ＝１～１２、Ｒ ４ ＝メチル、エチル、２－クロロエチル、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリル、フェニル基または置換フェニル基、例えば、２－および４－ニトロフェニル、ペンタクロロフェニル、ペンタフルオロフェニル、２，３，５，６－テトラフルオロ－フェニル、２－ピリジルまたは４－ピリジルである）；
（ＣＨ ２ ） ｍ ＮＲ ａ Ｒ ｂ （式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有し；Ｒ ａ 、Ｒ ｂ は、互いに独立しており、Ｈまたは置換されていてもよいＣ １ ～Ｃ ４ アルキル基であってもよい）であってもよく、特にＲ １ またはＲ ２ 基のうちの一方は、アルキルアジド基（ＣＨ ２ ） ｍ Ｎ ３ （式中、ｍ＝２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）であってもよく；Ｒ １ またはＲ ２ のうちの一方は、（ＣＨ ２ ） ｎ ＳＯ ２ ＮＲ ５ ＮＨ ２ （式中、ｎ＝１～１２であり、置換基Ｒ ５ は、Ｈ、アルキル、ヒドロキシアルキルまたはペルフルオロアルキル基Ｃ １ ～Ｃ １２ によって表されることができる）であってもよく；
Ｒ １ またはＲ ２ 基のうちの一方は、アリールヒドラジンＡｒ－ＮＲ ６ ＮＨ ２ （式中、Ａｒは式Ｂの全ピレン残基であり、Ｒ ６ ＝Ｈまたはアルキル）を形成する第一級アミノ基であってもよく；
Ｒ １ またはＲ ２ 基のうちの一方は、アリールヒドロキシルアミンＡｒ－ＮＲ ７ ＯＨ（式中、Ａｒは式Ｂの全ピレン残基であり、Ｒ ７ ＝Ｈまたはアルキル）を形成するヒドロキシ基であってもよく；
Ｒ １ またはＲ ２ 基のうちの一方は、アルキルオキシアミノ基（ＣＨ ２ ） ｎ ＯＮＨ ２ （式中、ｎ＝１～１２）であってもよく；
Ｒ １ またはＲ ２ 基のうちの一方は、ＣＯ（ＣＨ ２ ） ｎ ＣＯＯＲ ８ （式中、ｎ＝１～５、直鎖状または分枝状アルキル鎖（ＣＨ ２ ） ｎ を有し、Ｒ ８ は、Ｈ、直鎖状または分枝状Ｃ １ ～Ｃ ６ アルキル、ＣＨ ２ ＣＮ、２－および４－ニトロフェニル、２，３，５，６－テトラフルオロフェニル、ペンタクロロフェニル、ペンタフルオロフェニル、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾ－トリアゾリルから選択される）であってもよく；
さらに、Ｒ １ もしくはＲ ２ のうちの一方は、（ＣＨ ２ ） ｎ ＣＯＮＨＲ ９ （式中、ｎ＝１～５、Ｒ ９ ＝Ｈ、Ｃ １ ～Ｃ ６ アルキル、（ＣＨ ２ ） ｍ Ｎ ３ 、（ＣＨ ２ ） ｍ －Ｎ－マレイミド、（ＣＨ ２ ） ｍ －ＮＨＣＯＣＨ ２ Ｘ（式中、Ｘ＝ＢｒまたはＩ）、ｍ＝２～６、（ＣＨ ２ ）ｎおよびＲ ９ 中に直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）であってもよく；
またはＲ １ もしくはＲ ２ のうちの一方は、ＣＨ ２ －Ｃ ６ Ｈ ４ －ＮＨ ２ 、ＣＯＣ ６ Ｈ ４ －ＮＨ ２ 、ＣＯＮＨＣ ６ Ｈ ４ －ＮＨ ２ もしくはＣＳＮＨＣ ６ Ｈ ４ －ＮＨ ２ （Ｃ ６ Ｈ ４ は、１，２－、１，３－もしくは１，４－フェニレンである）、ＣＯＣ ５ Ｈ ３ Ｎ－ＮＨ ２ もしくはＣＨ ２ －Ｃ ５ Ｈ ３ Ｎ－ＮＨ ２ （Ｃ ５ Ｈ ３ Ｎは、ピリジン－２，４－ジイル、ピリジン－２，５－ジイル、ピリジン－２，６－ジイルもしくはピリジン－３，５－ジイルである）を表してもよく；またはＲ １ もしくはＲ ２ のうちの一方は、アルキルアジド（ＣＨ）Ｎ ３ もしくはアルキン、特にプロパルギルであってもよく；
リンカーＬは、二価または多価であってもよく、少なくとも１個の炭素原子を含み、任意の出現において、Ｃ １ ～Ｃ １２ の範囲の長さの直鎖状または分枝状の、アルキル、ヘテロアルキル、ペルフルオロアルキル、アルキルオキシ、例えば、ＣＨ ２ ＯＣＨ ２ 、ＣＨ ２ ＣＨ ２ Ｏ ＣＨ ２ ＣＨ ２ ＯＣＨ ２ 、アルキルアミノまたはジアルキルアミノ、特にジエタノールアミンまたはＮ－メチル（アルキル）モノエタノールアミン部分、例えば、Ｎ（ＣＨ ３ ）ＣＨ ２ ＣＨ ２ Ｏ－およびＮ（ＣＨ ２ ＣＨ ２ Ｏ－） ２ 、１つまたは複数のアミド、エステル（ｅｓｔｈｅｒ）またはウレタン部分、単一または複数のジフルオロメチル（ＣＦ ２ ）、アルケンまたはアルキン部分を任意の組合せで含んでもよく；
リンカーＬはまた、アミド基の一部としても、カルボニル（ＣＨ ２ ＣＯ、ＣＦ ２ ＣＯ）部分を含んでもよく；
リンカーＬはまた、１，３，５－トリアジンの残基を含むまたは含有してもよく、したがって、基Ｘへの２つの結合点を提供し；
Ｘは、特に、ヒドロキシアルキル（ＣＨ ２ ） ｎ ＯＨ、チオアルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ ＳＨ）、カルボキシアルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ ＣＯ ２ Ｈ）、スルホン酸アルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ ＳＯ ３ Ｈ）、硫酸アルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ ＯＳＯ ３ Ｈ）、リン酸アルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ） ２ ）もしくはホスホン酸アルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ Ｐ（Ｏ）（ＯＨ） ２ ）（式中、ｎは、０～１２の範囲の整数である）、またはその類似体を含む群から選択される部分からなるまたはそれらを含む可溶性および／またはイオン化可能アニオン提供部分を示し、ＣＨ ２ 基の１つまたは複数がＣＦ ２ によって交換されており、
さらに、アニオン提供部分は、非芳香族Ｏ、ＮおよびＳ含有複素環、例えば、ピペラジン、ピペコリンによって結合されていてもよく、または代替的に基Ｘのうちの１つは、基Ｒ １ およびＲ ２ に関して上で列挙した部分のうちの任意のものを、また基Ｌに関して列挙した任意の種類の結合と共に、他の置換基とは独立して有していてもよく、
ただし、式Ｂによって表されるすべての化合物において、塩基性条件下、すなわち７＜ｐＨ＜１４で、式Ｂの残基Ｘに３または６つの負荷電基が存在し、これらの負荷電基は、以下：ＳＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ ３ Ｈ、ＯＳＯ ３ Ｈ、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ） ２ 、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒ ａ （式中、Ｒ ａ ＝Ｃ １ ～Ｃ ４ アルキルまたは置換Ｃ １ ～Ｃ ４ アルキル）、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ） ２ 、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒ ａ （式中、Ｒ ａ ＝Ｃ １ ～Ｃ ４ アルキルまたは置換Ｃ １ ～Ｃ ４ アルキル）から選択されるイオン化可能基の少なくとも部分的に脱プロトン化された残基を表す］
の化合物またはその塩からなる群から選択される、蛍光色素。
態様２
式ＡのＲ １ が、非置換フェニル基、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ ２ 、ＮＨＲ ａ 、ＮＲ ａ Ｒ ｂ 、Ｒ ａ Ｏ、Ｒ ａ Ｓ（式中、Ｒ ａ およびＲ ｂ は、互いに独立しており、直鎖状または分枝炭素鎖を有するＣ １ ～Ｃ ６ アルキル基であってもよい）の組から選択される１つまたはいくつかの電子供与体置換基を有するフェニル基、ＮＯ ２ 、ＣＮ、ＣＦ ３ 、ＣＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＨ＝ＣＨＣＮ、ＣＨ＝Ｃ（ＣＮ） ２ 、ＳＯ ２ Ｒ ａ 、ＳＯ ３ Ｒ、ＣＯＲ ａ 、ＣＯＯＲ ａ 、ＣＨ＝ＣＨＣＯＲ ａ 、ＣＨ＝ＣＨＣＯＯＲ ａ 、ＣＯＮＨＲ ａ 、ＳＯ ２ ＮＲ ａ Ｒ ｂ 、ＣＯＮＲ ａ Ｒ ｂ 、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ ａ ）（ＯＲ ｂ ）（式中、Ｒ ａ およびＲ ｂ は、互いに独立しており、Ｈまたは直鎖状もしくは分枝状炭素鎖を有するＣ １ ～Ｃ ６ アルキル基（単数又は複数）であってもよい）の組から選択される１つまたはいくつかの電子受容体を有するフェニル基を表し；または、Ｒ １ が、芳香族複素環式基、特に、２－ピリジル、３－ピリジル、４－ピリジル、２－チエニル、３－チエニル、ピリミジン－４－イル、ピリミジン－２－イル、ピリミジン－５－イルまたは芳香族複素環から誘導される他の電子受容体基、例えば、４－ピリジル－Ｎ－オキシド、Ｎ－アルキルピリジニウム塩またはベタイン、特に、Ｎ－（ω－スルホアルキル）－４－ピリジニウム、Ｎ－（ω－スルホアルキル）－２－ピリジニウム、Ｎ－（１－ヒドロキシ－４，４，５，５－テトラフルオロ－シクロペンタ－１－エン－３－オン－２－イル）－４－ピリジニウム、Ｎ－（１－ヒドロキシ－４，４，５，５－テトラフルオロシクロペンタ－１－エン－３－オン－２－イル）－２－ピリジニウムを表す、態様１に記載の蛍光色素。
態様３
式Ｂ（式中、Ｘが、各出現において、１または複数の部位でそれぞれのリンカー基Ｌに結合した１～４つの基ＳＯ ３ Ｈを表してもよい）を有する態様１に記載の蛍光色素。
態様４
少なくとも１つのアルキルスルホニル基を有する、式Ｃ
［式中、
ｎ＝１～１２、好ましくは１～６；
Ｒ １ および／またはＲ ２ は、互いに独立しており、
Ｈ、重水素、アルキルまたは重水素置換アルキル（アルキル基の１個、いくつかまたはすべてのＨ原子は重水素原子で交換されることができる）、特に、１～１２個のＣ原子、好ましくは１～６個のＣ原子を有するアルキルまたは重水素置換アルキル、例えば、ＣＨ ３ 、Ｃ ２ Ｈ ５ 、直鎖状または分枝状Ｃ ３ ～Ｃ １２ 、好ましくはＣ ３ ～Ｃ ６ アルキル基または置換Ｃ ２ ～Ｃ １２ 、好ましくはＣ ２ ～Ｃ ６ アルキル基；特に、（ＣＨ ２ ） ｎ ＣＯＯＲ ３ （式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５、Ｒ ３ は、Ｈ、ＣＨ ２ ＣＮ、２－および４－ニトロフェニル、２，３，５，６－テトラフルオロフェニル、ペンタクロロフェニル、ペンタフルオロフェニル、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリルであってもよく、（ＣＨ ２ ） ｎ のアルキル鎖は、直鎖状または分枝状であってもよい）を表してもよく；
Ｒ １ －－－Ｒ ２ は、４、５、６または７員非芳香族炭素環を形成してもよく、この炭素環は、環の炭素原子の１つに結合したさらなる第一級アミノ基ＮＨ ２ 、第二級アミノ基ＮＨＲ ａ （式中、Ｒ ａ ＝Ｃ １ ～Ｃ ６ アルキル）、またはヒドロキシル基ＯＨを有する；場合により、Ｒ １ －－－Ｒ ２ は、４、５、６または７員非芳香族複素環（この複素環にはＯ、ＮまたはＳなどのさらなるヘテロ原子が含まれる）を形成してもよく；
ヒドロキシアルキル基（ＣＨ ２ ） ｍ ＯＨ（式中、ｍ＝２～１２、好ましくは２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）；Ｒ １ またはＲ ２ 基のうちの一方は、カーボネートまたはカルバメート誘導体（ＣＨ ２ ） ｍ ＯＣＯＯＲ ４ または（ＣＨ ２ ） ｍ ＮＨＣＯＯＲ ４ （式中、ｍ＝１～１２、Ｒ ４ ＝メチル、エチル、２－クロロエチル、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリル、フェニル基または置換フェニル基、例えば、２－および４－ニトロフェニル、ペンタクロロフェニル、ペンタフルオロフェニル、２，３，５，６－テトラフルオロフェニル、２－ピリジルまたは４－ピリジルである）；
（ＣＨ ２ ） ｍ ＮＲ ａ Ｒ ｂ （式中、ｍ＝２～１２、好ましくは２～６；直鎖状または分枝状アルキル鎖を有し；Ｒ ａ 、Ｒ ｂ は、互いに独立しており、Ｈまたは置換されていてもよいＣ １ ～Ｃ ４ アルキル基（単数又は複数）であってもよい）であってもよく、特にＲ １ またはＲ ２ 基のうちの一方は、アルキルアジド基（ＣＨ ２ ） ｍ Ｎ ３ （式中、ｍ＝２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）であってもよく；
Ｒ １ またはＲ ２ 基のうちの一方は、（ＣＨ ２ ） ｎ ＣＯＯＲ ５ （式中、ｎ＝１～５、直鎖状または分枝状アルキル鎖（ＣＨ ２ ） ｎ を有し、Ｒ ５ は、Ｈ、直鎖状または分枝状Ｃ １ ～Ｃ ６ アルキル、ＣＨ ２ ＣＮ、２－および４－ニトロフェニル、２，３，５，６－テトラフルオロフェニル、ペンタクロロフェニル、ペンタフルオロフェニル、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリルから選択される）であってもよく；
Ｒ １ またはＲ ２ のうちの一方は、式Ｂに関して記載の通り、アリールヒドラジンを形成する第一級アミノ基であってもよく；
Ｒ １ またはＲ ２ 基のうちの一方は、式Ｂに関して記載の通り、アリールヒドロキシルアミンを形成するヒドロキシ基であってもよく；
Ｒ １ またはＲ ２ 基のうちの一方は、アルキルオキシアミノ基（ＣＨ ２ ） ｎ ＯＮＨ ２ （式中、ｎ＝１～１２）であってもよく；
さらに、Ｒ １ もしくはＲ ２ のうちの一方は、（ＣＨ ２ ） ｎ ＣＯＮＨＲ ６ （式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５、Ｒ ６ ＝Ｈ、Ｃ １ ～Ｃ ６ アルキル、（ＣＨ ２ ） ｍ Ｎ ３ 、（ＣＨ ２ ） ｍ －Ｎ－マレイミド、（ＣＨ ２ ） ｍ －ＮＨＣＯＣＨ ２ Ｘ（式中、Ｘ＝ＢｒもしくはＩ）、ｍ＝２～６、（ＣＨ ２ ）ｎおよびＲ ６ 中に直鎖状もしくは分枝状アルキル鎖を有する）であってもよく；またはＲ １ もしくはＲ ２ のうちの一方は、ＣＨ ２ －Ｃ ６ Ｈ ４ －ＮＨ ２ 、ＣＯＣ ６ Ｈ ４ －ＮＨ ２ 、ＣＯＮＨＣ ６ Ｈ ４ －ＮＨ ２ もしくはＣＳＮＨＣ ６ Ｈ ４ －ＮＨ ２ （Ｃ ６ Ｈ ４ は、１，２－、１，３－もしくは１，４－フェニレンである）、ＣＯＣ ５ Ｈ ３ Ｎ－ＮＨ ２ もしくはＣＨ ２ －Ｃ ５ Ｈ ３ Ｎ－ＮＨ ２ （Ｃ ５ Ｈ ３ Ｎは、ピリジン－２，４－ジイル、ピリジン－２，５－ジイル、ピリジン－２，６－ジイルもしくはピリジン－３，５－ジイルである）を表してもよく；
式ＢのＳＯ ２ 断片と残基Ｘとの間の（ＣＨ ２ ）ｎ－ＣＨ ２ リンカー（式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５）は、２～６個の炭素原子を有する直鎖、分枝状または環式基を表してもよく；
Ｘ＝ＳＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ ３ Ｈ、ＯＳＯ ３ Ｈ、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ） ２ 、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒ ａ （式中、Ｒ ａ ＝置換されていてもよいＣ １ ～Ｃ ４ アルキル）、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ） ２ 、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒ ａ （式中、Ｒ ａ ＝置換されていてもよいＣ １ ～Ｃ ４ アルキル）であり；
ただし、式Ｃによって表されるすべての化合物において、塩基性条件下、すなわち７＜ｐＨ＜１４で、式Ｂの残基Ｘに３または６つの負荷電基が存在し、これらの負荷電基は、以下：ＳＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ ３ Ｈ、ＯＳＯ ３ Ｈ、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ） ２ 、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒ ａ （Ｒ ａ ＝Ｃ １ ～Ｃ ４ アルキルまたは置換Ｃ １ ～Ｃ ４ アルキル）、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ） ２ 、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒ ａ （式中、Ｒ ａ ＝Ｃ １ ～Ｃ ４ アルキルまたは置換Ｃ １ ～Ｃ ４ アルキル）から選択されるイオン化可能基の少なくとも部分的に脱プロトン化された残基を表す］
またはその塩を有する、態様１に記載の蛍光色素。
態様５
式Ｃ（式中、Ｘが、各出現において、ＳＯ ３ Ｈであり、ｎが、１～１２、好ましくは１～６である）を有する、態様３に記載の蛍光色素。
態様６
少なくとも１つのスルホンアミド基を有する、以下の式Ｄ
［式中、
Ｒ １ および／またはＲ ２ は、互いに独立しており、Ｈ、重水素、アルキルまたは重水素置換アルキル（アルキル基の１個、いくつかまたはすべてのＨ原子は、重水素原子によって交換されることができる）、特に、１～１２個のＣ原子、好ましくは１～６個のＣ原子を有するアルキルまたは重水素置換アルキル、例えば、ＣＨ ３ 、Ｃ ２ Ｈ ５ または直鎖状もしくは分枝状の置換されていてもよいＣ ３ ～Ｃ １２ 、好ましくはＣ ３ ～Ｃ ６ アルキル基；特に、（ＣＨ ２ ） ｎ ＣＯＯＲ ４ （式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５、Ｒ ４ は、Ｈ、ＣＨ ２ ＣＮ、２－および４－ニトロフェニル、２，３，５，６－テトラフルオロフェニル、ペンタクロロフェニル、ペンタフルオロフェニル、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリルであってもよく、（ＣＨ ２ ） ｎ 中のアルキル鎖は、直鎖状または分枝状であってもよい）を表してもよく；
Ｒ １ －－－Ｒ ２ は、４、５、６または７員非芳香族炭素環を形成してもよく、この炭素環は、環の炭素原子の１つに結合したさらなる第一級アミノ基ＮＨ ２ 、第二級アミノ基ＮＨＲ ａ （式中、Ｒ ａ ＝置換されていてもよいＣ １ ～Ｃ ６ アルキル）、またはヒドロキシル基ＯＨを有する；または場合により、Ｒ １ －－－Ｒ ２ は、４、５、６もしくは７員非芳香族複素環（この複素環にはＯ、ＮもしくはＳなどのヘテロ原子が含まれる）を形成してもよく；
Ｒ １ および／またはＲ ２ は、
ヒドロキシアルキル基（ＣＨ ２ ） ｍ ＯＨ（式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状または分枝状の置換されていてもよいアルキル鎖を有する）をさらに表してもよく；Ｒ １ またはＲ ２ 基のうちの一方は、カーボネートまたはカルバメート誘導体（ＣＨ ２ ） ｍ ＯＣＯＯＲ ５ または（ＣＨ ２ ） ｍ ＮＨＣＯＯＲ ５ （式中、ｍ＝１～１２、Ｒ ５ ＝メチル、エチル、２－クロロエチル、ＣＨ ２ ＣＮ、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリル、フェニル基または置換フェニル基、例えば、２－および４－ニトロフェニル、ペンタクロロフェニル、ペンタフルオロ－フェニル、２，３，５，６－テトラフルオロフェニル、２－ピリジル、４－ピリジル）；
（ＣＨ ２ ） ｍ ＮＲ ａ Ｒ ｂ （式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有し；Ｒ ａ 、Ｒ ｂ は、互いに独立しており、水素および／または置換されていてもよいＣ １ ～Ｃ ４ アルキル基を表す）；
（ＣＨ ２ ） ｍ Ｎ ３ （式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）；
ＣＨ ２ ） ｎ ＣＯＮＨＲ ６ （式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５、Ｒ ６ ＝Ｈ、置換または非置換Ｃ １ ～Ｃ ６ アルキル、（ＣＨ ２ ） ｍ Ｎ ３ 、（ＣＨ ２ ）ｍ－Ｎ－マレイミド、（ＣＨ ２ ）ｍ－ＮＨＣＯＣＨ ２ Ｙ（式中、Ｙ＝Ｂｒ、Ｉ）、ｍ＝２～６、（ＣＨ ２ ）ｎおよびＲ ６ 中に直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）であってもよく；
Ｒ １ またはＲ ２ 基の一方は、式Ｂに関して記載の通り、アリールヒドラジンを形成する第一級アミノ基であってもよく；
Ｒ １ またはＲ ２ 基の一方は、式Ｂに関して記載の通り、アリールヒドロキシルアミンを形成するヒドロキシ基であってもよく；
Ｒ １ またはＲ ２ 基の一方は、アルキルオキシアミノ基（ＣＨ ２ ） ｎ ＯＮＨ ２ （式中、ｎ＝１～１２）であってもよく；
さらに、Ｒ １ またはＲ ２ は、ＣＨ ２ －Ｃ ６ Ｈ ４ －ＮＨ ２ 、ＣＯＣ ６ Ｈ ４ －ＮＨ ２ 、ＣＯＮＨＣ ６ Ｈ ４ －ＮＨ ２ またはＣＳＮＨＣ ６ Ｈ ４ －ＮＨ ２ （Ｃ ６ Ｈ ４ は、１，２－、１，３－または１，４－フェニレンである）、ＣＯＣ ５ Ｈ ３ Ｎ－ＮＨ ２ またはＣＨ ２ －Ｃ ５ Ｈ ３ Ｎ－ＮＨ ２ （Ｃ ５ Ｈ ３ Ｎは、ピリジン－２，４－ジイル、ピリジン－２，５－ジイル、ピリジン－２，６－ジイルまたはピリジン－３，５－ジイルである）を表してもよく；
Ｒ ３ は、Ｈ、（ＣＨ ２ ） ｑ ＣＨ ２ Ｘ、Ｃ ２ Ｈ ５ 、直鎖状または分枝状Ｃ ３ ～Ｃ ６ アルキル基、Ｃ ｍ Ｈ ２ｍ ＯＲ ７ （式中、ｍ＝２～６、直鎖状または分枝状アルカン－ジイル鎖Ｃ ｍ Ｈ ２ｍ を有し、Ｒ ７ ＝Ｈ、ＣＨ ３ 、Ｃ ２ Ｈ ５ 、Ｃ ３ Ｈ ７ 、ＣＨ ３ （ＣＨ ２ ＣＨ ２ Ｏ） ｋ ＣＨ ２ ＣＨ ２ （式中、ｋ＝１～１２）である）を表してもよく；一方、（ＣＨ ２ ） ｑ ＣＨ ２ リンカーは、２～６個の炭素原子を有する直鎖、分枝状または環式基を表してもよく；
式Ｄにおいて、スルホンアミド断片ＳＯ ２ Ｎと残基Ｘとの間の（ＣＨ ２ ） ｎ －ＣＨ ２ リンカー（式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５）は、２～６個の炭素原子を有する直鎖、分枝状または環式基を表してもよく；
Ｘ＝ＳＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ ３ Ｈ、ＯＳＯ ３ Ｈ、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ） ２ 、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒ ａ （式中、Ｒ ａ ＝置換または非置換Ｃ １ ～Ｃ ４ アルキル）、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ） ２ 、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒ ａ （式中、Ｒ ａ ＝置換または非置換Ｃ １ ～Ｃ ４ アルキルである）であり；
ただし、式Ｄによって表されるすべての化合物において、塩基性条件下、すなわち７＜ｐＨ＜１４で、式Ｃの残基Ｘに３、６、９または１２個の負荷電基が存在し、これらの負荷電基は、以下：ＳＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ ３ Ｈ、ＯＳＯ ３ Ｈ、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ） ２ 、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒ ａ （式中、Ｒ ａ ＝Ｃ １ ～Ｃ ４ アルキルまたは置換Ｃ １ ～Ｃ ４ アルキル）、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ） ２ 、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒ ａ （式中、Ｒ ａ ＝Ｃ １ ～Ｃ ４ アルキルまたは置換Ｃ １ ～Ｃ ４ アルキル）から選択されるイオン化可能基の少なくとも部分的に脱プロトン化された残基を表す］
またはその塩である、態様１に記載の蛍光色素。
態様７
式Ｂ、ＣまたはＤのＲ １ および／またはＲ ２ が、Ｈ、重水素、アルキルまたは重水素置換アルキル（アルキル基の１個、いくつかまたはすべてのＨ原子は、重水素原子によって交換されることができる）、特に、１～１２個のＣ原子、好ましくは１～６個のＣ原子を有するアルキルまたは重水素置換アルキル、４，６－ジハロ－１，３，５－トリアジニル（Ｃ ３ Ｎ ３ Ｘ ２ ）（ハロゲンＸは、好ましくは、塩素である）、２－、３－もしくは４－アミノベンゾイル（ＣＯＣ ６ Ｈ ４ ＮＨ ２ ）、Ｎ－［（２－，Ｎ－［（３－またはＮ－［（４－アミノフェニル）ウレイド基（ＮＨＣＯＮＨＣ ６ Ｈ ４ ＮＨ ２ ）、Ｎ－［（２－，Ｎ－［（３－またはＮ－［（４－アミノフェニル）チオウレイド基（ＮＨＣＳＮＨＣ ６ Ｈ ４ ＮＨ ２ ）、または一般式（ＣＨ ２ ） ｍ１ ＣＯＯＲ ３ 、（ＣＨ ２ ） ｍ１ ＯＣＯＯＲ ３ 、（ＣＨ ２ ） ｎ１ ＣＯＯＲ ３ もしくは（ＣＯ） ｍ１ （ＣＨ ２ ） ｍ２ （ＣＯ） ｎ１ （ＮＨ） ｎ２ （ＣＯ） ｎ３ （ＣＨ ２ ） ｎ４ ＣＯＯＲ ３ の結合カルボン酸残基およびその反応性エステル（式中、整数ｍ１、ｍ２およびｎ１、ｎ２、ｎ３、ｎ４は、独立して、それぞれ１～１２および０～１２の範囲であり、鎖（ＣＨ ２ ） ｍ／ｎ は、直鎖状、分枝状、飽和、不飽和、部分もしくは完全重水素化であるおよび／またはＮ、ＯもしくはＳを含有する炭素環もしくは複素環に含まれ、Ｒ ３ は、Ｈ、Ｄまたは求核反応性脱離基であり、好ましくは、これらに限定されないが、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリル、シアノメチル、ポリハロゲノアルキル、ポリハロゲノフェニル、例えば、テトラ－またはペンタフルオロフェニル、２－または４－ニトロフェニルを含む）を表す、態様１から６のいずれかに記載の蛍光色素。
態様８
分析物－反応性基としてヒドロキシルアミンまたはヒドラジン部分を有し、それが色素コアに直接連結している、またはヒドロキシルアミン、ヒドラジンもしくはスルホニルヒドラジド部分が、リンカー基、特に、アルキル、ヘテロアルキルもしくは式Ｂに関して態様１に定義した通りのリンカーＬを介して連結している、式ＡおよびＢの蛍光色素。
態様９
式Ａの置換基Ｒ １ 、Ｒ ２ およびＲ ３ が、１または複数のカルボニル反応性アリールヒドラジン部分を表し、例えば、Ｒ ２ ＝Ｈ、Ｒ １ もしくはＲ ３ ＝ＮＨ ２ 、またはＲ １ ＝ＮＨ ２ 、Ｒ ２ 、Ｒ ３ ＝アルキル、ペルフルオロアルキルもしくはアルキルであり、これはさらに、Ｒ ４ およびＲ ５ についての可能な候補として列挙されている、可溶性および／またはアニオン提供部分、特に：ヒドロキシアルキル（ＣＨ ２ ） ｎ ＯＨ、チオアルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ ＳＨ）、カルボキシアルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ ＣＯ ２ Ｈ）、スルホン酸アルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ ＳＯ ３ Ｈ）、硫酸アルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ ＯＳＯ ３ Ｈ）、リン酸アルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ） ２ ）またはホスホン酸アルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ Ｐ（Ｏ）（ＯＨ） ２ ）（式中、ｎは、０または１～１２の範囲の整数である）とコンジュゲートされておりまたはそれにより置換されており；
あるいは、ヒドラジン誘導体が、スルホニルヒドラジド部分（Ｒ ４ ＝ＮＨ ２ であり、一方、Ｒ ５ は、アルキル、ペルフルオロアルキルまたは上述の種類の可溶性および／またはアニオン提供基とコンジュゲートまたはそれにより置換されたアルキル基である）によって表されてもよい、
態様１または８に記載の蛍光色素。
態様１０
式Ａのアリールアミノ基ＮＲ １ およびＮＲ ２ Ｒ ３ が、直接または（ポリ）メチレン、カルボニル、アミド、窒素、酸素もしくは硫黄含有リンカー、特に、（ＣＨ ２ ） ｍ ＣＯＮ（Ｒ ９ ）、ＣＯ（Ｏ）ＮＲ’、ＣＯ（ＣＨ ２ ） ｍ Ｎ（Ｒ ９ ）、ＣＯ（ＣＨ ２ ） ｍ Ｓ（ＣＨ ２ ） ｎ 、（ＣＨ ２ ） ｍ Ｓ（ＣＨ ２ ） ｎ ＣＯ、ＣＯ（ＣＨ ２ ） ｍ ＳＯ ２ （ＣＨ ２ ） ｎ 、（ＣＨ ２ ） ｍ ＳＯ ２ （ＣＨ ２ ） ｎ ＣＯまたはその組合せを介して間接的に、分析物－反応性基に、特に、芳香族または複素環式アミン、カルボン酸、カルボン酸のエステル、特に、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリルまたは別のアミノ反応性エステル、アルキルアジド、アルキン、（ＣＨ ２ ） ｎ ＯＮＨ ２ 、マレイミド、ＣＯＣＨ ２ Ｘ（Ｘ＝Ｃｌ、ＢｒおよびＩ）、ＮＲＣＯＣＨ ２ Ｘ（Ｒ＝Ｈ、Ｃ １ ～Ｃ ６ －アルキル、Ｘ＝Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）を含む群から選択される分析物－反応性基に連結しており；ｍおよびｎが、０または１～１２の範囲の整数であり、置換基Ｒ ９ が、前記態様１においてＲ １ 、Ｒ ２ 、Ｒ ３ 、Ｒ ４ およびＲ ５ に関して定義され残基であってもよく；
あるいは、式Ａのアリールアミノ基ＮＲ １ および／またはＮＲ ２ Ｒ ３ が、リンカー、特に上で定義した通りのリンカーを介して間接的に、アシルヒドラジンまたはアルキルヒドラジン部分に連結しており、したがって、それぞれ、ヒドラジド（ＺＣＯＮＨＮＨ ２ ）またはヒドラジン（ＺＮＨＮＨ ２ ）を表し；
Ｚが、アリールアミノ基およびリンカーを含む式Ａの色素残基を示し；
特に、Ｒ １ およびＲ ２ が、（ＣＨ ２ ） ｍ ＣＯＮ（Ｒ １０ ）、ＣＯ（ＣＨ ２ ） ｍ Ｎ（Ｒ １０ ）、ＣＯ（ＣＨ ２ ） ｍ Ｓ（ＣＨ ２ ） ｎ 、（ＣＨ ２ ） ｍ Ｓ（ＣＨ ２ ） ｎ ＣＯ、ＣＯ（ＣＨ ２ ） ｍ ＳＯ ２ （ＣＨ ２ ） ｎ 、（ＣＨ ２ ） ｍ ＳＯ ２ （ＣＨ ２ ） ｎ ＣＯおよびそれらの組合せ（式中、ｍおよびｎは、０または１～１２の範囲の整数である）によって表されてもよく；
Ｒ １０ が、前記態様１において官能基Ｒ １ 、Ｒ ２ 、Ｒ ３ 、Ｒ ４ およびＲ ５ のうちの任意のものに関して定義した通りであり；特に、ヒドロキシアルキル（ＣＨ ２ ） ｎ ＯＨ、チオアルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ ＳＨ）、カルボキシアルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ ＣＯ ２ Ｈ）、スルホン酸アルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ ＳＯ ３ Ｈ）、硫酸アルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ ＯＳＯ ３ Ｈ）、リン酸アルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ） ２ ）またはホスホン酸アルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ Ｐ（Ｏ）（ＯＨ） ２ ）（式中、ｎは、０または１～１２の範囲の整数である）であり；
リンカーがまた、非芳香族Ｏ、ＮおよびＳ含有複素環、例えば、ピペラジン、ピペコリンによって表されてもよい、
態様１に記載の蛍光色素。
態様１１
以下の式
のうちの１つを有する、態様１から６に記載の一般式Ａ～Ｄのうちの１つによる化合物またはその塩。
態様１２
特に、７～１３のｐＨ範囲の水性媒体中で、０、－２、－４もしくはそれよりも高い、好ましくは－４の正味電荷ｑを有する式Ａによる化合物、または０、－１、－３、－６もしくは－１２、好ましくは－６もしくは－１２の正味電荷ｚを有する式Ｂ、ＣおよびＤの化合物。
態様１３
負荷電スルホン酸基および／またはリン酸基、ならびに無機または有機カチオンから選択される対イオン、好ましくは、アルカリ金属カチオン、アンモニウムカチオンまたは有機アンモニウムもしくはホスホニウム化合物のカチオンを含み、ならびに／または正荷電基もしくは式Ａ～Ｄの色素の窒素部Ｎ（Ｒ １ ）Ｒ ２ に形成された電荷移動錯体を、強鉱酸、有機酸もしくはルイス酸のアニオンから選択される対イオンと共に含む、態様１から１２のいずれかに記載の蛍光色素塩。
態様１４
炭水化物－反応性基、特にヒドラジンＮ（Ｒ）ＮＨ ２ 、ヒドロキシルアミンＮ（Ｒ）ＯＨまたはアミノオキシＯＮＨ ２ 基（式中、Ｒは、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、アルケニルまたはペルフルオロアルキルである）が、式ＡまたはＢの色素の窒素部Ｎ（Ｒ １ ）Ｒ ２ に、式Ｂの基Ｌに関して列挙したすべての種類のリンカーを介して連結される、態様１から１３のいずれかに記載の蛍光色素。
態様１５
還元的アミノ化に、および還元糖、すなわち、グリカンを含む遊離形態のまたはセミアセタールとしてのアルデヒド基を有するモノマー、オリゴマーまたはポリマー炭水化物との縮合に使用するための、態様１から１４のいずれかに記載の化合物およびその塩。
態様１６
アミノ酸、ペプチド、一次および二次抗体、単一ドメイン抗体、ドセタキセル、アビジン、ストレプトアビジンおよびそれらの変形を含むタンパク質、アプタマー、ヌクレオチド、核酸、毒素、脂質、２－デオキシ－２－アミノグルコースおよび他の２－デオキシ－２－アミノアミノピラノシド、グリカンを含む炭水化物、ビオチンならびに他の低分子、すなわち、１５００Ｄａ未満の分子質量を有する分子、例えば、ジャスプラキノリドおよびその変形のための蛍光標識として使用するための、態様１から１４のいずれかに記載の化合物およびその塩。
態様１７
以下の化合物の組：７－Ｒ（Ｒ＝Ｈ、Ｍｅ）、１３ａ、１３ｂ、１６および１８
に属する、態様１６に記載の化合物。
態様１８
分析物へのコンジュゲーションのための蛍光試薬としての、態様１から１４のいずれかに記載の化合物およびその塩の使用であって、コンジュゲーションが、任意の化学実体、ペプチド、タンパク質、炭水化物、核酸、毒素および脂質とカップリングした化学実体または物質、例えば、アミン、カルボン酸、アルデヒド、アルコール、芳香族化合物、複素環、色素、アミノ酸、アミノ酸残基との少なくとも１つの共有化学結合または少なくとも１つの分子錯体の形成を含む、使用。
態様１９
態様１から１４のいずれかに記載の蛍光色素を含む、炭水化物－色素コンジュゲート。
態様２０
色素が、態様１１および以下に示される式６－Ｈ、６－Ｍｅ、８－Ｈ、１５、２３ａおよび２３ｂ
の化合物から選択される、態様１９に記載の炭水化物－色素コンジュゲート。
態様２１
態様１から１４のいずれかに記載の色素のうちの１つもしくは複数、または態様１９または２０に記載の炭水化物コンジュゲートの１つもしくは複数を含む、キットまたは組成物。
態様２２
一般式ＢおよびＣを有する、水中での４７７～５１０ｎｍの吸収極大、０または－６までの正味電荷、５３５～５６０ｎｍの発光極大を有する蛍光アミノピレン色素、特に、化合物７－Ｒ、１３ａ、１３ｂ、１５、１６、１８、２３ａおよび２３ｂを合成するための方法であって、アリールハロゲンの置換チオアルキル官能基への交換反応と、それに続く、スルホンへの酸化および場合により、ヒドロキシル部におけるリン酸化を含む、方法。
態様２３
一般式ＡおよびＤを有する、－４、－６およびそれよりも大きい正味電荷のリン酸化蛍光アミノピレンまたはアミノアクリドン色素、特に化合物６－Ｒおよび８－Ｒを合成するための方法であって、アミノアルコールのスルファミド化と、それに続く、ヒドロキシル部におけるリン酸化を含む、方法。
本発明は、下記の態様も包含する。
態様１
複数のイオン化可能基および／または負荷電基を有する蛍光色素であって、以下の一般式ＡおよびＢ：
Ｒ １ 、Ｒ ２ 、Ｒ ３ 、Ｒ ４ 、Ｒ ５ は、互いに独立しており、
Ｈ、ＣＨ ３ 、Ｃ ２ Ｈ ５ 、直鎖状もしくは分枝状Ｃ ３ ～Ｃ １２ 、好ましくはＣ ３ ～Ｃ ６ アルキルもしくはペルフルオロアルキル基、ホスホニル化アルキル基（ＣＨ ２ ） ｍ Ｐ（Ｏ）（ＯＨ） ２ （式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状もしくは分枝状アルキル鎖を有する）、（ＣＨ ２ ） ｎ ＣＯＯＨ（式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５）、または（ＣＨ ２ ） ｎ ＣＯＯＲ ６ （式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５、Ｒ ６ は、アルキル、特に、Ｃ １ ～Ｃ ６ アルキル、ＣＨ ２ ＣＮ、ベンジル、フルオレン－９－イル、ポリハロゲノアルキル、ポリハロゲノフェニル、例えば、テトラもしくはペンタフルオロフェニル、ペンタクロロフェニル、２－および４－ニトロフェニル、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリルもしくは他の潜在的に求核反応性の脱離基であってもよい）、スルホン酸アルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ ＳＯ ３ Ｈ）もしくは硫酸アルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ ＯＳＯ ３ Ｈ）（式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５、いずれの（ＣＨ ２ ） ｎ 中のアルキル鎖も直鎖状もしくは分枝状であってもよい）；
ヒドロキシアルキル基（ＣＨ ２ ） ｍ ＯＨもしくはチオアルキル基（ＣＨ ２ ） ｍ ＳＨ（式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状もしくは分枝状アルキル鎖を有する）、リン酸化ヒドロキシアルキル基（ＣＨ ２ ） ｍ ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ） ２ （式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状もしくは分枝状アルキル鎖を有する）を表してもよく；Ｒ １ またはＲ ２ 基のうちの一方は、カーボネートまたはカルバメート誘導体（ＣＨ ２ ） ｍ ＯＣＯＯＲ ７ または（ＣＨ ２ ） ｍ ＮＨＣＯＯＲ ７ （式中、ｍ＝１～１２、Ｒ ７ ＝メチル、エチル、ｔｅｒｔ－ブチル、ベンジル、フルオレン－９－イル、ＣＨ ２ ＣＮ、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリル、フェニル、置換フェニル基、例えば、２－または４－ニトロフェニル、ペンタクロロフェニル、ペンタフルオロフェニル、２，３，５，６－テトラフルオロ－フェニル、２－ピリジル、４－ピリジル、ピリミド－４－イル）；
（ＣＨ ２ ） ｍ ＮＲ ａ Ｒ ｂ （式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有し；Ｒ ａ 、Ｒ ｂ は、互いに独立しており、水素および／またはＣ １ ～Ｃ ４ アルキル基を表す）、ヒドロキシアルキル基（ＣＨ ２ ） ｍ ＯＨ（式中、ｍ＝２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）、リン酸化ヒドロキシアルキル基（ＣＨ ２ ） ｍ ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ） ２ （式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）；
アルキルアジド（ＣＨ ２ ） ｍ Ｎ ３ （式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）であってもよく；
Ｒ １ 、Ｒ ２ 、Ｒ ３ 、Ｒ ４ 、Ｒ ５ は、末端アルキルオキシアミノ基（ＣＨ ２ ） ｍ ＯＮＨ ２ （式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有し、これは、１つまたは複数のアルキルアミノ（ＣＨ ２ ） ｍ ＮＨまたはアルキルアミド（ＣＨ ２ ） ｍ ＣＯＮＨ基を、ｍ＝０～１２のすべての可能な組合せで含み得る）；
（ＣＨ ２ ） ｎ ＣＯＮＨＲ ８ （式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５；Ｒ ８ ＝Ｈ、Ｃ １ ～Ｃ ６ アルキル、（ＣＨ ２ ） ｍ Ｎ ３ または（ＣＨ ２ ） ｍ －Ｎ－マレイミド、（ＣＨ ２ ） ｍ －ＮＨ－ＣＯＣＨ ２ Ｘ（式中、Ｘ＝ＢｒまたはＩ）、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６であり、（ＣＨ ２ ）ｎ、（ＣＨ ２ ） ｍ およびＲ ８ 中に直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）；
好ましくは、Ｒ １ 、Ｒ ２ またはＲ ３ として、アリールヒドラジンを形成する第一級アミノ基；
好ましくは、Ｒ ２ またはＲ ３ として、アリールヒドロキシルアミンを形成するヒドロキシ基；
アルキルオキシアミノ基（ＣＨ ２ ） ｎ ＯＮＨ ２ （式中、ｎ＝１～１２）を含有してもよく；
さらに、残基Ｒ １ 、Ｒ ２ 、Ｒ ３ 、Ｒ ４ 、Ｒ ５ のうちの１つは、ＣＨ ２ －Ｃ ６ Ｈ ４ －ＮＨ ２ 、ＣＯＣ ６ Ｈ ４ －ＮＨ ２ 、ＣＯＮＨＣ ６ Ｈ ４ －ＮＨ ２ またはＣＳＮＨＣ ６ Ｈ ４ －ＮＨ ２ （Ｃ ６ Ｈ ４ は、１，２－、１，３－または１，４－フェニレンである）、ＣＯＣ ５ Ｈ ３ Ｎ－ＮＨ ２ またはＣＨ ２ －Ｃ ５ Ｈ ３ Ｎ－ＮＨ ２ （Ｃ ５ Ｈ ３ Ｎは、ピリジン－２，４－ジイル、ピリジン－２，５－ジイル、ピリジン－２，６－ジイルまたはピリジン－３，５－ジイルである）を表してもよく；
さらに、Ｒ ２ －－－Ｒ ３ （Ｒ ４ －－－Ｒ ５ ）は、４、５、６または７員環を形成してもよく、または、環の炭素原子の１つに結合した、第一級アミノ基ＮＨ ２ 、第二級アミノ基ＮＨＲ ａ （式中、Ｒ ａ ＝Ｃ １ ～Ｃ ６ アルキル）、ヒドロキシル基ＯＨ若しくはリン酸化ヒドロキシル基－ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ） ２ を有する若しくは有さない４、５、６もしくは７員環を形成してもよく；
場合により、Ｒ ２ －－－Ｒ ３ （Ｒ ４ －－－Ｒ ５ ）は、４、５、６または７員複素環（この複素環にはＯ、ＮまたはＳなどのさらに１～３個のヘテロ原子が含まれる）を形成してもよく；
さらに、Ｒ １ は、非置換フェニル基、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ ２ 、ＮＨＲ ａ 、ＮＲ ａ Ｒ ｂ 、Ｒ ａ Ｏ、Ｒ ａ Ｓ（式中、Ｒ ａ およびＲ ｂ は、互いに独立しており、直鎖状または分枝炭素鎖を有するＣ １ ～Ｃ ６ アルキル基であってもよい）の組から選択される１つまたはいくつかの電子供与体置換基を有するフェニル基、ＮＯ ２ 、ＣＮ、ＣＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＨ＝ＣＨＣＮ、ＣＨ＝Ｃ（ＣＮ） ２ 、ＳＯ ２ Ｒ ａ 、ＣＯＲ ａ 、ＣＯＯＲ ａ 、ＣＨ＝ＣＨＣＯＲ ａ 、ＣＨ＝ＣＨＣＯＯＲ ａ 、ＣＯＮＨＲ ａ 、ＳＯ ２ ＮＲ ａ Ｒ ｂ 、ＣＯＮＲ ａ Ｒ ｂ （式中、Ｒ ａ およびＲ ｂ は、互いに独立しており、Ｈまたは直鎖状もしくは分枝状炭素鎖を有するＣ １ ～Ｃ ６ アルキル基であってもよい）の組から選択される１つまたはいくつかの電子受容体を有するフェニル基を表してもよく；
またはＲ １ は、複素芳香族基を表してもよく；
ただし、上記式Ａのすべての化合物において、塩基性条件下、すなわち７＜ｐＨ＜１４で、少なくとも２つ、好ましくは少なくとも３、４、５または６つの負荷電基が存在し、これらの負荷電基は、以下：ＳＨ、ＣＯＯＨ、スルホン酸残基ＳＯ ３ Ｈ、第一リン酸基ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ） ２ 、第二リン酸基ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒ ａ （式中、Ｒ ａ ＝Ｃ １ ～Ｃ ４ アルキルまたは置換Ｃ １ ～Ｃ ４ アルキル）、第一ホスホン酸基Ｐ（Ｏ）（ＯＨ） ２ 、第二ホスホン酸基Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒ ａ （式中、Ｒ ａ ＝Ｃ～Ｃ ４ アルキルまたは置換Ｃ １ ～Ｃ ４ アルキル）から選択されるイオン化可能基の少なくとも部分的に脱プロトン化された残基を表す］
Ｒ １ および／またはＲ ２ は、互いに独立しており、
Ｈ、重水素、アルキルもしくは重水素置換アルキル（アルキル基の１個、いくつかもしくはすべてのＨ原子は重水素原子で交換されることができる）、特に、１～１２個のＣ原子、好ましくは１～６個のＣ原子を有するアルキルもしくは重水素置換アルキル、例えば、ＣＨ ３ 、Ｃ ２ Ｈ ５ 、直鎖状もしくは分枝状Ｃ ３ ～Ｃ １２ アルキルもしくはペルフルオロアルキル基、または置換Ｃ ２ ～Ｃ １２ アルキル基；特に、（ＣＨ ２ ） ｎ ＣＯＯＲ ３ （式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５、Ｒ ３ は、Ｈ、アルキル、特にＣ １ ～Ｃ ６ アルキル、ＣＨ ２ ＣＮ、ベンジル、フルオレン－９－イル、ポリハロゲノアルキル、ポリハロゲノ－フェニル、例えば、テトラもしくはペンタフルオロフェニル、ペンタクロロフェニル、２－および４－ニトロフェニル、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリルまたは他の潜在的に求核反応性の脱離基であってもよく、（ＣＨ ２ ） ｎ のアルキル鎖は直鎖状または分枝状であってもよい）を表してもよく；
Ｒ １ －－－Ｒ ２ は、４、５、６または７員非芳香族炭素環を形成してもよく、この炭素環は、環の炭素原子の１つに結合したさらなる第一級アミノ基ＮＨ ２ 、第二級アミノ基ＮＨＲ ａ （式中、Ｒ ａ ＝Ｃ １ ～Ｃ ６ アルキル）、またはヒドロキシル基ＯＨを有する；場合により、Ｒ １ －－－Ｒ ２ は、４、５、６または７員非芳香族複素環（この複素環にはＯ、ＮまたはＳなどのさらなるヘテロ原子が含まれる）を形成してもよく；
ヒドロキシアルキル基（ＣＨ ２ ） ｍ ＯＨ（式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）；
Ｒ １ またはＲ ２ 基のうちの一方は、カーボネートまたはカルバメート誘導体（ＣＨ ２ ） ｍ ＯＣＯＯＲ ４ または（ＣＨ ２ ） ｍ ＮＨＣＯＯＲ ４ （式中、ｍ＝１～１２、Ｒ ４ ＝メチル、エチル、２－クロロエチル、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリル、フェニル基または置換フェニル基、例えば、２－および４－ニトロフェニル、ペンタクロロフェニル、ペンタフルオロフェニル、２，３，５，６－テトラフルオロ－フェニル、２－ピリジルまたは４－ピリジルである）；
（ＣＨ ２ ） ｍ ＮＲ ａ Ｒ ｂ （式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有し；Ｒ ａ 、Ｒ ｂ は、互いに独立しており、Ｈまたは置換されていてもよいＣ １ ～Ｃ ４ アルキル基であってもよい）であってもよく、特にＲ １ またはＲ ２ 基のうちの一方は、アルキルアジド基（ＣＨ ２ ） ｍ Ｎ ３ （式中、ｍ＝２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）であってもよく；Ｒ １ またはＲ ２ のうちの一方は、（ＣＨ ２ ） ｎ ＳＯ ２ ＮＲ ５ ＮＨ ２ （式中、ｎ＝１～１２であり、置換基Ｒ ５ は、Ｈ、アルキル、ヒドロキシアルキルまたはペルフルオロアルキル基Ｃ １ ～Ｃ １２ によって表されることができる）であってもよく；
Ｒ １ またはＲ ２ 基のうちの一方は、アリールヒドラジンＡｒ－ＮＲ ６ ＮＨ ２ （式中、Ａｒは式Ｂの全ピレン残基であり、Ｒ ６ ＝Ｈまたはアルキル）を形成する第一級アミノ基であってもよく；
Ｒ １ またはＲ ２ 基のうちの一方は、アリールヒドロキシルアミンＡｒ－ＮＲ ７ ＯＨ（式中、Ａｒは式Ｂの全ピレン残基であり、Ｒ ７ ＝Ｈまたはアルキル）を形成するヒドロキシ基であってもよく；
Ｒ １ またはＲ ２ 基のうちの一方は、アルキルオキシアミノ基（ＣＨ ２ ） ｎ ＯＮＨ ２ （式中、ｎ＝１～１２）であってもよく；
Ｒ １ またはＲ ２ 基のうちの一方は、ＣＯ（ＣＨ ２ ） ｎ ＣＯＯＲ ８ （式中、ｎ＝１～５、直鎖状または分枝状アルキル鎖（ＣＨ ２ ） ｎ を有し、Ｒ ８ は、Ｈ、直鎖状または分枝状Ｃ １ ～Ｃ ６ アルキル、ＣＨ ２ ＣＮ、２－および４－ニトロフェニル、２，３，５，６－テトラフルオロフェニル、ペンタクロロフェニル、ペンタフルオロフェニル、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾ－トリアゾリルから選択される）であってもよく；
さらに、Ｒ １ もしくはＲ ２ のうちの一方は、（ＣＨ ２ ） ｎ ＣＯＮＨＲ ９ （式中、ｎ＝１～５、Ｒ ９ ＝Ｈ、Ｃ １ ～Ｃ ６ アルキル、（ＣＨ ２ ） ｍ Ｎ ３ 、（ＣＨ ２ ） ｍ －Ｎ－マレイミド、（ＣＨ ２ ） ｍ －ＮＨＣＯＣＨ ２ Ｘ（式中、Ｘ＝ＢｒまたはＩ）、ｍ＝２～６、（ＣＨ ２ ）ｎおよびＲ ９ 中に直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）であってもよく；
またはＲ １ もしくはＲ ２ のうちの一方は、ＣＨ ２ －Ｃ ６ Ｈ ４ －ＮＨ ２ 、ＣＯＣ ６ Ｈ ４ －ＮＨ ２ 、ＣＯＮＨＣ ６ Ｈ ４ －ＮＨ ２ もしくはＣＳＮＨＣ ６ Ｈ ４ －ＮＨ ２ （Ｃ ６ Ｈ ４ は、１，２－、１，３－もしくは１，４－フェニレンである）、ＣＯＣ ５ Ｈ ３ Ｎ－ＮＨ ２ もしくはＣＨ ２ －Ｃ ５ Ｈ ３ Ｎ－ＮＨ ２ （Ｃ ５ Ｈ ３ Ｎは、ピリジン－２，４－ジイル、ピリジン－２，５－ジイル、ピリジン－２，６－ジイルもしくはピリジン－３，５－ジイルである）を表してもよく；またはＲ １ もしくはＲ ２ のうちの一方は、アルキルアジド（ＣＨ）Ｎ ３ もしくはアルキン、特にプロパルギルであってもよく；
リンカーＬは、二価または多価であってもよく、少なくとも１個の炭素原子を含み、任意の出現において、Ｃ １ ～Ｃ １２ の範囲の長さの直鎖状または分枝状の、アルキル、ヘテロアルキル、ペルフルオロアルキル、アルキルオキシ、例えば、ＣＨ ２ ＯＣＨ ２ 、ＣＨ ２ ＣＨ ２ Ｏ ＣＨ ２ ＣＨ ２ ＯＣＨ ２ 、アルキルアミノまたはジアルキルアミノ、特にジエタノールアミンまたはＮ－メチル（アルキル）モノエタノールアミン部分、例えば、Ｎ（ＣＨ ３ ）ＣＨ ２ ＣＨ ２ Ｏ－およびＮ（ＣＨ ２ ＣＨ ２ Ｏ－） ２ 、１つまたは複数のアミド、エステル（ｅｓｔｈｅｒ）またはウレタン部分、単一または複数のジフルオロメチル（ＣＦ ２ ）、アルケンまたはアルキン部分を任意の組合せで含んでもよく；
リンカーＬはまた、アミド基の一部としても、カルボニル（ＣＨ ２ ＣＯ、ＣＦ ２ ＣＯ）部分を含んでもよく；
リンカーＬはまた、１，３，５－トリアジンの残基を含むまたは含有してもよく、したがって、基Ｘへの２つの結合点を提供し；
Ｘは、特に、ヒドロキシアルキル（ＣＨ ２ ） ｎ ＯＨ、チオアルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ ＳＨ）、カルボキシアルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ ＣＯ ２ Ｈ）、スルホン酸アルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ ＳＯ ３ Ｈ）、硫酸アルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ ＯＳＯ ３ Ｈ）、リン酸アルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ） ２ ）もしくはホスホン酸アルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ Ｐ（Ｏ）（ＯＨ） ２ ）（式中、ｎは、０～１２の範囲の整数である）、またはその類似体を含む群から選択される部分からなるまたはそれらを含む可溶性および／またはイオン化可能アニオン提供部分を示し、ＣＨ ２ 基の１つまたは複数がＣＦ ２ によって交換されており、
さらに、アニオン提供部分は、非芳香族Ｏ、ＮおよびＳ含有複素環、例えば、ピペラジン、ピペコリンによって結合されていてもよく、または代替的に基Ｘのうちの１つは、基Ｒ １ およびＲ ２ に関して上で列挙した部分のうちの任意のものを、また基Ｌに関して列挙した任意の種類の結合と共に、他の置換基とは独立して有していてもよく、
ただし、式Ｂによって表されるすべての化合物において、塩基性条件下、すなわち７＜ｐＨ＜１４で、式Ｂの残基Ｘに３または６つの負荷電基が存在し、これらの負荷電基は、以下：ＳＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ ３ Ｈ、ＯＳＯ ３ Ｈ、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ） ２ 、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒ ａ （式中、Ｒ ａ ＝Ｃ １ ～Ｃ ４ アルキルまたは置換Ｃ １ ～Ｃ ４ アルキル）、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ） ２ 、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒ ａ （式中、Ｒ ａ ＝Ｃ １ ～Ｃ ４ アルキルまたは置換Ｃ １ ～Ｃ ４ アルキル）から選択されるイオン化可能基の少なくとも部分的に脱プロトン化された残基を表す］
の化合物またはその塩からなる群から選択される、蛍光色素。
態様２
式ＡのＲ １ が、非置換フェニル基、ＯＨ、ＳＨ、ＮＨ ２ 、ＮＨＲ ａ 、ＮＲ ａ Ｒ ｂ 、Ｒ ａ Ｏ、Ｒ ａ Ｓ（式中、Ｒ ａ およびＲ ｂ は、互いに独立しており、直鎖状または分枝炭素鎖を有するＣ １ ～Ｃ ６ アルキル基であってもよい）の組から選択される１つまたはいくつかの電子供与体置換基を有するフェニル基、ＮＯ ２ 、ＣＮ、ＣＦ ３ 、ＣＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＨ＝ＣＨＣＮ、ＣＨ＝Ｃ（ＣＮ） ２ 、ＳＯ ２ Ｒ ａ 、ＳＯ ３ Ｒ、ＣＯＲ ａ 、ＣＯＯＲ ａ 、ＣＨ＝ＣＨＣＯＲ ａ 、ＣＨ＝ＣＨＣＯＯＲ ａ 、ＣＯＮＨＲ ａ 、ＳＯ ２ ＮＲ ａ Ｒ ｂ 、ＣＯＮＲ ａ Ｒ ｂ 、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ ａ ）（ＯＲ ｂ ）（式中、Ｒ ａ およびＲ ｂ は、互いに独立しており、Ｈまたは直鎖状もしくは分枝状炭素鎖を有するＣ １ ～Ｃ ６ アルキル基（単数又は複数）であってもよい）の組から選択される１つまたはいくつかの電子受容体を有するフェニル基を表し；または、Ｒ １ が、芳香族複素環式基、特に、２－ピリジル、３－ピリジル、４－ピリジル、２－チエニル、３－チエニル、ピリミジン－４－イル、ピリミジン－２－イル、ピリミジン－５－イルまたは芳香族複素環から誘導される他の電子受容体基、例えば、４－ピリジル－Ｎ－オキシド、Ｎ－アルキルピリジニウム塩またはベタイン、特に、Ｎ－（ω－スルホアルキル）－４－ピリジニウム、Ｎ－（ω－スルホアルキル）－２－ピリジニウム、Ｎ－（１－ヒドロキシ－４，４，５，５－テトラフルオロ－シクロペンタ－１－エン－３－オン－２－イル）－４－ピリジニウム、Ｎ－（１－ヒドロキシ－４，４，５，５－テトラフルオロシクロペンタ－１－エン－３－オン－２－イル）－２－ピリジニウムを表す、態様１に記載の蛍光色素。
態様３
式Ｂ（式中、Ｘが、各出現において、１または複数の部位でそれぞれのリンカー基Ｌに結合した１～４つの基ＳＯ ３ Ｈを表してもよい）を有する態様１に記載の蛍光色素。
態様４
少なくとも１つのアルキルスルホニル基を有する、式Ｃ
ｎ＝１～１２、好ましくは１～６；
Ｒ １ および／またはＲ ２ は、互いに独立しており、
Ｈ、重水素、アルキルまたは重水素置換アルキル（アルキル基の１個、いくつかまたはすべてのＨ原子は重水素原子で交換されることができる）、特に、１～１２個のＣ原子、好ましくは１～６個のＣ原子を有するアルキルまたは重水素置換アルキル、例えば、ＣＨ ３ 、Ｃ ２ Ｈ ５ 、直鎖状または分枝状Ｃ ３ ～Ｃ １２ 、好ましくはＣ ３ ～Ｃ ６ アルキル基または置換Ｃ ２ ～Ｃ １２ 、好ましくはＣ ２ ～Ｃ ６ アルキル基；特に、（ＣＨ ２ ） ｎ ＣＯＯＲ ３ （式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５、Ｒ ３ は、Ｈ、ＣＨ ２ ＣＮ、２－および４－ニトロフェニル、２，３，５，６－テトラフルオロフェニル、ペンタクロロフェニル、ペンタフルオロフェニル、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリルであってもよく、（ＣＨ ２ ） ｎ のアルキル鎖は、直鎖状または分枝状であってもよい）を表してもよく；
Ｒ １ －－－Ｒ ２ は、４、５、６または７員非芳香族炭素環を形成してもよく、この炭素環は、環の炭素原子の１つに結合したさらなる第一級アミノ基ＮＨ ２ 、第二級アミノ基ＮＨＲ ａ （式中、Ｒ ａ ＝Ｃ １ ～Ｃ ６ アルキル）、またはヒドロキシル基ＯＨを有する；場合により、Ｒ １ －－－Ｒ ２ は、４、５、６または７員非芳香族複素環（この複素環にはＯ、ＮまたはＳなどのさらなるヘテロ原子が含まれる）を形成してもよく；
ヒドロキシアルキル基（ＣＨ ２ ） ｍ ＯＨ（式中、ｍ＝２～１２、好ましくは２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）；Ｒ １ またはＲ ２ 基のうちの一方は、カーボネートまたはカルバメート誘導体（ＣＨ ２ ） ｍ ＯＣＯＯＲ ４ または（ＣＨ ２ ） ｍ ＮＨＣＯＯＲ ４ （式中、ｍ＝１～１２、Ｒ ４ ＝メチル、エチル、２－クロロエチル、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリル、フェニル基または置換フェニル基、例えば、２－および４－ニトロフェニル、ペンタクロロフェニル、ペンタフルオロフェニル、２，３，５，６－テトラフルオロフェニル、２－ピリジルまたは４－ピリジルである）；
（ＣＨ ２ ） ｍ ＮＲ ａ Ｒ ｂ （式中、ｍ＝２～１２、好ましくは２～６；直鎖状または分枝状アルキル鎖を有し；Ｒ ａ 、Ｒ ｂ は、互いに独立しており、Ｈまたは置換されていてもよいＣ １ ～Ｃ ４ アルキル基（単数又は複数）であってもよい）であってもよく、特にＲ １ またはＲ ２ 基のうちの一方は、アルキルアジド基（ＣＨ ２ ） ｍ Ｎ ３ （式中、ｍ＝２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）であってもよく；
Ｒ １ またはＲ ２ 基のうちの一方は、（ＣＨ ２ ） ｎ ＣＯＯＲ ５ （式中、ｎ＝１～５、直鎖状または分枝状アルキル鎖（ＣＨ ２ ） ｎ を有し、Ｒ ５ は、Ｈ、直鎖状または分枝状Ｃ １ ～Ｃ ６ アルキル、ＣＨ ２ ＣＮ、２－および４－ニトロフェニル、２，３，５，６－テトラフルオロフェニル、ペンタクロロフェニル、ペンタフルオロフェニル、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリルから選択される）であってもよく；
Ｒ １ またはＲ ２ のうちの一方は、式Ｂに関して記載の通り、アリールヒドラジンを形成する第一級アミノ基であってもよく；
Ｒ １ またはＲ ２ 基のうちの一方は、式Ｂに関して記載の通り、アリールヒドロキシルアミンを形成するヒドロキシ基であってもよく；
Ｒ １ またはＲ ２ 基のうちの一方は、アルキルオキシアミノ基（ＣＨ ２ ） ｎ ＯＮＨ ２ （式中、ｎ＝１～１２）であってもよく；
さらに、Ｒ １ もしくはＲ ２ のうちの一方は、（ＣＨ ２ ） ｎ ＣＯＮＨＲ ６ （式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５、Ｒ ６ ＝Ｈ、Ｃ １ ～Ｃ ６ アルキル、（ＣＨ ２ ） ｍ Ｎ ３ 、（ＣＨ ２ ） ｍ －Ｎ－マレイミド、（ＣＨ ２ ） ｍ －ＮＨＣＯＣＨ ２ Ｘ（式中、Ｘ＝ＢｒもしくはＩ）、ｍ＝２～６、（ＣＨ ２ ）ｎおよびＲ ６ 中に直鎖状もしくは分枝状アルキル鎖を有する）であってもよく；またはＲ １ もしくはＲ ２ のうちの一方は、ＣＨ ２ －Ｃ ６ Ｈ ４ －ＮＨ ２ 、ＣＯＣ ６ Ｈ ４ －ＮＨ ２ 、ＣＯＮＨＣ ６ Ｈ ４ －ＮＨ ２ もしくはＣＳＮＨＣ ６ Ｈ ４ －ＮＨ ２ （Ｃ ６ Ｈ ４ は、１，２－、１，３－もしくは１，４－フェニレンである）、ＣＯＣ ５ Ｈ ３ Ｎ－ＮＨ ２ もしくはＣＨ ２ －Ｃ ５ Ｈ ３ Ｎ－ＮＨ ２ （Ｃ ５ Ｈ ３ Ｎは、ピリジン－２，４－ジイル、ピリジン－２，５－ジイル、ピリジン－２，６－ジイルもしくはピリジン－３，５－ジイルである）を表してもよく；
式ＢのＳＯ ２ 断片と残基Ｘとの間の（ＣＨ ２ ）ｎ－ＣＨ ２ リンカー（式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５）は、２～６個の炭素原子を有する直鎖、分枝状または環式基を表してもよく；
Ｘ＝ＳＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ ３ Ｈ、ＯＳＯ ３ Ｈ、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ） ２ 、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒ ａ （式中、Ｒ ａ ＝置換されていてもよいＣ １ ～Ｃ ４ アルキル）、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ） ２ 、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒ ａ （式中、Ｒ ａ ＝置換されていてもよいＣ １ ～Ｃ ４ アルキル）であり；
ただし、式Ｃによって表されるすべての化合物において、塩基性条件下、すなわち７＜ｐＨ＜１４で、式Ｂの残基Ｘに３または６つの負荷電基が存在し、これらの負荷電基は、以下：ＳＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ ３ Ｈ、ＯＳＯ ３ Ｈ、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ） ２ 、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒ ａ （Ｒ ａ ＝Ｃ １ ～Ｃ ４ アルキルまたは置換Ｃ １ ～Ｃ ４ アルキル）、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ） ２ 、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒ ａ （式中、Ｒ ａ ＝Ｃ １ ～Ｃ ４ アルキルまたは置換Ｃ １ ～Ｃ ４ アルキル）から選択されるイオン化可能基の少なくとも部分的に脱プロトン化された残基を表す］
またはその塩を有する、態様１に記載の蛍光色素。
態様５
式Ｃ（式中、Ｘが、各出現において、ＳＯ ３ Ｈであり、ｎが、１～１２、好ましくは１～６である）を有する、態様３に記載の蛍光色素。
態様６
少なくとも１つのスルホンアミド基を有する、以下の式Ｄ
Ｒ １ および／またはＲ ２ は、互いに独立しており、Ｈ、重水素、アルキルまたは重水素置換アルキル（アルキル基の１個、いくつかまたはすべてのＨ原子は、重水素原子によって交換されることができる）、特に、１～１２個のＣ原子、好ましくは１～６個のＣ原子を有するアルキルまたは重水素置換アルキル、例えば、ＣＨ ３ 、Ｃ ２ Ｈ ５ または直鎖状もしくは分枝状の置換されていてもよいＣ ３ ～Ｃ １２ 、好ましくはＣ ３ ～Ｃ ６ アルキル基；特に、（ＣＨ ２ ） ｎ ＣＯＯＲ ４ （式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５、Ｒ ４ は、Ｈ、ＣＨ ２ ＣＮ、２－および４－ニトロフェニル、２，３，５，６－テトラフルオロフェニル、ペンタクロロフェニル、ペンタフルオロフェニル、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリルであってもよく、（ＣＨ ２ ） ｎ 中のアルキル鎖は、直鎖状または分枝状であってもよい）を表してもよく；
Ｒ １ －－－Ｒ ２ は、４、５、６または７員非芳香族炭素環を形成してもよく、この炭素環は、環の炭素原子の１つに結合したさらなる第一級アミノ基ＮＨ ２ 、第二級アミノ基ＮＨＲ ａ （式中、Ｒ ａ ＝置換されていてもよいＣ １ ～Ｃ ６ アルキル）、またはヒドロキシル基ＯＨを有する；または場合により、Ｒ １ －－－Ｒ ２ は、４、５、６もしくは７員非芳香族複素環（この複素環にはＯ、ＮもしくはＳなどのヘテロ原子が含まれる）を形成してもよく；
Ｒ １ および／またはＲ ２ は、
ヒドロキシアルキル基（ＣＨ ２ ） ｍ ＯＨ（式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状または分枝状の置換されていてもよいアルキル鎖を有する）をさらに表してもよく；Ｒ １ またはＲ ２ 基のうちの一方は、カーボネートまたはカルバメート誘導体（ＣＨ ２ ） ｍ ＯＣＯＯＲ ５ または（ＣＨ ２ ） ｍ ＮＨＣＯＯＲ ５ （式中、ｍ＝１～１２、Ｒ ５ ＝メチル、エチル、２－クロロエチル、ＣＨ ２ ＣＮ、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリル、フェニル基または置換フェニル基、例えば、２－および４－ニトロフェニル、ペンタクロロフェニル、ペンタフルオロ－フェニル、２，３，５，６－テトラフルオロフェニル、２－ピリジル、４－ピリジル）；
（ＣＨ ２ ） ｍ ＮＲ ａ Ｒ ｂ （式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有し；Ｒ ａ 、Ｒ ｂ は、互いに独立しており、水素および／または置換されていてもよいＣ １ ～Ｃ ４ アルキル基を表す）；
（ＣＨ ２ ） ｍ Ｎ ３ （式中、ｍ＝１～１２、好ましくは２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）；
ＣＨ ２ ） ｎ ＣＯＮＨＲ ６ （式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５、Ｒ ６ ＝Ｈ、置換または非置換Ｃ １ ～Ｃ ６ アルキル、（ＣＨ ２ ） ｍ Ｎ ３ 、（ＣＨ ２ ）ｍ－Ｎ－マレイミド、（ＣＨ ２ ）ｍ－ＮＨＣＯＣＨ ２ Ｙ（式中、Ｙ＝Ｂｒ、Ｉ）、ｍ＝２～６、（ＣＨ ２ ）ｎおよびＲ ６ 中に直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）であってもよく；
Ｒ １ またはＲ ２ 基の一方は、式Ｂに関して記載の通り、アリールヒドラジンを形成する第一級アミノ基であってもよく；
Ｒ １ またはＲ ２ 基の一方は、式Ｂに関して記載の通り、アリールヒドロキシルアミンを形成するヒドロキシ基であってもよく；
Ｒ １ またはＲ ２ 基の一方は、アルキルオキシアミノ基（ＣＨ ２ ） ｎ ＯＮＨ ２ （式中、ｎ＝１～１２）であってもよく；
さらに、Ｒ １ またはＲ ２ は、ＣＨ ２ －Ｃ ６ Ｈ ４ －ＮＨ ２ 、ＣＯＣ ６ Ｈ ４ －ＮＨ ２ 、ＣＯＮＨＣ ６ Ｈ ４ －ＮＨ ２ またはＣＳＮＨＣ ６ Ｈ ４ －ＮＨ ２ （Ｃ ６ Ｈ ４ は、１，２－、１，３－または１，４－フェニレンである）、ＣＯＣ ５ Ｈ ３ Ｎ－ＮＨ ２ またはＣＨ ２ －Ｃ ５ Ｈ ３ Ｎ－ＮＨ ２ （Ｃ ５ Ｈ ３ Ｎは、ピリジン－２，４－ジイル、ピリジン－２，５－ジイル、ピリジン－２，６－ジイルまたはピリジン－３，５－ジイルである）を表してもよく；
Ｒ ３ は、Ｈ、（ＣＨ ２ ） ｑ ＣＨ ２ Ｘ、Ｃ ２ Ｈ ５ 、直鎖状または分枝状Ｃ ３ ～Ｃ ６ アルキル基、Ｃ ｍ Ｈ ２ｍ ＯＲ ７ （式中、ｍ＝２～６、直鎖状または分枝状アルカン－ジイル鎖Ｃ ｍ Ｈ ２ｍ を有し、Ｒ ７ ＝Ｈ、ＣＨ ３ 、Ｃ ２ Ｈ ５ 、Ｃ ３ Ｈ ７ 、ＣＨ ３ （ＣＨ ２ ＣＨ ２ Ｏ） ｋ ＣＨ ２ ＣＨ ２ （式中、ｋ＝１～１２）である）を表してもよく；一方、（ＣＨ ２ ） ｑ ＣＨ ２ リンカーは、２～６個の炭素原子を有する直鎖、分枝状または環式基を表してもよく；
式Ｄにおいて、スルホンアミド断片ＳＯ ２ Ｎと残基Ｘとの間の（ＣＨ ２ ） ｎ －ＣＨ ２ リンカー（式中、ｎ＝１～１２、好ましくは１～５）は、２～６個の炭素原子を有する直鎖、分枝状または環式基を表してもよく；
Ｘ＝ＳＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ ３ Ｈ、ＯＳＯ ３ Ｈ、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ） ２ 、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒ ａ （式中、Ｒ ａ ＝置換または非置換Ｃ １ ～Ｃ ４ アルキル）、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ） ２ 、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒ ａ （式中、Ｒ ａ ＝置換または非置換Ｃ １ ～Ｃ ４ アルキルである）であり；
ただし、式Ｄによって表されるすべての化合物において、塩基性条件下、すなわち７＜ｐＨ＜１４で、式Ｃの残基Ｘに３、６、９または１２個の負荷電基が存在し、これらの負荷電基は、以下：ＳＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ ３ Ｈ、ＯＳＯ ３ Ｈ、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ） ２ 、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒ ａ （式中、Ｒ ａ ＝Ｃ １ ～Ｃ ４ アルキルまたは置換Ｃ １ ～Ｃ ４ アルキル）、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ） ２ 、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒ ａ （式中、Ｒ ａ ＝Ｃ １ ～Ｃ ４ アルキルまたは置換Ｃ １ ～Ｃ ４ アルキル）から選択されるイオン化可能基の少なくとも部分的に脱プロトン化された残基を表す］
またはその塩である、態様１に記載の蛍光色素。
態様７
式Ｂ、ＣまたはＤのＲ １ および／またはＲ ２ が、Ｈ、重水素、アルキルまたは重水素置換アルキル（アルキル基の１個、いくつかまたはすべてのＨ原子は、重水素原子によって交換されることができる）、特に、１～１２個のＣ原子、好ましくは１～６個のＣ原子を有するアルキルまたは重水素置換アルキル、４，６－ジハロ－１，３，５－トリアジニル（Ｃ ３ Ｎ ３ Ｘ ２ ）（ハロゲンＸは、好ましくは、塩素である）、２－、３－もしくは４－アミノベンゾイル（ＣＯＣ ６ Ｈ ４ ＮＨ ２ ）、Ｎ－［（２－，Ｎ－［（３－またはＮ－［（４－アミノフェニル）ウレイド基（ＮＨＣＯＮＨＣ ６ Ｈ ４ ＮＨ ２ ）、Ｎ－［（２－，Ｎ－［（３－またはＮ－［（４－アミノフェニル）チオウレイド基（ＮＨＣＳＮＨＣ ６ Ｈ ４ ＮＨ ２ ）、または一般式（ＣＨ ２ ） ｍ１ ＣＯＯＲ ３ 、（ＣＨ ２ ） ｍ１ ＯＣＯＯＲ ３ 、（ＣＨ ２ ） ｎ１ ＣＯＯＲ ３ もしくは（ＣＯ） ｍ１ （ＣＨ ２ ） ｍ２ （ＣＯ） ｎ１ （ＮＨ） ｎ２ （ＣＯ） ｎ３ （ＣＨ ２ ） ｎ４ ＣＯＯＲ ３ の結合カルボン酸残基およびその反応性エステル（式中、整数ｍ１、ｍ２およびｎ１、ｎ２、ｎ３、ｎ４は、独立して、それぞれ１～１２および０～１２の範囲であり、鎖（ＣＨ ２ ） ｍ／ｎ は、直鎖状、分枝状、飽和、不飽和、部分もしくは完全重水素化であるおよび／またはＮ、ＯもしくはＳを含有する炭素環もしくは複素環に含まれ、Ｒ ３ は、Ｈ、Ｄまたは求核反応性脱離基であり、好ましくは、これらに限定されないが、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリル、シアノメチル、ポリハロゲノアルキル、ポリハロゲノフェニル、例えば、テトラ－またはペンタフルオロフェニル、２－または４－ニトロフェニルを含む）を表す、態様１から６のいずれかに記載の蛍光色素。
態様８
分析物－反応性基としてヒドロキシルアミンまたはヒドラジン部分を有し、それが色素コアに直接連結している、またはヒドロキシルアミン、ヒドラジンもしくはスルホニルヒドラジド部分が、リンカー基、特に、アルキル、ヘテロアルキルもしくは式Ｂに関して態様１に定義した通りのリンカーＬを介して連結している、式ＡおよびＢの蛍光色素。
態様９
式Ａの置換基Ｒ １ 、Ｒ ２ およびＲ ３ が、１または複数のカルボニル反応性アリールヒドラジン部分を表し、例えば、Ｒ ２ ＝Ｈ、Ｒ １ もしくはＲ ３ ＝ＮＨ ２ 、またはＲ １ ＝ＮＨ ２ 、Ｒ ２ 、Ｒ ３ ＝アルキル、ペルフルオロアルキルもしくはアルキルであり、これはさらに、Ｒ ４ およびＲ ５ についての可能な候補として列挙されている、可溶性および／またはアニオン提供部分、特に：ヒドロキシアルキル（ＣＨ ２ ） ｎ ＯＨ、チオアルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ ＳＨ）、カルボキシアルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ ＣＯ ２ Ｈ）、スルホン酸アルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ ＳＯ ３ Ｈ）、硫酸アルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ ＯＳＯ ３ Ｈ）、リン酸アルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ） ２ ）またはホスホン酸アルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ Ｐ（Ｏ）（ＯＨ） ２ ）（式中、ｎは、０または１～１２の範囲の整数である）とコンジュゲートされておりまたはそれにより置換されており；
あるいは、ヒドラジン誘導体が、スルホニルヒドラジド部分（Ｒ ４ ＝ＮＨ ２ であり、一方、Ｒ ５ は、アルキル、ペルフルオロアルキルまたは上述の種類の可溶性および／またはアニオン提供基とコンジュゲートまたはそれにより置換されたアルキル基である）によって表されてもよい、
態様１または８に記載の蛍光色素。
態様１０
式Ａのアリールアミノ基ＮＲ １ およびＮＲ ２ Ｒ ３ が、直接または（ポリ）メチレン、カルボニル、アミド、窒素、酸素もしくは硫黄含有リンカー、特に、（ＣＨ ２ ） ｍ ＣＯＮ（Ｒ ９ ）、ＣＯ（Ｏ）ＮＲ’、ＣＯ（ＣＨ ２ ） ｍ Ｎ（Ｒ ９ ）、ＣＯ（ＣＨ ２ ） ｍ Ｓ（ＣＨ ２ ） ｎ 、（ＣＨ ２ ） ｍ Ｓ（ＣＨ ２ ） ｎ ＣＯ、ＣＯ（ＣＨ ２ ） ｍ ＳＯ ２ （ＣＨ ２ ） ｎ 、（ＣＨ ２ ） ｍ ＳＯ ２ （ＣＨ ２ ） ｎ ＣＯまたはその組合せを介して間接的に、分析物－反応性基に、特に、芳香族または複素環式アミン、カルボン酸、カルボン酸のエステル、特に、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリルまたは別のアミノ反応性エステル、アルキルアジド、アルキン、（ＣＨ ２ ） ｎ ＯＮＨ ２ 、マレイミド、ＣＯＣＨ ２ Ｘ（Ｘ＝Ｃｌ、ＢｒおよびＩ）、ＮＲＣＯＣＨ ２ Ｘ（Ｒ＝Ｈ、Ｃ １ ～Ｃ ６ －アルキル、Ｘ＝Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）を含む群から選択される分析物－反応性基に連結しており；ｍおよびｎが、０または１～１２の範囲の整数であり、置換基Ｒ ９ が、前記態様１においてＲ １ 、Ｒ ２ 、Ｒ ３ 、Ｒ ４ およびＲ ５ に関して定義され残基であってもよく；
あるいは、式Ａのアリールアミノ基ＮＲ １ および／またはＮＲ ２ Ｒ ３ が、リンカー、特に上で定義した通りのリンカーを介して間接的に、アシルヒドラジンまたはアルキルヒドラジン部分に連結しており、したがって、それぞれ、ヒドラジド（ＺＣＯＮＨＮＨ ２ ）またはヒドラジン（ＺＮＨＮＨ ２ ）を表し；
Ｚが、アリールアミノ基およびリンカーを含む式Ａの色素残基を示し；
特に、Ｒ １ およびＲ ２ が、（ＣＨ ２ ） ｍ ＣＯＮ（Ｒ １０ ）、ＣＯ（ＣＨ ２ ） ｍ Ｎ（Ｒ １０ ）、ＣＯ（ＣＨ ２ ） ｍ Ｓ（ＣＨ ２ ） ｎ 、（ＣＨ ２ ） ｍ Ｓ（ＣＨ ２ ） ｎ ＣＯ、ＣＯ（ＣＨ ２ ） ｍ ＳＯ ２ （ＣＨ ２ ） ｎ 、（ＣＨ ２ ） ｍ ＳＯ ２ （ＣＨ ２ ） ｎ ＣＯおよびそれらの組合せ（式中、ｍおよびｎは、０または１～１２の範囲の整数である）によって表されてもよく；
Ｒ １０ が、前記態様１において官能基Ｒ １ 、Ｒ ２ 、Ｒ ３ 、Ｒ ４ およびＲ ５ のうちの任意のものに関して定義した通りであり；特に、ヒドロキシアルキル（ＣＨ ２ ） ｎ ＯＨ、チオアルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ ＳＨ）、カルボキシアルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ ＣＯ ２ Ｈ）、スルホン酸アルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ ＳＯ ３ Ｈ）、硫酸アルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ ＯＳＯ ３ Ｈ）、リン酸アルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ） ２ ）またはホスホン酸アルキル（（ＣＨ ２ ） ｎ Ｐ（Ｏ）（ＯＨ） ２ ）（式中、ｎは、０または１～１２の範囲の整数である）であり；
リンカーがまた、非芳香族Ｏ、ＮおよびＳ含有複素環、例えば、ピペラジン、ピペコリンによって表されてもよい、
態様１に記載の蛍光色素。
態様１１
以下の式
態様１２
特に、７～１３のｐＨ範囲の水性媒体中で、０、－２、－４もしくはそれよりも高い、好ましくは－４の正味電荷ｑを有する式Ａによる化合物、または０、－１、－３、－６もしくは－１２、好ましくは－６もしくは－１２の正味電荷ｚを有する式Ｂ、ＣおよびＤの化合物。
態様１３
負荷電スルホン酸基および／またはリン酸基、ならびに無機または有機カチオンから選択される対イオン、好ましくは、アルカリ金属カチオン、アンモニウムカチオンまたは有機アンモニウムもしくはホスホニウム化合物のカチオンを含み、ならびに／または正荷電基もしくは式Ａ～Ｄの色素の窒素部Ｎ（Ｒ １ ）Ｒ ２ に形成された電荷移動錯体を、強鉱酸、有機酸もしくはルイス酸のアニオンから選択される対イオンと共に含む、態様１から１２のいずれかに記載の蛍光色素塩。
態様１４
炭水化物－反応性基、特にヒドラジンＮ（Ｒ）ＮＨ ２ 、ヒドロキシルアミンＮ（Ｒ）ＯＨまたはアミノオキシＯＮＨ ２ 基（式中、Ｒは、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、アルケニルまたはペルフルオロアルキルである）が、式ＡまたはＢの色素の窒素部Ｎ（Ｒ １ ）Ｒ ２ に、式Ｂの基Ｌに関して列挙したすべての種類のリンカーを介して連結される、態様１から１３のいずれかに記載の蛍光色素。
態様１５
還元的アミノ化に、および還元糖、すなわち、グリカンを含む遊離形態のまたはセミアセタールとしてのアルデヒド基を有するモノマー、オリゴマーまたはポリマー炭水化物との縮合に使用するための、態様１から１４のいずれかに記載の化合物およびその塩。
態様１６
アミノ酸、ペプチド、一次および二次抗体、単一ドメイン抗体、ドセタキセル、アビジン、ストレプトアビジンおよびそれらの変形を含むタンパク質、アプタマー、ヌクレオチド、核酸、毒素、脂質、２－デオキシ－２－アミノグルコースおよび他の２－デオキシ－２－アミノアミノピラノシド、グリカンを含む炭水化物、ビオチンならびに他の低分子、すなわち、１５００Ｄａ未満の分子質量を有する分子、例えば、ジャスプラキノリドおよびその変形のための蛍光標識として使用するための、態様１から１４のいずれかに記載の化合物およびその塩。
態様１７
以下の化合物の組：７－Ｒ（Ｒ＝Ｈ、Ｍｅ）、１３ａ、１３ｂ、１６および１８
態様１８
分析物へのコンジュゲーションのための蛍光試薬としての、態様１から１４のいずれかに記載の化合物およびその塩の使用であって、コンジュゲーションが、任意の化学実体、ペプチド、タンパク質、炭水化物、核酸、毒素および脂質とカップリングした化学実体または物質、例えば、アミン、カルボン酸、アルデヒド、アルコール、芳香族化合物、複素環、色素、アミノ酸、アミノ酸残基との少なくとも１つの共有化学結合または少なくとも１つの分子錯体の形成を含む、使用。
態様１９
態様１から１４のいずれかに記載の蛍光色素を含む、炭水化物－色素コンジュゲート。
態様２０
色素が、態様１１および以下に示される式６－Ｈ、６－Ｍｅ、８－Ｈ、１５、２３ａおよび２３ｂ
態様２１
態様１から１４のいずれかに記載の色素のうちの１つもしくは複数、または態様１９または２０に記載の炭水化物コンジュゲートの１つもしくは複数を含む、キットまたは組成物。
態様２２
一般式ＢおよびＣを有する、水中での４７７～５１０ｎｍの吸収極大、０または－６までの正味電荷、５３５～５６０ｎｍの発光極大を有する蛍光アミノピレン色素、特に、化合物７－Ｒ、１３ａ、１３ｂ、１５、１６、１８、２３ａおよび２３ｂを合成するための方法であって、アリールハロゲンの置換チオアルキル官能基への交換反応と、それに続く、スルホンへの酸化および場合により、ヒドロキシル部におけるリン酸化を含む、方法。
態様２３
一般式ＡおよびＤを有する、－４、－６およびそれよりも大きい正味電荷のリン酸化蛍光アミノピレンまたはアミノアクリドン色素、特に化合物６－Ｒおよび８－Ｒを合成するための方法であって、アミノアルコールのスルファミド化と、それに続く、ヒドロキシル部におけるリン酸化を含む、方法。
以下の実施例は、本発明をより詳細に例示する。
一般材料および方法
１．１．１ 調製方法
別途記述されない限り、反応は、アルゴン雰囲気下で実施した。溶媒は、Ｒｅａｇ．ＰｈＥｕｒ純度標準（ｐ．ａ．）を満たした。市販の物質は、さらなる精製なしに使用し、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ａｃｒｏｓ Ｏｒｇａｎｉｃｓ、Ａｌｆａ Ａｅｓａｒ、ＡＢＣＲ、Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｃａｒｂｏｌｕｔｉｏｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓなどから購入した。
一般材料および方法
１．１．１ 調製方法
別途記述されない限り、反応は、アルゴン雰囲気下で実施した。溶媒は、Ｒｅａｇ．ＰｈＥｕｒ純度標準（ｐ．ａ．）を満たした。市販の物質は、さらなる精製なしに使用し、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、Ａｃｒｏｓ Ｏｒｇａｎｉｃｓ、Ａｌｆａ Ａｅｓａｒ、ＡＢＣＲ、Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｃａｒｂｏｌｕｔｉｏｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓなどから購入した。
１．１．２ クロマトグラフィー法
１．１．２．１ 薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）
順相ＴＬＣは、シリカゲル６０ Ｆ２５４（Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で実施した。ＴＬＣについては、逆相シリカゲル６０ ＲＰ－１８ Ｆ２５４（Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用した。分取ＴＬＣは、１０×２．５ｃｍの濃縮ゾーンを有するＨＰＴＬＣシリカゲル６０ Ｆ２５４（Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で実施した。化合物は、ＴＬＣプレートをＵＶ光（２５４または３６６ｎｍ）に曝露することによって検出した。アミンは、ニンヒドリン溶液（ＥｔＯＨ中０．５％）を使用することによって検出した。
１．１．２．１ 薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）
順相ＴＬＣは、シリカゲル６０ Ｆ２５４（Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で実施した。ＴＬＣについては、逆相シリカゲル６０ ＲＰ－１８ Ｆ２５４（Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を使用した。分取ＴＬＣは、１０×２．５ｃｍの濃縮ゾーンを有するＨＰＴＬＣシリカゲル６０ Ｆ２５４（Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で実施した。化合物は、ＴＬＣプレートをＵＶ光（２５４または３６６ｎｍ）に曝露することによって検出した。アミンは、ニンヒドリン溶液（ＥｔＯＨ中０．５％）を使用することによって検出した。
１．１．２．２ カラムクロマトグラフィー
粒径４０～６３μｍのシリカゲル６０を、Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅから購入した。逆相カラムクロマトグラフィーは、ＰＯＬＹＧＯＰＲＥＰ（登録商標）６０～５０ Ｃ１８（Ｍａｃｈｅｒｅｙ Ｎａｇｅｌ）で実施した。非活性化シリカゲル６０を、ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌから購入した。市販のカートリッジを用い、自動化Ｉｓｏｌｅｒａ（商標）Ｏｎｅ ｓｙｓｔｅｍ（Ｂｉｏｔａｇｅ ＧｍｂＨ）で日常的な分離を実施した。
粒径４０～６３μｍのシリカゲル６０を、Ｍｅｒｃｋ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅから購入した。逆相カラムクロマトグラフィーは、ＰＯＬＹＧＯＰＲＥＰ（登録商標）６０～５０ Ｃ１８（Ｍａｃｈｅｒｅｙ Ｎａｇｅｌ）で実施した。非活性化シリカゲル６０を、ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌから購入した。市販のカートリッジを用い、自動化Ｉｓｏｌｅｒａ（商標）Ｏｎｅ ｓｙｓｔｅｍ（Ｂｉｏｔａｇｅ ＧｍｂＨ）で日常的な分離を実施した。
１．１．３ 分析機器
１．１．３．１ 吸収分光
吸収スペクトルは、二重ビームＵＶ－ｖｉｓ分光光度計（Ｖａｒｉａｎ、シリーズ４０００）で記録した。吸収スペクトルの決定のために、パス長１ｃｍの石英セルを使用した。発光スペクトルおよび蛍光量子収率は、Ｑｕａｎｔａｕｒｕｓ－ＱＹ Ａｂｓｏｌｕｔｅ ＰＬ量子収率分光計Ｃ１１３４７（Ｑｕａｎｔａｕｒｕｓ ＱＹ）またはＣａｒｙ Ｅｃｌｉｐｓｅ蛍光分光計（Ｖａｒｉａｎ）で得た。
１．１．３．１ 吸収分光
吸収スペクトルは、二重ビームＵＶ－ｖｉｓ分光光度計（Ｖａｒｉａｎ、シリーズ４０００）で記録した。吸収スペクトルの決定のために、パス長１ｃｍの石英セルを使用した。発光スペクトルおよび蛍光量子収率は、Ｑｕａｎｔａｕｒｕｓ－ＱＹ Ａｂｓｏｌｕｔｅ ＰＬ量子収率分光計Ｃ１１３４７（Ｑｕａｎｔａｕｒｕｓ ＱＹ）またはＣａｒｙ Ｅｃｌｉｐｓｅ蛍光分光計（Ｖａｒｉａｎ）で得た。
１．１．３．２ 核磁気共鳴（ＮＭＲ）
ＮＭＲスペクトルは、Ａｇｉｌｅｎｔ ４００ＭＲ ＤＤ２分光計で記録した。すべてのスペクトルは、ＣＤＣｌ３中のＣＨＣｌ３（７．２６ｐｐｍ）、ＣＤ３ＯＤ中のＣＨＤ２ＯＤ（３．３１ｐｐｍ）、（ＣＤ３）２ＣＯ中のＣＨＤ２ＣＯＣＤ３（２．０５ｐｐｍ）またはＤＭＳＯ－ｄ６中のＤＭＳＯ－ｄ５の残留プロトンのシグナルを使用し、内部標準としてテトラメチルシラン（δ＝０．００ｐｐｍ）を参照する。シグナルの多重度は、以下の通り記載される：ｓ＝一重項、ｂｒ．ｓ＝広幅一重項、ｄ＝二重項、ｔ＝三重項、ｑ＝四重項、ｍ＝多重項。カップリング定数ｎＪｘ，ｙは、単位Ｈｚで示され、ｎは、結合核ｘおよびｙ間の結合数である。１３Ｃ－シグナルは、ＨＳＱＣによる間接検出によって明らかにし、Ｈ原子に結合した炭素原子の共鳴のみを記録した。
ＮＭＲスペクトルは、Ａｇｉｌｅｎｔ ４００ＭＲ ＤＤ２分光計で記録した。すべてのスペクトルは、ＣＤＣｌ３中のＣＨＣｌ３（７．２６ｐｐｍ）、ＣＤ３ＯＤ中のＣＨＤ２ＯＤ（３．３１ｐｐｍ）、（ＣＤ３）２ＣＯ中のＣＨＤ２ＣＯＣＤ３（２．０５ｐｐｍ）またはＤＭＳＯ－ｄ６中のＤＭＳＯ－ｄ５の残留プロトンのシグナルを使用し、内部標準としてテトラメチルシラン（δ＝０．００ｐｐｍ）を参照する。シグナルの多重度は、以下の通り記載される：ｓ＝一重項、ｂｒ．ｓ＝広幅一重項、ｄ＝二重項、ｔ＝三重項、ｑ＝四重項、ｍ＝多重項。カップリング定数ｎＪｘ，ｙは、単位Ｈｚで示され、ｎは、結合核ｘおよびｙ間の結合数である。１３Ｃ－シグナルは、ＨＳＱＣによる間接検出によって明らかにし、Ｈ原子に結合した炭素原子の共鳴のみを記録した。
１．１．３．３ 質量分析（ＭＳ）
エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）による低分解能質量スペクトル（ＥＳＩ－ＭＳ）は、Ｖａｒｉａｎ ５００－ＭＳ分光計で得た。高分解能質量スペクトル（ＥＳＩ－ＨＲＭＳ）は、Ｂｒｕｋｅｒ ｍｉｃｒｏ ＴＯＦ（ＥＳＩ－ＴＯＦ－ＭＳ）分光計で得た。
エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）による低分解能質量スペクトル（ＥＳＩ－ＭＳ）は、Ｖａｒｉａｎ ５００－ＭＳ分光計で得た。高分解能質量スペクトル（ＥＳＩ－ＨＲＭＳ）は、Ｂｒｕｋｅｒ ｍｉｃｒｏ ＴＯＦ（ＥＳＩ－ＴＯＦ－ＭＳ）分光計で得た。
１．１．３．４ 高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）
ＨＰＬＣ系（Ｋｎａｕｅｒ）：１０ｍＬポンプヘッドを備えるＳｍａｒｔｌｉｎｅ ｐｕｍｐ１０００（２×）、ＵＶ検出器２５００、カラムサーモスタット４０００、混合チャンバー、分析用の２０または５０μＬループおよび分取カラム用の５００μＬループを備える注入バルブ；６ポート－３チャネル切り替えバルブ；分析カラム：Ｅｕｒｏｓｐｈｅｒ－１００ Ｃ１８ ５μｍ（別途述べない限り）またはＫｉｎｅｔｅｘ Ｃ１８ １００、５μｍ、２５０×４．６ｍｍ、流れ１．２ｍＬ／分；分取カラム：Ｋｉｎｅｔｅｘ Ｃ１８ １００、５μｍ、２５０×２１ｍｍ、流れ１０ｍＬ 分／ｍＬ、溶媒Ａ：水＋０．１％ ｖ／ｖトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）；溶媒Ｂ：ＭｅＣＮ＋０．１％ ｖ／ｖ ＴＦＡ（別途述べない限り）。分取規模でのリン酸化色素の単離および精製については、０．０５～０．１ＭのＥｔ３Ｎ＊Ｈ２ＣＯ３緩衝液（ｐＨ＝８～８．９；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈまたは１Ｍ水性Ｅｔ３Ｎおよび固体ＣＯ２の蒸発によって得たＣＯ２ガスから研究室内で調製）を含有するアセトニトリル－水系。
ＨＰＬＣ系（Ｋｎａｕｅｒ）：１０ｍＬポンプヘッドを備えるＳｍａｒｔｌｉｎｅ ｐｕｍｐ１０００（２×）、ＵＶ検出器２５００、カラムサーモスタット４０００、混合チャンバー、分析用の２０または５０μＬループおよび分取カラム用の５００μＬループを備える注入バルブ；６ポート－３チャネル切り替えバルブ；分析カラム：Ｅｕｒｏｓｐｈｅｒ－１００ Ｃ１８ ５μｍ（別途述べない限り）またはＫｉｎｅｔｅｘ Ｃ１８ １００、５μｍ、２５０×４．６ｍｍ、流れ１．２ｍＬ／分；分取カラム：Ｋｉｎｅｔｅｘ Ｃ１８ １００、５μｍ、２５０×２１ｍｍ、流れ１０ｍＬ 分／ｍＬ、溶媒Ａ：水＋０．１％ ｖ／ｖトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）；溶媒Ｂ：ＭｅＣＮ＋０．１％ ｖ／ｖ ＴＦＡ（別途述べない限り）。分取規模でのリン酸化色素の単離および精製については、０．０５～０．１ＭのＥｔ３Ｎ＊Ｈ２ＣＯ３緩衝液（ｐＨ＝８～８．９；Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈまたは１Ｍ水性Ｅｔ３Ｎおよび固体ＣＯ２の蒸発によって得たＣＯ２ガスから研究室内で調製）を含有するアセトニトリル－水系。
実施例１
蛍光アクリドン色素およびその前駆体の合成
２－ニトロアクリジン－９（１０Ｈ）－オン（１－Ｈ）
蛍光アクリドン色素およびその前駆体の合成
２－ニトロアクリジン－９（１０Ｈ）－オン（１－Ｈ）
Ｋ２ＣＯ３および触媒量のＣｕ（ＮＯ２）２の存在下での２－クロロ－５－ニトロ安息香酸とアニリン間の反応（１８５℃、２～４時間）により、Ｒ．Ｒａｍａｇｅ、Ｂ．Ｍａｌｔｍａｎ、Ｇ．Ｃｏｔｔｏｎ、Ｓ．Ｃ．Ｍ．ＣｏｕｔｕｒｉｅｒおよびＲ．Ａ．Ｓ．ＭｃＭｏｒｄｉｅによってＷＯ２００７／０４９０５７（０３．０５．２００７）に記載の手順に従って、４－ニトロ－Ｎ－フェニルアントラニル酸を得た；Ｊ．Ａ．ＳｍｉｔｈおよびＲ．Ｍ．ＷｅｓｔによるＵＳ２０１２／００１５３７３（１９．０１．２０１２）も参照されたい。４－ニトロ－Ｎ－フェニルアントラニル酸を、２－ニトロアクリジン－９（１０Ｈ）－オン（１－Ｈ）に環化させた（ＰＯＣｌ３、還流、３時間）。
２－ニトロ－９－オキソ－９，１０－ジヒドロアクリジン－７－スルホン酸（２－Ｈ）
化合物１－Ｈを乾燥し、２０％オレウムによりスルホン化（１００℃、１．５時間）して、表題化合物２－Ｈを得た（ＵＳ２０１２／００１５３７３）。例えば、５３０ｍｇ（２．２１ｍｍｏｌ）の２－ニトロ－１０Ｈ－アクリジン－９－オン（１－Ｈ）に、Ｈ２ＳＯ４（２５ｍＬ）中の２０％ ＳＯ３を滴下添加し、反応混合物を１００℃で９０分間撹拌した。次いで、反応混合物を非常に注意深くゆっくりと氷（＞３０ｇ）上に注ぎ、４ｍＬの濃水性ＨＣｌを添加した。褐色沈殿物を遠心分離によって分離し、４Ｍ水性ＨＣｌ（２×５ｍＬ）で洗浄し、凍結乾燥した。収量 － ４６３ｍｇ（６５％）の褐色固体。ＨＰＬＣ：ｔＲ＝５．６分；Ｈ２Ｏ／ＡＣＮ（＋０．１％ＴＦＡ）：２５分で８０／２０→５０／５０、２５４ｎｍで検出。
ＥＳＩ－ＭＳ（Ｃ１３Ｈ８Ｎ２Ｏ６Ｓ、Ｍ＝３２０）、ネガティブモード：ｍ／ｚ（相対強度、％）＝３１９（１００）［Ｍ－Ｈ］－。
Ｎ，Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）－２－ニトロ－９－オキソ－９，１０－ジヒドロアクリジン－７－スルホンアミド（４－Ｈ）
Ｎ，Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）－２－ニトロ－９－オキソ－９，１０－ジヒドロアクリジン－７－スルホンアミド（４－Ｈ）
化合物２－Ｈ（５５ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）を０℃に冷却し、クロロスルホン酸（１．７ｍＬ、ｄ＝１．７５ｇ／ｍＬ、３．０ｇ、２６ｍｍｏｌ）を滴下添加した。反応混合物を室温で６時間撹拌し、氷（７～１０ｇ）上に注いだ。ベージュ色沈殿物を遠心分離によって分離し、氷水（２×５ｍＬ）で洗浄し、真空で乾燥した。得られた塩化スルホニルを、ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ（１：１）中のＮ－メチルエタノールアミン（８６ｍｇ、０．８０ｍｍｏｌ）の溶液に０℃で添加した。反応混合物を室温に加温し、５０℃で終夜撹拌した。沈殿物は徐々に溶解した。収量 － 真空で反応混合物を濃縮すると（アセトニトリルの蒸発の過程で）、３３ｍｇ（４８％）の黄色固体が得られた。ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１６．７分 Ｈ２Ｏ／ＣＡＮ（＋０．１％ ＴＦＡ）：２５分で８０／２０→５０／５０、２５４ｎｍ。
ＥＳＩ－ＭＳ、ネガティブモード：ｍ／ｚ（相対強度、％）＝４０６（１００）［Ｍ－Ｈ］－。
Ｎ，Ｎ’－（２－ヒドロキシエチル）－２－ニトロ－９－オキソ－９，１０－ジヒドロアクリジン－７－スルホンアミドＯ，Ｏ’－ジホスフェート（５－Ｈ）
Ｎ，Ｎ’－（２－ヒドロキシエチル）－２－ニトロ－９－オキソ－９，１０－ジヒドロアクリジン－７－スルホンアミドＯ，Ｏ’－ジホスフェート（５－Ｈ）
化合物４－Ｈ（５０ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのＭｅＣＮに溶解させ、この溶液をＡｒ下で５ｍＬの新たに蒸留したＰＯＣｌ３に添加した。懸濁液を３０℃で２時間撹拌した。溶媒および過剰のＰＯＣｌ３を真空で除去し、残留物を水性ＴＥＡＢ緩衝液（１Ｍ）に溶解させ、表題化合物を、溶離液としてＭｅＣＮ－０．０５Ｍ水性ＴＥＡＢ緩衝液（１：３）を使用してＲＰ－１８で単離した。収量 － ２７ｍｇ（４０％）の黄色固体（凍結乾燥後）。ＨＰＬＣ：ｔＲ＝３．５分；Ｈ２Ｏ／ＡＣＮ（＋０．１％ ＴＦＡ）：２５分で７０／３０→０／１００、２５４ｎｍ。ＨＰＬＣ：ｔＲ＝９．２分、Ｈ２Ｏ／ＡＣＮ（＋０．１％ ＴＦＡ）：２５分で８０／２０→５０／５０、２５４ｎｍ。
ＥＳＩ－ＭＳ、ネガティブモード：ｍ／ｚ（相対強度、％）＝５６６（１００）［Ｍ－Ｈ］－。
２－アミノ－Ｎ，Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）－９－オキソ－９，１０－ジヒドロアクリジン－７－スルホンアミドＯ，Ｏ’－ジホスフェート（６－Ｈ）
２－アミノ－Ｎ，Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）－９－オキソ－９，１０－ジヒドロアクリジン－７－スルホンアミドＯ，Ｏ’－ジホスフェート（６－Ｈ）
Ｐｄ／Ｃ（酸化形態（ＶＷＲ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、１０％ Ｐｄ、７ｍｇ）を、アルゴン下でプロパノール－２と混合し（注意：Ｐｄ／Ｃは、反応の後処理、とりわけろ過の間に、空気中で乾燥すると発火を引き起こす！）、水（１ｍＬ）を添加し；混合物を水素でフラッシュし、３０分間撹拌した。化合物５－Ｈ（２７ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）をプロパノール－２（０．５ｍＬ）に溶解させ、この溶液を事前還元した触媒の懸濁液に添加した。反応混合物を水素雰囲気中、終夜撹拌した。ＨＰＬＣコントロールは、黄色蛍光を有する新しい物質へのほぼ完全な変換を示し、ｔＲ＝２．９分（ＨＰＬＣ面積９２％）、８．８分（７．５％；出発材料）Ｈ２Ｏ／ＡＣＮ（＋０．１％ ＴＦＡ）：２５分で８０／２０→５０／５０、２５４ｎｍであった。反応混合物をアルゴンでフラッシュし、触媒を遠心分離によって分離し、水性プロパノール－２で洗浄し、合わせた上清を真空で濃縮した。表題化合物を、分取ＨＰＬＣによって単離した（以下を参照）。Ｃ１７Ｈ２１Ｎ３Ｏ１１Ｐ２Ｓ（精密質量５３７．０３７２）、ＥＳＩ－ＭＳ、ネガティブモード：ｍ／ｚ（相対強度、％）＝５３６（１００）［Ｍ－Ｈ］－。ＥＳＩ－ＨＲＭＳ：５３６．０２７８（実測値［Ｍ－Ｈ］－）、計算値：５３６，０２９９。最終精製（糖の還元的アミノ化について）を、水性０．０５Ｍ ＴＥＡＢ緩衝液（ｐＨ８）およびＫｉｎｅｔｅｘカラム（５μｍ Ｃ１８ １００、２５０×１０ｍｍ）、ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ：２０分で５／９５～３０／７０、４ｍＬ／分；ｔＲ約１０～１１分（分析物の濃度に大きく依存する）を使用して分取ＨＰＬＣによって達成した。純度コントロール：０．０５Ｍ ＴＥＡＢ水性緩衝液（ｐＨ８）およびＫｉｎｅｔｅｘカラム（５μｍ Ｃ１８ １００、２５０×４．６ｍｍ）、ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ：２０分で５／９５～５０／５０、１．２ｍＬ／分；ｔＲ＝８．１分。
λｍａｘ（吸収、Ｈ２Ｏ（ε、Ｍ－１ｃｍ－１）＝２１７（１３５００）、２６０（２６０００）、２９５（２８０００）、４２０（３７００）ｎｍ；λｍａｘ（発光、Ｈ２Ｏ）＝４８５ｎｍ（４０５ｎｍでの励起）、５８６ｎｍ（３００ｎｍ、４２０ｎｍまたは４７０ｎｍでの励起）；蛍光寿命 － ２２．３ｎｓ（４０５ｎｍでの励起、４８５ｎｍで検出した発光）および３．７ｎｓ（４７０ｎｍでの励起、５８５ｎｍで検出した発光）。
１０－メチル－２－ニトロアクリジン－９（１０Ｈ）－オン（１－Ｍｅ）
ＮａＨ（鉱油中の６０％懸濁液６００ｍｇ；３６０ｍｇ、１５ｍｍｏｌ）を、アルゴン雰囲気下、乾燥ペンタン（３×１５ｍＬ）で洗浄し、乾燥ＤＭＳＯ中に懸濁し、次いで、２－ニトロアクリジン－９（１０Ｈ）－オン（１－Ｈ、２．５ｇ、１０．４ｍｍｏｌ）をこの懸濁液に少量ずつ添加した。有機物質が徐々に溶解すると、溶液はマゼンタ（紫色）に変化した。これを５０～６０℃に加温し、３０分間撹拌し、室温に冷却し、次いで、ＭｅＩ（４ｍＬ、６４ｍｍｏｌ）を反応混合物に添加した。室温で終夜撹拌する過程で、懸濁液は徐々に黄色に変化した。次いで、反応混合物を、水（７５ｍＬ）を含む氷上に注いだ。沈殿物をろ過によって収集し、水で洗浄し、ＡｃＯＨ（２００ｍＬ）から再結晶化させた。収量 － ２．１ｇ（８０％）の黄色固体。ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１３．９分 Ａ／Ｂ：２５分で７０／３０→０／１００、２５４ｎｍ。Ｃ１４Ｈ１０Ｎ２Ｏ３、Ｍ＝２５４ｇ／ｍｏｌ）。ＥＳＩ－ＭＳ、ポジティブモード：ｍ／ｚ（相対強度、％）＝２７７．０５７９（１００）［実測値Ｍ＋Ｎａ］＋；２７７．０５８４（計算値）。
１０－メチル－２－ニトロ－９－オキソ－９，１０－ジヒドロアクリジン－７－スルホン酸（２－Ｍｅ）
化合物１－Ｍｅ（４００ｍｇ、１．５７ｍｍｏｌ）に、Ｈ２ＳＯ４中の２０％ ＳＯ３（７．２ｍＬ、１６．８ｍｍｏｌ）を滴下添加し、反応混合物を１００℃で９０分間撹拌した。次いで、反応混合物を非常に注意深くゆっくりと氷（＞３０ｇ）上に注ぎ、４ｍＬの濃ＨＣｌを添加した。褐色沈殿物を遠心分離によって分離し、冷４Ｍ ＨＣｌ（２×５ｍＬ）で洗浄し、凍結乾燥した。収量 － 褐色固体として３７６ｍｇ（７２％）の表題化合物。ＨＰＬＣ：ｔＲ＝７．９分 Ａ／Ｂ：２５分で８０／２０→５０／５０、２５４ｎｍ。
ＥＳＩ－ＭＳ、ネガティブモード：ｍ／ｚ（相対強度、％）＝３３３（１００）［Ｍ－Ｈ］－。
Ｎ，Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）－１０－メチル－２－ニトロ－９－オキソ－９，１０－ジヒドロアクリジン－７－スルホンアミド（４－Ｈ）
化合物２－Ｍｅ（６２ｍｇ、０．１９ｍｍｏｌ）に、クロロスルホン酸（３．５ｍＬ、５３ｍｍｏｌ）を０℃で滴下添加した。反応混合物を５０℃で３０分間、および室温で終夜撹拌した。次いで、反応混合物を氷（１０ｇ）中に滴下して注ぎ、ベージュ色の沈殿物を遠心分離によって分離した。これを、氷水（２×１０ｍＬ）で洗浄し、凍結乾燥した。得られた塩化スルホニルを、ＴＨＦ（２ｍＬ）中のジエタノールアミン（１８５ｍｇ、１．７６ｍｍｏｌ）の溶液に０℃で添加した。反応混合物を室温で終夜撹拌した。沈殿物を遠心分離によって分離し、氷水で洗浄し、凍結乾燥した。収量 － 黄色固体として５７ｍｇ（７０％）の表題生成物。ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１６．９分 Ａ／Ｂ：２５分で８０／２０→５０／５０、２５４ｎｍ。ＥＳＩ－ＭＳ、ポジティブモード：ｍ／ｚ（相対強度、％）＝４４４（１００）［Ｍ＋Ｎａ］＋。Ｃ１８Ｈ１９Ｎ３Ｏ７Ｓ、Ｍ＝４２１ｇ／ｍｏｌ。ＥＳＩ－ＭＳ、ポジティブモード：ｍ／ｚ＝４２２．１００５［実測値Ｍ＋Ｈ］＋；４２２．１０１６（計算値）；４４４．０８２９［実測値Ｍ＋Ｎａ］＋；４４４．０８３６（計測値）。
Ｎ，Ｎ－（２－ヒドロキシエチル）－９，１０－ジヒドロ－９－オキソ－１０－メチル－２－ニトロアクリジン－７－スルホンアミドＯ，Ｏ’－ジホスフェート（５－Ｍｅ）
リン酸トリメチル（０．５ｍＬ）中の４－Ｍｅ（３１ｍｇ、７３μｍｏｌ）の溶液に、ＰＯＣｌ３（０．２ｍＬ）を、Ａｒ下、０℃で添加した。懸濁液を室温で２時間撹拌した。次いで、溶媒および過剰のＰＯＣｌ３を真空で除去し、残留物を過剰の水性Ｅｔ３Ｎ－Ｈ２ＣＯ３緩衝液（ｐＨ７．５）で希釈し、４℃で終夜維持した。表題化合物を、溶離液としてＭｅＣＮ－０．１Ｍ水性Ｅｔ３Ｎ－Ｈ２ＣＯ３緩衝液（１：５）を使用してＲＰ－１８で単離し、凍結乾燥し、最終還元ステップに使用した（以下を参照されたい）。Ｃ１８Ｈ２１Ｎ３Ｏ１３Ｐ２Ｓ、Ｍ＝５８１ｇ／ｍｏｌ。ＥＳＩ－ＭＳ、ネガティブモード：ｍ／ｚ（相対強度、％）＝５８０．０１９１（１００）［実測値Ｍ－Ｈ］－；５８０．０１９８（計算値）。
２－アミノ－Ｎ，Ｎ’－（２－ヒドロキシエチル）－９，１０－ジヒドロ－９－オキソ－１０－メチルアクリジン－７－スルホンアミドＯ，Ｏ’－ジホスフェート（６－Ｍｅ）
Ｐｄ／Ｃ（ＶＷＲ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、酸化形態、１０％ Ｐｄ）７ｍｇを、アルゴン下、プロパノール－２と混合し、水（１ｍＬ）を添加し；混合物を水素でフラッシュし、３０分間撹拌した。化合物５－Ｍｅ（２７ｍｇ）をプロパノール－２（０．５ｍＬ）に溶解し、この溶液を、事前還元した触媒の懸濁液に添加した。反応混合物を水素雰囲気中、終夜撹拌した。ＨＰＬＣコントロールは、黄色蛍光を有する新しい物質へのほぼ完全な変換を示し、ｔＲ＝１６．１分（ＨＰＬＣ面積９５％）、１９．２分（５％；出発材料？）Ｈ２Ｏ／ＡＣＮ（水性相中の＋０．０５Ｍ Ｅｔ３Ｎ＊Ｈ２ＣＯ３緩衝液）：２０分で９９／１→８０／２０、ダイオードアレイ検出器、Ｋｉｎｅｔｅｘカラム５μｍ Ｃ１８ １００、４．６×２５０ｍｍ、２０℃、１．２ｍＬ／分であった。反応混合物をアルゴンでフラッシュし、触媒を遠心分離によって分離し、水性プロパノール－２で洗浄し、合わせた上清を真空で濃縮した。表題化合物を、水性０．０５Ｍ ＴＥＡＢ緩衝液（ｐＨ８）およびＫｉｎｅｔｅｘカラム（５μｍ Ｃ１８ １００、２５０×１０ｍｍ）、ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ：２０分で５／９５～３０／７０、４ｍＬ／分；ｔＲ約１１．４分を使用する分取ＨＰＬＣによって単離した。Ｃ１８Ｈ２３Ｎ３Ｏ１１Ｐ２Ｓ（精密質量５５１．０５２９）。ＥＳＩ－ＭＳ、ネガティブモード：ｍ／ｚ（相対強度、％）＝５５０（１００）［Ｍ－Ｈ］－。ＥＳＩ－ＨＲＭＳ：５５０．０４４１（実測値［Ｍ－Ｈ］－、計算値：５５０，０４５６。
λｍａｘ（０．０５Ｍ水性Ｅｔ３Ｎ＊Ｈ２ＣＯ３緩衝液、ｐＨ８、ε、Ｍ－１ｃｍ－１）＝２１９（１０３００）、２６３（１８６００）、２９９（１８５００）、４３０（２９００）ｎｍ；λｍａｘ（発光、０．０５Ｍ水性Ｅｔ３Ｎ＊Ｈ２ＣＯ３緩衝液、ｐＨ８）＝４８５ｎｍおよび５８５ｎｍ（およそ１：２の比の２つの極大、３００ｎｍ、４２０ｎｍまたは４７０ｎｍであり得る励起波長とは独立）；蛍光量子収率：５～６％（絶対値）。
実施例２
蛍光１－アミノピレン色素およびその前駆体の合成
３－アミノピレン－１，６，８－トリスルホン酸三ナトリウム塩（ＡＰＴＳ）を、Ｚ．Ｓｈａｒｒｅｔｔ、Ｓ．Ｇａｍｓｅｙ、Ｌ．Ｈｉｒａｙａｍａ、Ｂ．Ｖｉｌｏｚｎｙ、Ｊ．Ｔ．Ｓｕｒｉ、Ｒ．Ａ．Ｗｅｓｓｌｉｎｇ、Ｂ Ｓｉｎｇａｒａｍ、Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００９、７、１４６１～１４７０によって記載の通りにＮａ２ＳＯ４の存在下で１－アミノピレンおよび２０％オレウムから調製した。
蛍光１－アミノピレン色素およびその前駆体の合成
３－アミノピレン－１，６，８－トリスルホン酸三ナトリウム塩（ＡＰＴＳ）を、Ｚ．Ｓｈａｒｒｅｔｔ、Ｓ．Ｇａｍｓｅｙ、Ｌ．Ｈｉｒａｙａｍａ、Ｂ．Ｖｉｌｏｚｎｙ、Ｊ．Ｔ．Ｓｕｒｉ、Ｒ．Ａ．Ｗｅｓｓｌｉｎｇ、Ｂ Ｓｉｎｇａｒａｍ、Ｏｒｇ．Ｂｉｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．２００９、７、１４６１～１４７０によって記載の通りにＮａ２ＳＯ４の存在下で１－アミノピレンおよび２０％オレウムから調製した。
３－アミノ－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’－トリス（２－ヒドロキシエチル）－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’－トリメチルピレン－１，６，８－トリスルホンアミド（７－Ｈ）
４４６ｍｇ（０．９８ｍｍｏｌ）のＡＰＴＳ（三ナトリウム塩）を氷浴中、０℃に冷却し、次いで、クロロスルホン酸（７．５ｍＬ、０．１１ｍｏｌ）を撹拌しながら滴下添加した。反応混合物を６５℃で３時間撹拌した。室温に冷却した後、反応混合物を砕氷上に移した。塩化トリスルホニルの赤色沈殿物を、遠心分離によって単離し、氷水（２×１０ｍＬ）で洗浄し、水性アセトニトリル（１：１、２５ｍＬ）中Ｎ－メチルエタノールアミン（１．０ｇ、１３ｍｍｏｌ）の溶液に０℃で添加した。反応混合物を、均質になるまで室温で激しく撹拌し、次いで、凍結乾燥した。表題化合物を、溶離液としてＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ／Ｈ２Ｏ（８０：１８：２）混合物を用いるＳｉＯ２（１００ｇ）上でのクロマトグラフィーによって単離した。収量 － ２５２ｍｇ（４１％）の褐色－橙色固体が、２回目のクロマトグラフィー精製後に得られた。ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１５．８分、ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ：２５分で２０／８０～５０／５０、１．２ｍＬ／分、２５４ｎｍ。Ｃ２５Ｈ３２Ｎ４Ｏ９Ｓ３（精密質量６２８．１３３１）；ＥＳＩ－ＨＲＭＳ：６５１．１２１２（実測値［Ｍ＋Ｎａ］＋）、計算値：６５１，１２２４。
λｍａｘ（吸収）＝４７７ｎｍ（ε＝２２４００Ｍ－１ｃｍ－１、ＭｅＯＨ）、λｍａｘ（発光）＝５３５ｎｍ（ＭｅＯＨ、４７０ｎｍでの励起）；蛍光寿命５．６ｎｓ（ＭｅＯＨ）；蛍光量子収率（０．９６；ＭｅＯＨ中、絶対値）。
３－アミノ－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’－トリス（２－ヒドロキシエチル）－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’－トリメチル－ピレン－１，６，８－トリスルホンアミドＯ，Ｏ’，Ｏ’’－トリホスフェートトリス（トリエチルアンモニウム塩）（８－Ｈ）
化合物７－Ｈ（４０ｍｇ、６４μｍｏｌ）を（ＭｅＯ）３ＰＯ（５ｍＬ）に溶解させ、この溶液を、新たに蒸留したＰＯＣｌ３（０．２ｍＬ）に、室温で撹拌しながら添加した。弱い発熱反応が観察され、溶液は橙色－褐色に変化した。反応混合物を室温で数時間撹拌した。すべての揮発性材料（過剰のＰＯＣｌ３およびリン酸トリメチルの大部分）を真空で除去した（リン酸トリメチルおよびＰＯＣｌ３を収集するために、最初にロータリーエバポレーター、次いで、オイルポンプ；０．５ｍｂａｒ、６０℃、ドライアイスで冷却したコールドトラップを使用）。残留物を１Ｍ Ｅｔ３Ｎ＊Ｈ２ＣＯ３緩衝液（ＴＥＡＢ；初期ｐＨ＝８）で処理および撹拌し、ｐＨを制御した。アミノ基のリン酸化も起こるが、このリン酸基は容易に切断される。溶液が酸性になった場合、ｐＨが約５～７で安定するまで、ＴＥＡＢ緩衝液を新たに少しずつ添加した。通常のＳｉＯ２のＴＬＣコントロールは、ｉＰｒＯＨ／Ｈ２Ｏ／２５％水性ＮＨ３（１０／５／１）中で可能であった；Ｒｆ約０．３（緑色蛍光を有する黄色スポット）。反応混合物を凍結乾燥し、表題化合物を、溶離液としてｉＰｒＯＨ／Ｈ２Ｏ／２５％水性ＮＨ３（１０／５／１）混合物を使用する通常のＳｉＯ２でのクロマトグラフィーによって単離した。ＨＰＬＣコントロールは、ｔＲ＝１０．２分（ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ（＋０．１％ ＴＦＡ）：２５分で２０／８０～５０／５０、１．２ｍＬ／分、２５４ｎｍ）で物質を含有する均質な画分を示した。凍結乾燥により６０ｍｇの赤色－橙色泡状物を得た。Ｃ２５Ｈ３５Ｎ４Ｏ１８Ｐ３Ｓ３（精密質量８６８．０３２１）＊×ＮＨ３ ＥＳＩ－ＭＳ、ネガティブモード：ｍ／ｚ（相対強度、％）＝８６７（１００）［Ｍ－Ｈ］－、８８９（６０）［Ｍ－２Ｈ＋Ｎａ］－。
最終精製を、０．１Ｍ ＴＥＡＢ緩衝液を使用する分取ＨＰＬＣおよび分取Ｋｉｎｔｅｘカラム（例えば、Ｋｉｎｅｔｅｘ、５μｍ Ｃ１８ １００、２５０×４．６ｍｍ、ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ：２０分で１０／９０～３０／７０、１．２ｍＬ／分；ｔＲ＝１０．８分）によって達成した。溶出物の凍結乾燥により、表題化合物を黄色泡状物として得た。
λｍａｘ（吸収）＝２０５、２３７、３０５および４７１ｎｍ（０．０５Ｍ水性Ｅｔ３Ｎ＊Ｈ２ＣＯ３緩衝液、ｐＨ８）、λｍａｘ（発光）＝５４４（０．０５Ｍ水性Ｅｔ３Ｎ＊Ｈ２ＣＯ３緩衝液、ｐＨ８）；蛍光寿命５．９ｎｓ（Ｈ２Ｏ中；４７０ｎｍでの励起）；蛍光量子収率：０．７７（Ｈ２Ｏ、標準：エタノール中０．５４の放出効率のクマリン１５３、λｅｘｃｉｔ＝４００ｎｍ）、０．８８（０．０５Ｍ水性Ｅｔ３Ｎ＊Ｈ２ＣＯ３緩衝液中の絶対値、ｐＨ８；４６０ｎｍでの励起）。
３－（トリフルオロアセチル）アミノ－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’－トリス（２－ヒドロキシエチル）－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’－トリメチルピレン－１，６，８－トリスルホンアミド（９－Ｈ）
化合物７－Ｈ（１７９ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）を１０ｍＬのＤＣＭに懸濁し、ＤＣＭ中の無水トリフルオロ酢酸の１０％溶液（ｄ＝１．３３ｇ／ｍＬ、０．９ｍＬ、約０．５７ｍｍｏｌ）、続いてＥｔ３Ｎ（１２６μＬ、ｄ＝０．７３ｇ／ｍＬ、０．９１ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応混合物を３０分間撹拌した。すべての揮発性材料を減圧下で蒸発させ、残留物をメタノール（５０ｍＬ）に溶解させ、ＮａＨＣＯ３（５０ｍｇ）を添加した。室温で３０分間撹拌した後、反応混合物を酢酸で中和し、すべての揮発性材料を真空で除去した。これらの操作は、トリフルオロアセテート基をヒドロキシル基から除去する。表題化合物を、溶離液としてＣＨ２Ｃｌ２／アセトン（２：１）を使用する通常のシリカゲル（５０ｇ）でのクロマトグラフィーによって単離した。収量 － １６５ｍｇ（８２％）の黄色固体。ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１０．８分、ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ：２５分で２０／８０～１００／０、２５４ｎｍ。Ｃ２７Ｈ３１Ｆ３Ｎ４Ｏ１０Ｓ３、（精密質量７２４．１１５４）。ＥＳＩ－ＭＳ、ネガティブモード：ｍ／ｚ（相対強度、％）＝７２３（１００）［Ｍ－Ｈ］－。
３－［Ｎ－メチル－Ｎ－（トリフルオロアセチル）］アミノ－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’－トリス（２－ヒドロキシエチル）－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’－トリメチルピレン－１，６，８－トリスルホンアミド（９－Ｍｅ）
ＤＭＦ（２ｍＬ）中の化合物７－Ｈ（１２０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）の溶液に、ＣｓＣＯ３（４２ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）およびＣＨ３Ｉ（９６０ｍｇ、６．７ｍｍｏｌ）をアルゴン下で添加した。反応混合物を７０℃で４０分間撹拌し、溶媒を減圧下で蒸発させた。表題化合物を、溶離液としてＤＣＭおよびメタノールの１５：１混合物を使用する、通常のＳｉＯ２（５０ｇ）でのクロマトグラフィーによって単離した；収量 － １１０ｍｇ（８８％）の黄色固体。第二級アミド基の存在に起因して、２つの回転異性体（２組のシグナル）が、この物質の１Ｈ ＮＭＲスペクトルで検出され、したがって、解釈は困難であった。ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１２．２分、ＡＣＮ／Ｈ２Ｏ：２５分で２０／８０～１００／０、２５４ｎｍ。Ｃ２８Ｈ３３Ｆ３Ｎ４Ｏ１０Ｓ３（精密質量７３８．１３１１）。ＥＳＩ－ＭＳ、ポジティブモード：ｍ／ｚ（相対強度、％）＝７３９（１００）［Ｍ＋Ｈ］＋、７６１（３５）［Ｍ＋Ｎａ］＋。
３－メチルアミノ－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’－トリス（２－ヒドロキシエチル）－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’－トリメチルピレン－１，６，８－トリスルホンアミド（７－Ｍｅ）
反応混合物が均質なまま維持されるように、飽和溶液として水性メタノール中に過剰に溶かしたＮａ２ＣＯ３（およそ１：１）による処理により対応するＮ－メチル－Ｎ－トリフルオロアセトアミド（９－Ｍｅ；上記を参照されたい）から表題化合物を得た。生成物を、溶離液としてＤＣＭおよびメタノールの１５：１混合物を使用する、ＳｉＯ２でのクロマトグラフィーによって、橙色固体（２０ｍｇ）として単離した。
ＨＲＭＳ（ＥＳＩ）：６６５．１３５３（実測値［Ｍ＋Ｎａ］＋）、計算値：６６５．１３８０。λｍａｘ（吸収）＝４９３ｎｍ（ε＝２３０００Ｍ－１ｃｍ－１、ＭｅＯＨ）、λｍａｘ（発光）＝５４９ｎｍ（ＭｅＯＨ）；蛍光寿命５．９ｎｓ（ＭｅＯＨ）、蛍光量子収率：０．９７（ＭｅＯＨ中の絶対値）；０．８３（標準としてローダミン６Ｇ（ＱＹ＝エタノール中０．９４）を使用してＭｅＯＨ中で得られた相対値、４８０ｎｍでの励起）。
トリス（トリエチルアンモニウム塩）として３－メチルアミノ－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’－トリス（２－ヒドロキシエチル）－Ｎ，Ｎ’，Ｎ’’－トリメチルピレン－１，６，８－トリスルホンアミドＯ，Ｏ’，Ｏ’’－トリホスフェート（８－Ｍｅ）
０．１ｍＬの（ＭｅＯ）３ＰＯ中のＰＯＣｌ３（７４ｍｇ、４８０μｍｏｌ）の溶液に、０．５ｍＬの（ＭｅＯ）３ＰＯ中の化合物７－Ｍｅ（４０ｍｇ、５４μｍｏｌ）の溶液を０℃で滴下添加した。次いで、反応混合物を室温で１．５時間撹拌した。すべての揮発性材料（過剰のＰＯＣｌ３およびリン酸トリメチルの大部分）を真空で除去した（リン酸トリメチルを収集するために、最初にロータリーエバポレーター、次いで、オイルポンプ；０．５ｍｂａｒ、６０℃、ドライアイスで冷却したコールドトラップを使用）。残留物を１Ｍ Ｅｔ３Ｎ＊Ｈ２ＣＯ３緩衝液（ＴＥＡＢ；初期ｐＨ＝８）で処理および撹拌し、ｐＨ値を制御した。溶液が酸性になった場合、ｐＨ値が約５～７で安定するまで、ＴＥＡＢ緩衝液を新たに少しずつ添加した。次いで、反応混合物をＲＰ－１８（およそ３０ｇ）に充填し、表題化合物を、ＭｅＣＮおよび水性０．１Ｍ Ｅｔ３Ｎ＊Ｈ２ＣＯ３緩衝液（ｐＨ７．５）の１：４混合物を使用して溶出した。収率 － ６３％、黄色固体。ＨＰＬＣ：ｔＲ＝６．９分 Ｈ２Ｏ／ＡＣＮ（＋０．１％ ＴＦＡ）：２５分で８０／２０→０／１００、２５４ｎｍ。Ｃ２６Ｈ３７Ｎ４Ｏ１８Ｐ３Ｓ３（精密質量８８２．０４７８）。ＥＳＩ－ＭＳ、ネガティブモード：ｍ／ｚ（相対強度、％）＝８８１（１００）［Ｍ－Ｈ］－、４４０（１５）［Ｍ－２Ｈ］２－。λｍａｘ（吸収）＝５０２ｎｍ（Ｈ２Ｏ）、λｍａｘ（発光）＝５６３ｎｍ（Ｈ２Ｏ）；蛍光量子収率０．８５（Ｈ２Ｏ、標準：エタノール中０．９４の発光効率を有するローダミン６Ｇ、λｅｘｃｉｔ＝５００ｎｍ）。この物質は、糖の還元的アミノ化において非反応性であることが分かった。
２，２，２－トリフルオロ－Ｎ－（ピレン－１－イル）アセトアミド（１１）
１－アミノピレン（１０）（１．００ｇ、４．６０ｍｍｏｌ）を、超音波浴を使用することによって、撹拌下、乾燥ＤＣＭ（３０ｍＬ）に溶解させた。無水トリフルオロ酢酸（ｄ＝１．５１、７７２μＬ、１．１７ｇ、５．５５ｍｍｏｌ、１．２１当量）を１０分間かけて滴下添加した。得られた懸濁液を室温で３０分間撹拌した。沈殿物をろ過によって除去し、シクロヘキサン（３×１５ｍＬ）で洗浄し、真空で乾燥した。ろ液中に白色沈殿物が観察され、これもろ別した。合わせた沈殿物（明灰色粉末）は、表題化合物（１．１３ｇ、３．６１ｍｍｏｌ、７９％）を表した。
ＣＦ３およびＣＯシグナルは、強度の低さに起因して検出されなかった。
Ｃ１８Ｈ１０Ｆ３ＮＯ（３１３．０７１４）ＨＲ－ＭＳ（ＥＳＩ）：実測値３１４．０７８３［Ｍ＋Ｈ］＋；計算値３１４．０７８７。
２，２，２－トリフルオロ－Ｎ－［３，６，８－トリス（ブロモ）ピレン－１－イル］－アセトアミド（１２）
２，２，２－トリフルオロ－Ｎ－［３，６，８－トリス（ブロモ）ピレン－１－イル］－アセトアミド（１２）
Ｎ－トリフルオロアセチル－１－アミノピレン１１（８７０ｍｇ、２．７６ｍｍｏｌ）を、ニトロベンゼン（３０ｍＬ）に懸濁し、５０℃で３０分間撹拌した。ニトロベンゼン（５ｍＬ）に溶解させた臭素（５００μＬ、１９．５ｍｍｏｌ、７．０７当量）をピレンの溶液に添加した。反応混合物を８０℃で３０分間、密閉容器中で撹拌した。その後、混合物を室温にした。シクロヘキサン（２０ｍＬ）で希釈した後、沈殿物をろ過によって除去し、シクロヘキサン（２×２５ｍＬ）で洗浄し、真空で乾燥した。生成物が、明黄色粉末（１２２４ｍｇ、２．２６ｍｍｏｌ、８１％）として得られた。
ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ（ネガティブモード、％）＝５４８（１００）［Ｍ］－。ＨＲ－ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ１８Ｈ７ＮＯＦ３
７９Ｂｒ２
８０Ｂｒ（［Ｍ－Ｈ］－）について計算値５４７．７９３７、実測値５４７．７９３０。
２，２，２－トリフルオロ－Ｎ－［３，６，８－トリス［（３－ヒドロキシプロピル）スルファニル］ピレン－１－イル］－アセトアミド（１４）
Ｋ２ＣＯ３（２２１．２ｍｇ、４００μｍｏｌ、０．５３当量）およびＮＥｔ３（４０μＬ）を乾燥ＤＭＦ（４ｍＬ）に懸濁し、アルゴンで１５分間フラッシュした。３－メルカプト－１－プロパノール（ｄ＝１．０６７ｍｇ／ｍＬ、２７２μＬ、２９０ｍｇ、３１６０μｍｏｌ、４．３５当量）、臭素化ピレン誘導体１２（４００ｍｇ、７５７μｍｏｌ）および乾燥ＤＭＦ（４０ｍＬ）を添加し、溶液にアルゴン流を穏やかに２０分間吹き込んだ。その後、Ｐｄ２（ｄｂａ）３（１９７．６ｍｇ、２１６μｍｏｌ、０．３０当量）およびキサントホス（１４０．４ｍｇ、２４２．８μｍｏｌ、０．３３当量）を添加した。混合物をアルゴン下、８５℃で１８時間撹拌した。溶媒を真空で除去し、残留物をＭｅＯＨに溶解し、Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）を適用し、フラッシュクロマトグラフィー（ＳＮＡＰ Ｕｌｔｒａ １００ｇカートリッジ、１５ＣＶで２～１８％ＭｅＯＨ勾配のＤＣＭ／ＭｅＯＨ）にかけて、表題化合物１４（２９８ｍｇ、５１１μｍｏｌ、７０％）を淡黄色固体として得た。この手順を、様々な規模で数回繰り返し、確実に５０～７０％収率の表題生成物を得た。
ＨＰＬＣ：ｔＲ＝８．３分（２５分でＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ ５０：５０→１００：０＋０．１％ ＴＦＡ、２５４ｎｍで検出）。ＨＲ－ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ２７Ｈ２８ＮＯＦ３Ｓ３（［Ｍ－Ｈ］－）について計算値５８２．１０６０、実測値５８２．１０４９。
２，２，２－トリフルオロ－Ｎ－［３，６，８－トリス［（３－ヒドロキシプロピル）スルホニル］ピレン－１－イル］－アセトアミド（１３ａ）
トリオール１４（１３５ｍｇ、２３２μｍｏｌ）を、ＡｃＯＨ（２０ｍＬ）およびＨ２Ｏ（１ｍＬ）の混合物に懸濁した。その後、タングステン酸ナトリウム二水和物（１９．１ｍｇ、５７．９μｍｏｌ、０．２５当量）を添加し、溶液を、混合物が粘性になるまで氷浴で冷却した。次いで、水性Ｈ２Ｏ２溶液（８５～９０％、ｄ＝約１．４５、５．００ｍＬ、約１８９ｍｍｏｌ、約８２当量）を１０分間かけて添加した。溶液を氷浴中、３０分間撹拌した。氷浴を取り除いた後、混合物を、反応が完了するまで（ＴＬＣ）、室温で２の間撹拌した。溶媒を凍結乾燥によって除去し、残留物をＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏに溶解した。Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）を添加し、すべての溶媒を真空で除去した後、試料をフラッシュクロマトグラフィー（ＳＮＡＰ Ｕｌｔｒａ ２５ｇカートリッジ、２０ＣＶでＡＣＮ／ＭｅＯＨ＋５％ ＤＣＭ、ＭｅＯＨ １～１０％勾配）にかけた。単離した化合物１３ａは、黄色固体（１１３ｍｇ、１１６μｍｏｌ、５０％）として得られた。
ＨＲ－ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ２７Ｈ２８ＮＯ１０Ｆ３Ｓ３（［Ｍ－Ｈ］－）について計算値６７８．０７５５、実測値６７８．０７５６。
３，６，８－トリス［（３－ヒドロキシプロピル）スルホニル］－ピレン－１－アミン（１３ｂ）
３，６，８－トリス［（３－ヒドロキシプロピル）スルホニル］－ピレン－１－アミン（１３ｂ）
保護ピレン誘導体１３ａ（２０ｍｇ、２９μｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ（６ｍＬ）に懸濁した。希水性Ｎａ２ＣＯ３（５ｍＬのＨ２Ｏと混合した７５０μＬの飽和水性Ｎａ２ＣＯ３溶液）を添加し、溶液を室温で３０分間、続いて５０℃で３０分間および室温で９０分間、撹拌した。Ｃｅｌｉｔｅ（登録商標）およびＭｅＯＨを添加し、溶媒を減圧下で除去した。粗生成物をｆｃｃ（ＳＮＡＰ Ｕｌｔｒａ １０ｇカートリッジ、１２ＣＶで２～２０％ＭｅＯＨ勾配のＤＣＭ／ＭｅＯＨ）によって精製し、表題生成物１３ｂを、橙色固体（１４ｍｇ、２４μｍｏｌ、８１％）として単離した。
ＨＰＬＣ：ｔＲ＝１３．１分（２５分でＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ １０：９０→１００：０＋０．１％ ＴＦＡ、２２５ｎｍで検出。ＴＬＣ（ＳｉＯ２）：Ｒｆ＝０．３８（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９：２）。ＨＲ－ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ２５Ｈ２９ＮＯ９Ｓ３（［Ｍ－Ｈ］－）について計算値５８２．０９３２、実測値５８２．０９２７。ＵＶ－ＶＩＳ（ＭｅＯＨ中）：ε＝２１０００Ｍ－１ｃｍ－１、λｍａｘ（吸収）＝４８６ｎｍ、λｍａｘ（蛍光）＝５３４ｎｍ、ＱＹ＝０．８０。
トリ－Ｏ－リン酸化３，６，８－トリス［（３－ヒドロキシプロピル）スルホニル］－ピレン－１－アミン（１５）
リン酸トリメチル（０．２ｍＬ）中の脱保護ピレン誘導体１３ｂ（２．００ｍｇ、３．４３μｍｏｌ）の溶液をアルゴン雰囲気下、新たに蒸留し、氷冷したＰＯＣｌ３（０．２５ｍＬ、２．６９ｍｍｏｌ）に滴下添加した。混合物を０℃で３０分間および室温で４時間撹拌した。すべての揮発性成分を、ドライアイス／アセトン浴で冷却したフラスコに真空（０．７ｍｂａｒ）で蒸留（最初は室温、後に６０℃まで加熱）し、残留物を凍結乾燥によってさらに乾燥した（０．０２ｍｂａｒ）。水性Ｅｔ３Ｎ－Ｈ２ＣＯ３緩衝液（１Ｍ、およそ６～８ｍＬ）を、ｐＨが８に調節されるまで残留物に添加した（気体発生）。試料を、凍結乾燥によっておよそ１ｍＬの体積に濃縮し、分取ＨＰＬＣ（Ｋｉｎｅｔｅｘ ５μｍ ＥＶＯ Ｃ１８ １００Ａ ２５０×２１ｍｍカラム、ＭｅＣＮ／水＋０．０５Ｍ ＴＥＡＢ、２０分かけてＭｅＣＮ勾配１０～３０％、９．１分でピーク）によって精製した。
ＨＰＬＣ：ｔＲ＝５．４８分（２０分でＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ １０：９０→１００：０＋０．０５Ｍ ＴＥＡＢ、２５４ｎｍで検出）。ＴＬＣ（ＲＰ－ＳｉＯ２ Ｃ１８）：Ｒｆ＝０．７～０．８（ＭｅＣＮ：Ｈ２Ｏ＋０．０５Ｍ ＴＥＡＢ＝９：２）。ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ２５Ｈ３２ＮＯ１８Ｐ３Ｓ３について計算値（８２２．９９９４）：［Ｍ－Ｈ］－８２１．９９２２。ＵＶ－ＶＩＳ（０．０５Ｍ水性Ｅｔ３Ｎ＊Ｈ２ＣＯ３（ＴＥＡＢ）緩衝液、ｐＨ８～８．５）：λｍａｘ（吸収）＝２０３、２３６、３０５、４７７ｎｍ；λｍａｘ（発光）＝５４２ｎｍ、ε＝１９６００Ｍ－１ｃｍ－１、ＱＹｆｌ．＝標準としてそのＱＹｆｌ．＝４９６ｎｍでの励起下０．１Ｍ ＮａＯＨ中９０％であるフルオレセインのアルカリ性溶液と比べて、それぞれ９２％（ＴＥＡＢ緩衝液中絶対値、ｐＨ８～８．５、積分球を備えるＨａｍａｍａｔｓｕ ａｐａｒａｔｕｓ Ｃ１１３４７－１２によって測定）および７４～７６％（Ｒ２６５８ ＰＭＴを備えるＦｌｕｏｒｏｌｏｇ－３分光計で測定）。
Ｎ－［３，６，８－トリス［（３－ヒドロキシプロピル）スルホニル］ピレン－１－イル］グリシン（１６）
脱保護アミノピレン１３ｂ（１９ｍｇ、３４μｍｏｌ）をＭｅＯＨ（１１ｍＬ）に懸濁した。グリオキシル酸一水和物（１２．６ｍｇ、１３６μｍｏｌ、４．０当量）を添加し、混合物を濃ＨＣｌ（１２μＬ、１４０μｍｏｌ、４．３当量）の添加によって酸性化した。室温で１時間撹拌した後、ＮａＢＨ３ＣＮ（１７ｍｇ、２７０μｍｏｌ、８．０当量）を添加した。３時間後、さらなるグリオキシル酸一水和物（１１ｍｇ、１２０μｍｏｌ、３．５当量）を添加した。終夜撹拌した後、２回目のＮａＢＨ３ＣＮ（２９ｍｇ、４６０μｍｏｌ、１４当量）および濃ＨＣｌ（２０μＬ、２４０μｍｏｌ、７．１当量）を添加した。室温でさらに１日撹拌した後、３回目のグリオキシル酸一水和物（９１ｍｇ、９９０μｍｏｌ、２９当量）、ＮａＢＨ３ＣＮ（２７ｍｇ、４３０μｍｏｌ、１２．６当量）および濃ＨＣｌ（２０μＬ、２４０μｍｏｌ、７．１当量）を添加し、反応を一晩撹拌した。溶媒を真空で除去し、粗生成物を、９～２５％ ＡＣＮ勾配のＨ２Ｏ／ＡＣＮ＋０．２％ ＴＦＡを用いるＲＰカラムクロマトグラフィーによって精製した。生成物を、赤色固体（８．３ｍｇ、１３μｍｏｌ、３８％）として単離した。
ＨＰＬＣ：ｔＲ＝４．４分（２５分でＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ ３０：７０→１００：０＋０．１％ ＴＦＡ、２５４ｎｍで検出）。ＨＰＬＣ：ｔＲ＝９．５分（２５分でＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ １０：９０→１００：０＋０．１％ ＴＦＡ、４６５ｎｍで検出）。ＭＳ（ＥＳＩ）：ｍ／ｚ（ネガティブモード、％）＝６４１（１００）［Ｍ］－。ＨＲ－ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ２７Ｈ３１ＮＯ１１Ｓ３（［Ｍ＋Ｎａ］＋）について計算値６６４．０９５１、実測値６６４．０９２５。ＵＶ－ＶＩＳ（ＭｅＯＨ中）：ε＝１８０００Ｍ－１ｃｍ－１、λｍａｘ．（吸収）＝４９９ｎｍ、λｍａｘ．（蛍光）＝５５３ｎｍ、ＱＹ＝０．７１。
３，６，８－トリス［（３－ヒドロキシプロピル）スルホニル］ピレン－１－（メチルアミン）（１８）
化合物１４（７５ｍｇ、０．１３ｍｍｏｌ）を、アルゴン下、乾燥ＤＭＦ（０．１ｍＬ）に懸濁し、Ｃｓ２ＣＯ３（５５ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）、続いてＭｅＩ（０．１５ｍＬ）を添加した。反応混合物を、ねじ蓋チューブ中、５０℃で１時間撹拌した。ＨＰＬＣは、反応が完了したことを示した。ＨＰＬＣ：出発材料ｔＲ＝１３．７分（２５分でＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ ３０：７０→１００：０＋０．１％ ＴＦＡ、２５４ｎｍで検出）。ＨＰＬＣ：生成物ｔＲ＝１５．８分（２５分でＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ ３０：７０→１００：０＋０．１％ ＴＦＡ、２５４ｎｍで検出）。ＤＭＦを真空で除去し、残留物をジクロロメタン－水混合物に溶かした。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、真空で蒸発させた。化合物１７（５６ｍｇ、７８％、Ｎ－メチル化生成物、構造については合成の一般スキームを参照されたい）を、酢酸エチル中０～５％ ＭｅＯＨを用いた溶出の過程で、ＳｉＯ２（２５ｇ）でのクロマトグラフィーによって単離した。これをスルホンに酸化するために、化合物１７を酢酸（５ｍＬ）に溶解させ、水（３ｍＬ）、続いてＮａ２ＷＯ４＊２Ｈ２Ｏ（１２ｍｇ、触媒）を添加し、混合物を０℃に冷却した。過酸化水素（１．５ｍＬのおよそ８０％溶液）を０℃で添加した。反応混合物は暗色に変化し、次いで、暗色は消失した。ＨＰＬＣは、ｔＲ＝８．４８分（２５分でＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ ３０：７０→１００：０＋０．１％ ＴＦＡ、２５４ｎｍで検出）で新しい物質への完全な変換を示した。すべての揮発性材料を真空で除去し、乾燥残留物を水性アセトニトリルに溶解させた。中間体化合物のＣＦ３ＣＯ基（脱保護）の切断は以下の通り実施した：Ｎａ２ＣＯ３（およそ２０重量％、１．５ｍＬ）の飽和水溶液を添加し、溶液を室温で撹拌した。アセトニトリル－水の比は、１．５ｍＬの飽和Ｎａ２ＣＯ３水溶液の添加により均質反応混合物になるように選択されなくてはならない。反応混合物は、数分で明橙色に変化し；これを、室温で終夜撹拌した。ＨＰＬＣは、ｔＲ＝６．４分（２５分でＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ ３０：７０→１００：０＋０．１％ ＴＦＡ、２５４ｎｍで検出）で新しい物質（表題化合物）への完全な変換を示した。炭酸ナトリウムを、氷状ＡｃＯＨの添加によって中性化し、凍結反応混合物を凍結乾燥した。固体残留物を、熱水性アセトニトリルに溶解させ、ＲＰ－ＳｉＯ２（Ｃ１８、５０ｇ）を含むカラム上に適用した。アセトニトリル－水混合物（１／３～１／２、＋１％ ＡｃＯＨ）による溶出の結果、最初に不純物の緑色－黄色「バンド」、続いて表題化合物（１７）の橙色ゾーンが生じた。橙色溶液の凍結乾燥により、４８ｍｇ（８０％）の表題化合物を橙色－赤色粉末（メタノールおよび水にわずかに可溶性）を得た。ＨＰＬＣ：ｔＲ＝６．０分（２０分でＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ ３０：７０→１００：０＋０．１％ ＴＦＡ、２５４ｎｍで検出；Ｋｉｎｅｔｅｘカラム）。
ＨＲ－ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ２６Ｈ３１ＮＯ９Ｓ３（５９７．１１１６）；［Ｍ－Ｈ］－実測値５９６、１０７８、計算値５９６．１０８８。ＵＶ－ＶＩＳ（ＭｅＯＨ）：ε＝２３４００Ｍ－１ｃｍ－１、λｍａｘ．（吸収）＝５０２ｎｍ、λｍａｘ．（蛍光）＝５５０ｎｍ、ＱＹ＝０．８８。ＵＶ－ＶＩＳ（Ｈ２Ｏ）：ε＝１９５００Ｍ－１ｃｍ－１、λｍａｘ．（吸収）＝５０９ｎｍ、λｍａｘ．（蛍光）＝５６３ｎｍ、ＱＹ＝０．８８。
大きな正味負電荷および好ましいスペクトル特性を有するいくつかの追加の選択された蛍光色素（スキーム１２および表２も参照されたい）。
構造２０の複数のイオン化可能基を有する赤色発光ローダミン色素を、Ｋ．Ｋｏｌｍａｋｏｖ、Ｃ．Ａ．Ｗｕｒｍ、Ｒ．Ｈｅｎｎｉｇ、Ｅ．Ｒａｐｐ、Ｓ．Ｊａｋｏｂｓ、Ｖ．Ｎ．ＢｅｌｏｖおよびＳ．Ｗ．ＨｅｌｌによってＣｈｅｍ．Ｅｕｒ．Ｊ．２０１２、１８、１２９８６～１２９９８（性質およびリン酸化の詳細についてはその化合物７－Ｈを参照されたい）に以前に記載された通り、対応するヒドロキシル置換ローダミン前駆体のリン酸化によって得、化合物１９（別のリン酸化ローダミン色素、上記スキーム６および１１を参照されたい）と同様に単離した。化合物２０のヒドロキシル置換前駆体を、Ｋ．Ｋｏｌｍａｋｏｖ、Ｃ．Ａ．Ｗｕｒｍ、Ｄ．Ｎ．Ｈ．Ｍｅｉｎｅｋｅ、Ｆ．Ｇｏｔｔｆｅｒｔ、Ｖ．Ｐ．Ｂｏｙａｒｓｋｉｙ、Ｖ．Ｎ．ＢｅｌｏｖおよびＳ．Ｗ．Ｈｅｌｌ（Ｃｈｅｍ．Ｅｕｒ．Ｊｏｕｒｎａｌ、２０１３、２０、１４６～１５７；その化合物１４－Ｅｔを参照されたい）に従って合成した。リン酸化の後に、記載の通りの日常的な手順を介したエチルエステル基の鹸化が続いた。
化合物２０の純度および同一性を、以下の分析データによって確認した：
ＨＰＬＣ：ｔＲ＝３．９分（Ｋｉｎｅｔｅｘ ＥＶＯ Ｃ－１８カラム、０．０２Ｍ水性Ｅｔ３Ｎ（Ａ）および３％ ＭｅＣＮ（Ｂ）、均一濃度流０．５ｍＬ／分、２５４ｎｍで検出）。ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．２５（シリカゲルプレート、ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ ５：１＋０．２％ Ｅｔ３Ｎ）。ＨＲ－ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ３５Ｈ３５Ｎ２Ｏ１３Ｐ２
－（［Ｍ－Ｈ］－）について計算値７５３．１６１４、実測値７５３．１６７２。非常に強烈な赤色蛍光を有する赤色－紫色の非常に水溶性の色素：ＵＶ－ＶＩＳ（ＰＢＳ緩衝液、ｐＨ＝７．４）λｍａｘ．ａｂｓ．＝５８２ｎｍ、λｍａｘ．ｆｌ．＝６０９ｎｍ、ε＝１２００００Ｍ－１ｃｍ－１、ＱＹｆｌ．＝０．７６％（ＴＥＡＢ緩衝液中絶対値、５４０ｎｍで励起）。
３，６，８－トリス［（３－スルホプロピル）スルホニル］－ピレン－１－アミン（２３ａ）
スルホアルキルスルホニル置換１－アミノピレン誘導体２３ａおよびその相同体２３ｂの合成は、トリブロモ置換前駆体１２におけるＳＨおよびＳＯ３Ｈ官能基を含有するシントンとのハロゲン交換（上記スキーム１１を参照されたい）に続いて、スルホンへの酸化を含んだ。
スルホアルキルスルホニル置換１－アミノピレン誘導体２３ａおよびその相同体２３ｂの合成は、トリブロモ置換前駆体１２におけるＳＨおよびＳＯ３Ｈ官能基を含有するシントンとのハロゲン交換（上記スキーム１１を参照されたい）に続いて、スルホンへの酸化を含んだ。
２，２，２－トリフルオロ－Ｎ－［３，６，８－トリス［（３－スルホプロピル）スルファニル］ピレン－１－イル］－アセトアミド（２１ａ）
２，２，２－トリフルオロ－Ｎ－［３，６，８－トリス（ブロモ）ピレン－１－イル］－アセトアミド（トリブロモ置換前駆体１２、１８０ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ；調製および性質については上記を参照されたい）およびナトリウム３－メルカプト－１－プロパンスルホネート（６００ｍｇ、３．３７ｍｍｏｌ、１０当量）を、塩基としてトリエチルアミン（０．６ｍＬ）と、触媒としてＰｄ２（ｄｂａ）３（２０ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）およびキサントホス試薬（３０ｍｇ、０．０５ｍｍｏｌ）の存在下、アルゴン雰囲気下で撹拌しながら、乾燥ＤＭＦ（２０ｍＬ）中、９０℃で反応させた。反応が完了したら（３～５時間）、粗生成物（２１ａのＮａ塩）を、逆相シリカゲル（Ｃ－１８）および移動相としてＨ２Ｏ－ＭｅＣＮ（勾配０～７０％）で最初に精製した。均質画分を合わせ、ろ過（シリンジフィルター０．４５μｍ）し、濃縮し、凍結乾燥した。粗生成物（３４０ｍｇ、無機塩を含有する）のさらなる精製を、勾配（０～２０％Ｂ）条件下、５０ｍｍｏｌのＴＥＡＢ緩衝液（Ａ）およびＭｅＣＮ（Ｂ）を用い、Ｋｉｎｅｔｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ ＮＸ Ｃ－１８固相（５μｍ）を使用する反復分取ＨＰＬＣによって実施した。純粋画分を合わせ、ｔ≦４０℃で濃縮し、凍結乾燥して、化合物２１ａのトリエチルアンモニウム塩として７０～８０％の黄色結晶性水溶性固体が得られた。
分析データ：
ＨＰＬＣ：ｔＲ＝８．２分（ＫｉｎｅｔｅｘカラムＥＶＯ Ｃ－１８ １００、５μｍ、４．６×２５０ｍｍ）、０．０５Ｍ水性ＴＥＡＢ（Ａ）および２５％ ＭｅＣＮ（Ｂ）、均一濃度流０．５ｍＬ／分、２５４ｎｍで検出）。ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．６（シリカゲルプレート、ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ ７：１＋０．２％ Ｅｔ３Ｎ、３６５ｎｍでＵＶ光による照明下のその強烈な青色蛍光によっても分かる）。ＨＲ－ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ２７Ｈ２７Ｆ３ＮＯ１０Ｓ６
－（［Ｍ－Ｈ］－）についての計算値７７３．９９１１、実測値７７３．９８４５。ＵＶ－ＶＩＳ（ＰＢＳ緩衝液、ｐＨ＝７．４）λｍａｘ．（吸収）＝４２８ｎｍ。合成は、Ｃ．Ｍｉｓｐｅｌｅａｒｅ－Ｃａｎｉｖｅｔおよび共同研究者ら、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ ２００５、６１、５２５３～５２５９によって記載されるチオールおよび臭化アリールのパラジウム触媒クロスカップリングのための一般的配合法に基づく。
２，２，２－トリフルオロ－Ｎ－［３，６，８－トリス［（３－スルホプロピル）スルホニル］ピレン－１－イル］－アセトアミド（２２ａ）
チオエーテル２１ａ（トリエチルアンモニウム塩として）を以下の通り、スルホンに酸化した：５０ｍｇ（０．０４６ｍｍｏｌ、Ｍ＝１０７７のＥｔ３Ｎ塩として）の物質を、ＨＯＡｃ（４ｍＬ）および水（０．４ｍＬ）の混合物に溶解させた。＋５℃に冷却しながら、１ｍｌの５０重量％ Ｈ２Ｏ２および０．５ｍＬのＮａ２ＷＯ４×２Ｈ２Ｏの１重量％水溶液（触媒）を添加した。反応混合物をこの温度で３０分間維持し、室温で終夜静置し、水（２０ｍＬ）で希釈し、凍結乾燥した。生成物を、勾配（０～５０％Ｂ）条件下、０．５体積％水性ＨＯＡｃ（Ａ）およびＭｅＣＮ（Ｂ）を用い、Ｋｉｎｅｔｅｘ Ｇｅｍｉｎｉ ＮＸ Ｃ－１８固相（５μｍ）を使用する分取ＨＰＬＣによって精製した。純粋画分をプールし、ｔ≦４０℃で濃縮し、凍結乾燥して、２８ｍｇ（５２％）の赤色結晶性固体をトリエチルアンモニウム塩（Ｍ．Ｗ．＝１１７３）として得、これは、水中で強烈な黄色－橙色蛍光を有する。
化合物２２ａに関する分析データ：
ＨＰＬＣ：ｔＲ＝５．２分（ＫｉｎｅｔｅｘカラムＥＶＯ Ｃ－１８ １００、０．０５Ｍ水性ＴＥＡＢ（Ａ）および２５％ ＭｅＣＮ（Ｂ）、均一濃度流０．５ｍＬ／分、２５４ｎｍで検出）。ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．５（シリカゲルプレート、ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ ７：１＋０．２％ Ｅｔ３Ｎ、３６５ｎｍでＵＶ光による照明下のその強烈な橙色蛍光によっても分かる）。ＨＲ－ＭＳ（ＥＳＩ）：Ｃ２７Ｈ２７Ｆ３ＮＯ１６Ｓ６
－（［Ｍ－Ｈ］－）についての計算値８６９．９６０６、実測値８６９．９５３６。ＵＶ－ＶＩＳ（ＰＢＳ緩衝液、ｐＨ＝７．４）λｍａｘ．ａｂｓ．＝４７６ｎｍ。
３，６，８－トリス［（３－スルホプロピル）スルホニル］－ピレン－１－アミン（２３ａ）
化合物２２ａのＣＯＣＦ３保護基を、塩基性条件下、室温で、従来の方法によって切断した（Ｔ．Ｗ Ｇｒｅｅｎｅ、Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ ｏｒｇａｎｉｃ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」第３版、１９９９、５５７頁を参照されたい）。反応の進行をＴＬＣによってモニタリングし、反応混合物を、ＨＯＡｃでｐＨ７～８に中性化し、ｔ≦４０℃で濃縮した。残留物を、均一濃度モード下、０，３体積％水性Ｅｔ３Ｎ（Ａ）および１０％ ＭｅＣＮ（Ｂ）を用い、Ｇｅｍｉｎｉ ＮＸ Ｃ－１８固相（５μｍ）を使用する分取ＨＰＬＣにかけた。純粋画分を濃縮し、凍結乾燥して、２２ｍｇ（７９％）の化合物２３ａを、トリエチルアンモニウム塩として得た。性質：赤色結晶性固体、水に十分溶解性で溶液となり、非常に強烈な黄色－緑色がかった蛍光を有する。
分析データ：
ＨＰＬＣ：ｔＲ＝４．７分（ＫｉｎｅｔｅｘカラムＥＶＯ Ｃ－１８ １００、０．０５Ｍ水性ＴＥＡＢ（Ａ）および２５％ＭｅＣＮ（Ｂ）、均一濃度、０．５ｍＬ／分、２５４ｎｍで検出）。ＴＬＣ：Ｒｆ＝０．４（シリカゲルプレート、ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ ７：１＋０．２％ Ｅｔ３Ｎ、３６５ｎｍでＵＶ光による照明下のその強烈な緑色蛍光によって分かる）。ＨＲ－ＭＳ（ＥＳＩ）ネガティブモード：Ｃ２５Ｈ２８ＮＯ１５Ｓ６－（［Ｍ－Ｈ］－）についての計算値７７４．９８７３、実測値７７４．９８０４；ポジティブモード：Ｃ２５Ｈ３３Ｎ２Ｏ１５Ｓ６
＋（［Ｍ＋ＮＨ４］＋）についての計算値７９３．０２０５、実測値７９３．０１４６。ＵＶ－ＶＩＳ（ＴＥＡＢ緩衝液、ｐＨ＝８．５）：ε＝２１０００Ｍ－１ｃｍ－１、λｍａｘ．ａｂｓ．＝４８６ｎｍ、λｍａｘ．ｆｌ．＝５４２ｎｍ、Φｆｌ＝８６％（ＴＥＡＢ緩衝液中、参照色素として４９６ｎｍでの励起下、０．１Ｍ ＮａＯＨ中Φｆｌ＝０．９のフルオレセインと比べて）。
市販のナトリウム２－メルカプト－エタンスルホネートをより短いアルキル鎖を有するチオール含有試薬として使用して、色素２３ｂ（上に示される色素２３ａの相同体、これも一般式Ｃ（各Ｘ＝ＳＯ３Ｈ、ｎ＝１）に属する）を、まったく同様にして、高い収率で臭素１２から得た。そのスペクトルおよび光物理学的性質（ε、λｍａｘおよびΦｆｌ、表２も参照されたい）は、色素２３ａのスペクトルおよび光物理的性質と完全に同一であることが判明した。
実施例３
グリカンの還元的アミノ化
本発明の化合物を使用したグリカンの還元的アミノ化については、８－アミノピレン－１，３，６－トリスルホン酸三ナトリウム塩（ＡＰＴＳ）およびボラン系還元剤を用いたＮ－グリカンの蛍光標識のための従来技術のプロトコール（Ｂｉｇｇｅ ＪＣ、Ｐａｔｅｌ ＴＰ、Ｂｒｕｃｅ ＪＡ、Ｇｏｕｌｄｉｎｇ ＰＮ、Ｃｈａｒｌｅｓ ＳＭ、Ｐａｒｅｋｈ ＲＢ、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９９５、２３０、２２９～２３８；Ｒｕｈａａｋ ＬＲ、Ｈｅｎｎｉｇ Ｒ、Ｈｕｈｎ Ｃ、Ｂｏｒｏｗｉａｋ Ｍ、Ｄｏｌｈａｉｎ ＲＪＥＭ、Ｄｅｅｌｄｅｒ ＡＭ、Ｒａｐｐ Ｅ、Ｗｕｈｒｅｒ Ｍ、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｏｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２０１０、９、６６５５～６６６４）またはその変形例に従うことができる。
グリカンの還元的アミノ化
本発明の化合物を使用したグリカンの還元的アミノ化については、８－アミノピレン－１，３，６－トリスルホン酸三ナトリウム塩（ＡＰＴＳ）およびボラン系還元剤を用いたＮ－グリカンの蛍光標識のための従来技術のプロトコール（Ｂｉｇｇｅ ＪＣ、Ｐａｔｅｌ ＴＰ、Ｂｒｕｃｅ ＪＡ、Ｇｏｕｌｄｉｎｇ ＰＮ、Ｃｈａｒｌｅｓ ＳＭ、Ｐａｒｅｋｈ ＲＢ、Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９９５、２３０、２２９～２３８；Ｒｕｈａａｋ ＬＲ、Ｈｅｎｎｉｇ Ｒ、Ｈｕｈｎ Ｃ、Ｂｏｒｏｗｉａｋ Ｍ、Ｄｏｌｈａｉｎ ＲＪＥＭ、Ｄｅｅｌｄｅｒ ＡＭ、Ｒａｐｐ Ｅ、Ｗｕｈｒｅｒ Ｍ、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｏｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２０１０、９、６６５５～６６６４）またはその変形例に従うことができる。
Claims (16)
- 少なくとも１つのアルキルスルホニル基を有する、式Ｃ
ｎ＝１～１２；
Ｒ１および／またはＲ２は、互いに独立しており、
Ｈ、重水素、アルキルまたは重水素置換アルキル（アルキル基の１個、いくつかまたはすべてのＨ原子は重水素原子で交換されることができる）、または置換Ｃ ２ ～Ｃ １２ アルキル基であり；
Ｒ１－－－Ｒ２は、４、５、６または７員非芳香族炭素環を形成してもよく、この炭素環は、環の炭素原子の１つに結合したさらなる第一級アミノ基ＮＨ ２ 、第二級アミノ基ＮＨＲ ａ （式中、Ｒ ａ ＝Ｃ １ ～Ｃ ６ アルキル）、またはヒドロキシル基ＯＨを有する；または、Ｒ１－－－Ｒ２は、４、５、６または７員非芳香族複素環（この複素環にはＯ、ＮまたはＳなどのさらなるヘテロ原子が含まれる）を形成してもよく；
ヒドロキシアルキル基（ＣＨ２）ｍＯＨ（式中、ｍ＝２～１２、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）；Ｒ１またはＲ２基のうちの一方は、カーボネートまたはカルバメート誘導体（ＣＨ２）ｍＯＣＯＯＲ４または（ＣＨ２）ｍＮＨＣＯＯＲ４（式中、ｍ＝１～１２、Ｒ４＝メチル、エチル、２－クロロエチル、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリル、フェニル基または置換フェニル基、２－ピリジルまたは４－ピリジルである）；
（ＣＨ２）ｍＮＲａＲｂ（式中、ｍ＝２～１２；直鎖状または分枝状アルキル鎖を有し；Ｒａ、Ｒｂは、互いに独立しており、Ｈまたは置換されていてもよいＣ１～Ｃ４アルキル基（単数又は複数）であってもよい）であってもよく、
Ｒ１またはＲ２基のうちの一方は、アルキルアジド基（ＣＨ２）ｍＮ３（式中、ｍ＝２～６、直鎖状または分枝状アルキル鎖を有する）であってもよく；
Ｒ１またはＲ２基のうちの一方は、（ＣＨ２）ｎＣＯＯＲ５（式中、ｎ＝１～５、直鎖状または分枝状アルキル鎖（ＣＨ２）ｎを有し、Ｒ５は、Ｈ、直鎖状または分枝状Ｃ１～Ｃ６アルキル、ＣＨ２ＣＮ、２－および４－ニトロフェニル、２，３，５，６－テトラフルオロフェニル、ペンタクロロフェニル、ペンタフルオロフェニル、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリルから選択される）であってもよく；
Ｒ１またはＲ２のうちの一方は、アリールヒドラジンＡｒ－ＮＲ ６ ＮＨ ２ （式中、Ａｒは全ピレン残基であり、Ｒ ６ ＝Ｈまたはアルキル）を形成する第一級アミノ基であってもよく；または
Ｒ１またはＲ２基のうちの一方は、アリールヒドロキシルアミンＡｒ－ＮＲ ７ ＯＨ（式中、Ａｒは全ピレン残基であり、Ｒ ７ ＝Ｈまたはアルキル）を形成するヒドロキシ基であってもよく；または
Ｒ１またはＲ２基のうちの一方は、アルキルオキシアミノ基（ＣＨ２）ｎＯＮＨ２（式中、ｎ＝１～１２）であってもよく；
さらに、Ｒ１もしくはＲ２のうちの一方は、（ＣＨ２）ｎＣＯＮＨＲ６（式中、ｎ＝１～１２、Ｒ６＝Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、（ＣＨ２）ｍＮ３、（ＣＨ２）ｍ－Ｎ－マレイミド、（ＣＨ２）ｍ－ＮＨＣＯＣＨ２Ｘ（式中、Ｘ＝ＢｒもしくはＩ）、ｍ＝２～６、（ＣＨ２）ｎおよびＲ６中に直鎖状もしくは分枝状アルキル鎖を有する）であってもよく；またはＲ１もしくはＲ２のうちの一方は、ＣＨ２－Ｃ６Ｈ４－ＮＨ２、ＣＯＣ６Ｈ４－ＮＨ２、ＣＯＮＨＣ６Ｈ４－ＮＨ２もしくはＣＳＮＨＣ６Ｈ４－ＮＨ２（Ｃ６Ｈ４は、１，２－、１，３－もしくは１，４－フェニレンである）、ＣＯＣ５Ｈ３Ｎ－ＮＨ２もしくはＣＨ２－Ｃ５Ｈ３Ｎ－ＮＨ２（Ｃ５Ｈ３Ｎは、ピリジン－２，４－ジイル、ピリジン－２，５－ジイル、ピリジン－２，６－ジイルもしくはピリジン－３，５－ジイルである）を表してもよく；
Ｘ＝ＳＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、ＯＳＯ３Ｈ、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒａ（式中、Ｒａ＝置換されていてもよいＣ１～Ｃ４アルキル）、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒａ（式中、Ｒａ＝置換されていてもよいＣ１～Ｃ４アルキル）であり；
ただし、式Ｃによって表されるすべての化合物において、塩基性条件下、すなわち７＜ｐＨ＜１４で、残基Ｘに３または６つの負荷電基が存在し、これらの負荷電基は、以下：ＳＨ、ＣＯＯＨ、ＳＯ３Ｈ、ＯＳＯ３Ｈ、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２、ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒａ（Ｒａ＝Ｃ１～Ｃ４アルキルまたは置換Ｃ１～Ｃ４アルキル）、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｒａ（式中、Ｒａ＝Ｃ１～Ｃ４アルキルまたは置換Ｃ１～Ｃ４アルキル）から選択されるイオン化可能基の少なくとも部分的に脱プロトン化された残基を表す］
またはその塩を有する、蛍光色素。 - Ｘが、各出現において、ＳＯ ３ Ｈであり、ｎが、１～１２である、請求項１に記載の蛍光色素。
- 式ＣのＲ １ および／またはＲ ２ は、互いに独立しており、
Ｈ、重水素、アルキルまたは重水素置換アルキル（アルキル基の１個、いくつかまたはすべてのＨ原子は重水素原子で交換されることができる）である、請求項１に記載の蛍光色素。 - 式ＣのＲ１および／またはＲ２は、互いに独立しており、４，６－ジハロ－１，３，５－トリアジニル（Ｃ３Ｎ３Ｘ２）（Ｘは、ハロゲンである）、２－、３－もしくは４－アミノベンゾイル（ＣＯＣ６Ｈ４ＮＨ２）、Ｎ－［（２－，Ｎ－［（３－またはＮ－［（４－アミノフェニル）ウレイド基（ＮＨＣＯＮＨＣ６Ｈ４ＮＨ２）、Ｎ－［（２－，Ｎ－［（３－またはＮ－［（４－アミノフェニル）チオウレイド基（ＮＨＣＳＮＨＣ６Ｈ４ＮＨ２）、または一般式（ＣＨ２）ｍ１ＣＯＯＲ３、（ＣＨ２）ｍ１ＯＣＯＯＲ３、（ＣＨ２）ｎ１ＣＯＯＲ３もしくは（ＣＯ）ｍ１（ＣＨ２）ｍ２（ＣＯ）ｎ１（ＮＨ）ｎ２（ＣＯ）ｎ３（ＣＨ２）ｎ４ＣＯＯＲ３の結合カルボン酸残基およびその反応性エステル（式中、整数ｍ１、ｍ２およびｎ１、ｎ２、ｎ３、ｎ４は、独立して、それぞれ１～１２および０～１２の範囲であり、鎖（ＣＨ２）ｍ／ｎは、直鎖状、分枝状、飽和、不飽和、部分もしくは完全重水素化であるおよび／またはＮ、ＯもしくはＳを含有する炭素環もしくは複素環に含まれ、Ｒ３は、Ｈ、Ｄまたは求核反応性脱離基であり、これらに限定されないが、Ｎ－スクシンイミジル、スルホ－Ｎ－スクシンイミジル、１－オキシベンゾトリアゾリル、シアノメチル、ポリハロゲノアルキル、ポリハロゲノフェニル、２－または４－ニトロフェニルを含む）を表す、請求項１に記載の蛍光色素。
- 以下の式
- 負荷電スルホン酸基および／またはリン酸基、ならびに無機または有機カチオンから選択される対イオンを含み、ならびに／または正荷電基もしくは式Ｃの色素の窒素部Ｎ（Ｒ１）Ｒ２に形成された電荷移動錯体を、強鉱酸、有機酸もしくはルイス酸のアニオンから選択される対イオンと共に含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の蛍光色素塩。
- ヒドラジンＮ（Ｒ）ＮＨ２、ヒドロキシルアミンＮ（Ｒ）ＯＨまたはアミノオキシＯＮＨ２基（式中、Ｒは、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、アルケニルまたはペルフルオロアルキルである）から選択される、炭水化物－反応性基が、式Ｃの色素の窒素部Ｎ（Ｒ １ ）Ｒ ２ に、二価または多価のリンカーＬを介して連結される、
リンカーＬは、少なくとも１個の炭素原子を含み、任意の出現において、Ｃ １ ～Ｃ １２ の範囲の長さの直鎖状または分枝状の、アルキル、ヘテロアルキル、ペルフルオロアルキル、アルキルオキシ、単一または複数のジフルオロメチル（ＣＦ ２ ）、アルケンまたはアルキン部分を任意の組合せで含んでもよく；または、リンカーＬは、カルボニル（ＣＨ ２ ＣＯ、ＣＦ ２ ＣＯ）部分、１，３，５－トリアジンの残基を含んでもよい、請求項１から６のいずれか一項に記載の蛍光色素。 - 還元的アミノ化に、および還元糖、すなわち、グリカンを含む遊離形態のまたはセミアセタールとしてのアルデヒド基を有するモノマー、オリゴマーまたはポリマー炭水化物との縮合における、請求項１から７のいずれか一項に記載の蛍光色素およびその塩の使用。
- アミノ酸、ペプチド、一次および二次抗体、単一ドメイン抗体、ドセタキセル、アビジン、ストレプトアビジンおよびそれらの変形を含むタンパク質、アプタマー、ヌクレオチド、核酸、毒素、脂質、２－デオキシ－２－アミノグルコースおよび他の２－デオキシ－２－アミノアミノピラノシド、グリカンを含む炭水化物、ビオチンならびに他の低分子、すなわち、１５００Ｄａ未満の分子質量を有する分子のための蛍光標識としての、請求項１から７のいずれか一項に記載の蛍光色素およびその塩の使用。
- 分析物へのコンジュゲーションのための蛍光試薬としての、請求項１から７のいずれか一項に記載の蛍光色素およびその塩の使用であって、コンジュゲーションが、任意の化学実体、ペプチド、タンパク質、炭水化物、核酸、毒素および脂質とカップリングした、アミン、カルボン酸、アルデヒド、アルコール、芳香族化合物、複素環、色素、アミノ酸、アミノ酸残基を含む、化学実体または物質との少なくとも１つの共有化学結合または少なくとも１つの分子錯体の形成を含む、使用。
- 請求項１から７のいずれか一項に記載の蛍光色素を含む、炭水化物－色素コンジュゲート。
- 色素が、以下に示される式１５、２３ａおよび２３ｂ
- 請求項１から７のいずれか一項に記載の色素のうちの１つもしくは複数、または請求項１１または１２に記載の炭水化物コンジュゲートの１つもしくは複数を含む、キットまたは組成物。
- 請求項１で定義される一般式Ｃを有する、水中での４７７～５１０ｎｍの吸収極大、０または－６までの正味電荷、５３５～５６０ｎｍの発光極大を有する蛍光アミノピレン色素を合成するための方法であって、アリールハロゲンの置換チオアルキル官能基への交換反応と、それに続く、スルホンへの酸化を含む、方法。
- ヒドロキシル部におけるリン酸化のステップをさらに含む、請求項１４に記載の方法。
- 蛍光アミノピレン色素が、式１５、２３ａおよび２３ｂの化合物からなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
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