JP7321252B2 - トランスフェリンの発現量を検出するための試薬の、腸管免疫寛容不均衡疾患の診断試薬またはキットの調製における応用 - Google Patents

トランスフェリンの発現量を検出するための試薬の、腸管免疫寛容不均衡疾患の診断試薬またはキットの調製における応用 Download PDF

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Description

（関連出願の相互参照）
本出願は２０２０年２月２４日に中国特許庁に提出され、出願番号２０２０１０１１１２３０．０、発明の名称「トランスフェリンの発現量を検出するための試薬の、腸管免疫寛容不均衡疾患の診断試薬またはキットの調製における応用」の中国特許出願の優先権を要求し、そのすべての内容は参照により本出願に組み込まれる。
本発明は、医学的分子生物学の技術分野に属し、特に、トランスフェリンの発現量を検出するための試薬の、腸管免疫寛容不均衡疾患の診断試薬またはキットの調製における応用に関する。
腸管は、外部の食物抗原に曝露して、腸管病原菌および外部の抗原感染に抵抗する防御の第一線である。腸内には多数の腸内細菌叢もある。人体の重要な免疫システムとして、腸管は有害な抗原（外部病原菌）と無害な抗原（腸内共生細菌と食物抗原）を効率的に認識することができ、同時に、腸管は腸内微生物代謝による多数の抗原物質（リポ多糖、リポテイコ酸、細菌ＤＮＡなど）からの刺激に効果的に挑戦して腸管免疫寛容のバランスを効率的に維持することができる。腸管免疫寛容の不均衡は、重度の炎症性腸疾患（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｂｏｗｅｌ ｄｉｓｅａｓｅ、ＩＢＤ）につながる可能性がある
腸管免疫寛容樹枝状細胞（ＣＤ１０３＋ＣＤ１１ｂ＋ＤＣ）、調節性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）、調節性Ｂ細胞（Ｔｒｅｇ）などの炎症抑制性細胞は、腸管免疫寛容のバランスを維持する上で重要な役割を果たすが、その分子メカニズムはまだ不明である。現在、臨床的に腸管免疫不均衡に関連する疾患を正確で効果的に検出するためのマーカーはない。
本発明は、トランスフェリンの発現量を検出するための試薬の、腸管免疫寛容不均衡疾患の診断試薬またはキットの調製における応用を提供することを目的とする。本発明は、腸管免疫不均衡に関連する疾患を正確かつ効果的に検出するために使用することができる。
上記発明の目的を達成するために、本発明は以下の技術解決手段を提供する。
本発明は、トランスフェリンの発現量を検出するための試薬を含む腸管免疫寛容不均衡疾患用の診断試薬またはキットを提供する。
本発明は、トランスフェリンの発現量を検出するための試薬の、腸管免疫寛容不均衡疾患診断における応用を提供する。
好ましくは、前記腸管免疫寛容不均衡疾患には潰瘍性大腸炎が含まれる。
本発明は、マーカーとしてのトランスフェリンの、腸管免疫寛容不均衡疾患診断における応用を提供する。
本発明は、マーカーとしてトランスフェリンを使用する腸管免疫寛容不均衡疾患のためのＥＬＩＳＡ診断キットを提供する。
好ましくは、前記キットには、抗ヒトトランスフェリンに特異的なウサギポリクローナル抗体が含まれている。
好ましくは、前記キットには、ウェルプレート、コーティング溶液、洗浄液、ブロッキング液、抗ウサギＩｇＧ二次抗体、発色基質、停止液も含まれている。
好ましくは、前記コーティング溶液にはリン酸緩衝生理食塩水が含まれ、前記洗浄液にはリン酸トゥイーンバッファーが含まれ、前記ブロッキング液にはウシ血漿アルブミン溶液が含まれ、前記ウシ血漿アルブミン溶液は溶媒としてリン酸緩衝生理食塩水を使用し、前記発色基質には、３，３′，５，５′－テトラメチルベンジジン溶液が含まれ、前記停止液には硫酸水溶液が含まれる。
本発明の有益な効果は以下のとおりである。
本発明は、トランスフェリンの発現量を検出するための試薬の、腸管免疫寛容不均衡疾患診断試薬またはキットの調製における応用を提供する。本発明は、トランスフェリンの濃度のレベルに従って腸管の炎症性疾患の重症度を診断し、腸管の免疫寛容不均衡疾患の早期診断の目的を達成する。本発明は、トランスフェリンを使用して腸管の免疫寛容不均衡マーカーとして、高い特異性および感度を有し、検出方法が簡単である。
実施例２の潰瘍性大腸炎の患者および正常な人々のアンチトロンビン中のトランスフェリンの含有量である。 実施例２の潰瘍性大腸炎患者の結腸組織におけるトランスフェリン濃度のｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ実験結果である。 実施例２の潰瘍性大腸炎患者の結腸組織におけるトランスフェリン濃度の統計結果である。 実施例３の通常のＳＰＦマウスおよび無菌マウス（ＧＦ）の腸組織および腸間膜リンパ節の各セグメント（十二指腸（Ｄ）、空腸（Ｊ）、回腸（Ｉ）、盲腸（Ｃ１）および結腸（Ｃ２））トランスフェリンおよび腸管の免疫寛容の重要な指標（レチンアルデヒドデヒドロゲナーゼＡＬＤＨ１Ａ２、ＣＣＬ２２、ＴＧＦ－β１およびＩＬ－１０）のｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ実験結果である。 実施例３の通常のＳＰＦマウスおよび無菌マウス（ＧＦ）の腸組織および腸間膜リンパ節の各セグメントｔｆのｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ統計結果である。 実施例３の通常のＳＰＦマウスおよび無菌マウス（ＧＦ）の腸組織および腸間膜リンパ節の各セグメントＡＬＤＨ１Ａ２のｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ統計結果である。 実施例３の通常のＳＰＦマウスおよび無菌マウス（ＧＦ）の腸組織および腸間膜リンパ節の各セグメントＣＣＬ２２のｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ統計結果である。 実施例３の通常のＳＰＦマウスおよび無菌マウス（ＧＦ）の腸組織および腸間膜リンパ節の各セグメントＴＧＦ－β１のｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ統計結果である。 実施例３の通常のＳＰＦマウスおよび無菌マウス（ＧＦ）の腸組織および腸間膜リンパ節の各セグメントＩＬ－１０のｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ統計結果である。 実施例４の通常のＳＰＦマウス（ＮＣ）および複合抗生物質（Ａｂｓ）摂食群のＳＰＦマウスの腸組織および腸間膜リンパ節の各セグメント（十二指腸（Ｄ）、空腸（Ｊ）、回腸（Ｉ）、盲腸（Ｃ１）および結腸（Ｃ２））トランスフェリンおよび腸管の免疫寛容の重要な指標（レチンアルデヒドデヒドロゲナーゼＡＬＤＨ１Ａ２、ＣＣＬ２２、ＴＧＦ－β１およびＩＬ－１０）のｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ実験結果である。 実施例４のＳＰＦマウス（ＮＣ）および複合抗生物質摂食群のＳＰＦマウスの腸組織および腸間膜リンパ節の各セグメントｔｆのｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ統計結果である。 実施例４のＳＰＦマウス（ＮＣ）および複合抗生物質摂食群のＳＰＦマウスの腸組織および腸間膜リンパ節の各セグメントＡＬＤＨ１Ａ２のｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ統計結果である。 実施例４のＳＰＦマウス（ＮＣ）および複合抗生物質摂食群のＳＰＦマウスの腸組織および腸間膜リンパ節の各セグメントＣＣＬ２２のｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ統計結果である。 実施例４のＳＰＦマウス（ＮＣ）および複合抗生物質摂食群のＳＰＦマウスの腸組織および腸間膜リンパ節の各セグメントＴＧＦ－β１のｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ統計結果である。 実施例４のＳＰＦマウス（ＮＣ）および複合抗生物質摂食群のＳＰＦマウスの腸組織および腸間膜リンパ節の各セグメントＩＬ－１０のｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ統計結果である。 マウスの腸組織（Ｇｕｔ）の各セグメント（十二指腸（Ｄ）、空腸（Ｊ）、回腸（Ｉ）、盲腸（Ｃ１）および結腸（Ｃ２））樹枝状細胞（ＣＤ１０３＋ＣＤ１１ｂ＋、ＣＤ１０３＋ＣＤ１１ｂ－、ＣＤ１０３－ＣＤ１１ｂ－及びＣＤ１０３－ＣＤ１１ｂ＋）に対するトランスフェリンノックダウン（ＳＨ）および複合抗生物質（Ａｂｓ）摂食の影響状況である。 マウスの腸間膜リンパ節（ｇＬＮ）の各セグメント（十二指腸（Ｄ）、空腸（Ｊ）、回腸（Ｉ）、盲腸（Ｃ１）および結腸（Ｃ２））樹枝状細胞（ＣＤ１０３＋ＣＤ１１ｂ＋、ＣＤ１０３＋ＣＤ１１ｂ－、ＣＤ１０３－ＣＤ１１ｂ－及びＣＤ１０３－ＣＤ１１ｂ＋）に対するトランスフェリンノックダウン（ＳＨ）および複合抗生物質（Ａｂｓ）摂食の影響状況である。 トランスフェリンノックダウン（ＳＨ）および複合抗生物質（Ａｂｓ）摂食による、マウスの腸組織（Ｇｕｔ）の各セグメントにおける免疫寛容の重要な指標である樹枝状細胞（ＣＤ１０３＋ＣＤ１１ｂ＋、ＣＤ１０３＋ＣＤ１１ｂ－、ＣＤ１０３－ＣＤ１１ｂ－及びＣＤ１０３－ＣＤ１１ｂ＋）の分化状況の統計結果である。 トランスフェリンノックダウン（ＳＨ）および複合抗生物質（Ａｂｓ）摂食による、マウス腸間膜リンパ節（ｇＬＮ）の各セグメントにおける免疫寛容の重要な指標である樹枝状細胞（ＣＤ１０３＋ＣＤ１１ｂ＋、ＣＤ１０３＋ＣＤ１１ｂ－、ＣＤ１０３－ＣＤ１１ｂ－及びＣＤ１０３－ＣＤ１１ｂ＋）の分化状況の統計結果である。 マウスの腸組織（Ｇｕｔ）の各セグメント（十二指腸（Ｄ）、空腸（Ｊ）、回腸（Ｉ）、盲腸（Ｃ１）および結腸（Ｃ２））のＦＯＸＰ３＋ＲＯＲγＴ＋Ｔｒｅｇ及びＦＯＸＰ３＋Ｔｒｅｇに対するトランスフェリンノックダウン（ＳＨ）および複合抗生物質（Ａｂｓ）摂食の影響である。 マウスの腸間膜リンパ節（ｇＬＮ）の各セグメント（十二指腸（Ｄ）、空腸（Ｊ）、回腸（Ｉ）、盲腸（Ｃ１）および結腸（Ｃ２））のＦＯＸＰ３＋ＲＯＲγＴ＋Ｔｒｅｇ及びＦＯＸＰ３＋Ｔｒｅｇに対するトランスフェリンノックダウン（ＳＨ）および複合抗生物質（Ａｂｓ）摂食の影響である。 マウスの腸組織（Ｇｕｔ）の各セグメントのＦＯＸＰ３＋ＲＯＲγＴ＋Ｔｒｅｇに対するトランスフェリンノックダウン（ＳＨ）および複合抗生物質（Ａｂｓ）摂食の影響の統計結果である。 マウスの腸組織（Ｇｕｔ）の各セグメントのＦＯＸＰ３＋Ｔｒｅｇに対するトランスフェリンノックダウン（ＳＨ）および複合抗生物質（Ａｂｓ）摂食の影響の統計結果である。 腸間膜リンパ節（ｇＬＮ）の各セグメントのＦＯＸＰ３＋ＲＯＲγＴ＋Ｔｒｅｇに対するトランスフェリンノックダウン（ＳＨ）および複合抗生物質（Ａｂｓ）摂食の影響の統計結果である。 マウス腸間膜リンパ節（ｇＬＮ）の各セグメントのＦＯＸＰ３＋Ｔｒｅｇに対するトランスフェリンノックダウン（ＳＨ）および複合抗生物質（Ａｂｓ）摂食の影響の統計結果である。
本発明は、トランスフェリンの発現量を検出するための試薬の、腸管免疫寛容不均衡疾患診断試薬またはキットの調製における応用を提供する。前記腸管免疫寛容不均衡疾患には、好ましくは、潰瘍性大腸炎が含まれ、前記トランスフェリンは、好ましくは、血漿及び／又は腸管組織中のトランスフェリンである。
本発明は、腸管免疫寛容の不均衡疾患である潰瘍性大腸炎患者の血漿および結腸組織におけるトランスフェリン含有量のダウンレギュレーションに基づいて、腸管の免疫寛容の不均衡に関連する疾患を診断する。トランスフェリン濃度のダウンレギュレーションは、腸管の免疫寛容ホメオスタシスの破壊に関連し、本発明は、腸管の免疫寛容の不均衡に関連する疾患の早期診断およびモニタリングマーカーとして、患者の血漿および腸管におけるトランスフェリン濃度を検出する。
本発明は、マーカーとしてトランスフェリンを使用する腸管免疫寛容不均衡疾患のためのＥＬＩＳＡ診断キットを提供する。前記キットには、好ましくは、抗ヒトトランスフェリンに特異的なウサギポリクローナル抗体が含まれている。本発明は、前記抗ヒトトランスフェリンに特異的なウサギポリクローナル抗体の調製方法について特別な制限がなく、当分野における従来の方法を使用すればよい。
本発明において、前記キットには、好ましくはウェルプレート、コーティング溶液、洗浄液、ブロッキング液、抗ウサギＩｇＧ二次抗体、発色基質、停止液も含まれている。
本発明において、前記コーティング溶液にはリン酸緩衝生理食塩水が含まれ（ＰＢＳバッファー）、前記リン酸緩衝生理食塩水のｐＨ値は、好ましくは９．６であり、前記リン酸緩衝生理食塩水の溶質には、Ｎａ２ＣＯ３とＮａＨＣＯ３が含まれ、前記リン酸緩衝生理食塩水中の溶質の濃度は好ましくは０．０５Ｍである。前記洗浄液にはリン酸トゥイーンバッファー（ＰＢＳＴ）が含まれ、前記リン酸トゥイーン緩衝液中のトゥイーンの体積パーセントは、好ましくは０．５％である。前記ブロッキング液にはウシ血漿アルブミン溶液が含まれ、前記ウシ血漿アルブミン溶液は溶媒としてリン酸緩衝生理食塩水を使用し、前記ウシ血漿アルブミン溶液中のウシ血漿アルブミンの質量百分率は１％である。前記発色基質には、３，３′，５，５′－テトラメチルベンジジン溶液（ＴＭＢ）が含まれる。前記停止液には硫酸水溶液が含まれ、前記硫酸水溶液中の硫酸の濃度は２Ｍである。
本発明の前記キットを使用する方法は、好ましくは、以下のステップを含む。
腸管の免疫寛容不均衡疾患にかかる患者から収集された血漿サンプルまたは腸組織を、コーティング溶液で希釈した後、９６ウェルプレートにプレーティングし、ブロッキング処理後、プレートウェル内のトランスフェリンを、抗ヒトトランスフェリンに特異的なウサギポリクローナル抗体によって特異的に吸着し、ホースラディッシュペルオキシダーゼで標識された二次抗体によって発色する。標準曲線を使用して、サンプル中のトランスフェリンの濃度を測定する。トランスフェリンの濃度レベルに基づいて腸管の炎症性疾患の重症度を診断し、腸管の免疫寛容不均衡疾患の早期診断の目的を達成する。
以下に本発明における実施例を参照しながら、本発明における技術的解決手段を明確で、完全に説明する。明らかに、記載された実施例は、すべての実施例ではなく、本発明の実施例の一部にすぎない。本発明の実施例に基づいて、創造的な作業なしに当業者によって得られる他のすべての実施例は、本発明の保護範囲に含まれるものとする。
実施例１
トランスフェリン検出キット。
該測定方法は従来の酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）であり、検出ステップは次のとおりである。
１） それぞれ１μｌの１０００倍希釈の潰瘍性大腸炎患者と正常な人々の血漿および９９μlの固定液（５０ｍＭ炭酸塩緩衝液、ｐＨ ９．６）を取り、それらを混合した後に９６ウェルプレート（Ｎｕｎｃ、デンマーク）に添加し、４℃で一晩コーティングした。
２） 翌日、ウェル内の溶液を廃棄し、０．１Ｍリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で３回洗浄してブロック処理し、自家製の抗ヒトトランスフェリンポリクローナル抗体（１０μｇ／ｍｌ）を加え、３７℃で６０ｍｉｎインキュベートした。抗ヒトトランスフェリンポリクローナル抗体の調製プロセスは次のとおりである。５００マイクログラムのヒトトランスフェリン（ｓｉｇｍａ）を１ｍＬのフロイント完全アジュバント（ｓｉｇｍａ）に溶解し、ウサギ（オス、２ｋｇ）の皮下組織へ複数回に皮下注射した。最初の免疫から１４、２８、４２日後に、フロイントの不完全なアジュバント（ｓｉｇｍａ）に溶解した２５０μgのヒトトランスフェリンを同じ方法でウサギの皮下組織に注射した。最後に、耳介静脈から血液を採取した後に抗体分離キット（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ、ＵＳＡ）で抗ヒトトランスフェリンポリクローナル抗体を分離し、精製した。
３） 未結合の抗体を洗浄液で洗浄した後、ホースラディッシュペルオキシダーゼ標識抗ウサギＩｇＧ二次抗体（ＫＰＬ、ＵＳＡ）を添加し、最後にテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を発色反応に使用した。
４） 一連の段階希釈された標準トランスフェリンを使用して標準曲線を作成し、測定された血漿サンプル中のトランスフェリンの濃度を取得した。具体的な操作プロセスは、購入したヒトの純粋なトランスフェリン（ｓｉｇｍａ）を、２０、１０、５、２．５、１．２５、０．６２５、０．３１２５ｍｇ／ｍｌの７つの標準濃度勾配に調製した。
実施例２
潰瘍性大腸炎患者と正常な人々の血漿および結腸組織におけるトランスフェリン含有量のＥＬＩＳＡ検出。
それぞれ、潰瘍性大腸炎の患者２０名と正常な人々の血漿を病院で採取し、血漿と３．８％（質量：体積）のクエン酸ナトリウムを１：９（体積：体積）の比率で混合してアンチトロンビンを得て、実施例１の方法に従って、アンチトロンビン中のトランスフェリンの含有量を検出した。検出結果を図１に示し、潰瘍性大腸炎患者の血漿トランスフェリン濃度レベルは有意な減少を示した（ｐ＜０．０１）。Ｔｆ：トランスフェリン。
正常な人および潰瘍性大腸炎の患者の結腸組織（ｎ＝２０）を、粉砕した後、実施例１に記載のトランスフェリン抗体を用いてｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔによって検出した。結果を図２と図３に示し、図２は、潰瘍性大腸炎患者の結腸組織におけるトランスフェリン濃度のｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ試験の結果を示し、図３は潰瘍性大腸炎患者の結腸組織におけるトランスフェリン濃度のｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔの統計結果を示し、この統計結果は、２０人の患者について実験を５つ独立して繰り返した結果である。＊＊ｐ＜０．０１、潰瘍性大腸炎患者の結腸組織におけるトランスフェリンのレベルは有意に低下した（ｐ＜０．０１）。
実施例３
腸管の免疫寛容の維持におけるトランスフェリンの役割をさらに検証するために、本発明は、通常のＳＰＦマウスおよび無菌マウス（ＧＦ）の腸組織および腸間膜リンパ節の各セグメント｛十二指腸（Ｄ）、空腸（Ｊ）、回腸（Ｉ）、盲腸（Ｃ１）および結腸（Ｃ２）｝トランスフェリンおよび腸管の免疫寛容の重要な指標（レチンアルデヒドデヒドロゲナーゼＡＬＤＨ１Ａ２、ＣＣＬ２２、ＴＧＦ－β１およびＩＬ－１０）の含有量を検出した。結果は次のとおりである。ＳＰＦマウスと比較して、無菌マウスは、腸組織および腸間膜リンパ節におけるトランスフェリンの含有量および腸管の免疫寛容の重要な指標（ＡＬＤＨ１Ａ２、ＣＣＬ２２、ＴＧＦ－β１およびＩＬ－１０）含有量がすべて多少減少し（図４～図９に示すように、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）、そのうち図４は通常のＳＰＦマウスおよび無菌マウス（ＧＦ）の腸組織および腸間膜リンパ節の各セグメント（十二指腸（Ｄ）、空腸（Ｊ）、回腸（Ｉ）、盲腸（Ｃ１）および結腸（Ｃ２））トランスフェリンおよび腸管の免疫寛容の重要な指標（レチンアルデヒドデヒドロゲナーゼＡＬＤＨ１Ａ２、ＣＣＬ２２、ＴＧＦ－β１およびＩＬ－１０）のｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ実験結果である。図５は通常のＳＰＦマウスおよび無菌マウス（ＧＦ）の腸組織および腸間膜リンパ節の各セグメントｔｆのｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ統計結果である。図６は通常のＳＰＦマウスおよび無菌マウス（ＧＦ）の腸組織および腸間膜リンパ節の各セグメントＡＬＤＨ１Ａ２のｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ統計結果である。図７は通常のＳＰＦマウスおよび無菌マウス（ＧＦ）の腸組織および腸間膜リンパ節の各セグメントＣＣＬ２２のｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ統計結果である。図８は通常のＳＰＦマウスおよび無菌マウス（ＧＦ）の腸組織および腸間膜リンパ節の各セグメントＴＧＦ－β１のｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ統計結果である。図９は通常のＳＰＦマウスおよび無菌マウス（ＧＦ）の腸組織および腸間膜リンパ節の各セグメントＩＬ－１０のｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ統計結果である。
実施例４
腸管の免疫寛容の維持におけるトランスフェリンの役割をさらに検証するために、本発明は、ＳＰＦマウス（ＮＣ）および複合抗生物質摂食群ＳＰＦマウス（Ａｂｓ、具体的な操作は、アンピシリン（１ｇ／Ｌ）、ストレプトマイシン（１ｇ／Ｌ）、メトロニダゾール（０．５ｇ／ｍｌ）、バンコマイシン（１ｇ／Ｌ）の水溶液を調製し、マウスに３週間給餌すること）の腸組織および腸間膜リンパ節の各セグメント｛十二指腸（Ｄ）、空腸（Ｊ）、回腸（Ｉ）、盲腸（Ｃ１）および結腸（Ｃ２）｝トランスフェリンおよび腸管の免疫寛容の重要な指標（レチンアルデヒドデヒドロゲナーゼＡＬＤＨ１Ａ２、ＣＣＬ２２、ＴＧＦ－β１およびＩＬ－１０）の含有量を検出した。結果は次のとおりである。比較群マウス（ＮＣ）と比較して、複合抗生物質処理群マウスの腸組織及び腸間膜リンパ節におけるトランスフェリン及び腸管免疫寛容の重要な指標（ＡＬＤＨ１Ａ２、ＣＣＬ２２、ＴＧＦ－β１およびＩＬ－１０）含有量はすべて多少減少し（図１０～図１５に示すように、＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１）、そのうち図１０は通常のＳＰＦマウス（ＮＣ）および複合抗生物質（Ａｂｓ）摂食群のＳＰＦマウスの腸組織および腸間膜リンパ節の各セグメント（十二指腸（Ｄ）、空腸（Ｊ）、回腸（Ｉ）、盲腸（Ｃ１）および結腸（Ｃ２））トランスフェリンおよび腸管の免疫寛容の重要な指標（レチンアルデヒドデヒドロゲナーゼＡＬＤＨ１Ａ２、ＣＣＬ２２、ＴＧＦ－β１およびＩＬ－１０）のｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ実験結果である。図１１はＳＰＦマウス（ＮＣ）および複合抗生物質摂食群のＳＰＦマウスの腸組織および腸間膜リンパ節の各セグメントＴｆのｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ統計結果である。図１２はＳＰＦマウス（ＮＣ）および複合抗生物質摂食群のＳＰＦマウスの腸組織および腸間膜リンパ節の各セグメントＡＬＤＨ１Ａ２のｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ統計結果である。図１３はＳＰＦマウス（ＮＣ）および複合抗生物質摂食群のＳＰＦマウスの腸組織および腸間膜リンパ節の各セグメントＣＣＬ２２のｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ統計結果である。図１４はＳＰＦマウス（ＮＣ）および複合抗生物質摂食群のＳＰＦマウスの腸組織および腸間膜リンパ節の各セグメントＴＧＦ－β１のｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ統計結果である。図１５はＳＰＦマウス（ＮＣ）および複合抗生物質摂食群のＳＰＦマウスの腸組織および腸間膜リンパ節の各セグメントＩＬ－１０のｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ統計結果である。
実施例５：
腸管の免疫寛容指標に対するトランスフェリンの影響をさらに検証するために、本発明は、樹枝状細胞（ＣＤ１０３＋ＣＤ１１ｂ＋ＤＣ）および調節性Ｔ細胞（ＦＯＸＰ３＋ＲＯＲγＴ＋ＴｒｅｇおよびＦＯＸＰ３＋Ｔｒｅｇ）などの免疫寛容の重要な指標の分化に対する、トランスフェリンノックダウン（ＳＨ）および複合抗生物質（Ａｂｓ、構築方法は実施例４と同じ）の影響を検出し、具体的な群分け・投与方法は、比較群（ＮＣ、生理食塩水群）、トランスフェリンノックダウン群（ＳＨ）、ウイルス投与群（尾静脈方法でのウイルス注入量は１０７ＴＵ（ｔｒａｎｓｄｕｃｉｎｇ ｕｎｉｔｓ））、複合抗生物質摂食群（Ａｂｓ）であった。
結果は次のとおりである。比較群（生理食塩水群）と比較して、トランスフェリンノックダウン群（ＳＨ）、複合抗生物質処理群樹枝状細胞（ＣＤ１０３＋ＣＤ１１ｂ＋）および調節性Ｔ細胞（ＦＯＸＰ３＋ＲＯＲγＴ＋ＴｒｅｇおよびＦＯＸＰ３＋Ｔｒｅｇ）の分化は大幅に減少した（図１６～２５、ｐ＜０．０１）。
そのうち図１６はマウスの腸組織（Ｇｕｔ）及び腸間膜リンパ節（ｇＬＮ）の各セグメント（十二指腸（Ｄ）、空腸（Ｊ）、回腸（Ｉ）、盲腸（Ｃ１）および結腸（Ｃ２））樹枝状細胞（ＣＤ１０３＋ＣＤ１１ｂ＋、ＣＤ１０３＋ＣＤ１１ｂ－、ＣＤ１０３－ＣＤ１１ｂ－、ＣＤ１０３－ＣＤ１１ｂ＋）に対するトランスフェリンノックダウン（ＳＨ）の影響状況である。
図１７はマウスの腸組織（Ｇｕｔ）及び腸間膜リンパ節（ｇＬＮ）の各セグメント（十二指腸（Ｄ）、空腸（Ｊ）、回腸（Ｉ）、盲腸（Ｃ１）および結腸（Ｃ２））樹枝状細胞（ＣＤ１０３＋ＣＤ１１ｂ＋、ＣＤ１０３＋ＣＤ１１ｂ－、ＣＤ１０３－ＣＤ１１ｂ－ＣＤ１０３－ＣＤ１１ｂ＋）に対する複合抗生物質（Ａｂｓ）摂食の影響状況である。
図１８は、トランスフェリンノックダウン（ＳＨ）による、マウス腸組織（Ｇｕｔ）及び腸間膜リンパ節（ｇＬＮ）の各セグメントにおける免疫寛容の重要な指標である樹枝状細胞（ＣＤ１０３＋ＣＤ１１ｂ＋ＤＣ）及び調節性Ｔ細胞（ＦＯＸＰ３＋ＲＯＲγＴ＋Ｔｒｅｇ及びＦＯＸＰ３＋Ｔｒｅｇ）の分化状況の統計結果である。
図１９は、複合抗生物質（Ａｂｓ）摂食による、マウス腸組織（Ｇｕｔ）及び腸間膜リンパ節（ｇＬＮ）の各セグメントにおける免疫寛容の重要な指標である樹枝状細胞（ＣＤ１０３＋ＣＤ１１ｂ＋ＤＣ）及び調節性Ｔ細胞（ＦＯＸＰ３＋ＲＯＲγＴ＋Ｔｒｅｇ及びＦＯＸＰ３＋Ｔｒｅｇ）の分化状況の統計結果である。
図２０はマウスの腸組織（Ｇｕｔ）及び腸間膜リンパ節（ｇＬＮ）の各セグメント（十二指腸（Ｄ）、空腸（Ｊ）、回腸（Ｉ）、盲腸（Ｃ１）および結腸（Ｃ２））に対するトランスフェリンノックダウン（ＳＨ）の影響である。
図２１はマウスの腸組織（Ｇｕｔ）及び腸間膜リンパ節（ｇＬＮ）の各セグメント（十二指腸（Ｄ）、空腸（Ｊ）、回腸（Ｉ）、盲腸（Ｃ１）および結腸（Ｃ２））のＦＯＸＰ３＋ＲＯＲγＴ＋Ｔｒｅｇ及びＦＯＸＰ３＋Ｔｒｅｇに対する複合抗生物質（Ａｂｓ）摂食の影響である。
図２２はマウスの腸組織（Ｇｕｔ）の各セグメントのＦＯＸＰ３＋ＲＯＲγＴ＋Ｔｒｅｇに対するトランスフェリンノックダウンＳＨの影響の統計結果である。
図２３はマウスの腸組織（Ｇｕｔ）の各セグメントのＦＯＸＰ３＋Ｔｒｅｇに対するトランスフェリンノックダウンＳＨの影響の統計結果である。
図２４はマウスの腸組織（Ｇｕｔ）の各セグメントのＦＯＸＰ３＋ＲＯＲγＴ＋Ｔｒｅｇに対する複合抗生物質（Ａｂｓ）摂食の影響の統計結果である。
図２５はマウスの腸組織（Ｇｕｔ）の各セグメントのＦＯＸＰ３＋Ｔｒｅｇに対する複合抗生物質（Ａｂｓ）摂食の影響の統計結果である。
上記は、本発明の好ましい実施形態にすぎない。本発明の原理から逸脱することなく、当業者にとって、いくつかの改善および修正を行うことができ、これらの改善および修正も本発明の保護範囲と見なされるべきであることを指摘すべきである。

Claims (5)

  1. 患者の結腸組織の検体から潰瘍性大腸炎を検出するための診断試薬であって、
    トランスフェリンの量をＥＬＩＳＡ法にて検出する試薬を含み、
    前記ＥＬＩＳＡ法にて検出する試薬を用いて、前記検体のトランスフェリンの量を検出し、
    検出した前記検体のトランスフェリン量が、健常者由来の検体のトランスフェリン量に比べ低いとき、前記検体の由来者が潰瘍性大腸炎を発症している可能性を示唆する、
    患者の結腸組織の検体から潰瘍性大腸炎を検出するための診断試薬。
  2. 患者の結腸組織の検体から潰瘍性大腸炎を検出するための潰瘍性大腸炎検査ＥＬＩＳＡキットであって、
    抗ヒトトランスフェリンポリクローナル抗体を有しており、
    前記検体のトランスフェリンの量をＥＬＩＳＡ法にて検出し、
    検出した前記検体のトランスフェリン量が、健常者由来の検体のトランスフェリン量に比べ低いとき、前記検体の由来者が潰瘍性大腸炎を発症している可能性を示唆する、
    患者の結腸組織の検体から潰瘍性大腸炎を検出するための潰瘍性大腸炎検査ＥＬＩＳＡキット。
  3. 前記潰瘍性大腸炎検査ＥＬＩＳＡキットには、ヒトトランスフェリンに特異的な抗ヒトトランスフェリンウサギポリクローナル抗体が含まれている、ことを特徴とする請求項２に記載の潰瘍性大腸炎検査ＥＬＩＳＡキット。
  4. 前記潰瘍性大腸炎検査ＥＬＩＳＡキットには、ウェルプレート、コーティング溶液、洗浄液、ブロッキング液、抗ウサギＩｇＧ二次抗体、発色基質、停止液も含まれている、ことを特徴とする請求項２に記載の潰瘍性大腸炎検査ＥＬＩＳＡキット。
  5. 前記コーティング溶液にはリン酸緩衝生理食塩水が含まれ、前記洗浄液にはリン酸トゥイーンバッファーが含まれ、前記ブロッキング液にはウシ血清アルブミン溶液が含まれ、前記ウシ血清アルブミン溶液は溶媒としてリン酸緩衝生理食塩水を使用し、前記発色基質には、３，３′，５，５′－テトラメチルベンジジン溶液が含まれ、前記停止液には硫酸水溶液が含まれることを特徴とする請求項４に記載の潰瘍性大腸炎検査ＥＬＩＳＡキット。
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Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009506011A (ja) 2005-08-25 2009-02-12 ヴィフォー・インターナショナル・アーゲー 慢性炎症性腸疾患の患者における鉄欠乏状態の経口処置用の薬剤を調製するための鉄（ｉｉｉ）複合化合物
WO2014025013A1 (ja) 2012-08-10 2014-02-13 独立行政法人産業技術総合研究所 糖鎖アイソフォーム検出方法及び糖鎖アイソフォーム検出装置
WO2014071207A1 (en) 2012-11-01 2014-05-08 The Regents Of The University Of California Particles for the treatment of inflammatory bowel disease
US20170205429A1 (en) 2014-10-03 2017-07-20 University Of Ottawa Markers for inflammatory bowel disease
JP2018524611A (ja) 2015-06-18 2018-08-30 ニューロロジカル・サージェリー・ピーシーＮｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｕｒｇｅｒｙ， Ｐ．Ｃ． 脳脊髄液の検出
JP2019520071A (ja) 2016-06-14 2019-07-18 アンスティチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル 急性重症大腸炎の処置応答を予測するための方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107831315B (zh) * 2017-10-31 2019-11-05 中国科学院昆明动物研究所 转铁蛋白标志物及其应用
CN109336973B (zh) * 2018-10-11 2021-08-24 中国科学院昆明动物研究所 抗转铁蛋白抗体及其用途

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009506011A (ja) 2005-08-25 2009-02-12 ヴィフォー・インターナショナル・アーゲー 慢性炎症性腸疾患の患者における鉄欠乏状態の経口処置用の薬剤を調製するための鉄（ｉｉｉ）複合化合物
WO2014025013A1 (ja) 2012-08-10 2014-02-13 独立行政法人産業技術総合研究所 糖鎖アイソフォーム検出方法及び糖鎖アイソフォーム検出装置
WO2014071207A1 (en) 2012-11-01 2014-05-08 The Regents Of The University Of California Particles for the treatment of inflammatory bowel disease
US20170205429A1 (en) 2014-10-03 2017-07-20 University Of Ottawa Markers for inflammatory bowel disease
JP2018524611A (ja) 2015-06-18 2018-08-30 ニューロロジカル・サージェリー・ピーシーＮｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｕｒｇｅｒｙ， Ｐ．Ｃ． 脳脊髄液の検出
JP2019520071A (ja) 2016-06-14 2019-07-18 アンスティチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル 急性重症大腸炎の処置応答を予測するための方法

Non-Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BOEHM, D. et al.，Paraoxonase-1 Status in Crohn's Disease and Ulcerative Colitis，Inflammatory Bowel Diseases，2009年01月01日，Vol.15, No.1，pp.93-99
KAZUYOSHI, Y. et al.，THE DIAGNOSTIC RELEVANCE OF FAECAL LACTOFERRIN TEST IN COLORECTAL CANCER SCREENING，United European Gastroenterology Journal，2014年10月，Vol.2, No.1, suppl，p.A546
MATUSIEWICZ, M. et al.，Reduced Transferrin Levels in Active Inflammatory Bowel Disease，BioMed Research International，2017年10月31日，Vol.2017, Article ID:9541370，pp.1-8
VELAMAZAN, R. et al.，A PATIENT SELF-MADE ONE STEP QUICK FAECAL TEST IMPROVES DIAGNOSTIC ACCURACY FOR DETECTING ENDOSCOPIC ACTIVITY COMPARED WITH FAECAL CALPROTECTIN ALONE IN INFLAMMATORY BOWEL DISEASE PATIENTS，United European Gastroenterology Journal，2019年10月，Vol.7, No.8, Abstract Number:OP143，pp.79-80
VIENNOIS, E. et al.，Circulating Protein Signatures As Biomarkers for Inflammatory Bowel Disease Management，Gastroenterology，2014年05月，Vol.146, No.5, Supplement 1，p.S-422
中村 のり子 ほか，免疫学的便潜血検査における糞便中ヒトヘモグロビンおよびヒトトランスフェリン検出試薬の検討，医学と薬学，1997年11月，第38巻，第5号，pp.979-988
武田 弘明 ほか，炎症性腸疾患におけるＴ細胞系異常，医学のあゆみ，Vol.178, No.9，1996年08月31日，pp.554-558
齊藤 治 ほか，糞便中各種蛋白分析による大腸疾患判別の試み，Therapeutic Research，1995年06月，Vol.16, No.Suppl 2，pp.528-532

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