JP7275041B2 - 瘻孔を治療する方法及び材料 - Google Patents
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Description
本出願は、2017年3月21日に出願の米国特許出願第62/474,483号への優先権を主張する。先願出願の開示は本出願の開示の一部とみなされ、その全体が本出願に組み込まれる。
この文書は、医療デバイス、特に瘻孔(例えば、難治性の痔瘻及び難治性の気管支胸腔瘻孔などの難治性の瘻孔)を治療するデバイス、システム及び方法に一般的に関する。
未解決の治癒は、医療における重要な問題である。治癒の失敗は、潰瘍(環境に開放された創傷)及び膿瘍につながることがある。膿瘍は、感染した解剖学的窩洞である。瘻孔は、2つの中空の器官の間、又は中空の器官と皮膚の表面の間を走るトンネルによって特徴付けられるタイプの膿瘍窩である。例えば、痔瘻は、直腸と肛門周囲の皮膚の間で発生する感染したトンネルである。一部の痔瘻は、皮膚まで拡散する肛門腺の感染の結果である。クローン病などの炎症性腸疾患も、消化管を巻き込む瘻孔の形成にかなり寄与する。痔瘻のための治療モダリティーは、瘻孔の位置及び複雑性に依存する。瘻孔処置法の一般的な目標は、完全な瘻孔閉鎖を達成すること、再発を予防すること、及び便失禁につながることがある括約筋の損傷を回避することである。膿瘍のできた窩洞を治癒することは、かなりの難問である。
足場の調査
FDAによって承認された10個の材料を市販されているマトリックスから選択し、in vitroで試験した:FlexHD(生物製剤;脱細胞化ヒト真皮;Musculoskeletal Transplant Foundation)、PuraCol(生物製剤;精製された1型ウシ腱コラーゲン;Medline Industries Inc.)、EZ Derm(生物製剤;アルデヒド架橋脱細胞化ブタ真皮;Molnlycke Inc.)、Cook SIS(生物製剤)、Gore Bio-A(合成)、Osteopore(合成;3D印刷ポリカルポラクトン;Osteopore International Pte Ltd.)、Gore TRM(合成)、Tepha-P4HB(合成;ポリ-4ヒドロキシブチレート;細菌バイオプラスチック;Tepha Corporation)、TIGRマトリックス(合成;ポリグリコール酸、ポリ乳酸及び炭酸トリメチレンのメッシュ;Novus Scientific)、及びVicryl 910(合成;PLGA;Ethicon Inc.)
マトリックスプラグの上の幹細胞はクローン病関連の肛門周囲瘻孔を治癒させる
製品製造及び治験登録
医学療法にもかかわらず少なくとも3カ月の間単一の排膿瘻孔を有する、磁気共鳴(MR)評価に禁忌でない、年齢18~65歳のクローン病患者、及び抗TNF療法を含む標準療法に失敗した患者が、資格を満たした。MSC収集から6カ月以内の臨床的に重要な共存症、がんの病歴、肝炎又はHIVを有していたか、又は妊娠中若しくは授乳中であった場合、患者は除外された。全ての患者でインフォームドコンセントが得られた。
プライマリーエンドポイント(安全性):
この研究のプライマリーエンドポイントは、難治性肛門周囲瘻孔の治療のためのGore(登録商標)Bio-A(登録商標)Fistula Plugに結合している脂肪由来の自家間葉性間質性細胞(MSC)の使用の安全性及び実現可能性を判定することであった。以下の有害事象について、対象をモニタリングした:
1.研究時に存在したクローン病の悪化(性質、重症度又は頻度の変化)。
2.介入性の病気
3.異常な検査値(これには、試験担当医が臨床的に有意であると考える正常値の範囲内でのベースラインからの臨床的に有意なシフトが含まれた)。
4.検診、生命徴候、体重、肛門周囲瘻孔のための排膿における臨床的に重要な異常。
24週(6カ月)後の診察時の身体検診で、排膿の臨床評価を実行した。瘻孔閉鎖は、排膿の非存在と規定した(自発的であるか弱い圧迫によるもの)。存在及び活動の評価のためのゴールドスタンダード検査であるMRIによる放射線撮影応答(Gecseら、Gut、63巻:1381~1392頁(2014年))を実行した。
臨床プロトコールのためにMSCを生成するために使用される標準操作手順と同一のプロトコールを使用して、登録された最初の6人の患者からの細胞試料を増大させた。簡潔には、手術時に得られた脂肪組織をcGMP製造施設に移した。脂肪組織の間質性血管分画からMSCを収集した。得られたMSCは、承認されたプロトコールを使用してcGMP条件下においてex vivoで増大させた。簡潔には、脂肪組織をD-PBSで洗浄し、遠心分離し、細かく切り刻み、D-PBS溶液中の0.075%コラゲナーゼに30~90分の間インキュベートした。溶液を、Advanced MEM(Gibco/Life Technologies、Grand Island、NY)、GlutaMAX(Gibco/Life Technologies)、PLTMax(Mill Creek Life Sciences、Rochester、MN)及びヘパリンを含有するMSC培地で中和した。BD Falcon細胞培養フラスコのMSC培地において、細胞を培養し、増大させた。試料を直接的に採集し(対照MSC)、同等物をGORE(登録商標)BIO-A(登録商標)瘻孔プラグ(マトリックス)に加え、さらなる4日間インキュベートした後に収集した。
療法のために使用された細胞の増殖動態、表現型及び特徴付け
生存可能な臨床産物を生成することが可能なあらゆる患者生検で、プロトコールが高度に実行可能であることが証明された。1人の患者は、汚染のために脂肪組織の再採取を必要とした。細胞は急速に増殖し、1日につき1.5の平均倍加であった(第2の平板培養の後)。プロトコールは、マトリックスに最近結合した生細胞を投与した。凍結保存時に、放出試験を実行した。解凍後の生存度は、95%を日常的に越えた。マトリックス上の細胞の用量を適切に理解するために、細胞結合の間に上清中の細胞を計数した。全ての試料について、インキュベーションの完了後に細胞の5%未満が上清中に残り、保存後に回復して増殖するそれらの能力を確認した。患者MSCは、CD44、CD73、CD105及びクラスI陽性並びにCD14、CD45及びクラスII陰性によって、古典的なMSC表現型を普遍的に実証した。
20人の患者を研究登録のためにスクリーニングし、そのうち12人を治療した。登録された患者は、持続的な難治性疾患を有していた(中央値5年の肛門周囲疾患、及び治療のために平均5.5回の麻酔下の事前検査)。全ての患者は研究登録時に生物製剤療法を受けており、全てはMSC-マトリックス設置の6カ月後に同じ生物製剤療法をまだ受けていた。
Gore(登録商標)Bio-A(登録商標) Fistula Plugに結合したMSCの作用の生物学的特性を理解するために、Gore(登録商標)Bio-A(登録商標) Fistula Plug(「マトリックス」、n=6)に対して通常のポリスチレン組織培養プラスチック(「対照」、n=6)の上で増殖させたMSCにおいて、全ての注釈された遺伝子(n=23,338)についてタンパク質をコードするmRNAの発現レベルを決定するために、RNA-seq分析を実行した。ドット-プロット分析は、対照及びマトリックス試料の両方における全体的RNA発現パターンが両方の実験条件において同等であることを明らかにした。しかし、全12試料(RPKM発現値>0.3でフィルタリングした)の全体のRNA-seqデータセットの階層的クラスタリングは、対照及びマトリックスMSCが対照及びマトリックスMSCに特異的である特徴的遺伝子発現パターンを有する2つの明瞭な生物学的クレードを形成することを示した(図13A~B)。
マトリックスプラグの上の幹細胞
別の実験では、MSCを異なるタイプのマトリックスで増殖させ、様々なポリペプチドの発現を調査し、培地単独で増殖させたMSCによって示される発現レベルと比較した。結果は、図16A~D及び17A~Dに提供される。
本発明はその詳細な記載と合わせて記載されたが、上述の記載は、添付の請求項の範囲によって規定される本発明の範囲を例示するものであり、限定するものでないことを理解すべきである。他の態様、利点及び改変は、以下の請求項の範囲内である。
(付記)
(付記1)
哺乳動物において瘻孔を治療する方法であって、前記瘻孔に足場を植え込むことを含み、前記足場は繊維及び前記繊維の間に位置する間葉系幹細胞を含み、前記繊維はポリグリコール酸及び炭酸トリメチレンのポリマーを含む、方法。
(付記2)
前記哺乳動物がヒトである、付記1に記載の方法。
(付記3)
前記瘻孔が痔瘻である、付記1又は2に記載の方法。
(付記4)
前記瘻孔が難治性の痔瘻である、付記1~3のいずれか一項に記載の方法。
(付記5)
前記瘻孔の最大直径が25mm未満である、付記1~4のいずれか一項に記載の方法。
(付記6)
前記間葉系幹細胞が脂肪由来の間葉系幹細胞である、付記1~5のいずれか一項に記載の方法。
(付記7)
前記ポリグリコール酸が前記繊維の約60から約70パーセントである、付記1~6のいずれか一項に記載の方法。
(付記8)
前記ポリグリコール酸が前記繊維の約67パーセントである、付記1~7のいずれか一項に記載の方法。
(付記9)
前記炭酸トリメチレンが前記繊維の約30から約40パーセントである、付記1~8のいずれか一項に記載の方法。
(付記10)
前記炭酸トリメチレンが前記繊維の約33パーセントである、付記1~9のいずれか一項に記載の方法。
(付記11)
前記足場が血小板由来物材料を含む、付記1~10のいずれか一項に記載の方法。
(付記12)
前記繊維がランダムに配置された繊維である、付記1~11のいずれか一項に記載の方法。
(付記13)
瘻孔を治療するためのインプラントを製造する方法であって、繊維を含む足場をポリプロピレン容器の中で間葉系幹細胞と接触させることを含み、前記繊維はポリグリコール酸及び炭酸トリメチレンのポリマーを含む、方法。
(付記14)
前記間葉系幹細胞が脂肪由来の間葉系幹細胞である、付記13に記載の方法。
(付記15)
前記ポリプロピレン容器の中での前記接触させることが3日間を超えて行われる、付記13~14のいずれか一項に記載の方法。
(付記16)
前記ポリプロピレン容器の中での前記接触させることが約3日間から約10日間行われる、付記13~15のいずれか一項に記載の方法。
(付記17)
前記ポリプロピレン容器の中での前記接触させることが約4日間から約6日間行われる、付記13~16のいずれか一項に記載の方法。
(付記18)
前記ポリグリコール酸が前記繊維の約60から約70パーセントである、付記13~17のいずれか一項に記載の方法。
(付記19)
前記ポリグリコール酸が前記繊維の約67パーセントである、付記13~18のいずれか一項に記載の方法。
(付記20)
前記炭酸トリメチレンが前記繊維の約30から約40パーセントである、付記13~19のいずれか一項に記載の方法。
(付記21)
前記炭酸トリメチレンが前記繊維の約33パーセントである、付記13~20のいずれか一項に記載の方法。
(付記22)
前記容器の中で前記足場を血小板由来物材料と接触させることを含む、付記13~21のいずれか一項に記載の方法。
(付記23)
前記繊維がランダムに配置された繊維である、付記13~22のいずれか一項に記載の方法。
(付記24)
繊維及び前記繊維の間に位置する間葉系幹細胞を含む足場であって、前記繊維はポリグリコール酸及び炭酸トリメチレンのポリマーを含み、前記間葉系幹細胞は、前記繊維の非存在下で培養した同等の間葉系幹細胞よりも多くの線維芽細胞増殖因子2(FGF-2)ポリペプチド、エオタキシンポリペプチド、FMS様チロシンキナーゼ3リガンド(FLT3L)ポリペプチド、増殖調節タンパク質(GRO)ポリペプチド及びインターロイキン10(IL-10)ポリペプチドを発現し、前記間葉系幹細胞は前記同等の間葉系幹細胞よりも少ないフラクタルキンポリペプチドを発現する、足場。
(付記25)
前記間葉系幹細胞が脂肪由来の間葉系幹細胞である、付記24に記載の足場。
(付記26)
前記ポリグリコール酸が前記繊維の約60から約70パーセントである、付記24又は25に記載の足場。
(付記27)
前記ポリグリコール酸が前記繊維の約67パーセントである、付記24~26のいずれか一項に記載の足場。
(付記28)
前記炭酸トリメチレンが前記繊維の約30から約40パーセントである、付記24~27のいずれか一項に記載の足場。
(付記29)
前記炭酸トリメチレンが前記繊維の約33パーセントである、付記24~28のいずれか一項に記載の足場。
(付記30)
前記足場が血小板由来物材料を含む、付記24~29のいずれか一項に記載の足場。
(付記31)
前記繊維がランダムに配置された繊維である、付記24~30のいずれか一項に記載の足場。
(付記32)
前記間葉系幹細胞が前記同等の間葉系幹細胞より多くの単球走化性タンパク質3(MCP-3)ポリペプチドを発現する、付記24~31のいずれか一項に記載の足場。
(付記33)
前記間葉系幹細胞が前記同等の間葉系幹細胞より少ないインターロイキン12(IL-12)p40ポリペプチドを発現する、付記24~32のいずれか一項に記載の足場。
(付記34)
前記間葉系幹細胞が前記同等の間葉系幹細胞より多いインターロイキン12(IL-12)p70ポリペプチドを発現する、付記24~33のいずれか一項に記載の足場。
Claims (12)
- 哺乳動物において創傷を治療する方法に使用するための創傷治療システムであって、前記方法は、前記創傷に前記創傷治療システムを植え込むことを含み、前記創傷治療システムは、ランダムに配置されたポリマー繊維の高度に多孔性の足場、間葉系幹細胞、及びI型、III型、V型及び/又はVI型コラーゲンを含む、間葉系幹細胞により分泌された細胞外マトリックスを含み、間葉系幹細胞及び分泌された細胞外マトリックスは、前記繊維の間に位置し、前記繊維はポリグリコール酸及び炭酸トリメチレンのポリマーを含む、創傷治療システム。
- 前記哺乳動物がヒトである、請求項1に記載の創傷治療システム。
- 前記創傷が瘻孔である、請求項1又は2に記載の創傷治療システム。
- 前記瘻孔が痔瘻である、請求項1~3のいずれか一項に記載の創傷治療システム。
- 前記瘻孔の最大直径が25mm未満である、請求項1~4のいずれか一項に記載の創傷治療システム。
- 前記間葉系幹細胞が脂肪由来の間葉系幹細胞である、請求項1~5のいずれか一項に記載の創傷治療システム。
- 前記ポリグリコール酸が前記繊維の60から70重量パーセントである、請求項1~6のいずれか一項に記載の創傷治療システム。
- 前記ポリグリコール酸が前記繊維の67重量パーセントである、請求項1~7のいずれか一項に記載の創傷治療システム。
- 前記炭酸トリメチレンが前記繊維の30から40重量パーセントである、請求項1~8のいずれか一項に記載の創傷治療システム。
- 前記炭酸トリメチレンが前記繊維の33重量パーセントである、請求項1~9のいずれか一項に記載の創傷治療システム。
- 前記足場が血小板由来物材料を含む、請求項1~10のいずれか一項に記載の創傷治療システム。
- 前記創傷治療システムが、足場の非存在下でインキュベートされた間葉系幹細胞に比べて、線維芽細胞増殖因子2(FGF-2)、エオタキシン、FMS様チロシンキナーゼ3リガンド(FLT3L)、増殖調節タンパク質(GRO)及びインターロイキン10(IL-10)からなる群から選択される1種以上のポリペプチドの増加したポリペプチド発現を示す、請求項1~11のいずれか一項に記載の創傷治療システム。
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