JP7237071B2 - 線虫カエノラブディティスエレガンスを使用して臭気物質を自動で検出する装置および方法 - Google Patents
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Description
- 機械的選択ユニットは、線虫を含むメンテナンス緩衝液を容器に導入するように構成された少なくとも1つの第1の閉鎖可能な入口ノズルと、追加の緩衝液を容器に導入するように構成された少なくとも1つの第2の閉鎖可能な入口ノズルとを備えた収集容器を備え、容器には、第1の開口構成および第2の閉鎖構成をとるように構成された閉鎖可能な出口穴および電動二重格子が設けられ、当該少なくとも1つの第1のノズルおよび当該少なくとも1つの第2のノズルは、容器の基部付近に配置され、基部から始めて容器を満たすように構成され、電動二重格子は、容器の基部と平行に、基部から当該少なくとも1つの第1のノズルおよび当該少なくとも1つの第2のノズルよりも大きい距離に配置され、線虫の卵または幼虫のみがその穴を通過するように構成され;
- 光学的選択ユニットは、中間個体群の線虫を1匹ずつチャネリングするように構成された少なくとも3つの測定マイクロ流体チャネルと、チャネリングされた線虫の長さ測定を実行するように構成された3つの光センサと、少なくとも3つの測定マイクロ流体チャネルを照明するように構成され、個々のチャネリングされた線虫の自己蛍光測定を実行するように構成されたダブルフォトダイオードに関連付けられた照明器と、線虫を測定ユニットまたは廃液タンクへと導くように構成された光学的選択ユニットと、測定ユニット内の線虫の通過を妨害するように構成された遮断弁とを備え;
- 測定ユニットは、線虫をマイクロ流体回路内へと誘導するように構成されたローディングマイクロチャネルに接続されたローディング穴、およびマイクロ流体回路からの線虫を除去するように構成された排出穴を備えた柱状マイクロ流体回路を有するマイクロ流体チップを含む中心層であって、チップは、第1の入口チャネルを介して試験液を受け取り、第2の入力チャネルを介して中性緩衝液を受け取るように構成される、中心層と、マイクロ流体回路を照明する連続光および変調光を放出するように構成された光源を備え、放出された変調光は、線虫の蛍光を刺激するように構成され、光源は線虫の蛍光を受け取るように構成されたフォトダイオードと関連付けられた、第1の端層と、中心層に対して第1の端層の反対側にある光センサを備え、放出された連続光によって照明されたときにマイクロ流体回路の透過光画像を取得し、臭気物質の存在下および非存在下で運動性線虫を分析するように構成された第2の端層とを備え;
装置は、機械的選択ユニット、光学的選択ユニットおよび測定ユニットを制御する制御ユニットをさらに備える。
線虫の初期個体群を含む初期量のメンテナンス緩衝液を、当該少なくとも1つの第1の閉鎖可能な入口ノズルを開いて、マイクロチャネル構造を通る過圧システムを介して機械的選択ユニットの容器に注入するステップであって、当該初期量のメンテナンス緩衝液は、開口構成で二重格子に触れるようなものである、ステップと;
ある時間の経過後、ある量の追加の緩衝液を、当該少なくとも1つの第2の閉鎖可能な入口ノズルを開いて、マイクロチャネルの構造を通る機械的選択ユニットの容器にパルス状に注入するステップであって、最低比重、および開いた二重格子通路の穴のサイズよりも小さな特定のサイズを有する初期個体群のメンバーが二重格子を通過するように開いた二重格子へと初期線虫個体群を押し込む、注入するステップと;
二重格子ならびに少なくとも1つの第1の閉鎖可能な入口ノズルおよび少なくとも1つの第2の閉鎖可能な入口ノズルを閉鎖することにより、収集容器が、大部分が成虫期である線虫の中間個体群を含む中間量のメンテナンス緩衝液を含むステップと;
閉鎖可能な出口穴を開き、線虫を少なくとも3つの測定マイクロ流体チャネルに個別にチャネリングするように、少なくとも3路分岐を有する接続チャネルを通して中間量の液体を光学的選択ユニットに注入するステップと;
個々のチャネリングされた線虫を光学的に選択するステップであって、
- 個々のチャネリングされた線虫の長さlを光学的に測定し、長さlが決定された長さの範囲Δlに含まれるかどうかを確認し、長さlが決定された範囲Δlに含まれない場合、少なくとも3つの測定チャネル出口にいる個々のチャネリングされた線虫を廃液タンクへと破棄する、サブステップと;
- 個々のチャネリングされた線虫の緑色自己蛍光Fgreenおよび赤色自己蛍光Fredを測定し、比率Δ(Fgreen/Fred)が決定された閾値εよりも小さいかどうかを確認し、比率Δ(Fgreen/Fred)が閾値εよりも大きい場合、少なくとも3つの測定チャネル出口にいる個々のチャネリングされた線虫を廃液タンクへと破棄する、サブステップと;
- 長さlが、範囲Δl内にあり、比率Δ(Fgreen/Fred)が決定された閾値εよりも小さい場合、個々のチャネリングされた線虫を、ローディングマイクロチャネルおよびローディング穴に向けて測定ユニットの柱状マイクロ流体回路に送り、測定ユニットに送られた線虫数Nを数えるサブステップと;
を含む光学的に選択するステップと:
Nが所定の値Ntot以上であるかどうかを確認し、数NがNtot以上であれば、遮断弁を作動させることによって測定ユニット内の線虫の通過を遮断するステップと;
柱状マイクロ流体回路内のN匹の線虫の臭気物質に対する反応を、
- 柱状ピラーマイクロ流体回路の領域を、第1の端層の光源から放出した光で照明するサブステップと;
- 光源に関連付けられたフォトダイオードを介して柱状マイクロ流体回路の領域全体で積分した第1の自己蛍光信号を測定し、蛍光バックグラウンド値を取得し、柱状マイクロ流体回路の領域の光センサ、sCMOSまたはCCDを介して透過光画像を取得し、マイクロ流体回路内の線虫の数および運動性を確認するサブステップと;
- 少なくとも1種の臭気物質を含み得る試験液を、第3のタンクからチップに注入するサブステップと;
- 中性緩衝液を第4のタンクからチップ内に注入し、試験液を出口タンクに排出するサブステップと;
- 第1の端層の光源に関連付けられたフォトダイオードを介して、第2の積分蛍光信号を測定するサブステップと;
- 立上がり時間τriseおよび立下がり時間τfall等、第2の蛍光信号のパラメータを計算するサブステップと;
- τriseが第1の時間範囲T1に含まれているか(τrise∈T1)かつτfallが第2の時間範囲T2に含まれているか(τfall∈T2)を確認し、T1およびT2は、臭気物質の存在下で線虫によって感知される刺激の不足によって活性化するニューロン中のカルシウム濃度の再構成の標準時間範囲であり、
- マイクロ流体回路の領域のsCMOSまたはCCD光センサを通じて透過光画像を取得するサブステップと;
- 取得した画像を分析して、走化性に起因する運動性があるかどうかを確認するために、線虫の運動性を決定するサブステップであって、
- 走化性に起因する運動性がない場合、本方法は、試験液に臭気物質が存在しないことを認識するが、
- 走化性に起因する運動性がある場合、本方法は、試験液に臭気物質が存在することを認識する、サブステップと;
- 中性緩衝液をチップから出口タンク内に排出するサブステップと
を通して分析するステップと
を含む。
4は、制御ユニットによって制御される。他の実施形態では、蛍光の第2の測定は、第1の長さ測定の後に段階的に実行される。制御ユニットによって制御される第2の電磁弁アセンブリ21は、3つの測定マイクロ流体チャネルの出口に配置され、チャネリングされた線虫を、測定ユニット300または廃液タンク16に向けて、所望により約100μm以上の直径の光学的選択ユニット200を測定ユニット300に接続するローディングマイクロチャネルへと導く。追加の計数光センサは、線虫ローディングマイクロチャネルに対応して配置され、制御ユニットにより制御される。装置1000は、所定数、所望により20~50匹の線虫の通過後、測定ユニット300内の線虫の通過を遮断する遮断弁を備える。遮断弁によって遮断された中間個体群の線虫は、測定ユニット300によって行われる次の測定を待ちながらユニット200とユニット300の間でローディングチャネル内に数分程度残るか、または第2の電磁弁アセンブリ21を介して廃液タンク16に送られる。臭気物質刺激への反応の測定ユニット300の概略図を図4に示す。測定ユニット300は、走化性およびニューロン活動、すなわち運動性および蛍光の測定を通じて臭気物質刺激に対する線虫の反応を検出するように構成される。測定ユニット300は、少なくとも3層デバイスを備える。中心層は、柱状マイクロ流体回路51が作製されているマイクロ流体チップ50を含み、そこには最終個体群の線虫が導入される。図5は、マイクロ流体チップ50の実施形態を示す。マイクロ流体チップ50は、線虫をマイクロ流体回路51に導入するように構成された、ローディングマイクロチャネルに接続されたローディング穴52を柱状マイクロ流体回路51の第1の縁部付近に備える。マイクロ流体チップ50は、第1の入口チャネルを介して第3の貯蔵タンク17から試験液を受け取るように構成された第1の入口穴53と、第2の入口チャネルを介して第4の貯蔵タンク18から中性緩衝液を受け取るように構成された第2の入口穴54とを第1の縁部付近にさらに備える。試験液は、臭気物質の存在の可能性を検出する必要がある液体であり、緩衝液は、例えばM9、S basal等の臭気物質を含まない液体である。マイクロ流体チップ50は、柱状マイクロ流体回路の第1の縁部の反対側の第2の縁部の付近に、液体を回路51から出すように構成された、出口チャネルを介して廃液タンク16に接続された排出穴55を備える。さらなる実施形態では、出口チャネルは、廃液タンク16とは異なる出口タンクに接続される。本発明による装置の好ましい実施形態では、マイクロ流体チップは、柱が70μm高、直径が200μm、および間隔が300μmの20mm×20mmまでのサイズを有し、液体入口チャネルは約100μmの直径を有する。本発明のさらなる実施形態は、異なるサイズおよび間隔を有してよい。第1の端層は、中心層のマイクロ流体チップを照明する連続光源および変調光源を含み、第2の端層(中心層に対して第1の端層の反対側)は、第1の端層の光源からの照明時、すなわち走化性を測定するように構成された透過光イメージングの測定時に、マイクロ流体チップの透過光画像を取得するsCMOSまたはCCD等の光センサを含む。特に、走化性測定を得るために、試験液がワームローディングマイクロチャネルに注入された後、後続の画像を比較することによって得られたシェード画像が分析される。装置の好ましい実施形態では、第2の端層の光センサと層のチップとの間の距離は、約300μmである。装置の好ましい実施形態では、第1の端層の光源は、ダブルアレイで配置されたLEDであり、透過画像、すなわち透過光イメージングの測定を取得するための550nmでの連続光と、利用される特定のトランスジェニック線虫により発現される緑色蛍光タンパク質GFPの蛍光を刺激するための、所望により1kHzを超えない変調波長数での、470nmの変調光とを放出するように構成される。装置の他の実施形態では、連続光源は、白色光を放出するランプまたはLEDであってよい。反応測定の第3のユニット300は、変調光源に関連付けられた適切な収集光学系を備えたフォトダイオードをさらに備え、その検知面には、利用されるトランスジェニック系統の特定のGFPの発光ピークに対応する約525/50nmの干渉フィルタが配置される。実際、適切な遺伝的改変に続いて、利用される線虫は受容体ニューロンでカルシウムと結合する特定のタンパク質を発現する。図6に示すフローチャートを参照して、本発明による線虫の使用に基づいて試験液中の臭気物質を自動的に検出する方法の好ましい実施形態のステップを以下で説明する。このような方法は、上記装置1000を使用することによって実行される。最初のステップ600では、ポンプによって作動される過圧システムを介して、初期線虫個体群を含む初期量のメンテナンス緩衝液は第1の貯蔵タンク5から排出され、機械的選択ユニット100に注入されて初期個体群から成虫線虫を選択する。初期線虫個体群は、入口マイクロチャネル構造11を通して、開いている第1の閉鎖可能な入口ノズルを備えた収集容器12に注入される。初期量は、収集容器12に収容されたときに開いた二重格子14に接触する液体量に相当する。ステップ610にて、数分程度、所望により1分に等しい所定の時間の後、線虫を含まない追加緩衝液の量は、ポンプにより作動される過圧システムを介して第2の貯蔵タンク10からパルス状に排出され、開いている第2の閉鎖可能な入口ノズルを備えた入口マイクロチャネル構造11を介して収集容器12に注入される。このようにして、追加の緩衝液は、容器12に含まれる初期量の液体を開いた二重格子14を通るように押し、その結果、線虫の卵および幼虫は、二重格子14を通過する。本発明の装置の好ましい実施形態を用いた本方法の実行において、パルス数は4であり、追加の緩衝液の量の体積流量は、約100μL/秒に等しい。他の実施形態では、追加の緩衝液のパルス数および体積流量は、機械的選択ユニット100のサイズ、特に収集容器12のサイズに応じて変化し得る。ステップ611では、二重格子14は、パルスの終わりに、二重格子14を通過したばかりのメンバーの落下を回避するために閉鎖され、収集容器12の第1および第2の入口ノズルが閉鎖される。したがって、収集容器12は、大部分が成虫期である中間線虫個体群を含む中間量のメンテナンス液を含む。次のステップ612では、第1の電磁弁アセンブリ20が閉鎖可能な出口穴15を開き、中間量の液体が、3路分岐を有する接続チャネルを介してポンプで作動される過圧システムによって光学的選択ユニット200に注入され、中間個体群の線虫は、3つの測定マイクロ流体チャネルに1匹ずつチャネリングされる。次のステップ620では、成虫期の線虫および若い成虫期の線虫は、産卵成虫期の線虫から光学的に選択される。このような選択は、中間個体群に含まれる個々の線虫を光学的に分析することによって行われる。線虫の光学的選択のステップ620は、2回の光学的測定621および623を含み、これらは同時にまたは段階的に実行されてよい。サブステップ621において、前述のように、個々のチャネルリングされた線虫の長さlが光学的に測定され、サブステップ622において、そのような長さlが、決定された長さの範囲Δl内に含まれるかどうかが確認される。長さlが決定された範囲Δlに含まれない場合、フローは「NO」の分岐を通って線虫を廃棄するステップ630に続き、それにより、光学的選択ユニット200の測定チャネルの出口で、第2の電磁弁アセンブリ21は、個々のチャネリングされた線虫を廃棄タンク16へと導く。長さlが所定の範囲Δl内に含まれる場合、フローは「YES」の分岐を通って、前述のように個々のチャネリングされた線虫の緑色自己蛍光Fgreenおよび赤色自己蛍光Fredが測定されるサブステップ623に続き、サブステップ624では、緑色自己蛍光Fgreenと赤色自己蛍光Fredとの比率Δ(Fgreen/Fred)が所望により0.5に等しい所定の閾値εよりも小さいかどうかを確認する。比率Δ(Fgreen/Fred)が閾値εより大きい場合、フローは「NO」の分岐を通って廃棄するステップ630に続く。比率Δ(Fgreen/Fred)が閾値ε以下である場合、フローは「YES」の分岐を通って、個々のチャネリングされた線虫を測定ユニット300に送る後続のステップ640へと続き、それにより、光学的選択ユニット200の測定チャネルの出口で、第2の電磁弁アセンブリ21は、個々のチャネリングされた線虫を測定ユニット300のマイクロ流体チップ50に向かうローディングマイクロチャネル内へと導く。ステップ640では、測定ユニット300に送られた個々の線虫は、線虫ローディングマイクロチャネルに対応して配置された計数光センサによってさらに計数され、送られた線虫の数Nを得る。後続のステップ650では、ステップ640で測定された、測定ユニット300に送られた線虫の数Nが、所望により20~50の範囲の決定された値Ntot以上であるかどうかを確認する。測定ユニット300に送られた線虫の数NがNtot未満である場合、フローは続いて「NO」の分岐を介してステップ640に戻る。測定ユニット300に送られた線虫の数NがNtot以上である場合、フローは「YES」の分岐を介して、遮断弁によって測定ユニット300内の線虫の通過を遮断するステップ660に続き、反応測定ユニット300内の臭気物質に対するNtot匹の線虫の反応を分析する後続のステップ670へと続く。臭気物質に対する線虫の反応の分析670は、以下に説明するサブステップを含む。まず、サブステップ671では、柱状マイクロ流体回路51の領域は第1の端層の光源によって放出された光で照明され、サブステップ672では、柱状マイクロ流体回路51の領域全体で積分された第1の自己蛍光信号が後続の蛍光測定の分析に使用するためのバックグラウンド値を取得するために、光源に関連付けられたフォトダイオードによって測定される。サブステップ672では、個々の線虫の位置は、透過光イメージングの測定によりさらに記憶され、測定の質を保証するためにそれらの数および運動性が確認される。サブステップ673では、試験液が第3のタンク17からマイクロ流体チップ50に注入され、後続のサブステップ674では、中性緩衝液が第4のタンク18からマイクロ流体チップ50に注入される。中性緩衝液を柱状マイクロ流体回路51に注入すると、試験液がチップから廃液タンク16内に排出され、この中性緩衝液によって置き換えられる。サブステップ675では、第2の積分蛍光信号、すなわち線虫のニューロン信号が、例えば測定感度を高めるロックイン技法等の技法を用いて、変調光源と同期した光源に関連付けられたフォトダイオードによって検出される。サブステップ676では、立上がり時間τriseおよび立下がり時間τfall等のニューロン信号のパラメータが計算され、サブステップ677では、積分された第2の蛍光信号の時間プロットが、第1の時間範囲T1に含まれる立上がり時間および第2の時間範囲T2に含まれる立下がり時間を持つパルスに対応するかどうかを確認する。このような第1の時間範囲T1および第2の時間範囲T2は、線虫によって以前に感知された刺激の欠如によって活性化されたニューロンにおけるカルシウム濃度の再構成の標準的な時間範囲であり、それらの値は、使用される特定のカルシウムインジケータに依存し、それぞれ数百ミリ秒および数百秒程度である。
Claims (19)
- 線虫の使用に基づく臭気物質の検出を自動的に行う装置(1000)であって、初期線虫個体群から成虫期の線虫を選択するように構成された、線中の中間個体群を得る機械的選択ユニット(100)と、前記中間個体群から成虫期の線虫の最終個体群を選択し、産卵成虫期の線虫から若い成虫期の線虫を選択して、臭気物質の刺激への前記最終個体群の線虫の反応を検出するように構成された測定ユニット(300)に送るように構成された線虫を用いた光学的選択ユニット(200)とを備え、前記機械的選択ユニット(100)は、少なくとも3路分岐を有する接続チャネルによって前記光学的選択ユニット(200)に接続され、前記光学的選択ユニット(200)は、ローディングマイクロチャネルによって前記測定ユニット(300)に接続され、
- 前記機械的選択ユニット(100)は、線虫を含むメンテナンス緩衝液を容器(12)に導入するように構成された少なくとも1つの第1の閉鎖可能な入口ノズルと、追加の緩衝液を前記容器(12)に導入するように構成された少なくとも1つの第2の閉鎖可能な入口ノズルとを備えた収集容器(12)を備え、前記容器(12)には、第1の開口構成および第2の閉鎖構成をとるように構成された閉鎖可能な出口穴(15)および電動の二重格子(14)が設けられ、前記少なくとも1つの第1のノズルおよび前記少なくとも1つの第2のノズルは、前記容器(12)の基部付近に配置され、前記基部から始めて前記メンテナンス緩衝液を前記容器(12)に導入するように構成され、前記電動の二重格子(14)は、前記容器の前記基部と平行に、前記基部から前記少なくとも1つの第1のノズルおよび前記少なくとも1つの第2のノズルよりも長い距離に配置され、線虫の卵または幼虫のみがその穴を通過するように構成され;
- 前記光学的選択ユニット(200)は、前記中間個体群の線虫を1匹ずつチャネリングするように構成された少なくとも3つの測定マイクロ流体チャネルと、前記チャネリングされた線虫の長さ測定を実行するように構成された3つの光センサ(22、23、24)と、前記少なくとも3つの測定マイクロ流体チャネルを照明するように構成され、前記個々のチャネリングされた線虫の自己蛍光測定を実行するように構成されたダブルフォトダイオード(26)に関連付けられた照明器(25)と、線虫を前記測定ユニット(300)または廃液タンク(16)へと導くように構成された前記光学的選択ユニット(200)と、前記測定ユニット(300)内の線虫の通過を妨害するように構成された遮断弁とを備え、;
- 前記測定ユニット(300)は、線虫をマイクロ流体回路(51)内へと誘導するように構成されたローディングマイクロチャネルに接続されたローディング穴、および前記マイクロ流体回路(51)からの線虫を除去するように構成された排出穴を備えた柱状の前記マイクロ流体回路(51)を有するマイクロ流体のチップ(50)を含む中心層であって、前記チップ(50)は、第1の入口チャネルを介して試験液を受け取り、第2の入力チャネルを介して中性緩衝液を受け取るように構成される、中心層と、前記マイクロ流体回路(51)を照明する連続光および変調光を放出するように構成された光源を備え、前記放出された変調光は、線虫の蛍光を刺激するように構成され、前記光源は線虫の蛍光を受け取るように構成されたフォトダイオードと関連付けられた、第1の端層と、前記中心層に対して前記第1の端層の反対側にある光センサを備え、前記放出された連続光によって照明されたときに前記マイクロ流体回路(51)の透過光画像を取得し、臭気物質の存在下および非存在下で運動性線虫を分析するように構成された第2の端層とを備え、
前記装置(1000)は、前記機械的選択ユニット(100)、前記光学的選択ユニット(200)および前記測定ユニット(300)を制御する制御ユニットをさらに備える、装置。 - 前記少なくとも3路の前記接続チャネルおよび前記ローディングマイクロチャネルは、100μm以上のセクションを有する、請求項1に記載の装置(1000)。
- 前記二重格子(14)の前記穴は、50μm~500μmの範囲のサイズを有する、請求項1または2に記載の装置(1000)。
- 前記少なくとも3つの測定マイクロ流体チャネルのそれぞれについて、前記3つの光センサ(22、23、24)は、前記チャネルの長手方向に沿って配置され、第1の光センサ(22)、第2の光センサ(23)および第3の光センサ(24)のチャネルでの直角投影がそれぞれ第1の目標位置、第2の目標位置および第3の目標位置を特定する距離で互いから平行移動されている、請求項1から3のいずれか一項に記載の装置(1000)。
- 前記第2の光センサ(23)および前記第3の光センサ(24)は、前記第1の光センサ(23)からそれぞれ900μmから1000μm平行移動されている、請求項4に記載の装置(1000)。
- 前記少なくとも3つの測定マイクロ流体チャネルのそれぞれに関して、各光センサ(22、23、24)は第1の高さに配置され、前記照明器(25)は前記第1の高さと測定マイクロ流体チャネルからの方向が反対の第2の高さに配置される、請求項4または5に記載の装置(1000)。
- 前記照明器(25)は、前記3つの目標位置の中心に配置される、請求項6に記載の装置(1000)。
- 前記照明器(25)は、前記第1の目標位置および前記第2の目標位置の中心に配置される、請求項6に記載の装置(1000)。
- 前記第1の端層の前記光源は、連続光および変調光を放出するように二重アレイで配置されたLEDである、請求項1から8のいずれか一項に記載の装置(1000)。
- 前記第1の端層の前記光源は、それぞれ550nmおよび470nmで連続光および変調光を放出する、請求項9に記載の装置(1000)。
- 前記第1の端層の前記光源は、変調周波数が1KHzを超えずに、連続光および変調光を放出する、請求項9または10に記載の装置(1000)。
- 請求項1に記載の装置を使用した線虫の使用に基づいて臭気物質を自動的に検出する方法であって、前記方法は、
線虫の初期個体群を含む初期量のメンテナンス緩衝液を、前記少なくとも1つの第1の閉鎖可能な入口ノズルを開いて、マイクロチャネル構造(11)を通る過圧システムを介して前記機械的選択ユニット(100)の前記容器(12)に注入する(600)ステップであって、前記初期量のメンテナンス緩衝液は、開口構成で前記二重格子(14)に触れる、ステップと;
ある時間の経過後、ある量の追加の緩衝液を、前記少なくとも1つの第2の閉鎖可能な入口ノズルを開いて、マイクロチャネルの前記構造(11)を通る前記機械的選択ユニット(100)の前記容器(12)にパルス状に注入する(610)ステップであって、前記開いた二重格子(14)の穴のサイズよりも小さな特定のサイズを有する前記初期個体群のメンバーが前記二重格子を通過するように前記開いた二重格子(14)へと前記初期線虫個体群を押し込むステップと、
前記二重格子(14)ならびに前記少なくとも1つの第1の閉鎖可能な入口ノズルおよび前記少なくとも1つの第2の閉鎖可能な入口ノズルを閉鎖する(611)ことにより、前記収集容器(12)が、大部分が成虫期である線虫の中間個体群を含む中間量のメンテナンス緩衝液を含む、ステップと;
前記閉鎖可能な出口穴(15)を開き(612)、線虫を前記少なくとも3つの測定マイクロ流体チャネルに個別にチャネリングするように、少なくとも3路分岐を有する前記接続チャネルを通して前記中間量の液体を前記光学的選択ユニット(200)に注入するステップと、
個々のチャネリングされた線虫を光学的に選択する(620)ステップであって、
- 個々のチャネリングされた線虫の長さlを光学的に測定し(621)、前記長さlが決定された長さの範囲Δlに含まれるかどうかを確認し(622)、前記長さlが前記決定された範囲Δlに含まれない場合、前記少なくとも3つの測定チャネル出口にいる前記個々のチャネリングされた線虫を前記廃液タンク(16)へと破棄する(630)、サブステップと;
- 前記個々のチャネリングされた線虫の緑色自己蛍光Fgreenおよび赤色自己蛍光Fredを測定し(623)、比率Δ(Fgreen/Fred)が決定された閾値εよりも小さいかどうかを確認し(624)、前記比率Δ(Fgreen/Fred)が前記閾値εよりも大きい場合、前記少なくとも3つの測定チャネル出口にいる前記個々のチャネリングされた線虫を前記廃液タンク(16)へと破棄する(630)、サブステップと;
- 前記長さlが、前記範囲Δl内にあり、前記比率Δ(Fgreen/F red)が前記決定された閾値εよりも小さい場合、前記個々のチャネリングされた線虫を、前記ローディングマイクロチャネルおよび前記ローディング穴に向けて前記測定ユニット(300)の前記柱状のマイクロ流体回路(51)に送り(640)、前記測定ユニット(300)に送られた線虫数Nを数えるサブステップと;
を含む光学的に選択するステップ(620)と:
Nが所定の値Ntot以上であるかどうかを確認し(650)、NがNtot以上であれば、前記遮断弁を作動させることによって前記測定ユニット(300)内の線虫の通過を遮断する(660)ステップと;
前記柱状のマイクロ流体回路(51)内のN匹の線虫の臭気物質に対する反応を分析するステップ(670)であって、
- 前記柱状のマイクロ流体回路(51)の領域を、前記第1の端層の前記光源によって放出した光で照明する(671)サブステップと;
- 前記光源に関連付けられた前記フォトダイオードを介して前記柱状のマイクロ流体回路(51)の前記領域全体で積分した第1の自己蛍光信号を測定し(672)、蛍光バックグラウンド値を取得し、前記柱状のマイクロ流体回路(51)の前記領域の光センサ、sCMOSまたはCCDを介して透過光画像を取得し、前記マイクロ流体回路(51)内の線虫の数および運動性を確認するサブステップと;
- 少なくとも1種の臭気物質を含み得る試験液を、第3のタンク(17)から前記チップ(50)に注入する(673)サブステップと;
- 中性緩衝液を第4のタンク(18)から前記チップ(50)内に注入し(674)、前記試験液を出口タンクに排出するサブステップと;
- 前記第1の端層の前記光源に関連付けられた前記フォトダイオードを介して、第2の積分蛍光信号を測定する(675)サブステップと;
- 立上がり時間τriseおよび立下がり時間τfallの、前記第2の積分蛍光信号のパラメータを計算する(676)サブステップと;
- τriseが第1の時間範囲T1に含まれているか(τrise∈T1)、かつτfallが第2の時間範囲T2に含まれているか(τfall∈T2)を確認し(677)、T1およびT2は、臭気物質の存在下で線虫によって感知される刺激の不足によって活性化するニューロン中のカルシウム濃度の再構成の標準時間範囲であり、
- 前記マイクロ流体回路(51)の前記領域のsCMOSまたはCCD光センサを通じて透過光画像を取得する(678)サブステップと;
- 前記取得した画像を分析して(679)、走化性に起因する運動性があるかどうかを確認する(680)ために、線虫の運動性を決定するサブステップであって、
- 走化性に起因する運動性がない場合、前記方法は、前記試験液に臭気物質が存在しないことを認識するが、
- 走化性に起因する運動性がある場合、前記方法は、前記試験液に臭気物質が存在することを認識する、サブステップと;
- 前記中性緩衝液を前記チップ(50)から前記出口タンク内に排出する(690)サブステップと
を通して行うステップと
を含む、方法。 - 前記N匹の線虫の反応を分析する前記ステップ(670)は、m回実行され(m=1,2,…である)、その後前記方法が終了する、請求項12に記載の方法。
- 前記N匹の線虫の反応を分析する前記ステップ(670)は、m回実行され(m=2である)、その後前記方法が終了する、請求項12に記載の方法。
- 前記長さの範囲Δ1は、第2の光センサ(23)から第1の光センサ(22)までの距離と第3の光センサ(24)から前記第1の光センサ(22)までの距離との間の範囲である、請求項12から14のいずれか一項に記載の方法。
- 前記長さの範囲Δ1は、900μm~1000μmの範囲である、請求項15に記載の方法。
- 前記閾値εは0.5に等しい、請求項12から16のいずれか一項に記載の方法。
- Ntotは20~50の範囲である、請求項12から17のいずれか一項に記載の方法。
- 前記取得された画像を分析する前記ステップ(679)は、後続の透過画像を比較することによって、バイナリ画像を生成する弁別閾手順を通して実行され、それにより、画素は、強度が決定された閾値を超えているか否かに応じてバックグラウンドまたは線虫に関連付けられる、請求項12から18のいずれか一項に記載の方法。
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US11932080B2 (en) | 2020-08-20 | 2024-03-19 | Denso International America, Inc. | Diagnostic and recirculation control systems and methods |
US11760170B2 (en) | 2020-08-20 | 2023-09-19 | Denso International America, Inc. | Olfaction sensor preservation systems and methods |
US11813926B2 (en) | 2020-08-20 | 2023-11-14 | Denso International America, Inc. | Binding agent and olfaction sensor |
US11885786B1 (en) * | 2021-01-29 | 2024-01-30 | Sigma Scientific LLC | Insect olfactometer |
US20240102988A1 (en) | 2021-02-03 | 2024-03-28 | Disruptive Technological Advances In Life Science S.R.L.-Societa’ Benefit, In Form | Methods for cancer detection |
CN113884012A (zh) * | 2021-09-27 | 2022-01-04 | 海南大学 | 一种在杀线虫剂活性测定中鉴别植物病原线虫幼虫生存状态的方法 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20110154510A1 (en) | 2009-11-05 | 2011-06-23 | Pak Stephen C | Automated high-content live animal drug screening using c. elegans |
US20120061240A1 (en) | 2010-09-15 | 2012-03-15 | Selvaganapathy Ravi Ponnambalam | Electrotaxis methods and devices |
CN102669058A (zh) | 2011-03-18 | 2012-09-19 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 基于微阀的秀丽隐杆线虫长期培养及双检测微流控芯片 |
WO2015088039A1 (ja) | 2013-12-10 | 2015-06-18 | 国立大学法人九州大学 | 線虫の嗅覚を用いた癌検出法 |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20040073961A1 (en) * | 2002-08-09 | 2004-04-15 | Andres Pedro J. | Nematode screening assay |
AU2003291635A1 (en) * | 2002-10-09 | 2004-05-04 | Buck Institute | Automated method for high throughput screening of nematodes |
WO2009021232A2 (en) * | 2007-08-09 | 2009-02-12 | Massachusetts Institute Of Technology | High-throughput, whole-animal screening system |
EP2775302A1 (en) * | 2013-03-08 | 2014-09-10 | Assistance Publique - Hôpitaux de Paris | Compound-carrier systems for assays in nematodes |
IT201700119113A1 (it) * | 2017-10-20 | 2019-04-20 | Crestoptics S P A | Apparato e metodo per il rilevamento automatizzato di sostanze odoranti in soluzione tramite impiego di nematodi Chaenorabditis Elegans |
-
2017
- 2017-10-20 IT IT102017000119113A patent/IT201700119113A1/it unknown
-
2018
- 2018-10-19 US US16/756,669 patent/US11513106B2/en active Active
- 2018-10-19 EP EP18803477.1A patent/EP3698133B1/en active Active
- 2018-10-19 ES ES18803477T patent/ES2907786T3/es active Active
- 2018-10-19 WO PCT/IB2018/058127 patent/WO2019077558A1/en unknown
- 2018-10-19 CN CN201880068024.7A patent/CN111247426B/zh active Active
- 2018-10-19 JP JP2020521434A patent/JP7237071B2/ja active Active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20110154510A1 (en) | 2009-11-05 | 2011-06-23 | Pak Stephen C | Automated high-content live animal drug screening using c. elegans |
US20120061240A1 (en) | 2010-09-15 | 2012-03-15 | Selvaganapathy Ravi Ponnambalam | Electrotaxis methods and devices |
CN102669058A (zh) | 2011-03-18 | 2012-09-19 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 基于微阀的秀丽隐杆线虫长期培养及双检测微流控芯片 |
WO2015088039A1 (ja) | 2013-12-10 | 2015-06-18 | 国立大学法人九州大学 | 線虫の嗅覚を用いた癌検出法 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
AI, X. et al.,A high-throughput device for size based separation of C. elegans developmental stages,Lab on a Chip,2014年05月21日,Vol.14, No.10,pp.1746-1752 |
BAKHTINA, N. A. et al.,Microfluidic laboratories for C. elegans enhance fundamental studies in biology,RSC Advances,2014年,Vol.4,pp.4691-4709 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
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