JP7227374B2 - 対合二分免疫受容体ポリヌクレオチドのハイスループットクローニングおよびその適用 - Google Patents
対合二分免疫受容体ポリヌクレオチドのハイスループットクローニングおよびその適用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7227374B2 JP7227374B2 JP2021532265A JP2021532265A JP7227374B2 JP 7227374 B2 JP7227374 B2 JP 7227374B2 JP 2021532265 A JP2021532265 A JP 2021532265A JP 2021532265 A JP2021532265 A JP 2021532265A JP 7227374 B2 JP7227374 B2 JP 7227374B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- tcrs
- tcr
- cell
- target
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 title claims description 279
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 title claims description 279
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 title claims description 279
- 102000027596 immune receptors Human genes 0.000 title description 41
- 108091008915 immune receptors Proteins 0.000 title description 40
- 238000010367 cloning Methods 0.000 title description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 554
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 claims description 512
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 claims description 512
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 331
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 173
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 123
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 122
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 119
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 119
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 112
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 111
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 111
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 claims description 54
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 claims description 54
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 claims description 50
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 43
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 27
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 20
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 claims description 19
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 claims description 14
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 13
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 13
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 claims description 9
- 239000002458 cell surface marker Substances 0.000 claims description 8
- 210000003171 tumor-infiltrating lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 7
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 4
- 239000006166 lysate Substances 0.000 claims description 4
- 229910052720 vanadium Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 230000009460 calcium influx Effects 0.000 claims 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 160
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 140
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 135
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 132
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 118
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 118
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 109
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 99
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 99
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 98
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 79
- -1 OX-40 Proteins 0.000 description 73
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 69
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 65
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 63
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 63
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 55
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 49
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 47
- 108091008875 B cell receptors Proteins 0.000 description 43
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 41
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 40
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 39
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 39
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 38
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 37
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 37
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 36
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 34
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 31
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 29
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 27
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 27
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 27
- 101100112922 Candida albicans CDR3 gene Proteins 0.000 description 26
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 25
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 25
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 24
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 24
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 24
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 24
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 23
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 23
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 22
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 22
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 22
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 21
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 20
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 20
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 19
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 19
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 19
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 18
- ROOXNKNUYICQNP-UHFFFAOYSA-N ammonium persulfate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[O-]S(=O)(=O)OOS([O-])(=O)=O ROOXNKNUYICQNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 238000001879 gelation Methods 0.000 description 17
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 17
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 16
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 16
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 15
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 15
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 15
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 15
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 15
- 150000004804 polysaccharides Chemical class 0.000 description 15
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 15
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 14
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 14
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 14
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 14
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 14
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 14
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 14
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 14
- 102100035360 Cerebellar degeneration-related antigen 1 Human genes 0.000 description 13
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 13
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 13
- 239000000463 material Substances 0.000 description 13
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 description 13
- 210000001266 CD8-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 12
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 12
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 12
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 12
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 12
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 12
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 12
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 12
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 12
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 12
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 11
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 11
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 11
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 11
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 11
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical group NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N N,N,N',N'-tetramethylethylenediamine Chemical compound CN(C)CCN(C)C KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 210000000662 T-lymphocyte subset Anatomy 0.000 description 10
- 241000703392 Tribec virus Species 0.000 description 10
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 10
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 10
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 10
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 10
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 10
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 9
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 9
- 229910001870 ammonium persulfate Inorganic materials 0.000 description 9
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 9
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 9
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 8
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 8
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 8
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 8
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 description 8
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 7
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 7
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 7
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 7
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 7
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 7
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 7
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 7
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 7
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 7
- ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N n,n'-methylenebisacrylamide Chemical compound C=CC(=O)NCNC(=O)C=C ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000000379 polymerizing effect Effects 0.000 description 7
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 7
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 6
- 239000004971 Cross linker Substances 0.000 description 6
- 101800001148 Delta-peptide Proteins 0.000 description 6
- 102100028972 HLA class I histocompatibility antigen, A alpha chain Human genes 0.000 description 6
- 108010075704 HLA-A Antigens Proteins 0.000 description 6
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 6
- 239000002585 base Substances 0.000 description 6
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 6
- 210000005220 cytoplasmic tail Anatomy 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 6
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 6
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 6
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 6
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 6
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 6
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 6
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 6
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 6
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 6
- 230000004044 response Effects 0.000 description 6
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 6
- 102100034458 Hepatitis A virus cellular receptor 2 Human genes 0.000 description 5
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 description 5
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 5
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 description 5
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 description 5
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 5
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 5
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 5
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 5
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 5
- 229920003213 poly(N-isopropyl acrylamide) Polymers 0.000 description 5
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 5
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 5
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 5
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 5
- 239000008279 sol Substances 0.000 description 5
- 229920000428 triblock copolymer Polymers 0.000 description 5
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102100025137 Early activation antigen CD69 Human genes 0.000 description 4
- 102100029722 Ectonucleoside triphosphate diphosphohydrolase 1 Human genes 0.000 description 4
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010074032 HLA-A2 Antigen Proteins 0.000 description 4
- 102000025850 HLA-A2 Antigen Human genes 0.000 description 4
- 101710083479 Hepatitis A virus cellular receptor 2 homolog Proteins 0.000 description 4
- 101000934374 Homo sapiens Early activation antigen CD69 Proteins 0.000 description 4
- 101001012447 Homo sapiens Ectonucleoside triphosphate diphosphohydrolase 1 Proteins 0.000 description 4
- 101001046687 Homo sapiens Integrin alpha-E Proteins 0.000 description 4
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 4
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 4
- 101000795989 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 10 Proteins 0.000 description 4
- 101000772136 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 16 Proteins 0.000 description 4
- 101000772143 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 17 Proteins 0.000 description 4
- 101000772144 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 18 Proteins 0.000 description 4
- 101000772141 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 19 Proteins 0.000 description 4
- 101000772111 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 2 Proteins 0.000 description 4
- 101000772109 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 20 Proteins 0.000 description 4
- 101000772110 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 21 Proteins 0.000 description 4
- 101000658386 Homo sapiens T cell receptor beta variable 14 Proteins 0.000 description 4
- 101000658391 Homo sapiens T cell receptor beta variable 16 Proteins 0.000 description 4
- 101000658398 Homo sapiens T cell receptor beta variable 19 Proteins 0.000 description 4
- 101000658410 Homo sapiens T cell receptor beta variable 2 Proteins 0.000 description 4
- 101000658408 Homo sapiens T cell receptor beta variable 30 Proteins 0.000 description 4
- 101000844040 Homo sapiens T cell receptor beta variable 9 Proteins 0.000 description 4
- 101000801234 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 18 Proteins 0.000 description 4
- 102100022341 Integrin alpha-E Human genes 0.000 description 4
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 4
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 4
- 102100027268 Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Human genes 0.000 description 4
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 4
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 4
- 102000003816 Interleukin-13 Human genes 0.000 description 4
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 description 4
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 4
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 4
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 4
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 4
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 4
- 102100031333 T cell receptor alpha variable 10 Human genes 0.000 description 4
- 102100029302 T cell receptor alpha variable 16 Human genes 0.000 description 4
- 102100029306 T cell receptor alpha variable 17 Human genes 0.000 description 4
- 102100029300 T cell receptor alpha variable 18 Human genes 0.000 description 4
- 102100029307 T cell receptor alpha variable 19 Human genes 0.000 description 4
- 102100029486 T cell receptor alpha variable 2 Human genes 0.000 description 4
- 102100029488 T cell receptor alpha variable 20 Human genes 0.000 description 4
- 102100029487 T cell receptor alpha variable 21 Human genes 0.000 description 4
- 102100034885 T cell receptor beta variable 14 Human genes 0.000 description 4
- 102100034881 T cell receptor beta variable 16 Human genes 0.000 description 4
- 102100034884 T cell receptor beta variable 19 Human genes 0.000 description 4
- 102100034891 T cell receptor beta variable 2 Human genes 0.000 description 4
- 102100034890 T cell receptor beta variable 30 Human genes 0.000 description 4
- 102100032166 T cell receptor beta variable 9 Human genes 0.000 description 4
- 229940126547 T-cell immunoglobulin mucin-3 Drugs 0.000 description 4
- 102100034922 T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Human genes 0.000 description 4
- 102100033728 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 18 Human genes 0.000 description 4
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101150117115 V gene Proteins 0.000 description 4
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 4
- 239000002199 base oil Substances 0.000 description 4
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 description 4
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 4
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 4
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 4
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 4
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 4
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 4
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 4
- FQPSGWSUVKBHSU-UHFFFAOYSA-N methacrylamide Chemical compound CC(=C)C(N)=O FQPSGWSUVKBHSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000000581 natural killer T-cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 4
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 4
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 4
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 4
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 4
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 4
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 4
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 4
- 238000007151 ring opening polymerisation reaction Methods 0.000 description 4
- 238000001338 self-assembly Methods 0.000 description 4
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 4
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 4
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 4
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 4
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 3
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 3
- 150000003923 2,5-pyrrolediones Chemical class 0.000 description 3
- 241000710929 Alphavirus Species 0.000 description 3
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 3
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 3
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 3
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 3
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 3
- 108060005986 Granzyme Proteins 0.000 description 3
- 102000001398 Granzyme Human genes 0.000 description 3
- 239000005057 Hexamethylene diisocyanate Substances 0.000 description 3
- 101000772137 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 1-1 Proteins 0.000 description 3
- 101000794417 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 3 Proteins 0.000 description 3
- 101000794420 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 4 Proteins 0.000 description 3
- 101000794371 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 5 Proteins 0.000 description 3
- 101000794370 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 6 Proteins 0.000 description 3
- 101000794373 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 7 Proteins 0.000 description 3
- 101000658388 Homo sapiens T cell receptor beta variable 13 Proteins 0.000 description 3
- 101000658429 Homo sapiens T cell receptor beta variable 3-1 Proteins 0.000 description 3
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 3
- 108050003558 Interleukin-17 Proteins 0.000 description 3
- 102000013691 Interleukin-17 Human genes 0.000 description 3
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 3
- 102000000646 Interleukin-3 Human genes 0.000 description 3
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 3
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 3
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 description 3
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical group ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 3
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 3
- 102000004503 Perforin Human genes 0.000 description 3
- 108010056995 Perforin Proteins 0.000 description 3
- KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N Perforine Natural products COC1=C2CCC(O)C(CCC(C)(C)O)(OC)C2=NC2=C1C=CO2 KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 3
- 229920000436 Poly(lactide-co-glycolide)-block-poly(ethylene glycol)-block-poly(lactide-co-glycolide) Polymers 0.000 description 3
- 108091081021 Sense strand Proteins 0.000 description 3
- 102100029309 T cell receptor alpha variable 1-1 Human genes 0.000 description 3
- 102100030199 T cell receptor alpha variable 3 Human genes 0.000 description 3
- 102100030196 T cell receptor alpha variable 4 Human genes 0.000 description 3
- 102100030178 T cell receptor alpha variable 5 Human genes 0.000 description 3
- 102100030179 T cell receptor alpha variable 6 Human genes 0.000 description 3
- 102100030182 T cell receptor alpha variable 7 Human genes 0.000 description 3
- 102100034886 T cell receptor beta variable 13 Human genes 0.000 description 3
- 102100034887 T cell receptor beta variable 3-1 Human genes 0.000 description 3
- 108020004566 Transfer RNA Proteins 0.000 description 3
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 3
- 150000001345 alkine derivatives Chemical class 0.000 description 3
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 3
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 3
- 238000010560 atom transfer radical polymerization reaction Methods 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 3
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 3
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 3
- 150000005829 chemical entities Chemical class 0.000 description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 3
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 230000009881 electrostatic interaction Effects 0.000 description 3
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 3
- 150000002118 epoxides Chemical group 0.000 description 3
- 230000003325 follicular Effects 0.000 description 3
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 3
- RRAMGCGOFNQTLD-UHFFFAOYSA-N hexamethylene diisocyanate Chemical compound O=C=NCCCCCCN=C=O RRAMGCGOFNQTLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 3
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 210000003826 marginal zone b cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000001806 memory b lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 3
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 3
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 3
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 3
- QNILTEGFHQSKFF-UHFFFAOYSA-N n-propan-2-ylprop-2-enamide Chemical compound CC(C)NC(=O)C=C QNILTEGFHQSKFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930192851 perforin Natural products 0.000 description 3
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 3
- 210000003720 plasmablast Anatomy 0.000 description 3
- 229920001610 polycaprolactone Polymers 0.000 description 3
- 229920001299 polypropylene fumarate Polymers 0.000 description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 3
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 3
- 229920000208 temperature-responsive polymer Polymers 0.000 description 3
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 3
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 3
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 3
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 3
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N (+)-Galactose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N 0.000 description 2
- PDVFSPNIEOYOQL-UHFFFAOYSA-N (4-methylphenyl)sulfonyl 4-methylbenzenesulfonate Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1S(=O)(=O)OS(=O)(=O)C1=CC=C(C)C=C1 PDVFSPNIEOYOQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RFLVMTUMFYRZCB-UHFFFAOYSA-N 1-methylguanine Chemical compound O=C1N(C)C(N)=NC2=C1N=CN2 RFLVMTUMFYRZCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KWVGIHKZDCUPEU-UHFFFAOYSA-N 2,2-dimethoxy-2-phenylacetophenone Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(OC)(OC)C(=O)C1=CC=CC=C1 KWVGIHKZDCUPEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZCXVJRGWDAFVTK-UHFFFAOYSA-N 2,3-dihydroxyocta-2,6-dienediamide Chemical compound NC(=O)C=CCCC(O)=C(O)C(N)=O ZCXVJRGWDAFVTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HVAUUPRFYPCOCA-AREMUKBSSA-N 2-O-acetyl-1-O-hexadecyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCOC[C@@H](OC(C)=O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C HVAUUPRFYPCOCA-AREMUKBSSA-N 0.000 description 2
- YSAJFXWTVFGPAX-UHFFFAOYSA-N 2-[(2,4-dioxo-1h-pyrimidin-5-yl)oxy]acetic acid Chemical compound OC(=O)COC1=CNC(=O)NC1=O YSAJFXWTVFGPAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FZWGECJQACGGTI-UHFFFAOYSA-N 2-amino-7-methyl-1,7-dihydro-6H-purin-6-one Chemical compound NC1=NC(O)=C2N(C)C=NC2=N1 FZWGECJQACGGTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OVONXEQGWXGFJD-UHFFFAOYSA-N 4-sulfanylidene-1h-pyrimidin-2-one Chemical compound SC=1C=CNC(=O)N=1 OVONXEQGWXGFJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JJTUDXZGHPGLLC-IMJSIDKUSA-N 4511-42-6 Chemical compound C[C@@H]1OC(=O)[C@H](C)OC1=O JJTUDXZGHPGLLC-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 2
- OIVLITBTBDPEFK-UHFFFAOYSA-N 5,6-dihydrouracil Chemical compound O=C1CCNC(=O)N1 OIVLITBTBDPEFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZLAQATDNGLKIEV-UHFFFAOYSA-N 5-methyl-2-sulfanylidene-1h-pyrimidin-4-one Chemical compound CC1=CNC(=S)NC1=O ZLAQATDNGLKIEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101150097493 D gene Proteins 0.000 description 2
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 2
- 102100031780 Endonuclease Human genes 0.000 description 2
- 239000001116 FEMA 4028 Substances 0.000 description 2
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090001126 Furin Proteins 0.000 description 2
- 102100035233 Furin Human genes 0.000 description 2
- 102100029966 HLA class II histocompatibility antigen, DP alpha 1 chain Human genes 0.000 description 2
- 102000055207 HMGB1 Human genes 0.000 description 2
- 108700010013 HMGB1 Proteins 0.000 description 2
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 2
- 102000008949 Histocompatibility Antigens Class I Human genes 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 101000864089 Homo sapiens HLA class II histocompatibility antigen, DP alpha 1 chain Proteins 0.000 description 2
- 101000930802 Homo sapiens HLA class II histocompatibility antigen, DQ alpha 1 chain Proteins 0.000 description 2
- 101000968032 Homo sapiens HLA class II histocompatibility antigen, DR beta 3 chain Proteins 0.000 description 2
- 101000658395 Homo sapiens Probable non-functional T cell receptor beta variable 17 Proteins 0.000 description 2
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 2
- 101000795920 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 12-1 Proteins 0.000 description 2
- 101000658376 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 12-2 Proteins 0.000 description 2
- 101000658374 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 12-3 Proteins 0.000 description 2
- 101000658380 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 13-1 Proteins 0.000 description 2
- 101000658378 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 13-2 Proteins 0.000 description 2
- 101000772107 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 22 Proteins 0.000 description 2
- 101000772105 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 24 Proteins 0.000 description 2
- 101000772106 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 25 Proteins 0.000 description 2
- 101000772113 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 27 Proteins 0.000 description 2
- 101000772121 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 30 Proteins 0.000 description 2
- 101000794423 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 34 Proteins 0.000 description 2
- 101000794422 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 35 Proteins 0.000 description 2
- 101000794424 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 39 Proteins 0.000 description 2
- 101000794419 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 40 Proteins 0.000 description 2
- 101000794418 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 41 Proteins 0.000 description 2
- 101000794372 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 8-1 Proteins 0.000 description 2
- 101000794375 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 8-2 Proteins 0.000 description 2
- 101000794369 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 9-1 Proteins 0.000 description 2
- 101000794368 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 9-2 Proteins 0.000 description 2
- 101000658393 Homo sapiens T cell receptor beta variable 18 Proteins 0.000 description 2
- 101000658400 Homo sapiens T cell receptor beta variable 27 Proteins 0.000 description 2
- 101000658406 Homo sapiens T cell receptor beta variable 28 Proteins 0.000 description 2
- 101000892439 Homo sapiens Taste receptor type 2 member 10 Proteins 0.000 description 2
- 101000714926 Homo sapiens Taste receptor type 2 member 14 Proteins 0.000 description 2
- 101000766332 Homo sapiens Tribbles homolog 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000766349 Homo sapiens Tribbles homolog 2 Proteins 0.000 description 2
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 description 2
- QIGBRXMKCJKVMJ-UHFFFAOYSA-N Hydroquinone Chemical compound OC1=CC=C(O)C=C1 QIGBRXMKCJKVMJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 2
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 2
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 2
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 2
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 2
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 2
- 241000710921 Infectious pancreatic necrosis virus Species 0.000 description 2
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 2
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 2
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 2
- UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N Iron oxide Chemical compound [Fe]=O UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101150008942 J gene Proteins 0.000 description 2
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 2
- 241000829100 Macaca mulatta polyomavirus 1 Species 0.000 description 2
- 101000634859 Mus musculus Taste receptor type 2 member 103 Proteins 0.000 description 2
- 101000798132 Mus musculus Taste receptor type 2 member 116 Proteins 0.000 description 2
- HYVABZIGRDEKCD-UHFFFAOYSA-N N(6)-dimethylallyladenine Chemical compound CC(C)=CCNC1=NC=NC2=C1N=CN2 HYVABZIGRDEKCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010003541 Platelet Activating Factor Proteins 0.000 description 2
- 229920006022 Poly(L-lactide-co-glycolide)-b-poly(ethylene glycol) Polymers 0.000 description 2
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 2
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 2
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 2
- 102100034883 Probable non-functional T cell receptor beta variable 17 Human genes 0.000 description 2
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 2
- 102100024952 Protein CBFA2T1 Human genes 0.000 description 2
- LOUPRKONTZGTKE-WZBLMQSHSA-N Quinine Chemical compound C([C@H]([C@H](C1)C=C)C2)C[N@@]1[C@@H]2[C@H](O)C1=CC=NC2=CC=C(OC)C=C21 LOUPRKONTZGTKE-WZBLMQSHSA-N 0.000 description 2
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 2
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 description 2
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 2
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100031722 T cell receptor alpha variable 12-1 Human genes 0.000 description 2
- 102100034847 T cell receptor alpha variable 12-2 Human genes 0.000 description 2
- 102100034846 T cell receptor alpha variable 12-3 Human genes 0.000 description 2
- 102100034849 T cell receptor alpha variable 13-1 Human genes 0.000 description 2
- 102100034848 T cell receptor alpha variable 13-2 Human genes 0.000 description 2
- 102100029482 T cell receptor alpha variable 22 Human genes 0.000 description 2
- 102100029484 T cell receptor alpha variable 24 Human genes 0.000 description 2
- 102100029483 T cell receptor alpha variable 25 Human genes 0.000 description 2
- 102100029313 T cell receptor alpha variable 27 Human genes 0.000 description 2
- 102100029314 T cell receptor alpha variable 30 Human genes 0.000 description 2
- 102100030190 T cell receptor alpha variable 34 Human genes 0.000 description 2
- 102100030191 T cell receptor alpha variable 35 Human genes 0.000 description 2
- 102100030189 T cell receptor alpha variable 39 Human genes 0.000 description 2
- 102100030197 T cell receptor alpha variable 40 Human genes 0.000 description 2
- 102100030198 T cell receptor alpha variable 41 Human genes 0.000 description 2
- 102100030183 T cell receptor alpha variable 8-1 Human genes 0.000 description 2
- 102100030180 T cell receptor alpha variable 8-2 Human genes 0.000 description 2
- 102100030188 T cell receptor alpha variable 9-1 Human genes 0.000 description 2
- 102100030184 T cell receptor alpha variable 9-2 Human genes 0.000 description 2
- 102100034882 T cell receptor beta variable 18 Human genes 0.000 description 2
- 102100034877 T cell receptor beta variable 27 Human genes 0.000 description 2
- 102100034880 T cell receptor beta variable 28 Human genes 0.000 description 2
- 102100040649 Taste receptor type 2 member 10 Human genes 0.000 description 2
- 102100036720 Taste receptor type 2 member 14 Human genes 0.000 description 2
- GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N Titan oxide Chemical compound O=[Ti]=O GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000723792 Tobacco etch virus Species 0.000 description 2
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 2
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 2
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 2
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 2
- 150000003926 acrylamides Chemical group 0.000 description 2
- 150000001266 acyl halides Chemical group 0.000 description 2
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N adenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 2
- 150000001299 aldehydes Chemical group 0.000 description 2
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 2
- 125000002355 alkine group Chemical group 0.000 description 2
- 150000001350 alkyl halides Chemical group 0.000 description 2
- 229940045714 alkyl sulfonate alkylating agent Drugs 0.000 description 2
- 150000008052 alkyl sulfonates Chemical group 0.000 description 2
- 229910045601 alloy Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000000956 alloy Substances 0.000 description 2
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 2
- VSCWAEJMTAWNJL-UHFFFAOYSA-K aluminium trichloride Chemical compound Cl[Al](Cl)Cl VSCWAEJMTAWNJL-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 150000001408 amides Chemical group 0.000 description 2
- 150000008064 anhydrides Chemical group 0.000 description 2
- 150000001448 anilines Chemical class 0.000 description 2
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002617 apheresis Methods 0.000 description 2
- 150000001502 aryl halides Chemical group 0.000 description 2
- IVRMZWNICZWHMI-UHFFFAOYSA-N azide group Chemical group [N-]=[N+]=[N-] IVRMZWNICZWHMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 2
- 150000001541 aziridines Chemical group 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 229960004853 betadex Drugs 0.000 description 2
- 230000002457 bidirectional effect Effects 0.000 description 2
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 125000005621 boronate group Chemical group 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 150000001718 carbodiimides Chemical group 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 229940105329 carboxymethylcellulose Drugs 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- 229920006317 cationic polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000002771 cell marker Substances 0.000 description 2
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 2
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 2
- 229940045110 chitosan Drugs 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 239000005289 controlled pore glass Substances 0.000 description 2
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 2
- 229940108928 copper Drugs 0.000 description 2
- 229920006037 cross link polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 239000004205 dimethyl polysiloxane Substances 0.000 description 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 2
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 2
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 2
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 2
- 238000012165 high-throughput sequencing Methods 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 2
- 150000002463 imidates Chemical class 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 2
- 239000012948 isocyanate Substances 0.000 description 2
- 150000002513 isocyanates Chemical class 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 150000002540 isothiocyanates Chemical class 0.000 description 2
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 2
- 150000002576 ketones Chemical group 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 2
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 2
- 210000000867 larynx Anatomy 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 2
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 125000005439 maleimidyl group Chemical group C1(C=CC(N1*)=O)=O 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- PSGAAPLEWMOORI-PEINSRQWSA-N medroxyprogesterone acetate Chemical compound C([C@@]12C)CC(=O)C=C1[C@@H](C)C[C@@H]1[C@@H]2CC[C@]2(C)[C@@](OC(C)=O)(C(C)=O)CC[C@H]21 PSGAAPLEWMOORI-PEINSRQWSA-N 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- HFGVZFZKVOBHAQ-UHFFFAOYSA-N n-[2-(2-aminoethyldisulfanyl)ethyl]-n-prop-2-enoylprop-2-enamide Chemical compound NCCSSCCN(C(=O)C=C)C(=O)C=C HFGVZFZKVOBHAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 2
- 239000002073 nanorod Substances 0.000 description 2
- 238000013188 needle biopsy Methods 0.000 description 2
- 230000000269 nucleophilic effect Effects 0.000 description 2
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 2
- 210000002741 palatine tonsil Anatomy 0.000 description 2
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004910 pleural fluid Anatomy 0.000 description 2
- 229920001434 poly(D-lactide) Polymers 0.000 description 2
- 229920001432 poly(L-lactide) Polymers 0.000 description 2
- 229920000435 poly(dimethylsiloxane) Polymers 0.000 description 2
- 229920001606 poly(lactic acid-co-glycolic acid) Polymers 0.000 description 2
- 229920006324 polyoxymethylene Polymers 0.000 description 2
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 150000003141 primary amines Chemical group 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 2
- 238000010526 radical polymerization reaction Methods 0.000 description 2
- 210000002707 regulatory b cell Anatomy 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 108020004418 ribosomal RNA Proteins 0.000 description 2
- 239000013545 self-assembled monolayer Substances 0.000 description 2
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 2
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 2
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 2
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 125000001273 sulfonato group Chemical class [O-]S(*)(=O)=O 0.000 description 2
- 150000003461 sulfonyl halides Chemical class 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 2
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 2
- 210000001685 thyroid gland Anatomy 0.000 description 2
- KSBAEPSJVUENNK-UHFFFAOYSA-L tin(ii) 2-ethylhexanoate Chemical compound [Sn+2].CCCCC(CC)C([O-])=O.CCCCC(CC)C([O-])=O KSBAEPSJVUENNK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 2
- 239000007762 w/o emulsion Substances 0.000 description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 2
- PAPBSGBWRJIAAV-UHFFFAOYSA-N ε-Caprolactone Chemical compound O=C1CCCCCO1 PAPBSGBWRJIAAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DCQFFOLNJVGHLW-ZNVMLXAYSA-N (1s,4s,5r,8r)-2,6-dioxabicyclo[3.2.1]octane-3,4,8-triol Chemical compound O[C@H]1[C@@]2([H])OC[C@]1([H])OC(O)[C@H]2O DCQFFOLNJVGHLW-ZNVMLXAYSA-N 0.000 description 1
- DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N (2R)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2R,3S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-amino-1-hydroxyethylidene)amino]-3-carboxy-1-hydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1,5-dihydroxy-5-iminopentylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=N[C@@H](CS)C(=N[C@@H](C)C(=N[C@@H](CO)C(=NCC(=N[C@@H](CCC(=N)O)C(=NC(CS)C(=N[C@H]([C@H](C)O)C(=N[C@H](CS)C(=N[C@H](CO)C(=NCC(=N[C@H](CS)C(=NCC(=N[C@H](CCCCN)C(=O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)N=C([C@H](CS)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](C)N=C(CN=C([C@H](CO)N=C([C@H](CS)N=C(CN=C(C(CS)N=C(C(CC(=O)O)N=C(CN)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N 0.000 description 1
- LZOIGVDSAMDBIO-LXWJMTKESA-N (2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-4-methylpentanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)[C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C1=CC=CC=C1 LZOIGVDSAMDBIO-LXWJMTKESA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-AKGZTFGVSA-N (2s)-2-amino-3-methylpentanoic acid Chemical compound CCC(C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-AKGZTFGVSA-N 0.000 description 1
- WHBMMWSBFZVSSR-GSVOUGTGSA-M (R)-3-hydroxybutyrate Chemical compound C[C@@H](O)CC([O-])=O WHBMMWSBFZVSSR-GSVOUGTGSA-M 0.000 description 1
- RKDVKSZUMVYZHH-UHFFFAOYSA-N 1,4-dioxane-2,5-dione Chemical compound O=C1COC(=O)CO1 RKDVKSZUMVYZHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WJNGQIYEQLPJMN-IOSLPCCCSA-N 1-methylinosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)N(C)C=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O WJNGQIYEQLPJMN-IOSLPCCCSA-N 0.000 description 1
- HLYBTPMYFWWNJN-UHFFFAOYSA-N 2-(2,4-dioxo-1h-pyrimidin-5-yl)-2-hydroxyacetic acid Chemical compound OC(=O)C(O)C1=CNC(=O)NC1=O HLYBTPMYFWWNJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SGAKLDIYNFXTCK-UHFFFAOYSA-N 2-[(2,4-dioxo-1h-pyrimidin-5-yl)methylamino]acetic acid Chemical compound OC(=O)CNCC1=CNC(=O)NC1=O SGAKLDIYNFXTCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 2-deoxy-D-ribose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)CC=O ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 0.000 description 1
- XMSMHKMPBNTBOD-UHFFFAOYSA-N 2-dimethylamino-6-hydroxypurine Chemical compound N1C(N(C)C)=NC(=O)C2=C1N=CN2 XMSMHKMPBNTBOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SMADWRYCYBUIKH-UHFFFAOYSA-N 2-methyl-7h-purin-6-amine Chemical compound CC1=NC(N)=C2NC=NC2=N1 SMADWRYCYBUIKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KOLPWZCZXAMXKS-UHFFFAOYSA-N 3-methylcytosine Chemical compound CN1C(N)=CC=NC1=O KOLPWZCZXAMXKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GJAKJCICANKRFD-UHFFFAOYSA-N 4-acetyl-4-amino-1,3-dihydropyrimidin-2-one Chemical compound CC(=O)C1(N)NC(=O)NC=C1 GJAKJCICANKRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UACOJOVKHNAJPX-UHFFFAOYSA-N 5-(methoxyamino)-6-methyl-2-sulfanylidene-1H-pyrimidin-4-one Chemical compound CONC=1C(NC(NC=1C)=S)=O UACOJOVKHNAJPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MQJSSLBGAQJNER-UHFFFAOYSA-N 5-(methylaminomethyl)-1h-pyrimidine-2,4-dione Chemical compound CNCC1=CNC(=O)NC1=O MQJSSLBGAQJNER-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LQLQRFGHAALLLE-UHFFFAOYSA-N 5-bromouracil Chemical compound BrC1=CNC(=O)NC1=O LQLQRFGHAALLLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VKLFQTYNHLDMDP-PNHWDRBUSA-N 5-carboxymethylaminomethyl-2-thiouridine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=S)NC(=O)C(CNCC(O)=O)=C1 VKLFQTYNHLDMDP-PNHWDRBUSA-N 0.000 description 1
- ZFTBZKVVGZNMJR-UHFFFAOYSA-N 5-chlorouracil Chemical compound ClC1=CNC(=O)NC1=O ZFTBZKVVGZNMJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KSNXJLQDQOIRIP-UHFFFAOYSA-N 5-iodouracil Chemical compound IC1=CNC(=O)NC1=O KSNXJLQDQOIRIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KELXHQACBIUYSE-UHFFFAOYSA-N 5-methoxy-1h-pyrimidine-2,4-dione Chemical compound COC1=CNC(=O)NC1=O KELXHQACBIUYSE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LRSASMSXMSNRBT-UHFFFAOYSA-N 5-methylcytosine Chemical compound CC1=CNC(=O)N=C1N LRSASMSXMSNRBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DCPSTSVLRXOYGS-UHFFFAOYSA-N 6-amino-1h-pyrimidine-2-thione Chemical compound NC1=CC=NC(S)=N1 DCPSTSVLRXOYGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VKKXEIQIGGPMHT-UHFFFAOYSA-N 7h-purine-2,8-diamine Chemical compound NC1=NC=C2NC(N)=NC2=N1 VKKXEIQIGGPMHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HOMVJUZBWGSSRB-UHFFFAOYSA-N 8-amino-2-methylideneoctanamide Chemical compound NCCCCCCC(=C)C(N)=O HOMVJUZBWGSSRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MSSXOMSJDRHRMC-UHFFFAOYSA-N 9H-purine-2,6-diamine Chemical compound NC1=NC(N)=C2NC=NC2=N1 MSSXOMSJDRHRMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M Acrylate Chemical compound [O-]C(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102100022900 Actin, cytoplasmic 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 description 1
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 description 1
- JBRZTFJDHDCESZ-UHFFFAOYSA-N AsGa Chemical compound [As]#[Ga] JBRZTFJDHDCESZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 102100029822 B- and T-lymphocyte attenuator Human genes 0.000 description 1
- 102000019260 B-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010012919 B-Cell Antigen Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102100027314 Beta-2-microglobulin Human genes 0.000 description 1
- 240000002791 Brassica napus Species 0.000 description 1
- 235000011293 Brassica napus Nutrition 0.000 description 1
- 235000000540 Brassica rapa subsp rapa Nutrition 0.000 description 1
- 102100026008 Breakpoint cluster region protein Human genes 0.000 description 1
- 102100021943 C-C motif chemokine 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710155857 C-C motif chemokine 2 Proteins 0.000 description 1
- 102100034871 C-C motif chemokine 8 Human genes 0.000 description 1
- 101710155833 C-C motif chemokine 8 Proteins 0.000 description 1
- 102100025248 C-X-C motif chemokine 10 Human genes 0.000 description 1
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 1
- BRQKZYGKJKCMDK-UHFFFAOYSA-K C1(=CC=CC=C1)P([O-])(=O)C(C1=C(C=C(C=C1C)C)C)=O.[Mg+2].[Li+].C1(=CC=CC=C1)P([O-])(=O)C(C1=C(C=C(C=C1C)C)C)=O.C1(=CC=CC=C1)P([O-])(=O)C(C1=C(C=C(C=C1C)C)C)=O Chemical compound C1(=CC=CC=C1)P([O-])(=O)C(C1=C(C=C(C=C1C)C)C)=O.[Mg+2].[Li+].C1(=CC=CC=C1)P([O-])(=O)C(C1=C(C=C(C=C1C)C)C)=O.C1(=CC=CC=C1)P([O-])(=O)C(C1=C(C=C(C=C1C)C)C)=O BRQKZYGKJKCMDK-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 102100024263 CD160 antigen Human genes 0.000 description 1
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101001007681 Candida albicans (strain WO-1) Kexin Proteins 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 108010076667 Caspases Proteins 0.000 description 1
- 102000011727 Caspases Human genes 0.000 description 1
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 description 1
- 235000001258 Cinchona calisaya Nutrition 0.000 description 1
- 108091028075 Circular RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- VMQMZMRVKUZKQL-UHFFFAOYSA-N Cu+ Chemical compound [Cu+] VMQMZMRVKUZKQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N Cu2+ Chemical compound [Cu+2] JPVYNHNXODAKFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- 102100039498 Cytotoxic T-lymphocyte protein 4 Human genes 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010013369 Enteropeptidase Proteins 0.000 description 1
- 102100029727 Enteropeptidase Human genes 0.000 description 1
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 1
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910001218 Gallium arsenide Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000206672 Gelidium Species 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 244000060234 Gmelina philippensis Species 0.000 description 1
- 241000206581 Gracilaria Species 0.000 description 1
- 102100036241 HLA class II histocompatibility antigen, DQ beta 1 chain Human genes 0.000 description 1
- 102100040485 HLA class II histocompatibility antigen, DRB1 beta chain Human genes 0.000 description 1
- 108010026122 HLA-A*33 antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010013476 HLA-A24 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010029526 HLA-A28 antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010086377 HLA-A3 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010018475 HLA-A31 antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010028938 HLA-B45 antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010091938 HLA-B7 Antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010037618 HLA-C*08 antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010065026 HLA-DQB1 antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010039343 HLA-DRB1 Chains Proteins 0.000 description 1
- 101150046249 Havcr2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000834898 Homo sapiens Alpha-synuclein Proteins 0.000 description 1
- 101000864344 Homo sapiens B- and T-lymphocyte attenuator Proteins 0.000 description 1
- 101000858088 Homo sapiens C-X-C motif chemokine 10 Proteins 0.000 description 1
- 101000761938 Homo sapiens CD160 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101001138062 Homo sapiens Leukocyte-associated immunoglobulin-like receptor 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001137987 Homo sapiens Lymphocyte activation gene 3 protein Proteins 0.000 description 1
- 101000634835 Homo sapiens M1-specific T cell receptor alpha chain Proteins 0.000 description 1
- 101000763322 Homo sapiens M1-specific T cell receptor beta chain Proteins 0.000 description 1
- 101000581514 Homo sapiens Membrane-bound transcription factor site-2 protease Proteins 0.000 description 1
- 101000844027 Homo sapiens Probable non-functional T cell receptor beta variable 7-3 Proteins 0.000 description 1
- 101000611936 Homo sapiens Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000836954 Homo sapiens Sialic acid-binding Ig-like lectin 10 Proteins 0.000 description 1
- 101000652359 Homo sapiens Spermatogenesis-associated protein 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000634836 Homo sapiens T cell receptor alpha chain MC.7.G5 Proteins 0.000 description 1
- 101000772138 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 1-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000658384 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 26-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000658382 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 26-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000795961 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 38-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000794367 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 8-4 Proteins 0.000 description 1
- 101000794366 Homo sapiens T cell receptor alpha variable 8-6 Proteins 0.000 description 1
- 101000763321 Homo sapiens T cell receptor beta chain MC.7.G5 Proteins 0.000 description 1
- 101000844037 Homo sapiens T cell receptor beta variable 10-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000844038 Homo sapiens T cell receptor beta variable 10-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000844035 Homo sapiens T cell receptor beta variable 10-3 Proteins 0.000 description 1
- 101000844036 Homo sapiens T cell receptor beta variable 11-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000844034 Homo sapiens T cell receptor beta variable 11-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000939856 Homo sapiens T cell receptor beta variable 11-3 Proteins 0.000 description 1
- 101000939859 Homo sapiens T cell receptor beta variable 12-3 Proteins 0.000 description 1
- 101000939858 Homo sapiens T cell receptor beta variable 12-4 Proteins 0.000 description 1
- 101000939742 Homo sapiens T cell receptor beta variable 20-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000939745 Homo sapiens T cell receptor beta variable 24-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000939744 Homo sapiens T cell receptor beta variable 25-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000658404 Homo sapiens T cell receptor beta variable 29-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000606201 Homo sapiens T cell receptor beta variable 4-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000606207 Homo sapiens T cell receptor beta variable 4-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000606206 Homo sapiens T cell receptor beta variable 4-3 Proteins 0.000 description 1
- 101000606204 Homo sapiens T cell receptor beta variable 5-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000606209 Homo sapiens T cell receptor beta variable 5-4 Proteins 0.000 description 1
- 101000606208 Homo sapiens T cell receptor beta variable 5-5 Proteins 0.000 description 1
- 101000606214 Homo sapiens T cell receptor beta variable 5-6 Proteins 0.000 description 1
- 101000606212 Homo sapiens T cell receptor beta variable 5-8 Proteins 0.000 description 1
- 101000606218 Homo sapiens T cell receptor beta variable 6-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000606217 Homo sapiens T cell receptor beta variable 6-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000606216 Homo sapiens T cell receptor beta variable 6-3 Proteins 0.000 description 1
- 101000606215 Homo sapiens T cell receptor beta variable 6-4 Proteins 0.000 description 1
- 101000606220 Homo sapiens T cell receptor beta variable 6-5 Proteins 0.000 description 1
- 101000606219 Homo sapiens T cell receptor beta variable 6-6 Proteins 0.000 description 1
- 101000844030 Homo sapiens T cell receptor beta variable 6-8 Proteins 0.000 description 1
- 101000844031 Homo sapiens T cell receptor beta variable 6-9 Proteins 0.000 description 1
- 101000844026 Homo sapiens T cell receptor beta variable 7-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000844024 Homo sapiens T cell receptor beta variable 7-4 Proteins 0.000 description 1
- 101000844023 Homo sapiens T cell receptor beta variable 7-7 Proteins 0.000 description 1
- 101000844021 Homo sapiens T cell receptor beta variable 7-8 Proteins 0.000 description 1
- 101000844022 Homo sapiens T cell receptor beta variable 7-9 Proteins 0.000 description 1
- 101000831007 Homo sapiens T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains Proteins 0.000 description 1
- 101000666896 Homo sapiens V-type immunoglobulin domain-containing suppressor of T-cell activation Proteins 0.000 description 1
- 101100321817 Human parvovirus B19 (strain HV) 7.5K gene Proteins 0.000 description 1
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N Hydroxylamine Chemical compound ON AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108090000177 Interleukin-11 Proteins 0.000 description 1
- 102000003815 Interleukin-11 Human genes 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 102000017578 LAG3 Human genes 0.000 description 1
- 102100020943 Leukocyte-associated immunoglobulin-like receptor 1 Human genes 0.000 description 1
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 1
- 102100029450 M1-specific T cell receptor alpha chain Human genes 0.000 description 1
- 102100026964 M1-specific T cell receptor beta chain Human genes 0.000 description 1
- 108010066345 MHC binding peptide Proteins 0.000 description 1
- 108010048043 Macrophage Migration-Inhibitory Factors Proteins 0.000 description 1
- 102100037791 Macrophage migration inhibitory factor Human genes 0.000 description 1
- PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N Maleimide Chemical compound O=C1NC(=O)C=C1 PEEHTFAAVSWFBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010000684 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 description 1
- 102000002274 Matrix Metalloproteinases Human genes 0.000 description 1
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 description 1
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 1
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M Methacrylate Chemical compound CC(=C)C([O-])=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000014962 Monocyte Chemoattractant Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010064136 Monocyte Chemoattractant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000713333 Mouse mammary tumor virus Species 0.000 description 1
- SGSSKEDGVONRGC-UHFFFAOYSA-N N(2)-methylguanine Chemical compound O=C1NC(NC)=NC2=C1N=CN2 SGSSKEDGVONRGC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 101800001775 Nuclear inclusion protein A Proteins 0.000 description 1
- 108020004711 Nucleic Acid Probes Proteins 0.000 description 1
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 108010079855 Peptide Aptamers Proteins 0.000 description 1
- YGYAWVDWMABLBF-UHFFFAOYSA-N Phosgene Chemical compound ClC(Cl)=O YGYAWVDWMABLBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000012288 Phosphopyruvate Hydratase Human genes 0.000 description 1
- 108010022181 Phosphopyruvate Hydratase Proteins 0.000 description 1
- 229920000463 Poly(ethylene glycol)-block-poly(propylene glycol)-block-poly(ethylene glycol) Polymers 0.000 description 1
- 229920001665 Poly-4-vinylphenol Polymers 0.000 description 1
- 239000004642 Polyimide Substances 0.000 description 1
- 241000710078 Potyvirus Species 0.000 description 1
- 102100032176 Probable non-functional T cell receptor beta variable 7-3 Human genes 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 108091008109 Pseudogenes Proteins 0.000 description 1
- 102000057361 Pseudogenes Human genes 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 108090000783 Renin Proteins 0.000 description 1
- 102100028255 Renin Human genes 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002262 Schiff base Substances 0.000 description 1
- 150000004753 Schiff bases Chemical class 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 229910052581 Si3N4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102100027164 Sialic acid-binding Ig-like lectin 10 Human genes 0.000 description 1
- XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N Silicon Chemical compound [Si] XUIMIQQOPSSXEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 102100029308 T cell receptor alpha variable 1-2 Human genes 0.000 description 1
- 102100034843 T cell receptor alpha variable 26-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100034842 T cell receptor alpha variable 26-2 Human genes 0.000 description 1
- 102100031724 T cell receptor alpha variable 38-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100030185 T cell receptor alpha variable 8-4 Human genes 0.000 description 1
- 102100030186 T cell receptor alpha variable 8-6 Human genes 0.000 description 1
- 102100032168 T cell receptor beta variable 10-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100032167 T cell receptor beta variable 10-2 Human genes 0.000 description 1
- 102100032172 T cell receptor beta variable 10-3 Human genes 0.000 description 1
- 102100032171 T cell receptor beta variable 11-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100032179 T cell receptor beta variable 11-2 Human genes 0.000 description 1
- 102100029711 T cell receptor beta variable 11-3 Human genes 0.000 description 1
- 102100029696 T cell receptor beta variable 12-3 Human genes 0.000 description 1
- 102100029697 T cell receptor beta variable 12-4 Human genes 0.000 description 1
- 102100029659 T cell receptor beta variable 20-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100029656 T cell receptor beta variable 24-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100029657 T cell receptor beta variable 25-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100034879 T cell receptor beta variable 29-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100039738 T cell receptor beta variable 4-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100039755 T cell receptor beta variable 4-2 Human genes 0.000 description 1
- 102100039757 T cell receptor beta variable 4-3 Human genes 0.000 description 1
- 102100039739 T cell receptor beta variable 5-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100039753 T cell receptor beta variable 5-4 Human genes 0.000 description 1
- 102100039756 T cell receptor beta variable 5-5 Human genes 0.000 description 1
- 102100039749 T cell receptor beta variable 5-6 Human genes 0.000 description 1
- 102100039751 T cell receptor beta variable 5-8 Human genes 0.000 description 1
- 102100039787 T cell receptor beta variable 6-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100039748 T cell receptor beta variable 6-2 Human genes 0.000 description 1
- 102100039747 T cell receptor beta variable 6-3 Human genes 0.000 description 1
- 102100039750 T cell receptor beta variable 6-4 Human genes 0.000 description 1
- 102100039786 T cell receptor beta variable 6-5 Human genes 0.000 description 1
- 102100039785 T cell receptor beta variable 6-6 Human genes 0.000 description 1
- 102100032181 T cell receptor beta variable 6-8 Human genes 0.000 description 1
- 102100032180 T cell receptor beta variable 6-9 Human genes 0.000 description 1
- 102100032177 T cell receptor beta variable 7-2 Human genes 0.000 description 1
- 102100032183 T cell receptor beta variable 7-4 Human genes 0.000 description 1
- 102100032184 T cell receptor beta variable 7-7 Human genes 0.000 description 1
- 102100032193 T cell receptor beta variable 7-8 Human genes 0.000 description 1
- 102100032192 T cell receptor beta variable 7-9 Human genes 0.000 description 1
- 102100024834 T-cell immunoreceptor with Ig and ITIM domains Human genes 0.000 description 1
- 101150012617 TRB gene Proteins 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical group O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N Titanium Chemical compound [Ti] RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 102100038282 V-type immunoglobulin domain-containing suppressor of T-cell activation Human genes 0.000 description 1
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 1
- QYKIQEUNHZKYBP-UHFFFAOYSA-N Vinyl ether Chemical compound C=COC=C QYKIQEUNHZKYBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930003448 Vitamin K Natural products 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- DHKHKXVYLBGOIT-UHFFFAOYSA-N acetaldehyde Diethyl Acetal Natural products CCOC(C)OCC DHKHKXVYLBGOIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001241 acetals Chemical class 0.000 description 1
- 125000000218 acetic acid group Chemical group C(C)(=O)* 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000001252 acrylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N acrylic acid group Chemical group C(C=C)(=O)O NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 1
- 238000005865 alkene metathesis reaction Methods 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000469 amphiphilic block copolymer Polymers 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000009175 antibody therapy Methods 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 238000003491 array Methods 0.000 description 1
- 229940072107 ascorbate Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 1
- 125000004069 aziridinyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 1
- 108010081355 beta 2-Microglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000012740 beta Adrenergic Receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 238000005842 biochemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000002051 biphasic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 125000004063 butyryl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000007248 cellular mechanism Effects 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- LOUPRKONTZGTKE-UHFFFAOYSA-N cinchonine Natural products C1C(C(C2)C=C)CCN2C1C(O)C1=CC=NC2=CC=C(OC)C=C21 LOUPRKONTZGTKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000007334 copolymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 1
- 238000006352 cycloaddition reaction Methods 0.000 description 1
- 229940097362 cyclodextrins Drugs 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 229960002433 cysteine Drugs 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000006196 deacetylation Effects 0.000 description 1
- 238000003381 deacetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 229920000359 diblock copolymer Polymers 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 description 1
- BQIVJVAZDJHDJF-LURJTMIESA-N ethyl (2s)-2-amino-3-methylbutanoate Chemical compound CCOC(=O)[C@@H](N)C(C)C BQIVJVAZDJHDJF-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- QIGLJVBIRIXQRN-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-amino-4-methylpentanoate Chemical compound CCOC(=O)C(N)CC(C)C QIGLJVBIRIXQRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 1
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 238000012239 gene modification Methods 0.000 description 1
- 230000008571 general function Effects 0.000 description 1
- 230000005017 genetic modification Effects 0.000 description 1
- 235000013617 genetically modified food Nutrition 0.000 description 1
- 229910052732 germanium Inorganic materials 0.000 description 1
- GNPVGFCGXDBREM-UHFFFAOYSA-N germanium atom Chemical compound [Ge] GNPVGFCGXDBREM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 235000003969 glutathione Nutrition 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229920000578 graft copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-O guanidinium Chemical compound NC(N)=[NH2+] ZRALSGWEFCBTJO-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 1
- UBIJTWDKTYCPMQ-UHFFFAOYSA-N hexachlorophosphazene Chemical compound ClP1(Cl)=NP(Cl)(Cl)=NP(Cl)(Cl)=N1 UBIJTWDKTYCPMQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004337 hydroquinone Drugs 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002443 hydroxylamines Chemical class 0.000 description 1
- 125000000879 imine group Chemical group 0.000 description 1
- 230000008073 immune recognition Effects 0.000 description 1
- 210000000428 immunological synapse Anatomy 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000017730 intein-mediated protein splicing Effects 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 102000009634 interleukin-1 receptor antagonist activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040001669 interleukin-1 receptor antagonist activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N iron Substances [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- 125000000468 ketone group Chemical group 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 1
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 210000003519 mature b lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- AEUKDPKXTPNBNY-XEYRWQBLSA-N mcp 2 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 AEUKDPKXTPNBNY-XEYRWQBLSA-N 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000000155 melt Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 125000005641 methacryl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005395 methacrylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 125000000956 methoxy group Chemical group [H]C([H])([H])O* 0.000 description 1
- IZAGSTRIDUNNOY-UHFFFAOYSA-N methyl 2-[(2,4-dioxo-1h-pyrimidin-5-yl)oxy]acetate Chemical compound COC(=O)COC1=CNC(=O)NC1=O IZAGSTRIDUNNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 238000007040 multi-step synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229920006030 multiblock copolymer Polymers 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000007857 nested PCR Methods 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 1
- 239000002853 nucleic acid probe Substances 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- BPUBBGLMJRNUCC-UHFFFAOYSA-N oxygen(2-);tantalum(5+) Chemical compound [O-2].[O-2].[O-2].[O-2].[O-2].[Ta+5].[Ta+5] BPUBBGLMJRNUCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 150000002972 pentoses Chemical class 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N phylloquinone Natural products CC(C)CCCCC(C)CCC(C)CCCC(=CCC1=C(C)C(=O)c2ccccc2C1=O)C SHUZOJHMOBOZST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920001482 poly(N-isopropylacrylamide) copolymer Polymers 0.000 description 1
- 229920002627 poly(phosphazenes) Polymers 0.000 description 1
- 229920001748 polybutylene Polymers 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001721 polyimide Polymers 0.000 description 1
- 239000003505 polymerization initiator Substances 0.000 description 1
- 239000004814 polyurethane Substances 0.000 description 1
- 229920002635 polyurethane Polymers 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 210000005211 primary lymphoid organ Anatomy 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 125000001501 propionyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 1
- 229960000948 quinine Drugs 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 108091006024 signal transducing proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000034285 signal transducing proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 150000003376 silicon Chemical class 0.000 description 1
- HQVNEWCFYHHQES-UHFFFAOYSA-N silicon nitride Chemical compound N12[Si]34N5[Si]62N3[Si]51N64 HQVNEWCFYHHQES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N sodium cyanoborohydride Chemical compound [Na+].[B-]C#N BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003393 splenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000006277 sulfonation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000000472 sulfonyl group Chemical group *S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 229910001936 tantalum oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 150000007970 thio esters Chemical group 0.000 description 1
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 1
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 1
- 229910052719 titanium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010936 titanium Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 101150069263 tra gene Proteins 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 101150115463 trg gene Proteins 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- 125000002264 triphosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])OP(=O)(O[H])O* 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 230000014567 type I interferon production Effects 0.000 description 1
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 1
- 229960000834 vinyl ether Drugs 0.000 description 1
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 235000019168 vitamin K Nutrition 0.000 description 1
- 239000011712 vitamin K Substances 0.000 description 1
- 150000003721 vitamin K derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229940046010 vitamin k Drugs 0.000 description 1
- WCNMEQDMUYVWMJ-JPZHCBQBSA-N wybutoxosine Chemical compound C1=NC=2C(=O)N3C(CC([C@H](NC(=O)OC)C(=O)OC)OO)=C(C)N=C3N(C)C=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O WCNMEQDMUYVWMJ-JPZHCBQBSA-N 0.000 description 1
- 239000010457 zeolite Substances 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6872—Intracellular protein regulatory factors and their receptors, e.g. including ion channels
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001102—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- A61K39/001111—Immunoglobulin superfamily
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/70539—MHC-molecules, e.g. HLA-molecules
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/50—Fusion polypeptide containing protease site
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2800/00—Nucleic acids vectors
- C12N2800/10—Plasmid DNA
- C12N2800/106—Plasmid DNA for vertebrates
- C12N2800/107—Plasmid DNA for vertebrates for mammalian
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2800/00—Nucleic acids vectors
- C12N2800/30—Vector systems comprising sequences for excision in presence of a recombinase, e.g. loxP or FRT
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
- C12N2830/20—Vector systems having a special element relevant for transcription transcription of more than one cistron
- C12N2830/205—Vector systems having a special element relevant for transcription transcription of more than one cistron bidirectional
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- G01N2333/70503—Immunoglobulin superfamily, e.g. VCAMs, PECAM, LFA-3
- G01N2333/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
Description
[0001]本出願は、2018年8月13日に出願された米国仮特許出願第62/718,227号、2018年8月31日に出願された米国仮特許出願第62/725,842号、2018年9月18日に出願された米国仮特許出願第62/732,898号、2019年3月14日に出願された米国仮特許出願第62/818,355号、および2019年3月26日に出願された米国仮特許出願第62/823,831号に対する優先権を主張し、それらの各々は全体が参照により本明細書に組み込まれる。
直接発現のためのTCRの同種対をコードする融合核酸分子を提供することができる。組成物および方法はまた、B細胞受容体(BCR)などの他の二分免疫受容体にも適用され得る。本明細書は以下の発明の開示を包含する。
[1]融合二分免疫受容体ポリヌクレオチドライブラリーを調製するための方法であって、
(a)複数のベッセルを生成するステップであって、各々が、(1)二分免疫受容体の第1のペプチド鎖をコードする第1の核酸および前記二分免疫受容体の第2のペプチド鎖をコードする第2の核酸を含む細胞と、(2)複数の重合可能またはゲル化可能なポリマーおよび/またはモノマーとを含む、ステップと、
(b)前記複数の重合可能またはゲル化可能なポリマーおよび/またはモノマーを重合またはゲル化して複数の硬化粒子を形成するステップであって、前記複数の硬化粒子のそれぞれが重合またはゲル化した複数のポリマーおよび/またはモノマーからなるマトリクスを有し、前記複数の硬化粒子のそれぞれが前記第1の核酸の第1のプライマー伸長産物および前記第2の核酸の第2のプライマー伸長産物を含み、前記第1のプライマー伸長産物および前記第2のプライマー伸長産物が前記マトリクス内に包埋または封入されており、前記第1のプライマー伸長産物および前記第2のプライマー伸長産物の拡散が抑制される、ステップと
を含む、方法。
[2]前記第1および前記第2のプライマー伸長産物が、逆転写(RT)産物、第2の鎖合成(SSS)産物、または増幅産物である、[1]に記載の方法。
[3]前記第1および/または前記第2のプライマー伸長産物がアダプター配列を含む、[1]または[2]に記載の方法。
[4]前記アダプター配列が、前記第1または前記第2の核酸分子とハイブリダイズできないか、または相補的ではない、[3]に記載の方法。
[5]前記第1および前記第2のプライマー伸長産物が可変ドメインをコードする、[1]または[4]のいずれかに記載の方法。
[6]前記可変ドメインが、CDR1、CDR2、およびCDR3を含む、[1]に記載の方法。
[7]前記第1および/または前記第2のプライマー伸長産物が、定常ドメインをさらにコードする、[1]~[6]のいずれかに記載の方法。
[8]前記細胞を溶解して前記第1の核酸および前記第2の核酸を放出させるステップをさらに含む、[1]~[7]のいずれかに記載の方法。
[9]前記第1の核酸および前記第2の核酸を逆転写するステップをさらに含む、[1]~[8]のいずれかに記載の方法。
[10]前記逆転写するステップが、RTプライマーを使用することによって実施される、[9]に記載の方法。
[11]前記RTプライマーが拡散抑制剤に連結しており、前記拡散抑制剤が前記マトリクス内の前記RTプライマーの拡散を抑制する、[10]に記載の方法。
[12]鋳型スイッチ反応またはSSS反応を実施するステップをさらに含む、[1]~[11]のいずれかに記載の方法。
[13]前記第1の核酸および前記第2の核酸を増幅させて第1および第2の増幅産物を生成するステップをさらに含む、[1]~[12]のいずれかに記載の方法。
[14]前記第1または前記第2の核酸の各々について、前記増幅させるステップが、第1の増幅プライマーおよび第2の増幅プライマーを使用することによって実施される、[13]に記載の方法。
[15]前記第1の増幅プライマーが拡散抑制剤に連結しており、前記拡散抑制剤が前記マトリクス内の前記第1の増幅プライマーの拡散を抑制する、[14]に記載の方法。
[16]前記複数の硬化粒子を洗浄するステップをさらに含む、[1]~[15]のいずれかに記載の方法。
[17]前記複数の硬化粒子を洗浄して、試薬が前記複数の硬化粒子から拡散することを可能にするステップをさらに含む、[16]に記載の方法。
[18]前記試薬が、RTプライマー、増幅プライマー、鋳型スイッチプライマー、SSSプライマー、またはそれらのいずれかの組合せを含む、[17]に記載の方法。
[19]前記複数の硬化粒子を繰り返し洗浄するステップをさらに含む、[1]~[18]のいずれかに記載の方法。
[20]洗浄するステップの後に油中で前記複数の硬化粒子を乳化し、それによってさらなる複数のベッセルを形成するステップであって、前記さらなる複数のベッセルの各ベッセルが前記複数の硬化粒子の単一の硬化粒子を含む、ステップをさらに含む、[6]~[19]のいずれかに記載の方法。
[21]前記第1および前記第2のプライマー伸長産物が拡散抑制剤に連結している、[1]~[20]のいずれかに記載の方法。
[22]前記拡散抑制剤がポリマーである、[11]~[21]のいずれかに記載の方法。
[23]前記ポリマーが、ポリアクリルアミド、ポリエチレングリコール、または多糖である、[22]に記載の方法。
[24]前記拡散抑制剤が粒子である、[21]に記載の方法。
[25]前記粒子が、前記マトリクスの孔径より大きい直径を有する、[24]に記載の方法。
[26]前記拡散抑制剤が前記マトリクスである、[21]~[25]のいずれかに記載の方法。
[27]前記第1および前記第2のプライマー伸長産物が、捕捉剤を介して前記拡散抑制剤に連結している、[21]~[26]のいずれかに記載の方法。
[28]前記捕捉剤が固定化部分を含む、[27]に記載の方法。
[29]前記固定化部分が、前記捕捉剤を前記拡散抑制剤に連結する、[28]に記載の方法。
[30]前記固定化部分が反応基を含む、[28]または[29]に記載の方法。
[31]前記捕捉剤がターゲティング部分をさらに含む、[27]~[30]のいずれかに記載の方法。
[32]前記ターゲティング部分が捕捉オリゴヌクレオチドである、[31]に記載の方法。
[33]前記第1の増幅プライマーが、前記捕捉オリゴヌクレオチドとハイブリダイズするオリゴヌクレオチド配列を含む、[14]~[32]のいずれかに記載の方法。
[34]前記第1および前記第2の増幅産物が、前記捕捉オリゴヌクレオチドとハイブリダイズするオリゴヌクレオチド配列を含み、それによって前記第1および前記第2の増幅産物を前記捕捉剤に連結し、それによって前記拡散抑制剤に連結する、[14]~[33]のいずれかに記載の方法。
[35]前記第1の増幅産物および前記第2の増幅産物を連結して、前記さらなる複数のベッセルの各ベッセル内に融合二分免疫受容体ポリヌクレオチドを形成し、それによって複数の融合二分免疫受容体ポリヌクレオチドを有する前記融合二分免疫受容体ポリヌクレオチドライブラリーを生成するステップをさらに含む、[20]~[34]のいずれかに記載の方法。
[36]前記第1の増幅産物および前記第2の増幅産物がライゲーションまたはPCRによって連結されている、[35]に記載の方法。
[37]前記第1の増幅産物および前記第2の増幅産物がホスホジエステル結合によって連結して連続ポリヌクレオチドを形成する、[35]または[36]に記載の方法。
[38]前記第1の増幅産物および前記第2の増幅産物がインフレームで連結している、[35]~[37]のいずれかに記載の方法。
[39]前記さらなる複数のベッセルから前記複数の融合二分免疫受容体ポリヌクレオチドを放出させるステップをさらに含む、[35]~[38]のいずれかに記載の方法。
[40]前記複数の各融合二分免疫受容体ポリヌクレオチドを環状化させるステップをさらに含む、[39]に記載の方法。
[41]前記複数の各融合二分免疫受容体ポリヌクレオチドをベクターに挿入するステップをさらに含む、[39]に記載の方法。
[42]前記ベクターが、自己増幅RNAレプリコン、プラスミド、ファージ、トランスポゾン、コスミド、ウイルス、またはビリオンである、[41]に記載の方法。
[43]前記ベクターがウイルスベクターである、[41]に記載の方法。
[44]前記ベクターが非ウイルスベクターである、[41]に記載の方法。
[45]前記二分免疫受容体が、T細胞受容体(TCR)またはB細胞受容体(BCR)である、[1]~[44]のいずれかに記載の方法。
[46]前記TCRが、TCRアルファペプチド鎖およびTCRベータペプチド鎖、またはTCRガンマペプチド鎖およびTCRデルタペプチド鎖を含み、前記BCRが、重ペプチド鎖および軽ペプチド鎖を含む、[45]に記載の方法。
[47]前記細胞が免疫細胞である、[1]~[46]のいずれかに記載の方法。
[48]前記免疫細胞がリンパ球である、[47]に記載の方法。
[49]前記リンパ球がT細胞またはB細胞である、[48]に記載の方法。
[50]前記T細胞が、炎症性T細胞、細胞傷害性T細胞、調節性T細胞、ヘルパーT細胞、ナチュラルキラーT細胞、またはそれらの組合せである、[49]に記載の方法。
[51]前記T細胞が、CD4+T細胞またはCD8+T細胞である、[49]または[50]に記載の方法。
[52]前記B細胞が、形質芽球細胞、形質細胞、リンパ形質細胞様細胞、メモリーB細胞、濾胞性B細胞、辺縁帯B細胞、B-1細胞、B-2細胞、または調節性B細胞である、[49]~[51]のいずれかに記載の方法。
[53]前記免疫細胞が、腫瘍組織または血液試料から単離される、[47]~[52]のいずれかに記載の方法。
[54]前記融合二分免疫受容体ポリヌクレオチドを宿主細胞に送達するステップをさらに含む、[35]~[53]のいずれかに記載の方法。
[55]前記融合二分免疫受容体ポリヌクレオチドライブラリーが、少なくとも50個の異なる融合二分免疫受容体配列を含む、[35]~[54]のいずれかに記載の方法。
[56]前記第1のペプチド鎖および前記第2のペプチド鎖が前記二分免疫受容体の同種対である、[1]~[55]のいずれかに記載の方法。
[57]前記ベッセルが液滴である、[1]~[56]のいずれかに記載の方法。
[58]前記液滴が油中水液滴である、[57]に記載の方法。
[59]前記硬化粒子がヒドロゲル粒子である、[1]~[58]のいずれかに記載の方法。
[60]前記ポリマーが、多糖、ポリアクリルアミド、またはそれらの組合せである、[1]~[59]のいずれかに記載の方法。
[61]前記多糖が、アガロース、ヒアルロン酸、カルボキシメチルセルロース、キトサン、またはアルギネートである、[60]に記載の方法。
[62]前記モノマーが、アクリルアミドまたはメタクリルアミドモノマーである、[1]~[61]のいずれかに記載の方法。
[63]前記重合またはゲル化した複数のポリマーおよび/またはモノマーが、アガロースおよびポリアクリルアミドの混合物を含む、[1]~[62]のいずれかに記載の方法。
[64]前記複数の重合可能またはゲル化可能なポリマーおよび/またはモノマーを重合またはゲル化するステップが、開始剤を使用するステップを含む、[1]~[63]のいずれかに記載の方法。
[65]前記開始剤がUV光または化学物質である、[64]に記載の方法。
[66]前記複数の重合可能またはゲル化可能なポリマーおよび/またはモノマーを重合またはゲル化するステップが、前記ベッセルの温度を低下させるステップを含む、[1]~[65]のいずれかに記載の方法。
[67]標的反応性T細胞受容体(TCR)を同定する方法であって、
(a)複数のTCRを発現する複数のT細胞を準備するステップであって、前記複数のT細胞の各T細胞が、前記複数のTCRのTCRの同種対を発現する、ステップと、
(b)前記複数のT細胞を複数の区画に分配するステップであって、各区画が前記複数のT細胞の個々のT細胞を含む、ステップと、
(c)各区画内で、第1のTCR鎖をコードする第1のポリヌクレオチドおよび前記個々のT細胞の前記TCRの同種対の第2のTCR鎖をコードする第2のポリヌクレオチドを連結させ、それによって複数の融合ポリヌクレオチドを生成するステップであって、(i)前記第1のポリヌクレオチドおよび前記第2のポリヌクレオチドが前記個々のT細胞の内因性核酸の転写産物もしくは増幅産物であるか、または(ii)前記第1のポリヌクレオチドおよび前記第2のポリヌクレオチドがホスホロアミダイトを使用して化学的に合成されていない、ステップと、
(d)前記複数の融合ポリヌクレオチドを複数の細胞に送達するステップであって、前記複数の細胞の各細胞が前記複数の融合ポリヌクレオチドのうちの少なくとも1つの融合ポリヌクレオチドを含む、ステップと、
(e)前記複数の細胞において複数のベクターから前記複数の融合ポリヌクレオチドを発現させるステップであって、前記複数の細胞のサブセットが複数の標的反応性TCRを発現する、ステップと、
(f)前記複数の細胞を1つまたは複数の標的抗原と接触させるステップであって、前記複数の標的反応性TCRを発現する前記複数の細胞のサブセットが前記1つまたは複数の標的抗原に結合する、ステップと、
(g)前記複数の細胞のサブセットの前記複数の標的反応性TCRの標的反応性TCRを同定するステップと
を含む、方法。
[68]送達するステップの前に、前記複数の融合ポリヌクレオチドを含む複数のベクターを生成するステップであって、前記複数のベクターの各ベクターが前記複数の融合ポリヌクレオチドの融合ポリヌクレオチドを含む、ステップをさらに含む、[67]に記載の方法。
[69]前記複数の細胞が複数のレシピエント細胞である、[67]または[68]に記載の方法。
[70]前記内因性核酸が、デオキシリボ核酸(DNA)またはリボ核酸(RNA)である、[67]~[69]のいずれかに記載の方法。
[71]前記DNAがゲノムDNAである、[70]に記載の方法。
[72]前記RNAがメッセンジャーRNAである、[70]または[71]に記載の方法。
[73]接触させるステップが、細胞の集団を、前記1つまたは複数の標的抗原を提示する1つまたは複数の細胞と接触させるステップをさらに含む、[67]~[72]のいずれかに記載の方法。
[74]前記1つまたは複数の細胞が、1つもしくは複数の腫瘍細胞、腫瘍様塊、腫瘍溶解物パルス抗原提示細胞(APC)または前記1つもしくは複数の標的抗原を提示するように操作されたAPCである、[73]に記載の方法。
[75]前記1つまたは複数の標的抗原を提示するように操作された前記1つまたは複数のAPCが、標的抗原をコードするDNAまたはRNAと共に送達される、[74]に記載の方法。
[76]接触させるステップが、前記細胞の集団を腫瘍組織と接触させるステップをさらに含む、[67]~[72]のいずれかに記載の方法。
[77]前記1つまたは複数の標的抗原が、主要組織適合遺伝子複合体(MHC)と複合体を形成している、[67]~[72]のいずれかに記載の方法。
[78]前記MHCがMHC四量体である、[77]に記載の方法。
[79]前記第1のTCR鎖がTCRアルファ鎖であり、前記第2のTCR鎖がTCRベータ鎖である、[67]~[78]のいずれかに記載の方法。
[80]前記第1のTCR鎖がTCRガンマ鎖であり、前記第2のTCR鎖がTCRデルタ鎖である、[67]~[78]のいずれかに記載の方法。
[81]前記複数の細胞が細胞系細胞である、[67]~[80]のいずれかに記載の方法。
[82]前記細胞系細胞が、CHO-K1細胞;HEK293細胞;Caco2細胞;U2-OS細胞;NIH 3T3細胞;NSO細胞;SP2細胞;CHO-S細胞;DG44細胞;K-562細胞、U-937細胞;MRC5細胞;IMR90細胞;Jurkat細胞;HepG2細胞;HeLa細胞;HT-1080細胞;HCT-116細胞;Hu-h7細胞;Huvec細胞;またはMolt4細胞である、[81]に記載の方法。
[83]前記複数の細胞が、対象由来の試料から単離される、[67]~[80]のいずれかに記載の方法。
[84]前記複数のT細胞が、対象由来の試料から単離される、[67]~[82]のいずれかに記載の方法。
[85]前記試料が、腫瘍組織、血液試料、末梢血単核細胞(PBMC)試料、またはそれらの組合せである、[84]に記載の方法。
[86]前記腫瘍組織が多くても約2000mm3である、[85]に記載の方法。
[87]前記血液試料が末梢血単核細胞(PBMC)を含む、[85]に記載の方法。
[88]前記複数のT細胞が、腫瘍浸潤T細胞または末梢T細胞である、[67]~[87]のいずれか一項に記載の方法。
[89]前記複数のT細胞が、CD8+T細胞、CD4+T細胞、疲弊T細胞、調節性T細胞、またはそれらのいずれかの組合せを含む、[67]~[88]のいずれかに記載の方法。
[90]前記複数の細胞のサブセットのうちの少なくとも1つの細胞を単離するステップをさらに含む、[67]~[89]のいずれかに記載の方法。
[91]前記複数の細胞のサブセットのうちの少なくとも1つの細胞がFACSによって単離される、[90]に記載の方法。
[92]前記複数の細胞のサブセットのうちの少なくとも1つの細胞がマーカーに基づいて単離される、[90]または[91]に記載の方法。
[93]前記マーカーが、細胞表面マーカーまたはサイトカインである、[92]に記載の方法。
[94]前記細胞表面マーカーが、CD39、CD69、CD103、CD25、PD-1、TIM-3、OX-40、4-1BB、CD137、CD3、CD28、CD4、CD8、CD45RA、CD45RO、GITR、FoxP3、またはそれらの組合せである、[93]に記載の方法。
[95]前記サイトカインが、IFN-γ、TNF-アルファ、IL-17A、IL-2、IL-3、IL-4、GM-CSF、IL-10、IL-13、グランザイムB、パーフォリン、またはそれらの組合せである、[93]または[94]に記載の方法。
[96](i)前記複数の細胞のサブセットのうちの少なくとも1つの細胞を前記対象に投与するステップまたは(ii)同定された標的反応性TCRを含む自家もしくは同種異系間細胞を前記対象に投与するステップをさらに含む、[67]~[95]のいずれかに記載の方法。
[97]前記自家または前記同種異系間細胞が、前記同定された標的反応性TCRをコードするポリヌクレオチドを含む、[96]に記載の方法。
[98]前記同定された標的反応性TCRをコードするポリヌクレオチドが、前記融合ポリヌクレオチドもしくはその増幅産物であるか、または前記融合ポリヌクレオチドの前記第1のTCR鎖および前記第2のTCR鎖をコードする配列を含む、[97]に記載の方法。
[99]複数の標的反応性T細胞受容体(TCR)を同定する方法であって、
(a)複数のTCRを発現する複数の細胞を準備するステップであって、前記複数の細胞の各細胞が前記複数のTCRのTCRを発現し、前記複数のTCRが少なくとも50個の異なる同種対を含み、複数のV遺伝子由来のV領域を含み、前記複数のTCRが前記複数の細胞に対して外因性である、ステップと、
(b)前記複数の細胞を1つまたは複数の標的抗原と接触させるステップであって、前記複数の標的反応性TCRを発現する前記複数の細胞のサブセットが前記1つまたは複数の標的抗原に結合する、ステップと、
(c)前記複数の細胞のサブセットのうちの少なくとも2つの細胞を同定するステップであって、少なくとも2つの細胞が前記複数の標的反応性TCRのうちの少なくとも2つの標的反応性TCRを発現し、それによって前記複数の標的反応性TCRのうちの前記少な
くとも2つの標的反応性TCRを同定する、ステップと
を含む、方法。
[100]前記複数のV遺伝子が、少なくとも10個の異なるV遺伝子を含む、[99]に記載の方法。
[101]前記複数の細胞が、複数の遺伝子操作された細胞である、[99]または[100]に記載の方法。
[102]前記複数の細胞が、対象由来の試料から単離される、[99]~[101]のいずれかに記載の方法。
[103]前記試料が、組織試料、血液試料、PBMC試料、またはそれらの組合せである、[102]に記載の方法。
[104]前記複数のTCRが、少なくとも100個の異なる同種対を含む、[99]~[103]のいずれかに記載の方法。
[105]前記複数の細胞のサブセットのうちの前記少なくとも2つの細胞を単離するステップをさらに含む、[99]~[104]のいずれかに記載の方法。
[106](b)が、前記複数の細胞を、前記1つまたは複数の標的抗原を提示する1つまたは複数の細胞と接触させるステップを含む、[99]~[105]のいずれかに記載の方法。
[107]前記1つまたは複数の細胞が、1つまたは複数の腫瘍細胞、腫瘍様塊、腫瘍溶解物パルス抗原提示細胞(APC)または前記1つもしくは複数の標的抗原を提示するように操作されたAPCである、[106]に記載の方法。
[108]前記1つまたは複数の標的抗原を提示するように操作された前記1つまたは複数のAPCが、標的抗原をコードするDNAまたはRNAを含む、[107]に記載の方法。
[109](b)が、前記複数の細胞を腫瘍組織と接触させるステップを含む、[99]~[105]のいずれかに記載の方法。
[110](b)が、前記複数の細胞を、主要組織適合遺伝子複合体(MHC)と複合体を形成している前記1つまたは複数の標的抗原と接触させるステップを含む、[99]~[105]のいずれかに記載の方法。
[111]前記MHCがMHC四量体である、[110]に記載の方法。
[112]前記1つまたは複数の標的抗原の配列または同一性が知られていない、[99]~[111]のいずれかに記載の方法。
[113]前記複数の細胞のサブセットのうちの前記少なくとも2つの細胞のうちの少なくとも1つを対象に投与するステップをさらに含む、[99]~[112]のいずれかに記載の方法。
[114]前記複数の細胞の各細胞がレポーター遺伝子を含み、前記細胞のTCRが前記1つまたは複数の標的抗原の標的抗原に結合すると、前記レポーター遺伝子がシグナルを送るように調節される、[99]~[113]のいずれかに記載の方法。
[115]前記複数の細胞が細胞系細胞である、[99]~[114]のいずれかに記載の方法。
[116]前記複数のTCRが、少なくとも100の異なるVJの組合せを含む、[99]~[115]のいずれかに記載の方法。
[117]前記複数のTCRが対象由来の試料からのTCRを含む、[99]~[116]のいずれかに記載の方法。
[118]前記対象が疾患または状態を有する、[117]に記載の方法。
[119]前記複数のTCRが、対象由来の腫瘍浸潤リンパ球を含む試料からのTCRを含む、[99]~[116]のいずれかに記載の方法。
[120]対象におけるがんを治療する方法であって、
(a)複数のTCRを発現する複数のT細胞を準備するステップであって、前記複数のT細胞の各T細胞が前記複数のTCRのTCRの同種対を発現する、ステップと、
(b)前記複数のT細胞を複数の区画に分配するステップであって、各区画が前記複数のT細胞の個々のT細胞を含む、ステップと、
(c)各区画内で、第1のTCR鎖をコードする第1のポリヌクレオチドおよび前記個々のT細胞の前記TCRの同種対の第2のTCR鎖をコードする第2のポリヌクレオチドを連結させ、それによって複数の融合ポリヌクレオチドを生成するステップであって、(i)前記第1のポリヌクレオチドおよび前記第2のポリヌクレオチドが前記個々のT細胞の内因性核酸の転写産物もしくは増幅産物であるか、または(ii)前記第1のポリヌクレオチドおよび前記第2のポリヌクレオチドがホスホロアミダイトを使用して化学的に合成されていない、ステップと、
(d)前記複数の融合ポリヌクレオチドを複数の細胞に送達するステップであって、前記複数の細胞の各細胞が前記複数の融合ポリヌクレオチドのうちの少なくとも1つの融合ポリヌクレオチドを含む、ステップと、
(e)前記複数の細胞において前記複数の融合ポリヌクレオチドを発現させるステップであって、前記複数の細胞のサブセットが、前記複数の融合ポリヌクレオチドのサブセットから複数の標的反応性TCRを発現する、ステップと、
(f)前記複数の融合ポリヌクレオチドのサブセットから前記複数の標的反応性TCRを同定するステップと、
(g)前記複数の融合ポリヌクレオチドのサブセットの1つまたは複数の融合ポリヌクレオチドまたはその誘導体を複数のレシピエント細胞に送達するステップであって、前記複数のレシピエント細胞の各細胞が、前記複数の融合ポリヌクレオチドのサブセットの前記1つまたは複数の融合ポリヌクレオチドまたはその誘導体のうちの少なくとも1つを含む、ステップと、
(h)(i)前記複数のレシピエント細胞のうちの少なくとも1つのレシピエント細胞を前記対象に投与するステップ、または(ii)前記複数のレシピエント細胞のうちの少なくとも2つのレシピエント細胞を前記対象に投与するステップであって、前記少なくとも2つのレシピエント細胞が異なるTCRを発現する、ステップと
を含む、方法。
[121]前記複数のT細胞が、腫瘍浸潤T細胞または末梢T細胞である、[120]に記載の方法。
[122]前記複数のT細胞が、CD8+T細胞、CD4+T細胞、疲弊T細胞、調節性T細胞、またはそれらのいずれかの組合せを含む、[120]または[121]に記載の方法。
[123]前記複数のT細胞が、in vitroで活性化され、および/または増殖する、[120]~[122]のいずれかに記載の方法。
[124]前記複数の融合ポリヌクレオチドが複数のベクターにおいて送達され、前記複数のベクターの各ベクターが、前記複数の融合ポリヌクレオチドの融合ポリヌクレオチドを含む、[120]~[123]のいずれかに記載の方法。
[125](d)における送達するステップの前に、前記複数のベクターを生成するステップをさらに含む、[124]に記載の方法。
[126](f)における同定するステップが、前記複数の細胞を1つまたは複数の標的抗原と接触させるステップであって、前記複数の標的反応性TCRを発現する前記複数の細胞のサブセットが、前記1つまたは複数の標的抗原に結合する、ステップを含む、[120]~[125]のいずれかに記載の方法。
[127]前記1つまたは複数の標的抗原が、1つまたは複数の腫瘍細胞、抗原提示細胞(APC)、または人工APC(aAPC)によって提示される、[126]に記載の方法。
[128]前記1つまたは複数のAPCまたはaAPCが、(i)前記1つもしくは複数の標的抗原によってパルスされるか、または(ii)標的抗原をコードするDNAもしくはRNAを含む、[127]に記載の方法。
[129]前記1つまたは複数の抗原の各抗原が、主要組織適合遺伝子複合体(MHC)と複合体を形成している、[126]に記載の方法。
[130]前記MHCがMHC四量体である、[129]に記載の方法。
[131](g)における送達するステップの前に、前記複数の細胞のサブセットの1つまたは複数の細胞を単離するステップをさらに含む、[120]~[130]のいずれかに記載の方法。
[132]前記対象から前記複数のTCRを発現する前記複数のT細胞を単離するステップをさらに含む、[120]~[131]のいずれかに記載の方法。
[133]投与するステップが、前記複数のT細胞を単離してから多くても約60日後に実施される、[132]に記載の方法。
[134]前記複数のレシピエント細胞が、同種異系間細胞、自家細胞、または細胞系細胞である、[120]~[133]のいずれかに記載の方法。
[135]前記複数の細胞が、遺伝子操作された細胞または細胞系細胞である、[120]~[134]のいずれかに記載の方法。
[136](h)の前に、前記複数のレシピエント細胞を増殖させるステップをさらに含む、[120]~[135]のいずれかに記載の方法。
[137]前記誘導体が、前記1つまたは複数の融合ポリヌクレオチドの配列を含む、[120]~[136]のいずれかに記載の方法。
[138]前記誘導体が、前記1つまたは複数の融合ポリヌクレオチドの増幅産物または合成産物である、[120]~[137]のいずれかに記載の方法。
[139]対象における腫瘍を治療する方法であって、
(a)複数のT細胞受容体(TCR)を発現する前記対象から複数のT細胞を単離するステップであって、前記複数のT細胞の各T細胞が、内因性核酸から前記複数のTCRのTCRの同種対を発現し、前記複数のTCRが複数の腫瘍反応性TCRを含む、ステップと、
(b)前記複数のTCRから前記複数の腫瘍反応性TCRを同定するステップと、
(c)前記複数の腫瘍反応性TCRまたはそのサブセットをコードするポリヌクレオチドを複数のレシピエント細胞に送達するステップであって、前記複数のレシピエント細胞の各レシピエント細胞が、前記複数の腫瘍反応性TCRまたはそのサブセットをコードするポリヌクレオチドのうちの少なくとも1つのポリヌクレオチドを含み、(i)前記ポリヌクレオチドが前記内因性核酸の転写産物もしくは増幅産物であるか、または(ii)前記ポリヌクレオチドがホスホロアミダイトを使用して化学的に合成されていない、ステップと、
(d)前記複数のレシピエント細胞において前記複数の腫瘍反応性TCRまたはそのサブセットを発現させるステップと、
(e)(i)前記複数のレシピエント細胞のうちの少なくとも1つのレシピエント細胞を前記対象に投与するステップ、または(ii)前記複数のレシピエント細胞のうちの少なくとも2つのレシピエント細胞を前記対象に投与するステップであって、前記少なくとも2つのレシピエント細胞が異なるTCRを発現する、ステップと
を含む、方法。
[140]ホスホロアミダイトを使用した前記複数の腫瘍反応性TCRまたはそのサブセットをコードするポリヌクレオチドの化学合成を含まない、[139]に記載の方法。
[141]前記複数のT細胞が、腫瘍浸潤T細胞または末梢T細胞である、[139または140]に記載の方法。
[142]前記複数のT細胞が、CD8+T細胞、CD4+T細胞、疲弊T細胞、調節性T細胞、またはそれらのいずれかの組合せを含む、[139]~[141]のいずれかに記載の方法。
[143]前記複数のレシピエント細胞が、同種異系間T細胞、自家T細胞、または細胞系細胞である、[139]~[142]のいずれかに記載の方法。
[144](b)の前に、複数のレポーター細胞において前記複数のTCRを発現させるステップをさらに含む、[139]~[143]のいずれかに記載の方法。
[145]発現させるステップが、ウイルスベクターによって前記複数のTCRをコードする核酸配列を送達するステップを含む、[144]に記載の方法。
[146]前記ウイルスベクターがレンチウイルスベクターである、[145]に記載の方法。
[147]前記複数のレポーター細胞の各レポーター細胞がレポーター遺伝子を含む、[144]~[146]のいずれかに記載の方法。
[148](b)において、同定するステップが、前記複数のTCRを、1つもしくは複数の標的抗原、または1つもしくは複数の標的抗原を提示する細胞もしくは組織と接触させるステップを含む、[144]~[147]のいずれかに記載の方法。
[149]前記1つまたは複数の標的抗原が、1つまたは複数の腫瘍細胞、抗原提示細胞(APC)、人工APC(aAPC)によって提示される、[148]に記載の方法。
[150]前記1つまたは複数のAPCまたはaAPCが、標的抗原をコードするDNAまたはRNAを含む、[149]に記載の方法。
[151]前記1つまたは複数の標的抗原がMHCと複合体を形成している、[148]に記載の方法。
[152]前記MHCがMHC四量体である、[151]に記載の方法。
[153]前記複数のTCRの前記複数の腫瘍反応性TCRが、TCRの少なくとも2つの異なる同種対を含む、[144]~[152]のいずれかに記載の方法。
[154]前記複数の腫瘍反応性TCRの各TCRが、異なるエピトープまたは異なるタンパク質に特異的である、[144]~[153]のいずれかに記載の方法。
[155]前記複数の腫瘍反応性TCRの各TCRが、異なる(i)TCRアルファCDR3配列、(ii)TCRベータCDR3可変ドメイン配列、(iii)TCRアルファ可変ドメイン配列、(iv)TCRベータ可変ドメイン配列、または(v)TCRアルファおよびTCRベータ可変ドメイン配列の組合せを含む、[144]~[154]のいずれかに記載の方法。
[156]前記複数の腫瘍反応性TCRが、前記対象由来の腫瘍細胞に結合するが、前記対象由来の健康な細胞に結合しないか、または前記腫瘍細胞に対してより少なくとも10倍低い親和性で前記対象由来の健康な細胞に結合する、[144]~[155]のいずれかに記載の方法。
[157](e)において投与される前記複数のレシピエント細胞が、(a)において単離される前記複数のT細胞より少なくとも10倍多い細胞を含む、[144]~[156]のいずれかに記載の方法。
[158]対象における腫瘍を治療する方法であって、
(a)T細胞受容体(TCR)の集団を発現する前記対象からT細胞の集団を単離するステップであって、前記T細胞の集団が多くても約10,000個の細胞を含む、ステップと、
(b)前記TCRの集団から複数の腫瘍反応性TCRを同定するステップと、
(c)前記複数の腫瘍反応性TCRまたはそのサブセットを発現する複数の細胞を前記対象に投与するステップであって、前記複数の腫瘍反応性TCRまたはそのサブセットが少なくとも2個の異なる同種対を含む、ステップと
を含む、方法。
[159]対象における腫瘍を治療する方法であって、
(a)TCRの集団から複数の腫瘍反応性T細胞受容体(TCR)を同定するステップであって、前記TCRの集団がTCRの少なくとも50個の異なる同種対を含む、ステップと、
(b)前記複数の腫瘍反応性TCRまたはそのサブセットを発現する複数の細胞を前記対象に投与するステップであって、前記複数の腫瘍反応性TCRまたはそのサブセットが、少なくとも50個の異なる同種対のうちの少なくとも5個の異なる同種対を含み、前記複数の腫瘍反応性TCRが前記複数の細胞に対して外因性である、ステップと
を含む、方法。
[160]対象における腫瘍を治療する方法であって、
(a)TCRの集団から同定された複数の腫瘍反応性TCRを発現する複数の細胞を前記対象に投与するステップであって、前記TCRの集団がTCRの少なくとも50個の異なる同種対を含み、前記複数の腫瘍反応性TCRまたはそのサブセットが、前記少なくとも50個の異なる同種対のうちの少なくとも5個の異なる同種対を含み、前記複数の腫瘍反応性TCRが前記複数の細胞に対して外因性である、ステップ
を含む、方法。
[161]前記複数の腫瘍反応性TCRまたはそのサブセットが少なくとも5個のTCRを含み、前記少なくとも5個のTCRの各TCRが、(1)異なるエピトープもしくは異なるタンパク質に特異的であるか、または(2)異なる(i)TCRアルファCDR3配列、(ii)TCRベータCDR3可変ドメイン配列、(iii)TCRアルファ可変ドメイン配列、(iv)TCRベータ可変ドメイン配列、もしくは(v)TCRアルファおよびTCRベータ可変ドメイン配列の組合せを含む、[159]または[160]に記載の方法。
[162](a)の前に、前記対象から前記TCRの集団を発現するT細胞の集団を単離するステップをさらに含む、[159]~[161]のいずれかに記載の方法。
[163]前記少なくとも50個の異なる同種対が、少なくとも5個の異なるV遺伝子由来のV領域を含む、[159]~[162]のいずれかに記載の方法。
[164]同定するステップが、マーカーによって前記複数の腫瘍反応性TCRを単離するステップを含む、[159]~[163]のいずれかに記載の方法。
[165]前記複数の腫瘍反応性TCRまたはそのサブセットを発現する前記複数の細胞が、複数の同種異系間細胞、自家細胞または細胞系細胞である、[159]~[164]のいずれかに記載の方法。
[166]前記複数の同種異系間細胞が、抑制性ナチュラルキラー(NK)細胞受容体に結合するタンパク質を発現する、[165]に記載の方法。
[167]前記タンパク質が、B2M-HLA-EまたはB2M-HLA-G融合タンパク質である、[166]に記載の方法。
[168]標的反応性T細胞受容体(TCR)を同定するための方法であって、
(a)第1の試料由来の複数のT細胞を、対象由来の腫瘍細胞を含む第2の試料または第3の試料と接触させるステップであって、前記第3の試料が前記第2の試料に由来し、前記第3の試料が、
(i)前記第2の試料の前記腫瘍細胞由来の標的抗原または前記標的抗原をコードする核酸、およびMHC、
(ii)MHCにおける前記標的抗原を提示する細胞、または
(iii)MHCを含む細胞および前記核酸によってコードされるタンパク質産物
を含み、
前記複数のT細胞のサブセットが、前記MHCと複合体を形成している前記標的抗原に
結合する、ステップと、
(b)前記第1の試料の前記複数のT細胞のサブセットまたはその一部を単離するステップと、
(c)前記複数のT細胞のサブセットまたはその一部を複数の区画に分配するステップであって、各区画が前記複数のT細胞のサブセットまたはその一部の個々のT細胞を含む、ステップと、
(d)各区画内で、第1のTCR鎖をコードする第1のポリヌクレオチドおよび前記個々のT細胞のTCRの同種対の第2のTCR鎖をコードする第2のポリヌクレオチドを同定し、それによって1つまたは複数の対合ポリヌクレオチドを生成するステップと
を含む、方法。
[169]同定するステップが、前記第1のTCR鎖をコードする前記第1のポリヌクレオチドおよび前記個々のT細胞のTCRの同種対の前記第2のTCR鎖をコードする前記第2のポリヌクレオチドを物理的に連結させるステップを含む、[168]に記載の方法。
[170]前記1つまたは複数の対合ポリヌクレオチドが、1つまたは複数の融合ポリヌクレオチドである、[168]または[169]に記載の方法。
[171]同定するステップが、シークエンシングによって前記第1のTCR鎖をコードする前記第1のポリヌクレオチドおよび前記個々のT細胞のTCRの同種対の前記第2のTCR鎖をコードする前記第2のポリヌクレオチドを連結させるステップを含む、[168]に記載の方法。
[172]前記第1のポリヌクレオチドおよび前記第2のポリヌクレオチドが、ホスホロアミダイトを使用して化学的に合成されていない、[168]~[170]のいずれかに記載の方法。
[173]前記第1のポリヌクレオチドおよび前記第2のポリヌクレオチドが、前記個々のT細胞の内因性核酸の転写産物または増幅産物である、[168]~[170]のいずれかに記載の方法。
[174]前記第1の試料または前記第2の試料が対象から単離される、[168]~[173]のいずれかに記載の方法。
[175]前記第1の試料および前記第2の試料が同じ対象から単離される、[168]~[174]のいずれかに記載の方法。
[176]前記第1の試料および前記第2の試料が異なる対象から単離される、[168]~[174]のいずれかに記載の方法。
[177]前記第1の試料または前記第2の試料が、組織試料、血液試料、PBMC試料、またはそれらの組合せである、[168]~[176]のいずれかに記載の方法。
[178]前記組織試料が、腫瘍組織または健康な組織である、[177]に記載の方法。
[179]前記第1の試料または前記第2の試料が、コア生検、細針生検、またはアフェレーシスによって対象から単離される、[168]~[178]のいずれかに記載の方法。
[180]単離するステップが、マーカーによって前記複数のT細胞のサブセットまたはその一部を単離するステップを含む、[168]~[179]のいずれかに記載の方法。
[181]前記マーカーが、細胞表面マーカーまたはサイトカインである、[180]に記載の方法。
[182]前記細胞表面マーカーが、CD39、CD69、CD103、CD25、PD-1、TIM-3、OX-40、4-1BB、CD137、CD3、CD28、CD4、CD8、CD45RA、CD45RO、GITR、FoxP3、またはそれらの組合せである、[181]に記載の方法。
[183]前記標的抗原を提示する細胞が、腫瘍細胞、抗原提示細胞(APC)、または人工APC(aAPC)である、[168]~[181]のいずれかに記載の方法。
[184]前記APCまたは前記aAPCが、前記標的抗原によりパルスされる、[183]に記載の方法。
[185]前記核酸によってコードされるタンパク質産物を含む細胞が、前記核酸またはその誘導体と共に送達されるAPCまたはaAPCである、[168]~[184]のいずれかに記載の方法。
[186]前記APCまたは前記aAPCが、前記MHCをコードするさらなる核酸と共にさらに送達される、[185]に記載の方法。
[187]前記核酸またはその誘導体がDNAまたはRNAである、[185または186]に記載の方法。
[188]前記標的抗原を提示する細胞または前記核酸によってコードされるタンパク質産物を含む細胞が、対象から単離されるか、または細胞系細胞である、[168]~[187]のいずれかに記載の方法。
[189]前記標的抗原を提示する細胞または前記核酸によってコードされるタンパク質産物を含む細胞が、前記第1の試料および前記第2の試料が単離される同じ対象から単離される、[188]に記載の方法。
[190]前記1つまたは複数の融合ポリヌクレオチドを含む1つまたは複数のベクターを生成するステップであって、前記1つまたは複数のベクターの各ベクターが、前記1つまたは複数の融合ポリヌクレオチドの融合ポリヌクレオチドを含む、ステップをさらに含む、[168]~[189]のいずれかに記載の方法。
[191]前記1つまたは複数のベクターを複数の細胞に送達するステップであって、前記複数の細胞の各細胞が前記1つまたは複数のベクターのうちの少なくとも1つのベクターを含む、ステップをさらに含む、[190]に記載の方法。
[192]前記複数の細胞において前記1つまたは複数の融合ポリヌクレオチドを発現させるステップであって、前記複数の細胞のサブセットが複数の標的反応性TCRを発現する、ステップをさらに含む、[191]に記載の方法。
[193]前記複数の細胞を1つまたは複数の標的抗原と接触させるステップであって、前記複数の標的反応性TCRを発現する前記複数の細胞のサブセットが前記1つまたは複数の標的抗原に結合する、ステップをさらに含む、[192]に記載の方法。
[194]前記複数の標的反応性TCRの1つまたは複数の標的反応性TCRを同定するステップをさらに含む、[193]に記載の方法。
[195]前記1つまたは複数の標的反応性TCRをコードするポリヌクレオチドを複数のレシピエント細胞に送達するステップをさらに含む、[194]に記載の方法。
[196]前記複数のレシピエント細胞の1つまたは複数の細胞を前記対象に投与するステップをさらに含む、[195]に記載の方法。
[197][67]~[116および168]~[196]のいずれかに記載の方法によって同定される標的反応性または腫瘍反応性TCRをコードする配列を含むレシピエント細胞を含む医薬組成物。
[198][197]に記載の医薬組成物を、それを必要とする対象に投与するステップを含む、レシピエント細胞を投与する方法。
[0035]一部の実施形態では、方法は、複数の各融合二分免疫受容体ポリヌクレオチドを環状化させるステップをさらに含む。一部の実施形態では、方法は、複数の各融合二分免疫受容体ポリヌクレオチドをベクターに挿入するステップをさらに含む。一部の実施形態では、ベクターは、自己増幅RNAレプリコン、プラスミド、ファージ、トランスポゾン、コスミド、ウイルス、またはビリオンである。一部の実施形態では、ベクターはウイルスベクターである。一部の実施形態では、ウイルスベクターは、レトロウイルス、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、アルファウイルス、ワクシニアウイルス、B型肝炎ウイルス、ヒトパピローマウイルスまたはそれらの偽型に由来する。一部の実施形態では、ベクターは非ウイルスベクターである。一部の実施形態では、非ウイルスベクターは、ナノ粒子、カチオン性脂質、カチオン性ポリマー、金属性ナノポリマー、ナノロッド、リポソーム、ミセル、マイクロバブル、細胞透過性ペプチド、またはリポスフィアである。一部の実施形態では、二分免疫受容体はT細胞受容体(TCR)またはB細胞受容体(BCR)である。一部の実施形態では、TCRは、TCRアルファペプチド鎖およびTCRベータペプチド鎖、またはTCRガンマペプチド鎖およびTCRデルタペプチド鎖を含み;BCRは、重ペプチド鎖および軽ペプチド鎖を含む。一部の実施形態では、細胞は免疫細胞である。一部の実施形態では、免疫細胞はリンパ球である。一部の実施形態では、リンパ球はT細胞またはB細胞である。一部の実施形態では、T細胞は、炎症性T細胞、細胞傷害性T細胞、調節性T細胞、ヘルパーT細胞、ナチュラルキラーT細胞、またはそれらの組合せである。一部の実施形態では、T細胞は、CD4+T細胞またはCD8+T細胞である。一部の実施形態では、B細胞は、形質芽球細胞、形質細胞、リンパ形質細胞様細胞、メモリーB細胞、濾胞性B細胞、辺縁帯B細胞、B-1細胞、B-2細胞、または調節性B細胞である。一部の実施形態では、免疫細胞は、腫瘍組織または血液試料から単離される。一部の実施形態では、方法は、融合二分免疫受容体ポリヌクレオチドを宿主細胞に送達するステップをさらに含む。一部の実施形態では、融合二分免疫受容体ポリヌクレオチドライブラリーは、少なくとも50個、少なくとも100個、少なくとも200個、少なくとも500個、少なくとも1,000個、少なくとも10,000個、少なくとも100,000個、少なくとも1,000,000個、または少なくとも10,000,000個の異なる融合二分免疫受容体配列を含む。一部の実施形態では、第1のペプチド鎖および第2のペプチド鎖は二分免疫受容体の同種対である。一部の実施形態では、ベッセルは液滴である。一部の実施形態では、液滴は油中水液滴である。一部の実施形態では、硬化粒子はヒドロゲル粒子である。一部の実施形態では、ポリマーは、多糖、ポリアクリルアミド、またはそれらの組合せである。一部の実施形態では、多糖は、アガロース、ヒアルロン酸、カルボキシメチルセルロース、キトサン、またはアルギネートである。一部の実施形態では、モノマーは、アクリルアミドまたはメタクリルアミドモノマーである。一部の実施形態では、重合またはゲル化した複数のポリマーおよび/またはモノマーは、アガロースおよびポリアクリルアミドの混合物を含む。一部の実施形態では、重合またはゲル化した複数のポリマーおよび/またはモノマーは架橋されている。一部の実施形態では、複数の重合可能またはゲル化可能なポリマーおよび/またはモノマーを重合またはゲル化するステップは、開始剤を使用するステップを含む。一部の実施形態では、開始剤はUV光または化学物質である。一部の実施形態では、複数の重合可能またはゲル化可能なポリマーおよび/またはモノマーを重合またはゲル化するステップは、ベッセルの温度を低下させるステップを含む。
[0072]本明細書に言及されている全ての刊行物、特許、および特許出願は、各個々の刊行物、特許、または特許出願が、具体的かつ個々に参照により組み込まれることが示された場合と同程度まで参照により本明細書に組み込まれる。参照により組み込まれる刊行物および特許または特許出願が本明細書に含まれる開示と矛盾する場合、本明細書が、いずれかのそのような矛盾する事項に優先し、および/または矛盾する事項より優位になることが意図される。
[00114]「約」または「およそ」という用語は、当業者によって決定される特定の値についての許容可能な誤差の範囲内を意味し、これは、値がどのように測定または決定されるか、すなわち、測定システムの制限に部分的に依存する。例えば、「約」は、当該技術分野における慣行に従い、1以内または1を超える標準偏差を意味し得る。あるいは、「約」は、所与の値の最大20%、最大10%、最大5%、または最大1%の範囲を意味し得る。あるいは、特に、生物システムまたはプロセスに関して、この用語は、値の1桁以内、好ましくは5倍以内、より好ましくは2倍以内を意味し得る。特定の値が本出願および特許請求の範囲において記載される場合、別段の記載がない限り、特定の値についての許容可能な誤差の範囲内を意味する「約」という用語を想定すべきである。
[00131]本明細書で使用される場合、「配列」という用語およびその文法的等価物は、ポリペプチド配列またはポリヌクレオチド配列を指すことができる。ポリヌクレオチド配列はDNAまたはRNAであってもよく;線状、環状または分枝状であってもよく;一本鎖または二本鎖のいずれかであってもよい。配列は突然変異されてもよい。配列は、任意の長さ、例えば、2から1,000,000の間またはそれより多くのアミノ酸またはヌクレオチドの長さ(またはそれらの間もしくはそれらを上回る任意の整数値)、例えば、約100から約10,000の間のヌクレオチドまたは約200から約500の間のアミノ酸もしくはヌクレオチドであってもよい。核酸の配列は実際の配列および配列の逆相補的配列を包含し得る。
[00140]免疫受容体、例えば、B細胞受容体(BCR)およびT細胞受容体(TCR)は、複数のサブユニットまたは鎖によって形成され得る。BCR(およびBCRの可溶型、すなわち抗体)分子は、重鎖(H鎖)の2つの同一のコピーおよび軽鎖(L鎖)の2つの同一のコピーによって形成され得る。TCR分子は、アルファ鎖(TRA遺伝子/配列によってコードされるα鎖またはTCRα鎖)およびベータ鎖(TRB遺伝子/配列によってコードされるβ鎖またはTCRβ鎖)、またはガンマ鎖(TRG遺伝子/配列によってコードされるγ鎖またはTCRγ鎖)およびデルタ鎖(TRD遺伝子/配列によってコードされるδ鎖またはTCRδ鎖)によって形成され得る。これらの免疫受容体鎖は可変ドメイン(例えば、再配列VDJまたはVJ領域によってコードされる)を有することができる。可変ドメインの一部は超可変であってもよい。超可変領域は、相補性決定領域(CDR)、例えば、CDR1、CDR2およびCDR3を含むことができる。一部の場合、1つのB細胞内で、1つのみの機能的H鎖配列および1つの機能的L鎖配列が発現され得る。一部の場合、1つのT細胞内で、1つのみの機能的α鎖配列および1つの機能的β鎖配列が発現され得る。一部の場合、1つのT細胞内で、1つのみの機能的γ鎖配列および1つの機能的δ鎖配列が発現され得る。
T細胞受容体(TCR)
[00143]本明細書に記載される免疫受容体はT細胞受容体(TCR)であってもよい。本明細書に提供される組成物および方法は、TCRα鎖をコードする第1の核酸配列およびTCRβ鎖をコードする第2の核酸配列、またはTCRγ鎖をコードする第1の核酸配列およびTCRδ鎖をコードする第2の核酸配列を含む融合TCRポリヌクレオチドを産生するために使用され得る。融合TCRポリヌクレオチドはプロモーターをさらに含むことができ、および/またはレシピエント細胞内で発現されるようにベクターに挿入され得る。
B細胞受容体(BCR)および抗体
[00150]本明細書に記載される免疫受容体はB細胞受容体(BCR)であってもよい。一部の実施形態では、本明細書に記載される免疫受容体は抗体(または免疫グロブリン)である。本明細書に提供される組成物および方法は、重鎖をコードする第1の核酸配列および軽鎖をコードする第2の核酸配列を含む融合BCRまたは抗体ポリヌクレオチドを産生するために使用され得る。融合二分BCRまたは抗体ポリヌクレオチドはプロモーターをさらに含むことができ、および/またはレシピエント細胞内で発現されるようにベクターに挿入され得る。
[00154]抗体は、抗原結合性断片(Fab)および断片結晶化可能領域(Fc)を含むことができる。Fc領域は、抗体が免疫系を活性化することを可能にし得る細胞表面受容体と相互作用することができる。IgG、IgAおよびIgD抗体アイソタイプでは、Fc領域は、抗体の2つの重鎖の第2および第3の定常ドメインに由来する、2つの同一のタンパク質断片からなり;IgMおよびIgE Fc領域は、各ポリペプチド鎖における3つの重鎖定常ドメイン(CHドメイン2~4)を含有する。IgGのFc領域は高度に保存されたN-グリコシル化部位を有する。Fc断片のグリコシル化は、Fc受容体媒介性活性に必須であり得る。この部位に付着したN-グリカンは主に複合型のコアフコシル化二分岐(diantennary)構造であり得る。抗体断片の例には、限定されないが、(1)VL、VH、CLおよびCH1ドメインからなる一価断片である、Fab断片、(2)ヒンジ領域にてジスルフィド架橋によって連結した2つのFab断片を含む二価断片である、F(ab’)2断片、(3)抗体の単一アームのVLおよびVHドメインからなるFv断片、(4)穏やかな還元性条件を使用したF(ab’)2断片のジスルフィド架橋の切断によって生じる、Fab’断片、(5)ジスルフィド安定化Fv断片(dsFv)、および(6)特異的に抗原に結合する抗体単一可変ドメイン(VHまたはVL)ポリペプチドである、単一ドメイン抗体(sdAb)が含まれる。
[00159]融合二分免疫受容体ポリヌクレオチドのライブラリーを産生するための組成物および方法が本明細書に提供される。融合二分免疫受容体ポリヌクレオチドは、単一細胞由来の二分免疫受容体をコードする2つのV(D)J再配列遺伝子のコード配列を含むことができる。単一細胞反応器は、単一細胞から融合二分免疫受容体ポリヌクレオチドを産生するために使用され得る。本明細書に記載される方法の例示的なスキームは図2に示される。単一細胞反応器(図2の影付きの構造によって概念的に示される)を使用することによって、誤対合を引き起こし得る、異なる細胞由来の異なる免疫受容体鎖をコードする核酸分子間の接触(すなわち、細胞間配列接触)が最小化され得る。例えば、図2に示されるように、TCRα鎖1をコードする核酸分子(TRA1)は、TCRβ鎖2をコードする核酸分子(TRB2)と接触することはできない。
[00162]単一細胞反応器は障壁を有することができ、その障壁は、異なる単一細胞反応器の含有物が互いに接触することを制限する。
[00169]種々の種類の固体支持体および種々の付着化学物質が、単一細胞由来の目的の分子が安定に会合され得る固体支持体を提供するために使用されてもよい。本開示は、任意の特定の種類の固体支持体材料または構成に限定されることを意図するものではない。
[00176]固体支持体はヒドロゲルを含むことができる。固体支持体はヒドロゲル粒子であってもよい。ヒドロゲルは既存の方法を使用してヒドロゲル粒子になり得る。例えば、ヒドロゲルのゾル状態または前駆体は油中水エマルジョンになり得る。水滴は、「油中ヒドロゲル」エマルジョンを生じるようにゲル状態に(例えば、前駆体の重合によって、またはアガロースなどの熱可逆性ヒドロゲルの温度を低下させることによって)変化され得る。前駆体の重合は、光によって、または油相に開始剤もしくは促進剤(例えば、TEMED)を加えることによって引き起こされ得る。このエマルジョンは、水溶液中に懸濁されたヒドロゲル粒子を生じるように解乳化され得る。
[00189]一部の場合、重合可能またはゲル化可能なポリマーおよび/またはモノマーを含む水溶液は、重合または非重合機構を介してマトリクスを形成することによってヒドロゲルに変換され得る。このプロセスはゲル化と呼ばれる。このような水溶液が区画の含有物である場合、ゲル化プロセスによって形成されるヒドロゲルはヒドロゲル粒子であり得る。区画(例えば、マイクロウェルまたは油中水液滴)の水相中の含有物から形成されるヒドロゲル粒子は、硬化粒子と称される。
[00195]目的の分子は、静電相互作用または物理的封入を介するなどの非特異的な様式で固体支持体に付着され得る。例えば、カルボキシル分子でさらにコーティングされる、磁石の層によって囲まれたポリスチレン製の固相可逆的固定化(SPRI)ビーズは、「クラウディング剤(crowding agent)」ポリエチレングリコール(PEG)および塩(例えば、20%PEG、2.5M)の存在下でポリヌクレオチドに安定に結合することができる。同様に、シリカビーズは、グアニジウムの存在下でポリヌクレオチドに安定に結合することができる。様々に、正電荷ビーズはポリヌクレオチドに結合することが記載されている。封入の例として、固体支持体がヒドロゲルであり、目的の分子がヒドロゲルの孔径より大きい流体力学半径を有する場合、目的の分子は、物理的封入によってヒドロゲルベースの固体支持体に付着され得る。
[00197]本明細書に提供される組成物または方法は捕捉剤を含むことができる。捕捉剤は、単一細胞反応器内の目的の分子(標的分子と同義語)を固定化または封入するためのアンカーとして機能することができる。一方で、捕捉剤は標的分子に結合することができる。他方で、捕捉剤は、それ自体の拡散を抑制するために固体支持体と会合することができ、その結果、次に標的分子の拡散が制限される。一部の実施形態では、捕捉剤はヒドロゲルのフレームワーク内で拡散抑制剤に連結している。標的分子は、核酸鋳型またはそのコピー、例えば、免疫受容体鎖をコードする核酸またはそのコピーであってもよい。
[00209]固体支持体がヒドロゲルを含む場合、捕捉剤の固定化部分は、ヒドロゲルまたは拡散抑制剤を支持するポリマーフレームワーク(例えば、マトリクス)に付着され得る。
[00219]一部の場合、捕捉剤は、ヒドロゲル内に捕捉剤を封入するために拡散抑制剤に固定化され得る。
[00225]一部の実施形態では、単一細胞反応器は目的の分子を含む。一部の実施形態では、目的の分子は目的の核酸である。一部の実施形態では、目的の分子は固体支持体に付着される。一部の実施形態では、目的の核酸は固体支持体に付着される。一部の実施形態では、単一細胞反応器は第1の核酸および第2の核酸を含むことができる。一部の実施形態では、単一細胞反応器は、第1の核酸および第2の核酸が付着される固体支持体を含むことができる。付着は安定な付着であってもよい。付着は可逆的付着であってもよい。
[00230]単一細胞反応器の水相は、基質として核酸を使用する酵素を含むことができる。これらの酵素の例には、DNAポリメラーゼ、RNAポリメラーゼ、逆転写酵素、制限酵素、エンドヌクレアーゼ、エキソヌクレアーゼ、USERミックス(New England Biolabs)における酵素、リガーゼが含まれる。
[00233]一部の実施形態では、異なる試薬が、同時ではなく、規定された順序で同じ細胞に由来する標的分子に接触するように作製され得る。同様に、一部の実施形態では、いくつかの試薬または反応副産物は、次の反応が起こる前に除去され得る。例えば、溶解緩衝剤が細胞を溶解するために添加されてもよく(図2、パネル(b))、逆転写酵素および熱安定性DNAポリメラーゼが、mRNAを逆転写し(RT)、PCR増幅させるために添加されてもよい(図2、パネル(c))。この状況では、溶解緩衝剤はRTおよび/またはPCRを阻害する場合があり、RT-PCRステップの前に除去されることを必要とし得る。本開示の一部の態様はこれらの目標を達成するための方法を提供する。
免疫受容体をコードするポリヌクレオチドにより改変された固体支持体
[00241]本開示は、免疫受容体をコードするポリヌクレオチドにより改変された複数の固体支持体を提供する。一部の実施形態では、固体支持体(例えば、ビーズまたはマイクロウェルの壁)は1つの細胞からの標的ポリヌクレオチド(「単一細胞充実性」と呼ばれる特徴)を含有する。標的ポリヌクレオチドは免疫受容体をコードするポリヌクレオチドであってもよい。免疫受容体はTCRまたはBCRであってもよい。
[00258]固体壁付き区画の水性含有物が硬化粒子に変換されると、硬化粒子は、固体足場を変形させること、固体足場を溶解させること、ベッセルの開口によって硬化粒子を誘導させるために遠心力を使用すること、またはそれらの組合せによって区画から除去され得る。
[00260]本開示は、単一の生体粒子に由来する第1および第2の免疫受容体をコードするポリヌクレオチドにより各々改変された複数の固体支持体を得るための方法を提供する。一部の実施形態では、第1および第2のポリヌクレオチドは、上流の共通配列(例えば、TSO配列)および下流の共通配列(例えば、C領域に結合するプライマーの配列)の両方を有する。この場合、これらの固体支持体は予備増幅または融合のために直接使用され得る。
[00266]第1の核酸配列および第2の核酸配列を含む融合二分免疫受容体ポリヌクレオチドを産生するための組成物および方法が本明細書に提供される。第1の核酸配列は第1の免疫受容体鎖をコードすることができ、第2の核酸配列は第2の免疫受容体鎖をコードすることができる。第1の免疫受容体鎖および第2の免疫受容体鎖は機能的免疫受容体の受容体を形成することができる。第1の免疫受容体鎖および第2の免疫受容体鎖をコードする核酸配列は単一細胞由来であり得る。第1の免疫受容体鎖および第2の免疫受容体鎖は、細胞(例えば、免疫細胞)から得られた免疫受容体の同種対の組合せ(または自然に対合した組合せ)由来であり得る。第1および/または第2の核酸配列は、免疫受容体の完全長可変ドメイン(例えば、3つ全てのCDR:CDR1、CDR2およびCDR3を含む)をコードすることができる。第1および/または第2の核酸配列は、CDR1、CDR2およびCDR3からなる群から選択される1つまたは複数のCDRを含む部分的可変ドメインをコードすることができる。第1および/または第2の核酸配列は、免疫受容体の定常ドメインをさらにコードすることができる。定常ドメインは、完全長定常ドメイン、または細胞外定常ドメイン、または完全長定常ドメインの任意の部分であってもよい。一部の場合、融合二分免疫受容体ポリヌクレオチドは、少なくとも600、少なくとも700、少なくとも800、少なくとも900、少なくとも1000、少なくとも1200、少なくとも1500、またはそれより多くのヌクレオチド(または塩基対)長である。一部の場合、融合二分免疫受容体ポリヌクレオチドは、少なくとも1000、少なくとも1500、少なくとも2000、少なくとも2500、またはそれより多くのヌクレオチド(または塩基対)長である。一部の場合、融合二分免疫受容体ポリヌクレオチドは、600~1000または1500~3000ヌクレオチド(または塩基対)長である。
[00268]融合反応の前に、二分免疫受容体ペプチド鎖の各々をコードする標的核酸が増幅され得、これは「予備増幅」と称される。予備増幅は、調製手順および増幅手順を含む、2つの手順を含むことができる。調製手順の間、1つまたは複数の反応が、増幅前に、共通配列(例えば、アダプター配列)を有するオリゴヌクレオチドを標的核酸に付加するために実施され得る。例えば、調製手順は、アダプターを用いて新たに合成される産物を生成するためにアダプター配列を有するプライマーを使用した標的核酸の核酸合成を含むことができる。アダプターは、標的核酸とハイブリダイズできなくてもよいか、または相補的でなくてもよい。本明細書で使用される場合、「ハイブリダイズできる」とは、所与の条件下で2つの核酸鎖の間に安定な塩基対合を形成することを指す。アダプターは所定の配列を含むことができ、増幅手順のためのプライマーを結合するために使用され得る。一部の場合、調製手順後、新たに合成された産物は、各末端に1つのアダプター配列を有する2つのアダプター配列を含む。
[00282]二分免疫受容体の2つのペプチド鎖をコードする2つの核酸は、いくつかの配向、例えば、頭-頭、頭-尾、および尾-尾で融合され得る(図3)。本明細書に記載されるように、「頭」はセンス核酸鎖の「5’末端」を指し、「尾」はセンス核酸鎖の「3’末端」を指す。一部の場合、配向は頭-尾であり、融合の順序(例えば、TRAの後にTRB、またはTRBの後にTRA)が制御され得る。このような制御性を達成するために、配列依存性融合が実施され得る。これを行うために、重複配列が2つの鎖の増幅産物内で操作され得る。本明細書に記載されるように、TCRのTRAおよびTRBポリヌクレオチドの融合は、異なるストラテジーを説明するための例として使用される。このストラテジーは、BCR鎖融合、抗体鎖融合およびTCRγδ鎖融合に適用され得る。
[00283]図4Aおよび4Bは、TCR免疫受容体のTRAおよびTRBの尾-尾(tail-to-tail)融合の例を示す。TRAセグメントの増幅に関して、TRAのC領域を認識するプライマー(すなわち、TRAC)がリバースプライマーとして使用され得る。TRACを認識するこのプライマーの配列は、[TRAC-5A*}と表記され得る。[OL-2*}で表記される約10ntの配列は[TRAC-5A*}の5’末端に付加されて、配列[OL-2*|TRAC-5A*}を有する「1R」と表記されるプライマーを形成することができる。同様に、TRBセグメントの増幅に関して、TRBのC領域を認識するプライマー(すなわち、TRBC)がリバースプライマーとして使用され得る。TRBCを認識するこのプライマーの配列は、[TRBC-5A*}と表記される。[OL-1}で表記される約10ntの配列は[TRBC-5A*}の5’末端に付加されて、配列[OL-1|TRBC-5A*}を有する、本発明者らが「2R」と呼ぶプライマーを形成することができる。この設計では、[OL-1*}は[TRAC-5A*}の最初の約10塩基であり、[OL-2}は[TRBC-5A*}の最初の約10塩基である。したがって、TRA増幅産物のセンス鎖の最後の約20塩基は[OL-1|OL-2}の配列を有することができ、TRB増幅産物のセンス鎖の最後の約20塩基は[OL-2*|OL-1*}の配列を有することができる。5’-3’エキソヌクレアーゼ(例えば、Gibson Assembly)、3’-5’エキソヌクレアーゼ(例えば、配列およびリガーゼ非依存性クローニングまたはSLIC)、またはUSER酵素ミックス(例えば、USERフレンドリーDNA組換え(USER friendly DNA recombination)またはUSERec)を使用して長い付着末端を作り出した後、2つの末端はライゲーションによって融合され得る。アセンブリ方法のさらなる例には、限定されないが、環状ポリメラーゼ伸長クローニング(CPEC)およびシームレスライゲーションクローニング抽出物(SLiCE)アセンブリが含まれる。あるいは、これらの2つの末端はオーバーラップPCRによって融合され得る。尾-尾配向においてTRAおよびTRBを融合するためのストラテジーの詳細な説明は実施例1にさらに提供される。
[00284]図5A~5Cは、TCR免疫受容体のTRAおよびTRBポリヌクレオチドの頭-尾(head-to-tail)融合の例を示す。本明細書に記載されるように、アダプター含有V遺伝プライマー-は、SSSの間、アダプター配列をV遺伝子配列に付加するために使用され得る。頭-尾融合を実施するために、[AdptA}および[AdptB}で表記される2つの異なるアダプター配列は、それぞれTRAおよびTRBについてのアダプター配列として使用され得る。TRAの後にTRBの順序で頭-尾融合を作り出すために、配列[TRAC-5A*}を有するTRAを増幅させるためのリバースプライマーには、[htOL-2*}と呼ばれる配列が付加されて、配列[htOL-2*|TRAC-5A*}を有する「ht1R」で表記されるプライマーを形成することができる。同時に、[htOL-1}と呼ばれる配列には、配列[AdptB}を有するプライマーが付加されて、配列[htOL-1|AdptB}を有する「ht2F」で表記される新しいプライマーを形成することができる。このプライマー「ht2F」は、TRBを増幅させるためのフォワードプライマーであってもよい。この設計では、[htOL-1*}は[TRAC-5A*}の最初の約10塩基であり得、[htOL-2}は[AdptB}の最初の約10塩基であり得る。TRAおよびTRBの増幅産物は、単一細胞反応器内でのライゲーションおよびオーバーラップPCRなどの様々なストラテジーによって融合され得、単一細胞に由来する免疫受容体をコードする配列を有する増幅産物は固体支持体に付着され、各単一細胞反応器内に1つの固体支持体のみが存在する。これらの単一細胞反応器内で、増幅産物は本明細書に提供される方法(例えば、固体支持体を融解すること)を使用して自由に拡散可能に作製され得る。例えば、2つの末端は、5’-3’エキソヌクレアーゼ(例えば、Gibson Assembly)、3’-5’エキソヌクレアーゼ(例えば、配列およびリガーゼ非依存性クローニングまたはSLIC)、またはUSER酵素ミックス(例えば、USERフレンドリーDNA組換えまたはUSERec)を使用して長い付着末端を作り出した後、ライゲーションによって融合され得る。アセンブリ方法のさらなる例には、限定されないが、環状ポリメラーゼ伸長クローニング(CPEC)およびシームレスライゲーションクローニング抽出物(SLiCE)アセンブリが含まれる。頭-尾配向において、およびTRAの後にTRBの順序でTRAおよびTRBを融合するためのストラテジーの詳細な説明は実施例2にさらに提供される。
[00285]融合二分免疫受容体ポリヌクレオチドは、本開示において「レシピエント細胞」と称される宿主細胞において発現されるように発現ベクターに挿入され得る。融合二分免疫受容体ポリヌクレオチドは、線形または環状核酸鎖としてレシピエント細胞に送達され得る。融合二分免疫受容体ポリヌクレオチドは、発現ベクターとしてレシピエント細胞に送達され得る。一部の場合、融合二分免疫受容体ポリヌクレオチドまたはベクターは電気穿孔によってレシピエント細胞に送達され得る。一部の場合、融合二分免疫受容体ポリヌクレオチドまたはベクターは、カチオン性ポリマーなどの担体によって送達され得る。
[00298]融合二分免疫受容体ポリヌクレオチドが本明細書に記載される方法を使用して作り出され得るソース免疫受容体発現細胞は、種々の生物由来の種々の細胞型であってもよく、種々の組織または臓器から単離されてもよい。ソース免疫受容体発現細胞は種々の試料から得られ得る。ソース免疫受容体発現細胞は、BCR、TCRおよび抗体などの免疫受容体を産生することができる。ソース免疫受容体発現細胞は免疫細胞であってもよい。免疫細胞とは、先天性および/または適応免疫応答の開始および/または実行に機能的に関与する造血起源の細胞を指す。ソース免疫受容体発現細胞は、リンパ球、例えば、腫瘍浸潤リンパ球(TIL)であってもよい。
[00304]ソース免疫受容体発現細胞は、種々の試料から得られ得るか、または単離され得る。ソース免疫受容体発現細胞は、種々の試料から得られるか、または単離される免疫細胞であってもよい。試料は、本明細書に記載される種々の供給源または対象から得られ得る。レシピエント細胞もまた、本明細書に記載される試料から得られ得る。
[00318]T細胞は対象から得られてもよい(例えば、初代T細胞)。一部の場合、ソースTCR発現細胞は対象から得られる。T細胞は本明細書に記載される任意の試料から得られてもよい。一部の場合、レシピエントT細胞は対象から得られる。「対象」という用語は、免疫応答が誘発され得る生物(例えば、哺乳動物)を含むことを意図する。対象の例には、ヒト、イヌ、ネコ、マウス、ラットおよびそれらのトランスジェニック種が含まれる。T細胞は、末梢血単核細胞、骨髄、リンパ節組織、臍帯血、胸腺組織、感染部位由来の組織、腹水、胸水、脾臓組織および腫瘍を含む、多くの供給源から得られてもよい。ある特定の態様では、T細胞系が使用されてもよい。T細胞は、ヘルパーT細胞、細胞傷害性T細胞、メモリーT細胞、調節性T細胞、ナチュラルキラーT細胞、アルファベータT細胞またはガンマデルタT細胞であってもよい。本開示のある特定の態様では、T細胞は、Ficoll(商標)分離などの様々な技術を使用して対象から収集された血液単位から得られてもよい。個体の循環血液由来の細胞はアフェレーシスによって得られてもよい。アフェレーシス産物は、T細胞、単球、顆粒細胞、B細胞、他の有核白血球、赤血球および血小板を含む、リンパ球を含有することができる。アフェレーシスによって収集された細胞は、血漿画分を除去するため、およびその後の処理ステップのために適切な緩衝剤または培地に細胞を入れるために洗浄され得る。一部の場合、細胞はリン酸緩衝食塩水(PBS)で洗浄され得る。洗浄溶液は、カルシウムもしくはマグネシウムまたは他の二価カチオンを欠いていてもよい。カルシウムの不在化での最初の活性化ステップは拡大された活性化をもたらし得る。洗浄ステップは、製造業者の指示書に従って半自動化「フロースルー」遠心分離機(例えば、Cobe 2991 セルプロセッサー、Baxter CytoMate、またはHaemonetics Cell Saver 5)を使用することのような方法によって達成され得る。洗浄後、細胞は、例えば、Caフリー、MgフリーPBS、PlasmaLyte A、または緩衝剤を有するもしくは有さない他の食塩水溶液などの様々な生体適合性緩衝剤に再懸濁され得る。あるいは、アフェレーシス試料の望ましくない成分が除去され得、細胞は培養培地中に直接再懸濁され得る。
[00329]本明細書に記載される融合二分免疫受容体ポリヌクレオチドを含有する発現ベクターは、免疫受容体プログラムレシピエント細胞を作り出すために新たな宿主細胞(本開示において「レシピエント細胞」と称される)に導入され得る。異なる目的のために、異なる種類の免疫受容体が異なる種類のレシピエント細胞に導入されてもよい。例えば、抗体は、発現のために様々な初代細胞(例えば、B細胞)または細胞系(例えば、HeLa細胞、CHO細胞)に導入されてもよい。例えば、TCRはT細胞に新たな特異性を与えるためにT細胞に導入されてもよい。免疫受容体プログラムレシピエント細胞は、標的分子または細胞を感知する(例えば、認識または結合する)ために新たに導入された免疫受容体を使用することができる。例えば、標的分子は抗原またはその断片であってもよい。標的分子はペプチドであってもよい。標的分子はエピトープであってもよい。
[00330]レシピエント細胞は、「試料」の節に記載されるように試料から得られ得る。レシピエント細胞としてのT細胞は、「T細胞の供給源」の節に記載されるように供給源由来であってもよい。レシピエント細胞は、T細胞、B細胞、NK細胞、マクロファージ、好中球、顆粒球、好酸球、赤血球、血小板、幹細胞、iPSCまたは間充織幹細胞であってもよい。さらに、レシピエント細胞は細胞系細胞であってもよい。細胞系は腫瘍形成性または人工的に不死化された細胞系であってもよい。細胞系の例には、限定されないが、CHO-K1細胞;HEK293細胞;Caco2細胞;U2-OS細胞;NIH3T3細胞;NSO細胞;SP2細胞;CHO-S細胞;DG44細胞;K-562細胞、U-937細胞;MRC5細胞;IMR90細胞;Jurkat細胞;HepG2細胞;HeLa細胞;HT-1080細胞;HCT-116細胞;Hu-h7細胞;Huvec細胞;およびMolt4細胞が含まれる。レシピエント細胞は自家T細胞または同種異系間T細胞であってもよい。レシピエント細胞は、遺伝子修飾されたまたは操作された細胞であってもよい。
[00331]免疫受容体発現ベクターをT細胞に移入する前であるか後であるかにかかわらず、T細胞は、例えば、米国特許第6,352,694号;同第6,534,055号;同第6,905,680号;同第6,692,964号;同第5,858,358号;同第6,887,466号;同第6,905,681号;同第7,144,575号;同第7,067,318号;同第7,172,869号;同第7,232,566号;同第7,175,843号;同第5,883,223号;同第6,905,874号;同第6,797,514号;同第6,867,041号;および米国特許出願公開第20060121005号に記載される方法を一般的に使用して活性化され、増殖され得る。T細胞はin vitroまたはin vivoで増殖され得る。
ミスアセンブリの阻止
[00340]一部の場合、免疫受容体発現ベクターは内因性二分免疫受容体を発現するレシピエント細胞に導入され得る。このような場合、内因性免疫受容体と外因性免疫受容体との間のミスアセンブリが阻止され得る。例えば、TCR発現ベクターがT細胞に導入される場合、内因性(ゲノム由来)TCR鎖および外因性(ベクター由来)TCR鎖の両方が発現され得る。したがって、内因性アルファ鎖が外因性ベータ鎖と二量体を形成し得、その結果、望ましくないTCR(すなわち、ミスアセンブリしたTCR)を生じる可能性がある。同様の状況がBCRプログラムB細胞において発生する場合がある。種々の方法が、免疫受容体鎖の定常ドメインを操作すること、または免疫受容体をコードする内因性遺伝子をノックアウト/ダウンすること、例えば、ジスルフィド結合を操作すること(Kuball 2007)、ドメインスワッピング(Bethune 2016)、RNA干渉によるノックダウン(Bunse 2014)、遺伝子ノックアウト(Provasi 2012)、TCRの一部をマウス化すること(murinizing)、一本鎖としてTCRを発現すること(UckertおよびSchumacher、2009)、およびTCR-CAR構築物においてTCRを発現すること(Walsengら、2017)によってこのようなミスアセンブリを最小化するために使用され得る。
[00346]一部の場合、改変されたTCRβ鎖が、キメラ抗原受容体(CAR)に使用されるものと同様の人工シグナル伝達ドメイン、すなわち、CD28膜貫通(TM)コード配列、続く2つのシグナル伝達モジュール(CD28およびCD3ζ)に融合され得る。同時に、改変されたTCRα鎖はTCRαの細胞外ドメインのみを含有することができる。さらに、システイン置換が、TCR二量体の安定性を増加させるためにTCRα鎖およびTCRβ鎖の定常ドメイン(C-ドメイン)において実施され得る。この構築物は、「TCR-CAR」と称される。このようなTCR-CARは、NK細胞などの非T細胞においてシグナル伝達することができる。
[00350]一部の場合、免疫受容体プログラムレシピエント細胞は、PD1およびCTLA-4などの免疫チェックポイントタンパク質をコードする不活性遺伝子を含む。これは、PD1およびCTLA-4などの免疫チェックポイントタンパク質をコードする遺伝子の不活性化によって可能になり得る。一部の場合、遺伝子修飾は、PD1、CTLA-4、LAG3、Tim3、BTLA、BY55、TIGIT、B7H5、LAIR1、SIGLEC10、2B4からなる群から選択される1つの遺伝子または2つの遺伝子の不活性化に依存する。一部の場合、遺伝子修飾は、B2MなどのMHC成分のノックアウトを含むことができる。本明細書に記載される遺伝子はまた、例えば、マイクロRNAによって下方制御され得る。
[00351]免疫受容体プログラムレシピエント細胞は、これらの細胞の機能を向上させるためにさらなる作用物質(例えば、タンパク質またはRNA)を発現するように操作され得る。例えば、機能は、細胞傷害機能、炎症誘発機能または抗炎症機能であってもよい。一部の場合、免疫受容体プログラムレシピエント細胞は、抗腫瘍効果を向上させるためにさらなる作用物質を発現するように操作され得る。一部の場合、さらなる作用物質は分泌タンパク質である。分泌タンパク質は、サイトカインもしくは抗体またはそれらの断片であってもよい。一部の場合、分泌タンパク質はサイトカインである。一部の場合、分泌タンパク質は一本鎖可変断片(scFv)である。分泌タンパク質は抑制分子を阻害することができ、その抑制分子は免疫エフェクター応答を開始する免疫細胞の能力を減少させる。分泌タンパク質は炎症誘発性サイトカインまたは抗炎症性サイトカインであってもよい。炎症誘発性サイトカインの例には、限定されないが、腫瘍壊死因子アルファ(TNFα);インターロイキン(IL)-1α;IL-1β;IL-2;IL-5;IL-6;IL-8;IL-15;IL-18;インターフェロン(IFN-γ);血小板活性化因子(PAF);単球走化性タンパク質1および2(MCP-1、MCP-2);マクロファージ遊走阻止因子(MIF);CXCL8;CXCL9;CXCL10;および高移動度群ボックスタンパク質1(HMGB-1)が含まれる。抗炎症性サイトカインの例には、限定されないが、IL-1ra、IL-4、IL-10、IL-11、IL-13、形質転換増殖因子ベータ(TGF-β)およびIL-16が含まれる。一部の場合、さらなる作用物質はRNAである。一部の場合、さらなる作用物質はRNAをコードするDNAであってもよい。RNAは、ガイドRNA、マイクロRNAまたは小ヘアピンRNA(shRNA)であってもよい。RNAは抑制分子の転写または翻訳を阻害することができる。抑制分子の例には、PD1、PD-L1、CTLA4、TIM3、LAG3、VISTA、BTLA、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4およびTGFRベータが含まれる。一部の場合、RNAは、TCRα鎖、TCRβ鎖、ベータ-2ミクログロブリン、HLA分子、CTLA-4、PD1およびFASを含む外因性遺伝子の遺伝子発現を下方制御することができる。これらの抑制分子をコードする外因性遺伝子はまた、本明細書に記載される遺伝子編集方法によってノックアウトされてもよい。
適用
[00355]本明細書に記載されるように、ソース免疫受容体発現細胞のポリクローナル集団は、免疫受容体プログラムレシピエント細胞のポリクローナル集団に変換され得、免疫受容体プログラムレシピエント細胞の操作された免疫受容体レパートリーは、ソース免疫受容体発現細胞の天然の免疫受容体レパートリー(例えば、免疫受容体鎖の同種対の組合せ)を含むことができる。多くの免疫受容体の二分性質は、従来技術ではこのタスクを困難にする。本明細書に提供される方法はこれらの困難を克服するために使用され得る。ソース免疫受容体発現細胞を使用することより、免疫受容体プログラムレシピエント細胞を使用するいくつかの利点が存在し得る。例えば、免疫受容体プログラムレシピエント細胞は、より多くの数で調製され得、より理想的な機能特性を有することができ、より理想的なエピジェネティック状態であり得、より均一な遺伝的または表現型バックグラウンドを有することができ、抗腫瘍効果を向上させるためにさらなる作用物質を発現するように操作され得、または選択を補助するためにレポーター遺伝子を発現するように操作され得る。免疫受容体プログラムレシピエント細胞は多くの分野において多くの適用に使用され得る。
[00356]ソース免疫受容体発現細胞がB細胞である場合、得られる融合二分免疫受容体ポリヌクレオチドライブラリーは、様々な抗体をコードするライブラリーであり得る。このライブラリーは、所望の特徴を有する抗体を見つけるためにスクリーニングされ得る。所望の特徴は、特定の標的タンパク質への結合または標的細胞におけるある特定の細胞応答の誘発を含むことができる。抗体発見のために、プライマーおよびリンカー配列が、当業者によって行われ得る、scFv構築物の必要性に適合するように再設計され得ることを除いて、融合BCR遺伝子は実施例に記載される同様のストラテジーを使用して一本鎖Fv構築物(scFv)およびscFv発現ベクターに変換され得る。ソース免疫受容体発現細胞は、形質芽球、形質細胞、リンパ形質細胞性細胞、メモリーB細胞、濾胞性B細胞、辺縁帯B細胞、B-1細胞、B-2細胞または調節性B細胞であってもよい。
[00357]抗体発現ベクターまたはscFv発現ベクターは、ファージディスプレイ、酵母ディスプレイ、哺乳動物細胞ディスプレイおよびmRNAディスプレイなどの従来のスクリーニング技術と共に使用され得る。さらに、抗体発現ベクターライブラリーは、操作された抗体発現レシピエント細胞のライブラリーを産生するためにB細胞株(例えば、Raji細胞)に導入され得る。これらの細胞は、Eyerら、2017およびMazutizら、2013に記載される表現型スクリーニングに使用され得、抗体発現レシピエント細胞は動物から直接単離されたB細胞に置き換えることができる。
[00358]抗体発現ベクターライブラリーはまた、表面受容体の機能のためのレポーター回路により操作された哺乳動物細胞に導入され得る。受容体アゴニストである抗体の直接選択が達成され得る。例えば、レンチウイルスの形態の抗体発現ベクターのライブラリーが、受容体アゴニストまたはアンタゴニスト抗体が求められる受容体に結合している蛍光レポーター系を含有する真核細胞を感染させるために使用され得る。この方法の実施形態では、非常に多数の候補抗体を発現するレンチウイルスおよび真核レポーター細胞が、各々が複製できる形式で一緒にパッケージ化され得るので、遺伝子型と表現型との間の直接的な相関を構築する。拡散抑制構成での(例えば、軟寒天または液滴中での)感染およびインキュベーション後、変化した蛍光(おそらく、抗体発現ベクターによってコードされる分泌抗体の作用に起因する)を示す細胞が保存され得、アゴニストまたはアンタゴニスト抗体をコードする統合遺伝子が回収され得る。インキュベーションは、適切なバックグラウンドシグナル伝達を提供するために同種リガンドまたは受容体の既知のアゴニストもしくはアンタゴニスト抗体の存在下であり得る。この系は、完全なトロンボポエチン表現型コピーである有効な抗体アゴニストを迅速に生成するその能力を例示することによって立証されている(Hongkai Zhangら、Chemistry & biology 20(5):734~741、2013年5月)。この系は、その活性化が選択可能な表現型の産生に関連付けられ得る任意の経路に一般化可能であり得る。
[00359]本明細書に記載される方法は、ヒトドナー由来のB細胞および形質細胞レパートリーから得たDNAライブラリーから組換えポリクローナル抗体を調製するために使用され得る。組換えポリクローナル抗体はある特定の疾患を処置するために使用され得る。例えば、免疫不全の患者は、数千のヒトドナーからプールされる血漿試料に由来する血漿ベースの薬物製品により処置され得る。このような製品の例には、静脈内免疫グロブリン(IVIG)および過免疫、特定の病原体に対する高力価の抗体を有するドナーの血漿から調製されるIVIGのバリエーションが含まれる。過免疫は、急性感染症を処置するため、または臓器移植後などの、免疫不全患者における感染症を阻止するために使用され得る。組換えポリクローナル抗体は現在の血漿ベースの製品を置き換えるために使用され得る。組換えポリクローナル抗体は血漿由来の等価物より高い効力を有するように操作され得る。
[00360]免疫受容体-プログラムレシピエント細胞を患者に投与し、様々な疾患を治療することができる。一部の実施形態では、免疫受容体-プログラムレシピエント細胞は、ポリクローナル免疫受容体-プログラムレシピエント細胞である。
[00361]多くの腫瘍が、腫瘍微小環境内に浸潤した大量のT細胞を有し、これらの腫瘍浸潤T細胞(TIT)の多くが、腫瘍発現抗原を認識するTCRを有し得る。これらのTITは、腫瘍反応性T細胞であり得る。TITによって認識される抗原は、ネオ抗原、腫瘍特異的抗原または腫瘍関連抗原であり得る。これらの抗原は、野生型配列または変異型配列であり得る。がんを治療する一般的な戦略は、これらのTITの数および/または活性を増大するものであり得る。この戦略を実施する1つの特異的なアプローチは、TITのex vivoでの増殖であり得る。しかしながら、このアプローチは、多くの制限を有し得る。例えば、いくつかのTITは、一部、慢性的な抗原暴露により、ひどく疲弊した表現型を示し得る。これらのT細胞は、わずかにしか増殖させることができない。さらに、外科的に除去された腫瘍から単離された少ないT細胞から患者の体へと再注入するのに十分多くの数(数億または数十億個の細胞さえも必要な場合がある)へと増殖するのには非常に長い時間がかかることがある。単一細胞シークエンシングの近年の進歩により可能になった代替の方法は、ひどく疲弊した細胞を含む、これらの腫瘍浸潤T細胞から対合TCR配列を得ることである。次に、これらのTCR配列を合成し、TCR発現ベクターを得ることができる。また、これらのベクターを、多くの新鮮な宿主T細胞(例えば、CAR-Tのために宿主細胞を調製する工程と同様に、患者の末梢血から単離された後にex vivoで増殖)に導入し、TCR-T細胞を産生することができる。しかしながら、DNA合成の限界により、一度にわずかな(例えば、100より少ない、または50より少ない)ユニークTCR発現ベクターしか作製することができない。言い換えると、TCR-T細胞は、限定的な外因性TCRレパートリーを有し得る。
[00376]がんを治療する「キラー」細胞の作製に加えて、自己免疫疾患を治療する「ヒーラー」細胞も作製し得る。抗原特異的調節性T細胞は、キメラ抗原受容体(CAR)をTreg細胞(Jelena Skuljecら、Chimeric Antigen Receptor-Redirected Regulatory T Cells Suppress Experimental Allergic Airway Inflammation、a Model of Asthma、Front Immunol.2017年;8:1125)に導入することによって作製することができる。組織に特異的なTCRを、本明細書に記載の方法を使用してTreg細胞に導入することができ(培養および操作方法を含む)、これらの細胞をホームに誘導し、特定の組織または臓器を保護する。供給源免疫受容体発現細胞は、組織常在性のT細胞から得ることができ、公知の組織特異的抗原に対して選択することができる。ここで、組織特異的抗原は、細胞内または細胞表面結合され得る。これらのTCR-Treg細胞は、さらに操作し、本明細書に記載のそれらの免疫調節活性を増大するさらなる因子(例えば、サイトカインまたは他の調節性分子)を発現させることができる。そのようなさらなる因子の例は、抗炎症性サイトカイン、例えばIL-1ra、IL-4、IL-10、IL-11、IL-13、形質転換増殖因子ベータ(TGF-β)、およびIL-16を含む。
[00377]T細胞は、特定のMHC結合抗原を認識するTCRを同定するため、複数の臓器、例えば末梢血、脾臓、リンパ節、および腫瘍(ここでは、本開示の他の箇所の記載と一貫するように、「供給源TCR発現細胞」と総称する)からスクリーニングされ得る。本明細書に記載の方法を使用して得られたポリクローナルTCRプログラムレシピエント細胞は、これらの適用において供給源TCR発現細胞を置き換えることができる。これらの適用では、レシピエント細胞は、細胞系細胞、例えば細胞系T細胞であり得る。細胞系T細胞の例は、限定はされないが、Jurkat、CCRF-CEM、HPB-ALL、K-T1、TALL-1、MOLT16/17、およびHUT78/H9を含む。細胞系T細胞の内在性TCRは、本明細書に記載のようにノックアウトまたはノックダウンされ得る。
[00391]本開示は、融合免疫受容体ポリヌクレオチドを含む組成物、融合免疫受容体ポリヌクレオチドを含有する発現ベクター、または融合免疫受容体ポリヌクレオチドおよび/または発現ベクターを含む宿主細胞を提供する。本開示は、融合免疫受容体ポリヌクレオチドを生成する核酸を含有する複数のヒドロゲル粒子を含む組成物も提供する。
[00420]本開示は、本明細書に記載の融合二分免疫受容体ポリヌクレオチドを作製または使用する方法を提供する。様々な方法および適用を提供する。
[00439]一部の実施形態では、本明細書は、液体中で実施する方法であって、:(a)複数の少なくとも2つの液滴が単一細胞を含む、複数の液滴を形成するステップ;(b)単一細胞由来の第1の核酸分子にハイブリダイズした第1のオリゴヌクレオチドを伸長し、それによって第1の伸長産物を形成するステップ;および単一細胞由来の第2の核酸分子にハイブリダイズした第2のオリゴヌクレオチドを伸長し、それによって第2の伸長産物を形成するステップ;(c)第1の伸長産物またはそれらの逆相補鎖を、第1のプライマーおよび第2のプライマーを含む第1のプライマーセットによって増幅し、それによって第1の増幅産物のセットを形成するステップ;ならびに第2の伸長産物またはそれらの逆相補鎖を、第3のプライマーおよび第4のプライマーを含む第2のプライマーセットによって増幅し、それによって第2の増幅産物のセットを形成するステップ;ならびに(d)第1の増幅産物のセットの増幅産物を第2の増幅産物のセットの増幅産物に連結するステップであって、連結するステップが第2および第4のプライマーの不在下での液体中で連結するステップを含む、ステップ、を含む、方法を提供する。
処置レジメン
[00447]処置レジメンで使用される細胞(例えば、免疫受容体プログラムレシピエント細胞)が本明細書に開示され得る。例えば、対象は、がんまたは疾患の処置のための処置レジメンの一部として細胞を受けることができる。処置レジメンは:いくつか挙げると、外科的処置、化学療法、放射線照射、免疫抑制剤、免疫刺激薬、抗真菌剤、抗ウイルス薬、抗生物質、または制吐薬を含み得る。いくつかの場合では、骨髄移植、フルダラビンなどの化学療法剤、外部ビーム放射線療法(XRT)、シクロホスファミド、またはOKT3もしくはCAMPATHなどの抗体を使用するT細胞除去療法と共に(例えば、前、同時、または後に)、細胞組成物を対象に投与することができる。いくつかの場合では、増殖させた細胞を外科的処置の前または後に投与することができる。外科的処置は、いくつかの場合では、腫瘍切除であり得る。外科的処置を実施して、TILまたはTITを単離することができる。
[00451]いくつかの場合では、免疫刺激薬を、細胞または対象に導入することができる。免疫刺激薬は、特異的または非特異的であり得る。特異的免疫刺激薬は、ワクチンまたは抗原など、抗原特異性を提供することができる。非特異的免疫刺激薬は、免疫応答を増加させるまたは免疫応答を刺激することができる。非特異的免疫刺激薬は、アジュバントであり得る。免疫刺激薬は、ワクチン、コロニー刺激剤、インターフェロン、インターロイキン、ウイルス、抗原、共刺激剤、免疫原性薬剤、免疫モジュレーター、または免疫療法剤であり得る。免疫刺激薬は、インターロイキンなどのサイトカインであり得る。1つまたは複数のサイトカインが、本開示の細胞と共に導入することができる。サイトカインは、細胞傷害性Tリンパ球(養子移入させる腫瘍特異的細胞傷害性Tリンパ球を含む)をブーストして、腫瘍微小環境内で増殖させるのに用いることができる。いくつかの場合では、IL-2を使用して、本明細書に記載の細胞の増殖を促進することができる。IL-15などのサイトカインも用いることができる。例えばIL-2、IL-7、IL-12、IL-15、IL-21、またはそれらの任意の組合せなど、免疫療法の分野において妥当である、他の関連サイトカインも利用することができる。いくつかの場合では、IL-2、IL-7、およびIL-15を使用して、本開示の細胞を培養する。インターロイキンは、IL-2、またはアルデスロイキン(aldeskeukin)であり得る。アルデスロイキンは、低用量または高用量で投与され得る。高用量アルデスロイキンレジメンは、寛容性を示す限り、最大約14回用量、約0.037mg/kg(600,000IU/kg)で、8時間ごとに静脈内にアルデスロイキンを投与するステップを含み得る。免疫刺激薬(例えば、アルデスロイキン)は、細胞投与後24時間以内に投与され得る。免疫刺激薬(例えば、アルデスロイキン)は、細胞注入後、最大約4日間、約8時間ごとの約15分間にわたる注入として投与され得る。免疫刺激薬(例えば、アルデスロイキン)は、約100,000IU/kg、約200,000IU/kg、約300,000IU/kg、約400,000IU/kg、約500,000IU/kg、約600,000IU/kg、約700,000IU/kg、約800,000IU/kg、約900,000IU/kg、または最大約1,000,000IU/kgの用量で投与され得る。いくつかの場合では、アルデスロイキンは、約100,000IU/kg~約300,000IU/kg、約300,000IU/kg~約500,000IU/kg、約500,000IU/kg~約700,000IU/kg、約700,000IU/kg~約1,000,000IU/kgの用量で投与され得る。免疫刺激薬(例えば、アルデスロイキン)は、1用量~約14用量で投与され得る。免疫刺激薬(例えば、アルデスロイキン)は、少なくとも約1用量、2回用量、3回用量、4回用量、5回用量、6回用量、7回用量、8回用量、9回用量、10回用量、11回用量、12回用量、13回用量、14回用量、15回用量、16回用量、17回用量、18回用量、19回用量、または最大約20用量で投与され得る。いくつかの場合では、アルデスロイキンなどの免疫刺激薬は、約1用量~3用量、3用量~5用量、5用量~8用量、8用量~10用量、10用量~14用量、14用量~20用量で投与され得る。いくつかの場合では、アルデスロイキン(aldeskeukin)は、20用量を超えて投与される。いくつかの場合では、アルデスロイキンなどの免疫刺激薬は、細胞投与と逐次的または同時に投与され得る。例えば、免疫刺激薬は、約-14、-13、-12、-11、-10、-9、-8、-7、-6、-5、-4、-3、-2、-1、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13日目、または最大約14日目に投与され得る。いくつかの場合では、アルデスロイキンなどの免疫刺激薬は、細胞の集団の投与後0日目~4日目に投与される。いくつかの場合では、免疫刺激薬(例えば、アルデスロイキン)は、約10分間、15分間、20分間、30分間、40分間、50分間、1時間、2時間、または最大約3時間の期間にわたって投与される。いくつかの場合では、免疫刺激薬(例えば、アルデスロイキン)は、操作細胞の投与の約24時間前~操作細胞の投与の約4日後に投与され得る。免疫刺激薬(例えば、アルデスロイキン)は、操作細胞の投与後-7、-6、-5、-4、-3、-2、-1、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19日目、または最大約20日目に投与され得る。
[00454]化学療法剤または化合物は、がんの処置に有用な化学化合物であり得る。開示したT細胞と組み合わせて使用され得るがん化学療法剤は、限定はされないが、有糸分裂阻害剤(ビンカアルカロイド)を含む。これらは、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシンおよびNavelbine(商標)(ビノレルビン、5’-ノルアンヒドロブラスチン)を含む。さらに他の場合では、がん化学療法剤は、カンプトテンシン化合物などのトポイソメラーゼI阻害剤を含む。本明細書で使用される場合、「カンプトテンシン化合物」は、Camptosar(商標)(イリノテカンHCL)、Hycamtin(商標)(トポテカンHCL)、ならびにカンプトテシンおよびその類似体に由来する他の化合物を含む。本明細書に開示の方法および組成物において使用され得るがん化学療法剤の別のカテゴリーは、エトポシド、テニポシドおよびミトポドジドなどのポドフィロトキシン誘導体である。本開示はさらに、アルキル化剤として公知の、他のがん化学療法剤であって、腫瘍細胞内の遺伝子素材をアルキル化するがん化学療法剤も包含する。これらは、限定ではなく、シスプラチン、シクロホスファミド、窒素マスタード、トリメチレンチオホスホルアミド、カルムスチン、ブスルファン、クロランブシル、ベルスチン、ウラシルマスタード、クロマファジンおよびダカルバジンを含む。本開示は、化学療法剤としての代謝拮抗剤を包含する。これらのタイプの薬剤の例は、シトシンアラビノシド、フルオロウラシル、メトトレキサート、メルカプトプリン、アザチオプリン(azathioprime)、およびプロカルバジンを含む。本明細書に開示の方法および組成物において使用され得るがん化学療法剤の追加のカテゴリーは、抗生物質を含む。例は、限定ではなく、ドキソルビシン、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ミトラマイシン、マイトマイシン、マイトマイシン(mytomycin)Cおよびダウノマイシンを含む。これらの化合物のために、多数のリポソーム製剤が市販されている。本開示は、限定ではなく、抗腫瘍抗体、ダカルバジン、アザシチジン、アムサクリン、メルファラン、イホスファミドおよびミトキサントロンを含む、他のがん化学療法剤をさらに包含する。
白金-トリアミン複合体;ポルフィマーナトリウム;ポルフィロマイシン;プレドニゾン;プロピルビス-アクリドン;プロスタグランジンJ2;プロテアソーム阻害剤;プロテインA系免疫調節物質;タンパク質キナーゼC阻害剤;タンパク質キナーゼC阻害剤、微細藻類;プロテインチロシンホスファターゼ阻害剤;プリンヌクレオシドホスホリラーゼ阻害剤;プルプリン;ピラゾロアクリジン;ピリドキシル化ヘモグロビンポリオキシエチレンコンジュゲート;rafアンタゴニスト;ラルチトレキセド;ラモセトロン;rasファルネシルプロテイントランスフェラーゼ阻害剤;ras阻害剤;ras-GAP阻害剤;脱メチル化レテリプチン;レニウムRe186エチドロネート;リゾキシン;リボザイム;RIIレチナミド;ログレチミド;ロヒツキン;ロムルチド;ロキニメックス;ルビジノンB1;ルボキシル;サフィンゴール;サイントピン;SarCNU;サルコフィトールA;サルグラモスチム;Sdi1模倣体;セムスチン;老化由来の阻害剤1;センスオリゴヌクレオチド;シグナル伝達阻害剤;シグナル伝達調節物質;単鎖抗原結合タンパク質;シゾフィラン;ソブゾキサン;ボロカプテートナトリウム;フェニル酢酸ナトリウム;ソルベロール;ソマトメジン結合タンパク質;ソネルミン;スパルホス酸;スピカマイシンD;スピロムスチン;スプレノペンチン;スポンギスタチン1;スクアラミン;幹細胞阻害剤;幹細胞分割阻害剤;スチピアミド;ストロメリシン阻害剤;スルフィノシン;超活性血管作用性腸管ペプチドアンタゴニスト;スラジスタ;スラミン;スワインソニン;合成グリコサミノグリカン;タリムスチン;タモキシフェンメチオジド;タウロムスチン;タザロテン;テコガランナトリウム;テガフール;テルラピリリウム;テロメラーゼ阻害剤;テモポルフィン;テモゾロミド;テニポシド;テトラクロロデカオキシド;テトラゾミン;タリブラスチン;チオコラリン;トロンボポエチン;トロンボポエチン模倣体;チマルファシン;チモポエチン受容体アゴニスト;チモトリナン;甲状腺刺激ホルモン;エチルエチオプルプリンすず;チラパザミン;チタノセンビクロリド(titanocene bichloride);トプセンチン;トレミフェン;全能性幹細胞因子;翻訳阻害剤;トレチノイン;トリアセチルウリジン;トリシリビン;トリメトレキサート;トリプトレリン;トロピセトロン;ツロステリド;チロシンキナーゼ阻害剤;チルホスチン;UBC阻害剤;ウベニメクス;尿生殖器洞由来成長阻害因子;ウロキナーゼ受容体アンタゴニスト;バプレオチド;バリオリンB;赤血球遺伝子治療;ベラレソール;ベラミン;ベルジン;ベルテポルフィン;ビノレルビン;ビンキサルチン;ビタキシン;ボロゾール;ザノテロン;ゼニプラチン;ジラスコルブ;およびジノスタチンスチマラマー。前述の化学療法剤のいずれかが、臨床有効量で投与され得る。化学療法剤も、細胞の集団の投与後約-14、-13、-12、-11、-10、-9、-8、-7、-6、-5、-4、-3、-2、-1、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13日目、または最大約14日目に投与され得る。いくつかの場合では、対象は、化学療法剤に対して不応性の難治性がんを有し得る。
[00458]いくつかの場合では、抗真菌療法は、免疫受容体プログラムレシピエント細胞を受ける対象に投与される。抗真菌剤は、真菌を死滅または真菌の増殖を防止できる薬剤であり得る。抗真菌剤の標的は、ステロール生合成、DNA生合成、およびβ-グルカン生合成を含み得る。抗真菌剤は、葉酸合成阻害剤または核酸架橋剤でもあり得る。葉酸合成阻害剤は、サルファに基づく薬剤であり得る。例えば、葉酸合成阻害剤は、真菌の葉酸合成を阻害する薬剤または競合阻害剤であり得る。サルファに基づく薬剤、または葉酸合成阻害剤は、メトトレキサートまたはスルファメトキサゾール(sulfamethaxazole)であり得る。いくつかの場合では、抗真菌剤は、核酸架橋剤であり得る。架橋結合剤は、真菌においてDNAまたはRNAプロセスを阻害し得る。例えば、架橋剤は、シトシンのフッ化類似体であり得る、5-フルオロシトシンであってよい。5-フルオロシトシンは、5-フルオロウラシルへの細胞質内変換によりDNAおよびRNA合成の両方を阻害し得る。他の抗真菌剤は、グリセオフルビンであり得る。グリセオフルビンは、ペニシリン・グリセオフルバム(Penicillium griseofulvum)によって産生される抗真菌抗生物質である。グリセオフルビンは真菌の有糸分裂を阻害し、架橋剤と考えることができる。追加的な架橋剤は、アリルアミン(ナフチフィンおよびテルビナフィン)であってよく、スクアレンエポキシダーゼのレベルでエルゴステロールの合成を阻害し;1つのモルホリン(morpholene)誘導体(アモロルフィン)は、エルゴステロール経路のその後のステップを阻害する。
[00463]いくつかの場合では、対象は、治療レジメンの一部として免疫抑制剤を受けることができる。免疫抑制剤は、放射線療法剤、生物剤、または化学薬剤を指し得る。いくつかの場合では、免疫抑制剤は、化学薬剤を含み得る。例えば、化学薬剤は、シクロホスファミド、メクロレタミン、クロラムブシル、メルファラン、イホスファミド、チオテパ、ヘキサメチルメラミン、ブスルファン、フルダラビン、ニトロソウレア、白金、メトトレキサート、アザチオプリン、メルカプトプリン、プロカルバジン、ダカルバジン、テモゾロミド、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン、フルオロウラシル、ダクチノマイシン、アントラサイクリン、マイトマイシンC、ブレオマイシン、およびミスラマイシンからなる群由来の少なくとも1つのメンバーを含み得る。化学薬剤は、シクロホスファミドまたはフルダラビンであり得る。
[00472]抗生物質は、治療レジメンの一部として対象に投与することができる。抗生物質は、治療有効用量で投与することができる。抗生物質は、細菌を死滅させるまたは細菌の増殖を阻害することができる。抗生物質は、広範囲の細菌を標的化することができる広域性抗生物質であり得る。広域性抗生物質は、第3または第4世代のいずれかであり、セファロスポリンまたはキノロンであり得る。
[00479]いくつかの場合では、抗ウイルス剤は、処置レジメンの一部として投与することができる。いくつかの場合では、ヘルペスウイルス予防法は、処置レジメンの一部として対象に投与することができる。ヘルペスウイルス予防法は、バラシクロビル(バルトレックス)であり得る。バルトレックスを経口使用して、陽性HSV血清学を有する対象におけるヘルペスウイルス感染症の出現を防止することができる。これは、500mg錠剤中に供給することができる。バラシクロビルは、治療有効量で投与することができる。例えば、バラシクロビルは、約50mg、75mg、100mg、125mg、150mg、175mg、200mg、225mg、250mg、275mg、300mg、325mg、350mg、375mg、400mg、425mg、450mg、475mg、500mg、525mg、550mg、575mg、600mg、625mg、650mg、または最大約700mg錠剤で投与することができる。対象が、経口摂取に寛容を示すことができる場合、バラシクロビルは、毎日経口500mgの用量で、フルダラビンの最後の用量の翌日に開始することができる。抗ウイルス療法は、細胞療法の投与後約-14、-13、-12、-11、-10、-9、-8、-7、-6、-5、-4、-3、-2、-1、0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13日目、または最大約14日目に投与され得る。
[00481]本明細書では、がんなどの状態を有する対象に治療レジメンを投与するための方法が提供され得る。いくつかの例では、細胞組成物(例えば、免疫受容体プログラムレシピエント細胞を含む)は、単位剤形で提供することができる。細胞組成物は、溶液に再懸濁し、注入として投与することができる。本明細書では、免疫刺激薬、免疫抑制剤、抗生物質、抗真菌剤、制吐剤、化学療法剤、放射線療法およびそれらの任意の組合せを含む処置レジメンも提供され得る。上述のいずれかを含む処置レジメンを凍結乾燥し、水溶液(例えば、生理食塩水溶液)中で再構成することができる。いくつかのの例では、処置(例えば、細胞処置)は、皮下注射、筋肉内注射、皮内注射、経皮的投与、静脈内(「i.v.」)投与、鼻腔内投与、リンパ内注射、および経口投与から選択される経路によって投与される。いくつかの例では、対象は、リンパ内のマイクロカテーテルによって免疫受容体プログラムレシピエント細胞を含む細胞組成物を注入される。
[00490]ステップ1:オリゴヌクレオチド負荷、熱可逆性ヒドロゲルの調製
[00491]オリゴヌクレオチド負荷、熱可逆性ヒドロゲルは、超低温ゲル化温度(ULGT)アガロース(熱可逆性ヒドロゲルとして寄与する)およびオリゴヌクレオチドとの共有結合により改変された線状ポリアクリルアミドポリマーによって作製することができる。ULGTアガロースは、IX-A型であってよく、Sigma Aldrich社から入手することができる(カタログ#A2576)。
[00497]約10,000個のT細胞に、約50μLの上記の溶解オリゴヌクレオチド負荷、熱可逆性ヒドロゲルを37℃で添加し、優しく混合し、フローフォーカシング微小流体装置を使用してキャリアオイルによって乳化させ、平均容積約250pLの、約200,000個の均一サイズの油中水液滴を形成する、またはTissueLyserLT(Qiagen社)を使用してボルテックスすることによって異種サイズの油中水液滴を形成する。キャリアオイルは、フルオロカーボンオイルを含有する界面活性剤(例えば、RAN Biotechnologies社、カタログ#008-FluoroSurfactant-2wtH)、またはミネラルオイルを含有する界面活性剤(例えば、73:20:7の比で混合したTegosoft DEC、ミネラルオイル、Abil WE09、Abilら、2017年を参照)であり得る。ボルテックス法では、T細胞の適当な画分(例えば、>20%)が、容積が0.1nLと0.5nLの間である液滴中にあるように、ボルテックスの頻度および期間を調整することができる。
[00499]上記で産生したエマルジョンを5分間、65~75℃でインキュベートし、細胞を破壊し、mRNAを放出させることができる。次いで、エマルジョンを氷上に置き、dT30をポリAテイルとハイブリダイズさせる(図4A、上)。この氷上でのインキュベーションはアガロースのゲル化も促進する。次に、エマルジョンは、水溶液中のヒドロゲルビーズを得るために解乳化される。解乳化方法は、使用するキャリアオイルに依存する。フルオロカーボンオイルでは、エマルジョンは、HFE-7500オイル(20% PFO)中の20%(体積/体積)1H,1H,2H,2H-ペルフルオロオクタノールを添加することによって解乳化することができる。ミネラルオイルでは、エマルジョンは、フェノール/クロロホルム/イソアミルアルコール(25:24:1;体積/体積/体積;Fisher社、カタログ番号BP17521)によって解乳化することができる。
[00502]ヒドロゲル中で拡散抑制された第1鎖cDNAにより、ヒドロゲル粒子は再び(上記のように)試薬交換され、液滴ベースの単一細胞反応器におけるTRAおよびTRBのPCR増幅のための緩衝液、DNAポリメラーゼ(例えば、TaqまたはKOD)、およびプライマーを送達することができる。3つのプライマーのセットを使用してTRACおよびTRBCを増幅することができる:プライマー「ARS-pTSO」、「1R」、および「2R」(図4A、矢印(2)を参照)。プライマーARS-pTSOは、[T1i|3xSpacer18|pTSO}の配列を有し、T1iはT1dと相補性であり、3xSpacer18は、3つの連続する内側Spacer18(すなわち、ヘキサエチレングリコール)改変からなる可動性リンカーであり、pTSOは、鋳型スイッチcDNAを刺激することができるTSOと基本的に同じ配列を有する。pTSOは、以下の配列を有し得る:5’-GCAGTGGTATCAACGCAGAGTAC-3’。プライマー1Rおよび2Rは、「対合二分免疫受容体配列の融合:テイル-テイル設計」節に概略した戦略に従って設計することができる。ドメインTRAC-5Aは、配列5’-GACCCTGCCGTGTACCAG-3’を有することができ;ドメインTRBC-5Aは、配列5’-TGTGTTTGAGCCATCAGAAGCAGAG-3’を有することができ;ドメインOL-1は、配列5’-ACCAG-3’を有することができ;ドメインOL-2は、配列5’-CTCTGCT-3’を有することができる。
[00505]増幅したTRAおよびTRBの融合は、「対合二分免疫受容体配列の融合:テイル-テイル設計」節に概略した戦略に従って実行することができる。例えば、USER(New England Biolabs社)およびリガーゼを使用することができる。これを行うため、プライマー1Rおよび2Rは、選択された位置でデオキシウリジンによって改変される必要がある。例えば、プライマー1Rは、配列5’-AGCAGAGC/dU/GG/dU/ACACGGCAGGGTC-3’を有することができ、プライマー2Rは、配列5’-ACCAGCTC/dU/GC/dU/TCTGATGGCTCAAACACA-3’を有することができ、ここで/dU/はデオキシウリジン改変を意味する。
[00509]最初の3ステップは、TSOが必ずしも必要でない以外は実施例1と基本的に同じであってよい(図5A、上および矢印(1))。
[00511]RT後、ヒドロゲルビーズを試薬交換に供し、第2の鎖合成(SSS)プライマーの群を送達することができる(図5A、矢印(2))。群は2つのパネルを含み得る:TRAパネルおよびTRBパネル。各パネルは、種によって10~100個のプライマーを含有し得る。ヒトでは、45プライマーのTRAパネルおよび48プライマーのTRBパネルを使用して、IMGTデータベースで注釈をつけられた、全ての機能性V遺伝子バリアントをカバーすることができる。TRAパネルの各プライマーは、[AdptA|CDSTRA}の一般構造を有することができ、TRBパネルの各プライマーは、一般構造[AdptB|CDSTRB}を有することができる。AdptAおよびAdptBは、本開示に記載する。AdptAは、P2A-3Aの配列を有し得る。P2A-3Aは、P2A「自己切断」ペプチドのコード配列の連続する約20塩基であり得る。P2Aのコード配列は、「gcgacgaatt ttagtttgct taagcaagcc ggagatgtgg aggaaaatcc tggaccg」であり得る。AdpBは、attB1-Kの配列を有することができ、そのヌクレオチド配列は「ACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCT tacc」であり得る。CDSTRAは、各TRA-L1遺伝子(TRAV遺伝子のリーダー配列をコードする)のコード配列の最初の20~45塩基であり得る。CDSTRBは、各TRB-L1遺伝子(TRBV遺伝子のリーダー配列をコードする)のコード配列の最初の20~45塩基であり得る。この場合、CDSTRAおよびCDSTRBは、それぞれTRAV-L1UEおよびTRBV-L1UEとも呼ぶことができる(ここで、Uは上流を意味し、Eは正確を意味し、配列が確かに開始コドンから開始することを意味している)。全てのCDSTRAおよびCDSTRB配列は、類似のTmを有するように設計されるべきであり、それによりそれらが適度に良い効率および特異性でcDNA上のそれらの標的部位に全て結合することができる。
[00516]SSS後、エマルジョンを、冷却し、アガロースゲルにさせ、解乳化、およびPCR緩衝液で洗浄することができる。プライマーht1F、ht1R、ht2F、ht2Rならびに熱安定性DNAポリメラーゼ(例えば、Hotstart Taq)を、試薬交換を介してヒドロゲルに添加することができる(図5B、矢印(4))。プライマーht1Fは、配列[T1i|3xSpacer18|AdptA}を有することができ、T1iは親和性保持配列(ARS)として寄与する。プライマーht2Rは、配列[T1i|3xSpacer18|TRBC-3A*}を有することができ、TRBC-3A*は、TRBCのリバースプライマーであり、配列5’-CTCTGCTTCTGATGGCTCAAACACA-3’を有し得る。プライマーht1Rおよびht2Fを、本明細書に記載する。ドメイン[htTRAC-5A}は、配列5’-gaccctgccgtgtaccagc-3’を有し得る。
[00518]実施例1から得られたテイル-テイル融合二分免疫受容体ポリヌクレオチドは、部分C領域配列のみを含有し得る。残りのC領域配列を、プロモーターと共に添加し、発現ベクター内の全発現カセットを形成することができる。図6Aおよび図6Bは、これを達成する例示的な戦略を概略する。まず、上鎖を選択的に捕捉し、放出させることができる(図6A、矢印(1))。これは、上鎖の保存配列(例えば、[OL-1|OL-2})を特異的に認識する捕捉オリゴヌクレオチドを使用して行うことができる。次に、反対方向に向かう2つのヒトプロモーターを含む線状DNA構築物(ここではプロモーターセグメントと名付けた)を、捕捉した上鎖と融合することができる(図6A、矢印(2)および(3))。融合を促進するため、プロモーターセグメントの下鎖(図6Aに示す)は、捕捉した上鎖にハイブリダイズする配列[TSO}を有する一本鎖領域を含み得る。一本鎖領域は、USER消化によって作製することができる。これを行うため、プロモーターセグメントを増幅するために使用するフォワードプライマーは、少ない(例えば、1~5)デオキシウリジン改変を有することができ、PCR産物は、USER酵素ミックスによって処置することができる。dsDNAを得るため(図6A、矢印(3))、強い鎖置換活性を有するDNAポリメラーゼ(例えば、phi29、Bst)を使用することができる。あるいは、リガーゼは、上鎖をシースするために使用することができる。
[00522]TCR発現ベクターでは、TRAおよびTRBのコード配列は、ヘッド-テイル方向に、インフレーム様式で融合することができ、それにより、1つのプロモーターは、TRAとTRBの両方をコードするmRNAを転写するために使用することができ、リボソームは、連続するポリペプチド、または、P2Aなどの「自己切断ペプチド」を使用する場合、2つのポリペプチドのいずれかとして、TRAおよびTRBを転写することができる。TRAとTRBの間のリンカー配列を挿入することができる。
[00530]その配列構築物が図8Aに記載される、実施例2に記載の方法によって生成されたヘッド-テイル融合TCR遺伝子は、先の実施例と類似の戦略を使用して、TCR発現ベクターへと変換することができる。命名規則は、実施例4と同じである。まず、融合TCR遺伝子は、従来のオーバーラップPCRまたは図6Aの矢印(2)~(3)に記載の他の方法を使用して、ds[TRBC-3|P2A-5}を融合することができる(図8A、矢印(1))。この融合は、「TRBL-VDJ}の下流に完全なTRBc配列を作成する(図8Aの縦の「=」印)。この融合産物は、前述のように環状化させることができ(図8A、矢印(2))、プライマー[attB1-K}および[TRAC-5A*}を使用するPCR増幅によって線状化することができる(図8B、矢印(3))。線状化産物は、前述のようにベクター骨格にクローニングし、TRAc配列を完成し、他の必要なエレメントを取り入れることができる(図8C)。
[00531]実施例1および2は、USER媒介突出末端生成およびライゲーションを使用して前もって増幅したTRAおよびTRBを融合する方法を記載する。あるいは、前もって増幅したTRAおよびTRBは、オーバーラップ伸長PCR(OE-PCR)を使用して融合することができる。いくつかの場合では、内側プライマー(例えば、実施例1のプライマー1Rおよび2R、または実施例2のプライマーht1Rおよびht2F)を除去するステップは、融合を促進し得る。内側プライマーの除去は、先に記載のように達成することができる。他の場合では、OE-PCRは、内側プライマーを除去するステップ無しで実施することができる。これらの場合では、前もって増幅した産物は、拡散抑制される必要がない。したがって、外側プライマー(例えば、実施例1のpTSO、または実施例2の[Adpt1}および[TRBC-5A*})は、ARSに連結される必要がない。
[00534]プライマー改変アガロースを調製する方法の2つの例を、本明細書で提供する。第1の方法では、約4%のアガロースおよび100~500mMの過ヨウ素酸ナトリウム(NaIO4)を含有する溶液を70℃で調製した。70℃での短いインキュベーション後、溶液は、ボルテックスを使用して界面活性剤含有オイルで乳化した。安定な油中水エマルジョンを作製する当技術分野で使用される、実質上任意の界面活性剤含有オイルをここで使用することができる。エマルジョンを氷上で約20分間インキュベートし、次いで20%~100%のPFOを使用して解乳化した。生じたアガロースビーズ懸濁液を水中で洗浄し、遠心分離および上澄み液の除去によって圧縮し、再び溶解し、0.1~1mMのシアノ水素化ホウ素ナトリウム(NaCNBH3)の存在下で、アミン標識RTプライマーを含有する等量の溶液と混合した。37℃で終夜のインキュベーション後、上記のように、溶液を乳化し、氷上でインキュベートし、解乳化および洗浄し、RTプライマーを共有結合により結合した2%アガロースビーズの懸濁液を生じた。固定化RTプライマーの濃度は、DNA結合色素またはRTプライマーに相補的な蛍光標識オリゴヌクレオチドで染色することによって測定することができる。100nM~10μMの固定化RTプライマーを有するアガロースビーズを得た。
[00537]健康なドナー由来の末梢T細胞を使用して、物理的に連結した(ヘッド-テイル方向)、自然対合TCR(すなわち融合TCRポリヌクレオチド)のDNAライブラリーを調製した。典型的なランでは、以下の成分を混合することによって、細胞懸濁液(CS)を作製した:末梢T細胞(典型的には終濃度μLあたり1000~5000個の細胞)、1つはヒトTRAC mRNAをターゲティングし、他はヒトTRBC mRNAをターゲティングする、2つのRTプライマーを含む、1%プライマー改変アガロース(この例では:TRBCターゲティングRTプライマーはTRBC1およびTRBC2を区別しない)、およびPBS。
Claims (26)
- 複数の標的反応性T細胞受容体(TCR)を同定する方法であって、
(a)複数のTCRを発現する複数の細胞を含む混合物を準備するステップであって、前記複数の細胞の各細胞が、前記複数のTCRのTCRを発現し、前記複数のTCRが対象由来の試料由来の少なくとも50個の異なる同種対を含み、複数のV遺伝子由来のV領域を含み、前記少なくとも50個の異なる同種対の各同種対がTCRベータ鎖と対合するTCRアルファ鎖を含み、前記複数のTCRが前記複数の細胞に対して外因性である、ステップと、
(b)(a)由来の前記複数の細胞含む混合物を、主要組織適合遺伝子複合体(MHC)と複合体を形成している1つまたは複数の標的ペプチド抗原と接触させるステップであって、前記複数の標的反応性TCRを発現する前記複数の細胞のサブセットが前記主要組織適合遺伝子複合体(MHC)と複合体を形成している1つまたは複数の標的ペプチド抗原に結合する、ステップと、
(c)(b)由来の前記複数の細胞のサブセットのうちの少なくとも2つの細胞を同定するステップであって、少なくとも2つの細胞が前記複数の標的反応性TCRのうちの少なくとも2つの標的反応性TCRを発現し、それによって前記複数の標的反応性TCRのうちの前記少なくとも2つの標的反応性TCRを同定する、ステップと
を含む、方法。 - 前記複数のV遺伝子が、少なくとも10個の異なるV遺伝子を含む、請求項1に記載の方法。
- 前記複数の細胞が、対象由来の試料から単離され、前記試料が、組織試料、血液試料、末梢血単核細胞(PBMC)試料、またはそれらの組合せである、請求項1に記載の方法。
- 前記複数のTCRが、少なくとも100個の異なる同種対を含み、前記少なくとも100個の異なる同種対の各同種対がTCRベータ鎖と対合するTCRアルファ鎖を含む、請
求項1に記載の方法。 - (b)が、前記複数の細胞を、前記主要組織適合遺伝子複合体(MHC)と複合体を形成している1つまたは複数の標的ペプチド抗原を提示する1つまたは複数の細胞と接触させるステップを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記1つまたは複数の細胞が、1つまたは複数の腫瘍細胞、腫瘍様塊、腫瘍溶解物パルス抗原提示細胞(APC)または前記1つもしくは複数の標的ペプチド抗原を提示するように操作されたAPCである、請求項5に記載の方法。
- 前記1つまたは複数の標的ペプチド抗原を提示するように操作された前記1つまたは複数のAPCが、標的ペプチド抗原をコードするDNAまたはRNAを含む、請求項6に記載の方法。
- 前記1つまたは複数の標的ペプチド抗原を提示するように操作された前記1つまたは複数のAPCが、対象由来のMHC分子を外部に発現する、請求項6に記載の方法。
- 前記複数のTCRが疲弊T細胞由来のTCRを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記MHCがMHC四量体である、請求項1に記載の方法。
- 前記1つまたは複数の標的ペプチド抗原の配列または同一性が知られていない、請求項1に記載の方法。
- 標的反応性TCRを発現すると同定された(b)由来の前記複数の細胞のサブセットのうちの前記少なくとも2つの細胞のうちの少なくとも1つの対象への投与、または(b)由来の前記複数の細胞のサブセットのうちの前記少なくとも2つの細胞のうちの少なくとも1つの細胞の標的反応性TCRを発現する細胞の対象への投与のための組成物を調製するステップをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記複数の細胞の各細胞がレポーター遺伝子を含み、前記細胞のTCRが前記1つまたは複数の標的ペプチド抗原の標的ペプチド抗原に結合すると、前記レポーター遺伝子がシグナルを送るように調節される、請求項1に記載の方法。
- (c)における同定が、前記レポーター遺伝子に基づいて前記少なくとも2つの細胞を選択することを含む、請求項13に記載の方法。
- (c)における同定が、細胞表面マーカーの発現に基づいて前記少なくとも2つの細胞を選択することを含む、請求項1に記載の方法。
- (c)における同定が、カルシウムの流入に基づいて前記少なくとも2つの細胞を選択することを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記複数の細胞が細胞系細胞である、請求項1に記載の方法。
- 前記複数のTCRが、少なくとも100の異なるVJの組合せを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記複数のTCRが疾患または状態を有する対象由来の試料由来のTCRを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記複数のTCRが、対象由来の腫瘍浸潤リンパ球を含む試料由来のTCRを含む、請求項1に記載の方法。
- (a)の前に、前記複数のTCRの各TCRのTCRベータ鎖をコードする第2のポリヌクレオチドとTCRアルファ鎖をコードする第1のポリヌクレオチドを物理的に連結させ、それによって複数の融合ポリヌクレオチドを発生させるステップ、および前記複数の細胞に前記複数の融合ポリヌクレオチドまたはその誘導体を送達するステップをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- (a)の前に、前記複数のTCRの同種対を同定するために、前記複数のTCRをシークエンシングするステップ、および前記複数の細胞に前記複数のTCRの同種対をコードする配列を送達するステップをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- (c)における同定が、前記複数の細胞のサブセットの少なくとも2つの細胞を選択することを含み、前記少なくとも2つの細胞が前記複数の標的反応性TCRの少なくとも2つの標的反応性TCRを発現し、それにより前記複数の標的反応性TCRの少なくとも2つの標的反応性TCRが選択される、請求項1に記載の方法。
- 前記選択が、標的反応性TCRを発現する細胞に関連するマーカーに基づいて標的反応性TCRを発現する細胞を選択する、請求項23に記載の方法。
- 前記選択が、(b)の前記複数の細胞における標的非反応性TCRを発現する細胞から標的反応性TCRを発現する細胞を分離することを含む、請求項23に記載の方法。
- 前記選択が、標的反応性TCRを発現する細胞に関連するマーカーに基づいて、(b)の前記複数の細胞における標的非反応性TCRを発現する細胞から標的反応性TCRを発現する細胞を分離することを含む、請求項25に記載の方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2023018149A JP7475506B2 (ja) | 2018-08-13 | 2023-02-09 | 対合二分免疫受容体ポリヌクレオチドのハイスループットクローニングおよびその適用 |
Applications Claiming Priority (11)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201862718227P | 2018-08-13 | 2018-08-13 | |
US62/718,227 | 2018-08-13 | ||
US201862725842P | 2018-08-31 | 2018-08-31 | |
US62/725,842 | 2018-08-31 | ||
US201862732898P | 2018-09-18 | 2018-09-18 | |
US62/732,898 | 2018-09-18 | ||
US201962818355P | 2019-03-14 | 2019-03-14 | |
US62/818,355 | 2019-03-14 | ||
US201962823831P | 2019-03-26 | 2019-03-26 | |
US62/823,831 | 2019-03-26 | ||
PCT/US2019/046170 WO2020036875A1 (en) | 2018-08-13 | 2019-08-12 | High throughput cloning of paired bipartite immunoreceptor polynucleotides and applications thereof |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2023018149A Division JP7475506B2 (ja) | 2018-08-13 | 2023-02-09 | 対合二分免疫受容体ポリヌクレオチドのハイスループットクローニングおよびその適用 |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2021534245A JP2021534245A (ja) | 2021-12-09 |
JPWO2020036875A5 JPWO2020036875A5 (ja) | 2022-08-19 |
JP7227374B2 true JP7227374B2 (ja) | 2023-02-21 |
Family
ID=69525770
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021532265A Active JP7227374B2 (ja) | 2018-08-13 | 2019-08-12 | 対合二分免疫受容体ポリヌクレオチドのハイスループットクローニングおよびその適用 |
JP2023018149A Active JP7475506B2 (ja) | 2018-08-13 | 2023-02-09 | 対合二分免疫受容体ポリヌクレオチドのハイスループットクローニングおよびその適用 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2023018149A Active JP7475506B2 (ja) | 2018-08-13 | 2023-02-09 | 対合二分免疫受容体ポリヌクレオチドのハイスループットクローニングおよびその適用 |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US11208457B2 (ja) |
EP (1) | EP3837373A4 (ja) |
JP (2) | JP7227374B2 (ja) |
KR (2) | KR102543325B1 (ja) |
CN (3) | CN116144706A (ja) |
AU (1) | AU2019322834A1 (ja) |
CA (1) | CA3108439A1 (ja) |
IL (2) | IL294471B1 (ja) |
MX (1) | MX2021001763A (ja) |
SG (1) | SG11202101371TA (ja) |
WO (1) | WO2020036875A1 (ja) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR102543325B1 (ko) | 2018-08-13 | 2023-06-13 | 루트패스 제노믹스, 인크. | 쌍을 이룬 이분 면역수용체 폴리뉴클레오티드의 고처리량 클로닝 및 이의 적용 |
WO2020206238A2 (en) | 2019-04-05 | 2020-10-08 | Rootpath Genomics, Inc. | Compositions and methods for t-cell receptor gene assembly |
WO2023091420A2 (en) * | 2021-11-16 | 2023-05-25 | TCR2 Therapeutics Inc. | Compositions and methods for t cell engineering |
WO2023096890A1 (en) * | 2021-11-24 | 2023-06-01 | Rootpath Genomics, Inc. | Compositions and methods for polynucleotide assembly |
WO2023179795A1 (zh) * | 2022-03-25 | 2023-09-28 | 立凌生物制药(苏州)有限公司 | 一种快速且简便地获得正确配对tcr的方法以及获得的tcr |
CN115029341A (zh) * | 2022-05-23 | 2022-09-09 | 立凌生物制药(苏州)有限公司 | 一种快速克隆配对tcr序列检测方法及其应用 |
CN114891779A (zh) * | 2022-03-31 | 2022-08-12 | 立凌生物制药(苏州)有限公司 | 一种克隆tcr序列的检测方法及其应用 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2017046205A1 (en) | 2015-09-15 | 2017-03-23 | Immunocore Limited | Tcr libraries |
Family Cites Families (45)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6905680B2 (en) | 1988-11-23 | 2005-06-14 | Genetics Institute, Inc. | Methods of treating HIV infected subjects |
US6352694B1 (en) | 1994-06-03 | 2002-03-05 | Genetics Institute, Inc. | Methods for inducing a population of T cells to proliferate using agents which recognize TCR/CD3 and ligands which stimulate an accessory molecule on the surface of the T cells |
US5858358A (en) | 1992-04-07 | 1999-01-12 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Methods for selectively stimulating proliferation of T cells |
US6534055B1 (en) | 1988-11-23 | 2003-03-18 | Genetics Institute, Inc. | Methods for selectively stimulating proliferation of T cells |
GB9125768D0 (en) | 1991-12-04 | 1992-02-05 | Hale Geoffrey | Therapeutic method |
US7175843B2 (en) | 1994-06-03 | 2007-02-13 | Genetics Institute, Llc | Methods for selectively stimulating proliferation of T cells |
US6692964B1 (en) | 1995-05-04 | 2004-02-17 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Methods for transfecting T cells |
US7067318B2 (en) | 1995-06-07 | 2006-06-27 | The Regents Of The University Of Michigan | Methods for transfecting T cells |
US6607878B2 (en) | 1997-10-06 | 2003-08-19 | Stratagene | Collections of uniquely tagged molecules |
US7572631B2 (en) | 2000-02-24 | 2009-08-11 | Invitrogen Corporation | Activation and expansion of T cells |
US6867041B2 (en) | 2000-02-24 | 2005-03-15 | Xcyte Therapies, Inc. | Simultaneous stimulation and concentration of cells |
JP2004500095A (ja) | 2000-02-24 | 2004-01-08 | エクサイト セラピーズ, インコーポレイテッド | 細胞の同時の刺激および濃縮 |
US6797514B2 (en) | 2000-02-24 | 2004-09-28 | Xcyte Therapies, Inc. | Simultaneous stimulation and concentration of cells |
EP1421210A4 (en) | 2001-07-31 | 2005-02-16 | Clontech Lab Inc | METHOD FOR DETECTING PROTEASE ACTIVITY IN ONE CELL |
TWI333977B (en) | 2003-09-18 | 2010-12-01 | Symphogen As | Method for linking sequences of interest |
EP1910550A4 (en) | 2005-07-21 | 2009-11-04 | Abbott Lab | MULTIGENIC EXPRESSION COMPRISING SORF CONSTRUCTS AND METHODS USING POLYPROTEINS, PRO-PROTEINS, AND PROTEOLYSIS |
WO2008109176A2 (en) | 2007-03-07 | 2008-09-12 | President And Fellows Of Harvard College | Assays and other reactions involving droplets |
WO2009015296A1 (en) | 2007-07-24 | 2009-01-29 | The Regents Of The University Of California | Microfabricated dropley generator |
EP3290531B1 (en) | 2008-12-19 | 2019-07-24 | President and Fellows of Harvard College | Particle-assisted nucleic acid sequencing |
JP2015513399A (ja) | 2012-02-22 | 2015-05-14 | ザ トラスティーズ オブ ザ ユニバーシティ オブ ペンシルバニア | 癌の治療のために有用なt細胞の存続的集団を作製するための組成物および方法 |
EP3461910B1 (en) | 2012-04-19 | 2020-08-26 | Life Technologies Corporation | Nucleic acid amplification |
KR102090851B1 (ko) | 2012-08-14 | 2020-03-19 | 10엑스 제노믹스, 인크. | 마이크로캡슐 조성물 및 방법 |
US10221442B2 (en) | 2012-08-14 | 2019-03-05 | 10X Genomics, Inc. | Compositions and methods for sample processing |
US20150005200A1 (en) | 2012-08-14 | 2015-01-01 | 10X Technologies, Inc. | Compositions and methods for sample processing |
US20150005199A1 (en) | 2012-08-14 | 2015-01-01 | 10X Technologies, Inc. | Compositions and methods for sample processing |
US20140378345A1 (en) | 2012-08-14 | 2014-12-25 | 10X Technologies, Inc. | Compositions and methods for sample processing |
EP3572510B1 (en) * | 2013-11-21 | 2022-09-21 | Repertoire Genesis Incorporation | T cell receptor and b cell receptor repertoire analysis system, and use of same in treatment and diagnosis |
WO2015136072A1 (en) * | 2014-03-14 | 2015-09-17 | Immunocore Limited | Tcr libraries |
US11390921B2 (en) | 2014-04-01 | 2022-07-19 | Adaptive Biotechnologies Corporation | Determining WT-1 specific T cells and WT-1 specific T cell receptors (TCRs) |
US20150298091A1 (en) | 2014-04-21 | 2015-10-22 | President And Fellows Of Harvard College | Systems and methods for barcoding nucleic acids |
EP3194593B1 (en) * | 2014-09-15 | 2019-02-06 | AbVitro LLC | High-throughput nucleotide library sequencing |
MX2017005267A (es) | 2014-10-29 | 2017-07-26 | 10X Genomics Inc | Metodos y composiciones para la secuenciacion de acidos nucleicos seleccionados como diana. |
WO2016069886A1 (en) | 2014-10-29 | 2016-05-06 | Adaptive Biotechnologies Corporation | Highly-multiplexed simultaneous detection of nucleic acids encoding paired adaptive immune receptor heterodimers from many samples |
AU2016242967B2 (en) | 2015-04-01 | 2021-07-01 | Adaptive Biotechnologies Corp. | Method of identifying human compatible T cell receptors specific for an antigenic target |
EP3289082A4 (en) * | 2015-04-27 | 2018-09-12 | AbVitro LLC | Methods of sequencing, determining, pairing, and validating therapeutic agents and disease specific antigens |
US9422547B1 (en) | 2015-06-09 | 2016-08-23 | Gigagen, Inc. | Recombinant fusion proteins and libraries from immune cell repertoires |
CN108369230B (zh) * | 2015-09-25 | 2021-09-17 | 阿布维特罗有限责任公司 | 用于对天然配对t细胞受体序列进行t细胞受体靶向鉴别的高通量方法 |
CN109477073B (zh) * | 2016-03-31 | 2024-04-12 | 来恩生物医药私人有限公司 | 表达外源病毒特异性t细胞受体(tcr)的非活化t细胞 |
US20190105348A1 (en) * | 2016-04-08 | 2019-04-11 | Unum Therapeutics Inc. | Chimeric receptors and uses thereof in immune therapy |
WO2018075664A1 (en) | 2016-10-18 | 2018-04-26 | Regents Of The University Of Minnesota | Tumor infiltrating lymphocytes and methods of therapy |
CN110198954A (zh) | 2017-01-13 | 2019-09-03 | 艾吉纳斯公司 | 与ny-eso-1结合的t细胞受体和其使用方法 |
WO2019126466A1 (en) | 2017-12-22 | 2019-06-27 | Rootpath Genomics, Inc. | Compositions and methods for barcoding |
WO2019196088A1 (en) | 2018-04-13 | 2019-10-17 | Syz Cell Therapy Co. | Methods of obtaining tumor-specific t cell receptors |
KR102543325B1 (ko) | 2018-08-13 | 2023-06-13 | 루트패스 제노믹스, 인크. | 쌍을 이룬 이분 면역수용체 폴리뉴클레오티드의 고처리량 클로닝 및 이의 적용 |
WO2020206238A2 (en) | 2019-04-05 | 2020-10-08 | Rootpath Genomics, Inc. | Compositions and methods for t-cell receptor gene assembly |
-
2019
- 2019-08-12 KR KR1020217007322A patent/KR102543325B1/ko active IP Right Grant
- 2019-08-12 IL IL294471A patent/IL294471B1/en unknown
- 2019-08-12 CN CN202310093858.6A patent/CN116144706A/zh active Pending
- 2019-08-12 SG SG11202101371TA patent/SG11202101371TA/en unknown
- 2019-08-12 KR KR1020237019408A patent/KR20230088518A/ko active Application Filing
- 2019-08-12 CN CN201980067485.7A patent/CN112840031B/zh active Active
- 2019-08-12 JP JP2021532265A patent/JP7227374B2/ja active Active
- 2019-08-12 AU AU2019322834A patent/AU2019322834A1/en active Pending
- 2019-08-12 EP EP19849196.1A patent/EP3837373A4/en active Pending
- 2019-08-12 WO PCT/US2019/046170 patent/WO2020036875A1/en unknown
- 2019-08-12 CN CN202310118607.9A patent/CN116298309B/zh active Active
- 2019-08-12 IL IL280682A patent/IL280682B/en unknown
- 2019-08-12 CA CA3108439A patent/CA3108439A1/en active Pending
- 2019-08-12 MX MX2021001763A patent/MX2021001763A/es unknown
-
2021
- 2021-02-11 US US17/173,705 patent/US11208457B2/en active Active
- 2021-11-17 US US17/528,550 patent/US20220135641A1/en active Pending
-
2023
- 2023-02-09 JP JP2023018149A patent/JP7475506B2/ja active Active
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2017046205A1 (en) | 2015-09-15 | 2017-03-23 | Immunocore Limited | Tcr libraries |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Human gene therapy,2017年,Vol.28,p.1158-1168 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU2019322834A1 (en) | 2021-03-18 |
CN116298309A (zh) | 2023-06-23 |
SG11202101371TA (en) | 2021-03-30 |
IL294471B1 (en) | 2024-03-01 |
EP3837373A4 (en) | 2022-07-06 |
US11208457B2 (en) | 2021-12-28 |
WO2020036875A1 (en) | 2020-02-20 |
KR20210057043A (ko) | 2021-05-20 |
IL280682A (en) | 2021-03-25 |
JP7475506B2 (ja) | 2024-04-26 |
US20210171600A1 (en) | 2021-06-10 |
KR20230088518A (ko) | 2023-06-19 |
US20220135641A1 (en) | 2022-05-05 |
CN112840031A (zh) | 2021-05-25 |
JP2021534245A (ja) | 2021-12-09 |
MX2021001763A (es) | 2021-04-19 |
EP3837373A1 (en) | 2021-06-23 |
IL280682B (en) | 2022-08-01 |
CN116298309B (zh) | 2024-04-02 |
IL294471A (en) | 2022-09-01 |
KR102543325B1 (ko) | 2023-06-13 |
JP2023058615A (ja) | 2023-04-25 |
CN112840031B (zh) | 2023-03-24 |
CN116144706A (zh) | 2023-05-23 |
CA3108439A1 (en) | 2020-02-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7227374B2 (ja) | 対合二分免疫受容体ポリヌクレオチドのハイスループットクローニングおよびその適用 | |
EP3283619B1 (en) | Methods for improving the efficacy and expansion of chimeric antigen receptor-expressing cells | |
TWI719946B (zh) | 使用cd123嵌合抗原受體治療癌症 | |
AU2020394441A1 (en) | CD19 and CD22 chimeric antigen receptors and uses thereof | |
WO2017075478A2 (en) | Compositions and methods for evaluating and modulating immune responses by use of immune cell gene signatures | |
WO2017075451A1 (en) | Compositions and methods for evaluating and modulating immune responses by detecting and targeting pou2af1 | |
US20220389406A1 (en) | Compositions and methods for t-cell receptor identification | |
Hocevar et al. | PEGylated gold nanoparticles target age-associated b cells in vivo | |
WO2023174398A1 (en) | Synthetic tumor-infiltrating lymphocytes (tils) | |
US20230272340A1 (en) | Compositions and methods for antigen identification | |
WO2022254337A1 (en) | Cd19 and cd22 chimeric antigen receptors and uses thereof |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220810 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20220810 |
|
A871 | Explanation of circumstances concerning accelerated examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A871 Effective date: 20220810 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220909 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20221209 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20230113 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20230209 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7227374 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |