JP7210818B2

JP7210818B2 - Ｔ細胞免疫療法のための組合せ及びその使用

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Publication number: JP7210818B2
Application number: JP2020519699A
Authority: JP
Inventors: シン－イホワン，
Original assignee: Manysmart Therapeutics Inc
Current assignee: Manysmart Therapeutics Inc
Priority date: 2017-10-03
Filing date: 2018-09-21
Publication date: 2023-01-24
Anticipated expiration: 2038-09-21
Also published as: JP2020536112A; EP3691661A1; CN109589336A; TW201914612A; EP3691661A4; US20200230236A1; WO2019070424A1; CN109589336B; TWI687227B

Description

[1]本発明は、Ｔ細胞及び２重特異性Ｔ細胞活性化抗原結合分子を含む組合せ並びに免疫療法、例えば、がんの治療において前記組合せを使用する方法に関する。

[2]臨床において疾患を治療するためには、対象の個々の細胞又は特定の種類の細胞を選択して破壊することが望ましいことが多い。例えば、がん治療において、第１の目標は、健康な細胞及び組織は完全なまま損傷を与えずに、腫瘍細胞を特異的に破壊することである。

[3]上記の目標を実現するために、Ｔ細胞媒介免疫療法で使用することができる多くの様々な２重特異性抗体が開発されてきた。２重特異性Ｔ細胞エンゲージャー（ＢｉＴＥ）は、よく研究されている、臨床において可能性を示すものである（Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、ＰｒｏｔＥｎｇ９、２９９～３０５（１９９６）；Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖら、ＪＭｏｌＢｉｏｌ、２９３、４１～６６（１９９９）；Ｎａｇｏｒｓｅｎ及びＢａｕｅｒｌｅ、ＥｘｐＣｅｌｌＲｅｓ、３１７、１２５５～１２６０（２０１１）並びにＳｈｅｒｉｄａｎ、ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、３４：１２１５～１２１７（２０１６））。ＢｉＴＥは、直列型のｓｃＦｖ分子で、２つのｓｃＦｖ分子が柔軟なリンカーによって融合している。ブリナツモマブ（ＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標））は、それぞれＣＤ１９及びＣＤ３に対する２つの１本鎖抗体を連結することによって形成されたＢｉＴＥであり（米国特許第７，６３５，４７２号）、Ｔ細胞媒介免疫療法によって治療抵抗性Ｂ細胞急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）を治療するために使用することができる。しかし、ＢｉＴＥの臨床的応用は決して簡単ではなく、抗体の有効性、毒性、適用性及び産生などのいくつかの難題が伴う。さらに、患者のＴ細胞の数及び機能が十分でないとき（例えば、化学療法若しくは骨髄移植を受けた結果として）、又はその他の疾患が存在するとき、ＢｉＴＥの治療効果は非常に限定され得る。例えば、ブリナツモマブは、骨髄外疾患を有するＡＬＬ患者を治療するために使用したとき、十分な治療効果を示さなかった（ＡｌｄｏｓｓＩら、ＡｍＪＨｅｍａｔｏｌ．、９２、８５８～８６５（２０１７））。

[4]Ｗａｎｇ及びＲｉｖｉｅｒｅ（ＣａｎｃｅｒＧｅｎｅＴｈｅｒ．、２２、８５～９４（２０１５）は、エキソビボにおいて腫瘍特異的細胞を増殖させ、これらの細胞を患者に再注入することによって、Ｔ細胞をがんに対する治療薬として使用できることを開示した。キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、抗原に特異的な組換え受容体である。ＣＡＲは、Ｔ細胞及びその他の免疫細胞の特異性及び有効性を別の方向に向けることができる。がん免疫療法において使用するための一般的条件は、腫瘍標的化Ｔ細胞を迅速に生成し、能動的免疫の障害を回避することである。一旦ＣＡＲが細胞中で発現したら、ＣＡＲ改変Ｔ細胞は腫瘍標化Ｔ細胞になり、患者において即時及び長期効果の両方を発揮することができる。しかし、ＣＡＲの適用性は、Ｔ細胞が患者自身に由来することが必要なため制限される。さらに、ＣＡＲは最初にＴ細胞に形質導入してＣＡＲＴ細胞を形成しなければならず、このようなＣＡＲＴ細胞を、患者体内に自家移植し直すことができるようになる前に増殖させるのには長期間かかる。

[5]したがって、Ｔ細胞免疫療法における治療効果を改善するための技術及び方法が依然として必要とされている。

〔発明の概要〕
[6]本発明は、驚くべきことに、２重特異性Ｔ細胞活性化抗原結合分子はエフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞と一緒に患者に投与することができ、このような投与によって免疫療法の治療効果を相乗的に高めることができることを発見した。

[7]したがって、本発明の一態様は、対象に治療有効量の２重特異性Ｔ細胞活性化抗原結合分子及び治療有効量のエフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞を投与するステップを含む、前記対象の疾患を治療する方法を提供することである。

[8]本発明の別の態様は、治療有効量の２重特異性Ｔ細胞活性化抗原結合分子及び治療有効量のエフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞を含む組合せを提供することである。

[9]本発明の別の態様は、疾患を治療するための医薬品の製造における、２重特異性Ｔ細胞活性化抗原結合分子と組み合わせたエフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞の使用を提供することである。

[10]本発明の別の態様は、２重特異性Ｔ細胞活性化抗原結合分子及びエフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞を含むキットを提供することである。

[11]本明細書で言及した出版物、特許出願、特許及びその他の参考文献は全て、全体が参考として本明細書に組み込まれる。

[12]本明細書で開示した本発明の利点及び特徴は、以下の説明、添付した図面、及び特許請求の範囲から明らかになるだろう。さらに、本明細書で記載した様々な実施形態の特徴は互いに相反せず、様々な組合せ及び順列で存在することができることを理解されたい。

インターロイキン－２（ＩＬ－２）及びゾレドロン酸で１４日間刺激して培養した後のδ２Ｔ細胞の比を示した図である。 δ２細胞がＴ細胞の１種であることを示した図である。単離したγ９δ２細胞の比が最高９８％であり得ることを示した図である。単離したγ９δ２Ｔ細胞が全てＣＤ２７（－）及びＣＤ４５ＲＡ（－）エフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞であることを示した図である。単離したγ９δ２Ｔ細胞がＰＤ－１を発現してないことを示した図である。 γ９δ２Ｔ細胞又はＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標）の単独又は組合せの治療による、ラージ、ＲＰＭＩ－８２２６、ＶＡＬ及びＤａｕｄｉ細胞株の殺滅に対する効果を示した図である。 γ９δ２Ｔ細胞又はＢＣＭＡ－ＢｉＴＥの単独又は組合せの治療による、ラージ及びＲＰＭＩ－８２２６細胞株の殺滅に対する効果を示した図である。 γ９δ２Ｔ細胞及びＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標）で治療していないＮＯＧマウスの骨髄におけるＶＡＬ血液がん細胞の生存能を示した図である。 γ９δ２Ｔ細胞及びＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標）の組合せで治療したＮＯＧマウスの骨髄におけるＶＡＬ血液がん細胞の生存能を示した図である。骨髄移植を受けた後に早期再発した患者をシミュレートしたＮＯＧマウス（ＰＢＭＣ移植無し）におけるＶＡＬ血液がん細胞の生存曲線を示した図である。骨髄移植を受けた後に早期再発した患者をシミュレートしたＮＯＧマウス（ＰＢＭＣ移植無し）におけるＶＡＬ血液がん細胞の相対生存日数（ｐ＜０．０１）を示した図である。骨髄移植を受けずに早期再発した患者をシミュレートしたＮＯＧマウス（ＰＢＭＣ移植有り）におけるＶＡＬ血液がん細胞の生存曲線を示した図である。骨髄移植を受けずに早期再発した患者をシミュレートしたＮＯＧマウス（ＰＢＭＣ移植有り）におけるＶＡＬ血液がん細胞の相対生存日数（ｐ＜０．０１）を示した図である。骨髄外がん細胞増殖の低減に対するγ９δ２Ｔ細胞及びＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標）の併用療法並びにＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標）の単独療法の効果を示した図である。

[21]本発明は、様々な実施形態、実施例及び表、並びに以下に記載したそれらに関する詳細な説明を参照することによってより理解することができる。特に定義しない限り、本明細書で使用した技術及び科学用語を含む用語は全て、本発明の属する技術分野の当業者によって通常理解されているのと同じ意味を有する。通常使用される辞書で定義されているように、用語は関連技術の文書におけるのと同じ意味を有するものと解釈するべきであることをさらに理解されたい。さらに、本開示において特に定義しない限り、用語は理想的又は過度に厳格に解釈されるものではない。本開示で使用した用語はある特定の実施形態を説明するためのものであり、本発明を限定するためのものではないことをさらに理解されたい。

[22]本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用する場合、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈が明確に他のことを指示していない限り、複数の指示対象を含むことに注意されたい。したがって、文脈によって必要と考えられない限り、単数形の用語は複数の指示対象を含むものである。

[23]たいていの場合、本明細書では範囲は「約」ある特定の値から、及び／又は「約」別の特定の値までとして表現される。このような範囲が表現されているとき、一実施形態はある特定の値から、及び／又はもう一方の特定の値までを含む。同様に、値が、語句「約」を使用して、およそとして表現されているとき、その特定の値は別の実施形態を形成するものと理解される。範囲のそれぞれの終点は、もう一方の終点と関連している場合及び関係がない場合の両方において重要であることがさらに理解される。本明細書で使用する場合、用語「約」は、±２０％、好ましくは±１０％、さらに好ましくは±５％を意味する。

[24]本明細書で使用する場合、特に指示しない限り、「含有する（ｃｏｎｔａｉｎ）（含有している（ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ））」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）（含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ））」などの用語は、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）（含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ））」を意味する。

定義
[25]本明細書で使用する場合、用語「抗原結合分子」は、最も広い意味で、抗原決定基に特異的に結合する分子を意味する。抗原結合分子の例は、完全長又は完全な構造のイムノグロブリンの分子及び／又はその機能的断片及び／又は抗体から得られた可変重鎖（ＶＨ）及び／又は可変軽鎖（ＶＬ）ドメインなどの、イムノグロブリン及びそれらの誘導体である。したがって、抗原結合分子は特異的標的又は抗原に結合することができる。抗原結合分子は、少なくとも３つの軽鎖ＣＤＲ（すなわち、ＶＬ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）、及び／又は３つの重鎖ＣＤＲ（すなわち、ＶＨ領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を有し、並びに好ましくは６つのＣＤＲ全てを有している。抗原結合分子に基づいた抗体には、例えば、モノクローナル、組換え、キメラ、ヒト化及びヒト抗体が含まれる。

[26]好ましくは、ＣＤＲは抗体のＶＬ及びＶＨドメインに含まれるが、そのどちらも抗原結合分子中に同時に存在する必要はない。例えば、Ｆｄ断片は２つのＶＨ領域を有し、一般的に完全な抗原結合ドメインのある特定の抗原結合機能を保持している。抗体断片、変化形又は結合ドメインのその他の形式の例には、（１）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインを有する１価断片であるＦａｂ断片、（２）ヒンジ領域のジスルフィド架橋によって連結した２個のＦａｂ断片を有する２価断片であるＦ（ａｂ’）_２断片、（３）２つのＶＨ及びＣＨ１ドメインを有するＦｄ断片、（４）抗体の１腕のＶＬ及びＶＨドメインを有するＦｖ断片、（５）ＶＨドメインを有するｄＡｂ断片、（６）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、並びに（７）１本鎖Ｆｖ（ｓｃＦＶ）が含まれる。

[27]用語「２重特異性」とは、抗原結合分子が少なくとも２つの明確に区別できる抗原決定基に特異的に結合することができることを意味する。典型的に、２重特異性抗原結合分子は、それぞれが異なる抗原決定基に特異的である２つの抗原結合部位を含む。ある特定の実施形態では、２重特異性抗原結合分子は同時に２つの抗原決定基、特に、２つの明確に区別することができる細胞で発現している２つの抗原決定基に結合することができる。

[28]本明細書で使用する場合、用語「抗原結合部分」とは、抗原決定基に特異的に結合するポリペプチド分子を意味する。一実施形態では、抗原結合部分は、その抗原結合部分が結合している実体（例えば、第２の抗原結合部分）を、標的部位、例えば、抗原決定基を持つ特定の種類の腫瘍細胞又は腫瘍間質に向けることができる。別の実施形態では、抗原結合部分はその標的抗原、例えば、Ｔ細胞受容体複合抗原によってシグナル伝達を活性化することができる。抗原結合部分は、抗体及びそれらの断片を含む。特定の抗原結合部分は抗体の抗原結合ドメインを含み、抗原結合ドメインは抗体の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。ある特定の実施形態では、抗原結合部分は当業界で公知の抗体定常領域を含んでいてもよい。有用な重鎖定常領域は５つのアイソタイプ、α、δ、ε、γ又はμのいずれかを含む。有用な軽鎖定常領域は２つのアイソタイプ、κ及びλのいずれかを含む。

[29]本明細書で使用する場合、用語「抗原決定基」は「抗原」及び「エピトープ」と同義であり、抗原結合部分が結合し、抗原結合部分－抗原複合体を形成しているポリペプチド高分子の部位（例えば、連続したアミノ酸鎖又は異なる領域の非連続アミノ酸で構成されている立体配置）を意味する。有用な抗原決定基は、例えば、腫瘍細胞の表面に、ウイルス感染細胞の表面に、その他の疾患細胞の表面に、免疫細胞の表面に、血清中に遊離して、及び／又は細胞外マトリックス（ＥＣＭ）中に見出すことできる。本明細書で抗原と呼ばれるタンパク質（例えば、ＣＤ３）は、特に指示がなければ、霊長類（例えば、ヒト）及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）などの哺乳類を含む任意の脊椎動物源由来のタンパク質の任意の天然形態であってもよい。特定の実施形態では、抗原はヒトタンパク質である。抗原として有用なヒトタンパク質の一例はＣＤ３、特にＣＤ３のイプシロンサブユニット、又はＢリンパ球抗原ＣＤ１９若しくはＢリンパ球表面抗原Ｂ４としても知られているＣＤ１９である。ある特定の実施形態では、本発明の２重特異性Ｔ細胞活性化抗原結合分子はＣＤ３及び／又はＣＤ１９のエピトープに結合する。

[30]「特異的結合」とは、結合が抗原に選択的で、望まないか又は非特異的な相互作用とは区別することができることを意味する。抗原結合部分が特異的抗原決定基に結合する能力は、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）又は当業者がよく知っているその他の技術、例えば、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術及び従来の結合測定法のいずれかによって測定することができる。ある特定の実施形態では、抗原に結合する抗原結合部分又はこの抗原結合部分を含む抗原結合分子は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ又は≦０．００１ｎＭ（例えば、１０^－８Ｍ以下、例えば、１０^－８Ｍ～１０^－１３Ｍ、例えば、１０^－９Ｍ～１０^－１３Ｍ）の解離定数（Ｋ_Ｄ）を有する。

[31]本明細書で使用する「Ｔ細胞活性化抗原」は、抗原結合分子との相互作用によってＴ細胞活性化を誘導することができる、Ｔリンパ球、特にエフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞の表面で発現する抗原決定基を意味する。詳細には、抗原結合分子とＴ細胞活性化抗原との相互作用は、Ｔ細胞受容体複合体のシグナル伝達カスケードを誘発することによってＴ細胞活性化を誘導することができる。特定の実施形態では、Ｔ細胞活性化抗原はＣＤ３、特に、ＣＤ３のイプシロンサブユニットである。

[32]本明細書で使用する「Ｔ細胞活性化」は、増殖、分化、サイトカイン分泌、細胞傷害性エフェクター分子放出、細胞傷害性活性及び活性化マーカーの発現から選択される、Ｔリンパ球、特にエフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞の１つ又は複数の細胞応答を意味する。ある特定の実施形態では、本発明の２重特異性Ｔ細胞活性化抗原結合分子はＴ細胞活性化を誘導することができる。

[33]本明細書で使用する「標的細胞抗原」は、標的細胞、例えば、がん細胞又は腫瘍間質の細胞などの腫瘍中の細胞の表面に存在している抗原決定基を意味する。特定の実施形態では、標的細胞抗原はＣＤ１９、特にヒトＣＤ１９である。

[34]「γ９δ２Ｔ細胞」は、末梢血液中に存在する天然に生じるＴ細胞の１種で、末梢血中のＴ細胞全体のほんの１～５％を占める。γ９δ２Ｔ細胞は、細胞表面のイソペンテニルピロリン酸（ＩＰＰ）分子を識別することによって正常細胞と異常細胞を区別することができる。γ９δ２Ｔ細胞は、異常細胞を識別するためにヒト白血球抗原（ＨＬＡ）を必要とせず、したがって、それらの使用はＨＬＡとは関係がない。この特性は、移植片対宿主病を引き起こすことなく、異種間対象におけるγ９δ２Ｔ細胞の使用を可能にする。

[35]本明細書で使用する場合、「エフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞」はＣＤ２７（－）及びＣＤ４５ＲＡ（－）細胞を意味する。１つの特定の実施形態では、エフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞は、プログラム死１（ＰＤ１又はＰＤ－１）免疫チェックポイント分子を発現していない。

[36]本明細書で使用する場合、用語「併用投与」などは、１人の患者に選択した薬剤を、同じ、又は異なる投与経路を介して、同時に又は別々に投与することを意味する。

[37]薬剤の「有効量」とは、投与された細胞又は組織において生理学的変化を引き起こすために必要な量を意味する。

[38]薬剤、例えば、医薬組成物の「治療有効量」とは、所望する治療又は予防結果を実現するために、必要な投薬及び期間において有効な量を意味する。例えば、治療有効量の薬剤は、疾患の有害作用を排除、低減、遅延、最小化又は予防することができる。

[39]用語「増強する（又は増強）」とは、所望する効果の有効性又は期間を増加又は延長することを意味する。一例として、薬剤を「増強する」とは、疾患、障害又は症状の治療に対する薬剤の効果の有効性又は期間を増加又は延長することである。本明細書で使用する場合、「有効性増強量」とは、疾患、障害又は症状の治療における薬剤の効果を増強するために十分な量を意味する。患者に使用する場合、有効量は、疾患、障害又は症状の重症度、事前治療、患者の健康状態及び薬物応答、並びに担当医の自由裁量に基づいて決定される。

[40]「患者」又は「対象」は哺乳類であり、限定はしないが、飼育動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト及びサルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）を含む。特に、患者又は対象はヒトである。

[41]「必要とする対象」又は「治療を必要とする」とは、障害を既に有している対象及び障害を予防するべきである対象を意味する。

[42]用語「医薬組成物」とは、含有されている活性成分の生物学的活性を有効にさせるような形態であり、その製剤を投与された対象に対して許容できない毒性を示す追加的成分を全く含有していない調製物を意味する。

[43]「薬学的に許容できる担体」とは、医薬組成物中の活性成分以外の成分で、対象に対して非毒性である成分を意味する。薬学的に許容できる担体には、限定はしないが、緩衝剤、賦形剤、安定化剤又は保存剤が含まれる。

[44]本明細書で使用する場合、「治療」（及び「治療する」又は「治療している」などのその文法的変形）は、治療されている個体における疾患の通常の経過を変化させようとする臨床的介入を意味し、予防のため、又は臨床病理の経過中のいずれかで実施することができる。治療の所望する効果には、限定はしないが、疾患の発生又は再発の予防、症状の緩和、疾患の任意の直接的若しくは間接的病理学的結果の減少、転移の予防、疾患悪化速度の低下、疾患状態の軽減若しくは寛解、及び予後の軽快若しくは改善が含まれる。一部の実施形態では、本発明の組合せは、疾患の進行を遅延させるため、又は疾患の悪化を緩めるために使用することができる。

[45]「がんの再発（ｒｅｃｕｒｒｅｎｃｅ）」、「がんの再燃（ｒｅｌａｐｓｅ）」及び「反復性又は治療抵抗性疾患」は本明細書では治療後のがんの再出現を意味するために同義に使用され、元の器官におけるがんの再出現及び元の器官以外でがんが再出現する遠位再発を含む。

[46]本明細書で使用する用語「自己由来」（ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ）及びその文法的に同等な用語は、同じ生物から生じることを意味する。例えば、試料（例えば、細胞、組織又は器官）は、同じ対象（例えば、患者）から取り出され、処理され、後で同じ対象に戻すことができる。自己由来の方法は、ドナー及びレシピエントが異なる対象である同種間の方法とは区別される。

[47]本明細書で使用する用語「異種間」（ｘｅｎｏｇｅｎｉｃ）及びその文法的に同等な用語は、異なる種から生じることを意味する。例えば、試料（例えば、細胞、組織又は器官）は、ドナーから取り出され、処理され、後に異なる種のレシピエントに移植することができる。

[48]本明細書で使用する用語「同種間」（ａｌｌｏｇｅｎｉｃ）及びその文法的に同等な用語は、同じ種の異なる対象であるレシピエント及びドナーを意味する。例えば、試料（例えば、細胞、組織又は器官）は、同種のドナーから取り出され、処理され、後に同種の異なるレシピエントに移植することができる。

[49]句「薬学的又は薬理学的に許容できる」とは、ある投薬量及び濃度で使用したとき、分子実体及び組成物が一般的にレシピエントに対して非毒性であることを意味する。すなわち、適切であるならば、ヒトなどの動物に投与したとき、この分子実体及び組成物は、不利な、アレルギー性の、又はその他の有害反応を引き起こさない。

[50]用語「添付文書」は、治療薬の商用包装物に通例含まれる指示物を意味するために使用され、適応症、使用方法、投薬量、投与方法、併用療法、禁忌、及び／又はこのような治療薬の使用に関する注意についての情報を含有している。

併用療法及び使用
[51]本発明は、驚くべきことに、エフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞及び２重特異性Ｔ細胞活性化抗原結合分子を組み合わせて患者に投与したとき、２重特異性Ｔ細胞活性化抗原結合分子が媒介するＴ細胞免疫療法の治療効果を相乗的に増強することができることを見出した。したがって、本発明の実施形態の１つは、治療有効量の２重特異性Ｔ細胞活性化抗原結合分子及び治療有効量のエフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞を、それらを必要とする対象に投与し、それらを必要とする対象のがん、感染性疾患、及び／又は免疫障害などの疾患を治療するために使用することができる併用療法である。別の実施形態では、本発明は、疾患を治療するための医薬品の製造における、２重特異性Ｔ細胞活性化抗原結合分子と組み合わせたエフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞の使用を提供する。

[52]一実施形態では、エフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞は、２重特異性Ｔ細胞活性化抗原結合分子の投与と同時、前又は後に投与する。したがって、２重特異性Ｔ細胞活性化抗原結合分子及びエフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞は、同時、順次、又は断続的に投与することができる。一実施形態では、エフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞及び２重特異性Ｔ細胞活性化抗原結合分子は、単一の活性化成分若しくは２つの個々の組成物として同時に投与してもよく、又は２つの個々の組成物として順次投与してもよい。

[53]一実施形態では、２重特異性Ｔ細胞活性化抗原結合分子は、
（ａ）第１の抗原に特異的に結合する第１の抗原結合部分であって、第１の抗原がＴ細胞を活性化するＣＤ３である、第１の抗原結合部分、並びに
（ｂ）第２の抗原に特異的に結合する第２の抗原結合部分であって、第２の抗原が腫瘍細胞ネオ抗原、腫瘍ネオエピトープ、腫瘍特異的抗原、腫瘍関連抗原、組織特異的抗原、細菌抗原、ウイルス抗原、酵母抗原、真菌抗原、原生動物抗原及び寄生生物抗原からなる群から選択される、第２の抗原結合部分を含む。

[54]好ましい実施形態では、第２の抗原は、限定はしないが、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３１、ＣＤ３２Ｂ、ＣＤ３３、ＣＤ３４、ＣＤ４０、ＣＤ１１７、ＣＤ１２３、繊維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、繊維芽細胞増殖因子受容体１（ＦＧＦＲ１）、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、内皮増殖因子受容体、糖タンパク質Ａ３３抗原（ｇｐＡ３３）、ヒト上皮増殖因子受容体１（ＨＥＲ１）、ヒト上皮増殖因子受容体２（ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、ヒト上皮増殖因子受容体３（ＨＥＲ３）、ヒト上皮増殖因子受容体４（ＨＥＲ４）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、ムチン１（ＭＵＣ１）、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ＰＳＭＡ、ブラキュリ、葉酸受容体アルファ、ＷＴ１、ｐ５３、ＭＡＧＥ－Ａ１、ＭＡＧＥ－Ａ２、ＭＡＧＥ－Ａ３、ＭＡＧＥ－Ａ４、ＭＡＧＥ－Ａ６、ＭＡＧＥ－Ａ１０、ＭＡＧＥ－Ａ１２、ＢＡＧＥ、ＤＡＭ－６、－１０、ＧＡＧＥ－１、－２、－８、ＧＡＧＥ－３、－４、－５、－６、－７Ｂ、ＮＡ８８－Ａ、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＭＡＲＴ－１、ＭＣ１Ｒ、Ｇｐ１００、チロシナーゼ、ＴＲＰ－１、ＴＲＰ－２、ＡＲＴ－４、ＣＡＭＥＬ、Ｃｙｐ－Ｂ、ＢＲＣＡ１、ＢＲＡＣＨＹＵＲＹ（ＴＩＶＳ７－２、多型）、ＢＲＡＣＨＹＵＲＹ（ＩＶＳ７Ｔ／Ｃ多型）、ＴＢＲＡＣＨＹＵＲＹ、Ｔ、ｈＴＥＲＴ、ｈＴＲＴ、ｉＣＥ、ＭＵＣ１（ＶＮＴＲ多型）、ＭＵＣ１ｃ、ＭＵＣ１ｎ、ＭＵＣ２、ＰＲＡＭＥ、Ｐ１５、ＲＵ１、ＲＵ２、ＳＡＲＴ－１、ＳＡＲＴ－２、ＳＡＲＴ－３、ＡＦＰ、β－カテニン／ｍ、カスパーゼ－８／ｍ、ＣＤＫ－４／ｍ、ＥＬＦ２Ｍ、ＧｎＴ－Ｖ、Ｇ２５０、ＨＳＰ７０－２Ｍ、ＨＳＴ－２、ＫＩＡＡ０２０５、ＭＵＭ－１、ＭＵＭ－２、ＭＵＭ－３、ミオシン／ｍ、ＲＡＧＥ、ＴＲＰ－２／ＩＮＴ２、７０７－ＡＰ、アネキシンＩＩ、ＣＤＣ２７／ｍ、ＴＰＩ／ｍｂｃｒ－ａｂｌ、ＥＴＶ６／ＡＭＬ、ＬＤＬＲ／ＦＵＴ、Ｐｍｌ／ＲＡＲα及びＴＥＬ／ＡＭＬ１を含むことができる。２重特異性Ｔ細胞活性化抗原結合分子の例は、例えば、以下の参考文献、国際公開第００／００６６０５号、米国特許第７，６３５，４７２号、国際公開第２００５／０４０２２０号、国際公開第２００８／１１９５６７号、国際公開第２０１０／０３７８３８号、国際公開第２０１３／０２６８３７号、国際公開第２０１３／０２６８３３号、米国特許出願公開第２０１４／０３０８２８５号、国際公開第２０１４／１４４７２２号、国際公開第２０１４／１５１９１０号、国際公開第２０１５／０４８２７２号、及びＳｈｅｒｉｄａｎ、ＮａｔｕｒｅＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、３４：１２１５～１２１７（２０１６）に記載されている。

[55]一実施形態では、エフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞はＣＤ２７（－）及びＣＤ４５ＲＡ（－）細胞である。ある特定の実施形態では、エフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞はプログラム死１（ＰＤ１又はＰＤ－１）免疫チェックポイント分子を発現していない。一部の実施形態では、Ｔ細胞はそれらを必要とする対象に対して自己由来、同種又は異種である。一部の好ましい実施形態では、Ｔ細胞はそれらを必要とする対象に対して自己由来又は同種である。

[56]エフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞は、Ｆｉｃｏｌｌ（商標）分離などの当業者に公知のいくつかの技術を使用して、ドナーから収集した血液から得て、エキソビボで増殖させることができる（Ｋｏｎｄｏら、Ｃｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ、１０、８４２～５６（２００８））。

[57]一実施形態では、本発明の方法を使用して治療できる疾患には、限定はしないが、増殖性障害（例えば、がん）、感染性疾患（例えば、細菌感染、ウイルス感染、酵母感染、真菌感染、原生動物感染及び寄生生物感染）又は免疫障害（例えば、自己免疫疾患、アレルギー及び免疫不全症）が含まれる。一部の実施形態では、疾患はがんである。その他の実施形態では、がんは固形腫瘍である。その他の実施形態では、がんは液性腫瘍である。一部の実施形態では、がんはＢ細胞がんである。一部の実施形態では、Ｂ細胞がんはＢ細胞リンパ腫又はＢ細胞白血病である。一部の実施形態では、Ｂ細胞がんは非ホジキンリンパ腫、急性リンパ芽球性白血病又は慢性リンパ性白血病である。一部の実施形態では、急性リンパ芽球性白血病は再燃性又は治療抵抗性急性リンパ芽球性白血病である。

[58]任意選択で、本発明の方法は、免疫系を抑制する免疫抑制療法を含むことができる。免疫抑制療法は、レシピエントの移植拒絶反応を緩和するか、最小限に抑えるか、又は排除するのを助けることができる。例えば、免疫抑制療法は免疫抑制薬を含むことができる。エフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞の投与の前、最中、及び／又は後に使用することができる免疫抑制薬には、限定はしないが、ＭＭＦ（ミコフェノール酸モフェチル（セルセプト））、ＡＴＧ（抗胸腺細胞グロブリン）、抗ＣＤ１５４（ＣＤ４ＯＬ）、抗ＣＤ４０（２Ｃ１０、ＡＳＫＰ１２４０、ＣＣＦＺ５３３Ｘ２２０１）、アレムツズマブ（キャンパス）、抗ＣＤ２０（リツキシマブ）、抗ＩＬ－６Ｒ抗体（トシリズマブ、アクテムラ）、抗ＩＬ－６抗体（サリルマブ、オロキズマブ）、ＣＴＬＡ４－Ｉｇ（アバタセプト／オレンシア）、ベラタセプト（ＬＥＡ２９Ｙ）、シロリムス（ラパミューン）、エベロリムス、タクロリムス（プログラフ）、ダクリズマブ（ゼナパックス）、バシリキシマブ（シムレクト）、インフリキシマブ（レミケード）、シクロスポリン、デオキシスパガリン、可溶性補体受容体１、コブラ毒因子、コンプスタチン、抗Ｃ５抗体（エクリズマブ／ソリリス）、メチルプレドニゾロン、ＦＴＹ７２０、エベロリムス、レフルノミド、抗ＩＬ－２Ｒ－Ａｂ、ラパマイシン、抗ＣＸＣＲ３抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、抗ＯＸ４０抗体及び抗ＣＤ１２２抗体が含まれる。さらに、１つ又は複数の免疫抑制剤／薬は、同時に又は順次使用することができる。

組合せ
[59]本発明は、治療有効量の２重特異性Ｔ細胞活性化抗原結合分子及び治療有効量のエフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞を含む組合せであって、２重特異性Ｔ細胞活性化抗原結合分子を対象にエフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞の投与と同時、前又は後に投与することができる組合せをさらに提供する。

[60]一実施形態では、２重特異性Ｔ細胞活性化抗原結合分子及びエフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞は、１つ又は複数の薬学的に許容できる担体中に一緒に、又は個々に、溶解又は分散させることができる。薬学的に許容できる担体には、ありとあらゆる溶媒、緩衝剤、分散剤、界面活性剤、抗酸化剤、保存剤（例えば、抗菌剤、抗真菌剤）、等張化剤、塩安定化剤、ポリマー、ゲル、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、矯臭剤、このような材料及びそれらの組合せが含まれる。一部の実施形態では、２重特異性Ｔ細胞活性化抗原結合分子及びエフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞は、同時、順次、又は断続的に投与する。

[61]一部の実施形態では、２重特異性Ｔ細胞活性化抗原結合分子及びエフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞は、静脈内、動脈内、皮下、腹腔内、病巣内、頭蓋内、脊髄内、関節内、前立腺内、脾臓内、腎臓内、胸腺内、気管内、鼻腔内、硝子体内、膣内、直腸内、腫瘍内、筋肉内、結膜下、小胞内、粘膜、心膜内、臍帯内、眼内、経口、局所的、局在的、吸入（例えば、エアロゾル吸入）によって、注射、注入、持続注入、標的細胞を直接浸す局在的灌流、カテーテル、洗浄液、クリーム、液体組成物（例えば、リポソーム）、マイクロカプセル、又はその他の方法によって、又は当業者に公知の前記の任意の組合せによって、投与することができる。一部の実施形態では、２重特異性Ｔ細胞活性化抗原結合分子及びエフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞は、非経口的に（例えば、皮下、皮内、病巣内、静脈内、動脈内、筋肉内、くも膜下腔内、又は腹腔内）、例えば、同時、順次、又は断続的に投与する。限定はしないが、様々な時点での単回又は複数回投与、大量瞬時投与、及びパルス注入を含む様々な投与計画が本明細書では想定される。

[62]疾患の治療のために、２重特異性Ｔ細胞活性化抗原結合分子及びエフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞の適切な投薬量は、治療する疾患の種類、投与経路、患者の体重、２重特異性Ｔ細胞活性化抗原結合分子の種類、疾患の重症度及び経過、以前又は同時の治療的介入、患者の治療歴、及び担当医の自由裁量に左右される。投与に対して責任のある医師が、いかなる事象においても、組成物中の活性成分（複数可）の濃度及び個々の対象に対する適切な用量（複数可）を決定する。２重特異性Ｔ細胞活性化抗原結合分子については、患者への投与に通常使用される１日投薬量は、約０．５ｍｇ／ｋｇ～１ｍｇ／ｋｇであり、一般的に、エフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞の投薬量の範囲は、約１×１０^４～約１×１０^１１Ｔ細胞、好ましくは、約１×１０^６～約１×１０^９Ｔ細胞である。

キット
[63]別の実施形態では、本発明は、前述のような疾患の治療のために適切な物質を含むキットを提供する。キットには、容器及び容器に入れた、又は付随した指示物又は添付文書が含まれる。適切な容器には、例えば、瓶、バイアル、シリンジ、ＩＶ溶液バッグなどが含まれる。容器は、ガラス又はプラスティックなどの種々の材料から形成することができる。容器は、組成物を単独又は疾患を治療するために有効な別の組成物と組み合わせて保持し、滅菌した接続口を有していてもよい（例えば、容器は皮下注射針によって貫通することができる栓を備えた静脈注射用溶液バッグ又はバイアルであってもよい）。組成物中の少なくとも１つの活性剤は、本発明の２重特異性Ｔ細胞活性化抗原結合分子又はエフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞である。指示物又は添付文書は、選択した症状を治療するために組成物を使用することを指示している。さらに、キットは、（ａ）キットに含有される第１の組成物を含む第１の容器であって、第１の組成物が本発明の２重特異性Ｔ細胞活性化抗原結合分子を含む容器、及び（ｂ）キットに含有される第２の組成物を含む第２の容器であって、第２の組成物がエフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞を含む容器を含んでいてもよい。本発明のこの実施形態におけるキットは、組成物が特定の症状を治療するために使用することができることを指示している添付文書をさらに含んでいてもよい。或いは、又は追加的に、キットは免疫抑制剤を含む第３の容器をさらに含んでいてもよい。容器は、商用及び使用者の観点から所望される、その他の緩衝剤、希釈剤、充填剤、針及びシリンジを含むその他の材料をさらに含んでいてもよい。

[64]本発明は、以下の実験の実施例を参照することによって詳細にさらに説明される。これらの実施例は、例示のためだけのものであり、特に指定しない限り、制限することを意味するものではない。したがって、本発明は、決して以下の実施例に制限されるものと解釈されるべきではなく、むしろ本明細書で提供した教示の結果として明らかになる、ありとあらゆる変種を含むものと解釈されるべきである。

実施例１
γ９δ２Ｔ細胞の単離及び同定
[65]本発明のために、血液がん細胞を殺滅する能力を有するエフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞を増殖させることが最初に必要である。γ９δ２Ｔ細胞は、抗ＣＤ３抗体、抗γ９抗体及び抗δ２抗体を使用したフローサイトメトリーによって同定することができる。エフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞の特徴の１つは、細胞表面にＣＤ２７及びＣＤ４５ＲＡ分子がないことである。

[66]Ｋｏｎｄｏら（Ｃｙｔｏｔｈｅｒａｐｙ、１０、８４２～５６（２００８））によれば、末梢血の単核球をインターロイキン－２（ＩＬ－２、１０００Ｕ／ｍｌ）及びゾレドロン酸（１μＭ／ｍｌ）で１４日間刺激して培養した後、培養物中のδ２細胞の比を、抗δ２抗体を使用したフローサイトメトリーによって分析した。次に、δ２細胞をＴＣＲγ／δ＋Ｔ細胞単離キット／ヒト（ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃ）を使用して単離した。単離した細胞は、抗ＣＤ３抗体、抗δ９抗体及び抗δ２抗体を使用したフローサイトメトリーによって分析し、それらの存在を定義した。次に、単離した細胞を抗ＣＤ２７抗体、抗ＣＤ４５ＲＡ抗体及び抗ＰＤ－１抗体によって測定して、γ９δ２Ｔ細胞のＣＤ２７、ＣＤ４５ＲＡ及びＰＤ－１分子の発現を決定した。

[67]図１に示したように、ＩＬ－２及びゾレドロン酸で１４日間刺激して培養した細胞の８５％超がδ２細胞であった。ＴＣＲγ／δ＋Ｔ細胞単離キット／ヒト（ＭｉｌｔｅｎｙｉＢｉｏｔｅｃ）によって単離したδ２細胞は全てＣＤ３分子を発現することができ、したがって、Ｔ細胞の１種であった。さらに、γ９δ２Ｔ細胞の割合は最高９８％であった（図２Ａ及びＢ）。図３Ａは、これらのγ９δ２Ｔ細胞が全てＣＤ２７（－）及びＣＤ４５ＲＡ（－）細胞であり、したがって、エフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞であることを示している。図３Ｂは、これらのγ９δ２Ｔ細胞がＰＤ－１免疫チェックポイント分子を発現していないことを示している。

実施例２
血液がん細胞の殺滅に対するγ９δ２Ｔ細胞及びＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標）（ＢｉＴＥ）の活性のインビトロアッセイ
[68]実験は、Ｓｈｅｅｈｙら（ＪＩｍｍｕｎｏｌＭｅｔｈｏｄｓ、２４９、９９～１１０（２００１））で開示された方法に従って実施した。

[69]この実験では、ＣＤ１９分子を発現しているラージ、ＶＡＬ及びＤａｕｄｉ血液がん細胞株を標的細胞として使用しており、ラージ及びＤａｕｄｉ細胞株は、ＣＤ１９^＋バーキットリンパ腫細胞であり、ＶＡＬ細胞株はＣＤ１９^＋ＡＬＬ細胞であった。ＲＰＭＩ－８２２６細胞株は、ＣＤ１９^－多発骨髄腫細胞であった。

[70]ラージ、ＲＰＭＩ－８２２６、ＶＡＬ及びＤａｕｄｉ細胞株は、５（６）－カルボキシフルオレセインジアセテートスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）で個別に染色し、培養プレートのウェルに接種した（５×１０^４／ウェル）。実施例１から得られたγ９δ２Ｔ細胞（１×１０^６細胞／ウェル）及びＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標）（１５ｎｇ／ウェル）を、様々な細胞を含有するウェルのそれぞれに個別に、又は一緒に添加した。６時間培養した後、フローサイトメトリーでＣＦＳＥ＋細胞を計数することによって細胞の生存能を決定した。

[71]図４Ａで示した結果は、γ９δ２Ｔ細胞はそれら自体様々な血液がん細胞を殺滅する能力を有するだけでなく、ＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標）と併用したとき血液がん細胞の殺滅において相乗効果を示すことを実証した。γ９δ２Ｔ細胞又はＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標）単独の使用と比較して、γ９δ２Ｔ細胞及びＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標）の併用は、ＣＤ１９^＋血液がん細胞（ラージ、ＶＡＬ及びＤａｕｄｉ血液がん細胞株）の殺滅の効果を相乗的に増加させた。

血液がん細胞の殺滅に対するγ９δ２Ｔ細胞及びＢＣＭＡ－ＢｉＴＥの活性のインビトロアッセイ
[72]実験は、Ｓｈｅｅｈｙら（ＪＩｍｍｕｎｏｌＭｅｔｈｏｄｓ、２４９、９９～１１０（２００１））で開示された方法に従って実施した。ＢＣＭＡ－ＢｉＴＥは、国際公開第２０１３／０７２４１５号に従って調製した。

[73]この実験では、ＢＣＭＡ分子を発現しているＲＰＭＩ－８２２６血液がん細胞株を標的細胞として使用しており、ＲＰＭＩ－８２２６細胞株は多発骨髄腫細胞であった。

[74]ラージ（ＢＣＭＡ^－）及びＲＰＭＩ－８２２６細胞株は、５（６）－カルボキシフルオレセインジアセテートスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）で個別に染色し、培養プレートのウェルに接種した（５×１０^４細胞／ウェル）。実施例１から得られたγ９δ２Ｔ細胞（１×１０^６細胞／ウェル）及びＢＣＭＡ－ＢｉＴＥ（１５μｌ／ウェル）を、様々な細胞を含有するウェルのそれぞれに個別に、又は一緒に添加した。６時間培養した後、フローサイトメトリーでＣＦＳＥ＋細胞を計数することによって細胞の生存能を決定した。

[75]図４Ｂで示した結果は、γ９δ２Ｔ細胞はそれ自体様々な血液がん細胞を殺滅する能力を有するだけでなく、ＢＣＭＡ－ＢｉＴＥと併用したとき血液がん細胞の殺滅において相乗効果を示すことを実証した。γ９δ２Ｔ細胞又はＢＣＭＡ－ＢｉＴＥ単独の使用と比較して、γ９δ２Ｔ細胞及びＢＣＭＡ－ＢｉＴＥの併用は、ＲＰＭＩ－８２２６血液がん細胞の殺滅の効果を相乗的に増加させた。

実施例３
免疫不全ＮＯＧマウスモデルにおける血液がん細胞の殺滅に対するγ９δ２Ｔ細胞及びＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標）の活性のインビボアッセイ
[76]この実験は、Ｔ細胞が欠如している免疫不全ＮＯＧマウス（Ｈｉｐｐら、Ｌｅｕｋｅｍｉａ、３１、１～９（２０１７）及びＭｏｎｊｅｚｉら、Ｌｅｕｋｅｍｉａ、３０、１～９（２０１６）を参照のこと）において実施した。

[77]最初に、レンチウイルスベクターを使用してルシフェラーゼ及び緑色蛍光タンパク質の遺伝子をＶＡＬ血液がん細胞（ＡＣＣ－５８６）に形質導入した（Ｚｈｏｕら、Ｂｌｏｏｄ、１２０、４３３４～４３４２（２０１２））。ルシフェラーゼ及び緑色蛍光タンパク質を発現しているＶＡＬ血液がん細胞（５×１０^５細胞）をＮＯＧマウスに尾静脈注射を介して移植した。

[78]ＶＡＬ血液がん細胞移植の４日後、実施例１から得られたγ９δ２Ｔ細胞をＮＯＧマウスに尾静脈注射を介して移植した。注射当たりの移植したγ９δ２Ｔ細胞の量は、ＶＡＬ細胞の量の２０倍であった。γ９δ２Ｔ細胞を１日おきに１回、全部で７回移植した。さらに、ＶＡＬ血液がん細胞移植の５日後、ＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標）を１４日間連続して、１日用量８００ｎｇで、８時間間隔で２回の注射に分けて、尾静脈から注入した。治療が完了した翌日に、マウスを殺処分し、骨髄を取り出してフローサイトメトリーを実施し、緑色蛍光タンパク質の活性を測定して、血液がん細胞の数を決定した。対照群のマウスには、γ９δ２Ｔ細胞もＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標）も移植しなかった。結果により、大量のＶＡＬ血液がん細胞が対照群のマウスの骨髄に依然として残存していることが示された（図５Ａ）。しかし、γ９δ２Ｔ細胞及びＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標）で治療したマウスの骨髄中には、ＶＡＬ血液がん細胞はほとんど認められなかった（図５Ｂ）。

実施例４
γ９δ２Ｔ細胞及びＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標）で治療した免疫不全ＮＯＧマウスの生存についての研究
[79]この実験では、Ｔ細胞が欠如している免疫不全ＮＯＧマウスを、骨髄移植を受けた後に早期再発している（Ｔ細胞の数が非常に少ないか、又は機能性Ｔ細胞（例えば、記憶Ｔ細胞）が欠如している）患者をシミュレートするために使用した。

[80]さらに、この実験では、骨髄移植を受けずに再発している患者をシミュレートするために、記憶Ｔ細胞を含有している末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をＮＯＧマウスに移植した。

[81]実施例３で記載した方法によれば、ルシフェラーゼ及び緑色蛍光タンパク質を発現しているＶＡＬ血液がん細胞（５×１０^５細胞）を２群のＮＯＧマウスに尾静脈注射を介して移植した。ＰＢＭＣ移植していないＮＯＧマウスを、実施例３に記載した治療に従って治療した。ＰＢＭＣ移植したＮＯＧマウスについては、末梢血から得られたＰＢＭＣを最初にシクロホスファミド、ビンクリスチン及びドキソルビシン塩酸塩で３日間処理し、化学療法によって治療されたＡＬＬ患者のＰＢＭＣを模倣し、その後ＶＡＬ血液がん細胞移植の４日後に尾静脈注射を介して移植した。ＰＢＭＣの移植細胞数はＶＡＬ細胞の２０倍であり、移植は３日毎に１回実施した。ＰＢＭＣ移植されたＮＯＧマウスに対するγ９δ２Ｔ細胞及びＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標）の治療は、実施例３に記載されたように実施した。

[82]図６Ａ及びＢは、骨髄移植を受けた後に早期再発している患者をシミュレートしているＮＯＧマウス（ＰＢＭＣ移植無し）におけるＶＡＬ血液がん細胞の生存曲線及び相対的生存日数（ｐ＜０．０１）の結果を示している。結果は、γ９δ２Ｔ細胞又はＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標）単独で治療したマウスの平均生存日数は、γ９δ２Ｔ細胞及びＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標）で治療しなかったマウスよりも１．５日長く、ＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標）と組み合わせてγ９δ２Ｔ細胞で治療したマウスの平均生存日数は約１５日長いことを示している。したがって、γ９δ２Ｔ細胞及びＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標）の併用療法は、γ９δ２Ｔ細胞又はＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標）単独での治療と比較して、ＮＯＧマウスの生存を相乗的に延長することができる。

[83]図７Ａ及びＢは、骨髄移植を受けずに早期再発している患者をシミュレートしているＮＯＧマウス（ＰＢＭＣ移植有り）におけるＶＡＬ血液がん細胞の生存曲線及び相対的生存日数（ｐ＜０．００１）を示している。結果は、γ９δ２Ｔ細胞単独で治療したＰＢＭＣ移植されたＮＯＧマウスの平均生存日数は、未治療のマウスよりも１．５日長く、ＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標）単独で治療したマウスの平均生存日数は、未治療のマウスよりも約５日長いことを示している。しかし、γ９δ２Ｔ細胞及びＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標）の組合せで治療したマウスについては、平均生存日数は、未治療よりも最高約２５．５日長いことがあり、これはγ９δ２Ｔ細胞又はＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標）単独で治療したマウスの生存日数全体の約３．９倍である。したがって、γ９δ２Ｔ細胞及びＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標）の併用療法は、γ９δ２Ｔ細胞又はＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標）単独での治療と比較して、ＰＢＭＣ移植したＮＯＧマウスの生存を相乗的に延長することができる。

実施例５
免疫不全ＮＯＧマウスにおける骨髄外疾患のためのγ９δ２Ｔ細胞及びＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標）の併用療法についての研究
[84]ＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標）は、合衆国において２年超に亘って販売されている。臨床適用におけるＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標）の効果を分析したとき、Ａｌｄｏｓｓら（ＡＭＪＨｅｍａｔｏｌ．、９２、８５８～８６５（２０１７））は、もし患者がＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標）による治療の前に骨髄外疾患を有していたならば、ＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標）の臨床治療効果は不十分であることを発見した。さらに、ＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標）による治療を受けた後再発した患者の最高４０％が骨髄外疾患を有していた。

[85]この実験では、ルシフェラーゼ及び緑色蛍光タンパク質の２つの遺伝子を有しているＶＡＬ血液がん細胞（５×１０^５細胞）をＮＯＧマウスに尾静脈注射を介して移植した。７日目から開始して、γ９δ２Ｔ細胞及びＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標）を実施例３で記載した方法に従ってＮＯＧマウスに移植したが、治療の期間は６日間に低減した。対照群は、ＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標）単独で７日目から投与開始した。治療を開始した日及び治療開始後の様々な時点で、ＩＶＩＳによってＮＯＧマウスを測定し、がん細胞の骨髄外増殖の指標として、腹部及び胸部におけるルシフェラーゼの強度を測定した。

[86]結果を図８に示す。γ９δ２Ｔ細胞及びＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標）の併用療法は、ＢＬＩＮＣＹＴＯ（登録商標）単独による治療と比較して、がん細胞の骨髄外増殖の出現を有意に低減させることができる（ｐ＜０．０１）。

Claims

治療を必要とする対象の血液がんの治療において使用するための医薬組成物であって、
治療有効量のブリナツモマブを含み、
治療有効量のＣＤ２７（－）及びＣＤ４５ＲＡ（－）エフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞と組み合わせて使用することを特徴とし、
前記エフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞がプログラム死－１（ＰＤ－１）を発現しておらず、前記エフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞がエキソビボにおいて増殖するものである、医薬組成物。
前記エフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞がそれらを必要とする前記対象に対して自己由来又は同種である、請求項１に記載の医薬組成物。
ブリナツモマブが医薬組成物に製剤化されている、請求項１又は２に記載の医薬組成物。
前記エフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞が医薬組成物に製剤化されている、請求項１～３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記血液がんが、非ホジキンリンパ腫又は急性リンパ芽球性白血病又は慢性リンパ性白血病である、請求項１～４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
前記急性リンパ芽球性白血病が再燃性又は治療抵抗性急性リンパ芽球性白血病である、請求項５に記載の医薬組成物。
治療を必要とする対象の血液がんの治療において使用するためのキットであって、
ブリナツモマブ、ＣＤ２７（－）及びＣＤ４５ＲＡ（－）エフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞及びそれらを必要とする対象の治療するべき血液がんを指示している添付文書を含み、
前記エフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞がプログラム死－１（ＰＤ－１）を発現しておらず、前記エフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞がエキソビボにおいて増殖するものである、キット。
前記エフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞がそれらを必要とする前記対象に対して自己由来又は同種である、請求項７に記載のキット。
ブリナツモマブが医薬組成物に製剤化されている、請求項７又は８に記載のキット。
前記エフェクター記憶γ９δ２Ｔ細胞が医薬組成物に製剤化されている、請求項７又は８に記載のキット。