JP7199096B2 - 皮膚疾患における治療標的としてのｆａｂｐ４ - Google Patents

Description

本発明は、ケラチノサイト及び免疫細胞の増殖及び／又は分化を調節する方法、より具体的には過剰増殖性ケラチノサイト又は炎症性皮膚疾患を特徴とする病状を治療する方法に関する。

ここに開示されている主題の背景として関連があると考えられる参考文献を以下に列挙する。
［１］Ｆｕｒｕｈａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ ２００８，７（６），４８９－５０３
［２］Ｃｏｅ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ １９９８，１３９１（３），２８７－３０６
［３］Ｈｏｔａｍｉｓｌｉｇｉｌ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ １９９６，２７４（５２９１），１３７７－１３７９
［４］Ｍａｅｄａ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｍｅｔａｂ ２００５，１（２），１０７－１１９
［５］Ｆｕｒｕｈａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ２００７，４４７（７１４７），９５９－９６５
［６］Ｔｕｎｃｍａｎ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ ２００６，１０３（１８），６９７０－６９７５
［７］Ｇａｒｉｎ－Ｓｈｋｏｌｎｉｋ ｅｔ ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ ２０１４，６３（３），９００－９１１
［８］Ｂｏｌｏｇｎｉａ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ ２０１２，Ｓｏｕｎｄｅｒｓ，３^ｒｄ ｅｄ．
［９］Ｋｒｕｅｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｒｈｅｕｍａｔｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ２００５（６４），３０－３６
［１０］Ｓｉｅｇｅｎｔｈａｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ １９９０，３，１９０，４８２－４８７
［ＩＩ］Ｆｌｏｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ２０１７，１３８，８５４－８７３
［１２］Ｃａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ Ｍｅｔａｂ ２０１３，１７，７６８－７７８
［１３］Ｂｕｒａｋ ｅｔ ａ．，Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ ２０１５，７，３１９ｒａ２０５
［１４］Ｍｉａｏ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ ２０１５，４０３，１－９
［１５］Ｗｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｍａｔｅｒ ２０１４，１３，１１５７－１１６４
［１６］Ｍａｄｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ １９９２，９９（３），２９９－３０５
［１７］Ｇｕｔｔｍａｎ－Ｙａｓｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１１，１２７（５），１１１０－１１１８
［１８］Ｙｕｓｐａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １９８９，１０９，１２０７－１２１７
［１９］Ｗｕ ｅｔ ａｌ．，Ａｕｓｔｒａｌａｓｉａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ ２００４，４５（１），４７－５０
［２０］Ｖａｎ ｄｅｒ Ｆｉｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２００９，１８２（９），５８３６－５８４５

本明細書における上記の参考文献の承認は、これらが現在開示されている主題の特許性に何らかの形で関連することを意味すると解釈されるべきではない。

脂肪酸結合タンパク質（ＦＡＢＰ）は、疎水性分子、特に長鎖脂肪酸とレチノイン酸のキャリアとして機能する小さな細胞質シャペロンである［１、２］。ＦＡＢＰファミリーメンバーのいくつかは、様々な代謝機能の重要な調節因子として同定されており、インスリン抵抗性、異常な脂質代謝、及びアテローム性動脈硬化症の発症に関連している。ＦＡＢＰは、細胞内脂肪酸及びその他の疎水性リガンドを、酵素、膜、及び核などの細胞目的地へ運ぶ。 ＦＡＢＰは細胞内脂質代謝の調節及び遺伝子発現の調節にも関与している。

細胞内の脂肪酸シャペロンのファミリーメンバーは、組織特異的に発現されている。Ａ－ＦＡＢＰ又はａＰ２とも呼ばれるＦＡＢＰ４は、脂肪細胞及びマクロファージにおける主要な脂肪酸結合タンパク質である。最近の研究は、ＦＡＢＰ４が肥満とインスリン抵抗性を結びつける経路の中心であり、全身のグルコース代謝と脂質代謝に重要な役割を果たすことを示している［３，４］。ＦＡＢＰ４はマクロファージにおいて炎症誘発性を有する。ＦＡＢＰ４の経口活性低分子阻害剤は、マウスモデルにおける重度のアテローム性動脈硬化症及び２型糖尿病に対する有効な治療薬であることがわかった［５］。さらに、転写活性の低下をもたらす、ＦＡＢＰ４プロモーターのＴ８７Ｃ多型を保有する個体は、ホモ接合型ＷＴ対立遺伝子を保有する対象と比較して、血清トリグリセリドが低く、アテローム性動脈硬化症及び２型糖尿病のリスクが有意に低い［６］。

転写因子ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体γ（ＰＰＡＲγ）は、脂肪生成、インスリン応答及び免疫機能に関連する遺伝子の主な調節因子であり、その活性化後に好ましい結果が得られる。ＰＰＡＲγは心血管細胞、特に内皮細胞の炎症反応を減少させることが示唆されている。ＦＡＢＰ４はＰＰＡＲγの発現を調節することが観察されており、それによってＦＡＢＰ４の阻害はマクロファージと脂肪細胞中のＰＰＡＲγのレベルを増加させ、ＦＡＢＰ４の過剰発現はＰＰＡＲγを減少させる［７］。また、ＦＡＢＰ４は、そのユビキチン化及び続くプロテアソーム分解を引き起こすことによってＰＰＡＲγを減少させることも示された。インビボで、ＦＡＢＰ４ヌルマウス前脂肪細胞は、ＰＰＡＲγの高い発現を示し、ＷＴマウスと比較して脂肪生成が著しく増強され、ＦＡＢＰ４が分化工程を調節することを示している。肥満、主に内臓肥満は、インスリン抵抗性、糖尿病、及びアテローム性動脈硬化症を促進することによって罹患率と死亡率を高める。皮下脂肪におけるレベルと比較して、マウス及びヒトにおける内臓脂肪においてＦＡＢＰ４が増加し、ＰＰＡＲγが減少したこともわかった。

皮膚は外界に対する機械的な障壁として機能するが、保護のために免疫システムも使用する。しかし、皮膚の免疫反応は必ずしも防御的ではないが、本質的に有害であり、病気を引き起こすことがある［８］。多くの皮膚疾患がＴリンパ球によって引き起こされ、したがって免疫学的に媒介される。その結果、多くの皮膚病は、全身に又は局所的に投与された免疫抑制療法に有利に反応する。皮膚病の多くは慢性的な経過をたどり、したがって治療が困難である。

乾癬は、世界人口のおよそ２乃至４％が罹患している慢性炎症性皮膚疾患である。その病因には表皮の欠陥及び免疫学的な機能欠陥の両方がある。乾癬の顕著な特徴は、ケラチノサイトの異常な分化と過剰増殖である。乾癬では、炎症細胞の浸潤とＴリンパ球の活性化がサイトカインの放出を引き起こし、その結果、ケラチノサイトの増殖と異常な分化が生じる［９］。

ＦＡＢＰ５は、表皮及び乾癬に関連するＦＡＢＰのファミリーメンバーであり、乾癬性皮膚病変において増加することが以前に発見された［１０］。しかしながら、一般的に皮膚科の濃度、特に乾癬における代謝調節因子ＦＡＢＰ４の役割はまだ観察されていない。

本発明の発明者らは、ＦＡＢＰ４が皮膚疾患、例えば乾癬のような炎症性皮膚疾患の発症に関するケラチノサイトと免疫細胞における必須の調整剤であることを発見した。これは、皮膚疾患の発症を抑制するのに有用であり得る医薬及び組成物の開発を可能にするとともに、これらの疾患が発症した後にその疾患の処置に使用することができる。

したがって、本開示の第１の態様では、ＦＡＢＰ４が関与する皮膚疾患又は症状の治療又は予防に使用する少なくとも１つのＦＡＢＰ４阻害剤を含む医薬組成物が提供されている。

ＦＡＢＰ４阻害剤は、ＦＡＢＰ４タンパク質の作用、機能又は発現を減少させる、制限する、又は遮断することのいずれかによってＦＡＢＰ４活性に影響する活性剤を意味する。ＦＡＢＰ４タンパク質活性の阻害は、ＦＡＢＰ４阻害剤が正常なタンパク質活性（例えば、阻害されていない、又は対照の）に対して有し得る阻害効果の範囲を含めて、広い意味で理解されるべきである。タンパク質活性の阻害は、必ずしもそうである必要はないが、タンパク質の活性の指標のレベル又は活性の増加をもたらす（例えば、これは、目的のタンパク質が下流の指標の阻害剤又は抑制遺伝子として作用している場合に起こり得る）。したがって、ＦＡＢＰ４タンパク質活性は、同じ指標の対照測定値と比較して、タンパク質の活性の任意の直接的又は間接的な指標のレベル又は活性が少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも５０％、少なくとも８０％、少なくとも１００％、又は少なくとも２５０％、又はそれ以上変化する（例えば、増加又は減少する）場合に阻害され得る。タンパク質活性の阻害はまた、例えば、タンパク質をコードする遺伝子の発現を阻害することによって、あるいはタンパク質をコードするｍＲＮＡの半減期を減少させることによっても影響を受けることがある。

いくつかの実施形態によれば、ＦＡＢＰ４阻害剤は、ペプチド、抗体、抗体断片、低分子、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピン型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、及びそれらの混合物から選択される。

低分子という用語は、最大で約５００Ｄａ、時には最大約１０００Ｄａ（ダルトン）の 分子量を有する分子を意味する。

低分子は、その主な構造的特徴として環を有する化合物である。この環は、通常、飽和又は不飽和（すなわち、シクロアルキル又はアリール）の３乃至１０員環（より典型的には５乃至６員環）であり、完全に炭素質であるか、１又はそれ以上のヘテロ原子を含む。すなわち、主環は、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール又はヘテロアリールであり、ここで、ヘテロ原子は、窒素、酸素及び硫黄のうちの１又はそれ以上である。代替的に、低分子は、２又はそれ以上の縮合環の系又はスピロ結合を有する系で、それぞれがシクロアルキル、ヘテロシクリル、アリール又はヘテロアリールであり、各環が３乃至１０個の環原子を有する（より典型的には、各々が５又は６個の環原子を有する）系であってもよい。

換言すると、本明細書で使用する場合、シクロアルキルは飽和単環式又は多環式系を意味し、ある実施形態では３乃至１０個の炭素原子、他の実施形態では３乃至６個の炭素原子、さらなる実施形態では５又は６個の炭素原子を有し；シクロアルケニル及びシクロアルキニルは、少なくとも１の二重結合及び少なくとも１の三重結合を含む単環式又は多環式系を意味する。

シクロアルキル、シクロアルケニル及びシクロアルキニル基の環系は、縮合、架橋又はスピロ結合の態様で互いに結合される１個の環又は２個以上の環から構成される。シクロアルキル（ケニル）（キニル）は、少なくとも１つの二重結合及び少なくとも１つの三重結合を含むシクロアルキル基を意味する。ヘテロシクリルは、単環式又は多環式の非芳香族環系を意味し、一実施形態では３乃至１０員、別の実施形態では４乃至７員、さらに別の実施形態では５乃至６員である。ここで、一又はそれ以上の所定の実施形態においては、環系中の原子のうち１乃至４個はヘテロ原子、すなわち、炭素、窒素、酸素又は硫黄を含むがこれらに限定されない炭素以外の元素である。ヘテロ原子（複数可）が窒素である実施形態では、窒素は選択的に、アルキル、アルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキル、シクロアルキル、ヘテロシクリル、アシル、グアニジン、又は窒素で置換されてもよく、四級化されてアンモニウム基を形成し、各々がさらに置換されていてもよい。

本明細書中で使用される場合、アリールは、５乃至１０個の炭素原子を含有する芳香族の単環式又は多環式基を意味する。アリール基としては、非置換又は置換フルオレニル、非置換又は置換フェニル、及び非置換又は置換ナフチルなどの基が挙げられるが、これらに限定されない。

ヘテロアリールは、所定の実施形態において、５乃至１８員の単環式又は多環式芳香環系を意味し、一又はそれ以上の実施形態では、環系中の原子の１乃至４個がヘテロ原子である、すなわち、窒素、酸素又は硫黄を含むがこれらに限定されない炭素以外の原子である。ヘテロアリール基は、選択的に芳香環又は非芳香環に縮合していてもよい。ヘテロアリール基は、フリル、イミダゾリル、ピリミジニル、テトラゾリル、チエニル、ピリジル、ピロリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、トリアゾリル、キノリニル及び ソキノリニルを含むがこれらに限定されない。

主環構造（単環を含むか又は縮合多環式系であるかのいずれか）は、その可能な各置換位置において、種々の置換基、例えばアルコキシ又はアルキルチオ基（ＲＯ－又はＲＳ－基）、ハロゲン化物（又はハロゲン原子、すなわちＩ、Ｂｒ、Ｃｌ及びＦ）、擬ハロゲン化物（例えばシアン化物、シアネート、チオシアネート、セレノシアン酸塩、トリフルオロメトキシ、アジド）、ハロアルキル、ハロアルコキシ、エステル（－ＣＯＯＲ基）、エーテル（?Ｒ’ＯＲ基）、アルカン酸（－ＲＯＯＨ）、アミノ、スルフィニル（－Ｓ（Ｏ）－）、スルホニル（－Ｓ（Ｏ）_２－）、スルホ（－Ｓ（Ｏ）_２Ｏ－）、モノ－又はジアルキルアミノカルボニル（－Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ又は－Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ’）、カルボキサミド（－ＮＲ’ＣＯＲ）、アミド（－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－）、チオアミド（－Ｃ（Ｓ）ＮＨ－）、オキシアミド（－ＯＣ（Ｏ）ＮＨ－）、チアアミド（－ＳＣ（Ｏ）ＮＨ－）、ジチアミド（－ＳＣ（Ｓ）ＮＨ－）、ウレイド（－ＨＮＣ（Ｏ）ＮＨ－）、チオウレイド（－ＨＮＣ（Ｓ）ＮＨ－）、ホルムアミド（－ＮＨ－Ｃ（Ｏ）－Ｈ）、その他などで置換されていてもよい。ここで、Ｒ及びＲ’は、各々、Ｃ_１－Ｃ_８直鎖又は分岐アルキル、アルキレン、アリール又はヘテロアリール基である。

本明細書で使用されているアミノは、一級、二級又は三級アミンに及び、結合点がＣ_１ 乃至Ｃ_６直鎖状又は分岐状アルキルで置換されている窒素原子を介している。三級アミンの場合、置換基は同一であっても異なっていてもよい。

いくつかの実施形態において、低分子は、カルバゾールアルカン酸又はカルバゾールアルカン酸誘導体、アリールスルホンアミド又はアリールスルホンアミド誘導体、スルホニルチオフェン又はスルホニルチオフェン誘導体、ヒドロキシピリミジン、カルバゾール又はカルバゾール誘導体、インドール又はインドール誘導体、カルバゾール又はカルバゾール誘導体、ベンゾイルベンゼン又はベンゾイルベンゼン誘導体、ビフェニル－アルカン酸又はビフェニル－アルカン酸誘導体、オキサゾール－アルカン酸又はオキサゾール－アルカン酸誘導体、ピリミジン又はピリミジン誘導体、ピリミドン又はピリミドン誘導体、ピリジン又はピリジン誘導体、ピラジン又はピラジン誘導体、ピラジノン又はピラジノン誘導体、テトラゾール又はテトラゾール誘導体、トリアゾロピリミジン又はトリアゾロピリミジン誘導体、トリアゾロピリミジノン又はトリアゾロピリミジノン誘導体、ピラゾール又はピラゾール誘導体、（２－（２’－（５－エチル－３，４－ジフェニル－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）（１，１’－ビフェニル）－３－イル）オキシ）－酢酸（ＢＭＳ３０９４０３）及び４－｛［２－メトキシカルボキシナイル）－５－（２－チエニル）－３－チエニル］アミノ｝－４－オキソ－２－ブタン酸（ＢＭＳ４８０４０４）、ならびにそれらの塩、立体異性体、水和物及び混合物、から選択される［１１］。

誘導体という用語は、本明細書に記載の親化合物から誘導される化学修飾化合物を意味し、親化合物とは置換基及び／又は官能基が異なり、本明細書で定義されているように、誘導体が親化合物と同じ又は同様の生物学的特性／活性を有する。例えば、ピラゾール誘導体は、（２－（２’－（５－エチル－３，４－ジフェニル－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）（１，１’－ビフェニル）－３－イル）オキシ）－酢酸（ＢＭＳ３０９４０３）である。

アルカン酸という用語は、１（又は２）乃至１８個の炭素を含む飽和又は不飽和炭素鎖の酸を指し、直鎖又は分岐鎖であり、例えばカルボン酸、エタン酸、プロパン酸、ブタン酸、ペンタン酸、ヘキサン酸、ヘプタン酸などである。

その他の実施形態において、低分子は、カルバゾールブタン酸、アリールスルホンアミド、スルホンブルチオフェン又はスルホンブルチオフェン誘導体、４－ヒドロキシピリミジン、２－ヒドロキシピリミジン、カルバゾール又はカルバゾール誘導体、テトラヒドロカルバゾール又はテトラヒドロカルバゾール誘導体、２，３－ジメチルインドール又は２，３－ジメチルインドール誘導体、ベンゾイルベンゼン、ビフェニルアルカン酸又はビフェニルアルカン酸誘導体、２－オキサゾールアルカン酸又は２－オキサゾール－アルカン酸誘導体、テトラヒドロピリミジン又はテトラヒドロピリミジン誘導体、ピリジン又はピリジン誘導体、ピラジン又はピラジノン誘導体、キノロン又はキノロン誘導体、アリールカルボン酸又はアリールカルボン酸誘導体、テトラゾール、トリアゾロピリミジン又はトリアゾロピリミジン誘導体、インドール又はインドール誘導体、フラボノイド（フラバノール、フラバノン、イソフラボン、ピラゾール又はピラゾール誘導体など）、（２－（２’－（５－エチル－３，４－ジフェニル－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）（１，１’－ビフェニル）－３－イル）オキシ）－酢酸（ＢＭＳ３０９４０３）及び４－｛［２－メトキシカルボニル）－５－（２－チエニル）－３－チエニル］アミノ｝－４－オキソ－２－ブタン酸（ＢＭＳ４８０４０４）、及びこれらの塩、立体異性体、水和物及び混合物、から選択される。

ＦＡＢＰ４阻害剤である例示的低分子を表１に示す。

いくつかの実施形態では、低分子は表１に詳述されているものから選択することができる。

いくつかの実施形態では、低分子は表１に詳述されたものから選択した少なくとも１つである。

いくつかの他の実施形態において、低分子は、ピラゾール又はピラゾール誘導体、（２－（２’－（５－エチル－３，４－ジフェニル－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）（１，１’－ビフェニル）－３－イル）オキシ）－酢酸（ＢＭＳ３０９４０３）、及び４－｛［２－メトキシカルボニル）－５－（２－チエニル）－３－チエニル］アミノ｝－４－オキソ－２－ブタン酸（ＢＭＳ４８０４０４）、ならびにこれらの塩、立体異性体、水和物及び混合物、から選択される。

さらなる実施形態では、低分子が、（２－（２’－（５－エチル－３，４－ジフェニルＬＨ－ピラゾール－１－イル）（１，１‘－ビフェニル）－３－イル）オキシ）－ 酢酸（ＢＭＳ３０９４０３）であってもよい。いくつかの他の実施形態では、低分子は、４－｛［２－メトキシカルボニル）－５－（２－チエニル）－３－チエニル］アミノ｝－４－オキソ－２－ブタン酸（ＢＭＳ４８０４０４）であってもよい。

いくつかの実施形態によれば、ＦＡＢＰ４阻害剤は、ＦＡＢＰ４に特異的に結合してその活性を阻害する抗体である。この抗体は、抗原のエピトープ、すなわちＦＡＢＰ４タンパク質又はその断片を特異的に認識して結合する、少なくとも軽鎖又は重鎖免疫グロブリン可変領域を含むポリペプチドリガンドである。この用語は、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ）’_２フラグメント、単鎖Ｆｖタンパク質（「ｓｃＦｖ」）、及びジスルフィド安定化Ｆｖタンパク質（「ｄｓＦｖ」）などの、当技術分野において公知の無傷の免疫グロブリン及びその変異体及び部分を意味する。この用語はまた、キメラ抗体（例えば、ヒト化ネズミ抗体）、及び異種結合抗体（例えば、二重特異性抗体）などの組換え形態も含む。また、Ｐｉｅｒｃｅ Ｃａｔａｌｏｇ ａｎｄ Ｈａｎｄｂｏｏｋ，１９９４－１９９５（Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．；Ｋｕｂｙ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ 第３版 ＷＨ Ｆｒｅｅｍａｎ＆Ｃｏ．，ニューヨーク １９９７も参照されたい。

抗体はモノクローナル抗体又はポリクローナル抗体であってもよい。モノクローナル抗体は、Ｂリンパ球の単一クローン又は単一抗体の軽鎖及び重鎖遺伝子がトランスフェクトされた細胞によって産生され、ヒト化モノクローナル抗体を含む。ポリクローナル抗体は、体内の様々なＢ細胞系統によって分泌される抗体である。

抗体はＦＡＢＰ４タンパク質又はそのフラグメントに特異的に結合すると言われている。すなわち、抗体は、ＦＡＢＰ４タンパク質及びその断片が混合されているその他の分子／巨大分子の実体との結合を超えて、ＦＡＢＰ４タンパク質及びそれらのフラグメントと選択的及び好ましい態様で関連付けることができる。ＦＡＢＰ４に対して阻害効果（又は中和効果）を有する抗体は、ＦＡＢＰ４の少なくとも１つの活性又はＦＡＢＰ４に関連する少なくとも１つの活性を、例えば、ＦＡＰＢ４が通常結合するリガンドへのＦＡＰＢ４の結合をブロックすることによって、その他のタンパク質とのＦＡＢＰ４のタンパク質－タンパク質相互作用を破壊するか、あるいは妨害することによって、阻害又は抑制する抗体である。

いくつかの実施形態では、抗体は抗ＦＡＢＰ４抗体である。例示的な抗ＦＡＢＰ４抗体は当該分野で記載されており、とりわけ、Ａｂ抗ＦＡＢＰ４［１２］、ＡｂＣＡ３３［１３］、Ａｂ２Ｅ４［１４］、などを含んでいてもよい。

ＦＡＢＰ４阻害剤は、いくつかの実施形態では、アンチセンス又はセンス阻害剤である。アンチセンス及びセンス阻害剤は生体高分子であり、特定の遺伝子、例えばＦＡＢＰ４をコード化する遺伝子によって産生されるメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）と結合（又はハイブリダイズ）し、それらの発現を不活性化又は調節する。アンチセンス阻害剤は、通常はオリゴマー化合物であり、ハイブリダイズする特定の標的核酸分子の領域に対して少なくとも部分的に相補的であり、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）を引き起こす。したがって、ＲＮＡｉは、配列特異的な一致を介してｍＲＮＡの標的化を通じて作用し、標的ｍＲＮＡの分解又は翻訳阻害をもたらし、例えばＦＡＢＰ４の発現の抑制といったタンパク質発現の変化又は喪失をもたらす。アンチセンス化合物の非限定的な例には、プライマー、プローブ、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ及びリボザイムが含まれる。アンチセンス又はセンス阻害剤のいずれも、ｄｓＤＮＡの一部を標的にするのに使用できる。これらはｄｓＤＮＡのその部分の発現を妨げるためである。アンチセンス分子はプラス鎖に結合することができ、センス分子はマイナス鎖に結合することができる。これらの化合物は、一本鎖、二本鎖、環状、分岐又はヘアピン化合物として導入することができ、内部又は末端のバルジ又はループなどの構造要素を含むことができる。二本鎖アンチセンス化合物は、二本鎖化合物、又は完全なあるいは部分多岐な二本鎖化合物の混成と形成ができる十分な自己相補性を有する一本鎖であってもよい。

ＦＡＢＰ４阻害剤は、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）であってもよく、これは２つのオーバーハングしたヌクレオチドを有し、リン酸化５’末端及びヒドロキシル化３’末端を有する１９乃至２５ｂｐの小さいｄｓＲＮＡ分子である。細胞型特異的キャリア分子に対する脂肪組織への特異的干渉ＲＮＡ送達の例は、［１５］に記載されている（参照により本明細書に組み入れられる）。いくつかの実施形態では、ＦＡＢＰ４阻害剤は、配列番号２乃至９の核酸配列を含むｓｉＲＮＡである。
センス３’ ｇｕａｇｇｕａｃｃｕｇｇａａａｃｕｕｇｕｕ（配列番号２）
アンチセンス５’ ｃａａｇｕｕｕｃｃａｇｇｕａｃｃｕａｃｕｕ（配列番号３）
センス３’ ｇａａａｕｇｇｇａｕｇｇａａａａｕｃａｕｕ（配列番号４）
アンチセンス５’ ｕｇａｕｕｕｕｃｃａｕｃｃｃａｕｕｕｃｕｕ（配列番号５）
センス３’ ｇａｕｇｕｇａｕｃａｃｃａｕｕａａａｕｕｕ（配列番号６）
アンチセンス５’ ａｕｕｕａａｕｇｇｕｇａｕｃａｃａｕｃｕｕ（配列番号７）
センス３’ ｇａａａｇｕｃａａｇａｇｃａｃｃａｕａｕｕ（配列番号８）
アンチセンス５’ ｕａｕｇｇｕｇｃｕｃｕｕｇａｃｕｕｕｃｕｕ（配列番号９）

適切なＦＡＢＰ４阻害剤の選択は、公知の適切な方法自体で行うことができる（例えば、Ｈｕｇｈｅｓ ｅｔ ａｌ，Ｂｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２０１１，１６２（６）１２３９）。例えば、活性化合物は、ＦＡＢＰ４に対する選択性と、その結果としてのＦＡＢＰ４阻害に対する有効性に基づいて、ライブラリーから選択して、スクリーニングすることができる。

さらに上述したように、マクロファージ及び脂肪細胞中のＰＰＡＲγの発現がＦＡＢＰ４によって負に調節され、内臓脂肪 などの炎症部位ではＦＡＢＰ４が増加し、ＰＰＡＲγが減少したことが本発明者らによって以前に観察されている［７］。本発明者らは、ＦＡＢＰ４が皮膚、Ｔリンパ球及びケラチノサイトにおいて過剰発現すること、及び、例えば炎症を伴う皮膚においてもＦＡＢＰ４の発現とＰＰＡＲγの発現との間に負の相関があることを見出した。したがって、理論に縛られることを望むものではないが、ＰＰＡＲγの活性化と同時に起こるＦＡＢＰ４の阻害は、様々な皮膚疾患の治療に相乗効果がある可能性がある。

したがって、本開示の医薬組成物は、少なくとも１つのＰＰＡＲγアゴニストを含むか、又は少なくとも１つＰＰＡＲγアゴニストと併用できる。ＰＰＡＲγアゴニストは、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体に結合する活性剤であり、この受容体を活性化する。

いくつかの実施形態によれば、医薬組成物は少なくとも１つのＰＰＡＲγアゴニストを含む。いくつかの実施形態では、少なくとも１つのＰＰＡＲγアゴニストはチアゾリジンジオン誘導体である。他の実施形態では、ＰＰＡＲγアゴニストは、ピオグリタゾン（Ａｃｔｏｓ）、ロシグリタゾン（Ａｖａｎｄｉａ）、ロベグリタゾン（Ｄｕｖｉｅ）、シグリタゾン、ダルグリタゾン、エングリタゾン、ネトグリタゾン、リボグリタゾン、トログリタゾン（Ｒｅｚｕｌｉｎ）、ローダニン、及びその他のチアゾリジンジオン誘導体から選択できる。当業者は理解するように、その他のＰＰＡＲγアゴニストは、インドール誘導体又は種々の非ステロイド性抗炎症薬（例えば、イブプロフェン）、ならびにその他のＰＰＡＲγアゴニストといった、本開示の範囲に包含される。

本開示の医薬組成物は薬学的に許容される担体を含んでいてもよい。薬学的に許容される担体は、例えば、ビヒクル、アジュバント、賦形剤、又は希釈剤であり、当業者には周知であって一般に容易に入手可能である。例えば、Ｅ．Ｗ．ＭａｒｔｉｎによるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ ペンシルベニア州イーストン 第１５版（１９７５）を参照されたい。薬学的に許容される担体は、活性化合物に対して化学的に不活性であるもの、及び使用条件下で有害な副作用又は毒性を有さないものであることが好ましい。担体の選択は、特定の部分的な活性剤によって、また組成物の投与に使用する特定の方法によって決まる。したがって、多種多様な適切な製剤の医薬組成物が本開示に包含される。

薬学的に許容される担体は、ＦＡＢＰ４阻害剤の局所投与、経口投与、直腸投与、膣投与、経皮投与、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与、眼内投与、及び鼻腔内投与に適している。医薬組成物は製薬業界で周知の方法で調製される。本開示の医薬組成物を製造する際に、その成分は通常賦形剤と混合するか、賦形剤で希釈するか、又は所望の形態に操作できるそのような担体内に封入する。特定の投与方法に基づいて、医薬組成物は、錠剤、丸剤、カプセル剤、サシェ剤、顆粒剤、散剤、チューインガム、懸濁剤、乳剤、液剤、ゲル剤、ローション剤、油剤、石鹸、スプレー剤、クリーム剤、軟膏剤、フィルム、マイクロカプセル、マイクロスフェア、リポソーム、ベシクル、マイクロエマルジョン、リポスフェア、パッチ、及びエトソームに製剤できる。

いくつかの実施形態によれば、この医薬組成物は少なくとも１つのＦＡＢＰ４阻害剤を局所的に、経口的に、吸入によって、経鼻的に、経皮的に、眼球内に、又は非経口的に対象の循環系に送達するように適合できる。

いくつかの実施形態によれば、この医薬組成物は注射によって少なくとも１つのＦＡＢＰ４阻害剤を投与するように適合できる。

その他の実施形態によれば、この医薬組成物は前記少なくとも１つのＦＡＢＰ４阻害剤を経口投与するように適合できる。

経口投与に適した製剤は、（ａ）水、食塩水又はジュース（例えばオレンジジュース）などの希釈剤に溶解させた有効量の化合物又はそれを含む組成物といった液体溶液；（ｂ）固形剤又は顆粒剤としてそれぞれ所定量の有効成分を含むカプセル剤、サシェ剤、錠剤、ロゼンジ剤及びトローチ剤；（ｃ）粉末；（ｄ）適切な液体中の懸濁液；（ｅ）適切な乳剤；からなる。液体製剤は、水や、例えばエタノール、ベンジルアルコール、及びポリエチレンアルコールといったアルコールなどの希釈剤を含んでいてもよく、薬学的に許容される界面活性剤、懸濁剤、又は乳化剤を添加してもしなくともよい。カプセル形態は、通常の硬質又は軟質ゼラチン型のものであり、例えば、界面活性剤、潤滑剤、及び不活性充填剤、例えばラクトース、スクロース、リン酸カルシウム、及びコーンスターチを含んでいてもよい。錠剤形態は、ラクトース、スクロース、マンニトール、コーンスターチ、ポテトスターチ、アルギン酸、微結晶セルロース、アラビアゴム、ゼラチン、グアーガム、コロイド状二酸化ケイ素、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸の一又はそれ以上、及び、その他の賦形剤、着色剤、希釈剤、緩衝剤、崩壊剤、保存剤、香味剤、及び薬理学的に適合する担体、を含んでいてもよい。ロゼンジ形態は、通常スクロース及びアカシア又はトラガカント、といった香味剤中に活性成分を含んでいてもよく、また、トローチは、例えばゼラチン及びグリセリン、又はスクロース及びアカシア、乳濁液、ゲルといった不活性基材に活性成分を含んでいてもよく、この活性成分に加えて当技術分野において公知のキャリアを含んでいてもよい。

本開示の医薬組成物は、炎症性皮膚疾患の治療又は予防に使用するものであり、全身的又は非全身的効果を誘発するように適合させることができる。すなわち、この組成物は活性剤であるＦＡＢＰ４阻害剤を対象の循環系に送達するように、又は活性剤を標的部位（例えば、皮膚の特定の層）に送達するように適合させることができる。

知られているように、ヒトの皮膚は多数の層でできており、皮膚の外側表面に位置する角質層、表皮、及び真皮の３つの主要なグループ層に分けられる。角質層は細胞外の脂質に富んだマトリックス中のケラチンで満たされた細胞層であるが、実際は皮膚への薬物送達に対する主な障壁であり、表皮層と真皮層は生活組織である。表皮は血管を含んでいないが、真皮は毛細管ループを含んでおり、経上皮全身分布のために治療薬を導くことができる。

いくつかの実施形態では、医薬組成物は、前記少なくとも１つのＦＡＢＰ４阻害剤を経皮投与するように適合している。他の実施形態では、医薬組成物は、少なくとも１つのＦＡＢＰ４阻害剤は皮膚層にわたって局所投与するように適合している。その他のいくつかの実施形態では、医薬組成物は、少なくとも１つのＦＡＢＰ阻害剤を角質層にわたって局所送達するように適合している。

医薬組成物は、ゲル、ローション、オイル、石鹸、スプレー、エマルジョン、クリーム、軟膏、溶液、懸濁液、フィルム、マイクロカプセル、ミクロスフェア、リポソーム、ベシクル、マイクロエマルジョン、リポスフェア、及びパッチなど、皮膚投与又は局所投与に適した任意の形態に製剤化することができる。

本開示の医薬組成物は、ＦＡＢＰ４が過剰発現している皮膚疾患又は症状の治療又は予防に使用される。いくつかの実施形態では、皮膚疾患又は状態を、乾癬、皮膚炎（アトピー性、脂漏性、接触）、湿疹、類乾癬、扁平苔癬、毛包扁平苔癬、急性痘瘡状苔癬状粃糠疹、慢性苔癬状粃糠疹、紅斑性疹、黄斑症、移植片対宿主病、組織球症、薬に起因する発疹、自己免疫性結合組織病（例、ループス）、酒さ、毛包炎、にきび、いぼ、魚鱗癬、瘢痕性脱毛症、皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）、光線性角化症、扁平上皮癌、基底細胞癌、母斑、単純扁平苔癬、乾癬、角化症、角膜皮膚炎、そう痒症、やけど、瘢痕、皮膚硬結、ケロイから成る群から選択することができる。

いくつかの実施形態によれば、皮膚疾患がリンパ腫（ＣＴＣＬ）である。

その他の実施形態では、本開示の医薬組成物は、炎症性皮膚疾患又は状態の治療又は予防に使用される。すなわち、この組成物は、ＦＡＢＰ４が過剰発現している炎症性成分を含む皮膚疾患又は症状に対して少なくとも１つの治療効果を引き起こす。

いくつかの実施形態では、炎症性皮膚疾患また状態状は、乾癬、皮膚炎（アトピー性、脂漏性、接触）、湿疹、類乾癬、扁平苔癬、扁平苔癬、毛包扁平苔癬、急性痘瘡状苔癬状粃糠疹、慢性苔癬状粃糠疹、紅斑性疹、黄斑症、移植片対宿主病、組織球症、薬物誘発性発疹、自己免疫性結合組織病（例、ループス）、酒さ、毛嚢炎、ニキビ、いぼ、魚鱗癬、白斑、瘢痕性脱毛症、及びＣＴＣＬから成る群から選択することができる。

そのような実施形態によれば、炎症性皮膚疾患がは乾癬である。その他の実施形態によれば、炎症性皮膚疾患が皮膚炎（アトピー性、脂漏性、接触）である。

別の態様によれば、少なくとも１つのＦＡＢＰ４阻害剤の経皮送達用の局所製剤が提供されており、この組成物は少なくとも１つのＦＡＢＰ４阻害剤と、少なくとも１つの薬学的に許容される担体とを含む。いくつかの実施形態において、この局所製剤は少なくとも１つのＰＰＡＲγアゴニストをさらに含んでいてもよい。

本開示のさらなる態様は、対象の皮膚疾患（例えば炎症性皮膚状態）を治療又は予防する方法を提供しており、必要とする対象に治療有効量の少なくとも１つのＦＡＢＰ４阻害剤又はこの阻害剤を含む医薬組成物を投与するステップを具える。この治療方法に使用するＦＡＢＰ４－阻害剤は、本明細書に詳述したものから選択することができる。

さらなる態様では、対象の乾癬を治療又は予防する方法を提供しており、必要とする対象に治療有効量の少なくとも１つのＦＡＢＰ４阻害剤又はこの阻害剤を含む医薬組成物を投与するステップを具える。

別の態様は、対象のＣＴＣＬを治療又は予防する方法を提供しており、必要とする対象に治療有効量の少なくとも１つのＦＡＢＰ４阻害剤又はこの阻害剤を含む医薬組成物を投与するステップを具える。

本開示の医薬組成物は、任意の病状又は症状を治療、予防又は診断用に選択できる。本明細書で使用される場合、治療という用語又はその言語的変形は、治療量のＦＡＢＰ４－阻害剤の投与を意味する。これは、疾患に関連する望ましくない症状を改善し、発症前にそのような症状の出現を防止し、疾患の進行を遅らせ、症状の悪化を遅らせ、緩解期の開始を促進し、疾患の進行性慢性期に生じた不可逆的な損傷を軽減し、進行期の開始を遅らせ、重症度を軽減するか又は疾患を治癒させ、生存率又はより急速な回復を改善し、症状又は上記の２又はそれ以上の組み合わせが生じることを防止するのに有効である。

知られているように、本明細書の目的の有効量は、当技術分野において知られている考えによって決定される。その量は、とりわけ治療する疾患の種類及び重症度ならびに治療計画に応じて、所望の治療効果を達成するのに有効でなければならない。有効量は通常、適切に設計された臨床試験（用量範囲試験）で決定され、当業者は有効量を決定するこのような試験を適切に実施する方法を知っている。一般的に知られているように、有効量は、受容体に対するリガンドの親和性、体内でのその分布プロフィール、体内での半減期などの様々な薬理学的パラメータを含む様々な要因や、あれば望まない副作用、年齢や性別、その他の要素に依存している。

いくつかの実施形態によれば、この治療方法は、対象にＰＰＡＲγアゴニストを投与するステップをさらに具える。ＰＰＡＲγアゴニストは、前記少なくとも１つのＦＡＢＰ４阻害剤と同時に投与してもよく、あるいはＦＡＢＰ４阻害剤に連続して投与することができる。

本明細書で使用されているように、同時に又はその言語的変形は、組成物の成分が同時に投与されること、例えば一方が他方と一緒に投与されることを意味して、使用される。同時投与は、組み合わせにおける最初の投与成分の循環半減期濃度が、その後に投与される別の成分と治療上有効な量で同時に存在するのであれば、別の成分の投与後一定期間内（例えば５分、１０分又は数時間でさえ）であれば、投与すべき組み合わせのうちの１つの成分を投与することができる。これらの成分の投与間の時間遅延は、成分の正確な性質及び成分を含有する製剤、個々の成分間の相互作用、成分のそれぞれの半減期、及び熟練者によって容易に認識さえるその他の要因に応じて異なる。

シーケンシャルに（又は、個別に）又はこれらの言語的変形は、本明細書では、ある成分と他の成分とを投与する間の期間が有意である、すなわち治療上有効量で最初に投与された成分が、第２の（次の）成分が投与されたときには、血流中にもはや存在しない（又は無症状量で存在する）ことを意味する。

上述したように、本発明者らは、ＦＡＢＰ４は、炎症性皮膚疾患を有する患者由来からの皮膚組織生検におけるケラチノサイト又は炎症性細胞（マクロファージ及びリンパ球など）においては過剰発現するが、非関与皮膚組織においては有意に発現しないことを見出した。したがって、ＦＡＢＰ４過剰発現の同定は、対象の早期発症型炎症性皮膚疾患の検出に、又は炎症性皮膚疾患を発症している対象の素因の検出に利用することができる。

したがって、本開示の別の態様は、炎症性皮膚疾患又は状態を発症している対象における素因を検出する（又は炎症性皮膚疾患又は状態の早期発症を検出する）方法を提供し、この方法は、患者のケラチノサイト又は炎症細胞（マクロファージや、リンパ球）を含むサンプル中のＦＡＢＰ４の発現を検出する方法を具える。ここで、サンプル中の所定の塩基レベルを上回るＦＡＢＰ４の存在は、炎症性皮膚疾患又は状態を発症する素因を示す。炎症性皮膚疾患又は状態は、本明細書に記載の疾患及び状態のいずれでもあってもよい。

いくつかの実施形態では、所定の塩基レベルが、正常な皮膚サンプル中のＦＡＢＰ４のレベルである。

素因という用語は、本明細書では、対象を炎症性皮膚疾患などの状態、疾患、又は障害に罹りやすくさせる１つ又は複数の要因の効果を指す。いくつかの実施形態では、ここに開示された方法は、状態、疾患、又は障害を発症する素因のある被験体の同定に使用でき得る。

検出は定性的又は定量的であり、公知の適切な方法により実施できると理解されるべきである。このような方法の非限定的な例には、免疫組織化学、ＰＣＲ技術（ＲＴ－ＰＣＴ及びｑＲＴ－ＰＣＲを含む）、ウエスタン分析、インサイチューハイブリダイゼーションなどがある。

生物学的サンプルは、被験体から直接又は間接的に得ることができ；全血、血漿、血清、涙、粘液、唾液、尿、胸水、組織、細胞（線維芽細胞、末梢血単核球、又は皮膚細胞など）、臓器及び／又は組織の抽出物を含む。

いくつかの実施形態では、生物学的サンプルが皮膚サンプルである。

試料中のＦＡＢＰ４の検出は、ＦＡＢＰ４核酸の発現、ＦＡＢＰ４タンパク質フラグメントの発現、及び／又はＦＡＢＰ４タンパク質の発現、を検出することを意味するとを理解すべきである。

対照レベル又は塩基レベルとは、健常対象における、又は対象の非関与サンプル由来の、塩基濃度又はＦＡＢＰ４の発現を示す既知の値などの参照標準を指す。特定の例では、対照試料は、乾癬などの疾患又は状態を有さないことがわかっている対象から採取される。その他の例では、診断を受けた対象からであるが、疾患の発症前、又は疾患治療の前又はそれより早い時点のいずれかの時点で得られる。

試験試料と対照との差は、ＦＡＢＰ４タンパク質、断片又は核酸の発現の増加又は逆に減少である。この差は、定性的差あるいは統計的に有意な差といった定量的差であり得る。いくつかの例では、差が、対照に対して、少なくとも約１０％、例えば少なくとも約２０％、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％の増加又は減少である。少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、少なくとも約１００％、少なくとも約１５０％、少なくとも約２００％、少なくとも約２５０％、少なくとも約２５０％、少なくとも約５０％約３００％、少なくとも約３５０％、少なくとも約４００％、少なくとも約４５０％、又は５００％超の増加又は減少である。

さらに別の態様では、本開示は、対象において炎症性皮膚疾患を治療又は予防する方法を提供しており；
被験体由来のケラチノサイト又は炎症性細胞を含有する試料中のＦＡＢＰ４の発現を検出するステップと、
ＦＡＢＰ４発現が所定の塩基レベルを上回るか下回るかを決定するステップと；
試料中のＦＡＢＰ４発現が所定の塩基レベルを上回る場合、治療有効量の少なくとも１つのＦＡＢＰ４阻害剤又はそれを含む医薬組成物を対象に投与するステップと；
を具える。

治療又は診断を受ける対象は、ヒト及び非ヒト哺乳動物の両方（すなわち、ヒト及び、例えば、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、ウマ、及びウシといった獣医の対象）を指す。

本明細書で使用されているように、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈が明らかにそうでないことを指示しない限り、複数の言及を含む。

本明細書で使用されるように、約という用語は、濃度、分子量などのパラメータの具体的に言及された値から±１０％の偏差を包含することを意味する。

数値範囲が本明細書に示されている場合は、示された範囲内の任意の引用数字（分数又は整数）を含むことを意味する。第１の指示番号と第２の指示番号との間の「範囲／範囲」及び「第１の指示番号」から「第２の指示番号までの範囲／範囲」は本明細書では互換的に使用され、第１及び第２の指示番号と、その間のすべての小数及び整数の数字を含むことを意味する。

［配列の簡単な説明］
本明細書と共に提供される核酸配列（以下の表２）は、３７Ｃ．Ｆ．Ｒ１．８２２に規定されるヌクレオチド塩基の標準的な略語を用いて示されている。各核酸配列の一方の鎖のみが示されているが、相補鎖は表示されている鎖への言及によって含まれると理解される。

本明細書に開示されている主題をよりよく理解し、それが実際にどのように実行され得るかを例示するために、添付の図面を参照して非限定的な例として実施形態を説明する。
図１Ａ乃至１Ｆは、ヒト皮膚の免疫組織化学染色におけるＦＡＢＰ４及びＰＰＡＲγタンパク質の発現を示す：健康対照皮膚（図１Ａ及び１Ｂ）、乾癬を発症している皮膚（図１Ｃ及び１Ｄ）、及び皮膚炎を発症している皮膚（図１Ｅ及び１Ｆ）。組織切片を抗ＦＡＢＰ４（図１Ａ、１Ｃ、１Ｅ）、又は抗ＰＰＡＲγ（図１Ｂ、１Ｄ、１Ｆ）抗体で染色した。原寸×１００。 図２Ａ乃至２Ｃは、ヒト皮膚の免疫組織化学染色におけるＦＡＢＰ４タンパク質の発現を示す：正常ヒト皮膚（図２Ａ）、乾癬を発症している皮膚の表皮（図２Ｂ）、及び乾癬を発症している皮膚の真皮（図２Ｃ）。組織切片を抗ＦＡＢＰ４抗体で染色した。原寸×２００。 図３Ａ及び３Ｂは、ヒト皮膚の免疫組織化学染色におけるＰＰＡＲγタンパク質の発現を示す：正常ヒト皮膚（図３Ａ）、及び乾癬を発症している皮膚（図３Ｂ）。組織切片を抗ＰＰＡＲγ抗体で染色した。原寸×２００。 図４Ａ及び４Ｂは、ヒト皮膚のＦＡＢＰ４タンパク質の免疫組織化学染色である：正常皮膚（図４Ａ）、及びヒト皮膚のＴ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）皮膚病変（図４Ｂ）。組織切片を抗ＦＡＢＰ４抗体で染色した。原寸×２００。 図５は、ＦＡＢＰ４を過剰発現している一時マウスのケラチノサイトにおけるケラチノサイト分化マーカーＫ１及びＫ５のレベルを示す免疫ブロット（ウエスタンブロット）である。ケラチノサイトを、ＧＦＰでタグ付けされたＦＡＢＰ４を発現しているレンチウイルスベクター（ＦＡＢＰ４－ＧＦＰ）、ＧＦＰを発現しているレンチウイルスベクター（ＧＦＰ）で感染させた、あるいは、処置をしていない（感染させていない）。 図６は、様々な時点におけるインビボ実験からの動物の乾癬面積重症度指数（ＰＡＳＩ）スコアを示す。＊ｐ＜０．０５；ビヒクル群と比較して＊＊＊ｐ＜０．００１（二元配置分散分析、続いてボンフェローニ事後検定を使用）。 図７は、様々な時点におけるインビボ実験からの動物の紅斑重症度スコアを示す。ビヒクル群と比較して＊＊＊ｐ＜０．００１（二元配置分散分析、続いてボンフェローニ事後検定を使用）。 図８は、様々な時点におけるインビボ実験からの動物の皮膚厚重症度スコアを示す。＊＊ｐ＜０．０１；ビヒクル群と比較して＊＊＊ ｐ＜０．００１（二元配置分散分析、続いてボンフェローニ事後検定を使用）。 図９は、様々な時点におけるインビボ実験からの動物のスケーリング重症度スコアを示す。＊ｐ＜０．０５、＊＊ｐ＜０．０１；ビヒクル群と比較して＊＊＊ｐ＜０．００１（二元配置分散分析、続いてボンフェローニ事後検定を使用）。 図１０Ａ乃至１０Ｆは、インビボ実験の７日目のマウスの代表的写真である：ナイーブ（図１０Ａ）、ビヒクル（図１０Ｂ）、ＢＭＳ５ｍｇ／ｋｇ（図１０Ｃ）、ＢＭＳ５ｍｇ／ｋｇ（図１０Ｄ）、ＢＭＳ３０ｍｇ／ｋｇ（図１０Ｅ）、及び酢酸コルチゾン（図１０Ｆ）。

以下の実施例は、特定の特徴及び／又は実施形態の説明に提供される。これらの実施例は、開示を記載された特定の特徴又は実施形態に限定すると解釈されるべきではない。

実施例１：ヒト乾癬性皮膚病変におけるＦＡＢＰ４、ＦＡＢＰ５、及びＰＰＡＲγの組織発現分析
乾癬を発症している患者の皮膚からパンチ生検（直径４ｍｍ）を得た（ｎ＝１０）。さらに慢性皮膚炎を発症している患者の皮膚から生検を得た（ｎ＝５）。余分な皮膚を外科的に取り除いた後、患者から正常な皮膚を得た（ｎ＝１０）。組織をホルマリンで固定し、パラフィンに包埋した。光学顕微鏡による組織病理学的検査用に、切片をヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）で染色し、そして診断を確認した病理学者が観察した。さらに、免疫組織化学的分析用に、切片を以下の抗体で染色した：ＦＡＢＰ４（ウサギポリクローナル抗ＦＡＢＰ４抗体、ＰＡＢ １２２７６、Ａｂｎｏｖａ社製）、ＦＡＢＰ５（ウサギポリクローナル抗ＦＡＢＰ５の抗体、ＳＣ－５０３７９、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｓ社製）とＰＰＡＲγ（マウスモノクローナル抗ＰＰＡＲｖγ抗体、Ｅ－８、Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｓ社制）、すべて１：５０に希釈した。ラフィン包埋組織及び凍結保存組織を標準的なプロトコルに従って処理した。

図１Ｃは、表皮及び真皮の両方において、正常な皮膚と比較した乾癬性皮膚病変で検出された高い発現レベルのＦＡＢＰ４を示す（図１Ａ）。この所見は、試験を行った乾癬を発症しているすべての生検で観察された（有病率１００％）。本発明者らの知る限りでは、乾癬病変におけるケラチノサイト及び真皮細胞におけるＦＡＢＰ４の発現が報告されたのはこれが初めてである。理論に縛られることを望むものではないが、この所見は、ＦＡＢＰ４の過剰発現が、表皮角化細胞の調節異常と、乾癬の分化の調節異常に関連していることを示唆している。さらに、この所見は、乾癬のもう一つの重要な特徴である、真皮免疫細胞における炎症を促進するＦＡＢＰ４の役割を支持する。

乾癬よりは少ないが、図１Ｅに示すように、真皮中のケラチノサイト及び炎症性細胞の両方におけるＦＡＢＰ４レベルの増加も、慢性皮膚炎患者からの皮膚生検において観察された（図１Ｃ）。

更に、ＦＡＢＰ４とＰＰＡＲγの発現間の負の相関は、ケラチノサイト及び免疫細胞で観察された：一方、正常な皮膚のＰＰＡＲγは、図１Ｂに示すように、表皮全体と真皮中の少数の細胞に検出されたが、乾癬の病変ではＰＰＡＲγの発現が有意に減少し、表皮の最上層にのみ表示され、真皮細胞では検出されなかった（図１Ｄ）。図１Ｆに示すように、ＰＰＡＲγの発現は皮膚炎を発症した皮膚の生検においても減少した。以前に報告されているように（［１６］、図示せず）、ＦＡＢＰ５は乾癬皮膚由来のケラチノサイトにおいてのみ発現した。

乾癬性皮膚は、多層のケラチノサイトからなる過剰増殖性表皮を特徴とし、その結果皮膚の厚さが厚くなる。より高い倍率では、ＦＡＢＰ４は乾癬病変における過形成表皮全体にわたって示され、図２Ｂに示すように、染色は基底層においてはほとんどが細胞質であり、上部層においては細胞核であった。真皮におけるＦＡＢＰ４発現は、図２Ｃに示すように、細胞質パターンで、マクロファージ、リンパ球及び内皮細胞において主に観察された。乾癬皮膚におけるＰＰＡＲγ発現は、表皮において著しく減少し、最上層においてのみ出現し、正常皮膚と比較すると真皮においては検出されなかった（図３Ｂ対３Ａを参照）。

これは、炎症性成分を有する皮膚疾患を発症する傾向が、真皮及び表皮の皮膚サンプルにおけるＦＡＢＰ、特にＦＡＢＰ４の発現を評価することによって検出できることを示唆している。また、ＦＡＢＰ４の過剰発現とＰＰＡＲγの下方制御が、乾癬の病因に関連していることを示唆している。

実施例２：ヒト皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）皮膚病変におけるＦＡＢＰ４の組織発現分析
ＣＴＣＬは皮膚ホーミングＴ細胞の一群の新生物である。菌状息肉腫（ＭＦ）はＣＴＣＬの最も一般的なタイプを表し、全原発性皮膚リンパ腫の約５０％を占めている。本来悪性ではあるが、ＭＦは炎症性の皮膚炎様症状を呈する長期の臨床経過をたどっている［８］。

ＭＦ患者におけるＦＡＢＰ４の発現を、病変皮膚の免疫組織化学的分析を行うことによって調べた。ＭＦの５人の患者からの試料を試験し、正常なヒトの皮膚と比較した。パンチ生検（直径６ｍｍ）は、ＭＦの患者の疾患のある皮膚から得た。余分な皮膚を外科的に縮小した後、患者から正常な皮膚を得た。実施例１に記載したように、組織切片を処理し、抗ＦＡＢＰ４抗体で染色した。

図４Ｂ及び４Ａにそれぞれ示すように、試験した全ての患者について、正常な皮膚と比較して、ＭＦ病変において高い発現レベルでＦＡＢＰ４が観察された。ＦＡＢＰ４の発現は、表皮及び真皮における浸潤性Ｔリンパ球に限定されていた。ＭＦの特徴である強い細胞質染色が、真皮浸潤細胞にならびに下部表皮を貫通した悪性細胞で観察された。

したがって、悪性ＣＴＣＬ Ｔリンパ球においてＦＡＢＰ４タンパク質が高く発現するため、過剰発現の検出を用いて、ＣＴＣＬの発症に対する患者の傾向を決定することができ、あるいは、早期発見が可能になる。

多くの皮膚疾患（乾癬、皮膚炎、ＣＴＣＬを含む）はリンパ球、主にリンパ球によって媒介されている［１７］。ＦＡＢＰ４の発現は、マクロファージ、脂肪細胞及び内皮細胞においてのみの、限定された細胞型のレパートリーで報告されている。本発明者によって行われた免疫組織化学分析では、ＦＡＢＰ４は真皮の炎症細胞に、マクロファージ及びリンパ球の両方において発現すことがわかった。リンパ球におけるＦＡＢＰ４の発現はこれまでになく、真皮細胞における発現も一般的にはないので、これらの知見は皮膚疾患に高い関連性がある。

実施例３：一次マウスケラチノサイトにおけるＦＡＢＰ４の過剰発現
乾癬に見られるように、ケラチノサイトへのＦＡＢＰ４の導入が、分化が損なわれた過剰増殖状態を作り出すことが示唆された。２つのケラチノサイト分化マーカーＫ１及びＫ５の発現を測定することによって分化を評価した。Ｋ５は、レベルがケラチノサイト分化の間に変化せず、したがってローディングコントロールとして働くケラチンであり、一方Ｋ１は通常のケラチノサイト分化の間に誘発される。

マウスの一次ケラチノサイトにおけるＦＡＢＰ４過剰発現の効果を評価するために、細胞にＦＡＢＰ４遺伝子を含むレンチウイルスベクター構築物を感染させた。ＦＡＢＰ４－Ｔ２Ａ－ＥＧＦＰと名付けられたＦＡＢＰ４レンチウイルスベクターは、ＣＭＶプロモーター下でＡＢＰ４遺伝子を用いて構築され、発現レポーターとして緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）遺伝子を含んでいる。ＦＡＢＰ４タンパク質のＮ末端にＴ２Ａ残基が存在すると、それらの結合の妨害により、市販の抗ＦＡＢＰ４抗体によるＦＡＢＰ４検出が不可能になる。したがって、感染とＦＡＢＰ４過剰発現の検証に、抗ＧＦＰ抗体を代用した。

ＦＡＢＰ４発現の有無にかかわらず、一次マウスケラチノサイトにおけるＫ１及びＫ５分化マーカーの発現を評価するために、上記に記載したように一次ケラチノサイトを新生児マウスから調製し［１８］、ＦＡＢＰ４－Ｔ２Ａ－ＥＧＦＰベクターを感染させた。２つの内部対照を使用した：レンチウイルスに感染していない細胞と、ＦＡＢＰ４遺伝子を欠くＥＧＦＰベクターに感染した細胞である。この細胞を３つの異なる濃度のカルシウム含む分化培地中で増殖させた。低濃度（０．０５ｍＭ）から中濃度（０．１２ｍＭ）又は高濃度（１ｍＭ）への細胞外カルシウムの上昇が、ケラチノサイトの分化を誘導した。

トランスフェクト細胞及び非トランスフェクト細胞におけるケラチノサイト分化マーカーＫ１及びＫ５の発現を図５に示す：ＦＡＢＰ４－Ｔ２Ａ－ＥＧＦＰを発現するレンチウイルスによる感染は、非感染細胞やＧＦＰ感染細胞と比較して、中及び高カルシウム条件の両方でＫ１レベルを低下させた。予想通り、Ｋ５のレベルは、感染がないケラチノサイト分化の間には変化しなかった。ＦＡＢＰ４過剰発現がＫ１を低下させるという観察結果は、ＦＡＢＰ４がケラチノサイトの正常な分化プロセスに干渉し、乾癬に似た過剰増殖状態を促進することを示唆している。

実施例４：マウスのイミキモド誘発型乾癬モデルにおけるインビボでのＦＡＢＰ４の阻害
上述したように、乾癬は慢性炎症性皮膚疾患である。免疫系が皮膚細胞を病原体と間違えて、皮膚細胞の増殖を加速させる誤ったシグナルを送り出すときに起こる。イミキモド（ＩＭＱ）は、局所投与すると乾癬を誘発し、悪化させる強力な免疫活性化剤である。マウスの背部の皮膚にＩＭＱを毎日塗布すると、プラーク型乾癬に似た炎症性のうろこ状の皮膚病変が誘発される［１９、２０］。マウスにおけるＩＭＱ誘発乾癬は、ヒト乾癬のモデルとして長い間使用されている。

マウスのＩＭＱ誘発モデルにおける乾癬を治療するＦＡＢＰ４阻害剤の経口投与の有効性を試験した。

ＢＭＳ３０９４０３（２－［２’－（５－エチル－３，４－ジフェニル－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）［１，１’－ビフェニル］－３－イル］オキシ］－酢酸、式Ｉ）を、ＦＡＢＰ４阻害剤として使用した：

試験はＢａｌｂ／ｃマウス（Ｅｎｖｉｇｏ ＲＭＳ（イスラエル）Ｌｔｄ）を用いて行い、試験開始時の平均（±ＳＤ）体重は１８．２±０．８１ｇであった。動物には、市販のげっ歯類用飼料（Ｔｅｋｌａｄ Ｃｅｒｔｉｆｉｅｄ Ｇｌｏｂａｌ １８％Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｉｅｔ、Ｈａｒｌａｎカタログ番号２０１８ＳＣ）を自由に摂取させた。動物は滅菌して酸性化した飲料水（ｐＨ２．５－３．５）に自由にアクセスさせた。

試験は、以下の６つの群で行い、１群あたり３－１０匹のマウスを含んでいた；
－ ナイーブマウスのグループ（ＩＭＱなし）
－ １のビヒクル対照群。ビヒクル配合物は注射用水（ＷＦＩ）中の１０％の１－メチル－２－ピロリドンと、５％のクレモフォールＥＬである。
－陽性対照として酢酸コルチゾンを投与した１処置群－１の錠剤（各２５ｍｇ、Ｒｅｋａｈ Ｐｈａｒｍ）を乳鉢で粉砕した。粉末を２．５ｍｌのＷＦＩに溶解させて１０ｍｇ／ｍｌを得た。化合物を、ＩＭＱ適用の初日（１日目）から６日間、１日１回、１２．５ｍｇ／ｋｇ体重（体重）マウスで、経口投与した。
－ ５、１５及び３０ｍｇ／ｋｇの３つの投与量で、ＢＭＳ（すなわち試験項目）を受けた３つの治療群。ＢＭＳ粉末（Ｃａｙｍａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ）をエタノールに溶解させて３０ｍｇ／ｍｌの溶液を作った。この原液をビヒクルで希釈して、０．５、１．５及び３ｍｇ／ｍｌの３つの異なる濃度とした。新しい水溶液を毎日調製した。ＩＭＱを適用した初日（１日目）から６日間、１日１回ＢＭＳを経口投与した。

ＩＭＱ誘発：６２．５ｍｇの毎日の局所投与量の市販のＩＭＱクリーム（５％）（Ａｌｄａｒａ；３Ｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）を、６日間連続して、ナイーブ群を除く全ての群からの剃毛した動物に塗布した。これは、１日の投与量３．１２５ｍｇの活性化合物に換算される。

実験条件：ナイーブ群を除く全ての剃毛した動物に、１日目から６日間連続して毎日ＩＭＱクリーム（Ａｌｄａｒａ（商標）５％クリーム、＃３ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）を塗布した（約６０ｍｇ／マウス）。試験項目、ビヒクル及び酢酸コルチゾンを、毎日６日間経口投与した。試験中に、罹患率及び死亡率、体重（ＢＷ）、臨床徴候、ならびに乾癬面積及び重症度指数（ＰＡＳＩ）の採点を行い、代表的な写真を撮った。動物を９日目に屠殺した。

採点は訓練された観察者によって「盲検的」な方法で、すなわち治療に気付かないようにして行われた。背部皮膚の炎症の重症度をスコア付けするために、臨床ＰＡＳＩスコアを採用した。紅斑、鱗屑化、及び肥厚は、０から４の尺度で独立して採点した。０、なし；１、わずか；２、中程度；３、著しい；４、非常に著しい。累積スコア（紅斑＋スケーリング＋肥厚）である、ＰＡＳＩスコアは、炎症の重症度尺度として使えた（スケール０から１２）。

死亡率及び罹患率：両方の実験の間、動物は死亡せず、又は病的状態でも発見されなかった。試験中、いずれの動物にも異常な臨床徴候は観察されなかった。体重に関する治療の効果は検出されなかった。

皮膚の炎症の重症度のスコア付け：背中の皮膚の炎症の重症度、すなわちＰＡＳＩの平均スコアを図６に示す。各パラメータ、すなわち紅斑の重症度、皮膚の厚さ、及び鱗屑を個々に測定した（それぞれ、図７乃至９）。ＰＡＳＩスコアによれば、すべてのＩＭＱ処置群は、特に試験の５日目及び７日目に、ナイーブ群と比較してかなりの皮膚反応を示した。７日目に、ＢＭＳ処置による皮膚炎症の有意な改善が観察された。中用量のＢＭＳ（１５ｍｇ／ｋｇ）が炎症の重症度に最も影響を及ぼしているようであった。この用量が、試験を行ったパラメータ－紅斑、皮膚の厚さ、及び鱗屑について最良の結果を示した。７日目に撮影された代表的な写真を、図１０Ａ乃至１０Ｆに示す。

要約すると、すべてのＩＭＱ処置群は、特に試験の５日目及び７日目に、ナイーブ群と比較してかなりの皮膚反応を示した。７日目に、全ての試験パラメータ、すなわち炎症の重症度、紅斑、皮膚の厚さ及び鱗屑化について、ＢＭＳ処置群において有意な効果の改善が観察された。実験は３回繰り返され、同様の結果が得られた。

Claims (9)

1. ＦＡＢＰ４を過剰発現している皮膚疾患の治療又は予防のための医薬組成物の製造におけるＦＡＢＰ４阻害剤の使用であって、
   前記ＦＡＢＰ４阻害剤が、（２－（２’－（５－エチル－３，４－ジフェニル－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）（１，１’－ビフェニル）－３－イル）オキシ）－酢酸（ＢＭＳ３０９４０３）、又はその塩、立体異性体、若しくは水和物であり、前記皮膚疾患が、乾癬であることを特徴とする使用。
2. 請求項１に記載の使用において、前記医薬組成物が、局所的、経口的、経鼻的、経皮的、眼球内、若しくは非経口的投与、又は吸入のために製剤化されていることを特徴とする使用。
3. 請求項２に記載の使用において、前記医薬組成物が、経皮的投与のために製剤化されていることを特徴とする使用。
4. 請求項２に記載の使用において、前記医薬組成物が、局所的投与のために製剤化されていることを特徴とする使用。
5. 請求項２に記載の使用において、前記医薬組成物が、前記ＦＡＢＰ４阻害剤を皮膚層を通って又は角質層を通って送達するように製剤化されていることを特徴とする使用。
6. 請求項２に記載の使用において、前記医薬組成物が、注射のために製剤化されていることを特徴とする使用。
7. 請求項２に記載の使用において、前記医薬組成物が、経口的投与のために製剤化されていることを特徴とする使用。
8. 請求項１乃至７の何れか１項に記載の使用において、前記医薬組成物が、ＰＰＡＲγアゴニストと共に投与されるものである、又はＰＰＡＲγアゴニストをさらに含むものであることを特徴とする使用。
9. 請求項８に記載の使用において、前記ＰＰＡＲγアゴニストが、チアゾリジンジオン、ピオグリタゾン（アクトス）、ロシグリタゾン（アバンディア）、ロベグリタゾン（Ｄｕｖｉｅ）、シグリタゾン、ダルグリタゾン、エングリタゾン、ネトグリタゾン、リボグリタゾン、トログリタゾン（Ｒｅｚｕｌｉｎ）、ローダミン、及び非ステロイド性抗炎症薬から選択されることを特徴とする使用。

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