JP7168453B2 - 哺乳類受精を達成するためのアプローチおよび授精のための期間を識別するための方法 - Google Patents
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Description
本出願は、2015年12月23日に出願された米国仮出願番号第62/387,348号、2016年4月28日に出願された米国仮出願番号第62/328,876号、2016年1月15日に出願された米国仮出願番号第62/279,315号、2016年4月28日に出願された米国仮出願番号第62/328,885号、および2016年11月15日に出願された米国仮出願番号第62/422,279号の利益を主張しており、これら仮出願の各々は、その全体が援用される。
本発明は、概して雄性受精能の分野に関し、より詳細には、受精を達成するために用いるべき生殖アプローチを識別する方法および/または受精を達成するために授精が行われる時間を変更する方法を提供する。
雄性不妊症の診断は、主に、濃度、全体的な運動性、前進運動性、体積、pH、粘度および/または形態に関する標準的な精液分析の結果に基づく。しかしながら、精子の形態、運動性および濃度の測定は、精子が雌性生殖輸管内に留まっている間に起こす複雑な変化を含む受精能力を評価しない。受精能力の評価に関連する難題に加えて、精子細胞を保存するため、および長期間にわたって雄性受精能を保つために、冷凍保存が用いられることが多い。残念なことに、凍結および融解は、精子の生存能および機能に悪影響を及ぼし得る。冷凍保存は、受精能獲得を変化させ、受精期間を移動させる/制限すると報告されている。
ある実施形態において、本開示は、哺乳動物の受精を達成するためのアプローチを識別する方法を提供する。受精能を獲得したインビトロの精子細胞の第1のサンプルを蛍光標識で処置する。1つまたはそれを超えるt0-蛍光画像を得る。それらの画像は、蛍光標識された受精能を獲得したインビトロのt0-精子細胞に関連する1つまたはそれを超えるGM1局在化パターンを示す。t0-蛍光画像は、0.1時間~5時間;0.1時間~8時間;0.1~12時間;または0.1時間~18時間から選択されるインビトロ受精能獲得後時間(t0)において得られる。t0-蛍光画像において示された蛍光標識された受精能を獲得したインビトロのt0-精子細胞に対して、先体頂部(AA)GM1局在化パターンの数、先体原形質膜(APM)GM1局在化パターンの数およびGM1局在化パターンの総数を計測して、t0-[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]のパーセンテージを求める。計測されたt0-[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]のパーセンテージに関連する受精能状態を判定し、ここで、35%超に対応する[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]の参照パーセンテージは、高受精能状態を示し;35%より1標準偏差低い値に対応する[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]の参照パーセンテージは、中受精能状態を示し;35%より2標準偏差またはそれを超えて低い値に対応する[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]の参照パーセンテージは、低受精能状態を示す。計測されたt0-[AA GM1局在化パターンおよびAPM GM1局在化パターン]のパーセンテージを、[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]の参照パーセンテージと比較する。受精能状態に基づいて受精を達成するために生殖アプローチを識別する。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
(項目1)
哺乳動物の受精を達成するためのアプローチを識別する方法であって、
受精能を獲得したインビトロの精子細胞の第1のサンプルを蛍光標識で処置する工程;
蛍光標識された受精能を獲得したインビトロのt 0 -精子細胞に関連する1つまたはそれを超えるG M1 局在化パターンを示す1つまたはそれを超えるt 0 -蛍光画像を得る工程であって、前記t 0 -蛍光画像は、0.1時間~5時間;0.1時間~8時間;0.1~12時間;または0.1時間~18時間から選択されるインビトロ受精能獲得後時間(t 0 )において得られる、工程;
前記t 0 -蛍光画像において示された前記蛍光標識された受精能を獲得したインビトロのt 0 -精子細胞に対する先体頂部(AA)G M1 局在化パターンの数、先体原形質膜(APM)G M1 局在化パターンの数およびG M1 局在化パターンの総数を計測する工程であって、t 0 -[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]のパーセンテージを求める工程;
計測されたt 0 -[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]のパーセンテージに関連する受精能状態を判定する工程であって;
ここで、35%超に対応する[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]の参照パーセンテージは、高受精能状態を示し、35%より1標準偏差低い値に対応する[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]の参照パーセンテージは、中受精能状態を示し;35%より2標準偏差またはそれを超えて低い値に対応する[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]の参照パーセンテージは、低受精能状態を示す、工程;
計測されたt 0 -[AA G M1 局在化パターンおよびAPM G M1 局在化パターン]のパーセンテージを[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]の前記参照パーセンテージと比較する工程;および
受精を達成するために、受精能状態に基づいて生殖アプローチを識別する工程
を含む、方法。
(項目2)
雄が、少なくとも正常の精子濃度を有し、
高受精能状態に対する生殖アプローチが、性交、頸管内授精(ICI)、頸管内授精前の精子の前受精能獲得、子宮内授精(IUI)または子宮内授精前の精子の前受精能獲得からなる群より選択されるか;
中受精能状態に対する生殖アプローチが、頸管内授精(ICI)、頸管内授精前の精子の前受精能獲得;子宮内授精(IUI);子宮内授精前の精子の前受精能獲得;または体外受精(IVF)もしくは体外受精前の精子の前受精能獲得からなる群より選択されるか;または
低受精能状態に対する生殖アプローチが、体外受精(IVF)、体外受精前の精子の前受精能獲得、卵細胞質内精子注入法(ICSI)、卵細胞質内精子注入法の前の精子の前受精能獲得、配偶子卵管内移植法(GIFT)、配偶子卵管内移植法の前の精子の前受精能獲得、囲卵腔内精子注入法(SUZI)または囲卵腔内精子注入法の前の精子の前受精能獲得からなる群より選択される、項目1に記載の方法。
(項目3)
雄が、正常未満の精子濃度を有し、
高受精能状態に対する生殖アプローチが、頸管内授精(ICI)、頸管内授精前の精子の前受精能獲得、子宮内授精(IUI)または子宮内授精前の精子の前受精能獲得からなる群より選択されるか;
中受精能状態に対する生殖アプローチが、頸管内授精(ICI)、頸管内授精前の精子の前受精能獲得、子宮内授精(IUI)または子宮内授精前の精子の前受精能獲得;体外受精(IVF)、体外受精前の精子の前受精能獲得からなる群より選択されるか、または
低受精能状態に対する生殖アプローチが、体外受精(IVF)、体外受精前の精子の前受精能獲得、卵細胞質内精子注入法(ICSI)、卵細胞質内精子注入法の前の精子の前受精能獲得、配偶子卵管内移植法(GIFT)、配偶子卵管内移植法の前の精子の前受精能獲得、囲卵腔内精子注入法(SUZI)または囲卵腔内精子注入法の前の精子の前受精能獲得からなる群より選択される、項目1に記載の方法。
(項目4)
(i)前記生殖アプローチが、体外受精前の精子の前受精能獲得に対応し、前受精能獲得のための時間が、受精能獲得のための1つまたはそれを超える刺激を含む培地中で精子を、授精前に24時間;授精前に18時間;授精前に12時間;授精前に6時間;授精前に4時間;授精前に3時間;または授精前に1時間インキュベートすることに対応するか;(ii)前記生殖アプローチが、卵細胞質内精子注入法(ICSI)に対応し、授精前の前受精能獲得のための時間が、受精能獲得のための1つまたはそれを超える刺激を含む培地中で精子を、授精前に24時間;授精前に18時間;授精前に12時間;授精前に6時間;授精前に4時間;授精前に3時間;または授精前に1時間インキュベートすることに対応するか;(iii)前記生殖アプローチが、配偶子卵管内移植法(GIFT)に対応し、授精前の前受精能獲得のための時間が、受精能獲得のための1つまたはそれを超える刺激を含む培地中で精子を、授精前に24時間;授精前に18時間;授精前に12時間;授精前に6時間;授精前に4時間;授精前に3時間;または授精前に1時間インキュベートすることに対応するか;または(iv)前記生殖アプローチが、囲卵腔内精子注入法(SUZI)に対応し、授精前の前受精能獲得のための時間が、受精能獲得のための1つまたはそれを超える刺激を含む培地中で精子を、授精前に24時間;授精前に18時間;授精前に12時間;授精前に6時間;授精前に4時間;授精前に3時間;または授精前に1時間インキュベートすることに対応する、項目2または3のいずれかに記載の方法。
(項目5)
受精能を獲得したインビトロの精子細胞の第2のサンプルを蛍光標識で処置する工程であって、ここで、受精能を獲得したインビトロの精子細胞の前記第2のサンプルおよび受精能を獲得したインビトロの精子細胞の第1のサンプルは、同じ雄に関連している、工程;
蛍光標識された受精能を獲得したインビトロのt 1 -精子細胞に関連する1つまたはそれを超えるG M1 局在化パターンを示す1つまたはそれを超えるt 1 -蛍光画像を得る工程であって、前記t 1 -蛍光画像は、受精能獲得後時間t 1 において得られ、t 1 は、t 0 より長い時間または18時間より長い時間から選択される、工程;
前記t 1 -蛍光画像において示された前記蛍光標識された受精能を獲得したインビトロのt 1 -精子細胞に対する先体頂部(AA)G M1 局在化パターンの数、先体原形質膜(APM)G M1 局在化パターンの数およびG M1 局在化パターンの総数を計測する工程であって、t 1 -[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]のパーセンテージを求める工程;
t 1 -[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]のパーセンテージをt 0 -[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]のパーセンテージと比較する工程であって、12時間超の遅いインビボ受精能獲得時間または12時間未満の標準的なインビボ受精能獲得時間から選択されるインビボ受精能獲得時間を判定する工程をさらに含み;
ここで、35%という標準から1標準偏差超の値に対応する、t 0 -[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]のパーセンテージとt 1 -[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]のパーセンテージの差は、12時間超の遅いインビボ受精能獲得時間を示すか;または35%という標準から1標準偏差未満の値に対応する、t 0 -[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]のパーセンテージとt 1 -[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]のパーセンテージの差は、12時間未満の標準的なインビボ受精能獲得時間を示し、
さらに、t 0 -[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]のパーセンテージとt 1 -[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]のパーセンテージの差が、35%という標準から1標準偏差超の値に対応するとき、t 1 -受精能状態は、計測されたt 1 -[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]のパーセンテージと[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]の参照パーセンテージとの比較に基づいて判定されるか;またはt 0 -[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]のパーセンテージとt 1 -[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]のパーセンテージの差が、35%という標準から1標準偏差未満の値に対応するとき、t 1 -受精能状態は、[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]の参照パーセンテージと、計測されたt 1 -[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]のパーセンテージまたは計測されたt 0 -[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]のパーセンテージとの比較に基づいて判定され;
前記雄のt 1 -受精能状態およびインビボ受精能獲得時間に基づいて、授精のための時間および受精を達成するために用いるべき生殖アプローチを識別する、
項目4に記載の方法。
(項目6)
雄が、少なくとも正常な精子濃度および遅いインビボ受精能獲得時間を有し;
t 1 -高受精能状態に対する生殖アプローチが、性交のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;頸管内授精(ICI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;子宮内授精(IUI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;頸管内授精前の精子の前受精能獲得、または子宮内授精前の精子の前受精能獲得からなる群より選択され;
t 1 -中受精能状態に対する生殖アプローチが、頸管内授精(ICI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;子宮内授精(IUI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;体外受精(IVF)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;頸管内授精前の精子の前受精能獲得;子宮内授精(IUI);子宮内授精前の精子の前受精能獲得;または体外受精前の精子の前受精能獲得からなる群より選択され、
t 1 -低受精能状態に対する生殖アプローチが、体外受精(IVF)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;卵細胞質内精子注入法(ICSI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;配偶子卵管内移植法(GIFT)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;囲卵腔内精子注入法(SUZI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;体外受精前の精子の前受精能獲得、卵細胞質内精子注入法の前の精子の前受精能獲得、配偶子卵管内移植法の前の精子の前受精能獲得、または囲卵腔内精子注入法の前の精子の前受精能獲得からなる群より選択される、
項目5に記載の方法。
(項目7)
雄が、正常未満の精子濃度および遅いインビボ受精能獲得時間を有し;
t 1 -高受精能状態に対する生殖アプローチが、性交のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;頸管内授精(ICI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;子宮内授精(IUI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;頸管内授精前の精子の前受精能獲得または子宮内授精前の精子の前受精能獲得からなる群より選択され;
t 1 -中受精能状態に対する生殖アプローチが、頸管内授精(ICI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;子宮内授精(IUI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;体外受精(IVF)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;頸管内授精前の精子の前受精能獲得、子宮内授精前の精子の前受精能獲得;または体外受精前の精子の前受精能獲得からなる群より選択され、
t 1 -低受精能状態に対する生殖アプローチが、体外受精(IVF)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;卵細胞質内精子注入法(ICSI)、卵細胞質内精子注入法(ICSI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;配偶子卵管内移植法(GIFT)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;囲卵腔内精子注入法(SUZI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること、体外受精前の精子の前受精能獲得、卵細胞質内精子注入法の前の精子の前受精能獲得、配偶子卵管内移植法の前の精子の前受精能獲得または囲卵腔内精子注入法の前の精子の前受精能獲得からなる群より選択される、
項目5に記載の方法。
(項目8)
雄が、少なくとも正常な精子濃度および標準的なインビボ受精能獲得時間を有し;
t 1 -高受精能状態に対する生殖アプローチが、性交、頸管内授精(ICI)、頸管内授精前の精子の前受精能獲得、子宮内授精(IUI)または子宮内授精前の精子の前受精能獲得からなる群より選択されるか;
t 1 -中受精能状態に対する生殖アプローチが、頸管内授精(ICI)、頸管内授精前の精子の前受精能獲得;子宮内授精(IUI);子宮内授精前の精子の前受精能獲得;または体外受精(IVF)もしくは体外受精前の精子の前受精能獲得からなる群より選択されるか;または
t 1 -低受精能状態に対する生殖アプローチが、体外受精(IVF)、体外受精前の精子の前受精能獲得、卵細胞質内精子注入法(ICSI)、卵細胞質内精子注入法の前の精子の前受精能獲得、配偶子卵管内移植法(GIFT)、配偶子卵管内移植法の前の精子の前受精能獲得、囲卵腔内精子注入法(SUZI)または囲卵腔内精子注入法の前の精子の前受精能獲得からなる群より選択される、
項目5に記載の方法。
(項目9)
雄が、正常未満の精子濃度および標準的なインビボ受精能獲得時間を有し;
t 1 -高受精能状態に対する生殖アプローチが、頸管内授精(ICI)、頸管内授精前の精子の前受精能獲得、子宮内授精(IUI)または子宮内授精前の精子の前受精能獲得からなる群より選択されるか;
t 1 -中受精能状態に対する生殖アプローチが、頸管内授精(ICI)、頸管内授精前の精子の前受精能獲得、子宮内授精(IUI)または子宮内授精前の精子の前受精能獲得;体外受精(IVF)、体外受精前の精子の前受精能獲得からなる群より選択されるか、または
t 1 -低受精能状態に対する生殖アプローチが、体外受精(IVF)、体外受精前の精子の前受精能獲得、卵細胞質内精子注入法(ICSI)、卵細胞質内精子注入法の前の精子の前受精能獲得、配偶子卵管内移植法(GIFT)、配偶子卵管内移植法の前の精子の前受精能獲得、囲卵腔内精子注入法(SUZI)または囲卵腔内精子注入法の前の精子の前受精能獲得からなる群より選択される、
項目5に記載の方法。
(項目10)
(i)前記生殖アプローチが、体外受精前の精子の前受精能獲得に対応し、前受精能獲得のための時間が、受精能獲得のための1つまたはそれを超える刺激を含む培地中で精子を、授精前に24時間;授精前に18時間;授精前に12時間;授精前に6時間;授精前に4時間;授精前に3時間;または授精前に1時間インキュベートすることに対応するか;(ii)前記生殖アプローチが、卵細胞質内精子注入法(ICSI)に対応し、授精前の前受精能獲得のための時間が、受精能獲得のための1つまたはそれを超える刺激を含む培地中で精子を、授精前に24時間;授精前に18時間;授精前に12時間;授精前に6時間;授精前に4時間;授精前に3時間;または授精前に1時間インキュベートすることに対応するか;(iii)前記生殖アプローチが、配偶子卵管内移植法(GIFT)に対応し、授精前の前受精能獲得のための時間が、受精能獲得のための1つまたはそれを超える刺激を含む培地中で精子を、授精前に24時間;授精前に18時間;授精前に12時間;授精前に6時間;授精前に4時間;授精前に3時間;または授精前に1時間インキュベートすることに対応するか;または(iv)前記生殖アプローチが、囲卵腔内精子注入法(SUZI)に対応し、授精前の前受精能獲得のための時間が、受精能獲得のための1つまたはそれを超える刺激を含む培地中で精子を、授精前に24時間;授精前に18時間;授精前に12時間;授精前に6時間;授精前に4時間;授精前に3時間;または授精前に1時間インキュベートすることに対応する、項目8または9のいずれかに記載の方法。
(項目11)
前記識別工程が、以下:患者の人口統計的データ、雌性パートナーの生殖状態、精子の濃度、全体的な運動性、前進運動性、精液の体積、精液のpH、精液の粘度および/または精子の形態ならびにそれらの組み合わせの1つ以上にまた基づく、項目10に記載の方法。
(項目12)
前記1つより多いG M1 局在化パターンが、AA G M1 局在化パターン、APM G M1 局在化パターン、Lined-Cell G M1 局在化パターン、INTER G M1 局在化パターン、PAPM G M1 局在化パターン、AA/PA G M1 局在化パターン、ES G M1 局在化パターンおよびDIFF G M1 局在化パターンを含む、項目11に記載の方法。
(項目13)
前記精子細胞が、少なくとも1時間;少なくとも3時間;少なくとも12時間;少なくとも18時間;少なくとも24時間の受精能獲得時間;0.5時間~3時間;3時間~12時間;6時間~12時間;3時間~24時間;12時間~24時間;または18時間~24時間の範囲の受精能獲得時間にわたってインビトロにおいて受精能獲得条件で処置される、項目12に記載の方法。
(項目14)
前記受精能を獲得したインビトロの精子細胞が、少なくとも0.5時間;少なくとも3時間;少なくとも12時間;少なくとも18時間;少なくとも24時間;少なくとも30時間;少なくとも36時間;または少なくとも48時間の固定時間、0.5時間~3時間;3時間~12時間;6時間~12時間;3時間~18時間;6~18時間;6~24時間;12時間~24時間;18時間~24時間;18~30時間;18~36時間;24~30時間;24~26時間;18~48時間;24~48時間;または36~48時間の範囲の固定時間にわたって固定液で処置される、項目13に記載の方法。
(項目15)
前記精子細胞が、インビトロにおいて受精能獲得条件で処置される前に、冷凍保存手順で処置され、保存された、項目14に記載の方法。
(項目16)
哺乳動物の受精を達成するためのアプローチを識別する方法であって、
受精能を獲得したインビトロのt 0 -精子細胞のサンプルを蛍光標識で処置する工程;
受精能を獲得したインビトロのt 1 -精子細胞のサンプルを蛍光標識で処置する工程;
蛍光標識された受精能を獲得したインビトロのt 0 -精子細胞に関連する1つまたはそれを超えるG M1 局在化パターンを示す1つまたはそれを超えるt 0 -蛍光画像を得る工程、
蛍光標識された受精能を獲得したインビトロのt 1 -精子細胞に関連する1つまたはそれを超えるG M1 局在化パターンを示す1つまたはそれを超えるt 1 -蛍光画像を得る工程であって、
前記t 0 -蛍光画像は、0.1時間~5時間;0.1時間~8時間;0.1~12時間;または0.1時間~18時間から選択されるインビトロ受精能獲得後時間(t 0 )において得られ;前記t 1 -蛍光画像は、受精能獲得後時間t 1 において得られ、ここで、t 1 は、t 0 より長い、工程;
前記t 0 -蛍光画像において示された前記蛍光標識された受精能を獲得したインビトロのt 0 -精子細胞に対する先体頂部(AA)G M1 局在化パターンの数、先体原形質膜(APM)G M1 局在化パターンの数およびG M1 局在化パターンの総数を計測する工程であって、t 0 -[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]のパーセンテージを求める工程;
前記t 1 -蛍光画像において示された前記蛍光標識された受精能を獲得したインビトロのt 1 -精子細胞に対する先体頂部(AA)G M1 局在化パターンの数、先体原形質膜(APM)G M1 局在化パターンの数およびG M1 局在化パターンの総数を計測する工程であって、t 1 -[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]のパーセンテージを求める工程;
t 1 -[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]のパーセンテージをt 0 -[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]のパーセンテージと比較する工程であって、12時間超の遅いインビボ受精能獲得時間または12時間もしくはそれ未満の標準的なインビボ受精能獲得時間から選択されるインビボ受精能獲得時間を判定する工程を含み、
ここで、35%という標準から1標準偏差超の値に対応する、t 0 -[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]のパーセンテージとt 1 -[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]のパーセンテージの差は、12時間超の遅いインビボ受精能獲得時間を示すか;または35%という標準から1標準偏差未満の値に対応する、t 0 -[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]のパーセンテージとt 1 -[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]のパーセンテージの差は、12時間未満の標準的なインビボ受精能獲得時間を示し;
35%超に対応する[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]の参照パーセンテージは、高受精能状態を示し;35%より1標準偏差低い値に対応する[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]の参照パーセンテージは、中受精能状態を示し;35%より2標準偏差またはそれを超えて低い値に対応する[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]の参照パーセンテージは、低受精能状態を示し;
さらに、t 0 -[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]のパーセンテージとt 1 -[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]のパーセンテージの差が、35%という標準から1標準偏差超の値に対応するとき、t 1 -受精能状態は、計測されたt 1 -[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]のパーセンテージと[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]の参照パーセンテージとの比較に基づいて判定されるか;またはt 0 -[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]のパーセンテージとt 1 -[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]のパーセンテージの差が、35%という標準から1標準偏差未満の値に対応するとき、t 1 -受精能状態は、[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]の参照パーセンテージと、計測されたt 1 -[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]のパーセンテージまたは計測されたt 0 -[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]のパーセンテージとの比較に基づいて判定され;
前記雄のt 1 -受精能状態およびインビボ受精能獲得時間に基づいて、授精のための時間および受精を達成するために用いるべき生殖アプローチを識別する
を含む、方法。
(項目17)
雄が、少なくとも正常な精子濃度および遅いインビボ受精能獲得時間を有し;
t 1 -高受精能状態に対する生殖アプローチが、性交のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;頸管内授精(ICI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;子宮内授精(IUI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;頸管内授精前の精子の前受精能獲得または子宮内授精前の精子の前受精能獲得からなる群より選択され;
t 1 -中受精能状態に対する生殖アプローチが、頸管内授精(ICI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;子宮内授精(IUI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;体外受精(IVF)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;頸管内授精前の精子の前受精能獲得;子宮内授精(IUI);子宮内授精前の精子の前受精能獲得;または体外受精前の精子の前受精能獲得からなる群より選択され、
t 1 -低受精能状態に対する生殖アプローチが、体外受精(IVF)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;卵細胞質内精子注入法(ICSI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;配偶子卵管内移植法(GIFT)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;囲卵腔内精子注入法(SUZI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;体外受精前の精子の前受精能獲得、卵細胞質内精子注入法の前の精子の前受精能獲得、配偶子卵管内移植法の前の精子の前受精能獲得または囲卵腔内精子注入法の前の精子の前受精能獲得からなる群より選択される、
項目16に記載の方法。
(項目18)
雄が、正常未満の精子濃度および遅いインビボ受精能獲得時間を有し;
t 1 -高受精能状態に対する生殖アプローチが、性交のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;頸管内授精(ICI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;子宮内授精(IUI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;頸管内授精(ICI)前の精子の前受精能獲得または子宮内授精(IUI)前の精子の前受精能獲得からなる群より選択され;
t 1 -中受精能状態に対する生殖アプローチが、頸管内授精(ICI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;子宮内授精(IUI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;体外受精(IVF)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;頸管内授精前の精子の前受精能獲得、子宮内授精前の精子の前受精能獲得;または体外受精前の精子の前受精能獲得からなる群より選択され、
t 1 -低受精能状態に対する生殖アプローチが、体外受精(IVF)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;卵細胞質内精子注入法(ICSI)、卵細胞質内精子注入法(ICSI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;配偶子卵管内移植法(GIFT)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;囲卵腔内精子注入法(SUZI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること、体外受精前の精子の前受精能獲得、卵細胞質内精子注入法の前の精子の前受精能獲得、配偶子卵管内移植法の前の精子の前受精能獲得または囲卵腔内精子注入法の前の精子の前受精能獲得からなる群より選択される、
項目16に記載の方法。
(項目19)
雄が、少なくとも正常な精子濃度および標準的なインビボ受精能獲得時間を有し;
t 1 -高受精能状態に対する生殖アプローチが、性交、頸管内授精(ICI)、頸管内授精前の精子の前受精能獲得、子宮内授精(IUI)または子宮内授精前の精子の前受精能獲得からなる群より選択されるか;
t 1 -中受精能状態に対する生殖アプローチが、頸管内授精(ICI)、頸管内授精前の精子の前受精能獲得;子宮内授精(IUI);子宮内授精前の精子の前受精能獲得;または体外受精(IVF)もしくは体外受精前の精子の前受精能獲得からなる群より選択されるか;または
t 1 -低受精能状態に対する生殖アプローチが、体外受精(IVF)、体外受精前の精子の前受精能獲得、卵細胞質内精子注入法(ICSI)、卵細胞質内精子注入法の前の精子の前受精能獲得、配偶子卵管内移植法(GIFT)、配偶子卵管内移植法の前の精子の前受精能獲得、囲卵腔内精子注入法(SUZI)または囲卵腔内精子注入法の前の精子の前受精能獲得からなる群より選択される、項目16に記載の方法。
(項目20)
雄が、正常未満の精子濃度および標準的なインビボ受精能獲得時間を有し;
t 1 -高受精能状態に対する生殖アプローチが、頸管内授精(ICI)、頸管内授精前の精子の前受精能獲得、子宮内授精(IUI)または子宮内授精前の精子の前受精能獲得からなる群より選択されるか;
t 1 -中受精能状態に対する生殖アプローチが、頸管内授精(ICI)、頸管内授精前の精子の前受精能獲得、子宮内授精(IUI)または子宮内授精前の精子の前受精能獲得;体外受精(IVF)、体外受精前の精子の前受精能獲得からなる群より選択されるか、または
t 1 -低受精能状態に対する生殖アプローチが、体外受精(IVF)、体外受精前の精子の前受精能獲得、卵細胞質内精子注入法(ICSI)、卵細胞質内精子注入法の前の精子の前受精能獲得、配偶子卵管内移植法(GIFT)、配偶子卵管内移植法の前の精子の前受精能獲得、囲卵腔内精子注入法(SUZI)または囲卵腔内精子注入法の前の精子の前受精能獲得からなる群より選択される、
項目16に記載の方法。
(項目21)
(i)前記生殖アプローチが、体外受精前の精子の前受精能獲得に対応し、前受精能獲得のための時間が、受精能獲得のための1つまたはそれを超える刺激を含む培地中で精子を、授精前に24時間;授精前に18時間;授精前に12時間;授精前に6時間;授精前に4時間;授精前に3時間;または授精前に1時間インキュベートすることに対応するか;(ii)前記生殖アプローチが、卵細胞質内精子注入法(ICSI)に対応し、授精前の前受精能獲得のための時間が、受精能獲得のための1つまたはそれを超える刺激を含む培地中で精子を、授精前に24時間;授精前に18時間;授精前に12時間;授精前に6時間;授精前に4時間;授精前に3時間;または授精前に1時間インキュベートすることに対応するか;(iii)前記生殖アプローチが、配偶子卵管内移植法(GIFT)に対応し、授精前の前受精能獲得のための時間が、受精能獲得のための1つまたはそれを超える刺激を含む培地中で精子を、授精前に24時間;授精前に18時間;授精前に12時間;授精前に6時間;授精前に4時間;授精前に3時間;または授精前に1時間インキュベートすることに対応するか;または(iv)前記生殖アプローチが、囲卵腔内精子注入法(SUZI)に対応し、授精前の前受精能獲得のための時間が、受精能獲得のための1つまたはそれを超える刺激を含む培地中で精子を、授精前に24時間;授精前に18時間;授精前に12時間;授精前に6時間;授精前に4時間;授精前に3時間;または授精前に1時間インキュベートすることに対応する、項目17~20のいずれかに記載の方法。
(項目22)
前記識別工程が、以下:患者の人口統計的データ、雌性パートナーの生殖状態、精子の濃度、全体的な運動性、前進運動性、精液の体積、精液のpH、精液の粘度および/または精子の形態ならびにそれらの組み合わせの1つ以上にまた基づく、項目21に記載の方法。
(項目23)
前記1つより多いG M1 局在化パターンが、AA G M1 局在化パターン、APM G M1 局在化パターン、Lined-Cell G M1 局在化パターン、INTER G M1 局在化パターン、PAPM G M1 局在化パターン、AA/PA G M1 局在化パターン、ES G M1 局在化パターンおよびDIFF G M1 局在化パターンを含む、項目22に記載の方法。
(項目24)
前記精子細胞が、少なくとも1時間;少なくとも3時間;少なくとも12時間;少なくとも18時間;少なくとも24時間の受精能獲得時間;0.5時間~3時間;3時間~12時間;6時間~12時間;3時間~24時間;12時間~24時間;または18時間~24時間の範囲の受精能獲得時間にわたってインビトロにおいて受精能獲得条件で処置される、項目23に記載の方法。
(項目25)
前記受精能を獲得したインビトロの精子細胞が、少なくとも0.5時間;少なくとも3時間;少なくとも12時間;少なくとも18時間;少なくとも24時間;少なくとも30時間;少なくとも36時間;または少なくとも48時間の固定時間、0.5時間~3時間;3時間~12時間;6時間~12時間;3時間~18時間;6~18時間;6~24時間;12時間~24時間;18時間~24時間;18~30時間;18~36時間;24~30時間;24~26時間;18~48時間;24~48時間;または36~48時間の範囲の固定時間にわたって固定液で処置される、項目24に記載の方法。
(項目26)
前記精子細胞が、インビトロにおいて受精能獲得条件で処置される前に、冷凍保存手順で処置され、保存された、項目25に記載の方法。
(項目27)
哺乳動物の受精を達成するためのアプローチを識別する方法であって、
受精能を獲得したインビトロの精子細胞を蛍光標識で処置する工程;
前記蛍光標識で処置された受精能を獲得したインビトロの精子細胞の1つまたはそれを超えるG M1 局在化パターンを示すデータを生成する工程であって、前記データは、0.1時間~18時間(t 0 )または18時間超(t 1 )から選択されるインビトロ受精能獲得後時間において得られる、工程;
前記インビトロ受精能獲得後時間における1つまたはそれを超えるG M1 局在化パターンの前記データに基づいて雄の受精能状態データを特徴づける工程;および
前記インビトロ受精能獲得後時間における前記雄の受精能状態データに基づいて、授精のための時間および受精を達成するために用いるべき生殖アプローチを識別する工程
を含む、方法。
(項目28)
前記精子細胞が、少なくとも1時間;少なくとも3時間;少なくとも12時間;少なくとも18時間;少なくとも24時間の受精能獲得時間;0.5時間~3時間;3時間~12時間;6時間~12時間;3時間~24時間;12時間~24時間;または18時間~24時間の範囲の受精能獲得時間にわたってインビトロにおいて受精能獲得条件で処置される、項目27に記載の方法。
(項目29)
前記受精能を獲得したインビトロの精子細胞が、少なくとも0.5時間;少なくとも3時間;少なくとも12時間;少なくとも18時間;少なくとも24時間;少なくとも30時間;少なくとも36時間;または少なくとも48時間の固定時間、0.5時間~3時間;3時間~12時間;6時間~12時間;3時間~18時間;6~18時間;6~24時間;12時間~24時間;18時間~24時間;18~30時間;18~36時間;24~30時間;24~26時間;18~48時間;24~48時間;または36~48時間の範囲の固定時間にわたって固定液で処置される、項目27または28のいずれかに記載の方法。
(項目30)
前記精子細胞が、インビトロにおいて受精能獲得条件で処置される前に、冷凍保存手順で処置され、保存された、項目29に記載の方法。
(項目31)
前記特徴づけ工程が、
受精能を獲得したインビトロの精子細胞のG M1 局在化パターンを示すデータと、既知の受精能状態を有する雄に対する受精能を獲得したインビトロの精子細胞のG M1 局在化パターンを示すデータを比較すること
を含む、項目30に記載の方法。
(項目32)
前記特徴づけ工程が、
所定の数の前記受精能を獲得したインビトロの精子細胞に対して、標識されたG M1 局在化パターンの各々の数を測定すること;
標識されたG M1 局在化パターンの総数の合計に対する、AA G M1 局在化パターンの数とAPM G M1 局在化パターンの数との合計の比を計算すること;および
G M1 局在化パターンの前記比を、既知の受精能状態を有する雄に対するG M1 局在化パターンの参照比と比較すること
をさらに含む、項目31に記載の方法。
(項目33)
前記雄の受精能状態データを、既知の雄性受精能状態および関連する既知の授精のための時間および関連する既知の生殖アプローチのデータと比較する工程をさらに含む、項目32に記載の方法。
(項目34)
前記既知の受精能状態が、3時間以内の精子受精能獲得によって受精能力ありとなる状態;12時間以内の精子受精能獲得によって受精能力ありとなる状態、12~24時間の受精能獲得によって受精能力ありとなる状態;および受精能力が無い状態を含む、項目33に記載の方法。
(項目35)
前記生殖アプローチが、性交;頸管内授精(ICI)、子宮内授精(IUI)、体外受精(IVF)、体外受精前の精子の前受精能獲得、卵細胞質内精子注入法(ICSI)、配偶子卵管内移植法(GIFT)および囲卵腔内精子注入法(SUZI)からなる群より選択される、項目34に記載の方法。
(項目36)
前記識別工程が、以下:患者の人口統計的データ、雌性パートナーの生殖状態、精子の濃度、全体的な運動性、前進運動性、精液の体積、精液のpH、精液の粘度および/または精子の形態ならびにそれらの組み合わせの1つ以上にまた基づく、項目35に記載の方法。
(項目37)
前記1つより多いG M1 局在化パターンが、AA G M1 局在化パターン、APM G M1 局在化パターン、Lined-Cell G M1 局在化パターン、INTER G M1 局在化パターン、PAPM G M1 局在化パターン、AA/PA G M1 局在化パターン、ES G M1 局在化パターンおよびDIFF G M1 局在化パターンである、項目36に記載の方法。
(項目38)
哺乳動物の受精を達成するためのアプローチを識別する方法であって、
受精能を獲得したインビトロの精子細胞を蛍光標識で処置する工程;
蛍光標識された受精能を獲得したインビトロの精子細胞の1つまたはそれを超える蛍光画像を得る工程、
前記蛍光標識された受精能を獲得したインビトロの精子サンプルに対するCap-Score値を計測する工程であって、前記Cap-Score値は、8時間未満(t 0 )、8時間~12時間の範囲(t 1 )または12時間超(t 2 )から選択されるインビトロ受精能獲得後時間において得られる、工程;
前記Cap-Score値を、前記インビトロ受精能獲得後時間における既知の受精能状態の雄に関連する参照Cap-Score値と比較する工程;および
前記インビトロ受精能獲得後時間における前記Cap-Score値に基づいて、授精のための時間および受精を達成するために用いるべき生殖アプローチを識別する工程
を含む、方法。
(項目39)
前記精子細胞が、少なくとも1時間;少なくとも3時間;少なくとも12時間;少なくとも18時間;少なくとも24時間の受精能獲得時間;0.5時間~3時間;3時間~12時間;6時間~12時間;3時間~24時間;12時間~24時間;または18時間~24時間の範囲の受精能獲得時間にわたってインビトロにおいて受精能獲得条件で処置される、項目38に記載の方法。
(項目40)
前記受精能を獲得したインビトロの精子細胞が、少なくとも0.5時間;少なくとも3時間;少なくとも12時間;少なくとも18時間;少なくとも24時間;少なくとも30時間;少なくとも36時間;または少なくとも48時間の固定時間、0.5時間~3時間;3時間~12時間;6時間~12時間;3時間~18時間;6~18時間;6~24時間;12時間~24時間;18時間~24時間;18~30時間;18~36時間;24~30時間;24~26時間;18~48時間;24~48時間;または36~48時間の範囲の固定時間にわたって固定液で処置される、項目38または39のいずれかに記載の方法。
(項目41)
前記精子細胞が、インビトロにおいて受精能獲得条件で処置される前に、冷凍保存手順で処置され、保存された、項目40に記載の方法。
(項目42)
前記Cap-Score値を、既知の雄性受精能状態および関連する既知の授精のための時間および関連する既知の生殖アプローチに対する参照Cap-Score値と比較する工程をさらに含む、項目41に記載の方法。
(項目43)
前記既知の受精能状態が、3時間以内の精子受精能獲得によって受精能力ありとなる状態;12時間以内の精子受精能獲得によって受精能力ありとなる状態、12~24時間の受精能獲得によって受精能力ありとなる状態;および受精能力が無い状態を含む、項目42に記載の方法。
(項目44)
前記生殖アプローチが、性交;頸管内授精(ICI)、子宮内授精(IUI)、体外受精(IVF)、卵細胞質内精子注入法(ICSI)、体外受精前の精子の前受精能獲得、配偶子卵管内移植法(GIFT)および囲卵腔内精子注入法(SUZI)からなる群より選択される、項目43に記載の方法。
(項目45)
前記識別工程が、以下:患者の人口統計的データ、雌性パートナーの生殖状態 精子の濃度、全体的な運動性、前進運動性、精液の体積、精液のpH、精液の粘度および/または精子の形態ならびにそれらの組み合わせの1つ以上にさらに基づく、項目44に記載の方法。
(項目46)
Cap-Scoreが、標識されたG M1 局在化パターンの総数の合計に対する、AA
G M1 局在化パターンの数とAPM G M1 局在化パターンの数との合計の比に対応し、前記標識されたG M1 局在化パターンの各々は、受精能獲得したインビトロの精子サンプルに対して測定される、項目45に記載の方法。
(項目47)
前記1つまたはそれを超える標識されたG M1 局在化パターンが、AA G M1 局在化パターン、APM G M1 局在化パターン、Lined-Cell G M1 局在化パターン、INTER G M1 局在化パターン、PAPM G M1 局在化パターン、AA/PA
G M1 局在化パターン、ES G M1 局在化パターンおよびDIFF G M1 局在化パターンを含む、項目46に記載の方法。
(項目48)
哺乳動物の妊娠を成功させるために適切な機構を識別する方法であって、
受精能を獲得したインビトロの精子細胞を蛍光標識で処置する工程;
蛍光標識された受精能を獲得したインビトロの精子細胞の1つまたはそれを超える蛍光画像を得る工程;
前記蛍光標識された受精能獲得したインビトロの精子サンプルに対するCap-Score値を計測する工程;
前記Cap-Score値を、既知の受精能状態の雄に関連する参照Cap-Score値と比較する工程;および
前記Cap-Score値に基づいて、授精のための時間および受精を達成するために用いるべき生殖アプローチを識別する工程
を含む、方法。
(項目49)
前記判定工程が、以下:患者の人口統計的データ、雌性パートナーの生殖状態 精子の濃度、全体的な運動性、前進運動性、精液の体積、精液のpH、精液の粘度および/または精子の形態のうちの1つまたはそれを超えるものにも基づく、項目48に記載の方法。
(項目50)
精子膜の剪断を防止するのに十分な直径サイズの開口部を有する広口ピペットを用いて精液サンプルを処理する工程;および
精子膜を損傷し得る試薬を使用せずに前記精液サンプルを処理する工程
をさらに含む、項目48または49のいずれかに記載の方法。
(項目51)
精子膜を損傷し得る試薬を使用せずに前記精液サンプルを処理する工程が、
前記処理された精液サンプルを受精能獲得培地、固定液、およびG M1 局在化パターンを測定するための試薬に曝露すること
を含む、項目50に記載の方法。
(項目52)
精子膜を損傷し得る試薬が、(i)プロテアーゼ;(ii)ヌクレアーゼ、(iii)粘液溶解薬;(iv)リパーゼ;(v)エステラーゼおよび(vi)グリコシドヒドロラーゼからなる群より選択される、項目51に記載の方法。
(項目53)
Cap-Scoreについてのパーセント変化が個体内で最小になるように、1つまたはそれを超える標識されたG M1 局在化パターンに対する集団サイズを決定する工程
をさらに含む、項目52に記載の方法。
(項目54)
前記1つまたはそれを超える標識されたG M1 局在化パターンが、AA G M1 局在化パターン、APM G M1 局在化パターン、Lined-Cell G M1 局在化パターン、中間部(INTER)G M1 局在化パターン、先体後部原形質膜(PAPM)G M1 局在化パターン、先体頂部/先体後部(AA/PA)G M1 局在化パターン、赤道部(ES)G M1 局在化パターンおよび散在性(DIFF)G M1 局在化パターンを含む、項目53に記載の方法。
本明細書中に記載されるように、精子が受精能獲得するための時間は、異なる雄の間および異なる雄の中で異なる。雄の精子受精能獲得のための時間を判定することを用いることにより、授精のための時間、および受精を達成するためにその授精の時間の間に用いるべき生殖アプローチを識別することができることが発見された。
精子取扱い方法
粘度を低下させる3つの一般的な方法を評価した。射精液を:1)0.25、1.25または2時間インキュベートした。2)改変ヒト卵管液(Irvine Scientific;Santa Anna,CA)で1:1希釈し、次いで、広口ホールピペット(「WOTP」)またはパスツールピペット(「PP」)に通した。3)キモトリプシン(「chymo」)で酵素的に消化した。パイロット研究によって、皮下針通過が、運動性および膜完全性に悪影響を及ぼし、さらに研究できないことが明らかになった。液化のあと、サンプルを洗浄し、受精能獲得(CAP)条件および非受精能獲得(NC)条件下でインキュベートした。蛍光顕微鏡法によって、上に記載された計算に従ってCap-Score値を得た。
同意雄からの精液サンプルを液化した後、精子を洗浄し、インキュベートし、固定し、次いで、蛍光顕微鏡法によってGM1局在化パターンについて評価した。1つのサンプル内のスコアリングの精度と、同じサンプルをスコアリングする判読者間のばらつきの両方を評価した。不等分散を用いるスチューデントのt検定を、Microsoft Excel(2013)を使用して行った。
同意患者からの精液サンプルを液化し、洗浄し、非受精能獲得条件下と受精能獲得条件下の両方においてインキュベートした。WHOガイドラインに従って、精液分析を行った。蛍光顕微鏡法によってCap-Score値を得た。Microsoft Excel(2013)およびXLSTAT(2015)を使用して統計分析を行った。
2つのコホート:1)受精能が判明している(妊娠中のパートナーがいるかまたは3歳未満の子をもうけた)コホートおよび2)初めて精液分析を受けようとしている患者の同意男性に対するCap-Score値を測定した。液化の後、精子を洗浄し、300万個を非受精能獲得(NC)条件および受精能獲得(CAP)条件下において3時間インキュベートした。精子を一晩固定し、GM1局在化パターンを蛍光顕微鏡法によって評価した。
液化時間、希釈およびピペッティングは、Cap-Score値を変化させなかった。コントロール(インキュベーションのみ)サンプル、WOTP処理サンプルおよびPP処理サンプルは、41±4、40±5および41±6というCap-Score値を有した(n=5;CAP)。chymoを用いてサンプルを液化したとき、受精能獲得刺激に対する応答の低下が観察された(P=0.03)。コントロールサンプルは、40±6というCap-Score値を有した(n=5;CAP)のに対して、酵素的に液化されたサンプルは、31±4というCap-Score値を有した(n=5;CAP)。chymoは、膜タンパク質を切断できるプロテアーゼであるので、Cap-Score値の低下が標識の変化に起因するかを判定するために調べた。受精能獲得刺激に曝露されなかったサンプルを比較したところ、差は観察されなかった。コントロールサンプルおよび酵素的に液化したサンプルは、22±4および21±5というCap-Score値を有した(n=5;NC)。これらのデータは、chymoによる精液の処理は、臨床行為において広く用いられているが、精子が受精能獲得刺激に応答する能力を阻害し得るという認識を裏付ける。
この実施例は、受精能のある男性(コホート1、妊娠中または最近子をもうけた)と潜在的な低受精能/不妊の男性(コホート2、受精能が疑われている男性)との間のコホート比較を用いて行われた。Cap-Scoreと従来の精液測定との関係性も調べた。
実施例1および2において用いられた手順を実施例3でも用いた。
実施例4
実施例5
実施例6
結果
Claims (26)
- t0-[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]のパーセンテージを、哺乳動物の受精を達成するための生殖アプローチの指標とする方法であって、前記方法が、
0.5時間~24時間の範囲の受精能獲得時間にわたって、受精能獲得条件で雄性被験体由来の精子細胞をインビトロで処置することにより、受精能を獲得したインビトロの精子細胞の第1のサンプルを得る工程;
受精能を獲得したインビトロの精子細胞の前記第1のサンプルを固定液および蛍光標識で処置する工程;
受精能を獲得したインビトロの精子細胞の前記第1のサンプルから1つまたはそれを超えるt0-蛍光画像を撮影して得る工程であって、前記精子細胞が、蛍光標識された受精能を獲得したインビトロのt 0 -精子細胞に関連する1つまたはそれを超えるG M1 局在化パターンを示し、前記t 0 -蛍光画像が、0.1時間~18時間から選択されるインビトロ受精能獲得後時間(t 0 )において得られる、工程;
前記1つまたはそれを超えるt0-蛍光画像において示された先体頂部(AA)GM1局在化パターンの数、先体原形質膜(APM)GM1局在化パターンの数およびGM1局在化パターンの総数を計測する工程であって、t0-[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]の前記パーセンテージを求める工程であって、t 0 -[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]の前記パーセンテージが、G M1 局在化パターンの前記総数に対する、先体頂部(AA)G M1 局在化パターンの前記数および先体原形質膜(APM)G M1 局在化パターンの前記数の合計の比に対応する、工程;
計測されたt0-[AA GM1局在化パターンおよびAPM GM1局在化パターン]のパーセンテージを[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]の参照パーセンテージと比較して、受精能状態を求める工程;および
前記求めた受精能状態に基づき哺乳動物の受精を達成するための生殖アプローチを識別する工程
を含み、35%超に対応する[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]の参照パーセンテージが、高受精能状態を示し、35%より1標準偏差低い値に対応する[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]の参照パーセンテージが、中受精能状態を示し、35%より2標準偏差またはそれを超えて低い値に対応する[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]の参照パーセンテージが、低受精能状態を示す、方法。 - 雄が、少なくとも正常の精子濃度を有し、
高受精能状態に対する生殖アプローチが、性交、頸管内授精(ICI)、頸管内授精前の精子の前受精能獲得、子宮内授精(IUI)または子宮内授精前の精子の前受精能獲得からなる群より選択されるか;
中受精能状態に対する生殖アプローチが、頸管内授精(ICI)、頸管内授精前の精子の前受精能獲得;子宮内授精(IUI);子宮内授精前の精子の前受精能獲得;または体外受精(IVF)もしくは体外受精前の精子の前受精能獲得からなる群より選択されるか;または
低受精能状態に対する生殖アプローチが、体外受精(IVF)、体外受精前の精子の前受精能獲得、卵細胞質内精子注入法(ICSI)、卵細胞質内精子注入法の前の精子の前受精能獲得、配偶子卵管内移植法(GIFT)、配偶子卵管内移植法の前の精子の前受精能獲得、囲卵腔内精子注入法(SUZI)または囲卵腔内精子注入法の前の精子の前受精能獲得からなる群より選択される、請求項1に記載の方法。 - 雄が、正常未満の精子濃度を有し、
高受精能状態に対する生殖アプローチが、頸管内授精(ICI)、頸管内授精前の精子の前受精能獲得、子宮内授精(IUI)または子宮内授精前の精子の前受精能獲得からなる群より選択されるか;
中受精能状態に対する生殖アプローチが、頸管内授精(ICI)、頸管内授精前の精子の前受精能獲得、子宮内授精(IUI)または子宮内授精前の精子の前受精能獲得;体外受精(IVF)、体外受精前の精子の前受精能獲得からなる群より選択されるか、または
低受精能状態に対する生殖アプローチが、体外受精(IVF)、体外受精前の精子の前受精能獲得、卵細胞質内精子注入法(ICSI)、卵細胞質内精子注入法の前の精子の前受精能獲得、配偶子卵管内移植法(GIFT)、配偶子卵管内移植法の前の精子の前受精能獲得、囲卵腔内精子注入法(SUZI)または囲卵腔内精子注入法の前の精子の前受精能獲得からなる群より選択される、請求項1に記載の方法。 - (i)前記生殖アプローチが、体外受精前の精子の前受精能獲得に対応し、前受精能獲得のための時間が、受精能獲得のための1つまたはそれを超える刺激を含む培地中で精子を、授精前に24時間;授精前に18時間;授精前に12時間;授精前に6時間;授精前に4時間;授精前に3時間;または授精前に1時間インキュベートすることに対応するか;(ii)前記生殖アプローチが、卵細胞質内精子注入法(ICSI)に対応し、授精前の前受精能獲得のための時間が、受精能獲得のための1つまたはそれを超える刺激を含む培地中で精子を、授精前に24時間;授精前に18時間;授精前に12時間;授精前に6時間;授精前に4時間;授精前に3時間;または授精前に1時間インキュベートすることに対応するか;(iii)前記生殖アプローチが、配偶子卵管内移植法(GIFT)に対応し、授精前の前受精能獲得のための時間が、受精能獲得のための1つまたはそれを超える刺激を含む培地中で精子を、授精前に24時間;授精前に18時間;授精前に12時間;授精前に6時間;授精前に4時間;授精前に3時間;または授精前に1時間インキュベートすることに対応するか;または(iv)前記生殖アプローチが、囲卵腔内精子注入法(SUZI)に対応し、授精前の前受精能獲得のための時間が、受精能獲得のための1つまたはそれを超える刺激を含む培地中で精子を、授精前に24時間;授精前に18時間;授精前に12時間;授精前に6時間;授精前に4時間;授精前に3時間;または授精前に1時間インキュベートすることに対応する、請求項2または3のいずれかに記載の方法。
- 0.5時間~24時間の範囲の受精能獲得時間にわたって、受精能獲得条件で雄性被験体由来の精子細胞をインビトロで処置することにより、受精能を獲得したインビトロの精子細胞の第2のサンプルを得る工程;
受精能を獲得したインビトロの精子細胞の前記第2のサンプルを固定液および蛍光標識で処置する工程;
蛍光標識された受精能を獲得したインビトロのt1-精子細胞に関連する1つまたはそれを超えるGM1局在化パターンを示す1つまたはそれを超えるt1-蛍光画像を撮影して得る工程であって、前記t1-蛍光画像は、受精能獲得後時間t1において得られ、t1は、t0より長い時間または18時間より長い時間から選択される、工程;
前記1つまたはそれを超えるt1-蛍光画像において示された先体頂部(AA)GM1局在化パターンの数、先体原形質膜(APM)GM1局在化パターンの数およびGM1局在化パターンの総数を計測する工程であって、t1-[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]のパーセンテージを求める工程であって、t 1 -[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]の前記パーセンテージが、G M1 局在化パターンの前記総数に対する、先体頂部(AA)G M1 局在化パターンの前記数および先体原形質膜(APM)G M1 局在化パターンの前記数の合計の比に対応する、工程;
t1-[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]のパーセンテージをt0-[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]のパーセンテージと比較する工程であって、前記比較が、12時間超の遅いインビボ受精能獲得時間または12時間未満の標準的なインビボ受精能獲得時間から選択されるインビボ受精能獲得時間を示す、工程をさらに含み;
ここで、35%という標準から1標準偏差超の値に対応する、t0-[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]のパーセンテージとt1-[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]のパーセンテージの差は、12時間超の遅いインビボ受精能獲得時間を示すか;または35%という標準から1標準偏差未満の値に対応する、t0-[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]のパーセンテージとt1-[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]のパーセンテージの差は、12時間未満の標準的なインビボ受精能獲得時間を示し、
さらに、t0-[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]のパーセンテージとt1-[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]のパーセンテージの差が、35%という標準から1標準偏差超の値に対応するとき、t1-受精能状態は、計測されたt1-[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]のパーセンテージと[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]の参照パーセンテージとの比較に基づいて示されるか;またはt0-[AA
GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]のパーセンテージとt1-[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]のパーセンテージの差が、35%という標準から1標準偏差未満の値に対応するとき、t1-受精能状態は、[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]の参照パーセンテージと、計測されたt1-[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]のパーセンテージまたは計測されたt0-[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]のパーセンテージとの比較に基づいて示され;
それによって、前記雄性被験体のt1-受精能状態およびインビボ受精能獲得時間に基づいて、授精のための時間および受精を達成するために用いるべき生殖アプローチを示す、
請求項4に記載の方法。 - 雄が、少なくとも正常な精子濃度および遅いインビボ受精能獲得時間を有し;
t1-高受精能状態に対する生殖アプローチが、性交のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;頸管内授精(ICI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;子宮内授精(IUI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;頸管内授精前の精子の前受精能獲得、または子宮内授精前の精子の前受精能獲得からなる群より選択され;
t1-中受精能状態に対する生殖アプローチが、頸管内授精(ICI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;子宮内授精(IUI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;体外受精(IVF)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;頸管内授精前の精子の前受精能獲得;子宮内授精(IUI);子宮内授精前の精子の前受精能獲得;または体外受精前の精子の前受精能獲得からなる群より選択され、
t1-低受精能状態に対する生殖アプローチが、体外受精(IVF)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;卵細胞質内精子注入法(ICSI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;配偶子卵管内移植法(GIFT)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;囲卵腔内精子注入法(SUZI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;体外受精前の精子の前受精能獲得、卵細胞質内精子注入法の前の精子の前受精能獲得、配偶子卵管内移植法の前の精子の前受精能獲得、または囲卵腔内精子注入法の前の精子の前受精能獲得からなる群より選択される、
請求項5に記載の方法。 - 雄が、正常未満の精子濃度および遅いインビボ受精能獲得時間を有し;
t1-高受精能状態に対する生殖アプローチが、性交のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;頸管内授精(ICI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;子宮内授精(IUI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;頸管内授精前の精子の前受精能獲得または子宮内授精前の精子の前受精能獲得からなる群より選択され;
t1-中受精能状態に対する生殖アプローチが、頸管内授精(ICI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;子宮内授精(IUI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;体外受精(IVF)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;頸管内授精前の精子の前受精能獲得、子宮内授精前の精子の前受精能獲得;または体外受精前の精子の前受精能獲得からなる群より選択され、
t1-低受精能状態に対する生殖アプローチが、体外受精(IVF)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;卵細胞質内精子注入法(ICSI)、卵細胞質内精子注入法(ICSI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;配偶子卵管内移植法(GIFT)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;囲卵腔内精子注入法(SUZI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること、体外受精前の精子の前受精能獲得、卵細胞質内精子注入法の前の精子の前受精能獲得、配偶子卵管内移植法の前の精子の前受精能獲得または囲卵腔内精子注入法の前の精子の前受精能獲得からなる群より選択される、
請求項5に記載の方法。 - 雄が、少なくとも正常な精子濃度および標準的なインビボ受精能獲得時間を有し;
t1-高受精能状態に対する生殖アプローチが、性交、頸管内授精(ICI)、頸管内授精前の精子の前受精能獲得、子宮内授精(IUI)または子宮内授精前の精子の前受精能獲得からなる群より選択されるか;
t1-中受精能状態に対する生殖アプローチが、頸管内授精(ICI)、頸管内授精前の精子の前受精能獲得;子宮内授精(IUI);子宮内授精前の精子の前受精能獲得;または体外受精(IVF)もしくは体外受精前の精子の前受精能獲得からなる群より選択されるか;または
t1-低受精能状態に対する生殖アプローチが、体外受精(IVF)、体外受精前の精子の前受精能獲得、卵細胞質内精子注入法(ICSI)、卵細胞質内精子注入法の前の精子の前受精能獲得、配偶子卵管内移植法(GIFT)、配偶子卵管内移植法の前の精子の前受精能獲得、囲卵腔内精子注入法(SUZI)または囲卵腔内精子注入法の前の精子の前受精能獲得からなる群より選択される、
請求項5に記載の方法。 - 雄が、正常未満の精子濃度および標準的なインビボ受精能獲得時間を有し;
t1-高受精能状態に対する生殖アプローチが、頸管内授精(ICI)、頸管内授精前の精子の前受精能獲得、子宮内授精(IUI)または子宮内授精前の精子の前受精能獲得からなる群より選択されるか;
t1-中受精能状態に対する生殖アプローチが、頸管内授精(ICI)、頸管内授精前の精子の前受精能獲得、子宮内授精(IUI)または子宮内授精前の精子の前受精能獲得;体外受精(IVF)、体外受精前の精子の前受精能獲得からなる群より選択されるか、または
t1-低受精能状態に対する生殖アプローチが、体外受精(IVF)、体外受精前の精子の前受精能獲得、卵細胞質内精子注入法(ICSI)、卵細胞質内精子注入法の前の精子の前受精能獲得、配偶子卵管内移植法(GIFT)、配偶子卵管内移植法の前の精子の前受精能獲得、囲卵腔内精子注入法(SUZI)または囲卵腔内精子注入法の前の精子の前受精能獲得からなる群より選択される、
請求項5に記載の方法。 - (i)前記生殖アプローチが、体外受精前の精子の前受精能獲得に対応し、前受精能獲得のための時間が、受精能獲得のための1つまたはそれを超える刺激を含む培地中で精子を、授精前に24時間;授精前に18時間;授精前に12時間;授精前に6時間;授精前に4時間;授精前に3時間;または授精前に1時間インキュベートすることに対応するか;(ii)前記生殖アプローチが、卵細胞質内精子注入法(ICSI)に対応し、授精前の前受精能獲得のための時間が、受精能獲得のための1つまたはそれを超える刺激を含む培地中で精子を、授精前に24時間;授精前に18時間;授精前に12時間;授精前に6時間;授精前に4時間;授精前に3時間;または授精前に1時間インキュベートすることに対応するか;(iii)前記生殖アプローチが、配偶子卵管内移植法(GIFT)に対応し、授精前の前受精能獲得のための時間が、受精能獲得のための1つまたはそれを超える刺激を含む培地中で精子を、授精前に24時間;授精前に18時間;授精前に12時間;授精前に6時間;授精前に4時間;授精前に3時間;または授精前に1時間インキュベートすることに対応するか;または(iv)前記生殖アプローチが、囲卵腔内精子注入法(SUZI)に対応し、授精前の前受精能獲得のための時間が、受精能獲得のための1つまたはそれを超える刺激を含む培地中で精子を、授精前に24時間;授精前に18時間;授精前に12時間;授精前に6時間;授精前に4時間;授精前に3時間;または授精前に1時間インキュベートすることに対応する、請求項8または9のいずれかに記載の方法。
- 前記時間および/または前記生殖アプローチが、以下:患者の人口統計的データ、雌性パートナーの生殖状態、精子の濃度、全体的な運動性、前進運動性、精液の体積、精液のpH、精液の粘度および/または精子の形態ならびにそれらの組み合わせの1つ以上にまた基づく、請求項10に記載の方法。
- 前記1つまたはそれを超えるGM1局在化パターンが、AA GM1局在化パターン、APM GM1局在化パターン、Lined-Cell GM1局在化パターン、INTER GM1局在化パターン、PAPM GM1局在化パターン、AA/PA GM1局在化パターン、ES GM1局在化パターンおよびDIFF GM1局在化パターンを含む、請求項11に記載の方法。
- 前記受精能を獲得したインビトロの精子細胞が、6時間~12時間の範囲の固定時間にわたって固定液で処置される、請求項1に記載の方法。
- 前記受精能獲得時間が3時間である、請求項1に記載の方法。
- 前記精子細胞が、インビトロにおいて受精能獲得条件で処置される前に、冷凍保存手順で処置され、保存された、請求項14に記載の方法。
- t0-[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]のパーセンテージと、t1-[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]のパーセンテージとの差を、授精のための時間および哺乳動物の受精を達成するための生殖アプローチの指標とする方法であって、
0.5時間~24時間の範囲の受精能獲得時間にわたって、受精能獲得条件で雄性被験体から得られた精子細胞をインビトロで処置することにより、受精能を獲得したインビトロのt 0 -精子細胞の第1のサンプルを得る工程;
0.5時間~24時間の範囲の受精能獲得時間にわたって、受精能獲得条件で同じ雄性被験体から得られた精子細胞をインビトロで処置することにより、受精能を獲得したインビトロのt 1 -精子細胞の第2のサンプルを得る工程;
受精能を獲得したインビトロのt0-精子細胞の前記第1のサンプルを固定液および蛍光標識で処置する工程;
受精能を獲得したインビトロのt1-精子細胞の前記第2のサンプルを固定液および蛍光標識で処置する工程;
蛍光標識された受精能を獲得したインビトロのt0-精子細胞に関連する1つまたはそれを超えるGM1局在化パターンを示す1つまたはそれを超えるt0-蛍光画像を撮影して得る工程であって、前記t 0 -蛍光画像が、0.1時間~18時間から選択されるインビトロ受精能獲得後時間(t 0 )において得られ、
蛍光標識された受精能を獲得したインビトロのt1-精子細胞に関連する1つまたはそれを超えるGM1局在化パターンを示す1つまたはそれを超えるt1-蛍光画像を撮影して得る工程であって、前記t 1 -蛍光画像が、0.1時間~18時間から選択されるインビトロ受精能獲得後時間(t 1 )において得られ、
ここで、t1は、t0より長い、工程;
前記1つまたはそれを超えるt0-蛍光画像において示された前記蛍光標識された受精能を獲得したインビトロのt0-精子細胞における先体頂部(AA)GM1局在化パターンの数、先体原形質膜(APM)GM1局在化パターンの数およびGM1局在化パターンの総数を計測する工程であって、t0-[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]の前記パーセンテージを求める工程であって、t 0 -[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]の前記パーセンテージが、前記蛍光標識された受精能を獲得したインビトロのt 0 -精子細胞におけるG M1 局在化パターンの前記総数に対する、先体頂部(AA)G M1 局在化パターンの前記数および先体原形質膜(APM)G M1 局在化パターンの前記数の合計の比に対応する、工程;
前記1つまたはそれを超えるt1-蛍光画像において示された前記蛍光標識された受精能を獲得したインビトロのt1-精子細胞における先体頂部(AA)GM1局在化パターンの数、先体原形質膜(APM)GM1局在化パターンの数およびGM1局在化パターンの総数を計測する工程であって、t1-[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]の前記パーセンテージを求める工程であって、t 1 -[AA G M1 局在化パターン+APM G M1 局在化パターン]の前記パーセンテージが、前記蛍光標識された受精能を獲得したインビトロのt 1 -精子細胞におけるG M1 局在化パターンの前記総数に対する、先体頂部(AA)G M1 局在化パターンの前記数および先体原形質膜(APM)G M1 局在化パターンの前記数の合計の比に対応する、工程;
t1-[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]のパーセンテージをt0-[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]のパーセンテージと比較する工程であって、前記比較が、12時間超の遅いインビボ受精能獲得時間または12時間もしくはそれ未満の標準的なインビボ受精能獲得時間から選択されるインビボ受精能獲得時間を示す、工程を含み、
ここで、35%という標準から1標準偏差超の値に対応する、t0-[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]のパーセンテージとt1-[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]のパーセンテージの差は、12時間超の遅いインビボ受精能獲得時間を示すか;または35%という標準から1標準偏差未満の値に対応する、t0-[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]のパーセンテージとt1-[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]のパーセンテージの差は、12時間未満の標準的なインビボ受精能獲得時間を示し;
35%超に対応する[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]の参照パーセンテージは、高受精能状態を示し;35%より1標準偏差低い値に対応する[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]の参照パーセンテージは、中受精能状態を示し;35%より2標準偏差またはそれを超えて低い値に対応する[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]の参照パーセンテージは、低受精能状態を示し;
さらに、t0-[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]のパーセンテージとt1-[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]のパーセンテージの差が、35%という標準から1標準偏差超の値に対応するとき、t1-受精能状態は、計測されたt1-[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]のパーセンテージと[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]の参照パーセンテージとの比較に基づいて示されるか;またはt0-[AA
GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]のパーセンテージとt1-[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]のパーセンテージの差が、35%という標準から1標準偏差未満の値に対応するとき、t1-受精能状態は、[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]の参照パーセンテージと、計測されたt1-[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]のパーセンテージまたは計測されたt0-[AA GM1局在化パターン+APM GM1局在化パターン]のパーセンテージとの比較に基づいて示され;
それによって、前記雄のt1-受精能状態およびインビボ受精能獲得時間に基づいて、前記授精のための時間および受精を達成するために用いるべき前記生殖アプローチを示す、方法。 - 雄が、少なくとも正常な精子濃度および遅いインビボ受精能獲得時間を有し;
t1-高受精能状態に対する生殖アプローチが、性交のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;頸管内授精(ICI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;子宮内授精(IUI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;頸管内授精前の精子の前受精能獲得または子宮内授精前の精子の前受精能獲得からなる群より選択され;
t1-中受精能状態に対する生殖アプローチが、頸管内授精(ICI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;子宮内授精(IUI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;体外受精(IVF)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;頸管内授精前の精子の前受精能獲得;子宮内授精(IUI);子宮内授精前の精子の前受精能獲得;または体外受精前の精子の前受精能獲得からなる群より選択され、
t1-低受精能状態に対する生殖アプローチが、体外受精(IVF)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;卵細胞質内精子注入法(ICSI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;配偶子卵管内移植法(GIFT)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;囲卵腔内精子注入法(SUZI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;体外受精前の精子の前受精能獲得、卵細胞質内精子注入法の前の精子の前受精能獲得、配偶子卵管内移植法の前の精子の前受精能獲得または囲卵腔内精子注入法の前の精子の前受精能獲得からなる群より選択される、
請求項16に記載の方法。 - 雄が、正常未満の精子濃度および遅いインビボ受精能獲得時間を有し;
t1-高受精能状態に対する生殖アプローチが、性交のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;頸管内授精(ICI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;子宮内授精(IUI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;頸管内授精(ICI)前の精子の前受精能獲得または子宮内授精(IUI)前の精子の前受精能獲得からなる群より選択され;
t1-中受精能状態に対する生殖アプローチが、頸管内授精(ICI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;子宮内授精(IUI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;体外受精(IVF)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;頸管内授精前の精子の前受精能獲得、子宮内授精前の精子の前受精能獲得;または体外受精前の精子の前受精能獲得からなる群より選択され、
t1-低受精能状態に対する生殖アプローチが、体外受精(IVF)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;卵細胞質内精子注入法(ICSI)、卵細胞質内精子注入法(ICSI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;配偶子卵管内移植法(GIFT)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること;囲卵腔内精子注入法(SUZI)のタイミングを遅いインビボ受精能獲得時間に変更すること、体外受精前の精子の前受精能獲得、卵細胞質内精子注入法の前の精子の前受精能獲得、配偶子卵管内移植法の前の精子の前受精能獲得または囲卵腔内精子注入法の前の精子の前受精能獲得からなる群より選択される、
請求項16に記載の方法。 - 雄が、少なくとも正常な精子濃度および標準的なインビボ受精能獲得時間を有し;
t1-高受精能状態に対する生殖アプローチが、性交、頸管内授精(ICI)、頸管内授精前の精子の前受精能獲得、子宮内授精(IUI)または子宮内授精前の精子の前受精能獲得からなる群より選択されるか;
t1-中受精能状態に対する生殖アプローチが、頸管内授精(ICI)、頸管内授精前の精子の前受精能獲得;子宮内授精(IUI);子宮内授精前の精子の前受精能獲得;または体外受精(IVF)もしくは体外受精前の精子の前受精能獲得からなる群より選択されるか;または
t1-低受精能状態に対する生殖アプローチが、体外受精(IVF)、体外受精前の精子の前受精能獲得、卵細胞質内精子注入法(ICSI)、卵細胞質内精子注入法の前の精子の前受精能獲得、配偶子卵管内移植法(GIFT)、配偶子卵管内移植法の前の精子の前受精能獲得、囲卵腔内精子注入法(SUZI)または囲卵腔内精子注入法の前の精子の前受精能獲得からなる群より選択される、請求項16に記載の方法。 - 雄が、正常未満の精子濃度および標準的なインビボ受精能獲得時間を有し;
t1-高受精能状態に対する生殖アプローチが、頸管内授精(ICI)、頸管内授精前の精子の前受精能獲得、子宮内授精(IUI)または子宮内授精前の精子の前受精能獲得からなる群より選択されるか;
t1-中受精能状態に対する生殖アプローチが、頸管内授精(ICI)、頸管内授精前の精子の前受精能獲得、子宮内授精(IUI)または子宮内授精前の精子の前受精能獲得;体外受精(IVF)、体外受精前の精子の前受精能獲得からなる群より選択されるか、または
t1-低受精能状態に対する生殖アプローチが、体外受精(IVF)、体外受精前の精子の前受精能獲得、卵細胞質内精子注入法(ICSI)、卵細胞質内精子注入法の前の精子の前受精能獲得、配偶子卵管内移植法(GIFT)、配偶子卵管内移植法の前の精子の前受精能獲得、囲卵腔内精子注入法(SUZI)または囲卵腔内精子注入法の前の精子の前受精能獲得からなる群より選択される、
請求項16に記載の方法。 - (i)前記生殖アプローチが、体外受精前の精子の前受精能獲得に対応し、前受精能獲得のための時間が、受精能獲得のための1つまたはそれを超える刺激を含む培地中で精子を、授精前に24時間;授精前に18時間;授精前に12時間;授精前に6時間;授精前に4時間;授精前に3時間;または授精前に1時間インキュベートすることに対応するか;(ii)前記生殖アプローチが、卵細胞質内精子注入法(ICSI)に対応し、授精前の前受精能獲得のための時間が、受精能獲得のための1つまたはそれを超える刺激を含む培地中で精子を、授精前に24時間;授精前に18時間;授精前に12時間;授精前に6時間;授精前に4時間;授精前に3時間;または授精前に1時間インキュベートすることに対応するか;(iii)前記生殖アプローチが、配偶子卵管内移植法(GIFT)に対応し、授精前の前受精能獲得のための時間が、受精能獲得のための1つまたはそれを超える刺激を含む培地中で精子を、授精前に24時間;授精前に18時間;授精前に12時間;授精前に6時間;授精前に4時間;授精前に3時間;または授精前に1時間インキュベートすることに対応するか;または(iv)前記生殖アプローチが、囲卵腔内精子注入法(SUZI)に対応し、授精前の前受精能獲得のための時間が、受精能獲得のための1つまたはそれを超える刺激を含む培地中で精子を、授精前に24時間;授精前に18時間;授精前に12時間;授精前に6時間;授精前に4時間;授精前に3時間;または授精前に1時間インキュベートすることに対応する、請求項16~20のいずれかに記載の方法。
- 前記時間および/または前記生殖アプローチが、以下:患者の人口統計的データ、雌性パートナーの生殖状態、精子の濃度、全体的な運動性、前進運動性、精液の体積、精液のpH、精液の粘度および/または精子の形態ならびにそれらの組み合わせの1つ以上にまた基づく、請求項21に記載の方法。
- 前記1つまたはそれを超えるGM1局在化パターンが、AA GM1局在化パターン、APM GM1局在化パターン、Lined-Cell GM1局在化パターン、INTER GM1局在化パターン、PAPM GM1局在化パターン、AA/PA GM1局在化パターン、ES GM1局在化パターンおよびDIFF GM1局在化パターンを含む、請求項22に記載の方法。
- 前記精子細胞が、インビトロにおいて受精能獲得条件で処置される前に、冷凍保存手順で処置され、保存された、請求項23に記載の方法。
- 精子細胞の前記第1のサンプルおよび精子細胞の前記第2のサンプルが、6時間~12時間の範囲の固定時間にわたって固定液で処置される、請求項16に記載の方法。
- 精子細胞の前記第1のサンプルおよび精子細胞の前記第2のサンプルに対する前記受精能獲得時間が、3時間である、請求項16に記載の方法。
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