JP7112994B2 - 蛍光撮影装置 - Google Patents

Description

本発明は、蛍光を用いて試料を撮影する蛍光撮影装置に関する。

従来、細胞、核酸、または微生物等の試料を観察する場合に、蛍光を利用する技術がある。試料自身が蛍光を発しない場合であっても、例えば蛍光試薬を用いて試料が含む特定の組織を染色することにより、この特定の組織から蛍光を発し得る試料にすることができる。

上記のような蛍光を発する試料の観察には蛍光撮影装置を用いる。蛍光撮影装置は、試料に照射する励起光を発する光源と、励起光を照射することによって試料が発する蛍光を用いて試料を撮影する撮影部と、を備える。また、蛍光撮影装置は、試料が発する蛍光を用いて高精度に試料を撮影するために、バンドパスフィルタ等の光学フィルタを備える場合がある。例えば、特許文献１の蛍光撮影装置は、バンドパスフィルタとハイパスフィルタを有している。

特表２００６－５２８７７２号公報

蛍光撮影装置は、複数の試料をまとめて撮影するために大型化してしまう傾向にある。このため、蛍光撮影装置は小型化することが望まれている。

また、誘電体多層膜を用いて形成する光学フィルタは構造上の方向性を有しており、光がほぼ垂直に入射する場合に予定する性能を発揮する。蛍光撮影装置に、誘電体多層膜を用いて形成した光学フィルタを使用する場合、試料が発する蛍光を平行光に整えてから光学フィルタに入射させる必要があるので、撮影光学系が大型化してしまいやすい。その結果、誘電体多層膜を用いて形成した光学フィルタの使用は、蛍光撮影装置の小型化を妨げる原因の１つとなっている。

一方、試料が発する蛍光を平行光の整えずに、試料が発する蛍光が非平行光である部分に誘電体多層膜からなる光学フィルタを配置して使用すれば、撮影光学系及び蛍光撮影装置を小型化できるが、試料の一部が発した蛍光は光学フィルタに対して斜めに入射する。このように光学フィルタに対して斜めに光が入射する場合、その光に対しては、光学フィルタは予定した性能を発揮せず、実効的な透過特性が変化する。具体的には、入射角度に応じて透過特性が短波長側に遷移する「ブルーシフト」が発生する。このブルーシフトがあるため、試料が発生する蛍光を平行光に整えずに誘電体多層膜からなる光学フィルタを使用する場合、試料の位置に応じて、検出する光量にアーチファクトが生じるという新たな問題が発生する。

そこで、本発明は、小型に形成でき、かつ、ブルーシフトに起因するアーチファクトを低減できる蛍光撮影装置を提供することを目的とする。

本発明の蛍光撮影装置は、操作入力を受け付ける操作画面を表示する表示部を備え、表示部は、光学フィルタ上の位置ごとに試料が発する蛍光の入射角度が異なることによって生じる試料画像の濃淡を補正するブルーシフト補正に係るパラメータを設定するパラメータ設定欄を有する設定操作画面を表示する。

設定操作画面は、試料が含む蛍光試薬を特定する蛍光試薬特定欄を有し、ブルーシフト補正に係るパラメータを、前記蛍光試薬ごとに設定することが好ましい。

設定操作画面は、ブルーシフト補正をする前の試料画像を表示する画像表示欄を備えることが好ましい。

パラメータ設定欄にパラメータを設定する前の場合、表示部は、画像表示欄にブルーシフト補正をする前の試料画像を表示し、かつ、パラメータ設定欄にパラメータを設定した後の場合、表示部は、画像表示欄に、ブルーシフト補正した後の試料画像を表示することが好ましい。

パラメータは、試料画像の中央部の画素値と試料画像の周縁部の画素値との比であることが好ましい。

光学フィルタは、蛍光を含む特定の波長帯域の光を選択的に透過する誘電体多層膜を有し、かつ、撮影に用いる蛍光が非平行光である位置に配置されていることが好ましい。

試料を撮影する撮影部の特性によって生じる試料画像の濃淡を補正するシェーディング補正と、ブルーシフト補正と、を試料画像に施す画像処理部を備えることが好ましい。

画像処理部は、ブルーシフト補正とシェーディング補正を、段階的に、または、合成して、試料画像に施すことが好ましい。

表示部は、試料が含む蛍光試薬の選択を受け付ける蛍光試薬選択欄を有する撮影条件設定画面を表示することが好ましい。

蛍光試薬選択欄において試料が含む蛍光試薬を選択した場合に、選択した蛍光試薬に応じて、試料に照射する励起光、撮影に使用する光学フィルタ、及び、ブルーシフト補正に係るパラメータ、を自動的に選択することが好ましい。

本発明の蛍光撮影装置は、小型に形成でき、かつ、ブルーシフトに起因するアーチファクトを低減できる。

蛍光撮影装置の外観を示す斜視図である。 試料保持部の使用態様を示す説明図である。 蛍光撮影装置の機能を示すブロック図である。 蛍光撮影装置の光学的構成を示す説明図である。 シェーディングの態様を示すシェーディング画像である。 シェーディング画像の画素値の分布を示すグラフである。 校正板が発する蛍光の分光特性を示すグラフである。 シェーディング補正パラメータを示すグラフである。 シェーディング補正をした後の画素値の分布を示すグラフである。 光学フィルタの分光透過特性及びブルーシフトの例を示すグラフである。 第１蛍光試薬を用いた試料が発する蛍光の分光スペクトルと、ブルーシフトによる蛍光の受光量の変化を示すグラフである。 ブルーシフトに起因したアーチファクトの例を示す画像である。 ブルーシフトに起因したアーチファクトによる画素値の分布を示すグラフである。 ブルーシフト補正パラメータの例を示すグラフである。 第２蛍光試薬を用いた試料が発する蛍光の分光スペクトルと、ブルーシフトによる蛍光の受光量の変化を示すグラフである。 記憶部におけるブルーシフト補正パラメータの記憶態様を示す表である。 シェーディング補正及びブルーシフト補正の作用を示す説明図である。 シェーディング補正に係る設定等をするための操作画面の例である。 ブルーシフト補正に係る設定等をするための操作画面の例である。 ブルーシフト補正の設定等に用いる校正用画像の取得態様を示す説明図である。 撮影に係る設定等をする操作画面の例である。

図１に示すように、蛍光撮影装置１０は例えば直方体の一部を切り欠いた外形の筐体１１を有する。筐体１１は、その内部に試料保持部１２等を収容する。試料保持部１２は、観察対象である試料を平面に１または複数配列して保持する。試料保持部１２は例えばトレイの形態である。試料保持部１２には、底面１３を透明なガラス等で形成した第１の試料保持部と、底面１３が黒色で不透明な第２の試料保持部の２種類があり、これらのうちいずれかを選択して使用する。底面１３が透明な第１の試料保持部は、底面１３を介して試料を透過する光を用いて撮影（いわゆる透過撮影）をする場合に使用する。また、底面１３が不透明な第２の試料保持部は、試料の反射光または蛍光等を用いて試料を撮影する場合に使用する。また、試料保持部１２は、開閉部１４を介して筐体１１に挿抜することができる。蛍光撮影装置１０が観察対象とする試料は、例えば、生体の細胞、核酸、または微生物等であり、少なくとも蛍光を発し得るものである。本実施形態においては、試料は、励起光８０（図４参照）の照射によって蛍光を発する蛍光試薬を１つ以上含む。

また、蛍光撮影装置１０は表示部１６を有する。表示部１６は、操作入力を受け付ける操作画面等のユーザインタフェース、及び、撮影した画像等を表示する。本実施形態においては、表示部１６はタッチパネルであり、蛍光撮影装置１０の操作部を兼ねている。したがって、表示部１６が操作画面を表示した場合、ユーザは表示部１６に触れることによって蛍光撮影装置１０の操作及び設定等を行うことができる。

図２に示すように、試料保持部１２は、試料を入れるウェル２１を縦横に所定の配列で配列したマイクロプレート２２を載せて使用できる。この他、試料保持部１２は、スライド等の形態で形成した試料を任意の配列で配置して使用できる。

図３に示すように、蛍光撮影装置１０は、上記の試料保持部１２及び表示部１６の他に、光源部３１、撮影部３２、光学フィルタ３３、画像取得部４１、画像処理部４２、記憶部４３、及び、制御部４４等を備える。

光源部３１は、試料が含む蛍光試薬に対応する励起光８０を発生する。すなわち、光源部３１は、複数の励起光光源を有しており、試料が含む蛍光試薬の種類に応じて励起光８０の波長帯域を切り替えることができる。蛍光試薬に対応する励起光８０とは、その蛍光試薬に起因した蛍光を発生させる光をいう。励起光光源は、例えば、ＬＥＤ（light emitting diode）、ＬＤ（laser diode）、または、ガスランプ等であり、必要に応じて出射する光の波長帯域を制限する光学フィルタを組み合わせて構成することができる。また、光源部３１は、撮影形態に応じて、励起光８０以外の光を発生することができる。試料が発生する蛍光ではなく、透過光、散乱光または反射光によって試料を撮影する場合、例えば、光源部３１は蛍光試薬の種類に関わらず、白色光等を発生することができる。本実施形態においては、特に言及する場合を除き、蛍光撮影装置１０は試料が発する蛍光を用いて撮影をする。

撮影部３２は、試料保持部１２が保持する試料の全体を撮影範囲に含むカメラである。試料に励起光８０を照射する場合には、撮影部３２は、試料が発する蛍光を用いて試料を撮影する。励起光８０以外の光を試料に照射する場合には、撮影部３２は、その透過光、散乱光、または反射光を用いて試料を撮影することができる。また、撮影部３２は、撮影範囲、撮影倍率、及び焦点距離をそれぞれ調整することができる。

光学フィルタ３３は、試料が発する蛍光を用いて試料を撮影する場合に使用するフィルタであり、誘電体多層膜を用いて形成する。光学フィルタ３３の誘電体多層膜は、試料が発する蛍光を含む特定の波長帯域の光を選択的に透過する。例えば、光学フィルタ３３は、試料が発する蛍光を透過し、それ以外の波長帯域の光を低減もしくはカットするバンドパスフィルタである。なお、光学フィルタ３３は、特定波長よりも長波長の光を透過するハイパスフィルタ、特定波長よりも短波長の光を透過するローパスフィルタ、特定の波長帯域の光を透過するバンドパスフィルタ、または、これらの組み合わせにより構成することができる。また、光学フィルタ３３は、励起光８０の波長帯域の光を低減またはカットする誘電体多層膜を含む場合がある。

試料が発する蛍光の波長帯域は蛍光試薬の種類によって異なるので、蛍光撮影装置１０は、蛍光試薬の種類に応じて複数種類の光学フィルタ３３を有している。そして、蛍光撮影装置１０は、複数の光学フィルタ３３の中から、設定等により、蛍光試薬の種類、すなわち、試料が発する蛍光の波長帯域に合わせて必要な光学フィルタ３３を選択的に使用する。なお、蛍光撮影装置１０は、全ての光学フィルタ３３を撮影部３２の光路上から抜去することができる。例えば、透過光等によって試料を撮影する場合には、光学フィルタ３３を撮影部３２の光路上から抜去する。また、試料が発する蛍光を用いて試料を撮影する場合、複数ある光学フィルタ３３の中から１つの光学フィルタ３３を選択するが、必要な場合には２つ以上の光学フィルタ３３を組み合わせて使用することができる。

画像取得部４１は、撮影部３２を用いて、試料を撮影した画像（以下、試料画像という）等を取得する。試料保持部１２が複数の試料を保持している場合、画像取得部４１は、試料保持部１２が保持する複数の試料が写る試料画像を取得する。試料画像は、試料の分析等に使用する画像である。また、画像取得部４１は、試料保持部１２が試料を保持していない場合にも、撮影部３２を用いて撮影をし、画像を取得することができる。例えば、試料保持部１２に校正板をおいて撮影をすることにより、画像取得部４１は、撮影部３２を用いて校正用画像を取得できる。校正用画像は、画像処理部４２が行う画像処理のパラメータを決定または変更するために使用する。

画像処理部４２は、蛍光試薬の種類に応じた画像処理を、試料画像に対して施す。画像処理部４２が行う画像処理は、シェーディング補正及びブルーシフト補正等である。シェーディング補正は、試料画像に生じたシェーディングを補正する画像処理である。シェーディングとは、蛍光試薬によらず撮影部３２の特性によって生じる試料画像等の濃淡のアーチファクトであり、光学フィルタ３３の使用／不使用またはその特性に関わらず、撮影部３２がレンズを使用することによって生じる。ブルーシフト補正は、光学フィルタ３３に入射する位置ごとに蛍光の入射角度が異なることによって生じる試料画像の濃淡のアーチファクトを補正する画像処理である。より具体的には、ブルーシフトに起因する上記アーチファクトは、蛍光試薬の種類に応じて、試料画像の中央部から周縁部にかけて画素値が減少または増加する形態で表れる。したがって、ブルーシフト補正は、これとは逆に、試料画像の中央部から周縁部にかけて画素値を増加または減少する補正である。ブルーシフト補正による画素値の増加または減少の別、及び、具体的な増加量または減少量は、蛍光試薬の種類に応じて変更する。

なお、画像処理部４２は、シェーディング補正とブルーシフト補正を合成した１つの補正処理を試料画像に対して施すことができる。本実施形態においては、説明の便宜のため、画像処理部４２は試料画像に対してシェーディング補正とブルーシフト補正を段階的に施す。

記憶部４３は、蛍光撮影装置１０の各部を制御する制御プログラム及び制御パラメータを記憶するメモリである。例えば、記憶部４３は、画像処理部４２が行う画像処理の制御パラメータとして、シェーディング補正に係るパラメータ（以下、シェーディング補正パラメータ５１という）及びブルーシフト補正に係るパラメータ（以下、ブルーシフト補正パラメータ５２という）を記憶する。また、記憶部４３が記憶するシェーディング補正パラメータ５１及びブルーシフト補正パラメータ５２等の制御パラメータはキャリブレーション等により設定変更をすることができる。

制御部４４は、蛍光撮影装置１０の各部を統括的に制御する。例えば、制御部４４は操作入力を受け付ける操作画面を表示部１６に表示し、操作入力を受け付ける。そして、受けた操作入力にしたがって蛍光撮影装置１０の各部を動作させる。具体的には、制御部４４は、蛍光観察について、シェーディング補正パラメータ５１等の設定に用いる設定操作画面４０１（図１８参照）、ブルーシフト補正パラメータ５２等の設定に用いる設定操作画面４５１（図１９参照）、及び、撮影実行時の撮影条件の設定をする撮影条件設定画面６０１（図２１参照）等を表示部１６に表示する。

図４に示すように、撮影部３２は試料保持部１２に対向し、撮影範囲の中心を試料保持部１２の中央部８６に合わせて配置される。また、撮影部３２は、少なくとも試料保持部１２の全体を撮影範囲に収めることができる。撮影部３２は、レンズ部６１と撮像素子６２とを有する。レンズ部６１は、１または複数のレンズを有し、試料保持部１２の像を撮像素子６２に結像する。また、レンズ部６１は内包するレンズの一部または全部を移動することにより、焦点距離の調節（ピント合わせ）、及び、撮影範囲の拡大または縮小をすることができる。レンズ部６１は、必要に応じて光学フィルタを含む場合がある。撮像素子６２は、例えば、ＣＣＤ（Charge Coupled Device）イメージセンサ、または、ＣＭＯＳ（Complementary Metal Oxide Semiconductor）イメージセンサ、等である。撮像素子６２は必要に応じてカラーフィルタを含むことができる。

また、光源部３１は、直接照明光源６６と間接照明光源６７の２種類の光源を備える。直接照明光源６６は、試料保持部１２の背面側（撮影部３２から見て試料保持部１２の反対側）に配置され、撮影部３２に直接的に照明光が入射し得る位置から試料保持部１２を照明する。また、間接照明光源６７は、撮影部３２に照明光が直接的には入射し得ない位置から試料保持部１２を照明する。直接照明光源６６及び間接照明光源６７はいずれも、試料が含む蛍光試薬に対応する励起光８０を発生することができる。本実施形態においては、間接照明光源６７を用いて試料保持部１２が保持する試料に励起光８０を照射する。

光学フィルタ３３は、撮影部３２が撮影に用いる蛍光が非平行光である位置に、表面を撮影部３２の撮影光軸Ｌ１に垂直にして配置する。試料が発する蛍光を平行光に調整し、試料が発する蛍光が平行光である部分に光学フィルタ３３を配置する場合と比較して、撮影部３２を小型に形成し、結果として蛍光撮影装置１０を小型に形成するためである。本実施形態においては、光学フィルタ３３は、撮影部３２と試料保持部１２の間に配置する。このため、試料保持部１２の中央部８６にある試料が発する蛍光は、光学フィルタ３３に垂直に入射する。一方、試料保持部１２の周縁部８７にある試料が発する蛍光は、光学フィルタ３３に対して斜めに入射する。例えば、周縁部８７にある試料が発する蛍光が光学フィルタ３３に入射する角度θ_Ｍは約２０度であり、従来の蛍光撮影装置よりも広角の撮影範囲を有する。

上記のように、蛍光撮影装置１０の撮影部３２は、レンズ部６１を使用して撮影をするので、試料画像にはシェーディングが重畳する。具体的には、図５に示すシェーディング画像１０１のように、シェーディングは、中央部Ｃ１が最も明るく、角部Ａ１及び角部Ａ２のように中央部Ｃ１から離れた位置においては中央部Ｃ１からの距離に応じて暗くなるアーチファクトである。すなわち、図６に示すように、対角の角部Ａ１及び角部Ａ２の画素値Ｑ２は、中央部Ｃ１の画素値Ｑ１よりも小さい。

このため、蛍光撮影装置１０においては、図７に示すように概ね緑色の蛍光を発する校正板（可視光下でピンク色に見える校正用の平板）を試料の代わりに試料保持部１２に配置して撮影をし、シェーディング画像１０１を得る。そして、シェーディング画像１０１の画素値の分布（図６参照）に基づいて、図８に示すように、位置に応じたシェーディング補正パラメータ５１を算出し、これを記憶部４３に予め記憶する。画像処理部４２は、シェーディング補正をする場合、例えばシェーディング補正パラメータ５１を試料画像等に乗算することにより、シェーディングを補正する。例えば、シェーディング画像１０１にシェーディング補正パラメータ５１を乗算すると、図９に示すように、一定の画素値Ｑ１を有する画像を得ることができる。

一方、蛍光撮影装置１０においては、上記シェーディングの他に、光学フィルタ３３を、撮影部３２が撮影に用いる蛍光が非平行光である位置に配置するので、光学フィルタ３３に入射する位置ごとに試料が発する蛍光の入射角度が異なるので、これに起因して試料画像に濃淡のアーチファクトが生じる。

具体的には、光学フィルタ３３は誘電体多層膜で形成されているので、図１０に示すように、分光透過特性が短波長方向に遷移するブルーシフトが発生する。例えば、試料保持部１２の中央部８６にある試料が発する蛍光は、光学フィルタ３３に垂直に入射する。この場合、光学フィルタ３３の分光透過特性はグラフ１２１であり、その中心波長は「λ１」である。しかし、試料保持部１２の周縁部８７にある試料が発する蛍光は、光学フィルタ３３に角度θ_Ｍで入射する。このため、試料保持部１２の周縁部８７にある試料が発する蛍光に対しては、光学フィルタ３３の分光透過特性はグラフ１２２で示すように、蛍光が垂直に入射する場合のグラフ１２１よりも短波長側に遷移し、その中心波長は例えば「λ２」（＜λ１）になる。

また、蛍光試薬は、その種類によって発する蛍光の分光特性が異なる。例えば、ある特定の蛍光試薬（以下、第１蛍光試薬という）を用いた試料は、図１１に示すように、光学フィルタ３３が透過する光の波長帯域及びその近傍において、発光量が単調に減少する分光特性を有する。このため、試料が第１蛍光試薬を用いる場合、試料保持部１２の中央部８６と周縁部８７において同光量の蛍光が発生したとしても、ブルーシフトの影響によって、撮影部３２で受光する蛍光の光量は、試料保持部１２の中央部８６にある試料が発する蛍光の光量Ｖ１よりも、試料保持部１２の周縁部８７にある試料が発する蛍光の光量Ｖ２の方が大きくなる。その結果、シェーディングがない（あるいはシェーディングを補正した）場合でも、試料画像にはブルーシフトに起因したアーチファクトが重畳する。例えば、図１２に示す画像２３０のように、中央部Ｃ１から対角の角部Ａ１及び角部Ａ２にかけて画素値が増大するアーチファクトが重畳する。ここでは、図１３に示すように、中央部Ｃ１での画素値が「Ｐ１」の場合、ブルーシフトによって角部Ａ１及び角部Ａ２の画素値が「Ｐ２」に増大する。

このため、記憶部４３は、図１４に示すように、上記第１蛍光試薬について、試料が発する蛍光の光学フィルタ３３への入射位置（すなわち蛍光の入射角度）に応じたブルーシフト補正パラメータ５２を記憶する。そして、画像処理部４２は、試料が第１蛍光試薬を用いる場合、試料画像内の位置に応じて、試料画像に第１蛍光試薬に対応するブルーシフト補正パラメータ５２を用いて算出する係数を乗算することにより、ブルーシフト補正をする。

蛍光試薬の種類は複数あり、ブルーシフトの影響によって試料画像にどのようなアーチファクトが重畳するかは、蛍光試薬ごとに異なる。例えば、図１５に示すように、第１蛍光試薬とは別の蛍光試薬（以下、第２蛍光試薬という）は、第１蛍光試薬とは逆に、光学フィルタ３３が透過する光の波長帯域及びその近傍において、単調に発光量が単調に増大する分光特性を有する。このため、第２蛍光試薬を用いる場合、試料保持部１２の中央部８６と周縁部８７において同光量の蛍光が発生したとしても、ブルーシフトの影響によって、試料保持部１２の中央部８６にある試料が発する蛍光の光量Ｖ３よりも、試料保持部１２の周縁部８７にある試料が発する蛍光の光量Ｖ４の方が小さくなる。その結果、第２蛍光試薬を用いる場合、第１蛍光試薬を用いる場合とは逆に中央部Ｃ１から対角の角部Ａ１及び角部Ａ２にかけて画素値が減少するアーチファクトが重畳する。

したがって、図１６に示すように、記憶部４３は、ブルーシフト補正パラメータ５２を蛍光試薬ごとに記憶する。記憶部４３が蛍光試薬ごとにブルーシフト補正パラメータ５２を記憶していることで、画像処理部４２は、使用する蛍光試薬に応じて適切なブルーシフト補正を行うことができる。その結果、撮影部３２が撮影に用いる蛍光が非平行光である位置に光学フィルタ３３を配置したために、ブルーシフトが発生するとしても、ブルーシフトに起因したアーチファクトを低減または除去した試料画像を得ることができる。

また、各蛍光試薬のブルーシフト補正パラメータ５２は、その蛍光試薬を用いる場合に使用する光学フィルタ３３の種類に対応付けて記憶する。光学フィルタ３３の種類によってブルーシフトによる中心波長の遷移量等が異なるので、蛍光試薬と、その蛍光試薬を用いる場合に使用する光学フィルタ３３との組み合わせに対して定まるブルーシフト補正パラメータ５２を用いることで、より正確なブルーシフト補正ができる。また、記憶部４３は、ブルーシフト補正パラメータ５２を、励起光８０（励起光光源の種類）と対応付けて記憶する。同じ蛍光試薬を用いる場合でも、使用する励起光８０に応じて、発生する蛍光の分光特性等が異なる場合があるので、蛍光試薬と、使用する励起光８０との組み合わせに対して定まるブルーシフト補正パラメータ５２を用いることで、より正確なブルーシフト補正ができる。

なお、図１６においては、記憶部４３は、各蛍光試薬のブルーシフト補正パラメータ５２として、「試料画像の中央部Ｃ１の画素値と試料画像の周縁部（例えば角部Ａ１または角部Ａ２）の画素値との比（例えばＰ２／Ｐ１またはＰ１／Ｐ２）」を記憶する。ブルーシフトに起因するアーチファクトは、試料画像の中央部Ｃ１から周縁部にかけて曲線的に変化する（図１３参照）。このため、記憶部４３は、各蛍光試薬を使用する場合の試料画像の中央部Ｃ１から周縁部にかけての曲線的な画素値の変化に応じて、試料画像内の位置ごとにブルーシフト補正パラメータ５２を記憶していることが好ましい。しかし、多くの蛍光試薬において、ブルーシフトによる試料画像の中央部Ｃ１から周縁部にかけての画素値の変化は、中央部Ｃ１から周縁部にかけて直線的に増加または減少すると近似できる。このため、本実施形態（図１６）においては、試料画像の中央部Ｃ１の画素値と試料画像の周縁部の画素値との比を、ブルーシフト補正パラメータ５２として記憶する。これにより、蛍光試薬が多数ある場合でも、蛍光試薬ごとにブルーシフト補正パラメータ５２を比較的容易に特定あるいは校正できる。

上記のように構成する蛍光撮影装置１０を使用する場合、ユーザは、特定の蛍光試薬を含む試料を試料保持部１２に配置し、開閉部１４を閉じて筐体１１内を暗室にする。その後、表示部１６に表示する操作画面を介して、試料に使用する蛍光試薬の種類を特定し、撮影実行の指示を制御部４４に与える。これにより、制御部４４は、複数の光学フィルタ３３の中から蛍光試薬の種類に応じた光学フィルタ３３を配置し、かつ、光源部３１から蛍光試薬の種類に応じた励起光８０を発光する。これにより、試料保持部１２が保持する試料は、蛍光試薬に応じた蛍光を発するので、画像取得部４１は撮影部３２を用いて撮影を実行し、試料画像３０１を取得する。試料画像３０１には、シェーディングによるアーチファクトとブルーシフトによるアーチファクトの２種類のアーチファクトが重畳している。

このため、蛍光撮影装置１０においては、図１７に示すように、画像取得部４１が試料画像３０１を取得すると、画像処理部４２が、蛍光試薬に応じた記憶部４３にあるシェーディング補正パラメータ５１及びブルーシフト補正パラメータ５２を参照し、取得した試料画像３０１にシェーディング補正３０２及びブルーシフト補正３０３を施すことにより、補正をした後の試料画像３０４を得る。

誘電体多層膜を有する光学フィルタ３３を使用する場合、光学フィルタ３３のブルーシフトの影響を排除するために、従来の蛍光撮影装置では撮影部３２（特にレンズ部６１）が大型化することを許容せざるを得なかった。これに対し、上記のように、蛍光撮影装置１０は、誘電体多層膜を有する光学フィルタ３３を使用するために蛍光を平行光に整えるのではなく、誘電体多層膜を有する光学フィルタ３３を蛍光が非平行光である位置に配置する。これにより、蛍光撮影装置１０は、蛍光を平行光に整えるための光学要素を省略して、撮影部３２（特にレンズ部６１）を小型に構成する。その結果、蛍光撮影装置１０の全体を小型に形成する。

一方で、蛍光撮影装置１０は、誘電体多層膜を有する光学フィルタ３３を蛍光が非平行光である位置に配置したことによってブルーシフトの影響を無視できなくなる弊害を、蛍光試薬に応じて行うブルーシフト補正によって是正する。このため、蛍光撮影装置１０は、小型に形成し、かつ、ブルーシフトによるアーチファクトを低減した試料画像３０４を得ることができる。したがって、蛍光撮影装置１０は小型ではあるが、試料が発した蛍光の光量を正確に計測でき、試料が発した蛍光の量を定量的に計測及び比較できる。

なお、光学フィルタ３３をレンズ部６１の入射瞳の位置に配置する場合、極めて高精度な光学フィルタ３３の位置調整が必要である。これに対して、蛍光撮影装置１０は光学フィルタ３３の位置調整にそれほどの精度を要求されず、蛍光試薬に応じた光学フィルタ３３の選択及び挿抜が容易である。また、レンズ部６１に、Ｆ値が１．０以下（例えばＦ０．８５）の明るいレンズを容易に採用できるため、蛍光の発光量が小さい試料を高精度に撮影できる利点もある。さらに、光学フィルタ３３を、蛍光が非平行光である位置に配置することによって、レンズ部６１に、撮影倍率や焦点距離を調節できるレンズを容易に採用できる利点もある。

なお、本実施形態においては、校正板（図７参照）を撮影することにより、シェーディング補正パラメータ５１を求めているが、これは細胞、核酸、または微生物等の具体的かつ実際的な試料を使用する場合、試料の個体差、試料及び／または蛍光試薬の経時変化があるため、シェーディング補正パラメータ５１を正確に求めることができないからである。一方、このように校正板を用いてシェーディング補正パラメータ５１を算出する場合、具体的かつ実際的な蛍光試薬と完全に同じ特性を有する校正板を作製することはできないので、シェーディング補正では、蛍光試薬ごとに異なるブルーシフトに起因下アーチファクトを除くことができない。このため、蛍光撮影装置１０においては、シェーディング補正パラメータ５１とブルーシフト補正パラメータ５２を個別に求めておき、これらを用いシェーディング補正３０２とブルーシフト補正３０３を順次に、またはこれらを合成した１つの補正処理を行う。このように、シェーディング補正パラメータ５１とブルーシフト補正パラメータ５２を個別に保有しておくことにより、シェーディング補正３０２とブルーシフト補正３０３の両方を高精度に実施することができる。

［シェーディング補正の設定操作］
図１８に示すように、蛍光撮影装置１０を校正モード（例えばキャリブレーションモードあるいはカスタムモード）で動作する場合に、表示部１６は、操作画面の１つである設定操作画面４０１を表示する。設定操作画面４０１は、シェーディング補正パラメータ５１を設定または変更する場合に使用するためのユーザインタフェースであり、画像表示欄４１０と、パラメータ設定欄４１１と、を含む。

画像表示欄４１０は、校正板を撮影した校正用画像であるシェーディング画像１０１を表示する欄である。シェーディング画像１０１を撮影した場合、表示部１６はこれを画像表示欄４１０に表示する。

パラメータ設定欄４１１は、シェーディング補正パラメータ５１を設定する欄である。ここでは、パラメータ設定欄４１１は、第１パラメータ欄４１３と第２パラメータ欄４１４を有し、第１パラメータ欄４１３に入力する第１パラメータと、第２パラメータ欄４１４に入力する第２パラメータの２つのパラメータによってシェーディングの２次元的な形状及び程度を定める。すなわち、第１パラメータ欄４１３に入力する第１パラメータと、第２パラメータ欄４１４に入力する第２パラメータと、の組がシェーディング補正パラメータ５１である。

第１パラメータ欄４１３と第２パラメータ欄４１４は任意に数値を入力することができる。また、第１パラメータ欄４１３及び第２パラメータ欄４１４の数値を入力（または変更）した場合、画像処理部４２は入力（変更）した数値を第１パラメータ及び第２パラメータに使用して直ちにシェーディング画像１０１にシェーディング補正を施す。そして、制御部４４は、画像表示欄４１０の画像を、シェーディング補正をした後の画像に更新する。これにより、操作者は、画像表示欄４１０の表示によって、第１パラメータ及び第２パラメータが適正であるか否か（適正にシェーディング補正が行えたか否か）を確認することができる。

また、蛍光撮影装置１０においては、上記のように手動で第１パラメータ及び第２パラメータを入力または変更する代わりに、自動的に第１パラメータ及び第２パラメータを設定できる。この場合、設定操作画面４０１において自動設定ボタン４１６を押す。自動設定ボタン４１６を押すと、制御部４４は、画像表示欄４１０に表示したシェーディング画像１０１を用いて自動的に第１パラメータ及び第２パラメータを算出する。そして、制御部４４が算出した第１パラメータを第１パラメータ欄４１３に入力し、かつ、制御部４４が算出した第２パラメータを第２パラメータ欄４１４に入力する。また、画像処理部４２は、制御部４４が算出した第１パラメータ及び第２パラメータに使用して直ちにシェーディング画像１０１にシェーディング補正を施す。そして、制御部４４は、画像表示欄４１０の画像を、シェーディング補正をした後のシェーディング画像１０１に更新する。

上記のように、シェーディング補正パラメータ５１である第１パラメータ及び第２パラメータが適正に入力等した後、ＯＫボタン４１８を押すと、記憶部４３はこれらの組をシェーディング補正パラメータ５１として記憶する。既にシェーディング補正パラメータ５１の設定がある場合には、新たに設定したシェーディング補正パラメータ５１に更新する。なお、キャンセルボタン４１９を押すことにより、設定操作画面４０１において入力した第１パラメータ及び第２パラメータを破棄することができる。この場合、記憶部４３は、既存のシェーディング補正パラメータ５１を維持する。

［ブルーシフト補正に係る設定操作］
図１９に示すように、蛍光撮影装置１０を校正モードで動作する場合、表示部１６は、操作画面の１つである設定操作画面４５１を表示する。設定操作画面４５１は、ブルーシフト補正パラメータ５２を設定または変更する場合に使用するためのユーザインタフェースであり、画像表示欄４６０と、パラメータ設定欄４６１と、を含む。

画像表示欄４６０は、特定の蛍光試薬を含む試料を撮影した校正用の試料画像にシェーディング補正をした画像（以下、ブルーシフト画像という）４６５を表示する。ブルーシフト画像４６５は、シェーディング補正をした後かつブルーシフト補正をする前の試料画像である。パラメータ設定欄４６１にブルーシフト補正パラメータ５２を設定する前の場合、表示部１６は、画像表示欄４６０にブルーシフト補正をする前の試料画像を表示する。また、パラメータ設定欄４６１にブルーシフト補正パラメータ５２を設定した後の場合、表示部１６は、画像表示欄４６０に、ブルーシフト補正をした後の試料画像を表示する。パラメータ設定欄４６１にブルーシフト補正パラメータ５２を設定した後の場合とは、パラメータ設定欄４６１にブルーシフト補正パラメータ５２を新規に設定する場合の他、パラメータ設定欄４６１においてブルーシフト補正パラメータ５２を変更した場合を含む。

パラメータ設定欄４６１は、ブルーシフト補正パラメータ５２を設定するユーザインタフェースである。ここでは、パラメータ設定欄４６１は、光源選択欄４７１、光学フィルタ選択欄４７２、蛍光試薬特定欄４７４、及び、ブルーシフト補正パラメータ入力欄４７６を備える。

光源選択欄４７１は、ブルーシフト画像４６５の撮影に使用した光源、すなわち励起光８０の波長を選択する欄である。光源選択欄４７１は、プルダウンメニュー４８１によって、蛍光撮影装置１０において使用できる光源（励起光８０の波長）の一覧を表示し、それらの中からブルーシフト画像４６５の撮影に使用した光源（励起光８０の波長）を選択することができる。

光学フィルタ選択欄４７２は、ブルーシフト画像４６５の撮影に使用した光学フィルタ３３を、例えば光学フィルタ３３が透過する波長帯域の中心波長によって選択する。光学フィルタ選択欄４７２は、プルダウンメニュー４８２によって、蛍光撮影装置１０において使用できる光学フィルタ３３の一覧を表示し、それらの中からブルーシフト画像４６５の撮影に使用した光学フィルタ３３を選択することができる。

なお、光源選択欄４７１及び光学フィルタ選択欄４７２の入力は、自動選択ボタン４７３を押すことにより、自動的に行うことができる。自動選択ボタン４７３を押した場合、制御部４４は、例えば、画像表示欄４６０に表示したブルーシフト画像４６５の撮影時の設定を参酌する等して、ブルーシフト画像４６５の撮影に用いた光源（励起光８０の波長）及び光学フィルタ３３を特定する。そして、制御部４４は、特定した光源（励起光８０の波長）を光源選択欄４７１に自動的に入力し、かつ、特定した光学フィルタ３３を光学フィルタ選択欄４７２に自動的に入力する。

蛍光試薬特定欄４７４は、試料が含む蛍光試薬を特定する欄であり、例えば、蛍光試薬の登録名を入力することができる。このため、ブルーシフト補正パラメータ５２は、設定操作画面４５１において、蛍光試薬ごとに設定する。また、蛍光撮影装置１０には、複数の蛍光試薬を予め登録してある。このため、自動入力チェックボックス４７５がオンに設定され、かつ、光源選択欄４７１において選択した励起光８０の波長と、光学フィルタ選択欄４７２において選択した光学フィルタ３３と、の組み合わせに対して登録した蛍光試薬がある場合には、制御部４４は、自動的にその登録名を蛍光試薬特定欄４７４に入力する。一方、自動入力チェックボックス４７５がオフに設定されている場合、または、光源選択欄４７１において選択した励起光８０の波長と、光学フィルタ選択欄４７２において選択した光学フィルタ３３と、の組み合わせに対して登録した蛍光試薬が未登録である場合には、操作者が蛍光試薬特定欄４７４に任意の登録名（例えば蛍光試薬の名称等）を入力する。設定操作画面４５１において、蛍光試薬特定欄４７４に既存の登録名を入力し、ブルーシフト補正パラメータ５２を変更することにより、既存の蛍光試薬に係るブルーシフト補正パラメータ５２を変更（校正）できる。また、設定操作画面４５１において、蛍光試薬特定欄４７４に未登録の名称等を入力して、ブルーシフト補正パラメータ５２を設定することにより、新規の蛍光試薬に係るブルーシフト補正パラメータ５２を記憶部４３に追加できる。

ブルーシフト補正パラメータ入力欄４７６は、ブルーシフト補正パラメータ５２を入力する欄である。ブルーシフト補正パラメータ入力欄４７６は、操作者が任意の数値を入力することができる。ブルーシフト補正パラメータ入力欄４７６に手動で数値を入力または変更した場合、画像処理部４２は、ブルーシフト補正パラメータ入力欄４７６に入力等されたブルーシフト補正パラメータ５２を用いて直ちにブルーシフト画像４６５にブルーシフト補正を施す。そして、制御部４４は、画像表示欄４６０の画像を、ブルーシフト補正をした後の画像に更新する。これにより、操作者は、画像表示欄４６０の表示によって、ブルーシフト補正パラメータ入力欄４７６に入力したブルーシフト補正パラメータ５２が適正であるか否か（適正にブルーシフト補正が行えたか否か）を確認することができる。

上記のように、ブルーシフト補正パラメータ５２を手動で入力する場合、操作者は、ブルーシフト画像４６５の任意の点において画素値を参照することができる。ブルーシフト画像４６５において「Ａ」で示す第１ポイント４８６を選択すると、表示部１６は、第１ポイント４８６の画素値を例えばポップアップ表示する。同様に、ブルーシフト画像４６５において「Ｂ」で示す第２ポイント４８７を選択すると、表示部１６は、第２ポイント４８７の画素値を例えばポップアップ表示する。このため、操作者はブルーシフト画像４６５の第１ポイント４８６及び第２ポイント４８７の各画素値を参照して、ブルーシフト補正パラメータ５２を算出することができる。なお、ここでは、第１ポイント４８６と第２ポイント４８７の２点の画素値を参照しているが、３以上の点について画素値を確認することもできる。

また、ブルーシフト補正パラメータ５２を自動的に算出することができる。例えば、ブルーシフト画像４６５においてブルーシフト補正パラメータ５２の算出に使用する２以上の点（例えば第１ポイント４８６と第２ポイント４８７）を選択し、自動検出ボタン４８３を押すと、制御部４４は選択した点の画素値を用いてブルーシフト補正パラメータ５２を自動的に算出し、ブルーシフト補正パラメータ入力欄４７６に自動的に入力する。

上記のように、手動または自動でブルーシフト補正パラメータ５２を設定し、そのブルーシフト補正パラメータ５２を用いて適正にブルーシフト補正を行えることを確認した場合、ＯＫボタン４９１を押す。これにより、記憶部４３は、設定操作画面４５１において設定したブルーシフト補正パラメータ５２を、蛍光試薬、光源（励起光８０の波長）、及び、光学フィルタ３３等と関連付けて記憶する。その結果、記憶部４３は、ブルーシフト補正パラメータ５２を変更し、または、新規に登録する。なお、キャンセルボタン４９２を押すことにより、設定操作画面４５１において入力したブルーシフト補正パラメータ５２等を破棄することができる。この場合、記憶部４３は、既存のブルーシフト補正パラメータ５２を維持する。

上記のブルーシフト画像４６５は、次のようにして得ることができる。例えば、図２０に示すように、特定の蛍光試薬を含む試料５０１を試料保持部１２の任意の位置において、その試料５０１が発する蛍光を用いて撮影する。試料保持部１２における試料の位置を変更しながら、同様に撮影を繰り返す。そして、各撮影で得た画像を合成し、合成画像５０３を得る。その後、合成画像５０３にシェーディング補正を施すことにより、ブルーシフト画像４６５を得ることができる。

なお、設定操作画面４５１において、表示部１６は、画像表示欄４６０に上記のブルーシフト画像４６５以外の画像を表示することができる。例えば、画像表示欄４６０には、必要に応じて、シェーディング補正をする前の画像を表示してもよい。また、必要に応じて、ブルーシフト補正パラメータ５２によって補正するアーチファクトを画像化して、画像表示欄４６０に表示してもよい。

［撮影実行時の設定操作］
図２１に示すように、蛍光撮影装置１０が、試料が発する蛍光を用いて撮影する蛍光撮影モードで動作する場合、表示部１６は、操作画面の１つである撮影条件設定画面６０１を表示する。撮影条件設定画面６０１は、例えば、蛍光試薬選択欄６１１と、情報表示欄６１２と、を備える。蛍光試薬選択欄６１１は、プルダウンメニュー６１３によって、選択し得る蛍光試薬の一覧を表示する。これにより、蛍光試薬選択欄６１１は、試料が含む蛍光試薬の選択を受け付ける。また、蛍光試薬選択欄６１１において試料が含む蛍光試薬を選択した場合に、制御部４４は、記憶部４３を参照することにより、選択した蛍光試薬に応じて、撮影に使用する励起光８０、光学フィルタ３３、及び、ブルーシフト補正パラメータ５２を自動的に選択し、その後、撮影指示があった場合にはこれらを用いて撮影を実行する。

情報表示欄６１２は、例えば、励起光表示欄６２１、光学フィルタ表示欄６２２、及び、ブルーシフト補正パラメータ表示欄６２３を有する。励起光表示欄６２１は、蛍光試薬選択欄６１１において選択した蛍光試薬に対応する励起光８０の波長を表示する。光学フィルタ表示欄６２２は、蛍光試薬選択欄６１１において選択した蛍光試薬に対応する光学フィルタ３３を、例えば透過する波長帯域の中心波長を用いて表示する。また、ブルーシフト補正パラメータ表示欄６２３は、蛍光試薬選択欄６１１において選択した蛍光試薬に対応するブルーシフト補正パラメータ５２を表示する。

上記のように、蛍光撮影装置１０は、試料が含む蛍光試薬を選択することにより、励起光８０、光学フィルタ３３、及び、ブルーシフト補正パラメータ５２を自動的に選択するので、試料が含む蛍光試薬を特定するだけで、正確な試料画像を容易に得ることができる。

上記実施形態において、画像取得部４１、画像処理部４２、及び、制御部４４といった各種の処理を実行する処理部（processing unit)のハードウェア的な構造は、次に示すような各種のプロセッサ（processor）である。各種のプロセッサには、ソフトウエア（プログラム）を実行して各種の処理部として機能する汎用的なプロセッサであるＣＰＵ（Central Processing Unit)、ＧＰＵ（Graphical Processing Unit）、ＦＰＧＡ (Field Programmable Gate Array) などの製造後に回路構成を変更可能なプロセッサであるプログラマブルロジックデバイス（Programmable Logic Device:ＰＬＤ）、各種の処理を実行するために専用に設計された回路構成を有するプロセッサである専用電気回路などが含まれる。

１つの処理部は、これら各種のプロセッサのうちの１つで構成されてもよいし、同種または異種の２つ以上のプロセッサの組み合せ（例えば、複数のＦＰＧＡ、ＣＰＵとＦＰＧＡの組み合わせ、またはＣＰＵとＧＰＵの組み合わせ等）で構成されてもよい。また、複数の処理部を１つのプロセッサで構成してもよい。複数の処理部を１つのプロセッサで構成する例としては、第１に、クライアントやサーバなどのコンピュータに代表されるように、１つ以上のＣＰＵとソフトウエアの組み合わせで１つのプロセッサを構成し、このプロセッサが複数の処理部として機能する形態がある。第２に、システムオンチップ（System On Chip:ＳｏＣ）などに代表されるように、複数の処理部を含むシステム全体の機能を１つのＩＣ（Integrated Circuit）チップで実現するプロセッサを使用する形態がある。このように、各種の処理部は、ハードウェア的な構造として、上記各種のプロセッサを１つ以上用いて構成される。

さらに、これらの各種のプロセッサのハードウェア的な構造は、より具体的には、半導体素子などの回路素子を組み合わせた形態の電気回路（circuitry）である。また、記憶部のハードウェア的な構造はＨＤＤ（hard disc drive）やＳＳＤ（solid state drive）等の記憶装置である。

１０ 蛍光撮影装置
１１ 筐体
１２ 試料保持部
１３ 底部
１４ 開閉部
１６ 表示部
２１ ウェル
２２ マイクロプレート
３１ 光源部
３２ 撮影部
３３ 光学フィルタ
４１ 画像取得部
４２ 画像処理部
４３ 記憶部
４４ 制御部
５１ シェーディング補正パラメータ
５２ ブルーシフト補正パラメータ
６１ レンズ部
６２ 撮像素子
６６ 直接照明光源
６７ 間接照明光源
８０ 励起光
８６ 中央部
８７ 周縁部
１０１ シェーディング画像
１２１ グラフ
１２２ グラフ
２３０ 画像
３０１ 試料画像
３０２ シェーディング補正
３０３ ブルーシフト補正
３０４ 試料画像
４０１ 設定操作画面
４１０ 画像表示欄
４１１ パラメータ設定欄
４１３ 第１パラメータ欄
４１４ 第２パラメータ欄
４１６ 自動設定ボタン
４１８ ボタン
４１９ キャンセルボタン
４５１ 設定操作画面
４６０ 画像表示欄
４６１ パラメータ設定欄
４６５ ブルーシフト画像
４７１ 光源選択欄
４７２ 光学フィルタ選択欄
４７３ 自動選択ボタン
４７４ 蛍光試薬特定欄
４７５ 自動入力チェックボックス
４７６ ブルーシフト補正パラメータ入力欄
４８１ プルダウンメニュー
４８２ プルダウンメニュー
４８３ 自動検出ボタン
４８６ 第１ポイント
４８７ 第２ポイント
４９１ ＯＫボタン
４９２ キャンセルボタン
５０１ 試料
５０３ 合成画像
６０１ 撮影条件設定画面
６１１ 蛍光試薬選択欄
６１２ 情報表示欄
６１３ プルダウンメニュー
６２１ 励起光表示欄
６２２ 光学フィルタ表示欄
６２３ ブルーシフト補正パラメータ表示欄
Ａ１ 角部
Ａ２ 角部
Ｃ１ 中央部
Ｌ１ 撮影光軸
Ｑ１ 画素値
Ｑ２ 画素値
Ｖ１ 光量
Ｖ２ 光量
Ｖ３ 光量
Ｖ４ 光量

Claims (10)

1. 操作入力を受け付ける操作画面を表示する表示部を備え、
   前記表示部は、光学フィルタに入射する位置ごとに試料が発する蛍光の入射角度が異なることによって生じる試料画像の濃淡を補正するブルーシフト補正に係るパラメータを設定するパラメータ設定欄を有する設定操作画面を表示する蛍光撮影装置。
2. 前記設定操作画面は、前記試料が含む蛍光試薬を特定する蛍光試薬特定欄を有し、
   前記ブルーシフト補正に係るパラメータを、前記蛍光試薬ごとに設定する請求項１に記載の蛍光撮影装置。
3. 前記設定操作画面は、前記ブルーシフト補正をする前の前記試料画像を表示する画像表示欄を備える請求項１または２に記載の蛍光撮影装置。
4. 前記パラメータ設定欄に前記パラメータを設定する前の場合、前記表示部は、前記画像表示欄に前記ブルーシフト補正をする前の前記試料画像を表示し、かつ、
   前記パラメータ設定欄に前記パラメータを設定した後の場合、前記表示部は、前記画像表示欄に、前記ブルーシフト補正した後の前記試料画像を表示する請求項３に記載の蛍光撮影装置。
5. 前記パラメータは、前記試料画像の中央部の画素値と前記試料画像の周縁部の画素値との比である請求項１ないし４のいずれか１項に記載の蛍光撮影装置。
6. 前記光学フィルタは、前記蛍光を含む特定の波長帯域の光を選択的に透過する誘電体多層膜を有し、かつ、撮影に用いる前記蛍光が非平行光である位置に配置されている請求項１ないし５のいずれか１項に記載の蛍光撮影装置。
7. 前記試料を撮影する撮影部の特性によって生じる前記試料画像の濃淡を補正するシェーディング補正と、前記ブルーシフト補正と、を前記試料画像に施す画像処理部を備える請求項１ないし６のいずれか１項に記載の蛍光撮影装置。
8. 前記画像処理部は、前記ブルーシフト補正と前記シェーディング補正を、段階的に、または、合成して、前記試料画像に施す請求項７に記載の蛍光撮影装置。
9. 前記表示部は、前記試料が含む蛍光試薬の選択を受け付ける蛍光試薬選択欄を有する撮影条件設定画面を表示する請求項２ないし８のいずれか１項に記載の蛍光撮影装置。
10. 前記蛍光試薬選択欄において前記試料が含む前記蛍光試薬を選択した場合に、選択した前記蛍光試薬に応じて、試料に照射する励起光、撮影に使用する光学フィルタ、及び、前記ブルーシフト補正に係るパラメータ、を自動的に選択する請求項９に記載の蛍光撮影装置。
    

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