JP7071777B2 - 上皮癌治療薬 - Google Patents

Description

本発明は、上皮癌治療薬に関する。

上皮癌治療薬としては、いわゆる抗癌剤が広く用いられている（非特許文献１等）。また、膀胱癌の治療薬としては、いわゆるＢＣＧも用いられている。

泌尿器ケア，古賀寛史、山口秋人，１９，７，７３１－７３６，２０１４

しかしながら、一般に、抗癌剤及びＢＣＧは副作用が強く、副作用による患者の苦痛が大きい。

そこで、本発明は、副作用が小さい上皮癌治療薬を提供することを目的とする。

前記目的を達成するために、本発明の上皮癌治療薬は、オキソ酸、オキソ酸イオン及びオキソ酸塩からなる群から選択される少なくとも一つを含み、上皮癌の治療又は予防のために使用されることを特徴とする。なお、本発明において「治療」は、特に断らない限り「予防」も含む。本発明において、「予防」は、例えば、再発予防を含み、例えば、上皮癌の再発予防を含む。

本発明によれば、副作用が小さい上皮癌治療薬を提供することができる。

図１は、ＭＡ－Ｔを用いて行ったＵＭ－ＵＣ－３細胞及び５６３７細胞の増殖アッセイの結果を示すグラフである。 図２は、膀胱癌細胞のタイムラプス撮影におけるＭＡ－Ｔ添加又は非添加後の撮影開始直後（０時間培養）の結果を示す写真である。 図３は、膀胱癌細胞のタイムラプス撮影におけるＭＡ－Ｔ添加又は非添加後の撮影開始４８時間後（４８時間培養）の結果を示す写真である。 図４は、ＭＡ－Ｔ添加又は非添加５６３７細胞のアポトーシス解析を示す図である。 図５は、マウスのin vivoイメージングにより、ＭＡ－Ｔの膀胱内投与による膀胱腫瘍の縮小を示した写真である。 図６は、ＭＡ－Ｔ膀胱内投与マウスの体重変化を示すグラフである。 図７は、図６のマウスの膀胱の病理組織解析結果を示す顕微鏡写真である。 図８は、マウスへのルシフェラーゼ発現膀胱癌細胞の移植によるＭＡ－Ｔの抗腫瘍作用による発光、膀胱重量の増加抑制、及び腫瘍組織病理解析結果を示すグラフ及び写真である。 図９は、マウスへのＭＡ－Ｔ処理膀胱癌術後検体移植による腫瘍組織体積の増加抑制の経時的変化と、腫瘍重量の増加抑制とを示すグラフである。 図１０は、図９の腫瘍組織病理解析結果を示す写真である。 図１１のグラフは、ＵＭ－ＵＣ－３細胞に、５００ｐｐｍ ＮａＣｌＯ_２水溶液を接触させた時間（左図）と各膀胱癌細胞の細胞増殖に対するＮａＣｌＯ_２水溶液の濃度依存性（右図）を示すグラフである。 図１２は、ＵＭ－ＵＣ－３細胞をＰＢＳあるいはＮａＣｌＯ_２と１２０分インキュベートして除去後ただちに（０時間）あるいは２４時間培養後（２４時間）の細胞の顕微鏡写真を示す図である。 図１３は、５００ｐｐｍ ＮａＣｌＯ_２水溶液を接触させたＵＭ－ＵＣ－３細胞のアポトーシス誘導を示す図である。 図１４は、５００ｐｐｍ ＮａＣｌＯ_２水溶液を接触させたのち２４時間（終夜）培養後のＵＭ－ＵＣ－３細胞の細胞周期解析結果を示す図である。 図１５は、ＮａＣｌＯ_２上皮癌治療薬の抗腫瘍効果評価を示す図である。図１５左下側のグラフにおいて、横軸は腫瘍移植１２日後からの日数、縦軸は腫瘍体積（ｍｍ^３）を示す。図１５上の写真は移植後２７日目に解剖して摘出した膀胱の写真を、下右側のグラフは、その摘出腫瘍の重量（ｍｇ）を示す。 図１６は、ＮａＣｌＯ_２、塩化ベンゼトニウム及びＭＡ－Ｔの膀胱癌細胞との接触によるラジカル産生の時間依存的変化を検証したグラフ及び蛍光顕微鏡画像である。 図１７は、舌癌細胞「ＨＳＣ－３」及び口腔癌細胞「ＨＯ－１－ｕ－１」を５００ｐｐｍ ＮａＣｌＯ_２水溶液と２時間接触させた後の４８時間培養後の生存率を示すグラフである。 図１８は、子宮癌細胞「ＨｅＬａ」及び子宮癌細胞「ＨｅＬａＳ３」を５００ｐｐｍ ＮａＣｌＯ_２水溶液と２時間接触させた後の４８時間培養後の生存率を示すグラフである。 図１９は、大腸癌細胞「ＨＴ２９」及び大腸癌細胞「ＨＴ１１６」を５００ｐｐｍ ＮａＣｌＯ_２水溶液と２時間接触させた後の４８時間培養後の生存率を示すグラフである。 図２０は、子宮癌細胞「ＨｅＬａ」の増殖抑制に対する、ＮａＣｌＯ_２水溶液単独使用の場合と、塩化ベンゼトニウム（ラジカル発生触媒）を併用した場合との効果を示すグラフである。 図２１は、子宮癌細胞「ＨｅＬａＳ３」の増殖抑制に対する、ＮａＣｌＯ_２水溶液単独使用の場合と、塩化ベンゼトニウム（ラジカル発生触媒）を併用した場合との効果を示すグラフである。 図２２は、膵癌細胞「ＰＫ０５」及び「ＰＫ１０」の増殖抑制に対する、ＮａＣｌＯ_２水溶液の効果を示すグラフである。

以下、本発明について、例を挙げてさらに具体的に説明する。ただし、本発明は、以下の説明により限定されない。

なお、本発明において、化合物（例えば、後述するアンモニウム等）に互変異性体又は立体異性体（例：幾何異性体、配座異性体及び光学異性体）等の異性体が存在する場合は、特に断らない限り、いずれの異性体も本発明に用いることができる。また、本発明において、物質（例えば、後述するオキソ酸、オキソ酸イオン、ラジカル発生触媒等）が塩を形成し得る場合は、特に断らない限り、前記塩も本発明に用いることができる。前記塩は、酸付加塩でも良いが、塩基付加塩でも良い。さらに、前記酸付加塩を形成する酸は無機酸でも有機酸でも良く、前記塩基付加塩を形成する塩基は無機塩基でも有機塩基でも良い。前記無機酸としては、特に限定されないが、例えば、硫酸、リン酸、フッ化水素酸、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、次亜フッ素酸、次亜塩素酸、次亜臭素酸、次亜ヨウ素酸、亜フッ素酸、亜塩素酸、亜臭素酸、亜ヨウ素酸、フッ素酸、塩素酸、臭素酸、ヨウ素酸、過フッ素酸、過塩素酸、過臭素酸、及び過ヨウ素酸等があげられる。前記有機酸も特に限定されないが、例えば、ｐ－トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、ｐ－ブロモベンゼンスルホン酸、炭酸、コハク酸、クエン酸、安息香酸及び酢酸等があげられる。前記無機塩基としては、特に限定されないが、例えば、水酸化アンモニウム、アルカリ金属水酸化物、アルカリ土類金属水酸化物、炭酸塩及び炭酸水素塩等があげられ、より具体的には、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素カリウム、水酸化カルシウム及び炭酸カルシウム等があげられる。前記有機塩基も特に限定されないが、例えば、エタノールアミン、トリエチルアミン及びトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン等があげられる。これらの塩の製造方法も特に限定されず、例えば、前記化合物に、前記のような酸や塩基を公知の方法により適宜付加させる等の方法で製造することができる。

また、本発明において、鎖状置換基（例えば、アルキル基、不飽和脂肪族炭化水素基等の炭化水素基）は、特に断らない限り、直鎖状でも分枝状でも良く、その炭素数は、特に限定されないが、例えば、１～４０、１～３２、１～２４、１～１８、１～１２、１～６、又は１～２（不飽和炭化水素基の場合は２以上）であっても良い。また、本発明において、環状の基（例えば、アリール基、ヘテロアリール基等）の環員数（環を構成する原子の数）は、特に限定されないが、例えば、５～３２、５～２４、６～１８、６～１２、又は６～１０であっても良い。また、置換基等に異性体が存在する場合は、特に断らない限り、どの異性体でも良く、例えば、単に「ナフチル基」という場合は、１－ナフチル基でも２－ナフチル基でも良い。

［１．上皮癌治療薬］
本発明の上皮癌治療薬は、前述のとおり、オキソ酸、オキソ酸イオン及びオキソ酸塩からなる群から選択される少なくとも一つを含むことを特徴とする。なお、後述するように、本発明の上皮癌治療薬は、オキソ酸、オキソ酸イオン及びオキソ酸塩以外の任意成分を含んでいてもよいし、含んでいなくてもよい。

［１－１．オキソ酸、オキソ酸イオン及びオキソ酸塩］
本発明の上皮癌治療薬において、例えば、前記オキソ酸が、ホウ酸、炭酸、オルト炭酸、カルボン酸、ケイ酸、亜硝酸、硝酸、亜リン酸、リン酸、ヒ酸、亜硫酸、硫酸、スルホン酸、スルフィン酸、クロム酸、ニクロム酸、過マンガン酸、及びハロゲンオキソ酸からなる群から選択される少なくとも一つであってもよい。

前記オキソ酸は、例えば、ハロゲンオキソ酸であってもよい。前記ハロゲンオキソ酸は、例えば、塩素オキソ酸、臭素オキソ酸、及びヨウ素オキソ酸からなる群から選択される少なくとも一つであってもよい。前記ハロゲンオキソ酸は、例えば、塩素オキソ酸であってもよい。

前記ハロゲンオキソ酸は、例えば、次亜塩素酸、亜塩素酸、塩素酸、過塩素酸、次亜臭素酸、亜臭素酸、臭素酸、過臭素酸、次亜ヨウ素酸、亜ヨウ素酸、ヨウ素酸、及び過ヨウ素酸からなる群から選択される少なくとも一つであってもよい。前記ハロゲンオキソ酸は、例えば、次亜ハロゲン酸、亜ハロゲン酸、ハロゲン酸、及び過ハロゲン酸からなる群から選択される少なくとも一つであってもよい。前記ハロゲンオキソ酸は、例えば、亜ハロゲン酸であってもよい。前記ハロゲンオキソ酸は、例えば、亜塩素酸であってもよい。

本発明の上皮癌治療薬において、前記オキソ酸が、オキソ酸塩の形態である場合、前記オキソ酸塩は、特に限定されず、無機塩でも有機塩でもよい。前記無機塩及び前記有機塩も特に限定されないが、その具体例は、例えば、前述のとおりである。

本発明の上皮癌治療薬において、オキソ酸、オキソ酸イオン及びオキソ酸塩からなる群から選択される少なくとも一つの物質の含有率は、特に限定されない。例えば、本発明の上皮癌治療薬が、後述するラジカル発生触媒を含まない場合は、上皮癌治療薬１ｇに対し、オキソ酸イオンの含有量が、０．１μｇ以上、１μｇ以上、２μｇ以上、３μｇ以上、５μｇ以上、１０μｇ以上、１００μｇ以上、２００μｇ以上、５００μｇ以上、１０００μｇ以上、１５００μｇ以上、２５００μｇ以上、又は５０００μｇ以上でもよく、１００００μｇ以下、５０００μｇ以下、２５００μｇ以下、２０００μｇ以下、１５００μｇ、１０００μｇ以下、５００μｇ、１００μｇ以下、又は１０μｇ以下でもよい。本発明の上皮癌治療薬が、後述するラジカル発生触媒を含む場合は、上皮癌治療薬１ｇに対し、オキソ酸イオンの含有量が、例えば、０．１μｇ以上、１μｇ以上、２μｇ以上、３μｇ以上、５μｇ以上、１０μｇ以上、１００μｇ以上、２００μｇ、５００μｇ以上、１０００μｇ以上、１５００μｇ以上、２５００μｇ以上、又は５０００μｇ以上でもよく、１００００μｇ以下、５０００μｇ以下、２５００μｇ以下、２０００μｇ以下、１５００μｇ、１０００μｇ以下、５００μｇ、１００μｇ以下、又は１０μｇ以下でもよい。

［１－２．ラジカル発生触媒］
本発明の上皮癌治療薬は、前述のとおり、さらに、前記上皮癌治療薬に含まれる前記オキソ酸、オキソ酸イオン及びオキソ酸塩からなる群から選択される少なくとも一つの物質からのラジカル発生を触媒する物質であるラジカル発生触媒を含んでいてもよい。以下、前記ラジカル発生触媒を「本発明のラジカル発生触媒」ということがある。

本発明のラジカル発生触媒は、例えば、有機化合物でも無機物質でもよい。前記有機物質は、例えば、アンモニウム、アミノ酸、タンパク質、ペプチド、リン脂質、及びそれらの塩からなる群から選択される少なくとも一つであってもよい。前記無機物質は、金属イオン及び非金属イオンの一方又は両方を含んでいても良い。前記金属イオンは、典型金属イオン及び遷移金属イオンの一方又は両方を含んでいても良い。前記無機物質は、例えば、アルカリ土類金属イオン、希土類イオン、Ｍｇ^２＋、Ｓｃ^３＋、Ｌｉ^＋、Ｆｅ^２＋、Ｆｅ^３＋、Ａｌ^３＋、ケイ酸イオン、及びホウ酸イオンからなる群から選択される少なくとも一つであっても良い。アルカリ土類金属イオンとしては、例えば、カルシウム、ストロンチウム、バリウム、又はラジウムのイオンが挙げられ、より具体的には、例えば、Ｃａ^２＋、Ｓｒ^２＋、Ｂａ^２＋、及びＲａ^２＋が挙げられる。また、「希土類」は、スカンジウム_２１Ｓｃ、イットリウム_３９Ｙの２元素と、ランタン_５７Ｌａからルテチウム_７１Ｌｕまでの１５元素（ランタノイド）の計１７元素の総称である。希土類イオンとしては、例えば、前記１７元素のそれぞれに対する３価の陽イオンが挙げられる。

また、前記ラジカル発生触媒は、例えば、ＣａＣｌ_２、ＭｇＣｌ_２、ＦｅＣｌ_２、ＦｅＣｌ_３、ＡｌＣｌ_３、ＡｌＭｅＣｌ_２、ＡｌＭｅ_２Ｃｌ、ＢＦ_３、ＢＰｈ_３、ＢＭｅ_３、ＴｉＣｌ_４、ＳｉＦ_４、及びＳｉＣｌ_４からなる群から選択される少なくとも一つであっても良い。ただし、「Ｐｈ」はフェニル基を表し、「Ｍｅ」はメチル基を表す。

前記ラジカル発生触媒は、例えば、０．４ｅＶ以上であるルイス酸でもよい。また、前記ラジカル発生触媒は、例えば、ブレーンステッド酸としての酸解離定数ｐＫ_ａが５以上であるブレーンステッド酸でもよい。前記ｐＫ_ａの上限値は、特に限定されないが、例えば、５０以下である。

なお、本発明のラジカル発生触媒において、前記ラジカル発生触媒は、目的に応じて、反応性の強さ、酸性度の強さ、安全性等を考慮して適宜選択することができる。

本発明において、アンモニウム、アミノ酸、ペプチド、及びリン脂質等がラジカル発生触媒として機能する理由は明らかではないが、前記アンモニウム、アミノ酸、ペプチド、及びリン脂質等がルイス酸としての機能を有するためであると推測される。なお、本発明において、「ルイス酸」は、例えば、前記ラジカル発生源に対してルイス酸として働く物質をいう。

本発明のラジカル発生触媒のルイス酸性度は、例えば、０．４ｅＶ以上、０．５ｅＶ以上、又は０．６ｅＶ以上である。前記ルイス酸性度の上限値は、特に限定されないが、例えば、２０ｅＶ以下である。本発明において、前記ルイス酸性度が前記数値以上又は以下であることの判断基準としては、例えば、後述する「ルイス酸性度の測定方法（１）」又は「ルイス酸性度の測定方法（２）」のいずれか一方による測定値が前記数値以上又は以下であればよい。

前記ルイス酸性度は、例えば、Ohkubo, K.; Fukuzumi, S. Chem. Eur. J., 2000, 6, 4532、J. AM. CHEM. SOC. 2002, 124, 10270-10271、又はJ. Org. Chem. 2003, 68, 4720-4726に記載の方法により測定することができ、具体的には、下記の「ルイス酸性度の測定方法（１）」により測定することができる。

（ルイス酸性度の測定方法（１））
下記化学反応式（１ａ）中のコバルトテトラフェニルポルフィリン、飽和Ｏ_２及びルイス酸性度の測定対象物（例えば金属等のカチオンであり、下記化学反応式（１ａ）ではＭ^ｎ＋で表される）を含むアセトニトリル（ＭｅＣＮ）を、室温において紫外可視吸収スペクトル変化の測定をする。得られた反応速度定数（k_cat）からルイス酸性度の指標であるΔＥ値（ｅＶ）を算出することができる。k_catの値は大きいほど強いルイス酸性度を示す。また、有機化合物のルイス酸性度は、量子化学計算によって算出される最低空軌道（LUMO）のエネルギー準位からも、見積もることができる。正側に大きい値であるほど強いルイス酸性度を示す。

なお、上記測定方法により測定（算出）されるルイス酸性度の指標となる、ルイス酸存在下におけるCoTPPと酸素の反応速度定数の例を以下に示す。下記表中において、「k_cat,M^-2s^-1」で表される数値が、ルイス酸存在下におけるCoTPPと酸素である。「LUMO, eV」で表される数値が、LUMOのエネルギー準位である。また、「benzetonium chloride」は塩化ベンゼトニウムを表し、「benzalkonium chloride」は塩化ベンザルコニウムを表し、「tetramethylammonium hexafluorophosphate」はヘキサフルオロリン酸テトラメチルアンモニウム塩を表し、「tetrabutylammonium hexafluorophosphate」はヘキサフルオロリン酸テトラブチルアンモニウム塩を表し、「ammonium hexafluorophosphate」はヘキサフルオロリン酸アンモニウム塩を表す。

また、本発明において、ルイス酸性度の測定は、ルイス酸性度の測定方法（１）において、酸素分子（Ｏ_２）に代えてユビキノン１（Ｑ１）を用い、ユビキノン１を還元してユビキノン１のアニオンラジカルを生成させることにより行なってもよい。このようなルイス酸性度の測定方法を、以下において、「ルイス酸性度の測定方法（２）」という場合がある。ルイス酸性度の測定方法（２）において、測定は、酸素分子（Ｏ_２）に代えてユビキノン１（Ｑ１）を用いること以外はルイス酸性度の測定方法（１）と同様にして行うことができる。また、ルイス酸性度の測定方法（２）においては、ルイス酸性度の測定方法（１）と同様に、得られた反応速度定数（k_cat）からルイス酸性度の指標であるΔＥ値（ｅＶ）を算出することができる。ルイス酸性度の測定方法（２）は、例えば、Ohkubo, K.; Fukuzumi, S. Chem. Eur. J., 2000, 6, 4532に記載されており、同文献に記載された方法にしたがって、又はそれに準じて行うことができる。

前記ルイス酸性度の測定方法（２）は、下記化学反応式（１ｂ）に対する反応速度定数（k_cat）を測定することにより行うことができる。

前記化学式（１ｂ）中、
Ｍ^ｎ＋は、前記ラジカル発生触媒を表し、
ＣｏＴＰＰは、コバルト（II）テトラフェニルポルフィリンを表し、
Ｑ１は、ユビキノン１を表し、
［（ＴＰＰ）Ｃｏ］^＋は、コバルト（III）テトラフェニルポルフィリンカチオンを表し、
（Ｑ１）^・－は、ユビキノン１のアニオンラジカルを表す。

本発明のラジカル発生触媒のルイス酸性度は、例えば、前記化学反応式（１ｂ）に対する反応速度定数（k_cat）すなわち「ルイス酸性度の測定方法（２）」により測定される前記反応速度定数（k_cat）の測定値（K_obs）が、例えば、１．０×１０^－５Ｓ^－１以上、２．０×１０^－５Ｓ^－１以上、３．０×１０^－５Ｓ^－１以上、４．０×１０^－５Ｓ^－１以上、５．０×１０^－５Ｓ^－１以上、６．０×１０^－５Ｓ^－１以上、７．０×１０^－５Ｓ^－１以上、８．０×１０^－５Ｓ^－１以上、９．０×１０^－５Ｓ^－１以上、１．０×１０^－４Ｓ^－１以上、２．０×１０^－４Ｓ^－１以上、３．０×１０^－４Ｓ^－１以上、４．０×１０^－４Ｓ^－１以上、５．０×１０^－４Ｓ^－１以上、６．０×１０^－４Ｓ^－１以上、７．０×１０^－４Ｓ^－１以上、８．０×１０^－４Ｓ^－１以上、９．０×１０^－４Ｓ^－１以上、１．０×１０^－３Ｓ^－１以上、２．０×１０^－３Ｓ^－１以上、３．０×１０^－３Ｓ^－１以上、４．０×１０^－３Ｓ^－１以上、５．０×１０^－３Ｓ^－１以上、６．０×１０^－３Ｓ^－１以上、７．０×１０^－３Ｓ^－１以上、８．０×１０^－３Ｓ^－１以上、９．０×１０^－３Ｓ^－１以上、１．０×１０^－２Ｓ^－１以上、２．０×１０^－２Ｓ^－１以上、３．０×１０^－２Ｓ^－１以上、４．０×１０^－２Ｓ^－１以上、５．０×１０^－２Ｓ^－１以上、６．０×１０^－２Ｓ^－１以上、７．０×１０^－２Ｓ^－１以上、８．０×１０^－２Ｓ^－１以上、又は９．０×１０^－２Ｓ^－１以上であってもよく、１．０×１０^－１Ｓ^－１以下、９．０×１０^－２Ｓ^－１以下、８．０×１０^－２Ｓ^－１以下、７．０×１０^－２Ｓ^－１以下、６．０×１０^－２Ｓ^－１以下、５．０×１０^－２Ｓ^－１以下、４．０×１０^－２Ｓ^－１以下、３．０×１０^－２Ｓ^－１以下、２．０×１０^－２Ｓ^－１以下、１．０×１０^－２Ｓ^－１以下、９．０×１０^－３Ｓ^－１以下、８．０×１０^－３Ｓ^－１以下、７．０×１０^－３Ｓ^－１以下、６．０×１０^－３Ｓ^－１以下、５．０×１０^－３Ｓ^－１以下、４．０×１０^－３Ｓ^－１以下、３．０×１０^－３Ｓ^－１以下、２．０×１０^－３Ｓ^－１以下、１．０×１０^－３Ｓ^－１以下、９．０×１０^－４Ｓ^－１以下、８．０×１０^－４Ｓ^－１以下、７．０×１０^－４Ｓ^－１以下、６．０×１０^－４Ｓ^－１以下、５．０×１０^－４Ｓ^－１以下、４．０×１０^－４Ｓ^－１以下、３．０×１０^－４Ｓ^－１以下、２．０×１０^－４Ｓ^－１以下、１．０×１０^－４Ｓ^－１以下、９．０×１０^－５Ｓ^－１以下、８．０×１０^－５Ｓ^－１以下、又は７．０×１０^－５Ｓ^－１以下であってもよい。

本発明のラジカル発生触媒において、前記アンモニウムは、例えば、４級アンモニウムでも良いし、３級、２級、１級又は０級のアンモニウムでも良い。また、前記アンモニウムは、特に限定されず、例えば、核酸塩基等でもよいし、後述するアミノ酸、ペプチド等であってもよい。

また、本発明のラジカル発生触媒は、例えば、陽イオン界面活性剤でも良く、第４級アンモニウム型陽イオン界面活性剤であっても良い。第４級アンモニウム型陽イオン界面活性剤としては、例えば、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、塩化セチルピリジニウム、塩化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム、塩化デカリニウム、エドロホニウム、塩化ジデシルジメチルアンモニウム、塩化テトラメチルアンモニウム、塩化テトラブチルアンモニウム、塩化ベンジルトリエチルアンモニウム、オキシトロピウム、カルバコール、グリコピロニウム、サフラニン、シナピン、臭化テトラエチルアンモニウム、臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム、スキサメトニウ、スフィンゴミエリン、ガングリオシドＧＭ１、デナトニウム、トリゴネリン、ネオスチグミン、パラコート、ピリドスチグミン、フェロデンドリン、プラリドキシムヨウ化メチル、ベタイン、ベタニン、ベタネコール、ベタレイン、レシチン、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシル、及びコリン類（ベンゾイルコリンクロリド、及びラウロイルコリンクロリド水和物などのコリンクロリド、ホスホコリン、アセチルコリン、コリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、及び重酒石酸コリンなど）が挙げられる。ただし、本発明のラジカルの製造方法において、前記第４級アンモニウムは、界面活性剤のみには限定されない。

本発明のラジカル発生触媒において、前記アンモニウムは、例えば、下記化学式（XI）で表されるアンモニウム塩であっても良い。

前記化学式（XI）中、
Ｒ^１１、Ｒ^２１、Ｒ^３１、及びＲ^４１、は、それぞれ水素原子もしくは芳香環であるか、又はアルキル基であり、前記アルキル基は、エーテル結合、カルボニル基、エステル結合、若しくはアミド結合、又は芳香環が含まれていてもよく、Ｒ^１１、Ｒ^２１、Ｒ^３１、及びＲ^４１は、それぞれ同じでも異なっていてもよく、
又は、Ｒ^１１、Ｒ^２１、Ｒ^３１、及びＲ^４１のうち２つ以上が一体化し、それらが結合するＮ^＋とともに環状構造を形成していてもよく、前記環状構造は、飽和でも不飽和でもよく、芳香環でも非芳香環でもよく、１以上の置換基を有していても有していなくてもよく、
Ｘ^－は、アニオンである。Ｘ^－は、例えば、ペルオキソ二硫酸イオンを除くアニオンである。
Ｒ^１１、Ｒ^２１、Ｒ^３１、及びＲ^４１において、前記芳香環は、特に限定されず、例えば、ヘテロ原子を含んでいても含んでいなくても良く、置換基を有していても有していなくても良い。ヘテロ原子を含む前記芳香環（ヘテロ芳香環）としては、例えば、含窒素芳香環、含硫黄芳香環、含酸素芳香環等があげられる。ヘテロ原子を含まない前記芳香環としては、例えば、ベンゼン環、ナフタレン環、アントラセン環、フェナントレン環等があげられる。ヘテロ芳香環としては、例えば、ピリジン環、チオフェン環、及びピレン環等があげられる。含窒素芳香環は、例えば、正電荷を有していなくてもよいし、有していてもよい。正電荷を有しない含窒素芳香環としては、例えば、ピロリン環、ピリジン環、ピリダジン環、ピリミジン環、ピラジン環、キノリン環、イソキノリン環、アクリジン環、３，４－ベンゾキノリン環、５，６－ベンゾキノリン環、６，７－ベンゾキノリン環、７，８－ベンゾキノリン環、３，４－ベンゾイソキノリン環、５，６－ベンゾイソキノリン環、６，７－ベンゾイソキノリン環、７，８－ベンゾイソキノリン環等があげられる。正電荷を有する含窒素芳香環としては、例えば、ピロリニウム環、ピリジニウム環、ピリダジニウム環、ピリミジニウム環、ピラジニウム環、キノリニウム環、イソキノリニウム環、アクリジニウム環、３，４－ベンゾキノリニウム環、５，６－ベンゾキノリニウム環、６，７－ベンゾキノリニウム環、７，８－ベンゾキノリニウム環、３，４－ベンゾイソキノリニウム環、５，６－ベンゾイソキノリニウム環、６，７－ベンゾイソキノリニウム環、７，８－ベンゾイソキノリニウム環等があげられる。含酸素芳香環又は含硫黄芳香環としては、例えば、前記ヘテロ原子を含まない芳香環又は含窒素芳香環の炭素原子又は窒素原子の少なくとも一つを、酸素原子及び硫黄原子の少なくとも一方で置き換えた芳香環があげられる。
Ｒ^１１、Ｒ^２１、Ｒ^３１、及びＲ^４１において、前記アルキル基又は前記芳香環が置換基を有する場合、前記置換基は、特に限定されず、任意であるが、例えば、スルホ基、ニトロ基、ジアゾ基等があげられる。

前記化学式（XI）で表されるアンモニウム塩は、例えば、下記化学式（XII）で表されるアンモニウム塩であっても良い。

前記化学式（XII）中、
Ｒ^１１１は、炭素数が５～４０のアルキル基であり、エーテル結合、ケトン（カルボニル基）、エステル結合、若しくはアミド結合、置換基、又は芳香環が含まれていてもよく、
Ｒ^２１及びＸ^－は、前記化学式（XI）と同じである。
Ｒ^１１１において、前記芳香環は、特に限定されず、例えば、ヘテロ原子を含んでいても含んでいなくても良く、置換基を有していても有していなくても良い。Ｒ^１１１において、前記芳香環の具体例は、特に限定されないが、例えば、前記化学式（XI）のＲ^１１、Ｒ^２１、Ｒ^３１、及びＲ^４１と同様である。
Ｒ^１１１において、前記アルキル基又は前記芳香環が置換基を有する場合、前記置換基は、特に限定されず、任意であるが、例えば、前記化学式（XI）のＲ^１１、Ｒ^２１、Ｒ^３１、及びＲ^４１と同様である。

前記化学式（XII）中、
Ｒ^２１は、例えば、メチル基又はベンジル基でも良く、前記ベンジル基は、ベンゼン環の水素原子の１以上が任意の置換基で置換されていても置換されていなくても良く、前記任意の置換基は、例えば、アルキル基、不飽和脂肪族炭化水素基、アリール基、ヘテロアリール基、ハロゲン、ヒドロキシ基（－ＯＨ）、メルカプト基（－ＳＨ）、又はアルキルチオ基（－ＳＲ、Ｒはアルキル基）であっても良い。

前記化学式（XII）で表されるアンモニウム塩は、例えば、下記化学式（XIII）で表されるアンモニウム塩であっても良い。

前記化学式（XIII）中、
Ｒ^１１１及びＸ^－は、前記化学式（XII）と同じである。

前記アンモニウムは、例えば、塩化ベンゼトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム、塩化テトラメチルアンモニウム、塩化アンモニウム、塩化メチルアンモニウム、塩化テトラブチルアンモニウム、塩化セチルピリジニウム、臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム、塩化デカリニウム、エドロホニウム、塩化ジデシルジメチルアンモニウム、塩化ベンジルトリエチルアンモニウム、オキシトロピウム、カルバコール、グリコピロニウム、サフラニン、シナピン、臭化テトラエチルアンモニウム、臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム、スキサメトニウム、スフィンゴミエリン、ガングリオシドＧＭ１、デナトニウム、トリゴネリン、ネオスチグミン、パラコート、ピリドスチグミン、フェロデンドリン、プラリドキシムヨウ化メチル、ベタイン、ベタニン、ベタネコール、ベタレイン、レシチン、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシル、及びコリン類からなる群から選択される少なくとも一つであってもよい。前記アンモニウムは、例えば、塩化ベンゼトニウムであってもよい。

前記化学式（XI）で表されるアンモニウム塩は、例えば、下記化学式（XIV）で表されるアンモニウム塩であってもよい。

前記化学式（XIV）中、
Ｒ^１００は、環状構造を形成していてもよく、前記環状構造は、飽和でも不飽和でもよく、芳香環でも非芳香環でもよく、１以上の置換基を有していても有していなくてもよく、
Ｒ^１１及びＸ^－は、前記化学式（XI）と同じである。

前記化学式（XI）で表されるアンモニウム塩は、例えば、下記化学式（XV）で表されるアンモニウム塩であってもよい。

前記化学式（XV）中、
各Ｚは、それぞれ、ＣＨ又はＮであり、同一でも異なっていてもよく、ＣＨの場合は、Ｈは置換基で置換されていてもよく、
Ｒ^１１及びＸ^－は、前記化学式（XI）と同じである。

前記化学式（XI）で表されるアンモニウム塩は、例えば、下記化学式（XVI）で表されるアンモニウム塩であってもよい。

前記化学式（XVI）中、
Ｒ^１０１、Ｒ^１０２、Ｒ^１０３、及びＲ^１０４は、それぞれ水素原子又は置換基であり、Ｒ^１０１、Ｒ^１０２、Ｒ^１０３、及びＲ^１０４は、それぞれ同じでも異なっていてもよく、
又は、Ｒ^１０１、Ｒ^１０２、Ｒ^１０３、及びＲ^１０４のうち２つ以上が一体化し、それらが結合するＮ^＋とともに環状構造を形成していてもよく、前記環状構造は、飽和でも不飽和でもよく、芳香環でも非芳香環でもよく、１以上の置換基を有していても有していなくてもよく、
Ｚは、ＣＨ又はＮであり、ＣＨの場合は、Ｈは置換基で置換されていてもよく、
Ｒ^１１及びＸ^－は、前記化学式（XI）と同じである。

前記化学式（XI）で表されるアンモニウム塩は、例えば、下記化学式（XVII）で表されるアンモニウム塩であってもよい。

前記化学式（XVII）中、
Ｒ^１１１～Ｒ^１１８は、それぞれ水素原子又は置換基であり、Ｒ^１１１～Ｒ^１１８は、それぞれ同じでも異なっていてもよく、
又は、Ｒ^１１１～Ｒ^１１８のうち２つ以上が一体化して環状構造を形成していてもよく、前記環状構造は、
芳香環でも非芳香環でもよく、１以上の置換基を有していても有していなくてもよく、
Ｚは、ＣＨ又はＮであり、ＣＨの場合は、Ｈは置換基で置換されていてもよく、
Ｒ^１１及びＸ^－は、前記化学式（XI）と同じである。

前記化学式（XI）で表されるアンモニウム塩は、例えば、塩化ベンゼトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム、塩化テトラメチルアンモニウム、塩化アンモニウム、塩化メチルアンモニウム、及び塩化テトラブチルアンモニウムからなる群から選択される少なくとも一つであっても良い。また、前記化学式（XII）で表されるアンモニウム塩が、塩化ベンゼトニウムであることが特に好ましい。

なお、塩化ベンゼトニウム（Ｂｚｎ^＋Ｃｌ^－）は、例えば、下記化学式であらわすことができる。また、塩化ベンザルコニウムは、例えば、前記化学式（XIII）中、Ｒ^１１１が炭素数８～１８のアルキル基であり、Ｘ^－が塩化物イオンである化合物として表すことができる。

なお、前記化学式（XI）、（XII）、（XIII）、（XIV）、（XV）、（XVI）及び（XVII）中、Ｘ^－は、任意のアニオンであり、特に限定されない。また、Ｘ^－は、１価のアニオンに限定されるものではなく、２価、３価等の任意の価数のアニオンでも良い。アニオンの電荷が２価、３価等の複数の場合、例えば、前記化学式（XI）、（XII）、（XIII）、（XIV）、（XV）、（XVI）及び（XVII）中のアンモニウム（１価）の分子数は、アニオンの分子数×アニオンの価数（例えば、アニオンが２価の場合、アンモニウム（１価）の分子数は、アニオンの分子数の２倍）となる。Ｘ^－としては、例えば、ハロゲンイオン（フッ化物イオン、塩化物イオン、臭化物イオン、ヨウ化物イオン）、酢酸イオン、硝酸イオン、硫酸イオン等が挙げられる。

本発明のラジカル発生触媒は、例えば、前記化学式（XI）、（XII）、（XIII）、（XIV）、（XV）、（XVI）及び（XVII）に限定されず、芳香環を含む任意の構造のアンモニウムでもよい。前記芳香環としては、特に限定されないが、例えば、前記化学式（XI）のＲ^１１、Ｒ^２１、Ｒ^３１、及びＲ^４１において例示した芳香環があげられる。

本発明のラジカル発生触媒は、例えば、スルホン酸系アミン又はそのアンモニウムでもよい。前記スルホン酸系アミンとは、例えば、分子中にスルホ基（スルホン酸基）を有するアミンである。前記スルホン酸系アミンとしては、例えば、タウリン、スルファミン酸、３－アミノ－４－ヒドロキシ－１－ナフタレンスルホン酸、スルファミン酸、ｐ－トルイジン－２－スルホン酸、ｏ－アニシジン－５－スルホン酸、ダイレクト ブルー １４、３－［Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）アミノ］－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸、３－［（３－コラミドプロピル）ジメチルアンモニオ］－１－プロパンスルホナート、アミノメタンスルホン酸、３－スルホプロピルアミン、２－アミノベンゼンスルホン酸、Ｒ（＋）－３－アミノテトラヒドロフラン トルエン、４－アミノ－５－ヒドロキシ－１，７－ナフタレンジスルホン酸、Ｎ－（２－アセトアミド）－２－アミノエタンスルホン酸、４’－アミノ－３’－メトキシアゾベンゼン－３－スルホン酸ナトリウム、Ｌａｐａｔｉｎｉｂ ｄｉｔｏｓｙｌａｔｅ、Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸、８－アミノ－１，３，６－ナフタレントリスルホン酸二ナトリウム水和物、１－アミノナフタレン－２－スルホン酸、（２Ｓ，３Ｓ）－３－アミノ－２－メチル－４－オキソ－１－アゼチジンスルホン酸、３－（１－ナフチルアミノ）プロパンスルホン酸ナトリウム、３－メチル－４－アミノベンゼンスルホン酸、３－シクロヘキシルアミノ－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸 ナトリウム、Ｎ－トリス（ヒドロキシメチル）メチル－２－アミノエタンスルホン酸 ナトリウム、４－アミノ－１－ナフタレンスルホン酸、スルファミン酸ナトリウム、トリカイン、スルファニル酸 ナトリウム、１，４－フェニレンジアミン－２－スルホン酸、ｐ－アニシジン－２－スルホン酸、６－アミノ－１－ナフタレンスルホン酸、３，４－ジアミノベンゼンスルホン酸、３－アミノ－４－クロロベンゼンスルホン酸、３－［（４－アミノ－３－メチルフェニル）アゾ］ベンゼンスルホン酸、３－アミノ－４－ヒドロキシ－５－ニトロベンゼンスルホン酸、５－アミノ－６－ヒドロキシ－３－ニトロベンゼンスルホン酸、４－アセトアミド－２－アミノベンゼンスルホン酸水和物、２－アミノフェノール－４－スルホン酸、１－アミノ－２－メトキシ－５－メチル－４－ベンゼンスルホン酸、ダンシル酸、Ｓｕｌｆａｍｉｃ ａｃｉｄ ［（１Ｓ，２Ｓ，４Ｒ）－４－［４－［［（１Ｓ）－２，３－ｄｉｈｙｄｒｏ－１Ｈ－ｉｎｄｅｎ－１－ｙｌ］ａｍｉｎｏ］－７Ｈ－ｐｙｒｒｏｌｏ［２，３－ｄ］ｐｙｒｉｍｉｄｉｎ－７－ｙｌ］－２－ｈｙｄｒｏｘｙｃｙｃｌｏｐｅｎｔｙｌ］ｍｅｔｈｙｌ ｅｓｔｅｒ、５－スルホ－４’－ジエチルアミノ－２，２’－ジヒドロキシアゾベンゼン、２－アミノナフタレン－６，８－ジスルホン酸、２－［Ｎ，Ｎ－ビス（２－ヒドロキシエチル）アミノ］－１－エタンスルホン酸ナトリウム、３－アセチル－２－（メチルアミノスルホニル）チオフェン、４－アミノ－２－クロロトルエン－５－スルホン酸ナトリウム、５－（３－ＡＭＩＮＯ－５－ＯＸＯ－２－ＰＹＲＡＺＯＬＩＮ－１－ＹＬ）－２－ＰＨＥＮＯＸＹＢＥＮＺＥＮＥＳＵＬＦＯＮＩＣ ＡＣＩＤ、スルファミン酸カリウム、Ｐ－ＡＭＩＮＯＡＺＯＢＥＮＺＥＮＥ ＭＯＮＯＳＵＬＦＯＮＩＣ ＡＣＩＤ、３－［（３－Ｃｈｏｌａｍｉｄｏｐｒｏｐｙｌ）ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｍｏｎｉｏ］－２－ｈｙｄｒｏｘｙ－１－ｐｒｏｐａｎｅｓｕｌｆｏｎａｔｅ、３－アミノ－２，７－ナフタレンジスルホン酸一ナトリウム、３－［Ｎ，Ｎ－ビス（ヒドロキシエチル）アミノ］－２－ヒドロキシプロパンスルホン酸ナトリウム塩、二（アミド硫酸）コバルト（II）、３－（４－アミノ－３－メトキシフェニルアゾ）ベンゼンスルホン酸、スルファミン酸ニッケル（II）四水和物、２，４－ジアミノベンゼンスルホン酸ナトリウム、５－アミノ－２－クロロトルエン－４－スルホン酸、２，５－ジクロロスルファニル酸、４－メチルベンゼンスルホン酸、ＡＰＴＳ（アミノピレントリスルホン酸）、４’－アミノアゾベンゼン－３－スルホン酸、ポンタシル カルミン ２Ｂ、ｐ－アニシジン－３－スルホン酸、４，４’－ビス（４－アミノ－１－ナフチルアゾ）－２，２’－スチルベンスルホン酸、３－ＡＭＩＮＯＮＡＰＨＴＨＡＬＥＮＥ－８－ＨＹＤＲＯＸＹ－４，６－ＤＩＳＵＬＦＯＮＩＣ ＡＣＩＤ、４－アミノ－１，５－ナフタレンジスルホン酸ナトリウム、４－アミノアゾベンゼン－４’－スルホン酸ナトリウム、５－アミノ－２－メチルベンゼンスルホン酸、７－アミノ－１，３－ナフタレンジスルホン酸ジナトリウム、アリザリンサフィロールＳＥ、７－アミノ－２－ナフタレンスルホン酸 ナトリウム、６－アミノ－５－ブロモピリジン－３－スルホン酸、２－アミノエタンチオールｐ－トルエンスルホン酸塩、２－アミノ－１－ナフタレンスルホン酸ナトリウム、６－アミノ－１，３－ナフタレンジスルホン酸二ナトリウム水和物、Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラエチルスルファミド、５－アミノ－２－エトキシベンゼンスルホン酸、３，５－ジアミノ－２，４，６－トリメチルベンゼンスルホン酸、７－アミノ－１－ナフタレンスルホン酸、スルファミン酸 グアニジン、２－アミノ－５－ニトロベンゼンスルホン酸、ジアミド硫酸ニッケル（II）、４－アミノ－４’－ニトロスチルベン－２，２’－ジスルホン酸二ナトリウム、アニリン－２，５－ジスルホン酸一ナトリウム、５－アミノ－１－ナフトール－３－スルホン酸水和物、２，５－ジクロロスルファニル酸 ナトリウム、６－アミノヘキサン酸ヘキシルｐ－トルエンスルホナート、ｒａｃ－（Ｒ＊）－２－（４－クロロフェニル）－３－アミノ－１－プロパンスルホン酸、２－（Ｎ，Ｎ－ジプロピル）アミノ アニソール－４－スルホン酸、２－アミノ－４－クロロフェノール－６－スルホン酸、６－アミノ－１，３－ナフタレンジスルホン酸、５，１０，１５，２０－テトラキス〔４－（トリメチルアンモニオ）フェニル〕－２１Ｈ，－２３Ｈ－ポルフィンテトラトシレート、５－アミノ－２－［（４－アミノフェニル）アミノ］ベンゼンスルホン酸、４－アミノ－３－クロロベンゼンスルホン酸、２－アミノベンゼンスルホン酸フェニルエステル、４－アセチルアミノ－４’－イソチオシアナトスチルベン－２，２’－ジスルホン酸ジナトリウム、（Ｓ）－３－ＡＭＩＮＯ－２－ＯＸＥＴＡＮＯＮＥ Ｐ－ＴＯＬＵＥＮＥＳＵＬＦＯＮＩＣ ＡＣＩＤ ＳＡＬＴ、５－アセチルアミノ－４－ヒドロキシ－２，７－ナフタレンジスルホン酸二ナトリウム、２－フェニルアミノ－５－アミノベンゼンスルホン酸、４－オクタデシルアミノ－４－オキソ－２－［（ソジオオキシ）スルホニル］ブタン酸ナトリウム、３，５－ジアミノ－４－メチルベンゼンスルホン酸等があげられる。

本発明のラジカル発生触媒は、例えば、ニコチン系アミン又はそのアンモニウムでもよい。前記ニコチン系アミンとは、例えば、分子中に、環状構造を有し、かつ、前記環状構造がニコチン骨格を含むアミンである。前記ニコチン系アミンとしては、例えば、ニコチンアミド、アルカロイド等があげられる。

本発明のラジカル発生触媒は、例えば、亜硝酸系アミン又は亜硝酸系アンモニウムでもよい。前記亜硝酸系アミン又は亜硝酸系アンモニウムとは、例えば、アミンと亜硝酸又は亜硝酸誘導体とを反応させて得られる化合物である。前記亜硝酸系アミン又は亜硝酸系アンモニウムとしては、例えば、ジアゾ化合物、ジアゾニウム塩、Ｎ－ニトロソ化合物、Ｃ－ニトロソ化合物等があげられる。

また、本発明のラジカル発生触媒において、前記アンモニウムは、１分子中にアンモニウム構造（Ｎ^＋）を複数含んでいても良い。さらに、前記アンモニウムは、例えば、π電子相互作用により複数の分子が会合し、二量体又は三量体等を形成していても良い。

本発明のラジカル発生触媒において、前記アミノ酸は、特に限定されない。前記アミノ酸は、例えば、分子中に、アミノ基又はイミノ基と、カルボキシ基との両方を、それぞれ少なくとも１つずつ含んでいればよい。前記アミノ酸は、例えば、α－アミノ酸でもよく、β－アミノ酸でもよく、γ－アミノ酸でもよく、それら以外のアミノ酸でもよい。前記アミノ酸は、例えば、タンパク質を構成するアミノ酸でもよく、具体的には、例えば、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、リシン、ヒドロキシリシン、アルギニン、システイン、シスチン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、ヒスチジン、プロリン、及び４－ヒドロキシプロリンからなる群から選択される少なくとも一つであってもよい。

本発明のラジカル発生触媒において、前記ペプチドは、特に限定されない。前記ペプチドは、例えば、前記アミノ酸分子が２個以上、ペプチド結合により結合したものであればよい。前記ペプチドは、例えば、酸化型グルタチオン（ＧＳＳＧ）及び還元型グルタチオン（ＧＳＨ）の少なくとも一方であってもよい。

本発明のラジカル発生触媒において、前記リン脂質は、特に限定されない。前記リン脂質は、例えば、分子中にリン原子を含む脂質であればよく、例えば、分子中にリン酸エステル結合（Ｐ－Ｏ－Ｃ）を含む脂質であってもよい。前記リン脂質は、例えば、分子中に、アミノ基、イミノ基、アンモニウム基、及びイミニウム基の少なくとも一つを有していてもよいし、有していなくてもよい。前記リン脂質は、例えば、ホスファチジルセリン、ホスファチジルコリン、ホスファチジン酸、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、及びカルジオリピンからなる群から選択される少なくとも一つであってもよい。

本発明のラジカル発生触媒は、前述のとおり、本発明の上皮癌治療薬に含まれる前記オキソ酸、オキソ酸イオン及びオキソ酸塩からなる群から選択される少なくとも一つの物質からのラジカル発生を触媒する物質である。したがって、本発明のラジカル発生触媒は、例えば、生体外でラジカル発生源からのラジカル発生を触媒してもよいが、生体内において、前記オキソ酸、オキソ酸イオン及びオキソ酸塩からなる群から選択される少なくとも一つの物質からのラジカル発生を触媒することが好ましい。前記生体内は、例えば、人体内でもよいが、人間以外の動物の体内でもよい。

本発明のラジカル発生触媒は、例えば、消化器官内において、ラジカル発生源からのラジカル発生を触媒してもよい。前記消化器官は、例えば、口腔部、咽頭部、食道、胃、十二指腸、小腸及び大腸からなる群から選択される少なくとも一つであってもよい。前記消化器官は、例えば、大腸であってもよい。前記小腸は、例えば、十二指腸、空腸及び回腸からなる群から選択される少なくとも一つであってもよい。前記大腸は、例えば、盲腸、結腸及び直腸からなる群から選択される少なくとも一つであってもよい。本発明のラジカル発生触媒は、例えば、前記消化器官内の殺菌、腸内細菌叢の変化の誘導、潰瘍性大腸炎の治療又は症状の抑制等に用いてもよい。

本発明の上皮癌治療薬において、前記ラジカル発生触媒の含有率は、特に限定されない。例えば、上皮癌治療薬１ｇに対し、前記ラジカル発生触媒の含有量が、０．１μｇ以上、１μｇ以上、２μｇ以上、３μｇ以上、５μｇ以上、１０μｇ以上、１００μｇ以上、２００μｇ、５００μｇ以上、１５００μｇ以上、２５００μｇ以上、又は５０００μｇ以上でもよく、１００００μｇ以下、５０００μｇ以下、２５００μｇ以下、２０００μｇ以下、１０００μｇ以下、５００μｇ、１００μｇ以下、又は１０μｇ以下でもよい。

［１－３．その他の任意成分］
本発明の上皮癌治療薬は、前述のとおり、オキソ酸、オキソ酸イオン及びオキソ酸塩からなる群から選択される少なくとも一つを含むことを特徴とする。本発明の上皮癌治療薬は、オキソ酸、オキソ酸イオン及びオキソ酸塩以外の任意成分を含んでいてもよいし、含んでいなくてもよい。前記任意成分としては、例えば、前記ラジカル発生触媒が挙げられる。また、本発明の上皮癌治療薬は、前記ラジカル発生触媒以外の任意成分を含んでいてもよいし、含んでいなくてもよい。前記ラジカル発生触媒以外の任意成分は、特に限定されない。その具体例については、下記「２．上皮癌治療薬の形態、製造方法、使用方法等」に記載する。

［２．上皮癌治療薬の形態、製造方法、使用方法等］
本発明の上皮癌治療薬の形態は、特に限定されず、例えば、固形、粉末、半固形状、液状等でもよい。固形の場合は、例えば、錠剤、カプセル等でもよい。

本発明の上皮癌治療薬の製造方法も特に限定されず、例えば、一般的な薬剤の製造方法と同様もしくはそれに準じた方法で製造することができる。具体的には、例えば、本発明の上皮癌治療薬の全成分を単に混合するのみでもよい。また、例えば、前記全成分を混合後に、例えば、押し固めて錠剤にしてもよいし、カプセルに封入してもよい。

本発明の上皮癌治療薬は、前述のとおり、前記ラジカル発生触媒以外の任意成分を含んでいてもよいし、含んでいなくてもよい。前記任意成分は、前述のとおり、特に限定されず、例えば、一般的な薬剤と同様又はそれに準じてもよい。前記任意成分としては、例えば、本発明の上皮癌治療薬が液状である場合は、水、ｐＨ緩衝液、生理食塩水等が挙げられる。

本発明の上皮癌治療薬は、前記任意成分として、例えば、一種類以上の薬学的に許容可能な添加物をさらに含んでいてもよい。すなわち、例えば、硫酸化多糖又は硫酸化オリゴ糖を、投与に先立ち、一種類以上の薬学的に許容可能な添加物と共に製剤してもよい。前記添加物は、特に限定されないが、例えば、担体、希釈剤、香料、甘味料、滑沢剤、溶解剤、懸濁剤、結合剤、錠剤崩壊剤、及びカプセル化材等の不活性物質が挙げられる。また、これら以外にも、例えば、医薬の分野で一般に使用されている任意の添加物を適宜用いてもよい。

前記添加物は、本発明の上皮癌治療薬を経口投与する場合は、例えば、以下に列挙する物質を使用することができる。担体としては、例えば、ラクトース、デンプン、スクロース、グルコース、炭酸ナトリウム、マンニトール、ソルビトール、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、メチルセルロース等が可能である。崩壊剤としては、例えば、トウモロコシ粉、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガム、アルギン酸等が可能である。結合剤としては、例えば、ゼラチン、天然糖、ベータラクトース、トウモロコシ甘味料、天然及び合成ゴム、アラビアゴム、トラガカントゴム、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、ワックス等が可能である。滑沢剤としては、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸、オレイン酸ナトリウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、食塩、タルク等が可能である。

本発明の上皮癌治療薬は、例えば、オキソ酸、オキソ酸イオン及びオキソ酸塩からなる群から選択される少なくとも一つと、必要に応じ前記ラジカル発生触媒及びその他の任意成分とを、希釈剤と混合しても良いし、担体に封入しても良い。前記担体は、例えば、カプセル、小袋、紙その他の容器の形態が可能である。前記担体は希釈剤を兼ねてもよく、固体でも、半固体でも、ビヒクルとして作用する液体でも良い。また、本発明の医薬の形態は、特に限定されないが、例えば、錠剤、ピル、散剤、ローゼンジ、エリキシル、懸濁液、乳濁液、溶液、シロップ、エアロゾル、軟膏、軟・硬ゼラチンカプセル、坐薬、滅菌注射用液及び包装滅菌散剤等の種々の形態が可能である。

本発明の上皮癌治療薬の投与形態は特に限定されず、その目的に応じて、経口的に、又は非経口的に投与することができる。経口剤として投与する時の形態は、特に限定されず、通常の及び腸溶性錠剤、カプセル、ピル、散剤、顆粒剤、エリキシル剤、チンキ剤、溶剤、懸濁剤、シロップ、固体もしくは液体エアロゾル、及び乳濁液等、当業者が通常用いる形態を選択することができる。また、非経口投与時の形態も特に限定されず、静脈内投与、腹腔内投与、皮下投与、筋肉内投与、注射、点滴等、当業者が通常用いる形態を選択することができる。

また、本発明の上皮癌治療薬の１回当たりの投与量及び投与間隔等は特に限定されず、その目的に応じて適宜選択することができる。それらは、患者の年齢、体重、性別、医学的状態、病状、投与経路、患者の代謝・排泄機能のレベル、使用される剤形、投与される特定のオキソ酸、オキソ酸イオン又はオキソ酸塩を含む種々の要素を考慮して、当業者によって選定することができる。本発明の上皮癌治療薬の１回当たりの投与濃度は、局所投与の場合、例えば、１００ｐｐｍ（０．１質量％）以上、２００ｐｐｍ以上、３００ｐｐｍ以上、５００ｐｐｍ以上、１０００ｐｐｍ以上、２５００ｐｐｍ以上、又は５０００ｐｐｍ以上であってもよく、例えば、５０００ｐｐｍ（３質量％）以下、２５００ｐｐｍ以下、１０００ｐｐｍ以下、５００ｐｐｍ以下、３００ｐｐｍ以下、又は２００ｐｐｍ以下であってもよい。本発明の上皮癌治療薬の１回当たりの投与間隔は、局所投与の場合、次回の投与までの間隔が、例えば、１日以上、２日以上、３日以上、４日以上、５日以上、６日以上又は７日以上であってもよく、例えば、７日以下、６日以下、５日以下、４日以下、３日以下、又は２日以下であってもよい。例えば、膀胱癌に対し、再発予防のために経尿道的切除術後直後及び週１回４～８回の投与（投与液量１０～４０ｍｌ、例えば３０ｍｌ）で本発明の上皮癌治療薬を投与してもよい。

本発明の上皮癌治療薬の有効成分であるオキソ酸、オキソ酸イオン又はオキソ酸塩は、一般的な上皮癌治療薬と比較して毒性が低い。また、本発明の上皮癌治療薬の有効成分であるオキソ酸、オキソ酸イオン又はオキソ酸塩については、その毒性がよく知られているため、患者に安全な投与量及び投与間隔等を選択することができる。このため、本発明によれば、例えば、一般的に使用されている抗癌剤やＢＣＧ製剤と比べて非常に副作用が小さい上皮癌治療薬を提供することができる。また、本発明の上皮癌治療薬によれば、例えば、強い再発抑制作用（再発予防効果）を得ることも可能である。すなわち、本発明の上皮癌治療薬によれば、例えば、上皮癌の再発率をきわめて低くすることができる。

また、本発明の上皮癌治療薬は、例えば、上皮癌細胞のアポトーシス促進剤として用いることもできる。例えば、上皮癌細胞のアポトーシスを促進することで、前記上皮癌細胞の増殖を、さらに効果的に抑制することができる。

また、本発明によれば、前記オキソ酸、オキソ酸イオン及びオキソ酸塩からなる群から選択される少なくとも一つを使用する本発明の上皮癌治療薬の製造方法を提供することができる。本発明の上皮癌治療薬の製造方法について、具体的には前述のとおりである。本発明の上皮癌治療薬の製造方法において、前述のとおり、前記ラジカル発生触媒を用いても用いなくてもよいし、前記ラジカル発生触媒以外の任意成分を用いても用いなくてもよい。また、本発明によれば、本発明の上皮癌治療薬を患者に投与する工程を含む、前記患者の上皮癌の治療方法を提供することができる。前記投与する工程において、投与方法、投与量、投与間隔等は特に限定されず、例えば、前述のとおりである。

本発明の上皮癌治療薬の投与対象、又は本発明による治療の対象となる患者は、例えば、ヒト又はヒトを除く非ヒト動物である。前記非ヒト動物は、例えば、マウス、ラッド、ウサギ、サル、イヌ、ウシ等があげられる。

以下、本発明の実施例について説明する。ただし、本発明は、以下の実施例には限定されない。

［実施例１：ＭＡ－Ｔを用いた膀胱癌治療薬］
以下のようにして、膀胱癌治療薬（本発明の上皮癌治療薬）を製造し、さらに、その効果を確認した。なお、以下において、ＮａＣｌＯ_２及び塩化ベンゼトニウムを含む水溶液（薬剤）を「ＭＡ－Ｔ」ということがある。ＭＡ－Ｔにおいて、ＮａＣｌＯ_２及び塩化ベンゼトニウムの濃度は、それぞれ、特に限定されないが、例えば、ＮａＣｌＯ_２及び塩化ベンゼトニウムを同質量用いることができる。以下において、例えば、１００ｐｐｍ ＮａＣｌＯ_２及び１００ｐｐｍ塩化ベンゼトニウムを含む水溶液（薬剤）を「１００ｐｐｍ ＭＡ－Ｔ」ということがある。ＭＡ－Ｔは、ＮａＣｌＯ_２を含むため、本発明の上皮癌治療薬として機能する。また、以下において、ＭＡ－Ｔを用いて製造した本発明の上皮癌治療薬を、「本発明のＭＡ－Ｔ上皮癌治療薬」という場合がある。

［（１）細胞培養］
膀胱癌細胞株ＵＭ－ＵＣ－３はＡＴＣＣ（American Type Culture Collection）より、ＢＯＹ－１２Ｅは東北大学より、ＵＭ－ＵＣ－２、５６３７、及びＥＪ－１は奈良県立医科大学より、それぞれ入手して使用した。

ＵＭ－ＵＣ－３、ＵＭ－ＵＣ－２、及びＥＪ－１細胞は、Ｄ－ＭＥＭ（Ｌｏｗ ｇｌｕｃｏｓｅ、富士フィルム和光純薬株式会社の商品名）、５６３７細胞はＲＰＭＩ－１６４０（富士フィルム和光純薬株式会社の商品名）、ＢＯＹ－１２Ｅ細胞はＥ－ＭＥＭ（富士フィルム和光純薬株式会社の商品名）にそれぞれＦｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ（ＦＢＳ，Ｂｉｏｓｅｒａ社）を１０体積％になるように加えた培地を用い、３７℃、５％ＣＯ_２環境下で培養した。継代する際は０．０２５％ Ｔｒｙｐｓｉｎ／ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）を細胞に添加し３７℃、５％ＣＯ_２にてインキュベートすることで細胞を剥離し、さらに、１５００ｒｐｍで３分間遠心して細胞を回収した。

［（２）試薬調製］
１００００ｐｐｍのＮａＣｌＯ_２（亜塩素酸ナトリウム）水溶液及び１００００ｐｐｍの塩化ベンゼトニウム水溶液を１０×リン酸緩衝生理食塩水（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ、ＰＢＳ）と蒸留水（ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ ｗａｔｅｒ、ＤＷ）とで下表のように最終１×ＰＢＳになるように希釈し、ＮａＣｌＯ_２及び塩化ベンゼトニウムの１×ＰＢＳ水溶液を調製した。これらの水溶液は、ＭＡ－Ｔを含む本発明の上皮癌治療薬、すなわち「本発明のＭＡ－Ｔ上皮癌治療薬」に該当する。なお、ＰＢＳにおいて、「１０×」は１０倍濃度を表し、「１×」は１倍濃度を表す。下記表１には、調製した水溶液の全量を４００μＬとした場合に必要な各溶液の量を示す。

図１のグラフに、ＵＭ－ＵＣ－３細胞及び５６３７細胞の細胞増殖に対するＮａＣｌＯ_２と塩化ベンゼトニウムの混合水溶液の効果を濃度及び反応時間依存的解析した図を示す。横軸は、時間（ｈｒ）であり、縦軸は、正規化された指数で表した細胞数である。ｘＣｅｌｌｉｇｅｎｃｅによる解析結果は、添加直後の値でノーマライズしてnormalie cell indexとして表した。図示のとおり、それぞれ、ＮａＣｌＯ_２と塩化ベンゼトニウムの混合水溶液濃度が２５ｐｐｍの低濃度でも膀胱癌細胞増殖の抑制が見られ、ＮａＣｌＯ_２と塩化ベンゼトニウムの混合水溶液濃度が高濃度になると、膀胱癌細胞増殖がさらに抑制され、１００ｐｐｍではいずれの細胞の増殖も完全に抑制されることが確認できた。

［（３）タイムラプス（Time laps）撮影］
３ｃｍディッシュにＵＭ－ＵＣ－３細胞を１×１０^４ｃｅｌｌｓ／１０００ｍｌ／ｄｉｓｈで播種し、翌日に培養培地を除去した後、１００ｐｐｍ ＭＡ－Ｔ水溶液を１０００μＬ／ｗｅｌｌ添加し、１２０分間インキュベートした。ＭＡ－Ｔ水溶液を除去後、通常培養培地を全てのウェルに添加し、ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ（株式会社東海ヒットの商品名）を併設したＢＺ－Ｘ７１０（株式会社キーエンスの商品名）を用いて２０倍レンズで同視野を１０分おきに４８時間撮影した。得られた画像を同システムに内蔵されているソフトを用いて動画処理した。なお、対照（Ｃｏｎｔｒｏｌ）として、ＭＡ－Ｔ水溶液に代えてＰＢＳを用いること以外は同様に処理したサンプルを用いて、同様に撮影及び動画処理をした。

図２及び３の写真に、前記タイムラプス撮影の結果を示す。図２は、撮影開始直後（０時間培養）の写真であり、図３は、撮影開始４８時間後（４８時間培養）の写真である。図２及び３において、それぞれ、「Control」は、ＰＢＳ添加群（対照）を表し、「ＭＡ－Ｔ」は、１００ｐｐｍ ＭＡ－Ｔ（すなわち、本発明のＭＡ－Ｔ上皮癌治療薬を加えた）サンプルを表す。図示のとおり、ＰＢＳ添加群（Control）では、４８時間後にＵＭ－ＵＣ－３細胞の増殖が確認されたのに対し、本発明のＭＡ－Ｔ上皮癌治療薬を加えたＵＭ－ＵＣ－３細胞では増殖が抑制されていた。すなわち、本発明のＭＡ－Ｔ上皮癌治療薬には、膀胱癌細胞の増殖を抑制する効果があることが確認された。

［（４）アポトーシス解析］
６ウェルプレートに各細胞を播種した。ＵＭ－ＵＣ－３細胞は５×１０^４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで、５６３７細胞は８×１０^４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで播種した。翌日に培養培地を除去し１００ｐｐｍ ＭＡ－Ｔ水溶液を添加した。その後、３７℃、５％ＣＯ_２環境下でインキュベート（ＵＭ－ＵＣ－３細胞に対しては１２時間、５６３７細胞に対しては６時間）した後、上清も含めて細胞を回収し、３０００ｒｐｍで５分間遠心して細胞ペレットを得た。この細胞ペレットを１×ＰＢＳで２回洗浄した後、Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ－ＦＩＴＣ Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｂｉｏ Ｖｉｓｉｏｎ社の商品名）の１×Ｂｉｎｄｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒを２９４μＬ、Ｐｒｏｐｉｄｉｕｍ ｉｏｄｉｄｅを３μＬ、Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖを３μＬ添加し懸濁させた。懸濁液を３７μｍのナイロンメッシュ（ＮＢＣメッシュテック社）に通し、ｒｏｕｎｄ ｂｏｔｔｏｍ ｔｕｂｅ（Ｆａｌｃｏｎ社）に移した。その後、FACS Calibur(Becton Dickinson社の商品名)により各染色細胞のポピュレーションを解析した。FACSのvoltage調節のためにPropidium iodideとAnnexin Vそれぞれの単染色サンプルを用意した。なお、対照（Control）として、ＰＢＳを用いること以外は同様に処理したサンプルを用いて、同様にアポトーシス解析をした。

図４に、５６３７細胞のアポトーシス解析を示す。同図において、「Control」は、ＰＢＳサンプル（対照）を表し、「ＭＡ－Ｔ」は、１００ｐｐｍ ＭＡ－Ｔ（すなわち、本発明のＭＡ－Ｔ上皮癌治療薬を加えた）サンプルを表す。図示のとおり、ＰＢＳサンプル（対照）では、５６３７細胞のアポトーシス率が８．５％であったのに対し、本発明の上皮癌治療薬を加えたＭＡ－Ｔでは、５６３７細胞のアポトーシス率が３０．２％であった。すなわち、本発明の上皮癌治療薬には、上皮癌細胞のアポトーシスを促進する効果があることが確認された。

［（５）ルシフェラーゼ発現膀胱癌細胞の同所性移植モデルを用いたＭＡ－Ｔの抗腫瘍作用］
独自開発技術であるルシフェラーゼ発現膀胱癌細胞のマウス同所性移植モデルを用いた評価を実施した。具体的には、ルシフェラーゼ発現ヒト膀胱癌細胞ＵＭ－ＵＣ－３を作製し、マウスへ移植後10日目にルシフェラーゼ基質を投与し、ルシフェラーゼ活性をin vivoイメージングした（投与前）。その後ＭＡ－Ｔを５０μｌ膀胱内に投与し、その2日後に再度イメージングした。その結果、後述するように、顕著なルシフェラーゼ活性の低下がＭＡ－Ｔ投与により認められた。

［（５－１）膀胱癌細胞同所性移植モデルの構築］
pGL4.51[luc2/CMV/Neo] vector (Promega) を PstI (NEB) でリニアライズ後、Wizard SV Gel and PCR Clean-Up Systemを用いてpGL4.51リニアライズ化ベクターを精製した。Lipofectamine 3000を用いたフォワード法によりＵＭ－ＵＣ－３細胞にpGL4.51リニアライズ化ベクターをトランスフェクションし、3000μg/mL Ｇ－４１８(Wako社の商品名)を用いてセレクションすることによりルシフェラーゼ発現ヒト膀胱癌細胞ＵＭ－ＵＣ－3 Ｆｌｕｃを作製した。この細胞を用いて下記の手順で膀胱癌細胞同所性移植モデルを構築した。

(1) 6-7週齢の雌BALB/c Slc-nu/nuにイソフルラン麻酔下で仰臥位に保定後、針を除去した２４Ｇ３/４サーフローF&F（テルモ株式会社の商品名）を用い、尿道口から膀胱内にカテーテルを通し、尿を排出した。
(2) １００μＬ0.2% Trypsin (Life technologies) /0.05% EDTA (DOJINDO) を膀胱内に注入した。カテーテルを挿入した状態でディスポクレンメ （夏目製作所、ＡＭ－１ ３０ｇ）で尿道口を止め、カテーテルをゆっくりと抜いた。
(3) Trypsin/EDTA注入５分後、仰向けからうつ伏せに体位を変え、腹部を摩ってTrypsin/EDTAを排出した。
(4) １００μＬ ＰＢＳ膀胱内に注入し、ＰＢＳの入排出を２～３回繰り返して膀胱内を洗浄した。
(5) カテーテルを介してＵＭ－ＵＣ－3 Ｆｌｕｃ細胞 (5.0×10⁶ cells/mouse) を５０μＬの無血清ＤＭＥＭ培地に懸濁し、膀胱内に注入した。その後、細胞が漏出しないよう尿道口をクレンメで止め、カテーテルを取り除いた。
(6) マウスを麻酔ボックス (シナノ製作所) に入れ、２時間留置した。
(7) 細胞注入後2時間後にクレンメを外し、マウスの状態を確認した後に元のケージに戻した。

ＵＭ－ＵＣ－３ Ｆｌｕｃ細胞膀胱内移植マウスのin vivo イメージングは、下記の手順で行った。

(1) ルシフェラーゼの基質として、VivoGlo In Vivo Imaging Substrates (Promega者の商品名)４ｍｇを２００μＬ ＰＢＳで溶解した。調整した溶液２００μＬを腹腔内投与した。投与後3分間ケージ内でマウスを放置後、３分間麻酔下に置いた。その後、イメージング装置NightOWL (BERTHOLD TECHNOLOGIES社の商品名)を用いて、露光時間６０秒間、Pixel Bining １×１で撮影を行った。
(2) 移植後１０日目と２４日目のルシフェラーゼの発光を測定し、その比率を発光比率として倍数であらわした。

さらに、前述のとおり、in vivoイメージング後にＭＡ－Ｔ投与を行った。具体的には、１００ｐｐｍ ＭＡ－Ｔを、ＵＭ－ＵＣ－３ Ｆｌｕｃ移植１０日後にルシフェラーゼ活性測定後に５０μｌ膀胱内に投与した。投与後３分間ケージ内でマウスを遊ばせ、更に３分間麻酔下に置いた。その２日後、再度、イメージング装置NightOWL (BERTHOLD TECHNOLOGIES社の商品名)を用いて、露光時間６０秒間、Pixel Bining １×１で撮影し、in vivoイメージングを行った。

図５の写真に、ＭＡ－Ｔ投与前と投与２日後とのin vivoイメージング結果を示す。図中、「ＭＡ－Ｔ１０７」は、ＭＡ－Ｔを投与したマウスを表し、「Ｃｏｎｔｒｏｌ」は、対照として、ＭＡ－Ｔに代えてＰＢＳを５０μｌ膀胱内に投与した以外は同様にしてin vivoイメージングをしたマウスを表す。図示のとおり、ＭＡ－Ｔを投与しなかったマウスでは、ほとんど発光の低下つまり腫瘍の縮小が見られなかったが、ＭＡ－Ｔを投与したマウスでは、腫瘍の縮小が顕著であった。

［（５－２）ＭＡ－Ｔ膀胱内投与マウスの体重変化と膀胱の病理組織解析］
前記「（５－１）膀胱同所性移植モデルの構築」と同様にして膀胱同所性移植モデルを構築したマウスに対し、１００ｐｐｍ ＭＡ－Ｔ又はコントロールとしてＰＢＳを、マウス膀胱内に５０μｌの用量で週２回２週間投与した。投与後、前記マウスの体重変化を１０日後まで測定した。図６のグラフに、その結果を示す。横軸は日数であり、縦軸は、測定開始時（０日）のマウス体重を１としたマウス体重（体重変化割合）である。「ＭＡ－Ｔ１０７」は、ＭＡ－Ｔを投与したマウスであり、「ＰＢＳ」は、コントロールとしてＰＢＳを投与したマウスである。図示のとおり、ＭＡ－Ｔ投与により顕著な体重減少は認められなかった。

さらに、投与終了後１０日目にマウス膀胱を摘出し、その病理組織解析を行った。図７の顕微鏡写真に、その結果を示す。図７上段は膀胱の全体像を示し、下段は拡大像を示す。図示のとおり、ＰＢＳ投与群とＭＡ－Ｔ投与群で病理組織学的な異常は認められなかった。

［（６）腫瘍組織病理解析］
前記「（５）ルシフェラーゼ発現膀胱癌細胞の同所性移植モデルを用いたＭＡ－Ｔの抗腫瘍作用」のＵＭ－ＵＣ－３ Ｆｌｕｃ移植マウスの２４日目の膀胱を摘出し、１０％中性緩衝ホルマリンで固定し、腫瘍組織のパラフィンブロックを作製してヘマトキシリン・エオシン（ＨＥ）染色を行った。

図８のグラフに、移植後１０日目と２４日目に測定した膀胱腫瘍のルシフェラーゼ発光値比率と、２４日目に解剖後測定した膀胱重量とを示す。同図において、「Control」は、ＰＢＳサンプル（対照）を表し、「ＭＡ－Ｔ」は、１００ｐpｍ ＭＡ－Ｔ（すなわち、本発明の上皮癌治療薬）サンプルの投与群を表す。また、図８右側の写真は、ＨＥ染色後に撮影した写真である。図８に示すとおり、本発明のＭＡ－Ｔでは、ＰＢＳサンプル（対照）と比較して、膀胱癌細胞の増殖が抑制され、膀胱腫瘍に組織学的にダメージが生じていることが確認された。

［（７）膀胱癌患者由来異種移植（patient-derived xenograft、ＰＤＸ)マウスを用いたＭＡ－Ｔの抗腫瘍効果評価］
膀胱癌臨床検体由来の腫瘍を継代移植したマウスモデルを使用した。２ヶ月前に腫瘍を継代移植（ｐａｓｓａｇｅ８）したＳＨＯ Ｈａｉｒｌｅｓｓ ＳＣＩＤマウス（オス、腫瘍移植時４週齢）３匹より腫瘍を摘出した。摘出した腫瘍を約５ｍｍ四方の大きさに切り分け、各腫瘍組織片を１００ｐｐｍ ＭＡ－Ｔ水溶液及び対照として１×ＰＢＳ溶液に１２０分浸した。その後ＳＨＯ Ｈａｉｒｌｅｓｓ ＳＣＩＤ マウス（オス、４週齢）の皮下に腫瘍を移植し（ＰＢＳ浸漬群：ｎ＝１０、ＭＡ－Ｔ浸漬群：ｎ＝１０）、移植日より３日おきに腫瘍径（長径と短径）を測定した。腫瘍体積は下記数式（Ａ）により算出した。移植後３２日目に腫瘍を摘出し、各腫瘍重量を測定した。統計処理はｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ ｔ－ｔｅｓｔにより行った。

腫瘍体積＝（長径×短径＾２）／２ （Ａ）

［（７－１）腫瘍組織病理解析］
前記「（７）膀胱癌患者由来異種移植（patient-derived xenograft、ＰＤＸ)マウスを用いたＭＡ－Ｔ水溶液の抗腫瘍効果評価」のＰＤＸマウスより摘出した腫瘍組織を１０％中性緩衝ホルマリンで固定し、腫瘍組織のパラフィンブロックを作製してＨＥ染色を行った。

図９左側のグラフに、腫瘍移植後日数と、腫瘍体積との関係を示す。横軸は、移植後日数（日）であり、縦軸は、腫瘍体積（ｍｍ³）である。また、図９右側のグラフは、移植後３２日目に解剖して摘出した腫瘍の重量（ｍｇ）を示す、図９において、「Control」は、ＰＢＳサンプル（対照）を表し、「ＭＡ－Ｔ」は、１００ｐｐｍ ＭＡ－Ｔ（すなわち、本発明のＭＡ－Ｔ上皮癌治療薬を加えた）サンプルを表す。図９に示すとおり、本発明のＭＡ－Ｔ上皮癌治療薬で処理した群では、ＰＢＳサンプル（対照）と比較して、膀胱癌腫瘍の増殖が抑制されていることが確認された。

さらに図１０に示すように、３２日目に摘出した腫瘍のＨＥ染色の結果、ＭＡ－Ｔ水溶液処理群では腫瘍の壊死像が組織学的に確認された。

［実施例２：亜塩素酸ナトリウム（ＮａＣｌＯ_２）を含む膀胱癌治療薬］
以下のようにして、ＮａＣｌＯ_２を含む膀胱癌治療薬（本発明の上皮癌治療薬）を製造し、さらに、その効果を確認した。なお、以下において、ＮａＣｌＯ_２を含む本発明の上皮癌治療薬を「本発明のＮａＣｌＯ_２上皮癌治療薬」又は単に「ＮａＣｌＯ_２上皮癌治療薬」ということがある。

［（１）細胞培養］
膀胱癌細胞株ＵＭ－ＵＣ－３、大腸癌細胞株ＨＴ-２９、ＨＣＴ１１６はＡＴＣＣ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ）より、ＢＯＹ－１２Ｅは東北大学より、ＵＭ－ＵＣ－２、５６３７、ＥＪ－１は奈良県立医科大学より、それぞれ入手して使用した。子宮癌細胞株ＨｅＬａ、子宮頸癌細胞株ＨｅＬａＳ３、舌癌細胞株ＨＳＣ－３及び口腔癌細胞株ＨＯ－１－ｕ－１はＪＣＲＢ（Ｊａｐａｎｅｓｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｂｉｏｒｅｓｏｕｒｃｅｓ）細胞バンクより入手した。

ＵＭ－ＵＣ－３細胞、ＵＭ－ＵＣ－２細胞、EＪ－１細胞、５６３７細胞、ＢＯＹ－１２Ｅ細胞は、前記実施例１の「（１）細胞培養」に記載の方法で培養して使用した。ＨｅＬａ細胞、ＨｅＬａＳ３細胞、ＨＳＣ－３細胞はＥ－ＭＥＭ（富士フィルム和光純薬株式会社）、ＨＯ－１－ｕ－１細胞はＤｕｌｂｅｃｃｏ‘ｓ ｍｏｄｉｆｗｉｅｄ Ｅａｇｌｅ’ｓ ｍｅｄｉｕｍ － Ｆ１２ ｍｅｄｉｕｍ （１：１ ｍｉｘ）（富士フィルム和光純薬株式会社）ＨＴ－２９細胞とＨＣＴ１１６細胞はＭｃＣｏｙ‘ｓ ５ａ Ｍｅｄｉｕｍ（富士フィルム和光純薬株式会社）にそれぞれＦｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ（ＦＢＳ，Ｂｉｏｓｅｒａ社）を１０体積％になるように加えた培地を用い、３７℃、５％ＣＯ_２環境下で培養した。継代する際は０．０２５％ Ｔｒｙｐｓｉｎ／ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）を細胞に添加し３７℃、５％ＣＯ_２にてインキュベートすることで細胞を剥離し、さらに、１５００ｒｐｍで３分間遠心して細胞を回収した。

［（２）試薬調製］
１００００ｐｐｍのＮａＣｌＯ_２（亜塩素酸ナトリウム）水溶液（Ｌｏｔ． Ｎｏ． １７０６１２Ｃ）を１０×リン酸緩衝生理食塩水（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ、ＰＢＳ）と蒸留水（ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ ｗａｔｅｒ、ＤＷ）とで下表のように最終１×ＰＢＳになるように希釈し、ＮａＣｌＯ_２の１×ＰＢＳ水溶液を調製した。これらの水溶液は、ＮａＣｌＯ_２を含む本発明の上皮癌治療薬、すなわち「本発明のＮａＣｌＯ_２上皮癌治療薬」に該当する。なお、ＰＢＳにおいて、「１０×」は１０倍濃度を表し、「１×」は１倍濃度を表す。下記表１には、調製したＮａＣｌＯ_２水溶液の全量を４００μＬとした場合に必要な各溶液の量を示す。

［（３）ＷＳＴ－８ ａｓｓａｙ］
以下のようにしてＷＳＴ－８ ａｓｓａｙを行った。

［ＮａＣｌＯ_２水溶液の反応時間及び濃度の検討］
９６ウェル（ｗｅｌｌ）プレートに各細胞を播種した。このとき、ＵＭ－ＵＣ－３、ＵＭ－ＵＣ－２、ＥＪ－１、及びＢＯＹ－１２Ｅの各細胞は１２００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで、５６３７細胞は１５００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで播種した。翌日に全てのウェルから培地を除き、５００ｐｐｍ（反応時間検討）及び各濃度のＮａＣｌＯ_２水溶液を１００μＬ／ｗｅｌｌで３つの（ｔｒｉｐｌｉｃａｔｅ）ウェルに添加した。このプレートを、３７℃、５％ ＣＯ_２環境下で３０，６０，９０，１２０分（反応時間検討、臨床試験における膀胱内注入による排尿の我慢可能な時間を考慮して最長時間を１２０分に設定）及び１２０分（濃度検討）インキュベートした後に、各ウェル内の溶液を除去した。その後、通常培養培地を全てのウェルに９０μＬずつ添加し、さらに４８時間培養した。その後、Ｃｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｋｉｔ－８（株式会社同仁化学研究所［ＤＯＪＩＮＤＯ］の商品名）を１ウェルあたり１０μＬずつ加え、３７℃、５％ ＣＯ_２環境下で２時間インキュベートし、吸収波長４５０ｎｍ、対照波長６３０ｎｍの吸光値をｉＭａｒｋマイクロプレートリーダー（ＢＩＯＲＡＤ社の商品名）を用いて測定した。

図１１のグラフは、ＵＭ－ＵＣ－３細胞に、５００ｐｐｍ ＮａＣｌＯ_２水溶液を各時間接触させた際の細胞増殖割合（左図）と各膀胱癌細胞の細胞増殖に対するＮａＣｌＯ_２水溶液の濃度依存性（右図）を示す。横軸は、左図では時間（ｍｉｎ）であり、右図は濃度（ｐｐｍ）である。縦軸は、正規化された指数で表した細胞増殖割合である。図示のとおり、５００ｐｐｍ ＮａＣｌＯ_２水溶液とＵＭ－ＵＣ－３細胞のインキュベートにより時間依存的に細胞増殖が抑制され、１２０分インキュベートにより６割以上の増殖抑制作用が見られた。また各種膀胱癌細胞に対するＮａＣｌＯ_２水溶液の１２０分インキュベートでは濃度依存性の増殖抑制が見られ、５００ｐｐｍ以上ではほぼ完全に膀胱癌の増殖が抑制されていることが確認できた。

図１２は、ＵＭ－ＵＣ－３細胞をＰＢＳあるいはＮａＣｌＯ_２と１２０分インキュベートして除去後ただちに（０時間）あるいは２４時間培養後（２４時間）の細胞の顕微鏡写真を示す。コントロール群（左上図）と比べＮａＣｌＯ_２群（右上図）ではＮａＣｌＯ_２と１２０分インキュベート後（ＮａＣｌＯ_２除去後０時間）で既に細胞の形態変化が見られた。さらに、ＮａＣｌＯ_２と１２０分インキュベートし、その除去後２４時間目においては細胞の退縮が確認でき(下中央図)、その一部の拡大により（下右図）アポトーシス小胞とみられる小胞の形成が確認された。「Ｃｏｎｔｒｏｌ」は、ＮａＣｌＯ_２を加えないＰＢＳ添加群サンプル（対照）を表し、ＮａＣｌＯ_２は、５００ｐｐｍ ＮａＣｌＯ_２を加えた（すなわち、本発明のＮａＣｌＯ_２上皮癌治療薬を加えた）サンプルを表す。

［（４）アポトーシス解析］
６ウェルプレートにＵＭ－ＵＣ－３細胞を５×１０^４ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで播種した。翌日に培養培地を除去し５００ｐｐｍ ＮａＣｌＯ_２水溶液を添加した。その後、３７℃、５％ＣＯ_２環境下で１２０分インキュベートした。ＮａＣｌＯ_２水溶液を除去後、通常培養液を添加し２４時間培養した後、上清も含めて細胞を回収し、３０００ｒｐｍで５分間遠心して細胞ペレットを得た。この細胞ペレットを１×ＰＢＳで２回洗浄した後、Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ－ＦＩＴＣ Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｂｉｏ Ｖｉｓｉｏｎ社の商品名）の１×Ｂｉｎｄｉｎｇ ｂｕｆｆｅｒを２９４μＬ、Ｐｒｏｐｉｄｉｕｍ ｉｏｄｉｄｅを３μＬ、Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖを３μＬ添加し懸濁させた。懸濁液を３７μｍのナイロンメッシュ（ＮＢＣメッシュテック社）に通し、ｒｏｕｎｄ ｂｏｔｔｏｍ ｔｕｂｅ（Ｆａｌｃｏｎ社）に移した。その後、FACS Calibur(Becton Dickinson社の商品名)により各染色細胞のポピュレーションを解析した。ＦＡＣＳのｖｏｌｔａｇｅ調節のためにＰｒｏｐｉｄｉｕｍ ｉｏｄｉｄｅとＡｎｎｅｘｉｎ Ｖそれぞれの単染色サンプルを用意した。なお、対照（Ｃｏｎｔｒｏｌ）として、ＮａＣｌＯ_２水溶液に代えてＮａＣｌＯ_２を含まないPBSを用いること以外は同様に処理したサンプルを用いて、同様にアポトーシス解析をした。

図１３に、ＵＭ－ＵＣ－３細胞のアポトーシス解析を示す。同図において、「Ｃｏｎｔｒｏｌ」は、ＮａＣｌＯ_２を加えなかったＰＢＳサンプル（対照）を表し、「ＮａＣｌＯ_２」は、５００ｐｐｍ ＮａＣｌＯ_２を加えた（すなわち、本発明のＮａＣｌＯ_２上皮癌治療薬を加えた）サンプルを表す。図示のとおり、ＮａＣｌＯ_２を加えなかったＰＢＳサンプル（対照）では、ＵＭ－ＵＣ－３細胞のアポトーシス率が１４．６％であったのに対し、本発明の上皮癌治療薬を加えた５００ｐｐｍ ＮａＣｌＯ_２では、ＵＭ－ＵＣ－３細胞のアポトーシス率が４３．８％であった。すなわち、本発明のＮａＣｌＯ_２上皮癌治療薬には、膀胱癌細胞にアポトーシスを顕著に誘導する効果があることが確認された。

［（５）細胞周期解析］
ＵＭ－ＵＣ－３細胞に対し、細胞ペレットを得るまでの操作を、前記「（４）アポトーシス解析」と同様に行った。得られた細胞ペレットに７０％エタノール水溶液７００μＬを１滴ずつ加え、－２０℃で終夜保存した。それを、４℃において３０００ｒｐｍで５分間遠心後、上清を除き１×ＰＢＳで２回洗浄した。さらに、１０ｍｇ／ｍＬのＲＮａｓｅ（富士フィルム和光純薬株式会社の商品名）１０μＬ、１×ＰＢＳ ５０μＬを添加し、室温で３０分間インキュベートした。その後、０．５ｍｇ／ｍＬ ＰＩ（Propidium iodide［ヨウ化プロピジウム］、ＳＩＧＭＡ Ａｌｄｒｉｃｈ社）溶液５０μＬを添加したＦＡＣＳ ｂｕｆｆｅｒ（３％ＦＣＳ ｉｎ １×ＰＢＳ）５００μＬに懸濁させた。その懸濁液を３７μｍナイロンメッシュに通した後、ＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｕｒ(Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社の商品名)により測定した。なお、対照（Ｃｏｎｔｒｏｌ）として、ＮａＣｌＯ_２水溶液に代えてＮａＣｌＯ_２を含まないＰＢＳを用いること以外は同様に処理したサンプルを用いて、同様に細胞周期解析をした。

図１４に、ＮａＣｌＯ_２水溶液除去後２４時間（終夜）培養後のＵＭ－ＵＣ－３細胞の細胞周期解析結果を示す。同図において、「Ｃｏｎｔｒｏｌ」は、ＮａＣｌＯ_２を加えなかったＰＢＳサンプル（対照）を表し、「ＮａＣｌＯ_２」は、５００ｐｐｍ ＮａＣｌＯ_２を加えた（すなわち、本発明のＮａＣｌＯ_２上皮癌治療薬を加えた）サンプルを表す。図示のとおり、本発明のＮａＣｌＯ_２上皮癌治療薬を加えた群では、ＰＢＳ群（対照）と比較して、アポトーシス細胞分画を示すｓｕｂＧ１期の分画比率が顕著に増加していた。すなわち、本発明のＮａＣｌＯ_２上皮癌治療薬には、膀胱癌細胞にアポトーシスによる細胞死を誘導することが確認された。

［（６）膀胱癌患者由来異種移植（ｐａｔｉｅｎｔ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｘｅｎｏｇｒａｆｔ、ＰＤＸ)マウスを用いたＮａＣｌＯ_２上皮癌治療薬の抗腫瘍効果評価］
膀胱癌臨床検体由来の腫瘍を継代移植したマウス腫瘍モデルは、１００ｐｐｍ ＭＡ－Ｔ水溶液に代えて５００ｐｐｍ ＮａＣｌＯ_２水溶液を使用した以外は、前記実施例１の［（７）膀胱癌患者由来異種移植（patient-derived xenograft、ＰＤＸ)マウスを用いたＭＡ－Ｔの抗腫瘍効果評価］と同様に実施した。使用したＳＨＯ Ｈａｉｒｌｅｓｓ ＳＣＩＤ マウス（オス、４週齢）はＰＢＳ浸漬群、ＮａＣｌＯ_２浸漬群ともｎ＝８であり、移植日より１２日目から３日おきに腫瘍径（長径と短径）を測定した。また２７日目に摘出した腫瘍の写真を撮ったのち、その重量を測定した。

図１５左下側のグラフにおいて、横軸は腫瘍移植１２日後からの日数、縦軸は腫瘍体積（ｍｍ^３）を示す。また、図１５上の写真は移植後２７日目に解剖して摘出した腫瘍の写真を、下右側のグラフは、その摘出腫瘍の重量（ｍｇ）を示す。図１５において、「Ｃｏｎｔｒｏｌ」は、ＰＢＳサンプル（対照）を表し、「ＮａＣｌＯ_２」は、５００ｐｐｍ ＮａＣｌＯ_２（すなわち、本発明のＮａＣｌＯ_２上皮癌治療薬）に浸漬した腫瘍移植結果を表す。図１５に示すとおり、本発明のＮａＣｌＯ_２上皮癌治療薬に浸漬した群では、ＰＢＳ群（対照）と比較して、膀胱癌腫瘍の有意な増殖抑制が確認された。さらに摘出腫瘍の写真と腫瘍重量の解析から、膀胱腫瘍の増加が抑制されていることも確認された。

［（７）ラジカル発生の検証］
ＮａＣｌＯ_２水溶液、塩化ベンゼトニウム水溶液（ラジカル発生触媒）ならびにＭＡ－Ｔのラジカル産生を検証した。ＵＭ－ＵＣ－３細胞を９６well plateに５０００ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌで播種した。翌日、培地を除去し、Ｈａｎｋ‘ｓ Ｂａｌａｎｃｅｄ Ｓａｌｔ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＨＢＳＳ）で希釈した生細胞における活性酸素種の検出及び定量試薬であるＣｅｌｌＲＯＸ（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ社の商品名）を２０μＭの濃度で５０μＬ／ｗｅｌｌ加え、37℃で1時間培養した。その後ＨＢＳＳで希釈したＮａＣｌＯ_２水溶液（Ａ）、塩化ベンゼトニウム水溶液（Ｂ）ならびにＭＡ－Ｔを５０μＬ／ｗｅｌｌ添加し、蛍光強度を蛍光プレートリーダーＧｌｏＭＡＸ（Ｐｒｏｍｅｇａ社の商品名）で経時的に測定した。また終濃度５００ｐｐｍのＮａＣｌＯ_２水溶液添加ＵＭ－ＵＣ－３細胞の活性酸素による蛍光を、ＢｉｏＺｅｒｏ蛍光顕微鏡（キーエンスの商品名）を用いてＥｘｃｉｔａｔｉｏｎ Ｆｉｌｔｅｒ（Ｒｅｄ ６２７ ｎｍ）Ｅｍｉｓｓｉｏｎ Ｆｉｌｔｅｒ（６６０－７２０ ｎｍ）により検出した。

図１６の左図では縦軸に蛍光強度を横軸に添加したサンプルを示す。単独ではラジカル産生能がないＮａＣｌＯ_２（Ａ）と塩化ベンゼトニウム（Ｂ）のうち、ＮａＣｌＯ_２（Ａ）は細胞と接触するにより時間依存的な活性酸種の産生が確認された。また１００ｐｐｍ ＮａＣｌＯ_２（Ａ１００）はＭＡ－Ｔ（１００ｐｐｍ ＮａＣｌＯ_２と１００ｐｐｍ塩化ベンゼトニウムの合剤）と同等以上の活性酸素種の検出が見られ、膀胱癌細胞に対する作用を確認した５００ｐｐｍＮａＣｌＯ_２は単独で顕著な活性酸素産生が確認できた。これはＭＡ－Ｔとは異なる活性酸素種がＮａＣｌＯ_２と膀胱癌細胞の接触により産生していることを示すものと考えられる。また、図１６右側の写真に、前記細胞のＢｉｏＺｅｒｏ蛍光顕微鏡による画像を示す。上段は、ＮａＣｌＯ_２及び塩化ベンゼトニウムを加えなかった対照（Ｃｏｎｔｒｏｌ）の画像であり、下段は、終濃度５００ｐｐｍのＮａＣｌＯ_２水溶液添加の画像である。図示のとおり、５００ｐｐｍＮａＣｌＯ_２は単独で膀胱癌細胞に顕著な活性酸素産生を示す蛍光が確認できた。

［（８）舌癌細胞、口腔癌細胞、子宮癌細胞、子宮頸癌細胞及び大腸癌細胞に対するＮａＣｌＯ_２の作用］

以下のようにして、本発明のＮａＣｌＯ_２上皮癌治療薬の、膀胱癌細胞以外の上皮癌細胞に対する治療薬としての効果を確認した。

インキュベート時間を対象癌患者に対する許容時間も考慮し１２０分間に代えて６０分間（１時間）にしたことと、膀胱癌細胞を、舌癌細胞「ＨＳＣ－３」、口腔癌細胞「ＨＯ－１－ｕ－１」、子宮癌細胞「ＨｅＬａ」、子宮癌細胞「ＨｅＬａＳ３」、大腸癌細胞「ＨＴ２９」、又は大腸癌細胞「ＨＴ１１６」に変更したこと以外は、前記「（３）ＷＳＴ－８ ａｓｓａｙ」と同様にして各癌細胞を４８時間培養し、癌細胞増殖アッセイを行った。図１７、図１８及び図１９のグラフに、４８時間培養後の各癌細胞の生存率を示す。図１７、図１８及び図１９のグラフにおいて、横軸は、ＮａＣｌＯ_２水溶液の濃度（ｐｐｍ）であり、縦軸は、癌細胞の生存率（％）である。

図１７、図１８及び図１９に示すとおり、舌癌細胞、口腔癌細胞、子宮癌細胞、子宮頸癌細胞及び大腸癌細胞に対しても、本発明のＮａＣｌＯ_２上皮癌細胞治療薬が、癌細胞増殖の抑制効果を示すことが確認された。

［（９）ラジカル発生触媒の効果の確認］
ＮａＣｌＯ_２水溶液中に塩化ベンゼトニウム（ラジカル発生触媒）を加えたこと以外は前記「（８）舌癌、口腔癌、子宮癌細胞、子宮頸癌細胞及び大腸癌細胞に対するＮａＣｌＯ_２の作用」と同様にして、子宮癌細胞「ＨｅＬａ」及び子宮癌細胞「ＨｅＬａＳ３」の各癌細胞を４８時間培養し、癌細胞増殖アッセイを行った。ＮａＣｌＯ_２水溶液中の塩化ベンゼトニウム濃度は、５ｐｐｍ、１０ｐｐｍ、１５ｐｐｍ及び２０ｐｐｍに変化させて、それぞれ同様のアッセイを行った。

図２０及び図２１のグラフにその結果を示す。図２０及び図２１において、「Ａ剤」は、ＮａＣｌＯ_２を表し、「Ｂ剤」は、塩化ベンゼトニウム（ラジカル発生触媒）を表す。図２０及び図２１のグラフにおいて、横軸は、ＮａＣｌＯ_２水溶液の濃度（ｐｐｍ）であり、縦軸は、癌細胞の生存率（％）である。また、図２０及び図２１中において、「Ｃｏｎｔｒｏｌ」は、塩化ベンゼトニウムを加えなかった場合、すなわち、前記「（９）舌癌、口腔癌、子宮癌細胞、子宮頸癌細胞及び大腸癌細胞に対するＮａＣｌＯ_２の作用」の結果を示す。図２０及び１８に示すとおり、ＮａＣｌＯ_２のみでも癌細胞増殖の抑制効果が見られたが、塩化ベンゼトニウム（ラジカル発生触媒）の添加により、癌細胞増殖の抑制効果の相加作用が確認できた。

［実施例３：亜塩素酸ナトリウム（ＮａＣｌＯ_２）を含む膵癌治療薬］
以下のようにして、ＮａＣｌＯ_２を含む膵癌治療薬（本発明の上皮癌治療薬）を製造し、さらに、その効果を確認した。なお、本実施例の膵癌治療薬は、ＮａＣｌＯ_２を含む本発明の上皮癌治療薬、すなわち「本発明のＮａＣｌＯ_２上皮癌治療薬」又は単に「ＮａＣｌＯ_２上皮癌治療薬」に該当する。

以下のようにして、膵癌初代培養細胞に対するＮａＣｌＯ_２水溶液（本発明のＮａＣｌＯ_２上皮癌治療薬）の作用を解析した。

［（１）細胞培養］
膵癌臨床検体から大阪大学薬学研究科で樹立した初代培養細胞ＰＫ０５及びＰＫ１０を使用した。これらの細胞を、ＲＰＭＩ－１６４０（富士フィルム和光純薬株式会社の商品名）にＦＢＳ（Ｂｉｏｓｅｒａ社）を１０体積％になるように加えた培地を用い、３７℃、５％ＣＯ_２環境下で培養した。継代する際は０．０２５％ Ｔｒｙｐｓｉｎ／ＥＤＴＡ（エチレンジアミン四酢酸）を細胞に添加し３７℃、５％ＣＯ_２にてインキュベートすることで細胞を剥離し、さらに、１５００ｒｐｍで３分間遠心して細胞を回収した。

［（２）試薬調製］
実施例２「亜塩素酸ナトリウム（ＮａＣｌＯ_２）を含む膀胱癌治療薬」の「（２）試薬調製」と同様に、１００００ｐｐｍのＮａＣｌＯ_２（亜塩素酸ナトリウム）水溶液（Ｌｏｔ． Ｎｏ． １７０６１２Ｃ）、１０×リン酸緩衝生理食塩水（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｂｕｆｆｅｒｅｄ ｓａｌｉｎｅ、ＰＢＳ）及び蒸留水（ｄｉｓｔｉｌｌｅｄ ｗａｔｅｒ、ＤＷ）を混合し、最終的に１×ＰＢＳになるとともにＮａＣｌＯ_２が所定濃度になるようにした。このようにして、ＮａＣｌＯ_２を０ｐｐｍ、２ｐｐｍ、４ｐｐｍ、８ｐｐｍ、１６ｐｐｍ、３１ｐｐｍ、６３ｐｐｍ、１２５ｐｐｍ、２５０ｐｐｍ、又は５００ｐｐｍの濃度で含む１×ＰＢＳ水溶液を、それぞれ調製した。これらの水溶液は、ＮａＣｌＯ_２の濃度以外は、実施例２「亜塩素酸ナトリウム（ＮａＣｌＯ_２）を含む膀胱癌治療薬」の「（２）試薬調製」で調製した水溶液と同じである。これらの水溶液は、ＮａＣｌＯ_２を含む本発明の上皮癌治療薬、すなわち「本発明のＮａＣｌＯ_２上皮癌治療薬」に該当する。なお、ＰＢＳにおいて、「１０×」は１０倍濃度を表し、「１×」は１倍濃度を表す。

［（３）細胞生存性評価］
９６ウェル（ｗｅｌｌ）プレートに、「（１）細胞培養」で培養したＰＫ０５又はＰＫ１０の各細胞を５０００ｃｅｌｌｓ／ｗｅｌｌで播種した。翌日に全てのウェルから培地を除き、「（２）試薬調製」で調製した各濃度のＮａＣｌＯ_２水溶液を１００μＬ／ｗｅｌｌで３つの（ｔｒｉｐｌｉｃａｔｅ）ウェルに添加した。このプレートを、３７℃、５％ ＣＯ_２環境下で４８時間培養した。その後、Ｃｅｌｌ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｋｉｔ－８（株式会社同仁化学研究所［ＤＯＪＩＮＤＯ］の商品名）を１ウェルあたり１０μＬずつ加え、３７℃、５％ ＣＯ_２環境下で２時間インキュベートし、吸収波長４５０ｎｍ、対照波長６３０ｎｍの吸光値をｉＭａｒｋマイクロプレートリーダー（ＢＩＯＲＡＤ社の商品名）を用いて測定した。図２２のグラフにその結果を示す。図２２において、「Ａ剤」は、ＮａＣｌＯ_２を表す。図２２のグラフにおいて、横軸は、ＮａＣｌＯ_２水溶液の濃度（ｐｐｍ）であり、縦軸は、癌細胞の生存率（％）である。なお、縦軸において、癌細胞の生存率（％）は、ＮａＣｌＯ_２濃度が０ｐｐｍの（すなわち亜塩素酸ナトリウムを含まない）１×ＰＢＳ水溶液（Ｃｏｎｔｒｏｌ）を添加したウェルの細胞生存率を１００％として表した。図２２に示すとおり、ＰＫ０５及びＰＫ１０のいずれの膵癌細胞に対しても、ＮａＣｌＯ_２濃度依存的な増殖抑制作用が確認できた。すなわち、「（２）試薬調製」で調製した各濃度のＮａＣｌＯ_２水溶液が、膵癌治療薬（すなわち上皮癌治療薬）として働くことが確認できた。また、３１ｐｐｍ以上のＮａＣｌＯ_２水溶液とのインキュベートでは、ほぼ完全に膵臓癌細胞の増殖が抑制されることが確認できた。

＜付記＞
本発明の実施形態及び実施例の一部又は全部は、以下の付記のように記載することができる。ただし、本発明は以下の付記には限定されない。

（付記１）
オキソ酸、オキソ酸イオン及びオキソ酸塩からなる群から選択される少なくとも一つを含み、上皮癌の治療又は予防のために使用されることを特徴とする上皮癌治療薬。
（付記２）
前記上皮癌が、泌尿器系、生殖器系、消化器系、循環器系、及び呼吸器系からなる群から選択される少なくとも一つの組織の癌である付記１記載の上皮癌治療薬。
（付記３）
前記上皮癌が、膀胱癌、子宮癌、子宮頸癌、卵巣癌、卵管癌、精巣癌、前立腺癌、大腸癌、小腸癌、十二指腸癌、胃癌、食道癌、喉頭癌、口腔癌、舌癌、咽頭癌、肝臓癌、膵臓癌、胆嚢癌、脾臓癌、腹膜癌、肺癌、及び眼癌からなる群から選択される少なくとも一つの組織の癌である付記１又は２記載の上皮癌治療薬。
（付記４）
前記オキソ酸が、ハロゲンオキソ酸である付記１から３のいずれかに記載の上皮癌治療薬。
（付記５）
前記ハロゲンオキソ酸が、塩素オキソ酸、臭素オキソ酸、及びヨウ素オキソ酸からなる群から選択される少なくとも一つである付記４記載の上皮癌治療薬。
（付記６）
前記ハロゲンオキソ酸が、次亜ハロゲン酸、亜ハロゲン酸、ハロゲン酸、及び過ハロゲン酸からなる群から選択される少なくとも一つである付記４又は５記載の上皮癌治療薬。
（付記７）
前記ハロゲンオキソ酸が、次亜塩素酸、亜塩素酸、塩素酸、過塩素酸、次亜臭素酸、亜臭素酸、臭素酸、過臭素酸、次亜ヨウ素酸、亜ヨウ素酸、ヨウ素酸、及び過ヨウ素酸からなる群から選択される少なくとも一つである付記４又は５記載の上皮癌治療薬。
（付記８）
さらに、ラジカル発生触媒を含み、
前記ラジカル発生触媒は、前記上皮癌治療薬に含まれる前記オキソ酸、オキソ酸イオン及びオキソ酸塩からなる群から選択される少なくとも一つの物質からのラジカル発生を触媒する物質である付記１から７のいずれかに記載の上皮癌治療薬。
（付記９）
前記ラジカル発生触媒が、アンモニウム、アミノ酸、タンパク質、ペプチド、リン脂質、及びそれらの塩からなる群から選択される少なくとも一つを含む付記８記載の上皮癌治療薬。
（付記１０）
前記アンモニウムが、下記化学式（XI）で表されるアンモニウム塩である付記９記載の上皮癌治療薬。

前記化学式（XI）中、
Ｒ^１１、Ｒ^２１、Ｒ^３１、及びＲ^４１、は、それぞれ水素原子もしくは芳香環であるか、又はアルキル基であり、前記アルキル基は、エーテル結合、カルボニル基、エステル結合、若しくはアミド結合、又は芳香環が含まれていてもよく、Ｒ^１１、Ｒ^２１、Ｒ^３１、及びＲ^４１は、それぞれ同じでも異なっていてもよく、
又は、Ｒ^１１、Ｒ^２１、Ｒ^３１、及びＲ^４１のうち２つ以上が一体化し、それらが結合するＮ^＋とともに環状構造を形成していてもよく、前記環状構造は、飽和でも不飽和でもよく、芳香環でも非芳香環でもよく、１以上の置換基を有していても有していなくてもよく、
Ｘ^－は、アニオンである。
（付記１１）
前記化学式（XI）で表されるアンモニウム塩が、下記化学式（XII）で表されるアンモニウム塩である付記１０記載の上皮癌治療薬。

前記化学式（XII）中、
Ｒ^１１１は、炭素数が５～４０のアルキル基であり、エーテル結合、ケトン（カルボニル基）、エステル結合、若しくはアミド結合、置換基、又は芳香環が含まれていてもよく、
Ｒ^２１及びＸ^－は、前記化学式（XI）と同じである。
（付記１２）
前記アンモニウムが、塩化ベンゼトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム、塩化テトラメチルアンモニウム、塩化アンモニウム、塩化メチルアンモニウム、塩化テトラブチルアンモニウム、塩化セチルピリジニウム、臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム、塩化デカリニウム、エドロホニウム、塩化ジデシルジメチルアンモニウム、塩化ベンジルトリエチルアンモニウム、オキシトロピウム、カルバコール、グリコピロニウム、サフラニン、シナピン、臭化テトラエチルアンモニウム、臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム、スキサメトニウム、スフィンゴミエリン、ガングリオシドＧＭ１、デナトニウム、トリゴネリン、ネオスチグミン、パラコート、ピリドスチグミン、フェロデンドリン、プラリドキシムヨウ化メチル、ベタイン、ベタニン、ベタネコール、ベタレイン、レシチン、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシル、及びコリン類からなる群から選択される少なくとも一つである付記９から１１のいずれかに記載の上皮癌治療薬。
（付記１３）
前記化学式（XI）で表されるアンモニウム塩が、下記化学式（XIV）で表されるアンモニウム塩である付記１０記載の上皮癌治療薬。

前記化学式（XIV）中、
Ｒ^１００は、環状構造を形成していてもよく、前記環状構造は、飽和でも不飽和でもよく、芳香環でも非芳香環でもよく、１以上の置換基を有していても有していなくてもよく、
Ｒ^１１及びＸ^－は、前記化学式（XI）と同じである。
（付記１４）
前記ラジカル発生触媒のルイス酸性度が、０．４ｅＶ以上である付記８から１３のいずれかに記載の上皮癌治療薬。
（付記１５）
上皮癌細胞のアポトーシス促進剤である付記１から１４のいずれかに記載の上皮癌治療薬。
（付記１６）
オキソ酸、オキソ酸イオン及びオキソ酸塩からなる群から選択される少なくとも一つを含み、上皮癌の治療又は予防のために使用されることを特徴とする薬学的組成物。
（付記１７）
前記上皮癌が、泌尿器系、生殖器系、消化器系、循環器系、及び呼吸器系からなる群から選択される少なくとも一つの組織の癌である付記１６記載の薬学的組成物。
（付記１８）
前記上皮癌が、膀胱癌、子宮癌、子宮頸癌、卵巣癌、卵管癌、精巣癌、前立腺癌、大腸癌、小腸癌、十二指腸癌、胃癌、食道癌、喉頭癌、口腔癌、舌癌、咽頭癌、肝臓癌、膵臓癌、胆嚢癌、脾臓癌、腹膜癌、肺癌、及び眼癌からなる群から選択される少なくとも一つの組織の癌である付記１６又は１７記載の薬学的組成物。
（付記１９）
前記オキソ酸が、ハロゲンオキソ酸である付記１６から１８のいずれかに記載の薬学的組成物。
（付記２０）
前記ハロゲンオキソ酸が、塩素オキソ酸、臭素オキソ酸、及びヨウ素オキソ酸からなる群から選択される少なくとも一つである付記１９記載の薬学的組成物。
（付記２１）
前記ハロゲンオキソ酸が、次亜ハロゲン酸、亜ハロゲン酸、ハロゲン酸、及び過ハロゲン酸からなる群から選択される少なくとも一つである付記１９又は２０記載の薬学的組成物。
（付記２２）
前記ハロゲンオキソ酸が、次亜塩素酸、亜塩素酸、塩素酸、過塩素酸、次亜臭素酸、亜臭素酸、臭素酸、過臭素酸、次亜ヨウ素酸、亜ヨウ素酸、ヨウ素酸、及び過ヨウ素酸からなる群から選択される少なくとも一つである付記１９又は２０記載の薬学的組成物。
（付記２３）
さらに、ラジカル発生触媒を含み、
前記ラジカル発生触媒は、前記薬学的組成物に含まれる前記オキソ酸、オキソ酸イオン及びオキソ酸塩からなる群から選択される少なくとも一つの物質からのラジカル発生を触媒する物質である付記２６から２２のいずれかに記載の薬学的組成物。
（付記２４）
前記ラジカル発生触媒が、アンモニウム、アミノ酸、タンパク質、ペプチド、リン脂質、及びそれらの塩からなる群から選択される少なくとも一つを含む付記２３記載の薬学的組成物。
（付記２５）
前記アンモニウムが、下記化学式（XI）で表されるアンモニウム塩である付記２４記載の薬学的組成物。

前記化学式（XI）中、
Ｒ^１１、Ｒ^２１、Ｒ^３１、及びＲ^４１、は、それぞれ水素原子もしくは芳香環であるか、又はアルキル基であり、前記アルキル基は、エーテル結合、カルボニル基、エステル結合、若しくはアミド結合、又は芳香環が含まれていてもよく、Ｒ^１１、Ｒ^２１、Ｒ^３１、及びＲ^４１は、それぞれ同じでも異なっていてもよく、
又は、Ｒ^１１、Ｒ^２１、Ｒ^３１、及びＲ^４１のうち２つ以上が一体化し、それらが結合するＮ^＋とともに環状構造を形成していてもよく、前記環状構造は、飽和でも不飽和でもよく、芳香環でも非芳香環でもよく、１以上の置換基を有していても有していなくてもよく、
Ｘ^－は、アニオンである。
（付記２６）
前記化学式（XI）で表されるアンモニウム塩が、下記化学式（XII）で表されるアンモニウム塩である付記２５記載の薬学的組成物。

前記化学式（XII）中、
Ｒ^１１１は、炭素数が５～４０のアルキル基であり、エーテル結合、ケトン（カルボニル基）、エステル結合、若しくはアミド結合、置換基、又は芳香環が含まれていてもよく、
Ｒ^２１及びＸ^－は、前記化学式（XI）と同じである。
（付記２７）
前記アンモニウムが、塩化ベンゼトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム、塩化テトラメチルアンモニウム、塩化アンモニウム、塩化メチルアンモニウム、塩化テトラブチルアンモニウム、塩化セチルピリジニウム、臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム、塩化デカリニウム、エドロホニウム、塩化ジデシルジメチルアンモニウム、塩化ベンジルトリエチルアンモニウム、オキシトロピウム、カルバコール、グリコピロニウム、サフラニン、シナピン、臭化テトラエチルアンモニウム、臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム、スキサメトニウム、スフィンゴミエリン、ガングリオシドＧＭ１、デナトニウム、トリゴネリン、ネオスチグミン、パラコート、ピリドスチグミン、フェロデンドリン、プラリドキシムヨウ化メチル、ベタイン、ベタニン、ベタネコール、ベタレイン、レシチン、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシル、及びコリン類からなる群から選択される少なくとも一つである付記２４から２６のいずれかに記載の薬学的組成物。
（付記２８）
前記化学式（XI）で表されるアンモニウム塩が、下記化学式（XIV）で表されるアンモニウム塩である付記２５記載の薬学的組成物。

前記化学式（XIV）中、
Ｒ^１００は、環状構造を形成していてもよく、前記環状構造は、飽和でも不飽和でもよく、芳香環でも非芳香環でもよく、１以上の置換基を有していても有していなくてもよく、
Ｒ^１１及びＸ^－は、前記化学式（XI）と同じである。
（付記２９）
前記ラジカル発生触媒のルイス酸性度が、０．４ｅＶ以上である付記２３から２８のいずれかに記載の薬学的組成物。
（付記３０）
上皮癌細胞のアポトーシス促進剤である付記１６から２９のいずれかに記載の薬学的組成物。
（付記３１）
付記１から１５のいずれかに記載の上皮癌治療薬を製造するための、オキソ酸、オキソ酸イオン及びオキソ酸塩からなる群から選択される少なくとも一つの使用。
（付記３２）
付記１６から３０のいずれかに記載の薬学的組成物を製造するための、オキソ酸、オキソ酸イオン及びオキソ酸塩からなる群から選択される少なくとも一つの使用。
（付記３３）
オキソ酸、オキソ酸イオン及びオキソ酸塩からなる群から選択される少なくとも一つの物質の、付記１から１５のいずれかに記載の上皮癌治療薬又は付記１６から３０のいずれかに記載の薬学的組成物としての使用。
（付記３４）
付記１から１５のいずれかに記載の上皮癌治療薬又は付記１６から３０のいずれかに記載の薬学的組成物を患者に投与する投与工程を含む、前記患者の上皮癌を治療又は予防する方法。
（付記３５）
患者の上皮癌を治療又は予防するためにオキソ酸、オキソ酸イオン及びオキソ酸塩からなる群から選択される少なくとも一つの物質を患者に投与する投与工程を含む、前記患者の上皮癌を治療又は予防する方法。
（付記３６）
患者の上皮癌を治療又は予防するために付記１から１５のいずれかに記載の上皮癌治療薬又は付記１６から３０のいずれかに記載の薬学的組成物を患者に投与する投与工程を含む、付記１から１５のいずれかに記載の上皮癌治療薬又は付記１６から３０のいずれかに記載の薬学的組成物の使用。
（付記３７）
患者の上皮癌を治療又は予防するためにオキソ酸、オキソ酸イオン及びオキソ酸塩からなる群から選択される少なくとも一つの物質を患者に投与する投与工程を含む、オキソ酸、オキソ酸イオン及びオキソ酸塩からなる群から選択される少なくとも一つの物質の使用。

以上、実施形態及び実施例を参照して本発明を説明したが、本発明は、上記実施形態及び実施例に限定されるものではない。本発明の構成や詳細には、本発明のスコープ内で当業者が理解しうる様々な変更をできる。

以上、説明したとおり、本発明によれば、副作用が小さい上皮癌治療薬を提供することができる。本発明の上皮癌治療薬は、膀胱癌、舌癌、口腔癌、子宮癌、子宮頸癌、大腸癌等の多種多様な上皮癌に対する治療薬として有用である。本発明の上皮癌治療薬は、例えば、実施例で示したとおり、活性酸素産生によるアポトーシス誘導上皮癌治療薬として有用である。

この出願は、２０２０年５月２１日に出願された日本出願特願２０２０－０８９２５３を基礎とする優先権を主張し、その開示のすべてをここに取り込む。

Claims (14)

1. ハロゲンオキソ酸、ハロゲンオキソ酸イオン及びハロゲンオキソ酸塩からなる群から選択される少なくとも一つを含み、上皮癌の治療又は予防のために投与されることを特徴とする上皮癌治療薬。
2. 前記上皮癌が、泌尿器系、生殖器系、消化器系、循環器系、及び呼吸器系からなる群から選択される少なくとも一つの組織の癌である請求項１記載の上皮癌治療薬。
3. 前記上皮癌が、膀胱癌、子宮癌、子宮頸癌、卵巣癌、卵管癌、精巣癌、前立腺癌、大腸癌、小腸癌、十二指腸癌、胃癌、食道癌、喉頭癌、口腔癌、舌癌、咽頭癌、肝臓癌、膵臓癌、胆嚢癌、脾臓癌、腹膜癌、肺癌、及び眼癌からなる群から選択される少なくとも一つの組織の癌である請求項１又は２記載の上皮癌治療薬。
4. 前記ハロゲンオキソ酸が、塩素オキソ酸、臭素オキソ酸、及びヨウ素オキソ酸からなる群から選択される少なくとも一つである請求項１から３のいずれか一項に記載の上皮癌治療薬。
5. 前記ハロゲンオキソ酸が、次亜ハロゲン酸、亜ハロゲン酸、ハロゲン酸、及び過ハロゲン酸からなる群から選択される少なくとも一つである請求項１から４のいずれか一項に記載の上皮癌治療薬。
6. 前記ハロゲンオキソ酸が、次亜塩素酸、亜塩素酸、塩素酸、過塩素酸、次亜臭素酸、亜臭素酸、臭素酸、過臭素酸、次亜ヨウ素酸、亜ヨウ素酸、ヨウ素酸、及び過ヨウ素酸からなる群から選択される少なくとも一つである請求項１から５のいずれか一項に記載の上皮癌治療薬。
7. さらに、ラジカル発生触媒を含み、
   前記ラジカル発生触媒は、前記上皮癌治療薬に含まれる前記ハロゲンオキソ酸、ハロゲンオキソ酸イオン及びハロゲンオキソ酸塩からなる群から選択される少なくとも一つの物質からのラジカル発生を触媒する物質である請求項１から６のいずれか一項に記載の上皮癌治療薬。
8. 前記ラジカル発生触媒が、アンモニウム、アミノ酸、タンパク質、ペプチド、リン脂質、及びそれらの塩からなる群から選択される少なくとも一つを含む請求項７記載の上皮癌治療薬。
9. 前記アンモニウムが、下記化学式（XI）で表されるアンモニウム塩である請求項８記載の上皮癌治療薬。
   

   

   前記化学式（XI）中、
   Ｒ^１１、Ｒ^２１、Ｒ^３１、及びＲ^４１、は、それぞれ水素原子もしくは芳香環であるか、又はアルキル基であり、前記アルキル基は、エーテル結合、カルボニル基、エステル結合、若しくはアミド結合、又は芳香環が含まれていてもよく、Ｒ^１１、Ｒ^２１、Ｒ^３１、及びＲ^４１は、それぞれ同じでも異なっていてもよく、
   又は、Ｒ^１１、Ｒ^２１、Ｒ^３１、及びＲ^４１のうち２つ以上が一体化し、それらが結合するＮ^＋とともに環状構造を形成していてもよく、前記環状構造は、飽和でも不飽和でもよく、芳香環でも非芳香環でもよく、１以上の置換基を有していても有していなくてもよく、
   Ｘ^－は、アニオンである。
10. 前記化学式（XI）で表されるアンモニウム塩が、下記化学式（XII）で表されるアンモニウム塩である請求項９記載の上皮癌治療薬。
    

    

    前記化学式（XII）中、
    Ｒ^１１１は、炭素数が５～４０のアルキル基であり、エーテル結合、ケトン（カルボニル基）、エステル結合、若しくはアミド結合、置換基、又は芳香環が含まれていてもよく、
    Ｒ^２１及びＸ^－は、前記化学式（XI）と同じである。
11. 前記アンモニウムが、塩化ベンゼトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム、塩化テトラメチルアンモニウム、塩化アンモニウム、塩化メチルアンモニウム、塩化テトラブチルアンモニウム、塩化セチルピリジニウム、臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム、塩化デカリニウム、エドロホニウム、塩化ジデシルジメチルアンモニウム、塩化ベンジルトリエチルアンモニウム、オキシトロピウム、カルバコール、グリコピロニウム、サフラニン、シナピン、臭化テトラエチルアンモニウム、臭化ヘキサデシルトリメチルアンモニウム、スキサメトニウム、スフィンゴミエリン、ガングリオシドＧＭ１、デナトニウム、トリゴネリン、ネオスチグミン、パラコート、ピリドスチグミン、フェロデンドリン、プラリドキシムヨウ化メチル、ベタイン、ベタニン、ベタネコール、ベタレイン、レシチン、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシル、及びコリン類からなる群から選択される少なくとも一つである請求項８から１０のいずれか一項に記載の上皮癌治療薬。
12. 前記化学式（XI）で表されるアンモニウム塩が、下記化学式（XIV）で表されるアンモニウム塩である請求項９記載の上皮癌治療薬。
    

    

    前記化学式（XIV）中、
    Ｒ^１００は、環状構造を形成していてもよく、前記環状構造は、飽和でも不飽和でもよく、芳香環でも非芳香環でもよく、１以上の置換基を有していても有していなくてもよく、
    Ｒ^１１及びＸ^－は、前記化学式（XI）と同じである。
13. 前記ラジカル発生触媒のルイス酸性度が、０．４ｅＶ以上である請求項７から１２のいずれか一項に記載の上皮癌治療薬。
14. 上皮癌細胞のアポトーシス促進剤である請求項１から１３のいずれか一項に記載の上皮癌治療薬。

Images