JP6998018B2 - 細胞処理装置、浮遊培養器、及び幹細胞の誘導方法 - Google Patents
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Description
ゲル培地ではない液体培地である、10%FBS(Gibco)を含むDMEM(Gibco)に懸濁した5×106個の繊維芽細胞(HDF1419、Cell Applications, Inc.)を、ウェルディッシュの各ウェルに播種し、ウェルディッシュを37℃のCO2インキュベーター中に静置して、繊維芽細胞を接着培養した。24時間後、パントロピックレトロウイルス発現システム(Plat-GP、Pantropic、Plat-GP)を用いて、繊維芽細胞に初期化因子OSKM(OCT3/4、SOX2、KLF4、c-MYC)を導入した。その後7日間、24時間ごとに培地を交換した。
実施例1と同様に、繊維芽細胞に初期化因子OSKM(OCT3/4、SOX2、KLF4、c-MYC)を導入した。その後7日間、24時間ごとに培地を交換した。
実施例1と同様に、繊維芽細胞に初期化因子OSKM(OCT3/4、SOX2、KLF4、c-MYC)を導入した。その後7日間、24時間ごとに培地を交換した。
Claims (37)
- 細胞に誘導因子を導入して誘導因子導入細胞を作製する因子導入装置と、
前記因子導入装置に前記細胞を含む溶液を送液するための導入前細胞送液路と、
前記因子導入装置で作製された前記誘導因子導入細胞を浮遊培養して前記誘導因子導入細胞から誘導多能性幹細胞を誘導するための浮遊培養器と、
前記因子導入装置と前記浮遊培養器とを接続し、前記因子導入装置から前記浮遊培養器に前記因子導入装置で作製された前記誘導因子導入細胞を含む溶液を送液するための導入細胞送液路と、
を備える、細胞処理装置。 - 前記浮遊培養器内で前記誘導因子導入細胞が初期化される、請求項1に記載の細胞処理装置。
- 前記浮遊培養器内で前記誘導された細胞が拡大培養される、請求項1又は2に記載の細胞処理装置。
- 前記浮遊培養器が、
前記誘導因子導入細胞と培地が入れられる半透膜と、
前記半透膜が入れられ、前記半透膜の周囲に培地が入れられる容器と、
を備える、請求項1から3のいずれか1項に記載の細胞処理装置。 - 前記浮遊培養器が、前記容器内の培地を攪拌させるための駆動装置をさらに備える、請求項4に記載の細胞処理装置。
- 前記容器内に攪拌部材が設けられている、請求項5に記載の細胞処理装置。
- 前記駆動装置が、磁力を介して、前記攪拌部材を回転させる、請求項6に記載の細胞処理装置。
- 前記浮遊培養器が、
前記誘導因子導入細胞と培地が入れられる半透膜と、
前記半透膜が入れられ、前記半透膜の周囲に培地が入れられる容器であって、内側面にらせん状の溝が設けられている容器と、
前記容器内の溝に沿って前記培地が流れるよう、前記容器内に前記培地を供給するポンプと、
を備える、請求項1から3のいずれか1項に記載の細胞処理装置。 - 前記因子導入装置で作製された誘導因子導入細胞が、前記浮遊培養器の半透膜内に送られる、請求項4から8のいずれか1項に記載の細胞処理装置。
- 前記浮遊培養器が、
培地が入れられる半透膜と、
前記半透膜が入れられ、前記半透膜の周囲に前記誘導因子導入細胞と培地が入れられる容器と、
前記半透膜内に前記培地の液流が生じるよう、前記半透膜内に前記培地を供給するポンプと、
を備える、請求項1から3のいずれか1項に記載の細胞処理装置。 - 前記因子導入装置で作製された誘導因子導入細胞が、前記容器内の前記半透膜の外に送られる、請求項10に記載の細胞処理装置。
- 前記浮遊培養器が、
前記誘導因子導入細胞と培地が入れられる容器と、
前記容器内の培地を攪拌させるための駆動装置と、
を備える、請求項1から3のいずれか1項に記載の細胞処理装置。 - 前記容器内に攪拌部材が設けられている、請求項12に記載の細胞処理装置。
- 前記駆動装置が、磁力を介して、前記攪拌部材を回転させる、請求項13に記載の細胞処理装置。
- 前記浮遊培養器が、
前記誘導因子導入細胞と培地が入れられる容器であって、内側面にらせん状の溝が設けられている容器と、
前記容器内の溝に沿って前記培地が流れるよう、前記容器内に前記培地を供給するポンプと、
を備える、請求項1から3のいずれか1項に記載の細胞処理装置。 - 前記因子導入装置で作製された誘導因子導入細胞が、前記浮遊培養器の容器内に送られる、請求項12から15のいずれか1項に記載の細胞処理装置。
- 前記培地が液体培地である、請求項4から16のいずれか1項に記載の細胞処理装置。
- 前記培地がゲル培地である、請求項4から16のいずれか1項に記載の細胞処理装置。
- 前記導入前細胞送液路の中の溶液を送液するためのポンプをさらに備える、請求項1に記載の細胞処理装置。
- 前記導入細胞送液路の中の溶液を送液するためのポンプをさらに備える、請求項1に記載の細胞処理装置。
- 誘導因子を導入された誘導因子導入細胞と培地が入れられる半透膜と、
前記半透膜内に前記誘導因子導入細胞を含む培地を送液するための第1送液路と、
前記半透膜が入れられ、前記半透膜の周囲に培地が入れられる容器と、
前記容器内の前記半透膜の外に設けられた攪拌部材と、
を備え、
前記半透膜内で、前記誘導因子導入細胞を浮遊培養して前記誘導因子導入細胞から誘導多能性幹細胞を誘導するための浮遊培養器であって、
前記半透膜内から当該浮遊培養器の外へ前記誘導多能性幹細胞を含む培地を送液するための第2送液路をさらに備える、浮遊培養器。 - 前記容器内の培地を攪拌させるための駆動装置をさらに備える、請求項21に記載の浮遊培養器。
- 前記駆動装置が、磁力を介して、前記攪拌部材を回転させる、請求項22に記載の浮遊培養器。
- 誘導因子を導入された誘導因子導入細胞と培地が入れられる半透膜と、
前記半透膜内に前記誘導因子導入細胞を含む培地を送液するための第1送液路と、
前記半透膜が入れられ、前記半透膜の周囲に培地が入れられる容器であって、内側面にらせん状の溝が設けられている容器と、
を備え、
前記半透膜内で、前記誘導因子導入細胞を浮遊培養して前記誘導因子導入細胞から誘導多能性幹細胞を誘導するための浮遊培養器であって、
前記半透膜内から当該浮遊培養器の外へ前記誘導多能性幹細胞を含む培地を送液するための第2送液路をさらに備える、浮遊培養器。 - 前記容器内の溝に沿って前記培地が流れるよう、前記容器内に前記培地を供給するポンプをさらに備える、請求項24に記載の浮遊培養器。
- 培地が入れられる半透膜と、
前記半透膜が入れられ、前記半透膜の周囲に誘導因子を導入された誘導因子導入細胞と培地が入れられる容器と、
を備え、
前記容器内で、前記誘導因子導入細胞を浮遊培養して前記誘導因子導入細胞から誘導多能性幹細胞を誘導するための浮遊培養器であって、
当該浮遊培養器の中へ前記誘導因子導入細胞を含む培地を送液するための第1送液路と、
当該浮遊培養器の外へ前記誘導多能性幹細胞を含む培地を送液するための第2送液路と、
をさらに備える、浮遊培養器。 - 前記半透膜内に前記培地の液流が生じるよう、前記半透膜内に前記培地を供給するポンプをさらに備える、請求項26に記載の浮遊培養器。
- 前記培地が液体培地である、請求項21から27のいずれか1項に記載の浮遊培養器。
- 前記培地がゲル培地である、請求項21から27のいずれか1項に記載の浮遊培養器。
- 前記第1送液路の中の溶液を送液するためのポンプをさらに備える、請求項21から29のいずれか1項に記載の浮遊培養器。
- 前記第2送液路の中の溶液を送液するためのポンプをさらに備える、請求項21から29のいずれか1項に記載の浮遊培養器。
- 細胞に誘導因子を導入して誘導因子導入細胞を作製することと、
半透膜を介して栄養成分を補給しながら前記半透膜内の前記誘導因子導入細胞を浮遊培養して前記誘導因子導入細胞から誘導多能性幹細胞を誘導し、浮遊する細胞塊を形成することと、
を含む、幹細胞の誘導方法。 - 前記浮遊培養が、攪拌培養である、請求項32に記載の幹細胞の誘導方法。
- 前記誘導因子導入細胞を浮遊培養する際に液体培地が用いられる、請求項32又は33に記載の幹細胞の誘導方法。
- 前記誘導因子導入細胞を浮遊培養する際にゲル培地が用いられる、請求項32又は33に記載の幹細胞の誘導方法。
- 前記浮遊培養器が半透膜を備える、請求項1に記載の細胞処理装置。
- 前記因子導入装置で作製された前記誘導因子導入細胞が、前記浮遊培養器の前記半透膜内に送られる、請求項36に記載の細胞処理装置。
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