JP6971946B2 - 反応抑制的抗体による特異的プラスミン不活性化 - Google Patents
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Description
本出願は、参照によりその全体が本明細書に援用される、2017年9月21日出願の米国仮特許出願第62/561,332号の優先権を主張する。
本出願は、ASCII形式で電子的に提出され、参照によりその全体が本明細書に援用される配列表を含む。上記ASCIIコピーは、2018年9月13日に作成され、27849−0023_SL.txtと命名され、サイズは27,141バイトである。
(モノクローナル抗体作製)
アプロチニンアガロースに結合したヒトプラスミンプロテアーゼドメインにおいて8か月間に4度免疫化したマウスの細胞を用いて、以下に記載するように体細胞融合によりモノクローナル抗体を作製した19。直接結合試験を行い、ヒトプラスミノーゲンプロテアーゼドメインに結合する抗体の最大抗体価を有するマウスを特定した。ウロキナーゼで予め活性化した(100U、30分)ヒトプラスミノーゲンプロテアーゼドメイン(50ug)により、腹膜内でマウスを過免疫処置した。麻酔後、以下に記載するように、ポリエチレングリコールを用いて、免疫脾臓細胞をSP2/0細胞と融合させた19。ヒポキサンチン・アミノプテリン・チミジン選択培地において、5%の二酸化炭素雰囲気中、37℃で、融合細胞を培養した。マイクロタイタープレートを1時間ヤギ抗マウスFab抗体(5ug/mL、25uL)でコーティングし、ラジオイムノアッセイによりクローンを選択した。ウェルは1%ウシ血清アルブミンでブロックした。ハイブリドーマ上澄み液を添加し、プレートを室温(RT)で1時間培養した。洗浄後、ウェルを125I−ヒトプラスミン(50,000cmp/25uL)で1時間培養した。洗浄後、結合した125I−ヒトプラスミンをガンマシンチグラフィーで検出した。希釈を制限することによりポジティブなハイブリドーマをサブクローニングし、それを液体窒素中に保存した。
ハイブリドーマ上澄み液を流速1mL/分で抗マウスIgGアガロースカラム(Immunechem社、カナダ)に注いだ。カラムはpH7.4のPBSで洗浄した。抗体を0.2Mグリシン(pH2.9)で溶出し、その後4℃のPBS(pH7.4)中で一晩透析した。抗体は、アミコンウルトラ−15遠心濾過フィルター(ミリポア、ビレリカ、マサチューセッツ州)を用い、該製造元の指示に従って濃縮した。蛋白質濃度はBCA法により決定した。
以下に記載するように(9)、プラスミンプロテアーゼドメインを遺伝子組み換えにより大腸菌中で発現させた。多重複プライマーを用いたPCRクローニングにより、ハイブリドーマ細胞からPiのcDNA配列を単離した。Piのヒト化キメラバージョンを一過性細胞トランスフェクションによりHEK293細胞中で発現させた。96時間後、懸濁培養液を集めた。精製されたキメラPiをHiTrap rProteinG FFで精製し、0.2umフィルターを通過させた。該フィルターは、Translational Sciences社(メンフィス、テネシー州)が提供したものである。
2ug/mLのプラスミンまたはプラスミノーゲンでコーティングした96ウェルプレート中、室温で1時間、ELISAにより飽和結合解析を行った。ウェルはPBS−T(10mMリン酸緩衝液pH7.4、150mM NaCl、0.05%Tween20)で6度洗浄した。非特異的な蛋白質結合部位は、室温で1時間、1%BSAを用いてブロックした。上記のようにプレートを洗浄後、室温で、1時間かけ、種々の濃度の抗体(0.002〜100ug/mL)を添加した(2回の試験)。プレートを洗浄し、西洋ワサビ(HRP)複合ヤギ抗マウス二次抗体(1:8000、Santa Cruz、ダラス、テキサス州)をプレートに添加した。室温で1時間培養後プレートを洗浄し、TMBを添加した。次に、370nmで吸光度を読んだ。
ヒトプラスミノーゲン、マウスプラスミノーゲン、tPA,トリプシンまたはキモトリプシン(10ug/mL)でコーティングし1%BSAでブロックした96ウェルプレート中、ELISAを用いて、Piによる異なるセリンプロテアーゼへの結合を評価した。培養および洗浄後、Piまたは対照のモノクローナル抗体上澄み液(抗ジゴキシン)を1時間かけてウェルに添加した(3回の試験)。次に、HRP複合ヤギ抗マウス抗体(1:5000、Sc−2005、Santa Cruz)を添加した。1時間培養後プレートを洗浄した。ウェルにTBSを添加し、370nmで吸光度を記録した。
ヒトプラスミン(2.8nM)をS2251基質およびPi(1x10−9〜3.3x10−8M)またはEACA(3.9x10−3〜0.25x10−1M)と混合し(または阻害因子なしで)、A405nmで20分間、パラニトロアニリド産物の放出により基質切断速度をモニターした。プラスミンの残存活性率を阻害因子の対数濃度の関数として決定した。
プラスミノーゲン活性因子ウロキナーゼの添加後、異なる動物プラスミンへのPiの影響を調べた。Pi(1uM、10uL)または緩衝液、S2251(10uL、0.5mM最終)、ウロキナーゼ(100または200U)(全量100uL)の存在下、種々の動物血漿(5uL)をマイクロタイタープレート内でPBSと混合した。プレートは37℃で培養し、プラスミン生成速度を405nmにおける基質切断により1時間モニターした。
EACA(1mM)、Pi(5ug)または対照モノクローナル抗体(ジゴキシン、5ug)の存在下、ヒト第V因子(2ug、IHFV、Innovative Research)を室温(RT)で1時間プラスミン(0.05ug)と混合した。次に、還元条件下、7.5%のゲル上でSDS−PAGEを行った。クマシーブルー染料で染色することにより、蛋白質バンドを検出した。
微量の125Iフィブリノーゲンの存在下、37℃で1時間、CaCl2(10mM)およびトロンビン(1U/mL)で凝固させたヒト血漿において、線維素溶解へのEACAまたはPiの影響を調べた(2回試験)。1mLのTBS(pH7.4)で洗浄後、種々の量のPi(62.5〜1000nM)、EACA(0.125〜2mM)の存在下(または阻害因子なしで)、tPA(5nM)を添加した。2.5時間後、上澄み液に溶解した125Iフィブリンの量を測定することにより、線維素溶解の量を測定した。
麻酔下にあるマウスを無作為的および盲検により、生理食塩水(対照)、Pi(100ナノモル/kg)、またはEACA(510マイクロモル/kg)で処理した。ヒトプラスミノーゲン(100ナノモル/kg)およびプラスミノーゲン活性化因子(80,000IU/kg)を60分かけて投与した。尻尾からの出血は注入40分後に開始した。以下に記載するように、尻尾を37℃の生理食塩水3mLで5分間予め温めた(27、28)。
データは平均+/−標準誤差で示してある。飽和結合および速度対基質曲線は、グラフパッドプリズムによる1サイト結合双曲線モデルおよびミカエリスメンテン速度モデルを用いて非線形回帰により分析した。インビトロの出血データは、修正型Dunn法を用いたノンパラメトリックなクラスカル・ウォリス一元配置分散分析により分析した。p<0.05は有意と考えた。
(特定のプロテアーゼドメインループに向けられたモノクローナル抗体プラスミン阻害因子(Pi))
イムノブロット法により示されるように(図1A)、プラスミン(マイクロプラスミン)のプロテアーゼドメインに特異的に結合するモノクローナル抗体プラスミン阻害因子(Pi)を生成した。プロテアーゼのコア構造はセリンプロテアーゼ間で高度に保存されているが、プラスミンの外部ループ構造(図1B)は、他の酵素とは有意に異なっており、プラスミンと、基質モディファイア(ストレプトキナーゼなど)、基質、および阻害因子との間の特異的な相互作用を介在することが証明されている(図1B)(9)。プラスミンのループ構造を変化させた種々のプラスミン変異株を用いた結合試験により、Piは、天然のループ4および5は必要とするが天然のループ3、6、または7の配列を必要としないプロテアーゼドメインのエピトープ(図1B)に結合することが示された(図1C)。このPiは高結合活性でプラスミノーゲンに結合しており(Kd3.4+/−0.8nM、図1D)、プラスミノーゲンの通常の生理学的濃度で結合が十分であることをそれは示している。
Piは、EACAよりも対数で約7倍の効力でプラスミン介在による小分子トリペプチドパラニトロアニリド基質(S2251)の切断を効果的に無効化した。PiはプラスミンによるS2251切断のVmax(最大速度)を減少させ、主にプラスミン活性の非競合的阻害因子として機能することを示した。Piは、最も強力なプラスミンの共有結合阻害因子であるα2抗プラスミンと比較すると、プラスミンによるS2251切断を阻害する点では同様の効力を有している(図3C)。MAbのFc領域がPiの阻害機能の立体障害となっているか否か、あるいは阻害機能に影響を及ぼしているか否かを決定するため、Fcドメインを欠如したPiのFab断片の影響を調べた。多重複プライマーを用いたPCRクローニングにより、PiのcDNA配列を得た(表1)。マウスFabも遺伝子組み換えによるPiのキメラFabも、トリペプチド基質を用いたプラスミン活性を強力に阻害し(図2D)、大きいIgG分子による立体効果はプラスミン活性の阻害には有意には寄与しないことが示された。
Piの特異性を決定するため、他のセリンプロテアーゼへの結合を調べた。対照(抗ジゴキシン)モノクローナル抗体との比較により、Piはマウスプラスミノーゲン、ヒトtPA、トリプシン、キモトリプシン、またはウシ血清アルブミン(対照)との特異的結合を有しないことが示された(図3A)。Piによるプラスミンへの影響をいくつかの異なる動物の血漿で調べた。Piはウロキナーゼにより生成されたヒト血漿のプラスミンを抑制したが、イヌ、モルモット、ウシ、ネコ、アレチネズミ、ハムスター、ブタ、ウサギ、またはラットの血漿ではプラスミン活性を阻害しなかった(図3B)。非ヒトの霊長類のプラスミンはヒトのプラスミンと比べ最も高い相同性を有している。Piは、プラスミン誘発によるヒト血餅の線溶時間を著しく長引かせたし、ヒヒおよびアフリカミドリザルに関しても用量依存的抑制を示した(図3C)。斯かるデータは、Piがヒトおよび非ヒト霊長類のプラスミンを特異的に阻害し、非霊長類のプラスミンには影響を及ぼさない、あるいは他のセリンプロテアーゼには結合しないことを示している。図3Dは、プラスミンプロテアーゼドメインの異なるエピトープに結合する2つの異なる反応抑制的抗体であるPiMAb38とPiMab340による相対的な血餅溶解を示している。
斯かる方法の一般化可能性を調べるため、プラスミンプロテアーゼドメインに特異的に生成された他のモノクローナル抗体を試験した。Piとは異なるエピトープ(すなわちループ7を必要とする)に結合するMAb340も、r−tPAにより開始されたヒト血餅溶解を阻害するが、一方、対照(抗ジゴキシン)のMAbは斯かる阻害を行わなかった(図3D)。
インビボでは、プラスミンによる第V因子切断は、無規制の血液プラスミンレベルにおける顕著な特徴である。インビトロでは、プラスミンは、対照(抗ジゴキシン抗体)の存在下、第V因子を容易に切断して低分子量のバンドを形成する(図4A)。EACAの治療処置レベル(1mM)は第V因子の切断を僅かに弱める(図4A)。しかし、Piの存在下では、第V因子切断は用量依存的に弱められた(図4A)。更にPiは、プラスミン介在によるヒトフィブリン血餅の線溶を有意に抑制した(図4B)。EACAも線維素溶解を減少させるが、Piよりも効力が相対的に約5,000倍小さい(図4B)。同じ用量のα2抗プラスミンと比較すると、Piは、tPAの用量を増やすことにより誘発したプラスミン介在によるヒトフィブリン血餅溶解の抑制の点で、2〜3倍強力であった(図4C)。Piの全IgG、Fab、およびキメラFabフォームが同様の用量依存的な効力で血餅溶解を効果的に阻害したが、これはIgG分子関連の線維素溶解には立体効果が存在しないことを示している。
クローン化したハイブリドーマ細胞からPiのcDNAを得た。cDNAをテンプレートとする変性マウスIgGプライマー対を用いて、重鎖(HC)および軽鎖(LC)の遺伝子を増幅した。
1. Hijazi N, Abu Fanne R, Abramovitch R, et al. Endogenous plasminogen activators mediate progressive intracerebral hemorrhage after traumatic brain injury in mice. Blood. 2015;125:2558−2567 PMID 25673638.
2. Stewart D, Kong M, Novokhatny V, Jesmok G, Marder VJ. Distinct dose−dependent effects of plasmin and TPA on coagulation and hemorrhage. Blood. 2003;101:3002−3007 PMID 12446443.
3. collaborators C−t, Shakur H, Roberts I, et al. Effects of tranexamic acid on death, vascular occlusive events, and blood transfusion in trauma patients with significant haemorrhage (CRASH−2): a randomised, placebo−controlled trial. Lancet. 2010;376:23−32 PMID 20554319.
4. Swedberg JE, Harris JM. Natural and engineered plasmin inhibitors: applications and design strategies. Chembiochem. 2012;13:336−348 PMID 22238174.
5. Henry DA, Carless PA, Moxey AJ, et al. Anti−fibrinolytic use for minimising perioperative allogeneic blood transfusion. Cochrane Database Syst Rev. 2011:CD001886 PMID 21412876.
6. Mezzano D, Tagle R, Panes O, et al. Hemostatic disorder of uremia: the platelet defect, main determinant of the prolonged bleeding time, is correlated with indices of activation of coagulation and fibrinolysis. Thromb Haemost. 1996;76:312−321 PMID 8883263.
7. Mezzano D, Panes O, Munoz B, et al. Tranexamic acid inhibits fibrinolysis, shortens the bleeding time and improves platelet function in patients with chronic renal failure. Thromb Haemost. 1999;82:1250−1254 PMID 10544908.
8. Rincon F, Rossenwasser RH, Dumont A. The epidemiology of admissions of nontraumatic subarachnoid hemorrhage in the United States. Neurosurgery. 2013;73:217−222; discussion 212−213 PMID 23615089.
9. Rincon F, Mayer SA. The epidemiology of intracerebral hemorrhage in the United States from 1979 to 2008. Neurocrit Care. 2013;19:95−102 PMID 23099848.
10. Oyelese Y, Ananth CV. Postpartum hemorrhage: epidemiology, risk factors, and causes. Clin Obstet Gynecol. 2010;53:147−156 PMID 20142652.
11. Molenaar IQ, Warnaar N, Groen H, Tenvergert EM, Slooff MJ, Porte RJ. Efficacy and safety of antifibrinolytic drugs in liver transplantation: a systematic review and meta−analysis. Am J Transplant. 2007;7:185−194 PMID 17227567.
12. Tsikouris JP, Suarez JA, Meyerrose GE. Plasminogen activator inhibitor−1: physiologic role, regulation, and the influence of common pharmacologic agents. J Clin Pharmacol. 2002;42:1187−1199 PMID
13. Lee KN, Lee CS, Tae WC, Jackson KW, Christiansen VJ, McKee PA. Cross−linking of wild−type and mutant alpha 2−antiplasmins to fibrin by activated factor XIII and by a tissue transglutaminase. J Biol Chem. 2000;275:37382−37389 PMID
14. Bajzar L. Thrombin activatable fibrinolysis inhibitor and an antifibrinolytic pathway. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 2000;20:2511−2518 PMID 11116046.
15. Mutch NJ, Thomas L, Moore NR, Lisiak KM, Booth NA. TAFIa, PAI−1 and alpha−antiplasmin: complementary roles in regulating lysis of thrombi and plasma clots. J Thromb Haemost. 2007;5:812−817 PMID 17388801.
16. McEvoy MD, Reeves ST, Reves JG, Spinale FG. Aprotinin in cardiac surgery: a review of conventional and novel mechanisms of action. Anesth Analg. 2007;105:949−962 PMID 17898372.
17. Beliveau R, Demeule M. Aprotinin and analogs as carriers across the blood−brain barrier. In: Office EP ed. Vol. EP20040700102 European Union; 2005.
18. Turner RB, Liu L, Sazonova IY, Reed GL. Structural elements that govern the substrate specificity of the clot−dissolving enzyme plasmin. J Biol Chem. 2002;277:33068−33074 PMID 12080056.
19. Reed GL, 3rd, Matsueda GR, Haber E. Synergistic fibrinolysis: combined effects of plasminogen activators and an antibody that inhibits alpha 2−antiplasmin. Proc Natl Acad Sci U S A. 1990;87:1114−1118 PMID 1689060.
20. Wiman B, Collen D. On the kinetics of the reaction between human antiplasmin and plasmin. Eur J Biochem. 1978;84:573−578 PMID 147769.
21. Urano T, de Serrano VS, Gaffney PJ, Castellino FJ. The activation of human [Glu1]plasminogen by human single−chain urokinase. Arch Biochem Biophys. 1988;264:222−230 PMID
22. Urano T, Sator de Serrano V, Gaffney PJ, Castellino FJ. Effectors of the activation of human [Glu1]plasminogen by human tissue plasminogen activator. Biochemistry. 1988;27:6522−6528 PMID
23. Albrecht S, Magdolen V, Herzog U, et al. Soluble tissue actor interferes with angiostatin−mediated inhibition of endothelial cell proliferation by lysine−specific interaction with plasminogen kringle domains. Thromb Haemost. 2002;88:1054−1059 PMID 12529759.
24. van Zonneveld AJ, Veerman H, Pannekoek H. On the interaction of the finger and the kringle−2 domain of tissue−type plasminogen activator with fibrin. Inhibition of kringle−2 binding to fibrin by epsilon−amino caproic acid. J Biol Chem. 1986;261:14214−14218 PMID 3021732.
25. Hoover−Plow JL, Miles LA, Fless GM, Scanu AM, Plow EF. Comparison of the lysine binding functions of lipoprotein(a) and plasminogen. Biochemistry. 1993;32:13681−13687 PMID 8257702.
26. Manji RA, Grocott HP, Leake J, et al. Seizures following cardiac surgery: the impact of tranexamic acid and other risk factors. Can J Anaesth. 2012;59:6−13 PMID 22065333.
27. Abou−Diwan C, Sniecinski RM, Szlam F, et al. Plasma and cerebral spinal fluid tranexamic acid quantitation in cardiopulmonary bypass patients. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2011;879:553−556 PMID 21300577.
28. McCormack PL. Tranexamic acid: a review of its use in the treatment of hyperfibrinolysis. Drugs. 2012;72:585−617 PMID 22397329.
29. Berman M, Cardone D, Sharples L, et al. Safety and efficacy of aprotinin and tranexamic acid in pulmonary endarterectomy surgery with hypothermia: review of 200 patients. Ann Thorac Surg. 2010;90:1432−1436 PMID 20971234.
30. Furtmuller R, Schlag MG, Berger M, et al. Tranexamic acid, a widely used antifibrinolytic agent, causes convulsions by a gamma−aminobutyric acid(A) receptor antagonistic effect. J Pharmacol Exp Ther. 2002;301:168−173 PMID 11907171.
31. Ng W, Jerath A, Wasowicz M. Tranexamic acid: a clinical review. Anaesthesiol Intensive Ther. 2015;47:339−350 PMID 25797505.
32. Fergusson DA, Hebert PC, Mazer CD, et al. A comparison of aprotinin and lysine analogues in high−risk cardiac surgery. N Engl J Med. 2008;358:2319−2331 PMID 18480196.
33. Kuitunen A, Hiippala S, Vahtera E, Rasi V, Salmenpera M. The effects of aprotinin and tranexamic acid on thrombin generation and fibrinolytic response after cardiac surgery. Acta Anaesthesiol Scand. 2005;49:1272−1279 PMID 16146463.
34. Henry DA. Fibrinolysis and upper gastrointestinal bleeding. Lancet. 1993;341:527−528 PMID 8094777.
35. Beebe DP, Aronson DL. An automated fibrinolytic assay performed in microtiter plates. Thromb Res. 1987;47:123−128 PMID 3116709.
36. Thomas SG, Calaminus SD, Auger JM, Watson SP, Machesky LM. Studies on the actin−binding protein HS1 in platelets. BMC Cell Biol. 2007;8:46 PMID 17996076.
37. Liu Y, Jennings NL, Dart AM, Du XJ. Standardizing a simpler, more sensitive and accurate tail bleeding assay in mice. World J Exp Med. 2012;2:30−36 PMID 24520531.
Claims (19)
- 治療を必要とする被験者のプラスミン活性を阻害するための医薬組成物であって、プラスミンプロテアーゼドメインに特異的に結合するモノクローナル抗体またはその機能性断片であって、線維素溶解を阻害するモノクローナル抗体またはその機能性断片を含む有効量のプラスミン阻害組成物を含み、前記モノクローナル抗体またはその機能性断片が、配列番号9−11で規定される、可変領域軽鎖のCDRアミノ酸配列であるCDR1、CDR2およびCDR3と、配列番号12−14で規定される、可変領域重鎖のCDRアミノ酸配列であるCDR1、CDR2およびCDR3とを含む、医薬組成物。
- 前記モノクローナル抗体またはその機能性断片は第V因子蛋白質のプラスミン切断を阻害する、請求項1に記載の医薬組成物。
- 前記モノクローナル抗体またはその機能性断片は、エプシロンアミノカプロン酸よりも強力に、トリペプチドパラニトロアニリド基質のプラスミン切断を阻害する、請求項1に記載に記載の医薬組成物。
- 前記被験者はヒトである、請求項1に記載の医薬組成物。
- 前記モノクローナル抗体またはその機能性断片はプラスミン活性の非競合的阻害因子である、請求項1に記載の医薬組成物。
- 前記モノクローナル抗体またはその機能性断片は、プラスミンへの前記モノクローナル抗体の結合を媒介するためにプラスミンのループ4および5を必要とする、請求項1に記載の医薬組成物。
- 前記モノクローナル抗体またはその機能性断片は、非プラスミン・セリンプロテアーゼ・トリプシン、トロンビン、活性化プロテインC、カリクレイン、好中球エラスターゼ、またはそれらの組み合わせとは特異的に結合しない、請求項1に記載の医薬組成物。
- 前記モノクローナル抗体またはその機能性断片は、配列番号15と少なくとも90%同一の可変領域軽鎖アミノ酸配列と、配列番号16と少なくとも90%同一の可変領域重鎖アミノ酸配列と、を含む、請求項1に記載の医薬組成物。
- 治療を必要とする被験者の出血を治療する医薬組成物であって、プラスミンプロテアーゼドメインに特異的に結合するモノクローナル抗体またはその機能性断片と製薬上許容される賦形剤とを含む医薬組成物の有効量を含み、前記モノクローナル抗体またはその機能性断片が、配列番号9−11で規定される、可変領域軽鎖のCDRアミノ酸配列であるCDR1、CDR2およびCDR3と、配列番号12−14で規定される、可変領域重鎖のCDRアミノ酸配列であるCDR1、CDR2およびCDR3とを含む、医薬組成物。
- 前記モノクローナル抗体またはその機能性断片は線維素溶解を阻害する、請求項9に記載の医薬組成物。
- 前記モノクローナル抗体またはその機能性断片は第V因子蛋白質のプラスミン切断を阻害する、請求項9に記載の医薬組成物。
- 前記モノクローナル抗体またはその機能性断片は、エプシロンアミノカプロン酸よりも強力に、トリペプチドパラニトロアニリド基質のプラスミン切断を阻害する、請求項9に記載の医薬組成物。
- 前記被験者はヒトである、請求項9に記載の医薬組成物。
- 前記モノクローナル抗体またはその機能性断片はプラスミン活性の非競合的阻害因子である、請求項9に記載の医薬組成物。
- 前記モノクローナル抗体またはその機能性断片は、プラスミンプロテアーゼドメインにおいてループ4および5に特異的に結合する、請求項9に記載の医薬組成物。
- 前記モノクローナル抗体またはその機能性断片は、非プラスミン・セリンプロテアーゼ・トリプシン、トロンビン、活性化プロテインC、カリクレイン、好中球エラスターゼ、またはそれらの組み合わせとは特異的に結合しない、請求項9に記載の医薬組成物。
- 前記モノクローナル抗体またはその機能性断片は、配列番号15と少なくとも90%同一の可変領域軽鎖アミノ酸配列と、配列番号16と少なくとも90%同一の可変領域重鎖アミノ酸配列と、を含む、請求項9に記載の医薬組成物。
- 出血を治療するための医薬組成物であって、プラスミン特異的なモノクローナル抗体またはその機能性断片と製薬上許容されるキャリアとを含む治療有効量の抗線溶組成物を含み、前記モノクローナル抗体またはその機能性断片が、配列番号9−11で規定される、可変領域軽鎖のCDRアミノ酸配列であるCDR1、CDR2およびCDR3と、配列番号12−14で規定される、可変領域重鎖のCDRアミノ酸配列であるCDR1、CDR2およびCDR3とを含む、医薬組成物。
- 前記モノクローナル抗体またはその機能性断片は、配列番号15と少なくとも90%同一の可変領域軽鎖アミノ酸配列と、配列番号16と少なくとも90%同一の可変領域重鎖アミノ酸配列と、を含む、請求項18に記載の医薬組成物。
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