JP6887944B2 - 抗ｆｇｆｒ２抗体と他剤を含む組成物 - Google Patents

抗ｆｇｆｒ２抗体と他剤を含む組成物 Download PDF

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Description

本発明は、新規な抗体もしくはその機能断片またはその修飾体および他の有効成分の組合せ、該抗体もしくはその機能断片またはその修飾体および他の有効成分を含有する医薬組成物等に関する。
癌の治療では、手術による癌部分の除去、抗癌剤や放射線により癌細胞を殺すことで治癒や延命効果が期待される。しかしながら、多くの癌に対しては単独の抗癌剤治療だけでは十分な効果が得られないため、様々な薬剤との併用により治療が試みられている。抗癌剤にはドキソルビシン、シスプラチン、タキソール、あるいはカンプトテシンなどの化学療法剤や、クリゾチニブ、ダサチニブ、ラパチニブなどの分子標的薬、ベバシズマブ、セツキシマブ、トラスツズマブなどの癌治療抗体、アナストロゾール、エキセメスタン、タモキシフェンなどのホルモン剤などがあり、癌の種類や進行度、治療状況により、使われる抗癌剤やその併用療法も決定される。細胞の増殖、生存を司るレセプターに対し、細胞外領域に作用し、直接増殖シグナルを遮断したり、ＡＤＣＣを介して抗腫瘍活性を示す癌治療抗体と、同じレセプターに対する薬剤や、異なるレセプターを阻害する薬剤、あるいは化学療法剤等を併用することで抗癌作用を強める方策は以前より行われてきた。
Ｌａｐｔｉｎｉｂ （Ｈｅｒ２ ＴＫＩ）とＨｅｒｃｅｐｔｉｎ （抗Ｈｅｒ２抗体）の併用は、乳癌治療において併用効果が認められ、ｌａｐａｔｉｎｉｂの作用によりＨｅｒ２が細胞表面に蓄積することで、Ｈｅｒ２の効果を強めている可能性が示唆されている（非特許文献１）。また、ＥｒｂＢファミリー全体を阻害するａｆａｔｉｎｉｂと、抗ＥＧＦＲモノクローナル抗体セツキシマブのＥＧＦＲの二重阻害においても強い抗癌作用を示すことが明らかとなっている（非特許文献２）。このように、受容体型ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｋｉｎａｓｅに対し、それを認識する抗体と、そのｔｙｒｏｓｉｎ ｋｉｎａｓｅ活性を阻害する低分子薬剤との併用は、強い増殖阻害を引き起こし、有用な治療法に繋がる可能性がある。他にも、大腸癌治療において、化学療法剤であるカンプトテシンとＥＧＦＲ阻害剤であるセツキシマブとの併用やアバスチンとの併用は、標準治療として確立されており、大腸癌治療に大きなメリットを示している。
しかしながら、抗ＦＧＦＲ２抗体と併用することにより、抗癌作用が増強される薬剤についてはほとんど知られていない（特許文献１及び２）。
米国特許出願公開ＵＳ２０１４／０３２２２２０Ａ１号 米国特許出願公開ＵＳ２０１５／００５０２７３Ａ１号
スカルトリティ他（Scaltriti, M. et al.）、オンコジーン（Oncogene）、２００９年２月刊、２８巻（６号）、８０３乃至８１４頁、２００８年１２月８日電子公表 レガレス他（Regales, L., et al.）、ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション（J. Clin. Invest.）、２００９年１０月刊、１１９巻（１０号）、３０００乃至３０１０頁、２００９年９月１４日電子公表
本発明の一つの課題は抗ＦＧＦＲ２抗体および他剤の組合せ、ならびに、該抗体および他剤を含有する医薬組成物等を提供することである。
また、本発明の他の一つの課題は、癌の治療又は予防に使用される抗ＦＧＦＲ２抗体および他剤を組合せ、ならびに、癌の治療又は予防に使用される、該抗体および他剤を含有する医薬組成物を提供することにある。
さらに、本発明の他の一つの課題は、抗ＦＧＦＲ２抗体と他剤とを組み合わせて投与することにより、または、該組成物を投与することにより、癌を治療又は予防する方法を提供することにある。
発明者らは上記課題を解決するために検討を行い、抗癌活性を有する抗ＦＧＦＲ２抗体に様々な抗癌剤（例えば、ドキソルビシン、シスプラチン、タキソール、ドセタキセル、フルオロウラシルあるいはカンプトテシンなどの化学療法剤や、クリゾチニブ、ダサチニブ、ラパチニブなどの分子標的薬、ベバシズマブ、セツキシマブ、トラスツズマブ、ラムシルマブなどの癌治療抗体、アナストロゾール、エキセメスタン、タモキシフェンなどのホルモン剤など）を組み合わせて使用することにより、優れた抗腫瘍効果が得られることを見出し、本発明を完成させた。
本発明は、
（１）下記（ｉ）乃至（ｉｘ）の特徴を有するモノクローナル抗体もしくはその機能断片、および、トポイソメラーゼ阻害剤、微小管阻害剤、プラチナ製剤、抗ＶＥＧＦＲ２抗体及び５−フルオロウラシル系抗がん剤よりなる群から選択される一つ又は二つ以上の他剤の組合せ、又は、該抗体もしくはその機能断片、および、トポイソメラーゼ阻害剤、微小管阻害剤、プラチナ製剤、抗ＶＥＧＦＲ２抗体及び５−フルオロウラシル系抗がん剤よりなる群から選択される一つ又は二つ以上の他剤を含む医薬組成物：
（ｉ）ヒト２型線維芽細胞増殖因子受容体（ｈＦＧＦＲ２）ＩＩＩｂ及びＩＩＩｃに特異的に結合する；
（ｉｉ）ｈＦＧＦＲ２の免疫グロブリン様ドメイン２又は免疫グロブリン様ドメイン３に結合する；
（ｉｉｉ）ヒト１型線維芽細胞増殖因子受容体（ｈＦＧＦＲ１）、ヒト３型線維芽細胞増殖因子受容体（ｈＦＧＦＲ３）及びヒト４型線維芽細胞増殖因子受容体（ｈＦＧＦＲ４）には特異的に結合しない；
（ｉｖ）抗体依存性細胞傷害活性を有する；
（ｖ）抗体依存性細胞媒介食活性を有する；
（ｖｉ）ｈＦＧＦＲ２に対する中和活性を有する；
（ｖｉｉ）ｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍活性を有する；
（ｖｉｉｉ）ｈＦＧＦＲ２へのＦＧＦの結合を阻害する；
（ｉｘ）キメラ抗体、ヒト化抗体又はヒト抗体である、
（２）
該抗体が配列表の配列番号１（図１）に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ１、配列表の配列番号２（図２）に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ２及び配列表の配列番号３（図３）に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ３を含むことからなる軽鎖、並びに、配列表の配列番号４（図４）に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ１、配列表の配列番号５（図５）に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ２及び配列表の配列番号６（図６）に示されるアミノ酸配列もしくは該アミノ酸配列のアミノ末端から数えて１つ目又は２つ目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されてなるアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ３を含むことからなる重鎖からなる、（１）に記載の組合せ又は医薬組成物、
（３）
該抗体が下記（ｉ）乃至（ｖｉ）から選択される、（１）又は（２）に記載の組合せ又は医薬組成物：
（ｉ）配列番号は８（図７）で示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号２１乃至２３５を含む軽鎖、および、配列番号１８（図１２）で示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号２０乃至４６７を含む重鎖、を含んでなるヒト化抗体（ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１）；
（ｉｉ）配列番号８（図７）で示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号２１乃至２３５を含む軽鎖、および、配列番号１６（図１１）で示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号２０乃至４６７を含む重鎖、を含んでなるヒト化抗体（ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１２／Ｌ１）；
（ｉｉｉ）配列番号８（図７）で示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号２１乃至２３５を含む軽鎖、および、配列番号１２（図９）で示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号２０乃至４６７を含む重鎖、を含んでなるヒト化抗体（ｈＦＲ２−１４＿Ｈ８／Ｌ１）；
（ｉｖ）配列番号８（図７）で示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号２１乃至２３５を含む軽鎖、および、配列番号２０（図１６）で示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号２０乃至４６７を含む重鎖、を含んでなるヒト化抗体（ｈＦＲ２−１４＿Ｈ９／Ｌ１）；
（ｖ）配列番号８（図７）で示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号２１乃至２３５を含む軽鎖、および、配列番号１４（図１０）で示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号２０乃至４６７を含む重鎖、を含んでなるヒト化抗体（ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１１／Ｌ１）；
（ｖｉ）配列番号８（図７）で示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号２１乃至２３５を含む軽鎖、および、配列番号１０（図８）で示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号２０乃至４６７を含む重鎖、を含んでなるヒト化抗体（ｈＦＲ２−１４＿Ｈ５／Ｌ１）、
（４）
該抗体が（３）の（ｉ）乃至（ｖｉ）のいずれか一つに記載の抗体の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列とそれぞれ９５％以上同一なアミノ酸配列を含む重鎖および軽鎖を含んでなり、且つヒトＦＧＦＲ２に結合する、（１）に記載の組合せ又は医薬組成物、
（５）
該抗体もしくはその機能断片が、（２）又は（３）の（ｉ）乃至（ｖｉ）のいずれか一つに記載の抗体が認識する抗原上の部位に結合する、（１）に記載の組合せ又は医薬組成物、
（６）
該抗体もしくはその機能断片が、（２）又は（３）の（ｉ）乃至（ｖｉ）のいずれか一つに記載の抗体と、ｈＦＧＦＲ２への結合において競合する、（１）に記載の組合せ又は医薬組成物、
（７）
下記の工程（ｉ）及び（ｉｉ）を含むことからなる方法により得られる抗体もしくはその機能断片および他剤の組合せ又は該抗体もしくはその機能断片および他剤を含む医薬組成物：
（ｉ）下記（ア）又は（イ）に記載の細胞を培養する工程；
（ア）下記（ａ）乃至（ｃ）のいずれか一つに記載のヌクレオチドが挿入された組換えベクター又は該ヌクレオチドが導入された組換え細胞：
（ａ）（１）乃至（６）のいずれか一つに記載の抗体の重鎖または軽鎖の一部または全部のアミノ酸配列をコードする塩基配列を含んでなるヌクレオチド；
（ｂ）（１）乃至（６）のいずれか一つに記載の抗体の重鎖または軽鎖の一部または全部のアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む塩基配列からなるヌクレオチド；
（ｃ）（１）乃至（６）のいずれか一つに記載の抗体の重鎖または軽鎖の一部または全部のアミノ酸配列をコードする塩基配列からなるヌクレオチド；
（イ）（１）乃至（６）のいずれか一つに記載の抗体又はその機能断片を産生する細胞、
および
（ｉｉ）前記工程（ｉ）で得られた培養物から（１）乃至（６）のいずれか一つに記載の抗体又はその機能断片を回収する工程、
（８）
該抗体の重鎖または軽鎖のアミノ末端またはカルボキシル末端において１乃至５個のアミノ酸が欠失してなる、（１）乃至（７）のいずれか一つに記載の組合せ又は医薬組成物、
（９）
（１）乃至（８）のいずれか一つに記載の抗体もしくはその機能断片の糖鎖修飾体および他剤の組合せ、又は、該修飾体および他剤を含む医薬組成物、
（１０）
癌の治療もしくは予防に使用される、（１）乃至（９）のいずれか一つに記載の組合せ又は医薬組成物、
（１１）
癌がｈＦＧＦＲ２陽性である、（１０）に記載の組合せ又は医薬組成物、
（１２）
該抗体もしくはその機能断片がさらなる化合物とコンジュゲートされた、（１）乃至（１１）のいずれか一つに記載の組合せ又は医薬組成物、
（１３）
他剤がトポイソメラーゼ阻害剤である、（１）乃至（１２）のいずれか一つに記載の組合せ又は医薬組成物、
（１４）
トポイソメラーゼ阻害剤と併用するための、（１）乃至（８）のいずれか一つに記載の組合せ又は組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は（９）に記載の組合せ又は組成物に含まれる修飾体を含む医薬組成物、
（１５）
トポイソメラーゼ阻害剤を含み、（１）乃至（８）のいずれか一つに記載の組合せ又は組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は（９）に記載の組合せ又は組成物に含まれる修飾体と併用することにより、該抗体、該機能断片又は該修飾体の作用を上昇させる医薬組成物、
（１６）
（１）乃至（８）のいずれか一つに記載の組合せ又は組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は（９）に記載の組合せ又は組成物に含まれる修飾体を含み、トポイソメラーゼ阻害剤と併用することにより、該トポイソメラーゼ阻害剤の作用を上昇させる医薬組成物、
（１７）
（１）乃至（８）のいずれか一つに記載の組合せ又は組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は（９）に記載の組合せ又は組成物に含まれる修飾体、および、トポイソメラーゼ阻害剤が組み合わせて投与されることを特徴とする医薬組成物、
（１８）
（１）乃至（８）のいずれか一つに記載の組合せ又は組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は（９）に記載の組合せ又は組成物に含まれる修飾体、および、トポイソメラーゼ阻害剤が、それぞれ別の製剤に有効成分として含有され、同時にまたは異なる時間に投与されることを特徴とする、（１７）に記載の医薬組成物、
（１９）
（１）乃至（８）のいずれか一つに記載の組合せ又は組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は（９）に記載の組合せ又は組成物に含まれる修飾体、および、トポイソメラーゼ阻害剤が、単一の製剤に有効成分として含有されることを特徴とする、（１７）に記載の医薬組成物、
（２０）
（１）乃至（８）のいずれか一つに記載の組合せ又は組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は（９）に記載の組合せ又は組成物に含まれる修飾体、および、トポイソメラーゼ阻害剤が組み合わせて投与されることを特徴とする癌の治療方法、
（２１）
トポイソメラーゼ阻害剤がイリノテカン、トポテカン及びエトポシドよりなる群から選択される一つ又は二つ以上である、（１３）乃至（１９）のいずれか一つに記載の医薬組成物又は（２０）に記載の治療方法、
（２２）
他剤が微小管阻害剤である、（１）乃至（１２）のいずれか一つに記載の組合せ又は医薬組成物、
（２３）
微小管阻害剤と併用するための、（１）乃至（８）のいずれか一つに記載の組合せ又は組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は（９）に記載の組合せ又は組成物に含まれる修飾体を含む医薬組成物、
（２４）
微小管阻害剤を含み、（１）乃至（８）のいずれか一つに記載の組合せ又は組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は（９）に記載の組合せ又は組成物に含まれる修飾体と併用することにより、該抗体、該機能断片又は該修飾体の作用を上昇させる医薬組成物、
（２５）
（１）乃至（８）のいずれか一つに記載の組合せ又は組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は（９）に記載の組合せ又は組成物に含まれる修飾体を含み、微小管阻害剤と併用することにより、該微小管阻害剤の作用を上昇させる医薬組成物、
（２６）
（１）乃至（８）のいずれか一つに記載の組合せ又は組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は（９）に記載の組合せ又は組成物に含まれる修飾体、および、微小管阻害剤が組み合わせて投与されることを特徴とする医薬組成物、
（２７）
（１）乃至（８）のいずれか一つに記載の組合せ又は組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は（９）に記載の組合せ又は組成物に含まれる修飾体、および、微小管阻害剤が、それぞれ別の製剤に有効成分として含有され、同時にまたは異なる時間に投与されることを特徴とする、（２６）に記載の医薬組成物、
（２８）
（１）乃至（８）のいずれか一つに記載の組合せ又は組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は（９）に記載の組合せ又は組成物に含まれる修飾体、および、微小管阻害剤が、単一の製剤に有効成分として含有されることを特徴とする、（２６）に記載の医薬組成物、
（２９）
（１）乃至（８）のいずれか一つに記載の組合せ又は組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は（９）に記載の組合せ又は組成物に含まれる修飾体、および、微小管阻害剤が組み合わせて投与されることを特徴とする癌の治療方法、
（３０）
微小管阻害剤がパクリタキセル、ドセタキセル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、エリブリン、ビンデシン及びビノレルビンよりなる群から選択される一つ又は二つ以上である、（２２）乃至（２８）のいずれか一つに記載の医薬組成物又は（２９）に記載の治療方法、
（３１）
他剤がプラチナ製剤である、（１）乃至（１２）のいずれか一つに記載の組合せ又は医薬組成物、
（３２）
プラチナ製剤と併用するための、（１）乃至（８）のいずれか一つに記載の組合せ又は組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は（９）に記載の組合せ又は組成物に含まれる修飾体を含む医薬組成物、
（３３）
プラチナ製剤を含み、（１）乃至（８）のいずれか一つに記載の組合せ又は組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は（９）に記載の組合せ又は組成物に含まれる修飾体と併用することにより、該抗体、該機能断片又は該修飾体の作用を上昇させる医薬組成物、
（３４）
（１）乃至（８）のいずれか一つに記載の組合せ又は組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は（９）に記載の組合せ又は組成物に含まれる修飾体を含み、プラチナ製剤と併用することにより、該プラチナ製剤の作用を上昇させる医薬組成物、
（３５）
（１）乃至（８）のいずれか一つに記載の組合せ又は組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は（９）に記載の組合せ又は組成物に含まれる修飾体、および、プラチナ製剤が組み合わせて投与されることを特徴とする医薬組成物、
（３６）
（１）乃至（８）のいずれか一つに記載の組合せ又は組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は（９）に記載の組合せ又は組成物に含まれる修飾体、および、プラチナ製剤が、それぞれ別の製剤に有効成分として含有され、同時にまたは異なる時間に投与されることを特徴とする、（３５）に記載の医薬組成物、
（３７）
（１）乃至（８）のいずれか一つに記載の組合せ又は組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は（９）に記載の組合せ又は組成物に含まれる修飾体、および、プラチナ製剤が、単一の製剤に有効成分として含有されることを特徴とする、（３５）に記載の医薬組成物、
（３８）
（１）乃至（８）のいずれか一つに記載の組合せ又は組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は（９）に記載の組合せ又は組成物に含まれる修飾体、および、プラチナ製剤が組み合わせて投与されることを特徴とする癌の治療方法
（３９）
プラチナ製剤がシスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン及びネダプラチンよりなる群から選択される一つ又は二つ以上である、（３１）乃至（３７）のいずれか一つに記載の医薬組成物又は（３８）に記載の治療方法、
（４０）
他剤が抗ＶＥＧＦＲ２抗体である、（１）乃至（１２）のいずれか一つに記載の組合せ又は医薬組成物、
（４１）
抗ＶＥＧＦＲ２抗体と併用するための、（１）乃至（８）のいずれか一つに記載の組合せ又は組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は（９）に記載の組合せ又は組成物に含まれる修飾体を含む医薬組成物、
（４２）
抗ＶＥＧＦＲ２抗体を含み、（１）乃至（８）のいずれか一つに記載の組合せ又は組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は（９）に記載の組合せ又は組成物に含まれる修飾体と併用することにより、該抗体、該機能断片又は該修飾体の作用を上昇させる医薬組成物、
（４３）
（１）乃至（８）のいずれか一つに記載の組合せ又は組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は（９）に記載の組合せ又は組成物に含まれる修飾体を含み、抗ＶＥＧＦＲ２抗体と併用することにより、該抗ＶＥＧＦＲ２抗体の作用を上昇させる医薬組成物、
（４４）
（１）乃至（８）のいずれか一つに記載の組合せ又は組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は（９）に記載の組合せ又は組成物に含まれる修飾体、および、抗ＶＥＧＦＲ２抗体が組み合わせて投与されることを特徴とする医薬組成物、
（４５）
（１）乃至（８）のいずれか一つに記載の組合せ又は組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は（９）に記載の組合せ又は組成物に含まれる修飾体、および、抗ＶＥＧＦＲ２抗体が、それぞれ別の製剤に有効成分として含有され、同時にまたは異なる時間に投与されることを特徴とする、（４４）に記載の医薬組成物、
（４６）
（１）乃至（８）のいずれか一つに記載の組合せ又は組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は（９）に記載の組合せ又は組成物に含まれる修飾体、および、抗ＶＥＧＦＲ２抗体が、単一の製剤に有効成分として含有されることを特徴とする、（４４）に記載の医薬組成物、
（４７）
（１）乃至（８）のいずれか一つに記載の組合せ又は医薬組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は（９）に記載の組合せ又は組成物に含まれる修飾体、および、抗ＶＥＧＦＲ２抗体が組み合わせて投与されることを特徴とする癌の治療方法、
（４８）
抗ＶＥＧＦＲ２抗体がラムシルマブである、（４０）乃至（４６）のいずれか一つに記載の医薬組成物又は（４７）に記載の治療方法、
（４９）
他剤が５−フルオロウラシル系抗がん剤である、（１）乃至（１２）のいずれか一つに記載の組合せ又は医薬組成物、
（５０）
５−フルオロウラシル系抗がん剤と併用するための、（１）乃至（８）のいずれか一つに記載の組合せ又は組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は（９）に記載の組合せ又は組成物に含まれる修飾体を含む医薬組成物、
（５１）
５−フルオロウラシル系抗がん剤を含み、（１）乃至（８）のいずれか一つに記載の組合せ又は組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は（９）に記載の組合せ又は組成物に含まれる修飾体と併用することにより、該抗体、該機能断片又は該修飾体の作用を上昇させる医薬組成物、
（５２）
（１）乃至（８）のいずれか一つに記載の組合せ又は組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は（９）に記載の組合せ又は組成物に含まれる修飾体を含み、５−フルオロウラシル系抗がん剤と併用することにより、該５−フルオロウラシル系抗がん剤の作用を上昇させる医薬組成物、
（５３）
（１）乃至（８）のいずれか一つに記載の組合せ又は組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は（９）に記載の組合せ又は組成物に含まれる修飾体、および、５−フルオロウラシル系抗がん剤が組み合わせて投与されることを特徴とする医薬組成物、
（５４）
（１）乃至（８）のいずれか一つに記載の組合せ又は組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は（９）に記載の組合せ又は組成物に含まれる修飾体、および、５−フルオロウラシル系抗がん剤が、それぞれ別の製剤に有効成分として含有され、同時にまたは異なる時間に投与されることを特徴とする、（５３）に記載の医薬組成物、
（５５）
（１）乃至（８）のいずれか一つに記載の組合せ又は組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は（９）に記載の組合せ又は組成物に含まれる修飾体、および、５−フルオロウラシル系抗がん剤が、単一の製剤に有効成分として含有されることを特徴とする、（５３）に記載の医薬組成物、
（５６）
（１）乃至（８）のいずれか一つに記載の組合せ又は組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は（９）に記載の組合せ又は組成物に含まれる修飾体、および、５−フルオロウラシル系抗がん剤が組み合わせて投与されることを特徴とする癌の治療方法、及び、
（５７）
５−フルオロウラシル系抗がん剤がフルオロウラシル、テガフール、テガフール・ギメラシル・オテラシルカリウム、テガフール・ウラシル、カペシタビン、カルモフール、ドキシフルリジンである、（４９）乃至（５５）のいずれか一つに記載の医薬組成物又は（５６）に記載の治療方法、等に関する。
本発明の提供する抗体および他剤の組合せを用いることにより各種癌の治療または予防が可能となる。
ヒト化ＦＲ２−１４抗体軽鎖（ｈＦＲ２−１４＿Ｌ１）のＣＤＲ１のアミノ酸配列（配列表の配列番号１） ヒト化ＦＲ２−１４抗体軽鎖（ｈＦＲ２−１４＿Ｌ１）のＣＤＲ２のアミノ酸配列（配列表の配列番号２） ヒト化ＦＲ２−１４抗体軽鎖（ｈＦＲ２−１４＿Ｌ１）のＣＤＲ３のアミノ酸配列（配列表の配列番号３） ヒト化ＦＲ２−１４抗体重鎖（ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９）のＣＤＲ１のアミノ酸配列（配列表の配列番号４） ヒト化ＦＲ２−１４抗体重鎖（ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９）のＣＤＲ２のアミノ酸配列（配列表の配列番号５） ヒト化ＦＲ２−１４抗体重鎖（ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９）のＣＤＲ３のアミノ酸配列（配列表の配列番号６） ｈＦＲ２−１４＿Ｌ１のアミノ酸配列（配列表の配列番号８）。うちアミノ酸番号１乃至２０はシグナル配列であり、通常大部分の成熟ｈＦＲ２−１４＿Ｌ１のアミノ酸配列には含まれない。可変領域はアミノ酸番号２１乃至１３０、定常領域はアミノ酸番号１３１乃至２３５。 ｈＦＲ２−１４＿Ｈ５のアミノ酸配列（配列表の配列番号１０）。うちアミノ酸番号１乃至１９はシグナル配列であり、通常大部分の成熟ｈＦＲ２−１４＿Ｈ５のアミノ酸配列には含まれない。可変領域はアミノ酸番号２０乃至１３７、定常領域はアミノ酸番号１３８乃至４６７。 ｈＦＲ２−１４＿Ｈ８のアミノ酸配列（配列表の配列番号１２）。うちアミノ酸番号１乃至１９はシグナル配列であり、通常大部分の成熟ｈＦＲ２−１４＿Ｈ８のアミノ酸配列には含まれない。可変領域はアミノ酸番号２０乃至１３７、定常領域はアミノ酸番号１３８乃至４６７。 ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１１のアミノ酸配列（配列表の配列番号１４）。うちアミノ酸番号１乃至１９はシグナル配列であり、通常大部分の成熟ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１１のアミノ酸配列には含まれない。可変領域はアミノ酸番号２０乃至１３７、定常領域はアミノ酸番号１３８乃至４６７。 ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１２のアミノ酸配列（配列表の配列番号１６）。うちアミノ酸番号１乃至１９はシグナル配列であり、通常大部分の成熟ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１２のアミノ酸配列には含まれない。可変領域はアミノ酸番号２０乃至１３７、定常領域はアミノ酸番号１３８乃至４６７。 ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９のアミノ酸配列（配列表の配列番号１８）。うちアミノ酸番号１乃至１９はシグナル配列であり、通常大部分の成熟ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９のアミノ酸配列には含まれない。可変領域はアミノ酸番号２０乃至１３７、定常領域はアミノ酸番号１３８乃至４６７。 ヒト胃癌細胞株ＳＮＵ−１６移植ヌードマウスにおける、ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１単独投与、ＣＰＴ−１１単独投与およびｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１とＣＰＴ−１１の併用投与でのｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍効果を示した図。シンボル無しは無処置対照群、シンボル丸はｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１ １０ｍｇ／ｋｇ、シンボル三角はＣＰＴ−１１ ４０ｍｇ／ｋｇ、シンボル四角はｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１ １０ｍｇ／ｋｇ＋ＣＰＴ−１１ ４０ｍｇ／ｋｇを示す。 ヒト胃癌細胞株ＳＮＵ−１６移植ＮＯＤ−ｓｃｉｄマウスにおける、ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１単独投与、Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ単独投与またはｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１とＰａｃｌｉｔａｘｅｌの併用投与でのｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍効果を示した図。シンボル無しは無処置対照群、シンボル丸はｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１ １０ｍｇ／ｋｇ、シンボル三角はＰａｃｌｉｔａｘｅｌ １５ｍｇ／ｋｇ、シンボル四角はｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１ １０ｍｇ／ｋｇ＋Ｐａｃｌｔａｘｅｌ １５ｍｇ／ｋｇを示す。 ヒト肺癌細胞株ＫＮＳ−６２移植ＮＯＤ−ｓｃｉｄマウスにおける、ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１単独投与、Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ単独投与またはｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１とＣｉｓｐｌａｔｉｎの併用投与でのｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍効果を示した図。シンボル無しは無処置対照群、シンボル丸はｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１ １０ｍｇ／ｋｇ、シンボル三角はＣｉｓｐｌａｔｉｎ ５ｍｇ／ｋｇ、シンボル四角はｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１ １０ｍｇ／ｋｇ＋Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ ５ｍｇ／ｋｇを示す。 ヒト化ＦＲ２−１４重鎖（ｈＦＲ２−１４＿Ｈ９）のアミノ酸配列（配列番号２０）。うちアミノ酸番号１乃至１９はシグナル配列であり、通常大部分の成熟ｈＦＲ２−１４＿Ｈ ９のアミノ酸配列には含まれない。可変領域はアミノ酸番号２０乃至１３７、定常領域はアミノ酸番号１３８乃至４６７。 ヒト胃癌細胞株ＳＮＵ−１６移植ヌードマウスにおける、ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１単独投与、Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ単独投与またはｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１とＣｉｓｐｌａｔｉｎの併用投与でのｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍効果を示した図。シンボル無しは無処置対照群、シンボル丸はｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１ １ｍｇ／ｋｇ、シンボル三角はＣｉｓｐｌａｔｉｎ ５ｍｇ／ｋｇ、シンボル四角はｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１ １ｍｇ／ｋｇ＋Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ ５ｍｇ／ｋｇを示す。 ヒト胃癌細胞株ＳＮＵ−１６移植ヌードマウスにおける、ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１単独投与、Ｄｏｃｅｔａｘｅｌ単独投与またはｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１とＤｏｃｅｔａｘｅｌの併用投与でのｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍効果を示した図。シンボル無しは無処置対照群、シンボル丸はｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１ １ｍｇ／ｋｇ、シンボル三角はＤｏｃｅｔａｘｅｌ １ｍｇ／ｋｇ、シンボル四角はｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１ １ｍｇ／ｋｇ＋Ｄｏｃｅｔａｘｅｌ １ｍｇ／ｋｇを示す。 ヒト胃癌細胞株ＳＮＵ−１６移植ヌードマウスにおける、ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１単独投与、抗ＶＥＧＦＲ２抗体単独投与またはｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１と抗ＶＥＧＦＲ２抗体の併用投与でのｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍効果を示した図。シンボル無しは無処置対照群、シンボル丸はｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１ １ｍｇ／ｋｇ、シンボル三角は抗ＶＥＧＦＲ２抗体 ２０ｍｇ／ｋｇ、シンボル四角はｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１ １ｍｇ／ｋｇ＋抗ＶＥＧＦＲ２抗体 ２０ｍｇ／ｋｇを示す。 ヒト胃癌細胞株ＳＮＵ−１６移植ヌードマウスにおける、ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１単独投与、５−ＦＵ単独投与またはｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１と５−ＦＵの併用投与でのｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍効果を示した図。シンボル無しは無処置対照群、シンボル丸はｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１ １ｍｇ／ｋｇ、シンボル三角は５−ＦＵ ５０ｍｇ／ｋｇ、シンボル四角はｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１ １ｍｇ／ｋｇ＋５−ＦＵ ５０ｍｇ／ｋｇを示す。
１．定義
本発明において、「遺伝子」とは、蛋白質のアミノ酸をコードする塩基配列が含まれるヌクレオチドまたはその相補鎖を意味し、例えば、蛋白質のアミノ酸をコードする塩基配列が含まれるヌクレオチドまたはその相補鎖であるポリヌクレオチド、オリゴヌクレオチド、ＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ｃＲＮＡ等は「遺伝子」の意味に含まれる。かかる遺伝子は一本鎖、二本鎖又は三本鎖以上のヌクレオチドであり、ＤＮＡ鎖とＲＮＡ鎖の会合体、一本のヌクレオチド鎖上にリボヌクレオチド（ＲＮＡ）とデオキシリボヌクレオチド（ＤＮＡ）が混在するもの及びそのようなヌクレオチド鎖を含む二本鎖又は三本鎖以上のヌクレオチドも「遺伝子」の意味に含まれる。本発明の「ＦＧＦＲ２遺伝子」としては、例えば、ＦＧＦＲ２蛋白質のアミノ酸配列をコードする塩基配列が含まれるＤＮＡ、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、ｃＲＮＡ等をあげることができる。
本発明において、「ヌクレオチド」、「核酸」および「核酸分子」は同義であり、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、プローブ、オリゴヌクレオチド、ポリヌクレオチド、プライマー等も「ヌクレオチド」の意味に含まれる。かかるヌクレオチドは一本鎖、二本鎖又は三本以上の鎖からなるヌクレオチドであり、ＤＮＡ鎖とＲＮＡ鎖の会合体、一本のヌクレオチド鎖上にリボヌクレオチド（ＲＮＡ）とデオキシリボヌクレオチド（ＤＮＡ）が混在するもの及びそのようなヌクレオチド鎖を含む二本鎖又は三本以上の鎖の会合体も「ヌクレオチド」の意味に含まれる。
本発明において、「ポリペプチド」、「ペプチド」および「蛋白質」は同義である。
本発明において、「抗原」を「免疫原」の意味に用いることがある。
本発明において、「細胞」には、動物個体に由来する各種細胞、継代培養細胞、初代培養細胞、細胞株、組換え細胞及び微生物等も含まれる。
本発明においては、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｃ、ＦＧＦＲ３、ＦＧＦＲｓ等を認識する抗体を、それぞれ「抗ＦＧＦＲ２抗体」、「抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ抗体」、「抗ＦＧＦＲ２ＩＩＩｃ抗体」、「抗ＦＧＦＲ３抗体」及び「抗ＦＧＦＲｓ抗体」等と表記することがある。かかる抗体には、キメラ化抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体等が含まれる。
本発明における「抗体の機能断片」とは、元の抗体が奏する機能の少なくとも一部を奏する抗体断片を意味する。「抗体の機能断片」としては、例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ’、一本鎖免疫グロブリン等をあげることができるが、それらに限定されるものではない。かかる抗体の機能断片は、抗体蛋白質の全長分子をパパイン、ペプシン等の酵素で処理することによって得られたものに加え、組換え遺伝子を用いて適当な宿主細胞において産生された組換え蛋白質であってもよい。
本発明において、抗体が結合する「部位」、すなわち抗体が認識する「部位」とは、抗体が結合又は認識する抗原上の部分ペプチド又は部分高次構造を意味する。本発明においては、かかる部位のことをエピトープ、抗体の結合部位とも呼ぶ。本発明の抗ＦＧＦＲ２抗体が結合又は認識するＦＧＦＲ２蛋白質上の部位としては、ＦＧＦＲ２蛋白質上の部分ペプチド又は部分高次構造等を例示することができる。
抗体分子の重鎖及び軽鎖にはそれぞれ３箇所の相補性決定領域（ＣＤＲ：Ｃｏｍｐｌｅｍｅｔａｒｉｔｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎ）があることが知られている。相補性決定領域は、超可変領域（ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ ｄｏｍａｉｎ）とも呼ばれ、抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域内にあって、一次構造の変異性が特に高い部位であり、重鎖及び軽鎖のポリペプチド鎖の一次構造上において、通常、それぞれ３ヶ所に分離している。本発明においては、抗体の相補性決定領域について、重鎖の相補性決定領域を重鎖アミノ酸配列のアミノ末端側からＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、ＣＤＲＨ３と表記し、軽鎖の相補性決定領域を軽鎖アミノ酸配列のアミノ末端側からＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２、ＣＤＲＬ３と表記する。これらの部位は立体構造の上で相互に近接し、結合する抗原に対する特異性を決定している。
本発明において、「抗体変異体」とは、元の抗体が有するアミノ酸配列においてアミノ酸が置換、欠失、付加及び／又は挿入（以下、「変異」と総称する）してなるアミノ酸配列を有し、且つ本発明のＦＧＦＲ２蛋白質に結合するポリペプチドを意味する。かかる抗体変異体における変異アミノ酸の数は、１乃至２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１５、２０、２５、３０、４０又は５０個である。かかる抗体変異体も本発明の「抗体」に包含される。
本発明において、「１乃至数個」における「数個」とは、３乃至１０個を指す。
本発明の抗体が奏する活性・性質としては、例えば、生物的活性、理化学的性質等を挙げることができ、具体的には、各種生物活性、抗原やエピトープに対する結合活性、製造や保存時における安定性、熱安定性等をあげることができる。
本発明において、「ストリンジェントな条件下でハイブリダイズする」とは、５×ＳＳＣを含む溶液中で６５℃にてハイブリダイゼーションを行い、ついで２×ＳＳＣ−０．１％ＳＤＳを含む水溶液中で６５℃にて２０分間、０．５×ＳＳＣ−０．１％ＳＤＳを含む水溶液中で６５℃にて２０分間、ならびに、０．２×ＳＳＣ−０．１％ＳＤＳを含む水溶液中で６５℃にて２０分間、それぞれ洗浄する条件又はそれと同等の条件でハイブリダイズすることを意味する。ＳＳＣとは１５０ｍＭ ＮａＣｌ−１５ｍＭクエン酸ナトリウムの水溶液であり、ｎ×ＳＳＣはｎ倍濃度のＳＳＣを意味する。
本発明において「細胞傷害」とは、何らかの形で、細胞に病理的な変化をもたらすことを指し、直接的な外傷にとどまらず、ＤＮＡの切断や塩基の二量体の形成、染色体の切断、細胞分裂装置の損傷、各種酵素活性の低下などあらゆる細胞の構造や機能上の損傷を意味する。本発明において「細胞傷害活性」とは上記細胞傷害を引き起こすことを意味する。
本発明において「抗体依存性細胞傷害活性」とは、「ａｎｔｉｂｏｄｙ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｃｕｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ（ＡＤＣＣ）活性」を指し、ＮＫ細胞が抗体を介して腫瘍細胞等の標的細胞を傷害する作用活性を意味する。
本発明において「抗体依存性細胞媒介食活性」とは「ａｎｄｉｂｏｄｙ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｅｌｌ ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ（ＡＤＣＰ）活性」を指し、単球やマクロファージ細胞が抗体を介して腫瘍細胞等の標的細胞を貪食する作用活性を意味する。「抗体依存性貪食活性」ともいう。
本発明において「補体依存性細胞傷害作用活性」とは、「ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ（ＣＤＣ）活性」を指し、補体が抗体を介して腫瘍細胞等の標的細胞を傷害する作用活性を意味する。
本発明において「癌」と「腫瘍」は同じ意味で用いられる。
本発明において「他の有効成分」又は「他の薬剤」とは、抗ＦＧＦＲ２抗体と組み合わせて使われるか、または本発明の医薬組成物に抗ＦＧＦＲ２抗体とともに含まれる疾患の治療又は予防活性を有する成分又は薬剤である。好適な態様において、かかる組合せまたは医薬組成物は癌の治療又は予防に有効であり、より好適な態様において、医薬組成物は癌の治療又は予防において相乗効果を示す。
本発明において「相乗効果」とは、複数の有効成分を組み合わせて使用した場合または複数の有効成分を１つの医薬組成物に含有せしめた場合、それぞれを有効成分が示す抗癌活性を加算したより強い抗癌活性を示すことをいう。例えば、有効成分ＡおよびＢの奏する抗癌活性がそれぞれａおよびｂであって、ＡとＢを組み合わせて使用するかまたはＡとＢを１つの医薬組成物に含有せしめて使用した場合に、その抗癌活性がａとｂを加算したより大きければ、該組合せまたは医薬組成物は相乗効果を奏するとみなすことができる。別の例として、有効成分ＡおよびＢの奏する抗癌活性がそれぞれａおよびゼロ（０：すなわちＢが抗癌活性を奏さない濃度）であって、ＡとＢを組み合わせて使用しするかまたはＡとＢを１つの医薬組成物に含有せしめた場合、その抗癌活性がａより大きければ、該組合せまたは医薬組成物は相乗効果を奏するとみなすことができる。また別の例として、有効成分ＡおよびＢの奏する抗癌活性がいずれもゼロ（０：すなわちＡとＢがいずれも抗癌活性を奏さない濃度）であって、ＡとＢを組み合わせて使用しするかまたはＡとＢを１つの医薬組成物に含有せしめた場合、その抗癌活性がゼロ（０）より大きければ、該組合せまたは医薬組成物は相乗効果を奏するとみなすことができる。
２．抗原蛋白質
（２−１）特性
ＦＧＦＲｓは線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）に結合する受容体蛋白質である。本発明において、ＦＧＦＲｓは脊椎動物由来、好適には哺乳動物由来であり、より好適にはヒト由来である。ヒトＦＧＦ及びＦＧＦＲｓは、２２のＦＧＦ（ＦＧＦ１乃至１４、および、ＦＧＦ１６乃至２３）、ならびにチロシンキナーゼドメインを有する４つのＦＧＦＲ（ＦＧＦＲ１乃至４）にそれぞれ分類される。ＦＧＦＲｓは、２つあるいは３つの免疫グロブリン様ドメイン（ＩｇＤ１乃至３）から成るリガンド結合部位を含む細胞外領域、１回膜貫通領域、およびチロシンキナーゼドメインを含む細胞内領域から構成されている。このうち、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２およびＦＧＦＲ３には、ＩＩＩｂおよびＩＩＩｃと呼ばれる各２つのスプライシングバリアントが存在する。これらのアイソフォームはＩｇＤ３の後半において約５０のアミノ酸配列が異なっており、異なる組織分布およびリガンド特異性を示す。ＦＧＦＲｓは次のような活性を有する：（１）ＦＧＦに結合する；（２）かかる結合によりＦＧＦＲｓは二量体化する；（３）かかる二量体化によりＦＧＦＲｓの特定のチロシン残基がリン酸化される；（４）かかるリン酸化によりＦＧＦＲ基質２α（ＦＲＳ２α）等のアダプター蛋白質のリクルートが促進される；（５）該ＦＧＦＲｓを発現している細胞又は組織にＦＧＦ刺激によるシグナルを伝達するか又はシグナル伝達を活性化する。
本発明においてＦＧＦＲ２蛋白質は以下の性質を有する。
（ｉ）ＦＧＦに結合する。
ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ蛋白質は、通常、ＦＧＦ１、ＦＧＦ３、ＦＧＦ７（ＫＧＦ）、ＦＧＦ１０，ＦＧＦ２２及びＦＧＦ２３からなる群より選択される１又は２以上に結合するが、他のＦＧＦに結合してもよく、変異型の場合は前記群に含まれるＦＧＦであっても結合しないことがある。
ＦＧＦＲ２ＩＩＩｃ蛋白質は、通常、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ４、ＦＧＦ６、ＦＧＦ９、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ２１、ＦＧＦ２３からなる群より選択される１又は２以上に結合する。他のＦＧＦに結合してもよく、変異型の場合は前記群に含まれるＦＧＦであっても結合しないことがある。
（ｉｉ）ＦＧＦＲ２発現細胞又は組織内にＦＧＦ刺激により生じるシグナルを伝達する。
ＦＧＦ刺激により生じるシグナル伝達としては、特に限定されるものではないが、例えば、ＦＧＦＲ２自己リン酸化、ＦＧＦＲ基質のリクルート及びその促進、それらを介したＭＡＰＫ，ＰＩ３Ｋ、Ａｋｔ、細胞外シグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）等のシグナル経路の活性化等をあげることができる。ＦＧＦＲ基質としては、ＦＧＦＲ基質２α（ＦＲＳ２α）等を例示することができる。
かかるシグナル伝達の活性化及びその抑制を評価するための試験方法は、特に限定されものではなく、公知の方法から任意に選択することができるが、例えば、ＥＲＫシグナル伝達を評価する系として、後述のＥｌｋ１ルシフェラーゼレポーターアッセイをあげることができる。
（ｉｉｉ）本発明においてＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ蛋白質は、次の（ａ）乃至（ｄ）のいずれか一つに記載のアミノ酸配列（以下、「ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂアミノ酸配列」という）を含んでなるか、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂアミノ酸配列を含むアミノ酸配列からなるか、またはＦＧＦＲ２ＩＩＩｂアミノ酸配列からなる：
（ａ）ＮＰ＿０７５２５９のアミノ酸配列；
（ｂ）ＮＰ＿０７５２５９のアミノ酸配列と８０％、８２％、８４％、８６％、８８％、９０％、９２％、９４％、９６％、９８％又は９９％以上の配列同一性を示し且つＦＧＦ結合活性を有するポリペプチドのアミノ酸配列；
（ｃ）ＮＰ＿０７５２５９のアミノ酸配列において１乃至５０，４０、３５、３０、２５、２０、１５、１２、１０、８、６、５、４、３もしくは２個、または１個のアミノ酸が置換、欠失、付加または挿入してなり且つＦＧＦ結合活性を有するポリペプチドのアミノ酸配列；及び、
（ｄ）ＮＰ＿０７５２５９のアミノ酸配列をコードする塩基配列に相補的な塩基配列を有するヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチドの有する塩基配列によりコードされ、且つ、ＦＧＦ結合活性を有するポリペプチドのアミノ酸配列。
（ｂ）乃至（ｄ）記載のいずれか一つに記載のポリペプチドは、ＦＧＦ結合活性に加え、ＦＧＦＲ２の有する他の活性を有していてもよい。
本発明においてＦＧＦＲ２ＩＩＩｃ蛋白質は、次の（ａ）乃至（ｄ）のいずれか一つに記載のアミノ酸配列（以下、「ＦＧＦＲ２ＩＩＩｃアミノ酸配列」という）を含んでなるか、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｃアミノ酸配列を含むアミノ酸配列からなるか、またはＦＧＦＲ２ＩＩＩｃアミノ酸配列からなる：
（ａ）ＮＰ＿０００１３２のアミノ酸配列；
（ｂ）ＮＰ＿０００１３２のアミノ酸配列と８０％以上、８２％以上、８４％以上、８６％以上、８８％以上、９０％以上、９２％以上、９４％以上、９６％以上、９８％以上又は９９％以上の配列同一性を示し且つＦＧＦ結合活性を有するポリペプチドのアミノ酸配列；
（ｃ）ＮＰ＿０００１３２のアミノ酸配列において１乃至５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１２、１０、８、６、５、４、３もしくは２個、または１個のアミノ酸が置換、欠失、付加または挿入してなり且つＦＧＦ結合活性を有するポリペプチドのアミノ酸配列；及び、
（ｄ）ＮＰ＿０００１３２のアミノ酸配列をコードする塩基配列に相補的な塩基配列を有するヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチドの有する塩基配列によりコードされ、且つ、ＦＧＦ結合活性を有するポリペプチドのアミノ酸配列。
（ｂ）乃至（ｄ）記載のいずれか一つに記載のポリペプチドは、ＦＧＦ結合活性に加え、ＦＧＦＲ２の有する他の活性を有していてもよい。
本発明のＦＧＦＲ２蛋白質は天然型（非組換型）及び組換え型のいずれであってもよい。また、担体やタグなど他のペプチドや蛋白質との融合物もＦＧＦＲ２蛋白質の意味に含まれる。さらに、ＰＥＧ等のポリマー付加を含む化学修飾、及び／又は、糖鎖修飾を含む生物学的修飾がなされたものもＦＧＦＲ２蛋白質の意味に含まれる。また、ＦＧＦＲ２蛋白質断片も本発明のＦＧＦＲ２蛋白質の意味に含まれる。ＦＧＦＲ２蛋白質断片のうち上記（ｉ）及び／又は（ｉｉ）に記載の性質を具備したものをＦＧＦＲ２蛋白質機能断片と呼ぶ。
（２−２）抗原遺伝子
本発明においてＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ遺伝子は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂアミノ酸配列をコードする塩基配列（以下、「ＦＧＦＲ２遺伝子配列」という）を含んでなるか、ＦＧＦＲ２遺伝子配列を含む塩基配列からなるか、またはＦＧＦＲ２遺伝子配列からなる。 本発明においてＦＧＦＲ２ＩＩＩｃ遺伝子は、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｃアミノ酸配列をコードする塩基配列（以下、「ＦＧＦＲ２遺伝子配列」という）を含んでなるか、ＦＧＦＲ２遺伝子配列を含む塩基配列からなるか、またはＦＧＦＲ２遺伝子配列からなる。
（２−３）抗原蛋白質の調製
本発明のＦＧＦＲ２蛋白質は、動物組織（体液を含む）、該組織由来の細胞もしくは該細胞培養物からの精製及び単離、遺伝子組換え、インビトロ翻訳、化学合成等により調製することができる。
３．抗体
（３−１）抗体の分類
本発明の抗体は、モノクローナル抗体およびポリクローナル抗体のいずれであってもよい。本発明のモノクローナル抗体としては、非ヒト動物由来の抗体（非ヒト動物抗体）、ヒト由来の抗体（ヒト抗体）、キメラ化抗体（「キメラ抗体」ともいう）、ヒト化抗体等をあげることができる。
非ヒト動物抗体としては、哺乳類、鳥類等の脊椎動物に由来する抗体等をあげることができる。哺乳類由来の抗体としては、マウス抗体、ラット抗体等げっ歯類由来の抗体等をあげることができる。鳥類由来の抗体としては、ニワトリ抗体等をあげることができる。抗ヒトＦＧＦＲ２ラットモノクローナル抗体としては、ＦＲ２−１０、ＦＲ２−１３、ＦＲ２−１４（ＷＯ２０１３／１５４２０６）等をあげることができる。
キメラ化抗体としては、非ヒト動物抗体由来の可変領域とヒト抗体（ヒト免疫グロブリン）定常領域とを結合してなる抗体等をあげることができるが、それに限定されるものではない。非ヒト動物抗体由来の可変領域とヒト抗体定常領域が結合してなるキメラ化抗体としては、前述のラットモノクローナル抗体ＦＲ２−１０、ＦＲ２−１３又はＦＲ２−１４由来の重鎖及び軽鎖可変領域、ならびに、ヒト重鎖及び軽鎖定常領域を有する、ｃＦＲ２−１０、ｃＦＲ２−１３、ｃＦＲ２−１４（ＷＯ２０１３／１５４２０６）等をそれぞれあげることができる。
ヒト化抗体としては、非ヒト動物抗体の可変領域中のＣＤＲをヒト抗体（ヒト免疫グロブリンの可変領域）に移植したもの、ＣＤＲに加え非ヒト動物抗体のフレームワーク領域の配列も一部ヒト抗体に移植したもの、それらのいずれかの非ヒト動物抗体由来の１つ又は２つ以上のアミノ酸をヒト型のアミノ酸で置換したもの等をあげることができるが、それらに限定されるものではない。非ヒト動物抗体の可変領域中のＣＤＲとしては、前述のＦＲ２−１０、ＦＲ２−１３又はＦＲ２−１４由来の重鎖可変領域中のＣＤＲＨ１乃至ＣＤＲＨ３および軽鎖可変領域中のＣＤＲＬ１乃至ＣＤＲＬ３、それらのＣＤＲのアミノ酸配列において１又は２個のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されたもの等を例示することができる。
ヒト抗体としては、本発明の抗原を認識する抗体であれば特に限定されるものではないが、本発明の抗体のＣＤＲを有する抗体と同一の部位に結合するヒト抗体、前述のＦＲ２−１０，ＦＲ２−１３又はＦＲ２−１４とＦＧＦＲ２上で同一の部位に結合するヒト抗体等を例示することができる。
本発明における抗体は、ＦＧＦＲ２に結合する活性を有していれば、複数の異なる抗体に由来する部分から構成される抗体であってもよく、例えば、複数の異なる抗体間で重鎖及び／又は軽鎖を交換したもの、重鎖及び／又は軽鎖の全長を交換したもの、可変領域のみ又は定常領域のみを交換したもの、ＣＤＲの全部又は一部のみを交換したもの等をあげることができる。キメラ化抗体の重鎖可変領域と軽鎖可変領域は、異なる本発明の抗体に由来してもよい。ヒト化抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域中のＣＤＲＨ１乃至ＣＤＲＨ３並びにＣＤＲＬ１乃至ＣＤＲＬ３は、２種又はそれ以上の本発明の抗体に由来してもよい。ヒト抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域中のＣＤＲＨ１乃至ＣＤＲＨ３並びにＣＤＲＬ１乃至ＣＤＲＬ３は、２種又はそれ以上の本発明の抗体が有するＣＤＲの組合せであってもよい。そのような複数の異なる抗体に由来する部分から構成される抗体は、（３−３）乃至（３−６）記載の１つ又は２つ以上の活性を有していてもよい。
本発明のモノクローナル抗体のアイソタイプは特に限定されるものではないが、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４等のＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２等のＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ等をあげることができ、好適にはＩｇＧおよびＩｇＭを挙げることができる。
（３−２）抗体の結合特異性
本発明の抗体はＦＧＦＲ２蛋白質を認識する。言い換えれば、本発明の抗体はＦＧＦＲ２蛋白質に結合する。かかる抗体は「抗ＦＧＦＲ２抗体」と表記される。また、本発明の好適な抗体はＦＧＦＲ２蛋白質を特異的に認識する。言い換えれば、本発明の好適な抗体はＦＧＦＲ２蛋白質に特異的に結合する。さらに、本発明の、より好適な抗体はＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ蛋白質及び／又はＦＧＦＲ２ＩＩＩｃ蛋白質に特異的に結合し、より一層好適な抗体はＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ蛋白質及び／又はＦＧＦＲ２ＩＩＩｃ蛋白質の有する免疫グロブリン様ドメイン（以下、「Ｉｇ様ドメイン」という）に特異的に結合する。かかるＩｇ様ドメインとしては、Ｉｇ様ドメイン２、Ｉｇ様ドメイン３等を例示することができる。
本発明において「特異的な認識」、すなわち「特異的な結合」とは、非特異的な吸着ではない結合を意味する。結合が特異的であるか否かの判定基準としては、例えば、解離定数（Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｃｏｎｓｉｔａｎｔ：以下、「ＫＤという」）をあげることができる。本発明の好適な抗体のＦＧＦＲ２蛋白質に対するＫＤ値は１×１０−５Ｍ以下、５×１０−６Ｍ以下、２×１０−６Ｍ以下または１×１０−６Ｍ以下、より好適には５×１０−７Ｍ以下、２×１０−７Ｍ以下または１×１０−７Ｍ以下、より一層好適には５×１０−８Ｍ以下、２×１０−８Ｍ以下または１×１０−８Ｍ以下、さらにより一層好適には５×１０−９Ｍ以下、２×１０−９Ｍ以下または１×１０−９Ｍ以下、最適には５×１０−１０Ｍ以下、２×１０−１０Ｍ以下または１×１０−１０Ｍ以下である。
本発明における抗原と抗体の結合は、ＥＬＩＳＡ法、ＲＩＡ法、Ｓｕｒｆａｃｅ Ｐｌａｓｍｏｎ Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ解析法等により測定または判定することができる。
（３−３）抗体の抗腫瘍活性
本発明の抗体は、抗腫瘍活性を有し、好適にはイン・ビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）で抗腫瘍活性を有する。本発明において、抗腫瘍活性と抗癌活性は同義である。
本発明において、抗腫瘍活性とは、腫瘍組織及び／又は腫瘍細胞の増殖、悪性化、浸潤、転移、腫瘍サイズ増大又は重量増加等を抑制する活性を意味する。
抗腫瘍活性は、定法に従って評価することができる。イン・ビボ抗腫瘍活性は、例えば、ヒト癌組織又は癌細胞を移植した非ヒト動物モデル（ゼノグラフト）を用いることにより、ヒト腫瘍に対する効果を評価することができる。ゼノグラフトに用いる非ヒト動物としては、ヌードマウス等のマウスやラット等をあげることができる。
また、抗腫瘍活性は、癌細胞の細胞増殖に対する抑制または阻害活性としても評価することができる。
（３−４）抗体の細胞傷害活性
本発明の抗ＦＧＦＲ２抗体は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性及び/又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）活性及び／又は抗体依存性細胞媒介食活性（ＡＤＣＰ）活性を有していてもよい。本発明の好適な抗体はＡＤＣＣ活性を有し、より好適な抗体は、ＦＧＦＲ２発現細胞に対してＡＤＣＣ活性を有する。ＡＤＣＣ活性、ＣＤＣ活性およびＡＤＣＰ活性は公知の方法により測定することができる。
（３−５）シグナル伝達に対する抗体の作用
本発明の抗ＦＧＦＲ２抗体の有する生物学的活性及び性質は、ＦＧＦＲ２を介したＦＧＦシグナルを通じて評価することもできる。ＦＧＦＲ２を介したＦＧＦ刺激によるシグナル伝達としては、特に限定されるものではないが、例えば、ＦＧＦＲ２自己リン酸化、ＦＧＦＲ基質のリクルート及びその促進、それらを介したＭＡＰＫ，ＰＩ３Ｋ、Ａｋｔ、細胞外シグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）等のシグナル経路の活性化等をあげることができる。
また、本発明の好適な抗体はＦＧＦＲ２に対する中和活性を有し、より好適にはＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ及び／又はＦＧＦＲ２ＩＩＩｃに対する中和活性を有する。中和活性とは、ＦＧＦＲ２のリガンドによるＦＧＦＲ２活性化を阻害又は抑制する活性を意味する。例えば、ＦＧＦ依存性のＦＧＦＲ２介在性シグナル、シグナル伝達等を阻害する抗体は、かかる中和活性を有すると判定することができる。
（３−６）抗体の受容体−リガンド間の結合を阻害する活性
本発明の好適な抗体はＦＧＦＲ２とそのリガンドの結合を阻害し、より好適にはＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ及び／又はＦＧＦＲ２ＩＩＩｃとＦＧＦの結合を阻害する。かかる受容体−リガンド間の結合阻害は、競合的阻害および非競合的阻害のいずれであってもよい。ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂおよびＦＧＦＲ２ＩＩＩｃに対するリガンドとしては、ＦＧＦ１、ＦＧＦ３、ＦＧＦ７、ＦＧＦ１０、ＦＧＦ２２およびＦＧＦ２３、ならびに、ＦＧＦ１、ＦＧＦ２、ＦＧＦ４、ＦＧＦ６、ＦＧＦ９、ＦＧＦ１７、ＦＧＦ１８、ＦＧＦ２１およびＦＧＦ２３を、それぞれ例示することができる。
（３−７）モノクローナル抗体
本発明はモノクローナル抗体を提供する。モノクローナル抗体には、ラット抗体、マウス抗体、ウサギ抗体、ニワトリ抗体、魚類抗体等の非ヒト動物由来のモノクローナル抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、それらの機能断片、それらの修飾体等が含まれる。このうち、ラットモノクローナル抗体の例としては、ＦＲ２−１４抗体（ＷＯ２０１３／１５４２０６）等をあげることができる。
ＦＲ２−１４は抗ヒトＦＧＦＲ２ラットモノクローナル抗体である(ＷＯ２０１３／１５４２０６)。
本発明の抗体変異体には、好適には、蛋白質の分解もしくは酸化に対する感受性の低下、生物活性の改善、抗原結合能の改善、又は理化学的性質もしくは機能的性質の付与等がなされている。そのような抗体変異体の例として、抗体の有するアミノ酸配列において保存的アミノ酸置換されてなるアミノ酸配列を有する抗体をあげることができる。保存的アミノ酸置換とは、アミノ酸側鎖に関連のあるアミノ酸グループ内で生じる置換である（ＷＯ２０１３／１５４２０６）。
蛋白質中に含まれるアスパラギン酸は、そのＣ末側に連結するアミノ酸が小さい側鎖を有する場合は異性化によりイソアスパラギン酸に変換され易く、一方で、アスパラギンの場合は脱アミド化によりアスパラギン酸に変換され易く、さらに異性化によりイソアスパラギン酸に変換される可能性がある。そのような異性化や脱アミド化が進めば、蛋白質の安定性に影響が生じ得る。そこで、かかる異性化や脱アミド化を回避するために、蛋白質中のアスパラギン酸やアスパラギンあるいはそれらに隣接するアミノ酸等を他のアミノ酸で置換することができる。かかるアミノ酸置換がなされた抗体変異体は、元の抗体が有する抗原結合活性を保持していることが好ましい。
本発明の抗体のアミノ酸配列において保守的アミノ酸置換がなされたアミノ酸配列を有する抗体変異体、ならびに、ＦＲ２−１４由来のＣＤＲＨ１乃至ＣＤＲＨ３及びＣＤＲＬ１乃至ＣＤＲＬ３のいずれかのアミノ酸配列において保守的アミノ酸変異がなされたアミノ酸配列を有する該ＣＤＲを含むマウス抗体、ラット抗体、キメラ化抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体等も本発明に包含される。
ＦＲ２−１４由来のＣＤＲＨ１乃至ＣＤＲＨ３及びＣＤＲＬ１乃至ＣＤＲＬ３のいずれか１つ又は２つ以上のアミノ酸配列において１乃至数個、好適には１乃至３個、より好適には１又は２個、最適には１個のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されてなるアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ１乃至ＣＤＲＨ３及びＣＤＲＬ１乃至ＣＤＲＬ３を含む抗体の変異体であって、且つヒトＦＧＦＲ２に結合するものは、本発明の抗体の変異体に包含される。
ＦＲ２−１４の好適な変異体としては、例えば、ＣＤＲＨ３のアミノ酸配列において１又は２個のアミノ酸、好適にはアミノ酸末端から数えて１つ目又は２つ目のアミノ酸が他のアミノ酸で置換されてなるアミノ酸配列を有するＣＤＲＨ３を含むキメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体等をあげることができる。
ＦＲ２−１４重鎖ＣＤＲＨ３のアミノ酸が置換された好適な変異体としては、例えば、（ｉ）１番目のアミノ酸であるアスパラギン酸がグルタミン酸で置換された変異体（配列番号１０並びに図８：１１８番目のアミノ酸がＧｌｕ）、（ｉｉ）２番目のアミノ酸であるグリシンがチロシン、アラニン、トリプトファン、バリン、アルギニン、アスパラギン、メチオニン、ロイシン、リジン、イソロイシン、ヒスチジン、フェニルアラニン、グルタミンまたはグルタミン酸で、好適にはフェニルアラニン、ヒスチジン、リジン又はロイシン（配列番号１２、１４、１６、１８、２０並びに図９乃至１２及び１６：１１９番目のアミノ酸がＰｈｅ、Ｌｙｓ、Ｈｉｓ又はＬｅｕ）で、より好適にはロイシンで置換された変異体（配列番号１６又は１８並びに図１１又は１２：１１９番目のアミノ酸がＬｅｕ）、（ｉｉｉ）８番目のアミノ酸であるスレオニンがアラニンで置換されたヒト化抗体、キメラ抗体、ヒト抗体、その機能断片等を例示することができる。具体的には、配列表の配列番号８、１０、１２、１４、１６、１８及び２０に示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号１１８−１２６からなるＣＤＲＨ３が挙げられる。
また、複数の抗体に由来するＣＤＲＨ１乃至ＣＤＲＨ３およびＣＤＲＬ１乃至ＣＤＲＬ３を有する抗体も、抗体変異体に含まれる。そのような変異体の例として、ＣＤＲＨ３のみある抗体に由来し、ＣＤＲＨ１及びＣＤＲＨ２ならびにＣＤＲＬ１乃至ＣＤＲＬ３は別の抗体に由来する抗体変異体をあげることができる。
本発明においては抗体変異体も「抗体」に包含される。
本発明の抗体の定常領域としては、とくに限定されるものではないが、ヒトの疾患を治療または予防するための本発明の抗体としては、好適にはヒト抗体のものが使用される。ヒト抗体の重鎖定常領域としては、例えば、Ｃγ１、Ｃγ２、Ｃγ３、Ｃγ４、Ｃμ、Ｃδ、Ｃα１、Ｃα２、Ｃε等をあげることができる。ヒト抗体の軽鎖定常領域としては、例えば、Ｃκ、Ｃλ等をあげることができる。
（３−８）抗体の機能断片
本発明は一つの態様として、本発明の抗ＦＧＦＲ２抗体の機能断片を提供する。抗体の機能断片とは、該抗体の有する機能の少なくとも一部を保持する断片を意味する。かかる抗体の機能としては、一般的には、抗原結合活性、抗原の活性を調節する活性、抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）活性及び抗体依存性細胞媒介食（ＡＤＣＰ）活性等を挙げることができる。本発明の抗ＦＧＦＲ２抗体の機能としては、例えば、ＦＧＦＲ２蛋白質結合活性、ＡＤＣＣ活性、ＡＤＣＰ活性、ＦＧＦＲ２に対する中和活性、イン・ビボ抗腫瘍活性、ＦＧＦＲ２とそのリガンドの結合を阻害する活性等をあげることができる。
抗体の機能断片としては、該抗体の有する活性の少なくとも一部を保持している該抗体の断片であれば特に限定されないが、例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、重鎖及び軽鎖のＦｖを適当なリンカーで連結させたシングルチェインＦｖ（ｓｃＦｖ）、ｄｉａｂｏｄｙ（ｄｉａｂｏｄｉｅｓ）、線状抗体、及び抗体断片より形成された多特異性抗体、Ｆ（ａｂ’）２を還元条件下で処理した抗体の可変領域の一価の断片であるＦａｂ’等をあげることができるが、それらに限定されるものではない。リンカー部分を保有するｓｃＦｖのように、本発明の抗体の断片以外の部分を含む分子も、本発明の抗体の機能断片の意味に包含される。
抗体蛋白質のアミノ末端及び／又はカルボキシ末端のアミノ酸が１乃至数個又はそれ以上を欠失してなり、且つ該抗体の有する機能の少なくとも一部を保持している分子も、抗体の機能断片の意味に包含される。例えば、哺乳類培養細胞で生産される抗体の重鎖のカルボキシル末端のリジン残基が欠失することが知られており（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ，７０５：１２９−１３４（１９９５））、また、同じく重鎖カルボキシル末端のグリシン、リジンの２アミノ酸残基が欠失し、新たにカルボキシル末端に位置するプロリン残基がアミド化されることが知られている（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，３６０：７５−８３（２００７））。しかし、これらの重鎖配列の欠失及び修飾は、抗体の抗原結合能及びエフェクター機能（補体の活性化や抗体依存性細胞障害作用など）には影響を及ぼさない。そのような抗体の機能断片の修飾体も、本発明の抗体もしくはその機能断片、又はその修飾体（後述）に包含される。
本発明の抗体又はその機能断片は、少なくとも２種類の異なる抗原に対して特異性を有する多特異性抗体であってもよい。多特異性抗体は、２種類の異なる抗原に結合する二重特異性抗体（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ）に限定されず、３種以上の異なる抗原に対して特異性を有する抗体も本発明の「多特異性抗体」の意味に包含される。
本発明の多特異性抗体は、全長抗体又はその機能断片であってもよい（例えば、Ｆ（ａｂ’）２二重特異性抗体）。 本発明の抗体の一つの態様は、一本鎖抗体（以下、「ｓｃＦｖ」という）である。また、２つ以上のｓｃＦｖをポリペプチドリンカーで結合させて作製されるＢｉｓｃＦｖやＭｕｌｔｉｓｃＦｖ、一本鎖イムノグロブリン、単一ドメイン抗体、ナノボディ等も、本発明における抗体の機能性断片の意味に包含される。
（３−９）ヒト化抗体およびヒト抗体
本発明はその一つの態様において、ヒト化抗体又はその機能断片を提供する。
本発明の抗ＦＧＦＲ２ヒト化抗体又はその機能断片は、抗腫瘍活性を有し、好適にはイン・ビボ（ｉｎ ｖｉｖｏ）で抗腫瘍活性を有する。また、かかるヒト化抗体又はその機能断片は、好適にはＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ蛋白質及び／又はＦＧＦＲ２ＩＩＩｃ蛋白質に特異的に結合し、より好適にはそれらの蛋白質の有するＩｇ様ドメインに結合する。さらに、かかるヒト化抗体又はその機能断片は、好適にはＡＤＣＣ活性及び／又はＡＤＣＰ活性を有する。また、本発明のヒト化抗体又はその機能断片はＦＧＦＲ２に対する中和活性を有し、好適にはＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ及び／又はＦＧＦＲ２ＩＩＩｃに対する中和活性を有し、より好適にはＦＧＦＲ２ＩＩＩｂ及びＦＧＦＲ２ＩＩＩｃに対する中和活性を有する。さらに、本発明のヒト化抗体又はその機能断片は、好適にはＦＧＦＲ２とそのリガンドの結合を阻害する。
本発明の好適なヒト化抗体の例としては、配列表の配列番号１（図２）に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ１、配列表の配列番号２（図２）に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ２及び配列表の配列番号３（図３）に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ３を含む可変領域を有する軽鎖、並びに、配列表の配列番号４（図４）に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ１、配列表の配列番号５（図５）に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ２及び配列表の配列番号６（図６）に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ３（但し、アミノ末端から数えて１つ目又は２つ目のアミノ酸は前述の通り他のアミノ酸で置換されていてもよい）を含む可変領域を有する重鎖からなり、本発明のＦＧＦＲ２蛋白質を認識するヒト化抗体もしくは該抗体のＦＧＦＲ２蛋白質結合活性を保持している該抗体の断片、またはその変異体等をあげることができる。
本発明のより好適なヒト化抗体はヒト化ＦＲ２−１４抗体およびその変異体であり、以下にその例としてｈＦＲ２−１４＿Ｈ１／Ｌ１乃至ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１（ＷＯ２０１３／１５４２０６）を挙げることができるが、それらに限定されるものではなく、例えば、ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１／Ｌ１乃至ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１のいずれか一つのヒト化抗体の重鎖可変領域を含む重鎖、ならびに、ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１／Ｌ１乃至ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１のいずれか一つのヒト化抗体の軽鎖可変領域を含む軽鎖、を含んでなる抗体も、本発明のより好適なヒト化抗体に含まれる。
ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１はＷＯ２０１３／１５４２０６の実施例９において得られた、糖鎖修飾が調節されたヒト化抗体である。当該抗体の軽鎖の塩基配列は配列番号７のヌクレオチド番号６１乃至７０５を、アミノ酸配列は配列番号８（図７）のアミノ酸番号２１乃至２３５を、重鎖の塩基配列は配列番号１７のヌクレオチド番号５８乃至１４０１を、アミノ酸配列は配列番号１８（図１２）のアミノ酸番号２０乃至４６７を、それぞれ含んでいる。
ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１２／Ｌ１の、軽鎖の塩基配列は配列番号７のヌクレオチド番号６１乃至７０５を、アミノ酸配列は配列番号８（図７）のアミノ酸番号２１乃至２３５を、重鎖の塩基配列は配列番号１５のヌクレオチド番号５８乃至１４０１を、アミノ酸配列は配列番号１６（図１１）のアミノ酸番号２０乃至４６７を、それぞれ含んでいる。
ｈＦＲ２−１４＿Ｈ８／Ｌ１の、軽鎖の塩基配列は配列番号７のヌクレオチド番号６１乃至７０５を、アミノ酸配列は配列番号８（図７）のアミノ酸番号２１乃至２３５を、重鎖の塩基配列は配列番号１１のヌクレオチド番号５８乃至１４０１を、アミノ酸配列は配列番号１２（図９）のアミノ酸番号２０乃至４６７を、それぞれ含んでいる。
ｈＦＲ２−１４＿Ｈ９／Ｌ１の、軽鎖の塩基配列は配列番号７のヌクレオチド番号６１乃至７０５を、アミノ酸配列は配列番号８（図７）のアミノ酸番号２１乃至２３５を、重鎖の塩基配列は配列番号１９のヌクレオチド番号５８乃至１４０１を、アミノ酸配列は配列番号２０（図１６）のアミノ酸番号２０乃至４６７を、それぞれ含んでいる。
ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１１／Ｌ１抗体の、軽鎖の塩基配列は配列番号７のヌクレオチド番号６１乃至７０５を、アミノ酸配列は配列番号８（図７）のアミノ酸番号２１乃至２３５を、重鎖の塩基配列は配列番号１３のヌクレオチド番号５８乃至１４０１を、アミノ酸配列は配列番号１４（図１０）のアミノ酸番号２０乃至４６７を、それぞれ含んでいる。
ｈＦＲ２−１４＿Ｈ５／Ｌ１の、軽鎖の塩基配列は配列番号７のヌクレオチド番号６１乃至７０５を、アミノ酸配列は配列番号８（図７）のアミノ酸番号２１乃至２３５を、重鎖の塩基配列は配列番号９のヌクレオチド番号５８乃至１４０１を、アミノ酸配列は配列番号１０（図８）のアミノ酸番号２０乃至４６７を、それぞれ含んでいる。
これらのヒト化抗体はＴｍ値が高く立体構造安定性に優れ、ＦＧＦＲ２に対する高い結合活性、優れた熱安定性、ＦＧＦＲ２リガンド依存性のＦＧＦＲ２シグナル中和活性、ＡＤＣＣ活性、ＡＤＣＰ活性、ＦＧＦＲ２リガンドとＦＧＦＲ２の結合を阻害する活性、ｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍活性等を有しており、過酷な条件に曝しても高い抗原結合活性を維持した。
本発明のより好適なヒト化抗体はｈＦＲ２−１４＿Ｈ１２／Ｌ１およびｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１である。
本発明のヒト化ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１／Ｌ１乃至ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１抗体のいずれか一つに記載の抗体の重鎖または軽鎖のアミノ酸配列と９０％以上、９２％以上、９４％以上、９６％以上、９８％以上又は９９％以上の同一なアミノ酸配列を含む重鎖または軽鎖を含み、且つＦＧＦＲ２に結合する抗体又はその機能断片も、本発明に包含される。かかる配列同一性は、好適には９４％以上、より好適には９６％以上、より一層好適には９８％以上、最適には９９％以上である。また、それらの抗体は、好適には（３−３）乃至（３−６）記載の活性を一つ又はそれ以上有している。
二種類のアミノ酸配列間の同一性あるいは相同性は、Ｂｌａｓｔ ａｌｇｏｒｉｔｈｍ ｖｅｒｓｉｏｎ ２．２．２（Ａｌｔｓｃｈｕｌ， Ｓｔｅｐｈｅｎ Ｆ．，Ｔｈｏｍａｓ Ｌ．Ｍａｄｄｅｎ，Ａｌｅｊａｎｄｒｏ Ａ．Ｓｃｈaｆｆｅｒ， Ｊｉｎｇｈｕｉ Ｚｈａｎｇ， Ｚｈｅｎｇ Ｚｈａｎｇ， Ｗｅｂｂ Ｍｉｌｌｅｒ， ａｎｄ Ｄａｖｉｄ Ｊ．Ｌｉｐｍａｎ（１９９７），「Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴ ａｎｄ ＰＳＩ−ＢＬＡＳＴ：ａ ｎｅｗ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎ ｄａｔａｂａｓｅ ｓｅａｒｃｈ ｐｒｏｇｒａｍｓ」，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２）のデフォルトパラメーターを使用することによって決定することができる。Ｂｌａｓｔ ａｌｇｏｒｉｔｈｍは、例えば、インターネットでhttp://blast.ncbi.nlm.nih.gov/にアクセスすることによっても使用することができる。
本発明のヒト化ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１／Ｌ１乃至ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１抗体のいずれか一つに記載の抗体の重鎖または軽鎖のアミノ酸配列において１乃至１０、８、６、５、４、３、もしくは２個、または１個のアミノ酸が置換、欠失、付加または挿入してなるアミノ酸配列を含む重鎖または軽鎖を含み、且つＦＧＦＲ２に結合する抗体又はその機能断片も、本発明に包含される。かかるアミノ酸変異は好適には置換であり、変異されるアミノ酸の個数は好適には１乃至５個、より好適には１乃至４個、より一層好適には１乃至３個、さらにより一層好適には１乃至２個、最適には１個である。また、それらの抗体は、好適には（３−３）乃至（３−６）記載の活性を一つ又はそれ以上有している。
ヒト化ｈＦＲ２−１４＿Ｈ５／Ｌ１、ｈＦＲ２−１４＿Ｈ８／Ｌ１、ｈＦＲ２−１４＿Ｈ９／Ｌ１、ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１１／Ｌ１、ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１２／Ｌ１、ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１抗体のいずれか一つに記載の抗体の重鎖または軽鎖のアミノ酸配列をコードする塩基配列に相補的な塩基配列を有するヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズするヌクレオチドの有する塩基配列によりコードされるアミノ酸配列を含む重鎖または軽鎖を含み、且つＦＧＦＲ２に結合する抗体又はその機能断片も、本発明に包含される。それらの抗体は、好適には（３−３）乃至（３−６）記載の活性を一つ又はそれ以上有している。
本発明は別の一つの態様において、ヒト抗体又はその機能断片を提供する。本発明のヒト抗体は、ＦＧＦＲ２に結合するヒト由来の抗体であれば特に限定されるものではないが、好適には（３−３）乃至（３−６）記載の活性を一つ又はそれ以上有している。
（３−１０）エピトープに結合する抗体
本発明の提供する抗体と「同一の部位に結合する抗体」も本発明の抗体に含まれる。ある抗体と「同一の部位に結合する抗体」とは、該抗体が認識する抗原分子上の部位に結合する他の抗体を意味する。第一抗体が結合する抗原分子上の部分ペプチド又は部分立体構造に第二抗体が結合すれば、第一抗体と第二抗体は同一の部位に結合すると判定することができる。また、第一抗体の抗原に対する結合に対して第二抗体が競合する、すなわち、第二抗体が第一抗体と抗原の結合を妨げることを確認することによって、具体的な結合部位のペプチド配列又は立体構造が決定されていなくても、第一抗体と第二抗体が同一の部位に結合すると判定することができる。さらに、第一抗体と第二抗体が同一の部位に結合し、且つ第一抗体が抗腫瘍活性など本発明の抗体の一つの態様に特徴的な効果を有する場合、第二抗体も同様の活性を有する蓋然性は極めて高い。従って、第一の抗ＦＧＦＲ２抗体の結合する部位に第二の抗ＦＧＦＲ２抗体が結合すれば、第一抗体と第二抗体がＦＧＦＲ２蛋白質上の同一の部位に結合すると判定することができる。また、第一の抗ＦＧＦＲ２抗体のＦＧＦＲ２蛋白質への結合に対して第二の抗ＦＧＦＲ２抗体が競合することを確認できれば、第一抗体と第二抗体がＦＧＦＲ２蛋白質上の同一の部位に結合する抗体と判定することができる。
本発明のヒト化抗体ＦＲ２−１０、ＦＲ２−１３又はＦＲ２−１４が認識するＦＧＦＲ２蛋白質上の部位に結合する抗体も本発明に含まれる。
（３−１１）抗体の修飾体
本発明は、抗体又はその機能断片の修飾体を提供する。本発明の抗体又はその機能断片の修飾体とは、本発明の抗体又はその機能断片に化学的又は生物学的な修飾が施されてなるものを意味する。化学的な修飾体には、アミノ酸骨格への化学部分の結合、Ｎ−結合またはＯ−結合炭水化物鎖の化学修飾体等が含まれる。生物学的な修飾体には、翻訳後修飾（例えば、Ｎ−結合またはＯ−結合への糖鎖付加、Ｎ末またはＣ末のプロセッシング、脱アミド化、アスパラギン酸の異性化、メチオニンの酸化）されたもの、原核生物宿主細胞を用いて発現させることによりＮ末にメチオニン残基が付加したもの等が含まれる。また、本発明の抗体または抗原の検出または単離を可能にするために標識されたもの、例えば、酵素標識体、蛍光標識体、アフィニティ標識体もかかる修飾物の意味に含まれる。このような本発明の抗体又はその機能断片の修飾物は、元の本発明の抗体又はその機能断片の安定性および血中滞留性の改善、抗原性の低減、かかる抗体又は抗原の検出又は単離等に有用である。
化学的修飾体に含まれる化学部分としては、ポリエチレングリコール等の水溶性ポリマーを例示することができる。
生物学的な修飾体としては、酵素処理や細胞処理等により修飾が施されたもの、遺伝子組換えによりタグ等他のペプチドが付加された融合体、ならびに内因性又は外来性の糖鎖修飾酵素を発現する細胞を宿主として調製されたもの等をあげることができる。
本発明の抗体又はその機能断片に結合している糖鎖修飾を調節すること（グリコシル化、脱フコース化等）によって、抗体依存性細胞傷害活性を増強することが可能である。抗体の糖鎖修飾の調節技術としては、例えば、ＷＯ９９／５４３４２、ＷＯ００／６１７３９、ＷＯ０２／３１１４０等に記載された方法が知られているが、これらに限定されるものではない。本発明の抗体の修飾体には当該糖鎖修飾が調節された抗体も含まれる。
かかる修飾は、抗体またはその機能断片における任意の位置に、または所望の位置において施されてもよく、１つ又は２つ以上の位置に同一又は２種以上の異なる修飾がなされてもよい。
本発明において「抗体断片の修飾体」は「抗体の修飾体の断片」をもその意味に含むものである。
本発明においては抗体の修飾体、その機能断片の修飾体を、単に「抗体」、「抗体の機能断片」と呼ぶことがある。
ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１は糖鎖修飾が調節された、すなわち脱フコース化されたヒト化抗体であり（ＷＯ２０１３／１５４２０６の実施例９）、本発明の抗体、本発明の抗体の修飾体に包含される。
４．抗体の製造方法
（４−１）ハイブリドーマを用いる方法
本発明の一つの態様として、抗ＦＧＦＲ２抗体は、例えば、コーラーとミルスタインの方法（Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ （１９７５）２５６，ｐ．４９５−４９７、Ｋｅｎｎｅｔ，Ｒ．ｅｄ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｐ．３６５−３６７，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８０））に従って取得することができる（ＷＯ２０１３／１５４２０６）。
（４−２）細胞免疫法
天然型のＦＧＦＲ２蛋白質を発現する細胞、組換え型ＦＧＦＲ２蛋白質またはその断片を発現する細胞等を免疫原として使用することにより、前記のハイブリドーマ法により抗ＦＧＦＲ２抗体を調製することができる（ＷＯ２０１３／１５４２０６）。
（４−３）遺伝子組換え
本発明の抗体は、その重鎖アミノ酸配列をコードする塩基配列が含まれるヌクレオチド（重鎖ヌクレオチド）及びその軽鎖アミノ酸配列をコードする塩基配列が含まれるヌクレオチド（軽鎖ヌクレオチド）、又は、かかる重鎖ヌクレオチドが挿入されたベクター及び軽鎖ヌクレオチドが挿入されたベクターを宿主細胞に導入し、該細胞を培養した後その培養物からかかる抗体を回収することにより調製することができ、そのようにして得られた抗体も本発明に含まれる（ＷＯ２０１３／１５４２０６）。
（４−４）ＤＮＡ免疫法
本発明の抗ＦＧＦＲ２抗体は、ＤＮＡ免疫法を使用して得ることもできる。抗原発現プラスミドをマウスやラットなどの動物個体に遺伝子導入し、抗原を個体内で発現させることによって、抗原に対する免疫を誘導する。遺伝子導入の手法には、直接プラスミドを筋肉に注射する方法や、リポソームやポリエチレンイミンなどの導入試薬を静脈注射する方法、ウイルスベクターを用いる手法、プラスミドを付着させた金粒子をＧｅｎｅ Ｇｕｎにより射ち込む手法、急速に大量のプラスミド溶液を静脈注射するＨｙｄｒｏｄｙｎａｍｉｃ法などが存在する。
（４−５）ヒト化抗体のデザイン法および調製法
ヒト化抗体としては、非ヒト動物抗体のＣＤＲのみがヒト由来の抗体に組込まれた抗体（Ｎａｔｕｒｅ（１９８６）３２１，ｐ．５２２−５２５参照）、ＣＤＲ移植法によりＣＤＲの配列に加え一部のフレームワークのアミノ酸残基もヒト抗体に移植した抗体（ＷＯ９０／０７８６１号、ＵＳ６９７２３２３号公報参照）、それらのいずれかにおける非ヒト動物抗体の１つまたは２つ以上のアミノ酸がヒト型のアミノ酸で置換されてなる抗体等を挙げることができるが、それらに限定されるものではない。
（４−６）ヒト抗体の調製法
本発明の抗体としては、さらに、ヒト抗体を挙げることができる。抗ＦＧＦＲ２ヒト抗体とは、ヒト由来の抗体のアミノ酸配列からなる抗ＦＧＦＲ２抗体を意味する。抗ＦＧＦＲ２ヒト抗体は、ヒト抗体の重鎖と軽鎖の遺伝子を含むヒトゲノムＤＮＡ断片を有するヒト抗体産生マウスを用いた方法、ヒト抗体ライブラリーより選別したファージディスプレイ由来のヒト抗体を取得する方法等の公知の方法により取得することができる（ＷＯ２０１３／１５４２０６）。
（４−７）抗体の機能断片の調製法
一本鎖抗体を作成する方法は公知である。ｓｃＦｖにおいて、重鎖可変領域と軽鎖可変領域は、コンジュゲートを作らないようなリンカー、好ましくはポリペプチドリンカーを介して連結される。ｓｃＦｖにおける重鎖可変領域及び軽鎖可変領域は、同一の抗体に由来してもよく、別々の抗体に由来してもよい。 本発明の抗体は、多量化して抗原に対する親和性を高めたものであってもよい。多量化する抗体としては、１種類の抗体であっても、同一の抗原の複数のエピトープを認識する複数の抗体であってもよい。
本発明の抗体は、アミノ酸配列が異なる複数種類の抗ＦＧＦＲ２抗体の混合物、すなわちポリクローナル抗体であってもよい。
抗体の修飾物として、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の各種分子と結合した抗体を使用することもできる。
本発明の抗体は、更にこれらの抗体と他の薬剤がコンジュゲートを形成しているもの（Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）でもよい。このような抗体の例としては、該抗体が放射性物質や薬理作用を有する化合物と結合している物を挙げることができる（ＷＯ２０１３／１５４２０６）。
（４−８）抗体の精製
得られた抗体は、均一にまで精製することができる。抗体の分離、精製は通常の蛋白質で使用されている分離、精製方法を使用すればよい。
例えばクロマトグラフィーカラム、フィルター、限外濾過、塩析、透析、調製用ポリアクリルアミドゲル電気泳動、等電点電気泳動等を適宜選択、組み合わせれば、抗体を分離、精製することができるが、これらに限定されるものではない。
(４−９)組換抗体
本発明は、本発明の抗体もしくはその機能断片またはその修飾体をコードするヌクレオチド（抗体遺伝子）又はベクターが導入された細胞を培養し、その培養物から抗体もしくはその機能断片またはその修飾体を回収する工程、を含む、抗体もしくはその機能断片またはその修飾体の製造方法により得られた抗体もしくはその機能断片またはその修飾体も、本発明に含まれる。
５．医薬組成物
本発明は抗ＦＧＦＲ２抗体もしくはその機能断片またはその修飾体を含む医薬組成物を提供する。
本発明の医薬組成物は、ＦＧＦＲ２もしくはそのリガンドの過剰発現またはＦＧＦＲ２の変異もしくは遺伝子増幅によるＦＧＦＲ２シグナル異常又は亢進、または、ＦＧＦＲ２のアイソフォームのスイッチングにより惹起されるか又は増悪化される各種疾患（以下、「ＦＧＦＲ２に関わる疾患」という）、とりわけ各種癌の治療又は予防に有用である。
かかる治療又は予防の対象となる癌の惹起又は増悪化の原因としては、ＦＧＦＲ２遺伝子のイントロン内の一塩基置換（ＳＮＰ）、ＦＧＦＲ２の高発現、ＦＧＦＲ２を恒常的に活性化するミスセンス変異、ＦＧＦＲ２遺伝子の増幅又は過剰発現、ＦＧＦＲ２ＩＩＩｂからＦＧＦＲ２ＩＩＩｃへのスイッチング等を例示することができる。
かかる癌種としては、例えば、乳癌、子宮内膜癌、卵巣癌、非小細胞肺癌などの肺癌、胃癌、前立腺癌、腎癌、肝臓癌、膵臓癌、大腸癌、食道癌、膀胱癌、子宮頚癌、血液癌、リンパ腫、脳腫瘍、胆管癌、悪性黒色腫等をあげることができ、好適にはＦＧＦＲ２蛋白質を発現しているそれらの癌をあげることができる。
本発明において、疾患の治療または予防には、かかる疾患、好適にはＦＧＦＲ２蛋白質を発現している個体におけるかかる疾患の発症の予防、増悪化又は進行の抑制又は阻害、かかる疾患に罹患した個体が呈する一つ又は二つ以上の症状の軽減、増悪化若しくは進行の抑制または寛解、二次性疾患の治療又は予防等が含まれるが、それらに限定されるものではない。
本発明の医薬組成物には、治療または予防に有効な量の抗ＦＧＦＲ２抗体又は該抗体の機能断片と薬学上許容される希釈剤、担体、可溶化剤、乳化剤、保存剤及び／又は補助剤を含有せしめることができる。
「治療または予防に有効な量」とは、特定の疾患、投与形態および投与径路につき治療又は予防効果を奏する量を意味し、「薬理学的に有効な量」と同義である。
本発明の医薬組成物には、ｐＨ、浸透圧、粘度、透明度、色、等張性、無菌性、該組成物又はそれに含まれる抗体の安定性、溶解性、徐放性、吸収性、浸透性、剤型、強度、性状、形状等を変化させたり、維持したり、保持したりするための物質（以下、「製剤用の物質」という）を含有せしめることができる。製剤用の物質としては、薬理学的に許容される物質であれば特に限定されるものではない。例えば、非毒性又は低毒性であることは、製剤用の物質が好適に具備する性質である。
製剤用の物質として、例えば、以下のものをあげることができるが、これらに限定されるものではない； グリシン、アラニン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン又はリジン等のアミノ酸類、抗菌剤、アスコルビン酸、硫酸ナトリウム又は亜硫酸水素ナトリウム等の抗酸化剤、リン酸、クエン酸、ホウ酸バッファー、炭酸水素ナトリウム、トリス−塩酸（Ｔｒｉｓ−Ｈｃｌ）溶液等の緩衝剤、マンニトールやグリシン等の充填剤、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）等のキレート剤、カフェイン、ポリビニルピロリジン、β−シクロデキストリンやヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン等の錯化剤、グルコース、マンノース又はデキストリン等の増量剤、単糖類、二糖類やグルコース、マンノースやデキストリン等の他の炭水化物、着色剤、香味剤、希釈剤、乳化剤やポリビニルピロリジン等の親水ポリマー、低分子量ポリペプチド、塩形成対イオン、塩化ベンズアルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロレキシジン、ソルビン酸又は過酸化水素等の防腐剤、グリセリン、プロピレングリコール又はポリエチレングリコール等の溶媒、マンニトール又はソルビトール等の糖アルコール、懸濁剤、ＰＥＧ、ソルビタンエステル、ポリソルビテート２０やポリソルビテート８０等ポリソルビテート、トリトン（ｔｒｉｔｏｎ）、トロメタミン（ｔｒｏｍｅｔｈａｍｉｎｅ）、レシチン又はコレステロール等の界面活性剤、スクロースやソルビトール等の安定化増強剤、塩化ナトリウム、塩化カリウム、マンニトールやソルビトール等の弾性増強剤、輸送剤、希釈剤、賦形剤、及び／又は薬学上の補助剤。
これらの製剤用の物質の添加量は、抗ＦＧＦＲ２抗体もしくはその機能断片またはその修飾体の重量に対して０．００１乃至１０００倍、好適には０．０１乃至１００倍、より好適には０．１乃至１０倍である。
抗ＦＧＦＲ２抗体もしくはその機能断片またはその修飾体をリポソーム中に含有せしめたイムノリポソーム、抗体とリポソームとが結合してなる抗体修飾体（米国特許第６２１４３８８号等）を含有する医薬組成物も、本発明の医薬組成物に含まれる。
賦形剤や担体は、通常液体又は固体であり、注射用の水、生理食塩水、人工脳脊髄液、その他の、経口投与又は非経口投与用の製剤に用いられる物質であれば特に限定されない。生理食塩水としては、中性のもの、血清アルブミンを含むもの等をあげることができる。
緩衝剤としては、医薬組成物の最終ｐＨが７．０乃至８．５になるように調整されたＴｒｉｓバッファー、同じく４．０乃至５．５になるように調整された酢酸バッファー、同じく５．０乃至８．０になるように調整されたクエン酸バッファー、同じく５．０乃至８．０になるように調整されたヒスチジンバッファー等を例示することができる。
本発明の医薬組成物は、固体、液体、懸濁液等である。凍結乾燥製剤をあげることができる。凍結乾燥製剤を成型するには、スクロース等の賦形剤を用いることができる。
本発明の医薬組成物の投与径路としては、経腸投与、局所投与及び非経口投与のいずれでもよく、例えば、静脈内投与、動脈内投与、筋肉内投与、皮内投与、皮下投与、腹腔内投与、経皮投与、骨内投与、関節内投与等をあげることができる。
かかる医薬組成物の組成は、投与方法、抗体のＦＧＦＲ２蛋白質結合親和性等に応じて決定することができる。本発明の抗ＦＧＦＲ２抗体もしくはその機能断片またはその修飾体のＦＧＦＲ２蛋白質に対する親和性が高いほど（ＫＤ値が低いほど）、少ない投与量でその薬効を発揮し得る。
本発明の抗ＦＧＦＲ２抗体の投与量は、薬理学的に有効な量であれば限定されず、個体の種、疾患の種類、症状、性別、年齢、持病、該抗体のＦＧＦＲ２蛋白質結合親和性又はその生物活性、その他の要素に応じて適宜決定することができるが、通常、０．０１乃至１０００ｍｇ／ｋｇ、好適には０．１乃至１００ｍｇ／ｋｇを、１乃至１８０日間に１回、又は１日２回若しくは３回以上投与することができる。
医薬組成物の形態としては、注射剤（凍結乾燥製剤、点滴剤を含む）、坐剤、経鼻型吸収製剤、経皮型吸収製剤、舌下剤、カプセル、錠剤、軟膏剤、顆粒剤、エアーゾル剤、丸剤、散剤、懸濁剤、乳剤、点眼剤、生体埋め込み型製剤等を例示することができる。
抗ＦＧＦＲ２抗体もしくはその機能断片またはその修飾体（以下「抗ＦＧＦＲ２抗体等」という）は、他剤と組み合わせて用いることができる。抗ＦＧＦＲ２等、またはそれを有効成分として含む医薬組成物は、他剤、すなわち抗ＦＧＦＲ２抗体等以外の化合物を有効成分としての医薬組成物と同時にあるいは個別に投与することができる。例えば、他剤を投与した後に抗ＦＧＦＲ２抗体等を有効成分として含む医薬組成物を投与するか、抗ＦＧＦＲ２抗体等を有効成分として含む医薬組成物を投与した後に、他剤を投与するか、または、抗ＦＧＦＲ２抗体等を有効成分として含む医薬組成物と他剤とを同時に投与してもよい。単一の医薬組成物中に抗ＦＧＦＲ２抗体等および他剤の両方の有効成分が含まれる場合と、両有効成分が複数の医薬組成物に分かれて含まれる場合のいずれも、本発明においては「抗ＦＧＦＲ２抗体等および他剤を含む医薬組成物」という。本発明において、かかる「医薬組成物」は「抗ＦＧＦＲ２抗体等と他剤を組み合わせて投与される医薬組成物」と同義である。
本発明において、抗ＦＧＦＲ２抗体等と他剤を「組み合わせて投与される」とは、ある一定期間において、被投与対象の体内に、抗ＦＧＦＲ２抗体等と他剤が取り込まれることを意味する。抗ＦＧＦＲ２抗体等と他剤が単一製剤中に含まれた製剤が投与されてもよく、またそれぞれが別々に製剤化され、別々に投与されても良い。別々に製剤化される場合、その投与の時期は特に限定されず、同時に投与されてもよく、時間を置いて異なる時間に、又は、異なる日に、投与されても良い。抗ＦＧＦＲ２抗体等と他剤が、それぞれ異なる時間又は日に投与される場合、その投与の順番は特に限定されない。通常、それぞれの製剤は、それぞれの投与方法に従って投与されるため、それらの投与は、同一回数となる場合もあり、異なる回数となる場合もある。また、それぞれが別々に製剤化される場合、各製剤の投与方法（投与経路）は同じであってもよく、異なる投与方法（投与経路）で投与されてもよい。また、抗ＦＧＦＲ２抗体等と他剤が同時に体内に存在する必要は無く、ある一定期間（例えば一ヶ月間、好ましくは１週間、さらに好ましくは数日間、さらにより好ましくは１日間）の間に体内に取り込まれていればよく、いずれかの投与時にもう一方の有効成分が体内から消失していてもよい。
「抗ＦＧＦＲ２抗体等と他剤を組み合わせて投与される医薬組成物」の投与形態としては、例えば、１）抗ＦＧＦＲ２抗体等と他剤を含む単一の製剤の投与、２）抗ＦＧＦＲ２抗体等と他剤とを別々に製剤化して得られる２種の製剤の同一投与経路での同時投与、３）抗ＦＧＦＲ２抗体等と他剤を別々に製剤化して得られる２種の製剤の同一投与経路での時間差をおいての投与、４）抗ＦＧＦＲ２抗体等と他剤を別々に製剤化して得られる２種の製剤の異なる投与経路での同時投与、５）抗ＦＧＦＲ２抗体等と他剤とを別々に製剤化して得られる２種の製剤の異なる投与経路での時間差をおいての投与などを挙げることができる。「抗ＦＧＦＲ２抗体等と他剤を組み合わせて投与される医薬組成物」の投与量、投与間隔、投与形態、製剤等は、抗ＦＧＦＲ２抗体を含有する医薬組成物のそれらに準ずるが、それらに限定されるものではない。
かかる医薬組成物は、それが２種の異なる製剤にされた場合には、それらを含むキットであってもよい。
本発明において、抗ＦＧＦＲ２抗体等および他剤の「組合せ」とは、抗ＦＧＦＲ２抗体等および他剤を「組み合わせて投与される」ことを意味する。
本発明において、「他剤」は抗癌剤であれは特に限定されるものではなく、好適には化学療法剤、分子標的薬、癌治療抗体、ホルモン剤であり、より好適にはトポイソメラーゼ阻害剤、微小管阻害剤、プラチナ製剤、抗ＶＥＧＦＲ２抗体、代謝拮抗剤である。トポイソメラーゼ阻害剤の好適な例としては、イリノテカン、トポテカン、エトポシド等を挙げることができる。微小管阻害剤の好適な例としては、パクリタキセル、ドセタキセル、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、エリブリン、ビノレルビン、パクリタクセル内包ミセルＮＫ１０５等を挙げることができる。プラチナ製剤の好適な例としては、オキサルプラチン、カルボプラチン、シスプラチン、ネダプラチン、シスプラチン内包ミセルＮＣ−６００４等を挙げることができる。抗ＶＥＧＦＲ２抗体の好適な例としては、ラムシルマブ等を挙げることができる。代謝拮抗剤としては、５−フルオロウラシル系抗がん剤（例えば、５−ＦＵ又は生体内において５−ＦＵに代謝され抗腫瘍効果を発揮する化合物等）が好ましく、５−フルオロウラシル系抗がん剤の好適な例としては、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、テガフール、テガフール・ギメラシル・オテラシルカリウム（Ｓ−１又はＴＳ−１）、テガフール・ウラシル（ＵＦＴ）、カペシタビン、カルモフール、ドキシフルリジン等を挙げることができる。ただし、本発明の組合せ又は医薬組成物に含まれる「他剤」はこれらに限定されない。
本発明の組合せ又は医薬組成物には、さらに他の医薬を使用することができる。さらなる他の医薬としては、ワクチン、放射線療法（放射線療法剤）など各種治療法等をあげることができる。
本発明は癌などＦＧＦＲに関わる疾患の治療方法または予防方法、該疾患の治療用または予防用医薬組成物を調製するための本発明の抗体の使用、該疾患の治療または予防のための本発明の抗体の使用をも提供する。本発明の抗体を含む治療用または予防用キットも本発明に含まれる。
以下、実施例において本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されない。
なお、下記実施例に関する各操作は特に明示がない限り、当業者が使用する実験書に記載の方法により行うか、または、市販の試薬やキットを用いる場合には市販品の指示書に従って行った。
実施例１． ＦＧＦＲ２発現胃癌細胞株に対するヒト化抗ＦＧＦＲ２抗体（ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１）とＣＰＴ−１１とのｉｎ ｖｉｖｏ併用効果
ヒト胃癌細胞株ＳＮＵ―１６（ＡＴＣＣより購入）をＰＢＳとマトリゲル（日本ＢＤより購入）１：１の混液にて５×１０7ｃｅｌｌｓ／ｍＬに調整し、細胞懸濁液をヌードマウス（ＣＡｎＮ．Ｃｇ−Ｆｏｘｎｌｎｕ／ＣｒｌＣｒｌｊ、雌性、５〜６週齢、日本チャールス・リバーより購入）の腋窩部皮下に０．１ｍＬ移植した。腫瘍体積値を用いて群分けを行い（各群ｎ＝５）、ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１（ＷＯ２０１３／１５４２０６）は１０ｍｇ／ｋｇにて腹腔内に投与し、ＣＰＴ−１１は４０ｍｇ／ｋｇにてマウスに尾静脈内投与した。ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１は移植１０、１７、２４日後に投与し、ＣＰＴ−１１は移植１０日後に投与した。経時的に腫瘍の長径（ｍｍ）および短径（ｍｍ）を電子デジタルノギス（株式会社ミツトヨ製）で計測し、以下に示す計算式により腫瘍体積を算出した。
腫瘍体積（ｍｍ３）＝１／２×［腫瘍長径］×［腫瘍短径］×［腫瘍短径］
抗腫瘍効果は、移植３６日後に以下に示す計算式により腫瘍増殖抑制率（ＴＧＩ％）で評価した。
ＴＧＩ （％） ＝ （１−Ａ／Ｂ）×１００
Ａ ： 化合物投与群の判定日の平均腫瘍体積
Ｂ ： 無処置対照群の判定日の平均腫瘍体積
ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１単独投与、ＣＰＴ−１１単独投与、およびｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１とＣＰＴ−１１併用投与の結果を図１３に示した。数値は平均値±標準誤差（ＳＥ）を示す。移植３６日後におけるＴＧＩは、ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１単独投与群で２４％、ＣＰＴ−１１単独投与群で４１％であったのに対し、ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１とＣＰＴ−１１併用投与群では８０％であり、併用により抗腫瘍効果が増強されることが示された。
実施例２． ＦＧＦＲ２発現胃癌細胞株に対するヒト化抗ＦＧＦＲ２抗体（ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１）とＰａｃｌｉｔａｘｅｌとのｉｎ ｖｉｖｏ併用効果
ヒト胃癌細胞株ＳＮＵ―１６（ＡＴＣＣより購入）をＰＢＳとマトリゲル（日本ＢＤより購入）１：１の混液にて5×１０7ｃｅｌｌｓ／ｍＬに調整し、細胞懸濁液をＮＯＤ−ｓｃｉｄマウス（ＮＯＤ．ＣＢ１７−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ／Ｊ、雌性、５〜６週齢、日本チャールス・リバーより購入）の腋窩部皮下に０．１ｍＬ移植した。腫瘍体積値を用いて群分けを行い（Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ単独投与群はｎ＝４、他の群はｎ＝５）、ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１は１０ｍｇ／ｋｇにて腹腔内に投与し、Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌは１５ｍｇ／ｋｇにてマウスに尾静脈内投与した。ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１は移植１０、１７、２４日後に投与し、Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌは移植１０日後に投与した。経時的に腫瘍の長径（ｍｍ）および短径（ｍｍ）を電子デジタルノギス（株式会社ミツトヨ製）で計測し、以下に示す計算式により腫瘍体積を算出した。
腫瘍体積（ｍｍ３）＝１／２×［腫瘍長径］×［腫瘍短径］×［腫瘍短径］
抗腫瘍効果は、移植３９日後に以下に示す計算式により腫瘍増殖抑制率（ＴＧＩ％）で評価した。
ＴＧＩ （％） ＝ （１−Ａ／Ｂ）×１００
Ａ ： 化合物投与群の判定日の平均腫瘍体積
Ｂ ： 無処置対照群の判定日の平均腫瘍体積
ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１単独投与、Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ単独投与、およびｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１とＰａｃｌｉｔａｘｅｌ併用投与の結果を図１４に示した。数値は平均値±標準誤差（ＳＥ）を示す。移植３９日後におけるＴＧＩは、ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１単独投与群で６０％、Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ単独投与群で５３％であったのに対し、ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１とＰａｃｌｉｔａｘｅｌ併用投与群では、９８％であった。先行技術の抗ＦＧＦＲ２抗体では、Ｐａｃｌｉｔａｘｅｌとの併用により、抗腫瘍効果が増強することが示されているが、腫瘍が縮退するには到らなかった（ＵＳ２０１５／００５０２７３ Ａ１）。一方、本発明におけるＣＰＴ−１１あるいはＰａｃｌｉｔａｘｅｌとの併用においては、併用効果により大幅な抗腫瘍活性の増強と、腫瘍縮退が認められ、とりわけＰａｃｌｉｔａｘｅｌとの併用では、３９日において５例中３例に腫瘍の完全消失が認められた。
実施例３． ＦＧＦＲ２発現肺癌細胞株に対するヒト化抗ＦＧＦＲ２抗体（ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１）とＣｉｓｐｌａｔｉｎとのｉｎ ｖｉｖｏ併用効果
ヒト肺癌細胞株ＫＮＳ―６２（財団法人ヒューマンサイエンス振興財団、ヒューマンサイエンス研究資源バンクより購入）をＰＢＳとマトリゲル（日本ＢＤより購入）１：１の混液にて１．４×１０7ｃｅｌｌｓ／ｍＬに調整し、細胞懸濁液をＮＯＤ−ｓｃｉｄマウス（ＮＯＤ．ＣＢ１７−Ｐｒｋｄｃｓｃｉｄ／Ｊ、雌性、５〜６週齢、日本チャールス・リバーより購入）の腋窩部皮下に０．１ｍＬ移植した。腫瘍体積値を用いて群分けを行い（各群ｎ＝５）、ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１は１０ｍｇ／ｋｇにて腹腔内に投与し、Ｃｉｓｐｌａｔｉｎは５ｍｇ／ｋｇにてマウスに尾静脈内投与した。ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１は移植７、１４、２１日後に投与し、Ｃｉｓｐｌａｔｉｎは移植７、２１日後に投与した。経時的に腫瘍の長径（ｍｍ）および短径（ｍｍ）を電子デジタルノギス（株式会社ミツトヨ製）で計測し、以下に示す計算式により腫瘍体積を算出した。
腫瘍体積（ｍｍ３）＝１／２×［腫瘍長径］×［腫瘍短径］×［腫瘍短径］
抗腫瘍効果は、移植３６日後に以下に示す計算式により腫瘍増殖抑制率（ＴＧＩ％）で評価した。
ＴＧＩ （％） ＝ （１−Ａ／Ｂ）×１００
Ａ ： 化合物投与群の判定日の平均腫瘍体積
Ｂ ： 無処置対照群の判定日の平均腫瘍体積
ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１単独投与、Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ単独投与、およびｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１とＣｉｓｐｌａｔｉｎ併用投与の結果を図１５に示した。数値は平均値±標準誤差（ＳＥ）を示す。移植３６日後におけるＴＧＩは、ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１単独投与群で１６％、Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ単独投与群で２７％であったのに対し、ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１とＣｉｓｐｌａｔｉｎ併用投与群では、５２％であった。無処置対照群（Ｕｎｔｒｅａｔｅｄ ｃｏｎｔｒｏｌ）とｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１とＣｉｓｐｌａｔｉｎ併用投与群との間に、有意差（ｔ検定、ｐ＜０．０５）が認められ、併用効果が示された。
実施例４． ＦＧＦＲ２発現胃癌細胞株に対するヒト化抗ＦＧＦＲ２抗体（ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１）とＣｉｓｐｌａｔｉｎとのｉｎ ｖｉｖｏ併用効果
ヒト胃癌細胞株ＳＮＵ−１６（ＡＴＣＣより購入）をＰＢＳとマトリゲル（日本ＢＤより購入）１：１の混液にて５×１０７ｃｅｌｌｓ／ｍＬに調整し、細胞懸濁液をヌードマウス（ＣＡｎＮ.Ｃｇ−Ｆｏｘｎ1[ｎｕ]／ＣｒｌＣｒｌｊ[Ｆｏｘｎ1ｎｕ／Ｆｏｘｎ1ｎｕ]、雌性、５〜６週齢、日本チャールス・リバーより購入）の腋窩部皮下に０．１ｍＬ移植した。腫瘍体積値を用いて群分けを行い（各群ｎ＝８）、ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１は１ｍｇ／ｋｇにて、Ｃｉｓｐｌａｔｉｎは５ｍｇ／ｋｇにてマウスにそれぞれ尾静脈内投与した。ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１は移植６、１３、２０日後に投与し、Ｃｉｓｐｌａｔｉｎは移植６日後に投与した。経時的に腫瘍の長径（ｍｍ）および短径（ｍｍ）を電子デジタルノギス（株式会社ミツトヨ製）で計測し、以下に示す計算式により腫瘍体積を算出した。
腫瘍体積（ｍｍ３）＝１／２×［腫瘍長径］×［腫瘍短径］×［腫瘍短径］
抗腫瘍効果は、移植２７日後に以下に示す計算式により腫瘍増殖抑制率（ＴＧＩ％）で評価した。
ＴＧＩ （％） ＝ （１−Ａ／Ｂ）×１００
Ａ ： 化合物投与群の判定日の平均腫瘍体積
Ｂ ： 無処置対照群の判定日の平均腫瘍体積
ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１単独投与、Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ単独投与、およびｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１とＣｉｓｐｌａｔｉｎ併用投与の結果を図１７に示した。数値は平均値±標準誤差（ＳＥ）を示す。移植２７日後におけるＴＧＩは、ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１単独投与群で６８％、Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ単独投与群で２３％であったのに対し、ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１とＣｉｓｐｌａｔｉｎ併用投与群では、８７％であった。Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ単独投与群と、ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１とＣｉｓｐｌａｔｉｎ併用投与群との間に、有意差（Ｄｕｎｎｅｔｔ型多重比較検定、ｐ＜０．０００１）が認められ、併用効果が示された。
実施例５． ＦＧＦＲ２発現胃癌細胞株に対するヒト化抗ＦＧＦＲ２抗体（ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１）とＤｏｃｅｔａｘｅｌとのｉｎ ｖｉｖｏ併用効果
ヒト胃癌細胞株ＳＮＵ−１６（ＡＴＣＣより購入）をＰＢＳとマトリゲル（日本ＢＤより購入）１：１の混液にて５×１０７ｃｅｌｌｓ／ｍＬに調整し、細胞懸濁液をヌードマウス（ＣＡｎＮ.Ｃｇ−Ｆｏｘｎ1[ｎｕ]／ＣｒｌＣｒｌｊ[Ｆｏｘｎ1ｎｕ／Ｆｏｘｎ1ｎｕ]、雌性、５〜６週齢、日本チャールス・リバーより購入）の腋窩部皮下に０．１ｍＬ移植した。腫瘍体積値を用いて群分けを行い（各群ｎ＝８）、ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１は１ｍｇ／ｋｇにて、Ｄｏｃｅｔａｘｅｌは１ｍｇ／ｋｇにてマウスにそれぞれ尾静脈内投与した。ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１は移植６、１３、２０日後に投与し、Ｄｏｃｅｔａｘｅｌは移植６日後に投与した。経時的に腫瘍の長径（ｍｍ）および短径（ｍｍ）を電子デジタルノギス（株式会社ミツトヨ製）で計測し、以下に示す計算式により腫瘍体積を算出した。
腫瘍体積（ｍｍ３）＝１／２×［腫瘍長径］×［腫瘍短径］×［腫瘍短径］
抗腫瘍効果は、移植２７日後に以下に示す計算式により腫瘍増殖抑制率（ＴＧＩ％）で評価した。
ＴＧＩ （％） ＝ （１−Ａ／Ｂ）×１００
Ａ ： 化合物投与群の判定日の平均腫瘍体積
Ｂ ： 無処置対照群の判定日の平均腫瘍体積
ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１単独投与、Ｄｏｃｅｔａｘｅｌ単独投与、およびｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１とＤｏｃｅｔａｘｅｌ併用投与の結果を図１８に示した。数値は平均値±標準誤差（ＳＥ）を示す。移植２７日後におけるＴＧＩは、ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１単独投与群で６８％、Ｄｏｃｅｔａｘｅｌ単独投与群で１６％であったのに対し、ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１とＤｏｃｅｔａｘｅｌ併用投与群では、７３％であった。Ｄｏｃｅｔａｘｅｌ単独投与群と、ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１とＤｏｃｅｔａｘｅｌ併用投与群との間に、有意差（Ｄｕｎｎｅｔｔ型多重比較検定、ｐ＜０．００５）が認められ、併用効果が示された。
実施例６． ＦＧＦＲ２発現胃癌細胞株に対するヒト化抗ＦＧＦＲ２抗体（ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１）と抗ＶＥＧＦＲ２抗体とのｉｎ ｖｉｖｏ併用効果
ヒト胃癌細胞株ＳＮＵ−１６（ＡＴＣＣより購入）をＰＢＳとマトリゲル（日本ＢＤより購入）１：１の混液にて５×１０７ｃｅｌｌｓ／ｍＬに調整し、細胞懸濁液をヌードマウス（ＣＡｎＮ.Ｃｇ−Ｆｏｘｎ1[ｎｕ]／ＣｒｌＣｒｌｊ[Ｆｏｘｎ1ｎｕ／Ｆｏｘｎ1ｎｕ]、雌性、５〜６週齢、日本チャールス・リバーより購入）の腋窩部皮下に０．１ｍＬ移植した。腫瘍体積値を用いて群分けを行い（各群ｎ＝８）、ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１は１ｍｇ／ｋｇにて、抗マウスＶＥＧＦＲ２抗体ＤＣ１０１（Ｂｉｏ−Ｘ−ｃｅｌｌより購入）は２０ｍｇ／ｋｇにてマウスにそれぞれ尾静脈内投与した。ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１は移植６、１３、２０日後に投与し、抗ＶＥＧＦＲ２抗体は移植６、９、１３、１６、２０日後に投与した。経時的に腫瘍の長径（ｍｍ）および短径（ｍｍ）を電子デジタルノギス（株式会社ミツトヨ製）で計測し、以下に示す計算式により腫瘍体積を算出した。
腫瘍体積（ｍｍ３）＝１／２×［腫瘍長径］×［腫瘍短径］×［腫瘍短径］
抗腫瘍効果は、移植２７日後に以下に示す計算式により腫瘍増殖抑制率（ＴＧＩ％）で評価した。
ＴＧＩ （％） ＝ （１−Ａ／Ｂ）×１００
Ａ ： 化合物投与群の判定日の平均腫瘍体積
Ｂ ： 無処置対照群の判定日の平均腫瘍体積
ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１単独投与、抗ＶＥＧＦＲ２抗体単独投与、およびｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１と抗ＶＥＧＦＲ２抗体併用投与の結果を図１９に示した。数値は平均値±標準誤差（ＳＥ）を示す。移植２７日後におけるＴＧＩは、ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１単独投与群で６８％、抗ＶＥＧＦＲ２抗体単独投与群で２８％であったのに対し、ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１と抗ＶＥＧＦＲ２抗体併用投与群では、９１％であった。抗ＶＥＧＦＲ２抗体単独投与群と、ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１と抗ＶＥＧＦＲ２抗体併用投与群との間に、有意差（Ｄｕｎｎｅｔｔ型多重比較検定、ｐ＜０．０００１）が認められ、併用効果が示された。
実施例７． ＦＧＦＲ２発現胃癌細胞株に対するヒト化抗ＦＧＦＲ２抗体（ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１）と５−ＦＵとのｉｎ ｖｉｖｏ併用効果
ヒト胃癌細胞株ＳＮＵ−１６（ＡＴＣＣより購入）をＰＢＳとマトリゲル（日本ＢＤより購入）１：１の混液にて５×１０７ｃｅｌｌｓ／ｍＬに調整し、細胞懸濁液をヌードマウス（ＣＡｎＮ.Ｃｇ−Ｆｏｘｎ1[ｎｕ]／ＣｒｌＣｒｌｊ[Ｆｏｘｎ1ｎｕ／Ｆｏｘｎ1ｎｕ]、雌性、５〜６週齢、日本チャールス・リバーより購入）の腋窩部皮下に０．１ｍＬ移植した。腫瘍体積値を用いて群分けを行い（各群ｎ＝８）、ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１は１ｍｇ／ｋｇにて、５−ＦＵは５０ｍｇ／ｋｇにてマウスにそれぞれ尾静脈内投与した。ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１は移植７、１４日後に投与し、５−ＦＵは移植７、１０、１４、１７日後に投与した。経時的に腫瘍の長径（ｍｍ）および短径（ｍｍ）を電子デジタルノギス（株式会社ミツトヨ製）で計測し、以下に示す計算式により腫瘍体積を算出した。
腫瘍体積（ｍｍ３）＝１／２×［腫瘍長径］×［腫瘍短径］×［腫瘍短径］
抗腫瘍効果は、移植２１日後に以下に示す計算式により腫瘍増殖抑制率（ＴＧＩ％）で評価した。
ＴＧＩ （％） ＝ （１−Ａ／Ｂ）×１００
Ａ ： 化合物投与群の判定日の平均腫瘍体積
Ｂ ： 無処置対照群の判定日の平均腫瘍体積
ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１単独投与、５−ＦＵ単独投与、およびｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１と５−ＦＵ併用投与の結果を図２０に示した。数値は平均値±標準誤差（ＳＥ）を示す。移植２１日後におけるＴＧＩは、ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１単独投与群で４９％、５−ＦＵ単独投与群で３２％であったのに対し、ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１と５−ＦＵ併用投与群では、７９％であった。５−ＦＵ単独投与群と、ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１と５−ＦＵ併用投与群との間に、有意差（Ｄｕｎｎｅｔｔ型多重比較検定、ｐ＜０．０００１）が認められ、併用効果が示された。
本発明の提供する抗体と他剤の組合せにより各種癌の治療または予防が可能となる。
配列番号１：ヒト化ＦＲ２−１４軽鎖（ｈＦＲ２−１４＿Ｌ１）のＣＤＲ１のアミノ酸配列（図１）
配列番号２：ヒト化ＦＲ２−１４軽鎖（ｈＦＲ２−１４＿Ｌ１）のＣＤＲ２のアミノ酸配列（図２）
配列番号３：ヒト化ＦＲ２−１４軽鎖（ｈＦＲ２−１４＿Ｌ１）のＣＤＲ３のアミノ酸配列（図３）
配列番号４：ヒト化ＦＲ２−１４重鎖（ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９）のＣＤＲ１のアミノ酸配列（図４）
配列番号５：ヒト化ＦＲ２−１４重鎖（ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９）のＣＤＲ２のアミノ酸配列（図５）
配列番号６：ヒト化ＦＲ２−１４重鎖（ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９）のＣＤＲ３のアミノ酸配列（図６）
配列番号７：ヒト化ＦＲ２−１４軽鎖（ｈＦＲ２−１４＿Ｌ１）の塩基配列。うちヌクレオチド番号１乃至６０はシグナル配列をコードする配列である。
配列番号８：ヒト化ＦＲ２−１４軽鎖（ｈＦＲ２−１４＿Ｌ１）のアミノ酸配列（図７）。うちアミノ酸番号１乃至２０はシグナル配列であり、通常大部分の成熟ｈＦＲ２−１４＿Ｌ１のアミノ酸配列には含まれない。
配列番号９：ヒト化ＦＲ２−１４重鎖（ｈＦＲ２−１４＿Ｈ５）の塩基配列。うちヌクレオチド番号１乃至５７はシグナル配列をコードする配列である。
配列番号１０：ヒト化ＦＲ２−１４重鎖（ｈＦＲ２−１４＿Ｈ５）のアミノ酸配列（図８）。うちアミノ酸番号１乃至１９はシグナル配列であり、通常大部分の成熟ｈＦＲ２−１４＿Ｈ５のアミノ酸配列には含まれない。
配列番号１１：ヒト化ＦＲ２−１４重鎖（ｈＦＲ２−１４＿Ｈ８）の塩基配列。うちヌクレオチド番号１乃至５７はシグナル配列をコードする配列である。
配列番号１２：ヒト化ＦＲ２−１４重鎖（ｈＦＲ２−１４＿Ｈ８）のアミノ酸配列（図９）。うちアミノ酸番号１乃至１９はシグナル配列であり、通常大部分の成熟ｈＦＲ２−１４＿Ｈ８のアミノ酸配列には含まれない。
配列番号１３：ヒト化ＦＲ２−１４重鎖（ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１１）の塩基配列。うちヌクレオチド番号１乃至５７はシグナル配列をコードする配列である。
配列番号１４：ヒト化ＦＲ２−１４重鎖（ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１１）のアミノ酸配列（１０）。うちアミノ酸番号１乃至１９はシグナル配列であり、通常大部分の成熟ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１１のアミノ酸配列には含まれない。
配列番号１５：ヒト化ＦＲ２−１４重鎖（ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１２）の塩基配列。うちヌクレオチド番号１乃至５７はシグナル配列をコードする配列である。
配列番号１６：ヒト化ＦＲ２−１４重鎖（ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１２）のアミノ酸配列（図１１）。うちアミノ酸番号１乃至１９はシグナル配列であり、通常大部分の成熟ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１２のアミノ酸配列には含まれない。
配列番号１７：ヒト化ＦＲ２−１４重鎖（ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９）の塩基配列。うちヌクレオチド番号１乃至５７はシグナル配列をコードする配列である。
配列番号１８：ヒト化ＦＲ２−１４重鎖（ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９）のアミノ酸配列（図１２）。うちアミノ酸番号１乃至１９はシグナル配列であり、通常大部分の成熟ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９のアミノ酸配列には含まれない。
配列番号１９：ヒト化ＦＲ２−１４重鎖（ｈＦＲ２−１４＿Ｈ９）の塩基配列。うちヌクレオチド番号１乃至５７はシグナル配列をコードする配列である。
配列番号２０：ヒト化ＦＲ２−１４重鎖（ｈＦＲ２−１４＿Ｈ９）のアミノ酸配列（図１６）。うちアミノ酸番号１乃至１９はシグナル配列であり、通常大部分の成熟ｈＦＲ２−１４＿Ｈ９のアミノ酸配列には含まれない。

Claims (17)

  1. 下記（ｉ）乃至（ｉｘ）の特徴を有するモノクローナル抗体もしくはその機能断片、および、イリノテカンを含む医薬組成物：
    （ｉ）ヒト２型線維芽細胞増殖因子受容体（ｈＦＧＦＲ２）ＩＩＩｂ及びＩＩＩｃに特異的に結合する；
    （ｉｉ）ｈＦＧＦＲ２の免疫グロブリン様ドメイン２又は免疫グロブリン様ドメイン３に結合する；
    （ｉｉｉ）ヒト１型線維芽細胞増殖因子受容体（ｈＦＧＦＲ１）、ヒト３型線維芽細胞増殖因子受容体（ｈＦＧＦＲ３）及びヒト４型線維芽細胞増殖因子受容体（ｈＦＧＦＲ４）には特異的に結合しない；
    （ｉｖ）抗体依存性細胞傷害活性を有する；
    （ｖ）抗体依存性細胞媒介食活性を有する；
    （ｖｉ）ｈＦＧＦＲ２に対する中和活性を有する；
    （ｖｉｉ）ｉｎ ｖｉｖｏ抗腫瘍活性を有する；
    （ｖｉｉｉ）ｈＦＧＦＲ２へのＦＧＦの結合を阻害する；
    （ｉｘ）キメラ抗体、ヒト化抗体又はヒト抗体、
    であって、該抗体が配列表の配列番号１（図１）に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ１、配列表の配列番号２（図２）に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ２及び配列表の配列番号３（図３）に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＬ３を含むことからなる軽鎖、並びに、配列表の配列番号４（図４）に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ１、配列表の配列番号５（図５）に示されるアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ２及び配列表の配列番号６（図６）に示されるアミノ酸配列もしくは該アミノ酸配列のアミノ末端から数えて１つ目又は２つ目のアミノ酸が他のアミノ酸に置換されてなるアミノ酸配列からなるＣＤＲＨ３を含むことからなる重鎖からなるモノクローナル抗体。
  2. 該抗体が下記（ｉ）乃至（ｖｉ）から選択される、請求項１に記載の医薬組成物：
    （ｉ）配列番号８（図７）で示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号２１乃至２３５を含む軽鎖、および、配列番号１８（図１２）で示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号２０乃至４６７を含む重鎖、を含んでなるヒト化抗体（ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１９／Ｌ１）；
    （ｉｉ）配列番号８（図７）で示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号２１乃至２３５を含む軽鎖、および、配列番号１６（図１１）で示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号２０乃至４６７を含む重鎖、を含んでなるヒト化抗体（ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１２／Ｌ１）；
    （ｉｉｉ）配列番号８（図７）で示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号２１乃至２３５を含む軽鎖、および、配列番号１２（図９）で示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号２０乃至４６７を含む重鎖、を含んでなるヒト化抗体（ｈＦＲ２−１４＿Ｈ８／Ｌ１）；
    （ｉｖ）配列番号８（図７）で示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号２１乃至２３５を含む軽鎖、および、配列番号２０（図１６）で示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号２０乃至４６７を含む重鎖、を含んでなるヒト化抗体（ｈＦＲ２−１４＿Ｈ９／Ｌ１）；
    （ｖ）配列番号８（図７）で示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号２１乃至２３５を含む軽鎖、および、配列番号１４（図１０）で示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号２０乃至４６７を含む重鎖、を含んでなるヒト化抗体（ｈＦＲ２−１４＿Ｈ１１／Ｌ１）；
    （ｖｉ）配列番号８（図７）で示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号２１乃至２３５を含む軽鎖、および、配列番号１０（図８）で示されるアミノ酸配列のアミノ酸番号２０乃至４６７を含む重鎖、を含んでなるヒト化抗体（ｈＦＲ２−１４＿Ｈ５／Ｌ１）。
  3. 該抗体が請求項２の（ｉ）乃至（ｖｉ）のいずれか一つに記載の抗体の重鎖および軽鎖のアミノ酸配列とそれぞれ９５％以上同一なアミノ酸配列を含む重鎖および軽鎖を含んでなり、且つヒトＦＧＦＲ２に結合する、請求項１に記載の医薬組成物。
  4. 該抗体もしくはその機能断片が、請求項２の（ｉ）乃至（ｖｉ）のいずれか一つに記載の抗体が認識する抗原上の部位に結合する、請求項１に記載の医薬組成物。
  5. 該抗体もしくはその機能断片が、請求項２の（ｉ）乃至（ｖｉ）のいずれか一つに記載の抗体と、ｈＦＧＦＲ２への結合において競合する、請求項１に記載の医薬組成物。
  6. 下記の工程（ｉ）及び（ｉｉ）を含むことからなる方法により得られる抗体もしくはその機能断片、および、イリノテカンを含む医薬組成物：
    （ｉ）下記（ア）又は（イ）に記載の細胞を培養する工程；
    （ア）下記（ａ）乃至（ｃ）のいずれか一つに記載のヌクレオチドが挿入された組換えベクター又は該ヌクレオチドが導入された組換え細胞：
    （ａ）請求項１乃至５のいずれか一つに記載の抗体の重鎖または軽鎖の一部または全部のアミノ酸配列をコードする塩基配列を含んでなるヌクレオチド；
    （ｂ）請求項１乃至５のいずれか一つに記載の抗体の重鎖または軽鎖の一部または全部のアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む塩基配列からなるヌクレオチド；
    （ｃ）請求項１乃至５のいずれか一つに記載の抗体の重鎖または軽鎖の一部または全部のアミノ酸配列をコードする塩基配列からなるヌクレオチド；
    （イ）請求項１乃至５のいずれか一つに記載の抗体又はその機能断片を産生する細胞、
    および
    （ｉｉ）前記工程（ｉ）で得られた培養物から請求項１乃至５のいずれか一つに記載の抗体又はその機能断片を回収する工程。
  7. 該抗体の重鎖または軽鎖のアミノ末端またはカルボキシル末端において１乃至５個のアミノ酸が欠失してなる、請求項１乃至６のいずれか一つに記載の医薬組成物。
  8. 請求項１乃至７のいずれか一つに記載の抗体もしくはその機能断片の糖鎖修飾体、および、イリノテカンを含む医薬組成物。
  9. 癌の治療もしくは予防に使用される、請求項１乃至８のいずれか一つに記載の医薬組成物。
  10. 癌がｈＦＧＦＲ２陽性である、請求項９に記載の医薬組成物。
  11. 該抗体もしくはその機能断片がさらなる化合物とコンジュゲートされた、請求項１乃至１０のいずれか一つに記載の医薬組成物。
  12. イリノテカンと併用するための、請求項１乃至７のいずれか一つに記載の組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は請求項８に記載の組成物に含まれる修飾体を含む医薬組成物。
  13. イリノテカンを含み、請求項１乃至７のいずれか一つに記載の組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は請求項８に記載の組成物に含まれる修飾体と併用することにより、該抗体、該機能断片又は該修飾体の作用を上昇させる医薬組成物。
  14. 請求項１乃至７のいずれか一つに記載の組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は請求項８に記載の組成物に含まれる修飾体を含み、イリノテカンと併用することにより、該イリノテカンの作用を上昇させる医薬組成物。
  15. 請求項１乃至７のいずれか一つに記載の組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は請求項８に記載の組成物に含まれる修飾体、および、イリノテカンが組み合わせて投与されることを特徴とする医薬組成物。
  16. 請求項１乃至７のいずれか一つに記載の組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は請求項８に記載の組成物に含まれる修飾体、および、イリノテカンが、それぞれ別の製剤に有効成分として含有され、同時にまたは異なる時間に投与されることを特徴とする、請求項１５に記載の医薬組成物。
  17. 請求項１乃至７のいずれか一つに記載の組成物に含まれる抗体もしくはその機能断片又は請求項８に記載の組成物に含まれる修飾体、および、イリノテカンが、単一の製剤に有効成分として含有されることを特徴とする、請求項１５に記載の医薬組成物。
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