JP6858367B2 - ウイルス吸着剤、該吸着剤を含むウイルス吸着性部材およびマイクロバイサイド - Google Patents
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Description
近年、HIVの増殖を阻止する抗ウイルス薬が開発され、AIDS発症の阻止又は抑制が可能となった。しかし、最も有効な手段は、接触による感染を防ぐことである。
サクランは、単純ヘルペスウイルスを用いたプラークアッセイ法により、ウイルスの増殖抑制効果を示すことが報告されており、抗ウイルス剤としての用途が提案されている(特許文献1:特許第4066443号、特許文献2:特開2009−21136号)。
本発明は以下を含むものである。
[1]サクランを有効成分とするウイルス吸着剤。
[2]サクランを、0.001〜1.0重量%の濃度で含む上記[1]に記載のウイルス吸着剤。
[3]前記ウイルスがHIVである上記[1]または[2]に記載のウイルス吸着剤。
[4]上記[1]〜[3]のいずれか一つに記載のウイルス吸着剤が塗布された部材。
[5]前記部材が、手袋またはコンドームである上記[4]に記載の部材。
[6]ウイルス吸着剤としてサクランを含む、ウイルスの感染を防御するための感染防御組成物。
[7]哺乳動物(好ましくはヒト)の皮膚に塗布するための水性溶液、クリーム状またはゼリー状である上記[6]に記載の組成物。
[8]ヒトのペニス又は膣又は外陰部に塗布するための水性溶液、クリーム状またはゼリー状である上記[6]に記載の組成物。
[9]サクランを0.001〜1.0重量%の濃度で含む上記[6]〜[8]のいずれか一つに記載の組成物。
[10]前記ウイルスがHIVである上記[6]〜[9]のいずれか一つに記載の組成物。
[11]ウイルス吸着剤としてサクランを含むウイルス感染予防剤。
[12]サクランを、0.001〜1.0重量%の濃度で含む上記[11]に記載のウイルス感染予防剤。
[13]前記ウイルスがHIVである上記[11]または[12]に記載のウイルス感染予防剤。
[14]さらに抗ウイルス剤を含む上記[1]〜[3]のいずれか一つに記載のウイルス吸着剤。
[15]前記抗ウイルス剤が、ウイルスの侵入阻害剤である上記[14]に記載のウイルス吸着剤。
[16]前記抗ウイルス剤が、エファビレンツである上記[14]に記載のウイルス吸着剤。
[17]さらに抗ウイルス剤を含む上記[6]〜[10]のいずれか一つに記載の組成物。
[18]前記抗ウイルス剤が、ウイルスの侵入阻害剤である上記[17]に記載の組成物。
[19]前記抗ウイルス剤が、エファビレンツである上記[17]に記載の組成物。
このように、サクランは、酸性多糖類であり、アルカリ溶液を用いることでスイゼンジノリから抽出できる。スイゼンジノリから抽出されるサクランはまた、グリーンサイエンス・マテリアル(株)から入手することができる。
水性溶液またはゾルの形態であれば、様々な部材に塗布が可能であり、容易に本発明の吸着剤を塗布したウイルス吸着部材を作製できる。また、水性溶液またはゾルの形態であれば、体の様々な部位に塗布が容易であり、ウイルスの感染を予防できる。
本発明の吸着剤を水性溶液またはゾル状で用いる場合は、例えば、サクランを、0.001〜0.5重量%、好ましくは0.01〜0.5重量%、より好ましくは0.05〜0.2重量%含む吸着剤をあげあることができる。この範囲でサクランを含有する本発明の吸着剤は、液体状態またはゾル状態を取る。
このような組成物はまた、局所的に適用することにより、ウイルスの感染を防ぐことができるので、マイクロバイサイドとなり得る。本発明の組成物は、いずれの形態も取りうるが、好ましくは、塗布が容易な形態である。これに限定されないが、例えば、水性溶液、クリーム、ゼリー、フィルム等の形態をあげることができる。本発明の感染防御組成物の好ましい態様は、例えば、(i)哺乳動物、例えばヒトの皮膚に塗布するための水性溶液、クリームまたはゼリー、(ii)男性のペニス、女性の膣や外陰部、その他の体の部位に塗布するための水性溶液、クリームまたはゼリーである。ウイルスの接触感染の危険のあるこれらの部位に塗布することにより、ウイルスを吸着し、感染を予防できる。
本発明の吸着剤を抗ウイルス剤とともに用いた場合は、サクランの効果と抗ウイルス剤の効果が相乗的に働き、より強い抗ウイルス作用を示し、感染の防止及び/又は予防が可能となる。かかる場合は、より低濃度のサクランを含有する吸着剤でも十分な効果が発揮できる。
材料:
サクランは、Green Science Material (Kumamoto, Japan) から入手し、脱イオン蒸留水 (deionized double distilled water) に、0.25%〜1%の濃度(w/v)になるように溶解して以下の実験に用いた。HIV (HIV-1LAI) は、NIH AIDS Research and Reference Reagent Program から入手し、Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) に溶解(濃度:2μg/mL)して以下の実験に用いた。
トランズウェル(登録商標)(24ウェルプレート、コーニング社製)を用いて、サクランからなる層に対するHIVの透過性を確認した。
アッパーチャンバー内に種々の濃度のサクラン溶液(終濃度0%、0.5%、1%)50μLを添加しメンブレンを処理した。サクランは、メンブレンを透過せず、メンブレン上に積層される。形成したサクランの層のポアサイズは8μmであった。サクランの層の上に、50μLのHIV溶液を重層した(HIV粒子の直径は、100nmである)。ローワーチャンバー内には600μLのDMEMを添加し、Total volumeを700μLとした。24時間後に、インサートメンブレンを通過したウイルス粒子を含む溶液(ローワーチャンバー内の溶液)、及びアッパーチャンバー内に残ったサクランを含む溶液を回収し、それぞれの溶液中のHIV−1gagタンパク質であるp24抗原量をp24 antigen ELISA kit(ZeptoMetrix Corp., Buffalo, NY)により検出した。
結果を図2に示す。Aは、メンブレンを通過したウイルスの量(ローワーチャンバー内の溶液中のウイルス量)、Bは、メンブレンを通過しなかったウイルスの量(アッパーチャンバー内の溶液中のウイルス量)を示している。サクランの層のポアサイズが、HIVの粒子径に比べて遥かに大きいにもかかわらず、HIVがサクランの層を通過せず、サクランに吸着または捕獲されたことが確認された。
種々の濃度のサクランを用いてHIVの透過性を確認した。
96ウェルのトランズウェル(登録商標)(コーニング社製)を用い、種々の濃度のサクラン溶液(終濃度0%、0.25%、0.5%、0.75%、1%)の37.5μLを、アッパーチャンバー内に入れ、メンブレンを処理した。サクラン層の上に37.5μLのHIV溶液を重層した。ローワーチャンバー内には235μLのDMEMを添加し、Total volume 310μLとした。24時間後に、インサートメンブレンを通過したウイルス粒子を含む溶液(ローワーチャンバー内の溶液)を回収し、実施例1と同様にしてp24抗原量をELISAより検出した。さらに、回収した溶液を、予め用意しておいたTZM−bl細胞に処理し、βガラクトシダーゼ法にてHIV−1感染効率を評価した。結果を、図3に示す。0.25%の濃度のサクラン溶液を処理したメンブレンは、ウイルスの透過を妨げた。
以上の結果より、サクランは、ウイルスを吸着し、ウイルスの拡散や透過を防ぐ効果があることが確認された。
96ウェルのトランズウェル(登録商標)(コーニング社製)を用い、サクランを抗ウイルス薬と併用した場合の効果を、実施例2と同様にして確認した。メンブレンの処理は、サクラン(0.000001%〜0.001%)、抗ウイルス薬(エファビレンツ(東京化成工業より入手):EFV)(3nM〜30nM)、およびサクランとEFVとの併用の3つの条件で行った。
上記各条件でメンブレンを処理した後、HIV溶液を重層した。24時間後に、インサートメンブレンを通過したウイルス粒子を含む溶液(ローワーチャンバー内の溶液)を回収し、実施例2と同様にして、予め用意しておいたTZM−bl細胞に処理し、βガラクトシダーゼ法にてHIV−1感染効率を評価した。結果を、図4〜図7に示す。サクランとEFVとの相乗効果は、ソフトウエア:CompuSyn(www.combosyn.com)を用いて解析した。Cl(Combination Index)が<1であることから、サクランとEFVとの相乗効果が確認された。
96ウェルのトランズウェル(登録商標)(コーニング社製)を用い、サクランを抗ウイルス薬である侵入阻害剤(Entry Inhibitor)と併用した場合の効果を、実施例3と同様にして確認した。メンブレンの処理は、サクラン(0.00001%〜0.001%)、侵入阻害剤であるCXCR4アンタゴニスト(AMD3100(NIH AIDS Research and Reference Reagent Programより入手):10nM〜50nM)またはgp41阻害剤(T−20(NIH AIDS Research and Reference Reagent Programより入手):30nM〜100nM)、およびサクランと侵入阻害剤との併用の3つの条件で行った。結果を、図8〜9に示す。サクランと侵入阻害剤との相乗効果は、Cl(Combination Index)が<1であることから、サクランとEFVとの相乗効果が確認された。
Claims (18)
- サクランを有効成分として含有するウイルス吸着剤であって、サクランを含有する層にウイルスを吸着させることを特徴とするウイルス吸着剤。
- サクランを、0.001〜1.0重量%の濃度で含む請求項1に記載のウイルス吸着剤。
- 前記ウイルスがHIVである請求項1または2に記載のウイルス吸着剤。
- 前記サクランを含有する層は、クリーム状、ゼリー状、またはフィルム状の層である請求項1〜3のいずれか一つに記載のウイルス吸着剤。
- 前記ウイルス吸着剤は、哺乳動物の皮膚に塗布されて使用されることを特徴とする請求項1〜4のいずれか一つに記載のウイルス吸着剤。
- 前記ウイルス吸着剤は、ヒト男性のペニス、またはヒト女性の腟あるいは外陰部に塗布されて使用されることを特徴とする請求項1〜4のいずれか一つに記載のウイルス吸着剤。
- 請求項1〜4のいずれか一つに記載のウイルス吸着剤が塗布された部材。
- 前記部材が、手袋、マスク、またはコンドームである請求項7に記載の部材。
- さらに抗ウイルス剤を含む請求項1〜6のいずれか一つに記載のウイルス吸着剤。
- 前記抗ウイルス剤が、ウイルスの侵入阻害剤である請求項9に記載のウイルス吸着剤。
- 前記抗ウイルス剤が、エファビレンツである請求項10に記載のウイルス吸着剤。
- サクランを有効成分として含有する層を用いてウイルスを捕獲する方法。
- 前記サクランを含有する層が、サクランを、0.001〜1.0重量%の濃度で含む請求項12に記載の方法。
- 前記ウイルスがHIVである請求項12または13に記載の方法。
- 前記サクランを含有する層は、クリーム状、ゼリー状、またはフィルム状の層である請求項12〜14のいずれか一つに記載の方法。
- 請求項12〜15のいずれか一つに記載のウイルスを捕獲する方法であって、ヒトの体の部位にサクランを含有する層を塗布することを特徴とする方法。
- 前記部位が、皮膚、男性のペニス、または女性の腟あるいは外陰部である請求項16に記載の方法。
- 請求項12〜15のいずれか一つに記載のウイルスを捕獲する方法であって、手袋、マスク、またはコンドームにサクランを含有する層を塗布することを特徴とする方法。
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