JP6851576B2 - 検体中の脂質による濁り抑制剤 - Google Patents
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[2]吸光度法による検体中の測定対象成分の測定において用いられる、[1]記載の抑制剤。
[3]検体が、血清又は血漿である、[1]又は[2]記載の抑制剤。
[5]吸光度法による検体中の測定対象成分の測定において用いられる、[4]記載の抑制方法。
[6]検体が、血清又は血漿である、[4]又は[5]記載の抑制方法。
[8]検体が、血清又は血漿である、[7]記載の測定方法
本発明の、検体中の脂質による濁り抑制剤は、検体中の脂質による濁りを抑制するために使用され、(i)POEの分子量が110以上、250未満であり、かつ、[アルキルの分子量]/[POEの分子量]が0.4以上、1.25以下であるPOE・POPアルキルエーテル(以下、POE・POPアルキルエーテルAと記す)、及び、(ii)POEの分子量が250以上、460未満であり、かつ、[アルキルの分子量]/[POEの分子量]が0.4以上、0.75以下であるPOE・POPアルキルエーテル(以下、POE・POPアルキルエーテルBと記す)を含有する。
等が挙げられる。
(1)脂質による濁りを有する検体の吸光度を測定する工程;
(2)(1)の検体と、脂質による濁りの抑制剤とを混合する工程;
(3)工程(2)で得られた混合物を一定温度で一定時間加温する工程;
(4)工程(3)で得られた混合物の吸光度を測定する工程;
(5)工程(4)で測定された吸光度が基準値以下であった場合に濁りが抑制され、工程(4)で測定された吸光度が基準値を越えていた場合に濁りが抑制されていない、と評価する工程。
本発明の、検体中の脂質による濁り抑制剤は、吸光度法による検体中の測定対象成分の測定において用いられる。吸光度法による検体中の測定対象成分の測定としては、例えば酵素的測定法による測定、比濁免疫測定法による測定等が挙げられる。酵素的測定法により測定される測定対象成分としては、例えば総コレステロール(TC)、遊離型コレステロール(FC)、エステル型コレステロール(EC)、中性脂肪(TG)、クレアチニン、クレアチン、尿酸、リン脂質、糖化タンパク質等が挙げられる。比濁免疫測定法により測定される測定対象成分としては、例えば糖化タンパク質、便中ヘモグロビン、C反応性タンパク質(CRP)、前立腺特異抗原(PSA)、マトリックスプロテアーゼ3(MMP−3)等が挙げられる。リン脂質としては、例えばホスファチジルコリン、リゾホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン等が挙げられる。糖化タンパク質としては、例えば糖化ヘモグロビン、糖化アルブミン等が挙げられる。
本発明の検体中の測定対象成分の測定は、例えば以下の工程を含む方法により行うことができる。
(1)検体と本発明の濁り抑制剤とを混合する工程;
(2)工程(1)で得られた混合物を、測定対象成分測定試薬と反応させる工程;
(3)工程(2)の反応により測定値を得る工程;
(4)既知濃度の測定対象成分を用いて予め作成した、測定対象成分濃度と測定値との関係を表す検量線と、工程(3)で得られた測定値とから、検体中の測定対象成分濃度を決定する工程。
本発明の検体中の脂質による濁り抑制方法は、検体を、(i)POE・POPアルキルエーテルA、及び、(ii)POE・POPアルキルエーテルBと反応させることを特徴とする特徴とする方法である。本発明の濁り抑制方法における検体、脂質としては、例えば前述の検体、脂質等がそれぞれ挙げられる。本発明の濁り抑制方法におけるPOE・POPアルキルエーテルAとしては、例えば前述のPOE・POPアルキルエーテルA等が挙げられる。本発明の濁り抑制方法におけるPOE・POPアルキルエーテルBとしては、例えば前述のPOE・POPアルキルエーテルB等が挙げられる。
以下、実施例により本発明をより詳細に説明するが、これらは本発明の範囲を何ら限定するものではない。なお、本実施例においては、下記メーカーの試薬及び酵素を使用した。
EMALEX DAPE−0203(日本エマルジョン社製)
ファインサーフNDB−800(青木油脂社製)
ワンダーサーフRL−80(青木油脂社製)
ワンダーサーフID−50(青木油脂社製)
ワンダーサーフID−70(青木油脂社製)
ワンダーサーフS−800(青木油脂社製)
ノニオンA−13P(日油社製)
EMALEX DAPE−0207(日本エマルジョン社製)
ファインサーフNDB−1000(青木油脂社製)
ファインサーフTDE−1055(青木油脂社製)
ファインサーフIDEP−802(青木油脂社製)
ワンダーサーフRL−100(青木油脂社製)
ワンダーサーフID−90(青木油脂社製)
ワンダーサーフNDR−1000(青木油脂社製)
ワンダーサーフS−1000(青木油脂社製)
EMALEX DAPE−0210(日本エマルジョン社製)
EMALEX DAPE−0212(日本エマルジョン社製)
EMALEX DAPE−0215(日本エマルジョン社製)
EMALEX DAPE−0220(日本エマルジョン社製)
ファインサーフNDB−1400(青木油脂社製)
ワンダーサーフNDR−1400(青木油脂社製)
ワンダーサーフRL−180(青木油脂社製)
ワンダーサーフS−1400(青木油脂社製)
イントラリポス(大塚製薬社製)、生理食塩水(大塚製薬社製)、TAPSO(同仁化学研究所社製)、PIPES(同仁化学研究所社製)、4−アミノアンチピリン(埼京化成社製)、N−(3,5−ジメトキシフェニル)−N’−サクシニルエチレンジアミン(DOSE)(同仁化学研究所社製)、硫酸ナトリウム(関東化学社製)、ペルオキシダーゼ(東洋紡社製)、アスコルビン酸オキシダーゼ(旭化成社製)、リポプロテインリパーゼ(コレステロールエステル加水分解酵素;東洋紡社製)、コレステロールエステル酸化酵素(CHODII)(天野エンザイム社製)、プロノンB−208(POE・ポリオキシブチレン縮合物;日油社製)、EMALEX 2425(POE長鎖分岐アルキルエーテル;日本エマルジョン社製)、ユニルーブMT−0620B(POE・ポリオキシアルキレン長鎖分岐アルキルエーテル;日油社製)。
<濁り抑制剤>
精製水
ワンダーサーフRL−80(POE・POPアルキルエーテルA) 7g/L
POE・POPアルキルエーテルB(第4表参照)
(1)脂質検体の調製
イントラリポスを生理食塩水で5倍希釈して、脂質検体を調製した。イントラリポスは、大豆油による中性脂肪(TG)を主成分とする脂肪乳剤である。
(2)脂質検体と濁り抑制剤との混合、及び、濁度の測定
反応セルに、上記(1)で調製した脂質検体(2μL)及び実施例1で調製した濁り抑制剤1A(150μL)を添加し、得られた混合物を37℃で加温しつつ、混合物の濁度(吸光度)を、日立7170型自動分析装置にて、主波長600nm、副波長800nmで測定した。その結果を図1に示す。
<濁り抑制剤>
精製水
ファインサーフNDB−800(POE・POPアルキルエーテルA) 7g/L
POE・POPアルキルエーテルB(第5表参照)
図2から明らかな様に、ファインサーフNDB−800(POE・POPアルキルエーテルA)及びPOE・POPアルキルエーテルBを含む濁り抑制剤を用いることにより、脂質による濁りを抑制できることが分かった。
<濁り抑制剤>
精製水
ノニオンA−13P(POE・POPアルキルエーテルA) 7g/L
POE・POPアルキルエーテルB(第6表参照)
図3から明らかな様に、ノニオンA−13P(POE・POPアルキルエーテルA)及びPOE・POPアルキルエーテルBを含む濁り抑制剤を用いることにより、脂質による濁りを抑制できることが分かった。
<濁り抑制剤>
精製水
EMALEX DAPE−0203(POE・POPアルキルエーテルA) 3g/L
POE・POPアルキルエーテルB(第7表参照)
図4から明らかな様に、EMALEX DAPE−0203(POE・POPアルキルエーテルA)及びPOE・POPアルキルエーテルBを含む濁り抑制剤を用いることにより、脂質による濁りを抑制できることが分かった。
以下の組成からなる、POE・POPアルキルエーテルAのみを含み、POE・POPアルキルエーテルBを含まない、濁り抑制剤(1a〜1f)を調製した。
<濁り抑制剤>
精製水
POE・POPアルキルエーテルA(第8表参照)
実施例1で調製した濁り抑制剤の代わりに比較例1で調製した濁り抑制剤を用いる以外は実施例2と同様の方法により、濁り抑制効果を評価した。その結果を図5に示す。
図5から明らかな様に、POE・POPアルキルエーテルAのみを含み、POE・POPアルキルエーテルBを含まない濁り抑制剤を用いた場合には、脂質による濁りは抑制されないことが分かった。
以下の組成からなる、POE・POPアルキルエーテルBのみを含み、POE・POPアルキルエーテルAを含まない、濁り抑制剤(2a〜2g)を調製した。
<濁り抑制剤>
精製水
POE・POPアルキルエーテルB(第9表参照)
実施例1で調製した濁り抑制剤の代わりに比較例3で調製した濁り抑制剤を用いる以外は実施例2と同様の方法により、濁り抑制効果を評価した。その結果を図6に示す。
以下の組成からなる、POE・POPアルキルエーテルCのみを含み、POE・POPアルキルエーテルA、POE・POPアルキルエーテルBのいずれも含まない濁り抑制剤(3a〜3h)を調製した。
<濁り抑制剤>
精製水
POE・POPアルキルエーテルC(第10表参照)
実施例1で調製した濁り抑制剤の代わりに比較例5で調製した濁り抑制剤を用いる以外は実施例2と同様の方法により、濁り抑制効果を評価した。その結果を図7に示す。
図7から明らかな様に、POE・POPアルキルエーテルCのみを含み、POE・POPアルキルエーテルA、POE・POPアルキルエーテルBのいずれも含まない濁り抑制剤を用いた場合には、脂質による濁りは全く可溶化されず、脂質による濁りは抑制されないことが分かった。
<TC測定用キット>
第1試薬
TAPSO(pH7.0) 5.2g/L
ワンダーサーフRL−80(POE・POPアルキルエーテルA)
3g/L
ワンダーサーフRL−100(POE・POPアルキルエーテルB)
5g/L
DOSE 0.15g/L
硫酸ナトリウム 3g/L
ペルオキシダーゼ 2.5kU/L
アスコルビン酸オキシダーゼ 2kU/L
リポプロテインリパーゼ 0.05kU/L
第2試薬
PIPES(pH7.5) 3g/L
界面活性剤(第11表参照)
4−アミノアンチピリン 0.5g/L
CHODII 4kU/L
<検体>
・検体1:健常人による血清と生理食塩水とを1:1で混合して調製した検体
・検体2:上記検体1の調製で使用した健常人による血清とイントラリポスとを1:1で混合して調製した検体
・検体3:イントラリポスと生理食塩水とを1:1で混合して調製した検体
(1)検量線の作成
標準液として、生理食塩水(TC濃度:0.0mg/dL)、及び、デタミナー標準血清脂質測定用(TC濃度:200〜250mg/dL)(協和メデックス社製)を用いて、TC測定用キットとして、「デタミナーL TCII」(協和メデックス社製)及び実施例9のキット1〜3の各キットを用いて、日立7170S型自動分析機により、各キットについて、TC濃度と「吸光度」との関係を示す検量線を作成した。
(2)検体に対する「吸光度」の測定
上記(1)の検量線作成において、標準液の代わりに上記で調製した検体1〜検体3の各検体を用いる以外は、(1)の「吸光度」算出方法と同様の操作を行い、各検体に対する「吸光度」を測定した。
(3)検体中のTC濃度の決定
上記(2)で測定した「吸光度」と、(1)で作成した検量線とから、各検体中のTC濃度を決定した。その結果を第12表に示す。
Claims (8)
- (i)ポリオキシエチレンの分子量が110以上、250未満であり、かつ、[アルキルの分子量]/[ポリオキシエチレンの分子量]が0.4以上、1.25以下であるポリオキシエチレン・ポリオキシプロピレンアルキルエーテル、及び、(ii)ポリオキシエチレンの分子量が250以上、460未満であり、かつ、[アルキルの分子量]/[ポリオキシエチレンの分子量]が0.4以上、0.75以下であるポリオキシエチレン・ポリオキシプロピレンアルキルエーテルを含有することを特徴とする、検体中の脂質による濁り抑制剤。
- 吸光度法による検体中の測定対象成分の測定において用いられる、請求項1記載の抑制剤。
- 検体が、血清又は血漿である、請求項1又は2記載の抑制剤。
- 検体を、(i)ポリオキシエチレンの分子量が110以上、250未満であり、かつ、[アルキルの分子量]/[ポリオキシエチレンの分子量]が0.4以上、1.25以下であるポリオキシエチレン・ポリオキシプロピレンアルキルエーテル、及び、(ii)ポリオキシエチレンの分子量が250以上、460未満であり、かつ、[アルキルの分子量]/[ポリオキシエチレンの分子量]が0.4以上、0.75以下であるポリオキシエチレン・ポリオキシプロピレンアルキルエーテルと混合させることを特徴とする、検体中の脂質による濁り抑制方法。
- 吸光度法による検体中の測定対象成分の測定において用いられる、請求項4記載の抑制方法。
- 検体が、血清又は血漿である、請求項4又は5記載の抑制方法。
- 検体と、請求項1〜3のいずれかに記載の抑制剤とを混合した後、検体中の測定対象成分を吸光度法により測定する、検体中の測定対象成分の測定方法。
- 検体が、血清又は血漿である、請求項7記載の測定方法。
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