JP6845589B2 - 腱治癒を調節するための物質および方法 - Google Patents
腱治癒を調節するための物質および方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP6845589B2 JP6845589B2 JP2019190297A JP2019190297A JP6845589B2 JP 6845589 B2 JP6845589 B2 JP 6845589B2 JP 2019190297 A JP2019190297 A JP 2019190297A JP 2019190297 A JP2019190297 A JP 2019190297A JP 6845589 B2 JP6845589 B2 JP 6845589B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- mir
- tendon
- nucleotides
- identity
- mimic
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 title claims description 137
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 39
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 title description 26
- 230000035876 healing Effects 0.000 title description 22
- 239000000126 substance Substances 0.000 title description 2
- 108091007431 miR-29 Proteins 0.000 claims description 126
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims description 105
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims description 105
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims description 102
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 claims description 89
- 208000021945 Tendon injury Diseases 0.000 claims description 43
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 29
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims description 29
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 21
- 208000023835 Tendon disease Diseases 0.000 claims description 20
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 claims description 18
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 claims description 18
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 18
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims description 17
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 13
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 11
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 8
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 8
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 claims description 6
- 108091068837 Homo sapiens miR-29b-1 stem-loop Proteins 0.000 claims description 4
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 claims description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 3
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 271
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 269
- 108091088477 miR-29a stem-loop Proteins 0.000 description 94
- 108091029716 miR-29a-1 stem-loop Proteins 0.000 description 94
- 108091092089 miR-29a-2 stem-loop Proteins 0.000 description 94
- 108091066559 miR-29a-3 stem-loop Proteins 0.000 description 94
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 85
- 108010067003 Interleukin-33 Proteins 0.000 description 80
- 102000017761 Interleukin-33 Human genes 0.000 description 80
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 61
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 58
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 56
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 47
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 41
- 101000852968 Homo sapiens Interleukin-1 receptor-like 1 Proteins 0.000 description 39
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 38
- 102100036706 Interleukin-1 receptor-like 1 Human genes 0.000 description 37
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 37
- 101000585365 Homo sapiens Sulfotransferase 2A1 Proteins 0.000 description 36
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 36
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 35
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 35
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 description 34
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 33
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 32
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 32
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 30
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 28
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 27
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 description 25
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 25
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 24
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 22
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 21
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 20
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 20
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 19
- 108020005345 3' Untranslated Regions Proteins 0.000 description 19
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 19
- 108091029162 miR-29 stem-loop Proteins 0.000 description 19
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 17
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 17
- 208000000491 Tendinopathy Diseases 0.000 description 16
- -1 bicyclic sugars Chemical class 0.000 description 16
- 230000008859 change Effects 0.000 description 15
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 13
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 13
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 13
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 13
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 13
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 13
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 12
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 12
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 12
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 108091047189 miR-29c stem-loop Proteins 0.000 description 11
- 108091054490 miR-29c-2 stem-loop Proteins 0.000 description 11
- 210000000426 patellar ligament Anatomy 0.000 description 11
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 11
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 11
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 10
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 10
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 10
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 10
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 10
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 9
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 9
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 9
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 9
- 108091057475 miR-29b-1 stem-loop Proteins 0.000 description 9
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 9
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 9
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- 108700011259 MicroRNAs Proteins 0.000 description 8
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 8
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 8
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 8
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 8
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 8
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 7
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 7
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 7
- 230000006870 function Effects 0.000 description 7
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 7
- 108091025088 miR-29b-2 stem-loop Proteins 0.000 description 7
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- 101100328884 Caenorhabditis elegans sqt-3 gene Proteins 0.000 description 6
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 6
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 6
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 6
- 108091007432 miR-29b Proteins 0.000 description 6
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 6
- WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N phosphatidylcholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC WTJKGGKOPKCXLL-RRHRGVEJSA-N 0.000 description 6
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 6
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 6
- 101150008975 Col3a1 gene Proteins 0.000 description 5
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 5
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 108091027559 Mir-96 microRNA Proteins 0.000 description 5
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 5
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 5
- 208000024288 Rotator Cuff injury Diseases 0.000 description 5
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 230000008482 dysregulation Effects 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 5
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 5
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 5
- 108091086713 miR-96 stem-loop Proteins 0.000 description 5
- 108091070961 miR-96-3 stem-loop Proteins 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 5
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 5
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 5
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 5
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 5
- 230000000472 traumatic effect Effects 0.000 description 5
- 101710167800 Capsid assembly scaffolding protein Proteins 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091068845 Homo sapiens miR-29b-2 stem-loop Proteins 0.000 description 4
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 4
- KPKZJLCSROULON-QKGLWVMZSA-N Phalloidin Chemical compound N1C(=O)[C@@H]([C@@H](O)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C[C@@](C)(O)CO)NC(=O)[C@H](C2)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]3C[C@H](O)CN3C(=O)[C@@H]1CSC1=C2C2=CC=CC=C2N1 KPKZJLCSROULON-QKGLWVMZSA-N 0.000 description 4
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 4
- 101710130420 Probable capsid assembly scaffolding protein Proteins 0.000 description 4
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 4
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 4
- 101710204410 Scaffold protein Proteins 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 4
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 4
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 4
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 4
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 4
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 4
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 4
- 150000008104 phosphatidylethanolamines Chemical class 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 4
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 4
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 4
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 3
- KSXTUUUQYQYKCR-LQDDAWAPSA-M 2,3-bis[[(z)-octadec-9-enoyl]oxy]propyl-trimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(C[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC KSXTUUUQYQYKCR-LQDDAWAPSA-M 0.000 description 3
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 3
- 101150008656 COL1A1 gene Proteins 0.000 description 3
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 3
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102100022887 GTP-binding nuclear protein Ran Human genes 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101000774835 Heteractis crispa PI-stichotoxin-Hcr2o Proteins 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 101000620756 Homo sapiens GTP-binding nuclear protein Ran Proteins 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101100393821 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) GSP2 gene Proteins 0.000 description 3
- 206010043248 Tendon rupture Diseases 0.000 description 3
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 125000000218 acetic acid group Chemical group C(C)(=O)* 0.000 description 3
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 3
- 238000012761 co-transfection Methods 0.000 description 3
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 3
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 3
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 3
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 3
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 3
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 3
- 238000003670 luciferase enzyme activity assay Methods 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 3
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- STGXGJRRAJKJRG-JDJSBBGDSA-N (3r,4r,5r)-5-(hydroxymethyl)-3-methoxyoxolane-2,4-diol Chemical compound CO[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H]1O STGXGJRRAJKJRG-JDJSBBGDSA-N 0.000 description 2
- KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC KILNVBDSWZSGLL-KXQOOQHDSA-N 0.000 description 2
- NRJAVPSFFCBXDT-HUESYALOSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC NRJAVPSFFCBXDT-HUESYALOSA-N 0.000 description 2
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LDGWQMRUWMSZIU-LQDDAWAPSA-M 2,3-bis[(z)-octadec-9-enoxy]propyl-trimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCOCC(C[N+](C)(C)C)OCCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC LDGWQMRUWMSZIU-LQDDAWAPSA-M 0.000 description 2
- WALUVDCNGPQPOD-UHFFFAOYSA-M 2,3-di(tetradecoxy)propyl-(2-hydroxyethyl)-dimethylazanium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCOCC(C[N+](C)(C)CCO)OCCCCCCCCCCCCCC WALUVDCNGPQPOD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- FZWGECJQACGGTI-UHFFFAOYSA-N 2-amino-7-methyl-1,7-dihydro-6H-purin-6-one Chemical compound NC1=NC(O)=C2N(C)C=NC2=N1 FZWGECJQACGGTI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OVONXEQGWXGFJD-UHFFFAOYSA-N 4-sulfanylidene-1h-pyrimidin-2-one Chemical compound SC=1C=CNC(=O)N=1 OVONXEQGWXGFJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RYVNIFSIEDRLSJ-UHFFFAOYSA-N 5-(hydroxymethyl)cytosine Chemical compound NC=1NC(=O)N=CC=1CO RYVNIFSIEDRLSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PEHVGBZKEYRQSX-UHFFFAOYSA-N 7-deaza-adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1C=CN2 PEHVGBZKEYRQSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HCGHYQLFMPXSDU-UHFFFAOYSA-N 7-methyladenine Chemical compound C1=NC(N)=C2N(C)C=NC2=N1 HCGHYQLFMPXSDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MSSXOMSJDRHRMC-UHFFFAOYSA-N 9H-purine-2,6-diamine Chemical compound NC1=NC(N)=C2NC=NC2=N1 MSSXOMSJDRHRMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthine Chemical compound O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000025978 Athletic injury Diseases 0.000 description 2
- 101150072801 COL1A2 gene Proteins 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 102100025680 Complement decay-accelerating factor Human genes 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 2
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 2
- 101000856022 Homo sapiens Complement decay-accelerating factor Proteins 0.000 description 2
- 101000979342 Homo sapiens Nuclear factor NF-kappa-B p105 subunit Proteins 0.000 description 2
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine Natural products O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 description 2
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 2
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 2
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 2
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000043136 MAP kinase family Human genes 0.000 description 2
- 108091054455 MAP kinase family Proteins 0.000 description 2
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102100023050 Nuclear factor NF-kappa-B p105 subunit Human genes 0.000 description 2
- 108010009711 Phalloidine Proteins 0.000 description 2
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 102000009572 RNA Polymerase II Human genes 0.000 description 2
- 108010009460 RNA Polymerase II Proteins 0.000 description 2
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 239000008156 Ringer's lactate solution Substances 0.000 description 2
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000006180 TBST buffer Substances 0.000 description 2
- 102000007000 Tenascin Human genes 0.000 description 2
- 108010008125 Tenascin Proteins 0.000 description 2
- 102100033740 Tenomodulin Human genes 0.000 description 2
- 101710114852 Tenomodulin Proteins 0.000 description 2
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical group OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000009692 acute damage Effects 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- BWZOPYPOZJBVLQ-UHFFFAOYSA-K aluminium glycinate Chemical group O[Al+]O.NCC([O-])=O BWZOPYPOZJBVLQ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 108010045569 atelocollagen Proteins 0.000 description 2
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 2
- 230000003436 cytoskeletal effect Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 230000008034 disappearance Effects 0.000 description 2
- ZGSPNIOCEDOHGS-UHFFFAOYSA-L disodium [3-[2,3-di(octadeca-9,12-dienoyloxy)propoxy-oxidophosphoryl]oxy-2-hydroxypropyl] 2,3-di(octadeca-9,12-dienoyloxy)propyl phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].CCCCCC=CCC=CCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC)COP([O-])(=O)OCC(O)COP([O-])(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC)COC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC ZGSPNIOCEDOHGS-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 125000001475 halogen functional group Chemical group 0.000 description 2
- 102000055002 human IL1RL1 Human genes 0.000 description 2
- 230000001146 hypoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 2
- 102000014909 interleukin-1 receptor activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108040006732 interleukin-1 receptor activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 2
- 210000003127 knee Anatomy 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 238000003468 luciferase reporter gene assay Methods 0.000 description 2
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 2
- 238000012045 magnetic resonance elastography Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000034217 membrane fusion Effects 0.000 description 2
- 108091048549 miR-29b stem-loop Proteins 0.000 description 2
- NFQBIAXADRDUGK-KWXKLSQISA-N n,n-dimethyl-2,3-bis[(9z,12z)-octadeca-9,12-dienoxy]propan-1-amine Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCCOCC(CN(C)C)OCCCCCCCC\C=C/C\C=C/CCCCC NFQBIAXADRDUGK-KWXKLSQISA-N 0.000 description 2
- 102000002574 p38 Mitogen-Activated Protein Kinases Human genes 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 2
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 2
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 229920000729 poly(L-lysine) polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N propylamine Chemical compound CCCN WGYKZJWCGVVSQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 2
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 2
- 238000013077 scoring method Methods 0.000 description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 2
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 210000002303 tibia Anatomy 0.000 description 2
- 230000007838 tissue remodeling Effects 0.000 description 2
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 2
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 2
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 2
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 2
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RPCAIVBGHNPKNM-LMVFSUKVSA-N (2r,3s,4r)-2,3,5-trihydroxy-4-sulfanylpentanal Chemical compound OC[C@@H](S)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O RPCAIVBGHNPKNM-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N (3-hexadecanoyloxy-2-hydroxypropyl) 2-(trimethylazaniumyl)ethyl phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C ASWBNKHCZGQVJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- LVNGJLRDBYCPGB-LDLOPFEMSA-N (R)-1,2-distearoylphosphatidylethanolamine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[NH3+])OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC LVNGJLRDBYCPGB-LDLOPFEMSA-N 0.000 description 1
- FVXDQWZBHIXIEJ-LNDKUQBDSA-N 1,2-di-[(9Z,12Z)-octadecadienoyl]-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/C\C=C/CCCCC FVXDQWZBHIXIEJ-LNDKUQBDSA-N 0.000 description 1
- PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycerol-3-phosphate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PORPENFLTBBHSG-MGBGTMOVSA-N 0.000 description 1
- SNKAWJBJQDLSFF-NVKMUCNASA-N 1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC SNKAWJBJQDLSFF-NVKMUCNASA-N 0.000 description 1
- UYHAERNXVVKSCT-PGUFJCEWSA-N 1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphoethanol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC UYHAERNXVVKSCT-PGUFJCEWSA-N 0.000 description 1
- TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC TZCPCKNHXULUIY-RGULYWFUSA-N 0.000 description 1
- QAIBOSDADREVLH-UHFFFAOYSA-N 1-(1,3-dioxolan-2-yl)-n,n-dimethylmethanamine Chemical compound CN(C)CC1OCCO1 QAIBOSDADREVLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UHUHBFMZVCOEOV-UHFFFAOYSA-N 1h-imidazo[4,5-c]pyridin-4-amine Chemical compound NC1=NC=CC2=C1N=CN2 UHUHBFMZVCOEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FPUGCISOLXNPPC-UHFFFAOYSA-N 2'-O-Methyladenosine Natural products COC1C(O)C(CO)OC1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 FPUGCISOLXNPPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FPUGCISOLXNPPC-IOSLPCCCSA-N 2'-methoxyadenosine Natural products CO[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 FPUGCISOLXNPPC-IOSLPCCCSA-N 0.000 description 1
- TXLHNFOLHRXMAU-UHFFFAOYSA-N 2-(4-benzylphenoxy)-n,n-diethylethanamine;hydron;chloride Chemical compound Cl.C1=CC(OCCN(CC)CC)=CC=C1CC1=CC=CC=C1 TXLHNFOLHRXMAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WKMPTBDYDNUJLF-UHFFFAOYSA-N 2-fluoroadenine Chemical compound NC1=NC(F)=NC2=C1N=CN2 WKMPTBDYDNUJLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OKXBWVNLYDDCPX-UHFFFAOYSA-N 3,3-di(tetradecoxy)propan-1-amine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCOC(CCN)OCCCCCCCCCCCCCC OKXBWVNLYDDCPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 description 1
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-dimethylaminopyridine Substances CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LRSASMSXMSNRBT-UHFFFAOYSA-N 5-methylcytosine Chemical compound CC1=CNC(=O)N=C1N LRSASMSXMSNRBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UJBCLAXPPIDQEE-UHFFFAOYSA-N 5-prop-1-ynyl-1h-pyrimidine-2,4-dione Chemical compound CC#CC1=CNC(=O)NC1=O UJBCLAXPPIDQEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KXBCLNRMQPRVTP-UHFFFAOYSA-N 6-amino-1,5-dihydroimidazo[4,5-c]pyridin-4-one Chemical compound O=C1NC(N)=CC2=C1N=CN2 KXBCLNRMQPRVTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LOSIULRWFAEMFL-UHFFFAOYSA-N 7-deazaguanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1CC=N2 LOSIULRWFAEMFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRYKDUPGBWLLHO-UHFFFAOYSA-N 8-azaadenine Chemical compound NC1=NC=NC2=NNN=C12 HRYKDUPGBWLLHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LPXQRXLUHJKZIE-UHFFFAOYSA-N 8-azaguanine Chemical compound NC1=NC(O)=C2NN=NC2=N1 LPXQRXLUHJKZIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005508 8-azaguanine Drugs 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N Adenosine Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 102000054930 Agouti-Related Human genes 0.000 description 1
- 101710085003 Alpha-tubulin N-acetyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 101710085461 Alpha-tubulin N-acetyltransferase 1 Proteins 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 101100328883 Arabidopsis thaliana COL1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100339431 Arabidopsis thaliana HMGB2 gene Proteins 0.000 description 1
- 108050001427 Avidin/streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 102000018720 Basic Helix-Loop-Helix Transcription Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010027344 Basic Helix-Loop-Helix Transcription Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 102100021943 C-C motif chemokine 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710155857 C-C motif chemokine 2 Proteins 0.000 description 1
- 239000002126 C01EB10 - Adenosine Substances 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- 206010008723 Chondrodystrophy Diseases 0.000 description 1
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000777300 Congiopodidae Species 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- 108010025905 Cystine-Knot Miniproteins Proteins 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- 102000052510 DNA-Binding Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108700020911 DNA-Binding Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101150034825 DODA gene Proteins 0.000 description 1
- XULFJDKZVHTRLG-JDVCJPALSA-N DOSPA trifluoroacetate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F.CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCOCC(C[N+](C)(C)CCNC(=O)C(CCCNCCCN)NCCCN)OCCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC XULFJDKZVHTRLG-JDVCJPALSA-N 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 108700022150 Designed Ankyrin Repeat Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 101100394030 Dictyostelium discoideum gxcB gene Proteins 0.000 description 1
- GZDFHIJNHHMENY-UHFFFAOYSA-N Dimethyl dicarbonate Chemical compound COC(=O)OC(=O)OC GZDFHIJNHHMENY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012824 ERK inhibitor Substances 0.000 description 1
- 102000016942 Elastin Human genes 0.000 description 1
- 108010014258 Elastin Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylserin Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(=O)OCC(O)CO ZWZWYGMENQVNFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282575 Gorilla Species 0.000 description 1
- 108700010013 HMGB1 Proteins 0.000 description 1
- 101150021904 HMGB1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100037907 High mobility group protein B1 Human genes 0.000 description 1
- 102000006947 Histones Human genes 0.000 description 1
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 description 1
- 101000744174 Homo sapiens DNA-3-methyladenine glycosylase Proteins 0.000 description 1
- 101000998137 Homo sapiens Interleukin-33 Proteins 0.000 description 1
- 101000934372 Homo sapiens Macrosialin Proteins 0.000 description 1
- 102000039996 IL-1 family Human genes 0.000 description 1
- 108091069196 IL-1 family Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102100030703 Interleukin-22 Human genes 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 1
- 208000012659 Joint disease Diseases 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 240000000599 Lentinula edodes Species 0.000 description 1
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 1
- 101000680845 Luffa aegyptiaca Ribosome-inactivating protein luffin P1 Proteins 0.000 description 1
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 description 1
- 102000019149 MAP kinase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040008097 MAP kinase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100025136 Macrosialin Human genes 0.000 description 1
- 108090000301 Membrane transport proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003939 Membrane transport proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091033773 MiR-155 Proteins 0.000 description 1
- 102100024193 Mitogen-activated protein kinase 1 Human genes 0.000 description 1
- 101000998136 Mus musculus Interleukin-33 Proteins 0.000 description 1
- 108010057466 NF-kappa B Proteins 0.000 description 1
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 1
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 description 1
- 108020003217 Nuclear RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000043141 Nuclear RNA Human genes 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 108010079855 Peptide Aptamers Proteins 0.000 description 1
- 241000288935 Platyrrhini Species 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 241000282405 Pongo abelii Species 0.000 description 1
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 description 1
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 239000013614 RNA sample Substances 0.000 description 1
- 102000000574 RNA-Induced Silencing Complex Human genes 0.000 description 1
- 108010016790 RNA-Induced Silencing Complex Proteins 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 241000242739 Renilla Species 0.000 description 1
- 241000242743 Renilla reniformis Species 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 101150095505 ST2 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010039710 Scleroderma Diseases 0.000 description 1
- 206010072170 Skin wound Diseases 0.000 description 1
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 206010043255 Tendonitis Diseases 0.000 description 1
- GUGOEEXESWIERI-UHFFFAOYSA-N Terfenadine Chemical compound C1=CC(C(C)(C)C)=CC=C1C(O)CCCN1CCC(C(O)(C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC=CC=2)CC1 GUGOEEXESWIERI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091036066 Three prime untranslated region Proteins 0.000 description 1
- 102100023935 Transmembrane glycoprotein NMB Human genes 0.000 description 1
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M Trifluoroacetate Chemical compound [O-]C(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000001400 Tryptase Human genes 0.000 description 1
- 108060005989 Tryptase Proteins 0.000 description 1
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 101710175714 Tyrosine aminotransferase Proteins 0.000 description 1
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 description 1
- 102000044159 Ubiquitin Human genes 0.000 description 1
- 108091023045 Untranslated Region Proteins 0.000 description 1
- LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N Uric Acid Chemical compound N1C(=O)NC(=O)C2=C1NC(=O)N2 LEHOTFFKMJEONL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N Uric acid Natural products N1C(=O)NC(=O)C2NC(=O)NC21 TVWHNULVHGKJHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010087302 Viral Structural Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- CWRILEGKIAOYKP-SSDOTTSWSA-M [(2r)-3-acetyloxy-2-hydroxypropyl] 2-aminoethyl phosphate Chemical compound CC(=O)OC[C@@H](O)COP([O-])(=O)OCCN CWRILEGKIAOYKP-SSDOTTSWSA-M 0.000 description 1
- HIHOWBSBBDRPDW-PTHRTHQKSA-N [(3s,8s,9s,10r,13r,14s,17r)-10,13-dimethyl-17-[(2r)-6-methylheptan-2-yl]-2,3,4,7,8,9,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-3-yl] n-[2-(dimethylamino)ethyl]carbamate Chemical compound C1C=C2C[C@@H](OC(=O)NCCN(C)C)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HIHOWBSBBDRPDW-PTHRTHQKSA-N 0.000 description 1
- TTWXVHUYMARJHI-KWXKLSQISA-N [(6Z,9Z,29Z,32Z)-20-[(dimethylamino)methyl]octatriaconta-6,9,29,32-tetraen-19-yl] carbamate Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCCC(CN(C)C)C(OC(N)=O)CCCCCCCC\C=C/C\C=C/CCCCC TTWXVHUYMARJHI-KWXKLSQISA-N 0.000 description 1
- HCAJCMUKLZSPFT-KWXKLSQISA-N [3-(dimethylamino)-2-[(9z,12z)-octadeca-9,12-dienoyl]oxypropyl] (9z,12z)-octadeca-9,12-dienoate Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(CN(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/C\C=C/CCCCC HCAJCMUKLZSPFT-KWXKLSQISA-N 0.000 description 1
- HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N [3-[hydroxy(2-hydroxyethoxy)phosphoryl]oxy-2-[(e)-octadec-9-enoyl]oxypropyl] (e)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C\CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\CCCCCCCC HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N 0.000 description 1
- 210000001361 achilles tendon Anatomy 0.000 description 1
- 208000008919 achondroplasia Diseases 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000004721 adaptive immunity Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 229960005305 adenosine Drugs 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 208000037883 airway inflammation Diseases 0.000 description 1
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000010775 animal oil Substances 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 230000001387 anti-histamine Effects 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 239000000739 antihistaminic agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007321 biological mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 210000003969 blast cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000010805 cDNA synthesis kit Methods 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 229920006317 cationic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 1
- 230000033077 cellular process Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 229940106189 ceramide Drugs 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 150000003841 chloride salts Chemical class 0.000 description 1
- 150000001841 cholesterols Chemical class 0.000 description 1
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000037319 collagen production Effects 0.000 description 1
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 239000000412 dendrimer Substances 0.000 description 1
- 229920000736 dendritic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 230000001687 destabilization Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 150000001982 diacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 125000005265 dialkylamine group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001985 dialkylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- UMGXUWVIJIQANV-UHFFFAOYSA-M didecyl(dimethyl)azanium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCCCCCCCC UMGXUWVIJIQANV-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- PSLWZOIUBRXAQW-UHFFFAOYSA-M dimethyl(dioctadecyl)azanium;bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CCCCCCCCCCCCCCCCCC PSLWZOIUBRXAQW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 235000005583 doda Nutrition 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 230000007783 downstream signaling Effects 0.000 description 1
- 238000010864 dual luciferase reporter gene assay Methods 0.000 description 1
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 1
- 229920002549 elastin Polymers 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 125000003843 furanosyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000003284 homeostatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 230000005745 host immune response Effects 0.000 description 1
- 102000045906 human IL33 Human genes 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012760 immunocytochemical staining Methods 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000011221 initial treatment Methods 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 108010074109 interleukin-22 Proteins 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002960 lipid emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000002479 lipoplex Substances 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- 238000012304 luminex technique Methods 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000009061 membrane transport Effects 0.000 description 1
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003716 mesoderm Anatomy 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 description 1
- 108091028838 miR-2 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 108091090951 miR-67 stem-loop Proteins 0.000 description 1
- 239000011325 microbead Substances 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 125000004573 morpholin-4-yl group Chemical group N1(CCOCC1)* 0.000 description 1
- 108700010586 mouse ST2L Proteins 0.000 description 1
- HKUFIYBZNQSHQS-UHFFFAOYSA-N n-octadecyloctadecan-1-amine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCNCCCCCCCCCCCCCCCCCC HKUFIYBZNQSHQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000633 nuclear envelope Anatomy 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 230000009437 off-target effect Effects 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 108010092948 oligonucleotidase Proteins 0.000 description 1
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 238000012261 overproduction Methods 0.000 description 1
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 1
- 210000002741 palatine tonsil Anatomy 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 210000004417 patella Anatomy 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- MCYTYTUNNNZWOK-LCLOTLQISA-N penetratin Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(N)=O)C1=CC=CC=C1 MCYTYTUNNNZWOK-LCLOTLQISA-N 0.000 description 1
- 108010043655 penetratin Proteins 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- 125000001095 phosphatidyl group Chemical class 0.000 description 1
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- ZJAOAACCNHFJAH-UHFFFAOYSA-N phosphonoformic acid Chemical group OC(=O)P(O)(O)=O ZJAOAACCNHFJAH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000865 phosphorylative effect Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920000724 poly(L-arginine) polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920000962 poly(amidoamine) Polymers 0.000 description 1
- 108010011110 polyarginine Proteins 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 108091007428 primary miRNA Proteins 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 229940048914 protamine Drugs 0.000 description 1
- 230000009979 protective mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 108700015048 receptor decoy activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000002040 relaxant effect Effects 0.000 description 1
- 238000009256 replacement therapy Methods 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000548 ribosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 210000000513 rotator cuff Anatomy 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 210000004683 skeletal myoblast Anatomy 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000008354 sodium chloride injection Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 229940038774 squalene oil Drugs 0.000 description 1
- 238000007447 staining method Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 125000003696 stearoyl group Chemical group O=C([*])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000004500 stellate cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- IIACRCGMVDHOTQ-UHFFFAOYSA-N sulfamic acid Chemical group NS(O)(=O)=O IIACRCGMVDHOTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000565 sulfonamide group Chemical group 0.000 description 1
- 125000001273 sulfonato group Chemical group [O-]S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 150000003457 sulfones Chemical group 0.000 description 1
- 150000003462 sulfoxides Chemical group 0.000 description 1
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000008093 supporting effect Effects 0.000 description 1
- 210000002437 synoviocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 1
- 201000004415 tendinitis Diseases 0.000 description 1
- 101150041549 tgt-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 125000000101 thioether group Chemical group 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K thiophosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=S RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940094937 thioredoxin Drugs 0.000 description 1
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 1
- 229950003937 tolonium Drugs 0.000 description 1
- HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M tolonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=C(C)C(N)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 239000012096 transfection reagent Substances 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- 108091007466 transmembrane glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WFKWXMTUELFFGS-UHFFFAOYSA-N tungsten Chemical compound [W] WFKWXMTUELFFGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052721 tungsten Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010937 tungsten Substances 0.000 description 1
- 229940116269 uric acid Drugs 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 210000000605 viral structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000012800 visualization Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/712—Nucleic acids or oligonucleotides having modified sugars, i.e. other than ribose or 2'-deoxyribose
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
- A61K47/549—Sugars, nucleosides, nucleotides or nucleic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/61—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule the organic macromolecular compound being a polysaccharide or a derivative thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
- A61K47/6901—Conjugates being cells, cell fragments, viruses, ghosts, red blood cells or viral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/04—Drugs for skeletal disorders for non-specific disorders of the connective tissue
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6806—Preparing nucleic acids for analysis, e.g. for polymerase chain reaction [PCR] assay
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
- A61K9/50—Microcapsules having a gas, liquid or semi-solid filling; Solid microparticles or pellets surrounded by a distinct coating layer, e.g. coated microspheres, coated drug crystals
- A61K9/51—Nanocapsules; Nanoparticles
- A61K9/5107—Excipients; Inactive ingredients
- A61K9/5176—Compounds of unknown constitution, e.g. material from plants or animals
- A61K9/5184—Virus capsids or envelopes enclosing drugs
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
- C12N2310/141—MicroRNAs, miRNAs
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
- C12N2310/321—2'-O-R Modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/33—Chemical structure of the base
- C12N2310/333—Modified A
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/33—Chemical structure of the base
- C12N2310/334—Modified C
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/33—Chemical structure of the base
- C12N2310/335—Modified T or U
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/30—Chemical structure
- C12N2310/33—Chemical structure of the base
- C12N2310/336—Modified G
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2320/00—Applications; Uses
- C12N2320/30—Special therapeutic applications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2320/00—Applications; Uses
- C12N2320/30—Special therapeutic applications
- C12N2320/32—Special delivery means, e.g. tissue-specific
Description
ヒトの3つの主要なアイソフォームはmiR−29a、miR−29b1、miR−29b2およびmiR−29cである。
UAGCACCAUCUGAAAUCGGUUA
を有する。
UAGCACCAUUUGAAAUCAGUGUU
を有する。
UAGCACCAUUUGAAAUCGGUUA
を有する。
AGCACCA
を有する同じ「シード」領域を共通に持つ。
ACUGAUUUCUUUUGGUGUUCAG(miR29a)
GCUGGUUUCAUAUGGUGGUUUAGA(miR−29b1);
CUGGUUUCACAUGGUGGCUUAG(miR−29b2);および
UGACCGAUUUCUCCUGGUGUUC(miR−29c)
を有する。
AUGACUGAUUUCUUUUGGUGUUCAGAGUCAAUAUAAUUUUCUAGCACCAUCUGAAAUCGGUUAU(hsa−pre−mir−29a:選択肢(i));
AUGACUGAUUUCUUUUGGUGUUCAGAGUCAAUAUAAUUUUCUAGCACCAUCUGAAAUCGGUUAUAAUGAUUGGGG(hsa−pre−mir−29a:選択肢(ii));
CUUCAGGAAGCUGGUUUCAUAUGGUGGUUUAGAUUUAAAUAGUGAUUGUCUAGCACCAUUUGAAAUCAGUGUUCUUGGGGG(hsa−pre−mir−29b1);
CUUCUGGAAGCUGGUUUCACAUGGUGGCUUAGAUUUUUCCAUCUUUGUAUCUAGCACCAUUUGAAAUCAGUGUUUUAGGAG(hsa−pre−mir−29b2);および
AUCUCUUACACAGGCUGACCGAUUUCUCCUGGUGUUCAGAGUCUGUUUUUGUCUAGCACCAUUUGAAAUCGGUUAUGAUGUAGGGGGA(hsa−pre−mir−29c)
を含む。
miR−29ミミックとは、天然に存在するmiR−29と比較して、構造または配列に1つまたは複数の改変を有するが、miR−29によって調節されるmRNAのmiR−29結合部位とハイブリダイズする能力およびこのようなmRNAの翻訳を阻害するか、その分解を促進して、例えば、そのmRNAによってコードされるタンパク質の産生を阻害する能力を保持している、オリゴヌクレオチドのことである。miR−29によって調節されるmRNAとしては3型コラーゲン(Col3a1)が挙げられる。
CCAUUUUAUACCAAAGGUGCUAC(Col1a1 mRNA由来);
UGUUCAUAAUACAAAGGUGCUAA(Col1a2 mRNA由来);および
UUCAAAAUGUCUCAAUGGUGCUA(col3a1 mRNA由来)
が挙げられる。
AGCACCA
と同一であり得るか、天然のシード配列と最大3つの位置、例えば2つ以下の位置、例えば1つ以下の位置で異なり得る、シード配列を含む。好ましくは、シード配列は示されるシード配列と同一である。
UAGCACCAUCUGAAAUCGGUUA(hsa−miR−29a);
UAGCACCAUUUGAAAUCAGUGUU(hsa−miR−29b1およびhsa−miR−29b2);もしくは
UAGCACCAUUUGAAAUCGGUUA(hsa−miR−29c);など
(上記の各配列のシード配列には下線が施されている);
を有するオリゴヌクレオチドまたは天然の成熟配列と:
(i)シード配列内の3つ以下の位置;および
(ii)シード配列外の5つ以下の位置
で異なるオリゴヌクレオチドを含むか、これよりなるものであり得る。
上記の配列改変に加えて、またはこれに代えて、miR−29ミミックまたはその前駆体は、RNAオリゴヌクレオチドと比較して1つまたは複数の構造改変を含み得る。
5’−rUrArGrCrArCrCrArUrCrUrGrArArArUrCrGrGmUmUmA−3’
であり、配列中、「r」はリボース糖を表し、「m」は2’−O−メチルリボースを表す。
5’mAmCrCmGrAmUrUmUrCmArGmArUmGrGmUrGmCrUA−3’
および
5’−mAmCrCmGrAmUrUmUrCmArGmArUmGrGmUrGmCrUmAdG−3’
がある。
miR−29、ミミックおよび前駆体が適切な担体と結合した(例えば、担体と複合体を形成しているか、担体に封入された)組成物が提供され得る。
−中性脂質およびリン脂質、例えばスフィンゴミエリン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジン酸、パルミトイルオレオイルホスファトジルコリン(palmitoyloleoyl phosphatdylcholine)、リゾホスファチジルコリン、リゾホスファチジルエタノールアミン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジリノレオイルホスファチジルコリン、ホスファチジルコリン(PC)、1,2−ジオレオイル−sn−グリセロ−3−ホスフォコリン(DOPC)、レシチン、ホスファチジルエタノールアミン(PE)、リゾレシチン、リゾホスファチジルエタノールアミン、スフィノゴミエリン(sphinogomyelin)(SM)、カルジオリピン、ホスホスファチジン酸(phosphosphatidic acid)、1,2−ジステアロイル−sn−グリセロ−3−ホスフォコリン(DSPC)、1,2−ジパルミトイル−sn−グリセロ−3−ホスホエタノールアミン(DPPE)、1−パルミトイル−2−オレオイル−sn−グリセロ−3−ホスフォコリン(POPC)、1,2−ジラウロイル−sn−グリセロ−3−ホスフォコリン(DLPC)、1,2−ジミリストイル−sn−グリセロ−3−ホスフォコリン(DMPC)、1,2−ジパルミトイル−sn−グリセロ−3−ホスフォコリン(DPPC)、1,2−ジミリストイル−sn−グリセロ−3−ホスホエタノールアミン(DMPE)、1,2−ジオレオイル−sn−グリセロ−3−ホスホエタノールアミン(DOPE)、ジパルミトオレオイル−PE、ジフィタノイル−PE、DSPE、ジエライドイル−PE、ジリノレオイル−SMおよびジリノレオイル−PEなど;
−ステロール、例えばコレステロール;
−ポリマー修飾脂質、例えば、PEG修飾ホスファチジルエタノールアミンおよびホスファチジン酸、PEG−セラミドコンジュゲート、PEG修飾ジアルキルアミンおよびPEG修飾1,2−ジアシルオキシプロパン−3−アミンを含めたポリエチレングリコール(PEG)修飾脂質。特に適切なものとして、PEG修飾ジアシルグリセロールおよびジアルキルグリセロール、例えば、PEG−ジジミリストイルグリセロール(didimyristoyl glycerol)(PEG−DMG)、PEG−ジスチリルグリセロール(PEG−DSG)およびPEG−カルバモイル−1,2−ジミリスチルオキシプロピルアミン(PEG−cDMA);
−カチオン性脂質、例えばN,N−ジオレイル−N,N−ジメチルアンモニウムクロリド(「DODAC」);N−(2,3−ジオレイルオキシ)プロピル−N,N−N−トリエチルアンモニウムクロリド(「DOTMA」);N,N−ジステアリル−N,N−ジメチルアンモニウムブロミド(「DDAB」);N−(2,3−ジオレオイルオキシ)プロピル)−N,N,N−トリメチルアンモニウムクロリド(「DOTAP」);1,2−ジオレイルオキシ−3−トリメチルアミノプロパンクロリド塩(「DOTAP.C1」);3β−(N−(N’,N’−ジメチルアミノエタン)−カルバモイル)コレステロール(「DC−Chol」)、N−(1−(2,3−ジオレイルオキシ)プロピル)−N−2−(スペルミンカルボキサミド)エチル)−N,N−ジメチルアンモニウムトリフルオロアセタート(「DOSPA」)、ジオクタデシルアミドグリシルカルボキシスペルミン(「DOGS」)、1,2−ジレオイル(dileoyl)−sn−3−ホスホエタノールアミン(「DOPE」)、1,2−ジオレオイル−3−ジメチルアンモニウムプロパン(「DODAP」)、N,N−ジメチル−2,3−ジオレイルオキシ)プロピルアミン(「DODMA」)、N−(1,2−ジミリスチルオキシプロパ−3−イル)−N,N−ジメチル−N−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド(「DMRIE」)、1,2−ジリノレイルオキシ−3−ジメチルアミノプロパン(DLinDMA)1,2−ジリノレオイル−3−ジメチルアミノプロパン(DLinDAP)、1−リノレオイル−2−リノエイルオキシ(linoeyloxy)−3−ジメチルアミノプロパン(DLin−2−DMAP)、1,2−ジリノレイルカルバモイルオキシ−3−ジメチルアミノプロパン(DLin−C−DAP)、1,2−ジリノレイルチオ−3−ジメチルアミノプロパン(DLin−S−DMA)および2,2−ジリノレイル−4−10ジメチルアミノメチル−[1,3]−ジオキソラン(DLin−K−DMA)など。市販されているカチオン性脂質の調製物としては、Lipofectin(商標)(DOTMAとDOPEとを含む、Gibco/BRL社から入手可能)およびLipofectamine(商標)(DOSPAとDOPEとを含む、Gibco/BRL社から入手可能)が挙げられる。
−ホスファチジルグリセロール、カルジオリピン、ジアシルホスファチジルセリン、ジアシルホスファチジン酸、N−ドデカノイルホスファチジルエタノロアミン(dodecanoyl phosphatidylethanoloamine)、N−スクシニルホスファチジルエタノールアミン、N−グルタリルホスファチジルエタノールアミンおよびリシルホスファチジルグリセロールを含めたアニオン性脂質。
担体分子はほかにも、標的細胞の表面に結合することが可能な標的化剤を運搬し得る。例えば、標的化剤は、標的腱細胞の表面に発現する分子と特異的に結合することが可能な特異的結合パートナーであり得る。適切な結合パートナーとしては、細胞表面分子またはこのような細胞表面分子のリガンドもしくは受容体に対する抗体などが挙げられる。腱細胞への標的化を補助し得る表面マーカーとしては、テネイシンC、CD55およびテノモジュリンが挙げられる。
−BPTI、LAC−DI、ITI−D2(クニッツドメイン足場);
−ETI−II、AGRP(Knottin);
−チオレドキシン(ペプチドアプタマー);
−Fn3(AdNectin);
−リポカリン(BBP)(Anticalin);
−アンキリン反復(DARPin);
−プロテインAのZドメイン(Affibody);
−ガンマ−B−クリスタリン/ユビキチン(Affilin);
−LDLR−A−ドメイン(Avimer)
が挙げられる。
miR−29オリゴヌクレオチド、ミミックおよび前駆体を標的細胞に直接送達する代わりに、miR−29オリゴヌクレオチド、そのミミックまたはいずれかの前駆体をコードする核酸を標的細胞に送達して、標的細胞内でmiR−29オリゴヌクレオチド、ミミックまたは前駆体を発現させることが可能である。このような方法は「遺伝子治療」と見なされ得る。
miR−29、ミミックおよび前駆体をコードする核酸は、任意の好都合な経路によって送達され得る。
腱は筋肉と骨とを結びつける結合組織である。筋肉の収縮により生じた力を筋肉そのものから少し離れて付着している骨格構造に伝達する1。
本発明者らは、腱細胞のmiR−29活性を増大させることにより、コラーゲンバランスを1型コラーゲン合成に傾き3型コラーゲン合成から離れるよう変化させることが可能であることを明らかにした。
治療の対象として最も一般的なのはヒトであるが、本発明の方法は、ヒト以外の霊長類(特に、ゴリラ、チンパンジーおよびオランウータンなどの大型類人猿のほかにも、旧世界ザルおよび新世界ザル)およびげっ歯類(マウスおよびラットを含む)をはじめとする一般的な実験動物、飼育動物および農業動物(特に限定されないが、ウサギ、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ヒツジ、ヤギなどを含む)を含めた他のあらゆる動物に及び得る。
本明細書に記載される分子は医薬組成物に製剤化することができる。これらの組成物は、上記物質のうちの1つに加えて、薬学的に許容される補形剤、担体、緩衝剤、安定剤をはじめとする当業者に周知の材料を含み得る。このような材料は、無毒性でなければならず、また有効成分の効果に干渉するものであってはならない。担体をはじめとする材料の正確な性質は、投与経路、例えば、経口、静脈内、皮内または皮下、経鼻、筋肉内および腹腔内の各経路によって左右され得る。投与に適した組成物および方法の例については、EssekuおよびAdeyeye(2011)ならびにVan den Mooter G.(2006)に記載されている。
材料および方法
腱障害のヒトモデル
手順およびプロトコルはいずれも、ACEC番号99/101の下、倫理委員会の承認を受けたものである。肩の外科手術を受けている回旋筋腱板断裂の患者から棘上筋腱の試料15例を採取した(表1)。回旋筋腱板断裂患者の平均年齢は54歳(範囲35〜70歳)、断裂の平均の大きさは2.5cmであった。同患者からほかにも、肩甲下筋腱を採取した。術前MRIスキャン時の肩甲下筋腱障害、関節鏡検査時の肩甲下筋腱の肉眼的損傷のいずれについても臨床的に検出可能な証拠が認められない患者のみを組み入れ、この基準により、患者は厳密に前臨床コホートとなった。回旋筋腱板断裂がなく肩の安定化のための関節鏡下手術を受けている患者から採取した肩甲下筋腱の試料10例を含む独立した対照群を得た。関節鏡検査により回旋筋腱板断裂がないことを確認した。対照群の平均年齢は35歳(範囲20〜41歳)であった。
既に記載されている標準的な3点法を用いて、回旋筋腱板の関節鏡下修復術を施行した。既に記載されている通りに、回旋筋腱板断裂の横断面の大きさを推定し記録した39。関節鏡下、関節唇の側方1cmの位置にある腱の上方境界から肩甲下筋腱を採取した。外科手術による修復を実施する前、断裂部の端1.5cm以内のところから棘上筋腱を採取した。免疫組織化学染色には、組織試料を直ちに10%(v/v)ホルマリンで4〜6時間固定した後、パラフィンに包埋した。Leica−LMミクロトーム(Leica Microsystems社、ドイツ)を用いて厚さ5μmの切片を薄切し、Superfrost Ultra Plusガラススライド(Gerhard Menzel社、ドイツ)に載せた。既に確立されている方法論に従って、キシレンで組織切片からパラフィンを除去し、段階的に濃度を変化させたアルコールで脱水し、組織染色および免疫組織化学染色に用いた40。
ヒト切片をヘマトキシリン/エオシンおよびトルイジンブルーで染色し、Bonarスコアの改変版による評価で腱障害の程度を判定した41(グレード4=著明な腱障害、グレード3=進行した腱障害、2=中等度の変性、1=軽度の変性、0=正常な腱)。これには、浮腫および変性の有無とともに線維芽細胞の細胞充実性および類軟骨性化生の程度を含めた。次いで、切片を以下のマーカー:IL−33(Alexis社、マウスモノクローナル)、ST2(Sigma Aldrich社、ウサギポリクローナル)、IL−1RaCP(ProSci社、ウサギポリクローナル)、CD68(汎マクロファージ)、CD3(T細胞)、CD4(Tヘルパー細胞)、CD206(M2マクロファージ)および肥満細胞トリプターゼ(肥満細胞)(Vector Labs社)に対する抗体で染色した。
テノサイトをコラーゲン1型およびコラーゲン3型の免疫細胞化学染色について評価して、テノサイトのマトリックス産生を評価した(Abcam社)。Sircolアッセイキット(Biocolor社、キャリクファーガス、北アイルランド)を製造業者のプロトコル通りに用いて、総可溶性コラーゲン量を測定した。被験試料100μlにSircol色素試薬1mlを加え、室温で30分間かき混ぜた。10,000×gで10分間遠心分離することによりコラーゲン−色素複合体を沈殿させた、次いで、エタノール500μlで2回洗浄した。ペレットをアルカリ試薬500μlに溶かした。マイクロプレートリーダーで540nmにおける吸光度を測定した。製造業者によって提供されたコラーゲン標準品に基づき検量曲線を作成した。さらに、ELISAを用いて、ヒトおよびマウスのコラーゲン1型および3型の濃度を評価し、製造業者(USCNK Life Science社)によって供給された標準品とともにマイクロプレートリーダーで450nmにおける呈色変化を測定した。
ヒトホスホ−MAPK Array(R & D Systems Europe社、英国)を製造業者の指示通りに用いて、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ(MAPK)、細胞外シグナル制御キナーゼ(ERK1/2)、c−JunN末端キナーゼ(JNK)およびp38アイソフォームのリン酸化状態を評価した。CalbioChem社(Merck KGaA社、ドイツ)からERK阻害剤(FR180204)を購入し、既に本発明者らの研究室で用いてオフターゲット効果に比べ最適な特異的阻害をもたらすことが既に明らかになっている濃度43、IC50=10μMで使用した。
正常酸素圧下および低酸素圧下での実験から細胞を分離した後、mRNAを抽出した。RNA精製には、QIAgenミニカラム(Qiagen社、クローリー、英国)に製造業者の指示通りにオンカラムDNアーゼ段階を組み込んで用いた。AffinityScript(商標)(Agilent Technologies社、カリフォルニア州、米国)多温度cDNA合成キットを製造業者の指示通りに用いて、RNA試料からcDNAを調製した。プローブをプライマーとともに使用するかどうかによってSYBRグリーンまたはTaqman FastMix(Applied Biosystems社、カリフォルニア州、米国)を用いて、リアルタイムPCRを実施した。RNアーゼフリー水を用いてcDNAを5分の1に希釈した。各試料を三重反復で分析した。プライマー(Integrated DNA Technologies社、ベルギー)は以下の通りであった:GAPDH、5’−TCG ACA GTC AGC CGC ATC TTC TTT−3’(f)および5’−ACC AAA TCC GTT GAC TCC GAC CTT−3’(r);ヒトIL−33、GGA AGA ACA CAG CAA GCA AAG CCT(f)TAA GGC CAG AGC GGA GCT TCA TAA(r);マウスIL−33、GGA AGA ACA CAG CAA GCA AAG CCT(f)TAA GGC CAG AGC GGA GCT TCA TAA(r);全ヒトST2、ACA ACT GGA CAG CAC CTC TTG AGT(f)ACC TGC GTC CTC AGT CAT CAC ATT(r);マウスsST2、CCA ATG TCC CTT GTA GTC GG(f)CTT GTT CTC CCC GCA GTC(r)、TCC CCA TCT CCT CAC CTC CCT TAA T(プローブ);マウスST2L、TCT GCT ATT CTG GAT ACT GCT TTC、TCT GTG GAG TAC TTT GTT CAC C(r)AGA GAC CTG TTA CCT GGG CAA GAT G(プローブ);ヒトST2L、ACA AAG TGC TCT ACA CGA CTG(f)TGT TCT GGA TTG AGG CCA C(r);CCC CAT CTG TAC TGG ATT TGT AGT TCC G(プローブ);ヒトsST2、GAG ACC TGC CAC GAT TAC AC(f)TGTTAAACCCTGAGTTCCCAC(r)、CCC CAC ACC CCT ATC CTT TCT CCT(プローブ);ヒトCol 3A、TTG GCA GCA ACG ACA CAG AAA CTG(f)TTG AGT GCA GGG TCA GCA CTA CTT(r)マウスCol 3A、GCT TTG TGC AAA GTG GAA CCT GG(f)CAA GGT GGC TGC ATC CCA ATT CAT(r);ヒトCOL 1A1、CCA TGC TGC CCT TTC TGC TCC TTT(f)CAC TTG GGT GTT TGA GCA TTG CCT(r)マウスCOL 1A1、TTC TCC TGG CAA AGA CGG ACT CAA(f)GGA AGC TGA AGT CAT AAC CGC CA(r)。
miRNeasyキット(Qiagen社)により全RNAを単離した。cDNA調製にmiScript Reverse Transcription Kit(Qiagen社)を用いた。ヒトmiR−29a(MS00001701)、miR−29b(MS00006566)およびmiR−c(MS00009303)ならびにマウス29a(MS00003262)、29b(MS00005936)およびc(MS00001379)発現の半定量的測定にTaqMan mRNAアッセイ(Applied Biosystems社)またはmiScriptプライマーアッセイ(Qiagen社)を用いた。内在性対照としてU6B小分子核RNAまたはベータ−アクチンの発現を用いた。
標準品と比較したq−PCRにより、長い3’UTR型および短い3’UTR型の1型および3型転写産物の絶対レベルを測定した。AffinityScript(Agilent社)にランダムヘキサマーおよびオリゴ−dTプライマーの両方を用いてcDNAを作製した。以下のプライマーを用いてSYBRグリーン定量的PCRを実施し、試料はGAPDH内在性対照に対して正規化した。
Col1a2_S FW 5’GCCTGCCCTTCCTTGATATT 3’
Col1a2_S REV 5’TGAAACAGACTGGGCCAATG 3’
col1a2_L FW 5’TCAGATACTTGAAGAATGTTGATGG 3’
col1a2_L REV 5’CACCACACGATACAACTCAATAC 3’
Col1a1_S FW 5’CTTCACCTACAGCGTCACT 3’
Col1a1_S REV 5’TTGTATTCAATCACTGTCTTGCC 3’
col1a1_L FW 5’CCACGACAAAGCAGAAACATC 3’
col1a1_L REV 5’GCAACACAGTTACACAAGGAAC 3’
COL3A1_S FW 5’CTATGACATTGGTGGTCCTGAT 3’
COL3A1_S REV 5’TGGGATTTCAGATAGAGTTTGGT 3’
COL3A1_L FW 5’CCACCAAATACAATTCAAATGC 3’
COL3A1_L REV 5’GATGGGCTAGGATTCAAAGA 3’
ヒト配列を特徴付けるため、ヒトテノサイトから単離した全RNAからMiRscript II逆転写酵素キット(Qiagen社)を用いて作製しておいたcDNAに3’RACEを実施した。以下に挙げる遺伝子特異的順方向プライマーをキットのUniversal逆方向プライマーとともに用いて、cDNA末端をPCRにより増幅した。
ヒト3’RACE遺伝子特異的順方向プライマー:
RACE−Col1a1−L FW 5’GACAACTTCCCAAAGCACAAAG 3’
RACE−Col1a1−S FW 5’CTTCCTGTAAACTCCCTCCATC 3’
RACE−Col1a2−L FW 5’TCTTCTTCCATGGTTCCACAG 3’
RACE−Col1a2−S FW 5’CCTTCCTTGATATTGCACCTTTG 3’
RACE−Col3a1−L FW 5’CTATGACATTGGTGGTCCTGAT 3’
RACE−Col3a1−S FW 5’GTGTGACAAAAGCAGCCCCATA 3’
ウマ3’RACEプライマー:
ウマcol1a1 GSP1 CCCTGGAAACAGACAAACAAC
ウマcol1a1 GSP2 CAGACAAACAACCCAAACTGAA
ウマcol1a2 GSP1 GCTGACCAAGAATTCGGTTTG
ウマcola2 GSP2 ACATTGGCCCAGTCTGTTT
ウマcol3a1 GSP1 AGGCCGTGAGACTACCTATT
ウマcol3a1 GSP2 CTATGATGTTGGTGGTCCTGAT
ウマcol1a1 q−PCR fw CAGACTGGCAACCTCAAGAA
ウマcol1a1 q−PCR rev TAGGTGACGCTGTAGGTGAA
ウマcol1a2 q−PCR fw GGCAACAGCAGGTTCACTTAT
ウマcol1a2 q−PCR Rev GCAGGCGAGATGGCTTATTT
ウマcol3a1 q−PCR fw CTGGAGGATGGTTGCACTAAA
ウマcol3a1 q−PCR rev CACCAACATCATAGGGAGCAATA
Dharmacon(登録商標)DharmaFECT(登録商標)3 siRNAトランスフェクション試薬(Thermo Scientific社)を用いて、細胞に最終濃度20nMのmiR−29aおよびmiR−29bに対する合成成熟miRNAまたはネガティブ対照(Dy547で標識した線虫(C.elegans)miR−67ミミック、Thermo Scientific社)をトランスフェクトした。48時間後、トランスフェクション細胞溶解物を収集して、目的遺伝子の発現を解析した。
COL1および3ならびに可溶性ST2 3’UTRに対してオリゴをアニーリングすることによりヒト2 miRNA標的部位を作製し、pMIR−REPORTルシフェラーゼベクター(Ambion社)のルシフェラーゼ遺伝子下流にセンス方向およびアンチセンス方向にクローニングした。これらの構築物の配列を決定してインサートを確認し、pMIR−COL I/COL III/sST2−miR29a/b/cおよびpMIR(A/S)−COL I/COL III/sST2−miR29a/b/cを命名し、HEK293細胞のトランスフェクションに用いた。HEK293細胞を96ウェルプレートで培養し、pMIR−COL I/COL III/sST2−miR29a/b/c、pMIR(A/S)−COL I/COL III/sST2−miR29a/b/cまたはpMIR−REPORTのいずれか0.1μgを、ウミシイタケルシフェラーゼを含むpRL−TKベクター(Promega社)0.01μgおよび40nMのmiR−155またはスクランブルmiRNA(Thermo Scientific Dharmacon(登録商標))とともにトランスフェクトした。Effectene(Qiagen)を製造業者の指示通りに用いてトランスフェクションを実施した。トランスフェクションから24時間後、Dual−Luciferase Reporter Assay(Promega社)を用いてルシフェラーゼ活性を測定した。以下のプライマー、sST2fw 5’AGTTTAAACTGGCTTGAGAAGGCACACCGT3’およびsST2rev 5’AGTCGACGGGCCAAGAAAGGCTCCCTGG3’を用いて、ゲノムDNAからヒトsST2の3’UTRを増幅し、それぞれPmeI部位およびSalI部位を作製した。これらの部位を用いて、PCR増幅産物をpmiRGLO(Promega社)の同じ部位にクローニングした。QuickChange部位特異的変異誘発キット(Agilent社)を用いて、Targetscanで予測された2つのmiR29a MRE部位のシード領域である29−1および29−2を変異させた。Attactene(Qiagen社)を製造業者の指示通りに用いて、各ベクターをmiR29aまたはスクランブル対照ミミックをともにHEK293細胞にトランスフェクトした。24時間後、Dual−Gloルシフェラーゼアッセイ(Promega社)を用いてルシフェラーゼ活性を測定し、ウミシイタケ(Renilla)に対して正規化した。正規化したルシフェラーゼ活性を同じ構築物のスクランブル対照に対する百分率で表した。
25−Plexヒトサイトカインアッセイにより、Luminex技術を用いた25の別個のヒトサイトカインのin vitro定量測定を評価した。上清(n=3)
外科的処置の準備には、マウスにイソフラン(3%)と酸素(1%)の混合物による麻酔を実施し、両後肢を剪毛した。外科的処置の間、酸素を用いてイソフランのレベルを1%に下げ、ノーズコーンから送達して麻酔を実施した。皮膚切開後、支帯の両側に腱と平行になるよう2つの切れ目を入れ、次いで、膝蓋腱の下に直剪刀を置いた。鋏の刃を支持体として、直径0.75mmの生検パンチ(World Precision Instruments社)を用いて、右膝蓋腱の全層にわたって部分断裂を生じさせた。左膝蓋腱には偽処置を実施し、この処置は、腱の下にプラスチック製の支持体を置くだけで、傷害を一切生じさせないものであった。皮膚創傷を皮膚ステープルで閉じ、術後1日目、3日目、7日目および21日にマウスを屠殺した。マウスをCO2吸入により屠殺し、直ちに体重を測定した。BALB/c対照(CTL)およびST2−/−BALB/cの2つのグループのマウスを用いた。1時点当たりのマウスは各グループとも16匹(ST2−/−BALB/c、BALB/cそれぞれn=8)とした。上記の実験を別々に4回繰り返した。
生体力学的解析には、各グループのマウスの膝蓋腱を傷害し、3つの時点のうち1つの時点でマウス8匹を屠殺し、Linら10により既に記載されている通りに力学的試験を実施した。簡潔に述べれば、膝蓋腱を解剖して付着物を取り除き、膝蓋、膝蓋腱および脛骨のみを1つの単位として残した。腱の幅と厚さを定量化し、この2つの数値の積として断面積を計算した。特別設計の備品に入れたIsopon p38(High Build Cellulose Filler)に脛骨を包埋し、金属鉗子で適切な位置に固定した。BOSE ElectroForce(登録商標)3200試験機器に万力を用いて膝蓋を適切な位置に固定した。各腱標本を370Cの生理食塩水浴に浸漬して以下のプロトコルを実施した−0.02Nに再負荷し、0.1%/秒(0.003mm/秒s)の速度で0.02〜0.04に10サイクル前準備し、10秒間保持した。直後、腱を25%(0.75mm/秒)の速度で5%(0.015mm)の歪みまでの伸長させた後、600秒間弛緩させることにより応力緩和実験を実施した。最後に、破断するまで0.1%/秒(0.003mm/秒)の速度で力を増大させながら加えた。これらの試験から、最大応力を求め、応力−歪み曲線のほぼ直線の領域から得られる線形回帰を用いて弾性率を計算した。
150ng/ml miR−29aミミック、9μg/mlポリエチレンイミン(PEI)および5%グルコースを含有するトランスフェクション複合体を調製した。この複合体50μlを外科手術の直後にマウスの膝蓋腱に注射した。1日後および3日後にマウスを屠殺し、col1a1およびcol3a1のmRNAおよびタンパク質のレベルを測定した。蛍光標識したmiR−29aミミックを用いて、ファロイジン(細胞骨格構造を示す)および核(DAPI)に対する対比染色を用いた免疫蛍光法により、腱内のmiR−29aミミックのin vivo分布を評価した。
パッセンジャー鎖:
mAmCrCmGrAmUrUmUrCmArGmArUmGrGmUrGmCrUmAdG
ガイド鎖:
/5Phos/rUrArGrCrArCrCrArUrCrUrGrArArArUrCrGrGmUmUmA
/5Phos/=5’リン酸
mA=2’O−メチルアデノシンリボヌクレオチド;
mC=2’O−メチルシトシンリボヌクレオチド;
mG=2’O−メチルグアニンリボヌクレオチド;
mU=2’O−メチルウラシルリボヌクレオチド;
rA=アデノシンリボヌクレオチド;
rC=シトシンリボヌクレオチド;
rG=グアニンリボヌクレオチド;
rU=ウラシルリボヌクレオチド;
図の説明に示される通り、結果はいずれも平均+/−標準誤差平均(SEM)で表し、統計解析はいずれも、Graph Pad Prism 5ソフトウェアを用いてスチューデントのT検定、ANOVA検定またはマン・ホイトニーの検定のいずれかにより実施した。p値が0.05未満であれば統計的に有意であると見なした。
ヒト腱障害におけるIL−33およびST2の発現
本発明者らはまず、本発明者らが既に開発したモデル22を用いて、ヒト腱障害におけるIL−33発現を検討した。初期腱障害では、対照または断裂腱の生検に比して、IL−33、可溶性の膜結合ST2の転写産物が有意にアップレギュレートされていた(図1A〜1C)。初期腱障害の組織には、断裂腱または対象の生検に比して、IL−33およびST2の有意に高い染色がみられた(図1D)。内皮細胞、特に線維芽細胞様細胞、すなわち、初期腱障害の調節に極めて重要であると考えられるテノサイトに顕著な染色がみられた(データ不掲載)。同時に、in vitroで培養したテノサイトをTNFおよびIL−1βで刺激したところ、核IL−33の発現がmRNAレベルおよびタンパク質レベル(図1Eおよびデータ不掲載)の両方でアップレギュレートされた。これに対して、休止テノサイトおよび未刺激テノサイトにはともに、ST2の恒常的発現がみられた(データ不掲載)。
コラーゲン3型発現に傾いたマトリックス調節異常は、腱障害において修復促進の鍵となる初期表現型変化であるが、コラーゲン3型は生体力学的に劣っている。IL−33は、総コラーゲンタンパク質量の用量依存的および時間依存的上方制御を誘導した(データ不掲載)が、これは1型、特に3型コラーゲンのmRNAおよびタンパク質の発現増大によって説明される(図1F、1G)。アレイ解析を実施したところ(データ不掲載)、IL−33の下流シグナル伝達に関する報告12、16と同じく、この作用はERK阻害によって打ち消された(データ不掲載)。ほかにも、rhIL−33によってIL−6、IL−8およびMCP−1の産生が有意に増大し(データ不掲載)、この増大がNF−κB阻害によって調節されたことから、IL−33はテノサイトにおいてその標準的なIL−1Rシグナル伝達経路を介して作用することが示唆された(データ不掲載)。これに対し、他のサイトカインの産生に対しては、線維芽細胞で既に報告されているIL−33誘導性サイトカイン産生プロファイル20〜23と一致する効果は全く見られなかった。
本発明者らは、上記の観察を十分に確立されたin vivoの腱傷害モデルまで広げた。WTマウスでは、腱傷害後第1日および第3日にIL−33 mRNAの増大がみられた(図2A)。受傷ST2−/−マウスではこれが有意に減少したことから、オートクリン調節が示唆された。WTマウスでは、可溶性ST2が受傷後のいずれの時点でも未受傷対照に比して有意にアップレギュレートされた(図2B)のに対し、膜ST2 mRNAの増大がみられたのは、受傷後第3日までに限られた(データ不掲載)。受傷後第7日、第21日ともに、WTマウスにはIL−33およびST2の転写産物およびタンパク質の発現に有意な変化はみられず、ST2−/−マウスではIL−33発現に有意な変化はみられず、IL−33発現の影響が現れるのは、腱の傷害/修復における「アラーミン」型活性と同じく初期であることが示唆された。
この可能性を裏付けるため、本発明者らは、IL−33エフェクターの生物学的性質をin vivoで直接修正することを試みた。rhIL−33の投与は、コラーゲン1型の合成には影響を及ぼさなかった(図3A、3B)が、特に受傷腱におけるコラーゲン3型の合成が有意に増大した(図3D、3Eおよびデータ不掲載)。さらにWTマウスでは、rhIL−33投与により、受傷後のいずれの時点でも最終腱強度の有意な低下がみられ(図3Eおよびデータ不掲載)、このような変化が機能的影響を及ぼすことが示唆された。治癒しつつあるST2−/−マウスの腱では、IL−33の投与はコラーゲンマトリックス合成にも最終腱強度にも影響を及ぼさず、IL−33がST2依存性経路を介して作用することが裏付けられた(データ不掲載)。
IL−33がテノサイトにおけるコラーゲン1型および3型の差次的調節を駆動することが確認されたため、本発明者らは、この過程にmiRNAネットワークが何らかの機構的役割を果たしていると仮定した。これまでの研究で、miR−29ファミリーが1型および3型コラーゲンを含めた多数の細胞外トリックス遺伝子を直接標的とし24〜25、自然免疫および適応免疫の調節に関与していることが明らかにされている26。コンピュータアルゴリズムでは、miR−29がほかにもsST2を標的とし得ることが予測される。本発明者らは、ヒト腱生検および外植テノサイトにmiR−29ファミリーの全メンバーが発現し(図4A)、miR−29aが最も発現の変化が大きいことを明らかにした。テノサイト培養物では、IL−33がNFκB依存性シグナル伝達を介して作用することにより、6時間後、12時間後および24時間後にmiR−29aの発現が有意に低下する(図4B)のに対し、miR−29bおよびmiR−cに対する効果には一致がみられなかった(データ不掲載)。IL−33が仲介するコラーゲン3型マトリックスの変化がmiR−29aによって調節されたことから、本発明者らは、miR−29aの操作がin vitroでコラーゲンマトリックス合成に及ぼす機能的効果を分析した。まず、ルシフェラーゼアッセイを用いて、既に示されているように27、miR−29aがcol 1a1およびcol 3a1を直接標的とすることを確認した(図7B)。ほかにも、それまで確認されていなかったcol 1a2サブユニット転写産物との相互作用を観察した(図7)。miR−29aが実際に疾患関連細胞の標的mRNA候補のレベルを調節するかどうかを試験するため、テノサイトにmiR−29aのミミックおよびアンタゴマーをトランスフェクトした。初代テノサイトでは、miR−29a操作によりコラーゲン3型のmRNAおよびタンパク質の発現が調節されたが、コラーゲン1型のmRNAおよびタンパク質の発現は調節されなかった(図4C、4D)。さらに、miR−29aの過剰発現により、IL−33誘導によるコラーゲン3型のmRNAおよびタンパク質の合成が有意に阻害された(図4E)。さらに、miR−29aの阻害によりcol 3a1発現が有意に増大し、ヒトテノサイトにおいてmiR−29aがこれらの転写産物を能動的に調節するだけでなく、その減少が腱障害にみられる3型コラーゲン産生の増大に重要な因子であること示された。これに対し、col 1a1転写産物のレベルには変化がみられなかった(図4I)。
コンピュータ解析では、可溶性ST2がmiR−29aの標的になり得ることが明らかになり、IL−33エフェクター機能に何らかの調節的役割を果たしている可能性が示唆された。2つの有望なmiR−29abc結合部位を有することが予測されるヒトsST2の3’UTRを含むルシフェラーゼレポーター遺伝子を作製した。sST2−ルシフェラーゼレポータープラスミドとmiR−29ミミックとの共トランスフェクションにより、スクランブル対照に比してルシフェラーゼ活性の有意な低下がみられた(図7B)。さらに、sST2の両miR−29 MREのシード領域を変異させたところ、ルシフェラーゼ活性が完全に回復したことから、sST2がmiR−29aの直接の標的であることが確証された(図5A)。miR−29aが実際にテノサイトにおいて標的mRNA候補のレベルを調節するかどうかを検討するため、再びヒトテノサイトにmiR−29aのミミックおよびアンタゴマーをトランスフェクトした。miR−29aミミック/アンタゴマーのトランスフェクションによって可溶性ST2のメッセージが有意に(p<0.01)約5倍変化し(図5B)、これに対応して可溶性ST2タンパク質が有意に変化したことから、miR29aが可溶性ST2の標的であることが裏付けられた(図5C)。
最後に、本発明者らは、in vivoの腱障害モデルにおけるmiR−29a発現を検討した。WTマウスの腱傷害では、miR29aが第1日に(ベースラインに対して)22分の1に減少し、第3日までに6分の1の減少まで戻り(図5Dおよびデータ不掲載)、第7日には有意差が認められなかった。この効果はST2−/−マウスでは有意に阻害された(データ不掲載)。さらに、未受傷腱では、外来rh−IL−33の投与により、いずれの時点でもPBS注射対照に比してmiR−29a発現の減少がみられた(データ不掲載)。この効果は受傷WTマウスに最も著明にみられ、rhIL−33を加えると、miR−29aのさらに10倍の減少が仲介された(図5E)。ST2−/−マウスにrhIL−33を加えたところ、同じく受傷腱にも未受傷腱にもmiR−29a発現に対する有意な効果は認められず、miR−29aのダウンレギュレーションの一部はIL−33/ST2依存性シグナル伝達によって直接仲介されていることが示唆された。IL−33に対する中和抗体を加えたところ、受傷後第1日および第3日にmiR−29a遺伝子発現に対する傷害の効果の有意な低下がみられた(図5F)。
WTマウスの膝蓋腱にmiR−29a/PEI複合体を直接注射することにより、miR−29aミミックをテノサイトに送達した。ファロイジン(緑、細胞骨格構造に対する染色)およびDAPI(核を示す染色)で対比染色するミミック(赤)の免疫蛍光染色を用いて、miR−29aミミック注射の24時間後におけるテノサイト周辺へのミミックの局在を可視化した(不掲載)。図8に示されるように、miR−29aミミックを注射した腱では、対照群に比してコラーゲン3型のmRNAおよびタンパク質レベルの有意な低下がみられた。これに対し、コラーゲン1型のレベルには変化がみられなかった。
マイクロRNは、疾患および組織リモデリングに重要な役割を果たす多様な細胞プロセスの強力な調節因子として登場した。腱障害をモデル系として用いた上記の研究は、単一のマイクロRNA(miR−29)が複雑な初期の生物学的過程において炎症性サイトカインエフェクター機能および細胞外マトリックス調節を交差調節し、組織修復をもたらすことができることを初めて明らかにするものである。
1.Eming,S.A.,Krieg,T.& Davidson,J.M.Inflammation in wound repair: molecular and cellular mechanisms.J Invest Dermatol 127,514−525(2007).
2.McCormick,A.,Charlton,J.& Fleming,D.Assessing health needs in primary care.Morbidity study from general practice provides another source of information.BMJ 310,1534(1995).
3.Nakama,L.H.,King,K.B.,Abrahamsson,S.& Rempel,D.M.Evidence of tendon microtears due to cyclical loading in an in vivo tendinopathy model.J Orthop Res 23,1199−1205(2005).
4.Sharma,P.& Maffulli,N.Tendon injury and tendinopathy: healing and repair.J Bone Joint Surg Am 87,187−202(2005).
5.Millar,N.L.,Wei,A.Q.,Molloy,T.J.,Bonar,F.& Murrell,G.A.Cytokines and apoptosis in supraspinatus tendinopathy.J Bone Joint Surg Br 91,417−424(2009).
6.Pufe,T.,Petersen,W.,Tillmann,B.& Mentlein,R.The angiogenic peptide vascular endothelial growth factor is expressed in foetal and ruptured tendons.Virchows Arch 439,579−585(2001).
7.Tsuzaki,M.,et al.IL−1 beta induces COX2,MMP−1,−3 and−13,ADAMTS−4,IL−1 beta and IL−6 in human tendon cells.J Orthop Res 21,256−264(2003).
8.Tohyama,H.,Yasuda,K.,Uchida,H.& Nishihira,J.The responses of extrinsic fibroblasts infiltrating the devitalised patellar tendon to IL−1beta are different from those of normal tendon fibroblasts.J Bone Joint Surg Br 89,1261−1267(2007).
9.John,T.,et al.Effect of pro−inflammatory and immunoregulatory cytokines on human tenocytes.J Orthop Res 28,1071−1077(2010).
10.Lin,T.W.,Cardenas,L.,Glaser,D.L.& Soslowsky,L.J.Tendon healing in interleukin−4 and interleukin−6 knockout mice.J Biomech 39,61−69(2006).
11.Zhang,N.& Oppenheim,J.J.Crosstalk between chemokines and neuronal receptors bridges immune and nervous systems.J Leukoc Biol 78,1210−1214(2005).
12.Schmitz,J.,et al.IL−33,an interleukin−1−like cytokine that signals via the IL−1 receptor−related protein ST2 and induces T helper type 2−associated cytokines.Immunity 23,479−490(2005).
13.Gao,P.,Wange,R.L.,Zhang,N.,Oppenheim,J.J.& Howard,O.M.Negative regulation of CXCR4−mediated chemotaxis by the lipid phosphatase activity of tumor suppressor PTEN.Blood 106,2619−2626(2005).
14.Chen,X.,Murakami,T.,Oppenheim,J.J.& Howard,O.M.Triptolide,a constituent of immunosuppressive Chinese herbal medicine,is a potent suppressor of dendritic−cell maturation and trafficking.Blood 106,2409−2416(2005).
15.Lamkanfi,M.& Dixit,V.M.IL−33 raises alarm.Immunity 31,5−7(2009).
16.Liew,F.Y.,Pitman,N.I.& McInnes,I.B.Disease−associated functions of IL−33: the new kid in the IL−1 family.Nat Rev Immunol 10,103−110.
17.Asirvatham,A.J.,Magner,W.J.& Tomasi,T.B.miRNA regulation of cytokine genes.Cytokine 45,58−69(2009).
18.Pritchard,C.C.,Cheng,H.H.& Tewari,M.MicroRNA profiling: approaches and considerations.Nat Rev Genet 13,358−369(2012).
19.Matthews,T.J.,Hand,G.C.,Rees,J.L.,Athanasou,N.A.& Carr,A.J.Pathology of the torn rotator cuff tendon.Reduction in potential for repair as tear size increases.J Bone Joint Surg Br 88,489−495(2006).
20.Xu,D.,et al.IL−33 exacerbates antigen−induced arthritis by activating mast cells.Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 105,10913−10918(2008).
21.Zaiss,M.M.,et al.IL−33 shifts the balance from osteoclast to alternatively activated macrophage differentiation and protects from TNF−alpha−mediated bone loss.J Immunol 186,6097−6105(2011).
22.Rankin,A.L.,et al.IL−33 induces IL−13−dependent cutaneous fibrosis.J Immunol 184,1526−1535(2010).
23.Palmer,G.& Gabay,C.Interleukin−33 biology with potential insights into human diseases.Nat Rev Rheumatol 7,321−329.
24.Ogawa,T.,et al.Suppression of type I collagen production by microRNA−29b in cultured human stellate cells.Biochem Biophys Res Commun 391,316−321.
25.Bartel,D.P.MicroRNAs: target recognition and regulatory functions.Cell 136,215−233(2009).
26.Ma,F.,et al.The microRNA miR−29 controls innate and adaptive immune responses to intracellular bacterial infection by targeting interferon−gamma.Nature immunology 12,861−869(2011).
27.Maurer,B.,et al.MicroRNA−29,a key regulator of collagen expression in systemic sclerosis.Arthritis Rheum 62,1733−1743(2010).
28.Basu,S.,Binder,R.J.,Suto,R.,Anderson,K.M.& Srivastava,P.K.Necrotic but not apoptotic cell death releases heat shock proteins,which deliver a partial maturation signal to dendritic cells and activate the NF−kappa B pathway.Int Immunol 12,1539−1546(2000).
29.Scaffidi,P.,Misteli,T.& Bianchi,M.E.Release of chromatin protein HMGB1 by necrotic cells triggers inflammation.Nature 418,191−195(2002).
30.Shi,Y.,Evans,J.E.& Rock,K.L.Molecular identification of a danger signal that alerts the immune system to dying cells.Nature 425,516−521(2003).
31.Chen,C.J.,et al.Identification of a key pathway required for the sterile inflammatory response triggered by dying cells.Nat Med 13,851−856(2007).
32.Eigenbrod,T.,Park,J.H.,Harder,J.,Iwakura,Y.& Nunez,G.Cutting edge: critical role for mesothelial cells in necrosis−induced inflammation through the recognition of IL−1 alpha released from dying cells.J Immunol 181,8194−8198(2008).
33.Moussion,C.,Ortega,N.& Girard,J.P.The IL−1−like cytokine IL−33 is constitutively expressed in the nucleus of endothelial cells and epithelial cells in vivo: a novel ‘alarmin’? PLoS One 3,e3331(2008).
34.Cayrol,C.& Girard,J.P.The IL−1−like cytokine IL−33 is inactivated after maturation by caspase−1.Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 106,9021−9026(2009).
35.James,R.,Kesturu,G.,Balian,G.& Chhabra,A.B.Tendon: biology,biomechanics,repair,growth factors,and evolving treatment options.J Hand Surg Am 33,102−112(2008).
36.Brown,B.D.& Naldini,L.Exploiting and antagonizing microRNA regulation for therapeutic and experimental applications.Nat Rev Genet 10,578−585(2009).
37.Roderburg,C.,et al.Micro−RNA profiling reveals a role for miR−29 in human and murine liver fibrosis.Hepatology 53,209−218(2011).
38.Ogawa,T.,et al.Suppression of type I collagen production by microRNA−29b in cultured human stellate cells.Biochem Biophys Res Commun 391,316−321(2010).
39.Millar,N.L.,Wu,X.,Tantau,R.,Silverstone,E.& Murrell,G.A.Open versus two forms of arthroscopic rotator cuff repair.Clin Orthop Relat Res 467,966−978(2009).
40.McInnes,I.B.,et al.Production of nitric oxide in the synovial membrane of rheumatoid and osteoarthritis patients.J Exp Med 184,1519−1524(1996).
41.Khan,K.M.,Cook,J.L.,Bonar,F.,Harcourt,P.& Astrom,M.Histopathology of common tendinopathies.Update and implications for clinical management.Sports Med 27,393−408(1999).
42.Millar,N.L.,Wei,A.Q.,Molloy,T.J.,Bonar,F.& Murrell,G.A.Heat shock protein and apoptosis in supraspinatus tendinopathy.Clin Orthop Relat Res 466,1569−1576(2008).
43.Kurowska−Stolarska,M.,et al.IL−33 induces antigen−specific IL−5+T cells and promotes allergic−induced airway inflammation independent of IL−4.J Immunol 181,4780−4790(2008).
44.Zheng,Y.,et al.Interleukin−22,a T(H)17 cytokine,mediates IL−23−induced dermal inflammation and acanthosis.Nature 445,648−651(2007).
45.Hedrick,M.N.,et al.CCR6 is required for IL−23−induced psoriasis−like inflammation in mice.The Journal of clinical investigation 119,2317−2329(2009).
Claims (9)
- 哺乳動物における腱損傷を治療するためまたは腱の引張り強度を増大させるための、miR−29ミミックを含む医薬組成物であって、前記miR−29ミミックはガイド鎖およびパッセンジャー鎖を含み、前記ガイド鎖は、
UAGCACCAUUUGAAAUCAGUGUU(hsa−miR−29b1および2)もしくは
UAGCACCAUUUGAAAUCGGUUA(hsa−miR−29c)
(上記の各配列のシード配列には下線が施されている)
の配列を含み、
前記miR−29ミミックのガイド鎖は、1つまたは複数の改変糖残基を含み、かつ前記パッセンジャー鎖は1つまたは複数の改変糖残基を含む、医薬組成物。 - 前記miR−29ミミックが、
(i)1つまたは複数の改変ヌクレオシド間結合、
(ii)1つまたは複数の改変塩基、および/または
(iii)膜通過部分を含む、
請求項1に記載の医薬組成物。 - 前記miR−29ミミックが、シード配列AGCACCAを含むガイド鎖を含む、請求項1に記載の医薬組成物。
- 前記腱が腱傷害または腱障害に罹患している、請求項1に記載の医薬組成物。
- 前記腱が慢性腱障害に罹患している、請求項1に記載の医薬組成物。
- 前記miR−29ミミックは、前記対象の腱の治療において、1型コラーゲンよりも3型コラーゲンの合成をより大きく阻害することによって、前記腱損傷を治療する、請求項1に記載の医薬組成物。
- 前記miR−29ミミックは、局所注射により前記対象に投与される、請求項1に記載の医薬組成物。
- 前記miR−29ミミックは、非経口的に許容される水溶液の形態である、請求項1に記載の医薬組成物。
- 哺乳動物における腱損傷を治療するためまたは腱の引張り強度を増大させるための薬物の製造における、miR−29ミミックの使用であって、前記miR−29ミミックはガイド鎖およびパッセンジャー鎖を含み、前記ガイド鎖は、
UAGCACCAUUUGAAAUCAGUGUU(hsa−miR−29b1および2)もしくは
UAGCACCAUUUGAAAUCGGUUA(hsa−miR−29c)
(上記の各配列のシード配列には下線が施されている)
の配列を含み、
前記miR−29ミミックのガイド鎖は、1つまたは複数の改変糖残基を含み、かつ前記パッセンジャー鎖は1つまたは複数の改変糖残基を含む、使用。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
GB1400598.7 | 2014-01-14 | ||
GB201400598A GB201400598D0 (en) | 2014-01-14 | 2014-01-14 | Materials and methods for modulation of tendon healing |
Related Parent Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016563273A Division JP6665107B2 (ja) | 2014-01-14 | 2015-01-14 | 腱治癒を調節するための物質および方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2020073480A JP2020073480A (ja) | 2020-05-14 |
JP6845589B2 true JP6845589B2 (ja) | 2021-03-17 |
Family
ID=50238941
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016563273A Active JP6665107B2 (ja) | 2014-01-14 | 2015-01-14 | 腱治癒を調節するための物質および方法 |
JP2019190297A Active JP6845589B2 (ja) | 2014-01-14 | 2019-10-17 | 腱治癒を調節するための物質および方法 |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2016563273A Active JP6665107B2 (ja) | 2014-01-14 | 2015-01-14 | 腱治癒を調節するための物質および方法 |
Country Status (22)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US9932582B2 (ja) |
EP (1) | EP3094727B1 (ja) |
JP (2) | JP6665107B2 (ja) |
CN (1) | CN106062194A (ja) |
AU (1) | AU2015207351C1 (ja) |
CA (1) | CA2935623C (ja) |
DK (1) | DK3094727T3 (ja) |
ES (1) | ES2661111T3 (ja) |
GB (1) | GB201400598D0 (ja) |
HK (1) | HK1226093B (ja) |
HR (1) | HRP20180377T1 (ja) |
HU (1) | HUE036049T2 (ja) |
NO (1) | NO3094727T3 (ja) |
NZ (1) | NZ721667A (ja) |
PL (1) | PL3094727T3 (ja) |
PT (1) | PT3094727T (ja) |
RS (1) | RS56915B1 (ja) |
RU (1) | RU2699706C2 (ja) |
SA (1) | SA516371485B1 (ja) |
SI (1) | SI3094727T1 (ja) |
TR (1) | TR201802656T4 (ja) |
WO (1) | WO2015107340A1 (ja) |
Families Citing this family (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20170068452A (ko) * | 2014-09-08 | 2017-06-19 | 미라젠 세러퓨틱스 인코포레이티드 | Mir-29 모방체 및 이의 용도 |
CN107532181A (zh) * | 2015-03-16 | 2018-01-02 | 米拉根医疗股份有限公司 | Mirna模拟物和它们在治疗感觉病患中的用途 |
MA45477A (fr) * | 2016-04-15 | 2019-02-20 | Res Inst Nationwide Childrens Hospital | Administration à vecteurs de virus adéno-associé de microarn-29 et micro-dystrophine pour traiter la dystrophie musculaire |
MA50836A (fr) * | 2017-10-18 | 2020-08-26 | Res Inst Nationwide Childrens Hospital | Administration par vecteur à virus adéno-associé de micro-dystrophine spécifique de muscles pour traiter la dystrophie musculaire |
EP4114938A1 (en) * | 2020-03-04 | 2023-01-11 | The Trustees of Indiana University | Methods to re-engage a fetal wound healing pathway for adult skin repair |
RU2743804C1 (ru) * | 2020-08-03 | 2021-02-26 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Волгоградский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации ФГБОУ ВО ВолгГМУ МЗ РФ | Способ моделирования тендинопатии |
CN112080568A (zh) * | 2020-09-27 | 2020-12-15 | 扬州大学 | 一种与湖羊肌肉细胞增殖相关的miRNA标志物及其检测引物和应用 |
GB202016863D0 (en) | 2020-10-23 | 2020-12-09 | Causeway Therapeutics Ltd | Microrna-29 compounds, compositions and uses in therapy |
KR20230102595A (ko) * | 2021-12-30 | 2023-07-07 | 주식회사 이노제닉스 | 포스파티딜이노시톨 3-키나아제 촉매 소단위 알파 유전자의 3'비번역 부위에 특이적으로 결합하는 핵산 절편 및 그 응용 |
Family Cites Families (16)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
PL2056882T3 (pl) | 2006-08-01 | 2013-03-29 | Univ Texas | Identyfikacja mikro-RNA, który aktywuje ekspresję łańcucha ciężkiego beta-miozyny |
US8034560B2 (en) | 2007-01-31 | 2011-10-11 | The Ohio State University Research Foundation | MicroRNA-based methods and compositions for the diagnosis, prognosis and treatment of acute myeloid leukemia (AML) |
WO2009018493A1 (en) | 2007-07-31 | 2009-02-05 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | A micro-rna family that modulates fibrosis and uses thereof |
MX2010001216A (es) | 2007-07-31 | 2010-04-30 | Univ Texas | Microarn que controla la expresion de miosina y la identidad de miofibras. |
EP2331143B1 (en) * | 2008-09-04 | 2016-08-17 | Universität Zürich Prorektorat Mnw | Treatment of scleroderma |
JP5883381B2 (ja) | 2009-05-05 | 2016-03-15 | ミラゲン セラピューティクス,インコーポレイテッド | 親油性ポリヌクレオチド接合体 |
CA2765129A1 (en) | 2009-06-08 | 2010-12-16 | Miragen Therapeutics | Chemical modification motifs for mirna inhibitors and mimetics |
KR101801404B1 (ko) | 2009-06-16 | 2017-12-20 | 큐알엔에이, 인크. | 콜라겐 유전자에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 콜라겐 유전자 관련된 질환의 치료 |
WO2011088309A1 (en) | 2010-01-14 | 2011-07-21 | Regulus Therapeutics Inc. | Microrna compositions and methods |
JP5995855B2 (ja) | 2010-11-05 | 2016-09-21 | ミラゲン セラピューティクス,インコーポレイテッド | 塩基修飾オリゴヌクレオチド |
AU2012212105A1 (en) | 2011-02-03 | 2013-09-12 | Mirna Therapeutics, Inc. | Synthetic mimics of miR-124 |
MY165507A (en) | 2011-02-03 | 2018-03-28 | Mirna Therapeutics Inc | Synthetic mimics of mir-34 |
EP2827951A4 (en) * | 2012-03-21 | 2016-07-13 | Futurestem Llc | COMBINATION THERAPY TO IMPROVE THE HEALING OF JOINTS, TIGHTS AND TAPES |
US20140010801A1 (en) | 2012-06-08 | 2014-01-09 | University Of Pittsburgh - Of The Commonwealth System Of Higher Education | Compositions and Methods for Restoring or Rejuvenating Stem/Progenitor Cell Function |
US9267139B2 (en) | 2012-10-11 | 2016-02-23 | Georgia Regents Research Institute, Inc. | Compositions and methods for treating musculoskeletal diseases and disorders |
KR20170068452A (ko) | 2014-09-08 | 2017-06-19 | 미라젠 세러퓨틱스 인코포레이티드 | Mir-29 모방체 및 이의 용도 |
-
2014
- 2014-01-14 GB GB201400598A patent/GB201400598D0/en not_active Ceased
-
2015
- 2015-01-14 CN CN201580004551.8A patent/CN106062194A/zh active Pending
- 2015-01-14 SI SI201530192T patent/SI3094727T1/en unknown
- 2015-01-14 HU HUE15706497A patent/HUE036049T2/hu unknown
- 2015-01-14 WO PCT/GB2015/050066 patent/WO2015107340A1/en active Application Filing
- 2015-01-14 TR TR2018/02656T patent/TR201802656T4/tr unknown
- 2015-01-14 JP JP2016563273A patent/JP6665107B2/ja active Active
- 2015-01-14 DK DK15706497.3T patent/DK3094727T3/en active
- 2015-01-14 RS RS20180202A patent/RS56915B1/sr unknown
- 2015-01-14 RU RU2016131870A patent/RU2699706C2/ru active
- 2015-01-14 NZ NZ721667A patent/NZ721667A/en unknown
- 2015-01-14 ES ES15706497.3T patent/ES2661111T3/es active Active
- 2015-01-14 CA CA2935623A patent/CA2935623C/en active Active
- 2015-01-14 PL PL15706497T patent/PL3094727T3/pl unknown
- 2015-01-14 US US15/110,108 patent/US9932582B2/en active Active
- 2015-01-14 NO NO15706497A patent/NO3094727T3/no unknown
- 2015-01-14 PT PT157064973T patent/PT3094727T/pt unknown
- 2015-01-14 AU AU2015207351A patent/AU2015207351C1/en active Active
- 2015-01-14 EP EP15706497.3A patent/EP3094727B1/en active Active
-
2016
- 2016-07-13 SA SA516371485A patent/SA516371485B1/ar unknown
- 2016-12-14 HK HK16114250A patent/HK1226093B/zh unknown
-
2018
- 2018-01-25 US US15/880,490 patent/US10472631B2/en active Active
- 2018-03-02 HR HRP20180377TT patent/HRP20180377T1/hr unknown
-
2019
- 2019-10-17 JP JP2019190297A patent/JP6845589B2/ja active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU2015207351A1 (en) | 2016-07-14 |
EP3094727B1 (en) | 2017-12-13 |
RU2699706C2 (ru) | 2019-09-09 |
HK1226093B (zh) | 2017-09-22 |
US20160333345A1 (en) | 2016-11-17 |
CA2935623C (en) | 2023-08-15 |
US20180155724A1 (en) | 2018-06-07 |
GB201400598D0 (en) | 2014-03-05 |
HUE036049T2 (hu) | 2018-06-28 |
US10472631B2 (en) | 2019-11-12 |
NZ721667A (en) | 2023-02-24 |
PL3094727T3 (pl) | 2018-06-29 |
PT3094727T (pt) | 2018-03-05 |
JP2020073480A (ja) | 2020-05-14 |
AU2015207351C1 (en) | 2021-05-06 |
WO2015107340A1 (en) | 2015-07-23 |
US9932582B2 (en) | 2018-04-03 |
SI3094727T1 (en) | 2018-03-30 |
JP2017503859A (ja) | 2017-02-02 |
RS56915B1 (sr) | 2018-05-31 |
NO3094727T3 (ja) | 2018-05-12 |
TR201802656T4 (tr) | 2018-03-21 |
RU2016131870A (ru) | 2018-02-20 |
HRP20180377T1 (hr) | 2018-04-06 |
EP3094727A1 (en) | 2016-11-23 |
CA2935623A1 (en) | 2015-07-23 |
AU2015207351B2 (en) | 2021-01-07 |
ES2661111T3 (es) | 2018-03-27 |
JP6665107B2 (ja) | 2020-03-13 |
RU2016131870A3 (ja) | 2018-08-10 |
CN106062194A (zh) | 2016-10-26 |
SA516371485B1 (ar) | 2019-06-24 |
DK3094727T3 (en) | 2018-02-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6845589B2 (ja) | 腱治癒を調節するための物質および方法 | |
US20210230597A1 (en) | Micro-rnas and compositions comprising same for the treatment and diagnosis of serotonin-, adrenalin-, noradrenalin-, glutamate-, and corticotropin-releasing hormone- associated medical conditions | |
US9241991B2 (en) | Agents, compositions, and methods for treating pruritus and related skin conditions | |
JP6309450B2 (ja) | セロトニン関連の医学的状態、アドレナリン関連の医学的状態、ノルアドレナリン関連の医学的状態、グルタミン酸関連の医学的状態および副腎皮質刺激ホルモン放出ホルモン関連の医学的状態の処置および診断のためのミクロrnaおよび該ミクロrnaを含む組成物 | |
US9359607B2 (en) | Methods of diagnosing and treating motor neuron diseases | |
US20150291954A1 (en) | Organic compositions to treat beta-catenin-related diseases | |
US10870852B2 (en) | Compositions and methods for treating diabetic retinopathy | |
JP2018531046A6 (ja) | 核酸ベースのtia−1阻害剤 | |
JP2018531046A (ja) | 核酸ベースのtia−1阻害剤 | |
US20180064850A1 (en) | Biocompatible implants for use in tendon therapy | |
US11155820B2 (en) | Target of VGSC β3 protein for prevention, treatment and diagnostic detection of cancers | |
US20210244828A1 (en) | Miri26-5p for treating motor neuron diseases | |
JP2016540049A (ja) | 肺動脈性高血圧症の治療のための材料及び方法 | |
WO2021252432A1 (en) | Compositions and methods for delivering polynucleotides | |
Guncay | Evaluation of LNA Gapmer efficacy in FSHD patients' muscle cells |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20191114 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20191114 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A132 Effective date: 20200915 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20201215 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20201215 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20210202 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20210218 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6845589 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |